專利名稱：：一種pH敏感型抗癌前藥及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種pH敏感型抗癌前藥及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：近年來，大分子靶向抗癌藥物成為對淋巴轉(zhuǎn)移的化療藥物研究的重點(diǎn)，這類偶聯(lián)物具有較大的分子體積，在局部注射后，不能透過毛細(xì)血管非常狹窄的內(nèi)皮間隙進(jìn)入血液，而比較容易通過毛細(xì)淋巴管較寬的內(nèi)皮間隙進(jìn)入局部的引流淋巴結(jié)。另外，這類偶聯(lián)物還可以通過被巨噬細(xì)胞吞噬的方式，帶到局部淋巴結(jié)，在淋巴結(jié)內(nèi)酶的作用下，被水解釋放出活性物質(zhì)(抗癌藥物)，起到殺死淋巴結(jié)內(nèi)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的作用。因而這類大分子載體靶向藥物最適于淋巴癌轉(zhuǎn)移的治療。果膠常用作片劑、微球、微囊和脂質(zhì)體等的衣層，制備滴丸與顆粒劑，包埋液體或固體藥物，起到緩釋作用和掩蔽藥物的不適臭味，是天然的大分子多糖聚合物，廣泛存在于植物的細(xì)胞壁中，是由a-(1—4)-D-吡喃半乳糖醛酸單位組成的酸性大分子多糖(HyunjoKim，etal.InternationalJournalofPharmaceutics,1998，161:149-159)，其分子由3個(gè)單位構(gòu)成一螺旋狀結(jié)構(gòu)，其螺旋的節(jié)距為1.34nm。此外，其結(jié)構(gòu)中還帶有乙?；推渌行?多)糖支鏈，如鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖木糖等存在；果膠可通過增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，激活巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞、NK細(xì)胞和補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)細(xì)胞因子分泌，增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫等提高宿主免疫功能；通過改變實(shí)體癌細(xì)胞膜的生長特性、影響實(shí)體癌細(xì)胞內(nèi)信號傳遞途徑、抗自由基作用、誘導(dǎo)分化與凋亡、抑制實(shí)體癌細(xì)胞的核酸與蛋白質(zhì)合成、影響實(shí)體癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、影響癌基因、抗突變作用、抑制實(shí)體癌血管形成而發(fā)揮直接的抗癌作用(中國中醫(yī)藥信息雜志，1999，5:64)。果膠在pH6—8的條件下是溶于水的，但是隨pH降低，溶解度將減小。果膠一阿霉素偶聯(lián)物適于制備淋巴靶向藥物、肝靶向藥物或肺靶向藥物，但是若果膠一阿霉素偶聯(lián)物在血液中(pH^7.4)循環(huán)時(shí)，還未到達(dá)癌實(shí)體已經(jīng)釋放阿霉素，則會(huì)引起毒副作用，同時(shí)降低阿霉素的治療效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種pH敏感型抗癌前藥，該抗癌前藥在pH為46時(shí)溶解度最大，而在其它條件難溶，尤其在血液中(pH^7.4)循環(huán)時(shí)，由于溶解度小，在循環(huán)過程中幾乎不釋放阿霉素，從而毒副作用小。本發(fā)明的技術(shù)方案以生物相容性好的果膠為載體，直接通過共價(jià)鍵將阿霉素與果膠偶聯(lián)，該共價(jià)鍵能被體內(nèi)的酶逐漸水解而緩慢釋放出抗癌藥物。具體地說，它是通過化學(xué)鍵將阿霉素與分子量為7.l萬40萬(平均分子量15-30萬，優(yōu)選20萬)的果膠偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物，其中果膠、阿霉素的重量配比為果膠1份、阿霉素0.051份；該抗癌前藥在pH為46時(shí)溶解度最大，而在pH小于3或大于7時(shí)幾乎不溶。本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供上述pH敏感型抗癌前藥的制備方法，它是由果膠含水溶液與阿霉素含水溶液在pH6—8的條件下，加入脫水劑反應(yīng)后透析、濃縮而得。其合成過程如下a、將分子量為7.l萬40萬的果膠溶于水，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)為pH6—8，與阿霉素水溶液混勻后加入脫水劑，控溫208(TC，攪拌324h;優(yōu)選反應(yīng)溫度為5(TC，反應(yīng)時(shí)間為8h;b、轉(zhuǎn)移到透析袋，水透析，透析物濃縮至干即得。所述脫水劑為N，N—二環(huán)己基碳二亞胺(簡稱DCC)、N—環(huán)己基一N'—二甲胺丙基碳二亞胺(簡稱CDC)、l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(簡稱EDC'HC1)，優(yōu)選EDC'HC1作為脫水劑。果膠為天然高分子，具有良好的生物相容性，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使它具備淋巴靶向特性，在局部注射以后，可以特異性地進(jìn)入到注射部位周圍的引流淋巴結(jié)，可以作為設(shè)計(jì)淋巴靶向性新藥的載體使用。果膠在PH6—8的條件下是溶于水的，但是隨著pH值降低，溶解度將減小。不同的制備方法或制備條件制備得到的果膠與阿霉素偶聯(lián)物的對pH值的敏感性是不同的，發(fā)明人也制備出了水溶性的果膠一阿霉素偶聯(lián)物(詳見對比試驗(yàn)例)，其溶解度與果膠具有相同的趨勢，隨pH降低而迅速減小。本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的溶解度隨著pH的降低先增大后減小，且在pH為5時(shí)溶解度最大，而在pH為7.4時(shí)溶解度非常小，pH為5時(shí)的溶解度是pH為7.4時(shí)的14倍。這表明注射該果膠一阿霉素偶聯(lián)物后，在血液中(pH^7.4)循環(huán)時(shí)，由于溶解度小，在循環(huán)過程中幾乎不釋放阿霉素，從而毒副作用小。而當(dāng)顆粒被細(xì)胞吞噬，進(jìn)入溶酶體(pH^5)后，溶解度會(huì)增大，從而能夠緩慢釋放抗癌藥物阿霉素，因此該偶聯(lián)物具有良好的pH敏感性。本發(fā)明pH敏感型抗癌前藥可以用于治療和抑制腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移、治療肝癌或肺癌?？梢酝ㄟ^局部注射給藥或靜脈給藥，可以注射到在實(shí)體癌癌灶中，也可以注射到實(shí)體癌周圍的引流淋巴結(jié)中，偶聯(lián)物進(jìn)入淋巴結(jié)后被巨嗜細(xì)胞吞噬，在淋巴結(jié)中酶的作用下水解釋放出抗癌藥物，用于治療實(shí)體癌(例如乳腺癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、宮頸癌、宮內(nèi)膜癌、大腸癌等)及其引流淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明合成的果膠一阿霉素偶聯(lián)物具有pH敏感性，在pH為4-6，尤其pH為5的磷酸鹽緩沖液中溶解度大大高于其它條件的溶解度，且在pH為5時(shí)的粒徑小，分布較窄，能較好地被腫瘤細(xì)胞吞噬。圖l本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物和水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物在磷酸鹽緩沖液中的溶解度參本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的溶解度■對比試驗(yàn)的果膠一阿霉素偶聯(lián)物的溶解度圖2本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物在磷酸鹽緩沖液中的釋放情況圖3本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物在pH為3的磷酸鹽緩沖液中的粒徑分布圖圖4本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物在pH為5的磷酸鹽緩沖液中的粒徑分布圖圖5本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物在pH為7.4的磷酸鹽緩沖液中的粒徑分布圖圖6黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移模型小鼠生存時(shí)間曲線圖(n=10)。令本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物組；國鹽酸阿霉素組；A對照組。具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)一步描述，但不應(yīng)理解為是對本發(fā)明的限定。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)上述技術(shù)方案，還可以做出多種形式的修改、替換、變更。凡基于上述技術(shù)思想所作的修改、替換、變更均屬于本發(fā)明的范圍。下面通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。實(shí)施例l本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在5(TC，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在5(TC，攪拌反應(yīng)6.5小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體O.9g。實(shí)施例2本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在5(TC，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在5(TC，攪拌反應(yīng)8小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體l.lg。實(shí)施例3本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在3(TC，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在30。C，攪拌反應(yīng)24小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體lg。實(shí)施例4本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在40。C，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在40。C，攪拌反應(yīng)10小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體O.8g。實(shí)施例5難溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在6(TC，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在6(TC，攪拌反應(yīng)5小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體O.9g。實(shí)施例6本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml水，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8。將O.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml水，轉(zhuǎn)移到果膠溶液中，控溫在7(TC，攪拌30分鐘。加入lgEDOHCl，控制溫度在7(TC，攪拌反應(yīng)6小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)，透析物濃縮至干，得到紅色固體l.lg。對比實(shí)施例l水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8，然后將0.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液中，加入果膠溶液，控溫在5(TC，攪拌30分鐘。加入lgEEDQ，控制溫度在5(TC，攪拌反應(yīng)8小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，濃縮到約100ml，加入300ml乙醇，產(chǎn)生沉淀，離心。沉淀用水溶解，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)。透析袋內(nèi)液濃縮后，真空干燥，得水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物0.9g。對比實(shí)施例2水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8，然后將0.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液中，加入果膠溶液，控溫在7(TC，攪拌30分鐘。加入lgEEDQ，控制溫度在7(TC，攪拌反應(yīng)6小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，濃縮到約100ml，加入300ml乙醇，產(chǎn)生沉淀，離心。沉淀用水溶解，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)。透析袋內(nèi)液濃縮后，真空干燥，得水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物lg。對比實(shí)施例3水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物的制備稱取lg果膠(分子量7.l萬40萬，平均分分子量20萬)，加入100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液，果膠溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6—8，然后將0.5g鹽酸阿霉素溶解于100ml二甲基甲酰胺和水(體積比為l:1)的混合溶液中，加入果膠溶液，控溫在40。C，攪拌30分鐘。加入lgEEDQ，控制溫度在40。C，攪拌反應(yīng)24小時(shí)。到達(dá)所需時(shí)間后，濃縮到約100ml，加入300ml乙醇，產(chǎn)生沉淀，離心。沉淀用水溶解，轉(zhuǎn)移到截留分子量為7000的透析袋，用二次水透析24小時(shí)。透析袋內(nèi)液濃縮后，真空干燥，得水溶性果膠一阿霉素偶聯(lián)物0.8g。試驗(yàn)例l偶聯(lián)物載藥量的測定1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備稱取10mg鹽酸阿霉素，溶解于100ml二次水中，分別移取l、2、3、4、5ml于10ml比色管中，用水稀釋到刻度。得濃度分別為9.37、18.74、28.11、37.48、46.85yg/mL標(biāo)準(zhǔn)液，于480nm(紫外可見分光光度計(jì)光譜掃描確定)處測定吸光度。用濃度對吸光度作回歸，得回歸方程為A4.0174C-0.0028(R2=0.9927)2、本發(fā)明果膠一阿霉素溶液的制備及載藥量的測定稱取實(shí)施例2制備的難溶性果膠一阿霉素10mg，加入80mlpH二2的鹽酸溶液，超聲溶解，然后定容到100ml，在480nm測定吸光度，代入回歸方程，經(jīng)計(jì)算，載藥量為19.8%。3、對比實(shí)施例果膠一阿霉素溶液的制備及載藥量的測定稱取對比實(shí)施例l制備的水溶性果膠一阿霉素10mg，加入80ml去離子水，超聲溶解，然后定容到100ml，在480nm測定吸光度，代入回歸方程，經(jīng)計(jì)算，載藥量為18.9%。試驗(yàn)例2果膠一阿霉素在不同pH磷酸鹽緩沖液中的溶解度試驗(yàn)考査了實(shí)施例2制備的果膠-阿霉素偶聯(lián)物和對比實(shí)施例l制備的果膠-阿霉素偶聯(lián)物以及果膠在不同pH(3、4、5、6、7.4、8)的磷酸鹽緩沖液中的溶解度。見圖l。結(jié)果表明，本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物的溶解度隨著pH的降低先增大后減小，且在pH為5時(shí)溶解度最大，而在pH為7.4時(shí)溶解度非常小，pH為5時(shí)的溶解度是pH為7.4時(shí)的14倍。這表明注射該果膠一阿霉素偶聯(lián)物后，在血液中(pH^7.4)循環(huán)時(shí)，由于溶解度小，在循環(huán)過程中幾乎不釋放阿霉素，從而毒副作用小。而當(dāng)顆粒被細(xì)胞吞噬，進(jìn)入溶酶體(pH^5)后，溶解度會(huì)增大，從而能夠緩慢釋放抗癌藥物阿霉素，因此該偶聯(lián)物具有良好的pH敏感性。對于對比實(shí)施例的水溶性果膠-阿霉素偶聯(lián)物，其在磷酸鹽緩沖液中的溶解度則隨pH降低而迅速減小。試驗(yàn)例3果膠一阿霉素在不同pH磷酸鹽緩沖液中的釋放試驗(yàn)考査了實(shí)施例2制備的果膠-阿霉素偶聯(lián)物和對比實(shí)施例l制備的果膠-阿霉素偶聯(lián)物在pH為3、5和7.4的磷酸鹽緩沖液中的釋放情況。結(jié)果表明，對比實(shí)施例l制備的果膠-阿霉素在三種pH的磷酸鹽緩沖液中均沒有釋放出阿霉素，而實(shí)施例2制備的果膠-阿霉素隨著pH值降低，相同時(shí)間內(nèi)釋放阿霉素的量增大，見圖2試驗(yàn)例4測定果膠一阿霉素在不同pH磷酸鹽緩沖液中的粒徑取20mg實(shí)施例2制備的果膠一阿霉素偶聯(lián)物，分別置于10mlpH為3、5和7.4的磷酸鹽緩沖液中，攪拌5小時(shí)，2000rpm離心15min，取上清液用納米粒度儀測定粒徑。結(jié)果表明在pH為3的磷酸鹽緩沖液中，果膠一阿霉素粒徑主要分布在3091—5560nm之間；在pH為5的磷酸鹽緩沖液中，果膠一阿霉素粒徑主要分布在342—458nm之間；在pH為7.4的磷酸鹽緩沖液中，果膠一阿霉素粒徑主要分布在396—825nm之間。因此，該偶聯(lián)物的粒徑也具有pH敏感性。本發(fā)明果膠一阿霉素偶聯(lián)物在pH為3、5和7.4的磷酸鹽緩沖液中粒徑分布圖見圖3、4、5。試驗(yàn)例5本發(fā)明果膠-阿霉素偶聯(lián)物全身給藥后在小鼠體內(nèi)的分布試驗(yàn)1、受試藥物a、稱取21.4mg鹽酸阿霉素，溶解于10ml生理鹽水中，得到含阿霉素2mg/ml的注射劑。b、稱取實(shí)施例2的果膠一阿霉素101mg(相當(dāng)于含阿霉素20mg)，加入100mg泊洛沙姆188，混勻后，加入幾滴O.5%的羧甲基纖維素鈉溶液，用研鉑研磨60min，轉(zhuǎn)移到10ml的容量瓶，用0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液定容，得到阿霉素濃度為2mg/ml的混懸注射劑。c、稱取對比實(shí)施例l制備的果膠一阿霉素106mg(相當(dāng)于含阿霉素20mg)，用生理鹽水溶解，定容到10ml，得到含阿霉素2mg/ml的注射劑。所有注射劑在做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之前用Y—射線滅菌。2、動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重1822g，購自四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心。3、方法3.1給藥方法選取50只小鼠，隨機(jī)分為5組，每組10只。分別給予尾靜脈注射a、b、c和生理鹽水0.lml/只。3.2樣品采集及處理給藥后2小時(shí)摘除眼球取血，處死小鼠。取適量的心臟、肝臟、脾臟、肺和腎臟組織用勻漿液(含O.3mol/L鹽酸的60。/。乙醇)按重量體積比l:9配成組織勻漿液。勻漿后3000rpm離心10min。取O.lml上清液進(jìn)行熒光檢測。血樣3000rpm離心10min。取O.lml上清液進(jìn)行熒光檢測。4、結(jié)果不同組織樣品中阿霉素的熒光光度值見表l。表1給藥后2小吋不同組織樣品中阿霍素的熒光光度值(n=10〕<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注a.阿霉素生理鹽水組；b.本發(fā)明果膠-阿霉素生理鹽水；bl本發(fā)明果膠-阿霉素混懸注射劑組；C.對比實(shí)施例的水溶性果膠-阿霉素組；d.生理鹽水組。5、結(jié)論不同阿霉素制劑在小鼠體內(nèi)的分布不盡相同。本發(fā)明果膠-阿霉素和對比實(shí)施例的難溶性果膠-阿霉素都有在肝臟和肺臟中富集的趨勢，隨制劑不同有所區(qū)別，但都明顯高于血液中的濃度。說明果膠-阿霉素具有一定的趨肝性和肺靶向性。試驗(yàn)例6本發(fā)明果膠-阿霉素抗小鼠肺轉(zhuǎn)移瘤和肺癌的實(shí)驗(yàn)研究1.主要材料取用試驗(yàn)例5中的鹽酸阿霉素注射劑和本發(fā)明果膠一阿霉素注射劑。2.動(dòng)物和細(xì)胞株C57BL/6J小鼠，雌性，1822g，46周齡，購自四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠Lewis肺癌細(xì)胞系(LL/2)，購于ATCC(AmericanTypeCultureCollection)，本實(shí)驗(yàn)室保種。3.肺癌模型制備與治療肺癌模型制備收集對數(shù)生長期的LL/2細(xì)胞，1500rpm離心3min，細(xì)胞沉淀用無血清、無抗生素的培養(yǎng)基洗滌l次，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量后用無血清、無抗生素培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為lX107/ml。每只小鼠于尾靜脈注射1X1()6個(gè)(0.1ml)腫瘤細(xì)胞，種瘤后3天開始治療。治療分三組，對照組(生理鹽水)、阿霉素組(劑量10mg/kg)、難溶性果膠-阿霉素組(相當(dāng)于阿霉素劑量10mg/kg)，尾靜脈注射，注射體積100ml，每5天1次，共34次。4.結(jié)果不同藥物對肺癌荷瘤小鼠生存時(shí)間的影響見圖6;各組藥物對肺癌荷瘤小鼠肺部轉(zhuǎn)移節(jié)結(jié)數(shù)多少的影響見表2。表2不同藥物對肺癌荷瘤小鼠肺部轉(zhuǎn)移節(jié)結(jié)數(shù)多少的影響〔n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>總之，本發(fā)明果膠一阿霉素和鹽酸阿霉素組與對照組相比均可延長肺癌荷瘤小鼠的生存時(shí)間，抑制癌節(jié)結(jié)在肺部的生長。本發(fā)明果膠一阿霉素效果更為明顯。權(quán)利要求權(quán)利要求1一種pH敏感型抗癌前藥，其特征在于它是通過化學(xué)鍵將阿霉素與分子量為7.1萬～40萬的果膠偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物，其中果膠、阿霉素的重量配比為果膠1份、阿霉素0.05～1份。2根據(jù)權(quán)利要求l所述的pH敏感型抗癌前藥，其特征在于它是由果膠水溶液與阿霉素水溶液在pH6—8的條件下，加入脫水劑反應(yīng)后透析、濃縮而得。3pH敏感型抗癌前藥的制備方法，其特征在于其合成過程如下a、將分子量為7.l萬40萬的果膠溶于水，調(diào)節(jié)為pH6—8，與阿霉素水溶液混勻后加入脫水劑，控溫2080。C，攪拌324h;b、轉(zhuǎn)移到透析袋，用二次水透析，透析物濃縮至干即得。4根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備pH敏感型抗癌前藥的方法，其特征在于:所述脫水劑為N，N—二環(huán)己基碳二亞胺、N—環(huán)己基一N'—二甲胺丙基碳二亞胺或l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。5根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備pH敏感型抗癌前藥的方法，其特征在于:反應(yīng)溫度為5(TC，反應(yīng)時(shí)間為8h。6權(quán)利要求l或2所述pH敏感型抗癌前藥在制備治療癌癥的藥物中的用途。7權(quán)利要求l或2所述pH敏感型抗癌前藥在制備治療肺癌的藥物中的用途。8pH敏感型抗癌藥物制劑，其特征在于它是由權(quán)利要求1或2所述的pH敏感型抗癌前藥加入藥學(xué)上可接受的輔助性成分制備而成。9根據(jù)權(quán)利要求8所述的pH敏感型抗癌藥物制劑，其特征在于所述抗癌藥物制劑是局部注射給藥或靜脈給藥制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種pH敏感型抗癌前藥及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種pH敏感型抗癌前藥，該抗癌前藥在pH為4～6時(shí)溶解度最大，而在pH小于3或大于7時(shí)幾乎不溶，尤其在血液中(pH≈7.4)循環(huán)時(shí)，由于溶解度小，在循環(huán)過程中幾乎不釋放阿霉素，從而毒副作用小。本發(fā)明pH敏感型抗癌前藥是通過化學(xué)鍵將阿霉素與分子量為7.1萬～40萬的果膠偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物。它是由果膠水溶液與阿霉素水溶液在pH6-8的條件下，加入脫水劑反應(yīng)后透析、濃縮而得。文檔編號A61P35/00GK101433723SQ20081030646公開日2009年5月20日申請日期2008年12月23日優(yōu)先權(quán)日2008年12月23日發(fā)明者唐小海,鑫宋,謝永美,宇邱申請人:重慶萊美藥業(yè)股份有限公司