專利名稱：用于治療病毒感染的新核苷類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化合物，其用于治療病毒感染。本發(fā)明還涉及包含該化合物的藥物組合物、制備它們的方法以及化合物在多種醫(yī)藥應(yīng)用中的用
途，例如治療或預(yù)防病毒感染，特別是登革病毒(dengue virus)、黃熱病病毒(yellow fever virus)、 西尼羅河病毒(West Nile vi賜)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、碑媒腦炎病毒(tick-borne encephalitis virus)、昆金病毒(Kunjin virus)、墨累谷腦炎(Murray Valley encephalitis)、圣路易斯腦炎(St Louis encephalitis)、奧馬斯克出血熱病毒(Omsk hemorrhagicfever virus)、 牛病毒性腹渴病毒(bovine viral diarrhea virus)、 齊卡病毒(Zika virus)和丙型肝炎病毒(H印atitis C virus),更特別是登革病毒和丙型肝炎病毒。背景
登革熱是由四種登革病毒血清型DEN-l、 DEN-2、 DEN-3和DEN-4(其屬于黃病毒科(F/flWv/nV/fle))中的一種《1起的發(fā)熱疾病。該病毒最初由埃及斑蚊04eflfe "egy/^/)(—種吸食人的蚊子)傳染給人。
感染產(chǎn)生一系列臨床表現(xiàn)，從較弱的流行性感冒樣癥狀至更加嚴(yán)重并且有時致命的出血性疾病。典型的癥狀包括發(fā)燒、劇烈頭痛、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛和疹。該疾病的更嚴(yán)重的形式是登革出血熱(DHF)和登革熱休克綜合征(DSS)。根據(jù)WHO, DHF存在四個主要的臨^J^現(xiàn)(1)高燒(2)出血現(xiàn)象(3)血小板減少和(4)血漿泄漏。DSS被定義為DHF加上弱的疾脈以及脈壓窄或寒冷引起的低血壓、冷濕皮膚和多動。DHF的嚴(yán)重程度可以通過早期檢測和干涉來降低，但是休克的患者處于死亡高風(fēng)險中。
登革熱在熱帶地區(qū)，特別是在亞洲、非洲和拉丁美洲流行，估計25億人生活在處于感染危險的區(qū)域中。每年發(fā)生約4千萬例登革熱病和數(shù)十萬例DHF。在新加坡，2005年的流行導(dǎo)致超過12000例登革熱。200880003104.0
盡管是有規(guī)律的爆發(fā)，但是先前受感染的人仍然易受到感染侵襲，因為存在四種不同血清型的登革病毒，并且由這些血清型中的一種引起感染
僅對該血清型提供免疫力。相信DHF更可能發(fā)生在第二次登革熱感染的患者中。正在尋找登革熱、DHF和DSS的有效的療法。
黃熱病病毒(YFV)、西尼羅河病毒(WNV)、日本腦炎病毒(JEV)、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒(HCV)也屬于黃病毒科。
WNV可以是無癥狀的，或者其在某些個體中可以導(dǎo)致流行性感冒樣癥狀。在某些病例中，其導(dǎo)致神經(jīng)學(xué)障礙、腦炎，并且在嚴(yán)重的病例中可以導(dǎo)致死亡。WNV也是通過蚊子傳播的。YFV是另一種蚊子傳播的病毒，其在感染的個體中可以導(dǎo)致嚴(yán)重的癥狀。JEV也是通過蚊子傳播的，并且或者是無癥狀的，或者導(dǎo)致流行性感冒樣癥狀，在某些病例中發(fā)展成腦炎。該疾病的急性腦炎期的特征在于驚厥、頸強直和其它癥狀。
HCV是血液傳播的病毒，其通過血液-血液接觸而傳播。在該疾病的初(急性)期，大多數(shù)患者將不表現(xiàn)出任何癥狀。甚至在慢性期(即疾病持續(xù)超過6個月)，患者與患者的癥狀的嚴(yán)重程度可以不同。在長期，某些感染
的人可能發(fā)展成肝硬化和肝癌。對于HCV，目前的治療包括干擾素a和利巴韋林(一種抗病毒藥)的組合。
同樣，正在尋找由這些黃病毒科病毒引起的感染的有效的療法。
目前令人驚奇地發(fā)現(xiàn)某些核苷類似物用于治療病毒感染，例如由黃病毒科病毒引起的那些感染，所述的黃病毒科病毒特別是登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒，以及本文描述的其它黃病毒科病毒。
本發(fā)明的目的是提供新的化合物。提供此類化合物例如在治療病毒感染中的用途也是本發(fā)明的目的。
發(fā)明的公開內(nèi)容
本發(fā)明提供了化合物及其藥物組合物，其用于治療病毒感染。第一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或前藥
6R1
(I)
其中
X是CH或CR4;Rl是卣素、NR5R6或OR7;R2是H、卣素或NR5R6;
R3是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基或雜芳基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；
R4是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、卣素、氰基、硝基、羥基、烷氧基、烷基硫代、氬基、烷基氨基、氣基、酰胺或烷基氧基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；
R5和R6獨立地選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羥基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；并且
R7是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷基羰基或芳基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代。
第二方面，本發(fā)明提供了式(n)化合物或其可藥用鹽或前藥
R1
HO OH
其中
X是CH或CR4;Rl是卣素、NR5R6或OR7;R2是H、卣素或NR5R6;
R3是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基或雜芳基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；
R4是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、卣素、氰基、硝基、羥基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或
烷基氧基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；
R5和R6獨立地選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羥基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；并且
R7是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷基羰基或芳基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代。
在以上式(I)和(H)的某些實例中，X是CH。在其它實例中，X是CR4。
在以上式(I)和(II)中，R3可以是例如H、烷基、環(huán)烷基、芳基、鏈烯基或炔基。在某些實例中，R3是H、低級烷基、低級鏈烯基或低級炔基，在某些實例中，R3是H、低級烷基或低級炔基。在某些實例中，R3是H或乙炔基。
在以上式(I)和(II)中，R4可以是例如面素、烷基、環(huán)烷基、芳基、鏈烯基或炔基。在某些實例中，R4是卣素、低級烷基、低級鏈烯基或低級炔基。在某些實例中，R4是F、 I或低級炔基，例如乙炔基。
在以上式(I)和(II)中，R2可以是例如H或NR5R6，其中R5和R6獨立地選自H、烷基、鏈烯基和炔基。在某些實例中，R2是H。在其它實例中，R2是NH2。在其它實例中，R2是閨素。在其它實例中，R5和R6之一是H并且另一個選自烷基、鏈烯基和炔基。
在以上式(I)和(II)中，Rl可以是例如鹵素、NR5R6或OR7，其中R7選自H、烷基、鏈烯基和炔基。在某些實例中，R7是低級烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基。在某些實例中，R7是甲基。在某些實例中，R5和R6各自獨立地選自烷基、鏈烯基和炔基。在某些實例中，Rl是卣素、NR5R6或OR7，其中R7是H或烷基；R5和R6各自獨立地選自H和烷基；R3是H或低級炔基并且R4是卣素或低級炔基。
其中R1是卣素，其可以是例如Cl或Br。在某些實例中，R1是C1。其中Rl是OR7， R7可以是H或低級垸基。在某些實例中，R7是甲基。其中Rl是NR5R6，其可以是例如NHz或NHR5，其中R5是低級烷基，例如甲基。
X可以是例如CH并且R1可以是NH2或C1。在某些實施方案中，X是CH， R1是NH2或C1，并且R2是H。
X可以是例如CR4并且Rl可以是NH2。在某些實施方案中，X是CR4并且R1是NH2，其中R4是炔基，例如低級炔基，例如乙炔基。
以上定義的式(I)或(II)化合物中的任何烷基或環(huán)烷基可以被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自囟素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。
以上定義的式(I)或(H)化合物中的任何鏈烯基或炔基可以被一 個或多個取代基取代，所述的取代基選自鹵素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。
以上定義的式(I)或(II)化合物中的任何芳基、雜芳基或雜環(huán)基可以被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自卣素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。
在某些實例中，式(I)或(II)化合物中的任何烷基、鏈烯基或炔基是低級烷基、鏈烯基或炔基。在某些實例中，式(I)或(II)化合物中的任何芳基是苯基。
一組化合物包括基本上純的旋光異構(gòu)體，其中關(guān)于所有不對稱碳中心上的取代基，四氫呋喃基的立體化學(xué)(即四氫呋喃環(huán)的四個碳)與實施例1的相同。
一組化合物包括基本上純的旋光異構(gòu)體，其中關(guān)于所有不對稱碳中心上的取代基，四氫呋喃基的立體化學(xué)(即四氫呋喃環(huán)的四個碳)與實施例1的相反。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了選自以下的化合物在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2,3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇。
在另 一個實施方案中，本發(fā)明提供了 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-^J^-5-氟-吡咯并l2，3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，該藥物組合物包含以上定義的
式(i)或(n)化合物，以及至少一種可藥用賦形劑，例如適合的稀釋劑和/或
栽體，例如包括填充劑、粘合劑、崩解劑、流動調(diào)節(jié)劑、潤滑劑、糖或甜味劑、芳香劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑和/或乳化劑、增溶劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。
另一方面，本發(fā)明提供了以上定義的式(I)或(II)化合物，其用作藥物。另一方面，本發(fā)明提供了以上定義的式(I)或(II)化合物，其用于制備藥物。
另一方面，本發(fā)明提供了式(I)或(II)化合物在制備用于治療和/或預(yù)防病毒感染的藥物、例如藥物組合物中的用途。
另 一方面，本發(fā)明提供了式(i)或(n)化合物作為藥物在例如治療和/或預(yù)防病毒感染中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了以上定義的式(i)或(ii)化合物，其用于治療和/或預(yù)防病毒感染。
另 一方面，本發(fā)明提供了以上定義的式(I)或(II)化合物在制備用于治療和/或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的方法，該方法包括給需要的患者施用有效量的以上定義的式(I)或(II)化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了用于治療和/或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的
藥物組合物，該藥物組合物包含以上定義的式(i)或(n)化合物。
病毒感染是例如由黃病毒科的病毒引起的，所述的黃病毒科的病毒是例如登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病
毒性腹瀉病毒、齊卡病毒、Gadgets Gully病毒(Gadgets Gully virus)、科薩努爾叢林病病毒(Kya sanur Forest disease virus)、 蘭加特病毒(Langatvirus)、浪匕躍病病毒(Louping ill virus)、；皮瓦生病毒(Powassan virus)、羅亞爾農(nóng)場病毒(Royal Farm virus)、卡爾希病毒(Karshi virus)、 0L丹姆病毒(Kadam virus)、 Meaban病毒(Meaban virus)、 索馬勒茲碌病毒(SaumarezReefvirus)、秋歹'J尼病毒(Tyuleniy virus)、 Aroa病毒(Aroa virus)、 巴蘇蜂拉病毒(Buss叫uara vius)、 Iguape病毒(Iguape virus) 、 Naranjal病毒(Naranjal virus)、 凱多各病毒(Kedougou virus) 、 Cacipacore 病毒(Cacipacore virus)、庫坦戈病毒(Koutango virus)、 阿爾福病毒(Alfuyvirus)、 烏蘇土病毒(Usutu virus)、雅5顯^t、病毒(Yaounde virus)、克科貝拉病毒(Kokobera virus)、斯特拉特福德病毒(Stratford virus)、巴力口4匕病毒(Bagaza virus)、寸尹歹'J烏斯病毒(IIheus virus)、羅西歐病毒(Rocio virus)、以色歹'J土耳其腦脊膜腦脊髓炎病毒(Israeli turkey meningoencephalomyelitisvirus)、恩、他耶病毒(Ntaya virus)、 i旦布蘇病毒(Tembusu virus)、 Sponweni病毒(Sponweni virus)、 斑齊病毒(Banzi virus)、 Bouboui病毒(Boubouivirus)、埃,杰山病毒(Edge Hill virus)、朱格拉病毒(Jugra virus)、 Potiskum病毒(Potiskum virus)、薩博亞病毒(Saboya virus)、塞皮克病毒(Sepikvirus)、烏干達病毒(Uganda virus)、威塞爾斯布隆病毒(Wesselsbron virus)、恩德培蝙蝠病毒(Entebbe bat virus)、索科洛克病毒(Sokoluk virus)、 Yokose病毒(Yokose virus)、阿普瓦病毒(Apoi virus)、考博恩里奇病毒(CowboneRidge virus)、朱蒂亞中白病毒(Jutiapa virus)、莫多克病毒(modoc virus)、 SalVieja病毒(Sal Vieja virus)、 San Perlita病毒(San Peiiita virus)、布卡拉沙蝙蝠病毒(Bukalasa bat virus)、卡勒島病毒(Carey Island virus)、達嚷爾蝙蝠病毒(Dakar bat virus)、蒙大拿鼠耳蝙蝠白細胞腦炎病毒(Mantanamyotis leukoencephalitis virus)、 巴土穴病毒(Batu Cave virus)、粉判蝙蝠病毒(Phnom Penh bat virus)、里奧布拉伏病毒(Rio Bravo virus)、 細胞融合劑病毒(Cell fusing agent virus)、塔瑪納蝙蝠病毒(Tamana bat virus)和丙型肝炎病毒，特別是登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒，特別是登革病毒和丙型肝炎病毒。
另一方面，本發(fā)明提供了式(I)或(II)化合物與至少一種第二種藥物的組合。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合，例如藥盒，包含a)第一種藥物，其是游離形式或可藥用鹽形式的式(I)或(II)化合物，和b)至少一種共同藥物。該藥盒可以包含用于其施用的"i兌明書。
在以上應(yīng)用本發(fā)明化合物的方法中，式(I)或(II)化合物可以施用于包括細胞或組織的系統(tǒng)。在其它實施方案中，式(I)或(II)化合物可以施用于人或動物患者。
制備以上定義的式(I)或(II)化合物的方法，該方法包括將式(i)化合物或相應(yīng)的環(huán)氧化物與式(ii)化合物偶聯(lián)
(i)
在式(i)化合物中，基團-OY和鄰近的-OH被-O-代替，<formula>formula see original document page 13</formula>得到式(iii)化合物
<formula>formula see original document page 13</formula>
其中X、 Rl、 R2和R3如以上定義的，Y表示H或烷基，例如低級烷基，例如甲基，并且Prot表示保護基，優(yōu)選卡基(其任選^:一個或多個鹵素取代)或苯甲?；驎醣锦；蚣坠柰榛?。如果需要，可以將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)的其它化合物。式(i)和式(ii)化合物是已知的化合物或者可以根據(jù)已知方法、例如類似于本文描述的方法制備。
本發(fā)明提供的化合物在下文中被定義為"本發(fā)明化合物"。本發(fā)明化合物包括任何形式的化合物，例如游離形式、鹽形式、溶劑化物形式以及鹽和溶劑化物形式。
本文所用的術(shù)語"烷基"指的是優(yōu)選包含1至15個碳原子的支鏈或直鏈烴基。相同的術(shù)語適用于烷基芳基的非芳族部分。烷基的實例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、壬基、癸基等。烷基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自卣素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用的術(shù)語"低級烷基"指的是包含1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子的支鏈或直鏈烷基。低級烷基的實例包括但不限于曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。低級烷基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自鹵素、羥基、M、烷基M、 二烷基M、烷基皿、芳基g、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。術(shù)語"環(huán)烷基"指的是優(yōu)選包含3至8個碳原子的飽和的或部分飽和的(非芳族)環(huán)。實例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。環(huán)烷基優(yōu)選是3、 5或6元環(huán)。環(huán)烷基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自鹵素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用術(shù)語"鏈烯基"指的是優(yōu)選包含2至15個碳原子、更優(yōu)選2至6個碳原子、甚至更優(yōu)選2或3個碳原子并且包含一個或多個雙鍵的支鏈或直鏈基團。鏈烯基的實例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、壬烯基、癸烯基等。鏈烯基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自囟素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用術(shù)語"炔基"指的是優(yōu)選包含2至15個碳原子、更優(yōu)選2至6個碳原子、甚至更優(yōu)選2或3個碳原子、并且最優(yōu)選2個碳原子并且包含一個或多個三鍵的支鏈或直鏈基團。炔基的實例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、壬炔基、癸炔基等。炔基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自卣素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。
術(shù)語"低級鏈烯基"和"低級炔基，，具有與以上定義的術(shù)語"低級烷基"相應(yīng)的含義。低級鏈烯基和低級炔基的實例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、乙炔基、丙炔基和丁炔基。低級鏈烯基或炔基可以是未取代的或者任選被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自卣素、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取4戈的。
本文所用的術(shù)語"烷氧基"指的是-OR,其中R是以上定義的烷基。術(shù)語"低級烷氧基，，具有與以上定義的術(shù)語"低級烷基，，相應(yīng)的含義。低級烷氧基的實例包括但不限于曱氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正
14丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。低級烷氧基的典型實例包括甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。
本文所用的術(shù)語"卣素"指的是F、 Cl、 Br或I，優(yōu)選Br或Cl。本文所用的術(shù)語"芳基"指的是具有6至18個碳原子的芳族環(huán)，并且包括單環(huán)基團和多環(huán)基團，例如稠合的基團，例如二環(huán)和三環(huán)基團。優(yōu)選的芳基是包含6至12個碳原子(對于單環(huán)優(yōu)選6個碳原子，對于稠合的二環(huán)優(yōu)選9或IO個碳原子)的那些。實例包括但不限于苯基、萘基和蒽基，特別是苯基。芳基可以是未取代的或者在一個或多個環(huán)位置上被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自鹵素、羥基、氨基、烷基M、 二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和疊氮基。典型地，它是未取代的。
術(shù)語"雜芳基"表示具有5至18個原子、優(yōu)選5或6個原子的芳族環(huán)，環(huán)中包含至少一個雜原子，例如但不限于N、 O和S。術(shù)語"雜芳基"包括單環(huán)基團和多環(huán)基團，例如稠合的基團，例如二環(huán)和三環(huán)基團。雜芳基可以任選與 一個或多個苯環(huán)和/或另外的雜芳基環(huán)和/或脂環(huán)稠合或橋連。
術(shù)語"雜環(huán)"、"雜環(huán)烷基"或"雜環(huán)的，，表示具有5至18個原子、優(yōu)選5或6個原子的飽和的或部分飽和的(非芳族)環(huán)，環(huán)中包含至少一個雜原子，例如但不限于N、 O和S。雜環(huán)可以任選與一個或多個苯環(huán)和/或另外的雜環(huán)和/或脂環(huán)稠合或橋連。
雜環(huán)和雜芳基的實例包括但不限于嗎啉基、哌喚基、哌#、吡咬基、吡咯烷基、吡溱基、嘧咬基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并巧悉唑基、苯并蓉唑基、苯并吹喃基、苯并呋咱基、苯并吡峻基、苯并三峻基、苯并噻汾基、^唑基、^啉基、噌啉基、巧1咮基、異吲咮基、二氫吲哚基、咪唑基、incio!azinyl、巧l唑基、嗎啉基、會鬼啉基、壹淋基、異會啉基、會峻啉基、1,2，3，4-四氫奮淋基、四氫p比喃基、四喳并p比^^、漆二唑基、噻喻基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二噁烷基、六氫氮雜革基、吡啶-2-酮、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并哺、唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫異鳴唑基、二氫異嚷唑基、二氫喁二唑基、二氫嗜、唑基、二氫吡溱基、二氫吡唑基、二氫吡t基、二氫嘧咬基、二氫吡咯基、二氫會啉基、二氫四唑基、二氫逸二唑基、二氬瘞喳基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲基二氧基節(jié)基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、噻唑基、異噻唑基、異巧悉唑基、咪唑基、茚滿基、萘吡1^
(naphthpyridinyl)、噍二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噍唑啉、氧雜環(huán)丁烷基、吡喃基、吡漆基、吡咬并吡t基、歧"秦基、吡咯基、吡唑基、吡咯基、菲咬基、三唑基、漆吩基、呋喃基、異苯并呋喃基或四唑基，特別是含N雜環(huán)，例如吡"^基、哌梵基、嘧t基、吡咯烷基、p底噪基、異會啉基、喹唑啉基、2，2，6，6-四曱基哌^!t^基和嗎淋基。
術(shù)語"烷基羰基"和"芳基羰基"包括其中羰基的碳原子與烷基或芳基部分的碳原子鍵合的基團。
術(shù)語"取代的"旨在描述具有取代基取代分子的一個或多個原子(例如C、 O或N)上的氫的部分。
術(shù)語"一個或多個取代基"意指至多例如3個取代基、優(yōu)選一個取代基。兩個或多個取代基可以是獨立選擇的。
多環(huán)部分包括具有兩個或多個環(huán)的那些，例如環(huán)烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)，其中兩個或多個碳是兩個鄰近環(huán)共有的("稠合的"環(huán))或其中環(huán)是通過非鄰近/共有原子相連的("橋連的"環(huán))。
本文所用的術(shù)語"前藥"表示式(I)或(II)化合物的藥理學(xué)上可接受的衍
生物，以l更衍生物的體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)生式(i)或(n)中定義的化合物。式(i)和(II)化合物的前藥可以通過修飾化合物中存在的功能團(例如羥基或制備，從而將修飾的基團在體內(nèi)裂解，得到母體化合物。適合的前藥包括例如酯或酰胺。
術(shù)語"鹽"包括衍生自式(I)和(II)化合物的治療活性的、無毒性的酸加成鹽。酸加成鹽可以是通過用適合的酸處理化合物的堿形式來獲得。適合
的酸包括無機酸，例如氫卣酸，特別是鹽酸、氫溴酸，硫酸、硝酸和磷酸；和有機酸，例如乙酸、羥乙酸、丙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對曱苯磺酸、環(huán)己烷M磺酸、水楊酸、對氨基水楊酸、雙羥萘酸(pamoic acid)、己酸、環(huán)戊烷丙酸、羥乙酸、丙酮酸、乳酸、酒石酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、1,2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、4-氯苯磺酸、2-M酸、樟腦磺酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基磺酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘酸和硬脂酸。
術(shù)語"保護基"表示封閉分子中官能團，以便在反應(yīng)中化學(xué)選擇性是可能的。適合的保護基優(yōu)選是易于引入、對相關(guān)反應(yīng)條件穩(wěn)定并且易于除去。此類保護基是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且在Theodora W Greene編寫的Protective Groups in Organic Synthesis(有機合成中的保護基)(JohnWiley & Sons Canada, Ltd)中描述。適合的保護基包括例如千基，其任選被一個或多個閨素取代(例如二氯節(jié)基)，或苯甲?；驎醣锦；蚣坠柰榛?。
術(shù)語"治療"包括消除或減輕至少一種與所治療的狀態(tài)、疾病或障礙相關(guān)的或者由所治療的狀態(tài)、疾病或障礙引起的癥狀。例如，治療可以包括消除一種或多種以下患者的病毒血癥或發(fā)燒。
術(shù)語"預(yù)防"包括預(yù)防至少一種與所治療的狀態(tài)、疾病或障礙相關(guān)的或者由所治療的狀態(tài)、疾病或障礙引起的癥狀。例如，預(yù)防可以包括預(yù)防一種或多種以下患者的病毒血癥或發(fā)燒。
術(shù)語"患者，，包括能夠患有病毒感染或受到病毒感染的折磨或感染病毒感染的有才幾體，例如哺乳動物例如人、猿、猴子、母牛、馬、豬、綿羊、貓、狗、山羊、小鼠、兔子、大鼠和轉(zhuǎn)基因非人動物。在某些實施方案中，患者是人，例如能夠患有本文描述的疾病或病癥或受到本文描述的疾病或病癥的折磨的人，所述的疾病或病癥例如由黃病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黃病毒科病毒引起的感染。
登革病毒旨在包括任何登革病毒血清型1、 2、 3和4 "由病毒感染引起的疾病"包括患者與病毒活性相關(guān)的障礙和狀態(tài)，例如病毒感染，例如在患者中由黃病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黃病毒科病毒引起的感染。
本發(fā)明化合物的"有效量"是治療或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的所需或足夠的量，所述的病毒感染例如由黃病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黃病毒科病毒引起的感染，例如有效量是治療或預(yù)防一種或多種病毒感染的癥狀所需的量。有效量可以取決于所用的化合物、施用方式、所需的治療和指定的疾病以及其它因素(例如患者年齡、體重、 一般健康狀況和性別)而不同。例如，本發(fā)明化合物的選擇可以影響"有效量"的制定。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將能夠研究本文所描述的因素并且在沒有過度的試驗下確定關(guān)于本發(fā)明化合物的有效量。施用方案可以影響有效量的制定。本發(fā)明化合物可以在由病毒感染引起疾病的發(fā)作之前或之后(例如在黃病毒科的病毒引起的感染之前或之后)施用于患者。另外，數(shù)個分劑量和交錯劑量可以是每天或連續(xù)施用，或者劑量可以是連續(xù)輸注的，或者可以是推注的。另外，本發(fā)明化合物的劑量可以是如治療或預(yù)防情況的緊急性所指示的按比例增加或減少。具有本領(lǐng)域一般^t術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地確定并且開出所需的有效量。例如，醫(yī)師或獸醫(yī)開始施用的藥物組合物中所用的本發(fā)明化合物的劑量水平低于獲得所需的治療效果所需的劑量水平，并且逐漸增加劑量直至獲得所需的效果。
術(shù)語"藥物組合物"包括適合施用于哺乳動物、例如人的制劑，例如藥物。
物轉(zhuǎn)化為它們的治療活性的、無毒性堿加成鹽形式。適合的堿鹽形式包括例如銨鹽、堿金屬和堿土金屬鹽，特別是鋰、鈉、鉀、鎂和鉤鹽，與有機
堿的鹽，例如N，N，-二節(jié)基亞乙基二胺(benzathine)、 N-甲基-D-葡糖胺和羥基胺鹽(hybramine)，以及與氨基酸的鹽，所述的氨基酸例如精氨酸和賴氨酸。
通過用適合的堿或酸處理可以方便地將酸或堿加成鹽形式轉(zhuǎn)化為游離 形式。
本文中所用的術(shù)語加成鹽還包括本發(fā)明化合物及其鹽能夠形成的溶劑 化物。此類溶劑化物包括例如7K合物和醇化物。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明化合物可以以旋光異構(gòu)體、外消旋體或非對映 異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明的范圍包括化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)體形式。 因此，本文所用的術(shù)語"立體化學(xué)異構(gòu)體形式"表示本發(fā)明化合物可以具
有的所有可能的異構(gòu)體形式。特別的是，不對稱碳可以具有R-或S-構(gòu)型。 例如，本發(fā)明化合物的四氫呋喃基的不對稱碳可以具有R-或S-構(gòu)型。
還應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明化合物可以以互變異構(gòu)體存在。例如，本發(fā) 明化合物(其中Rl是OH或NH2，或者其中R2是NH2)可以以互變異構(gòu)體 形式存在。本發(fā)明的范圍包括所有此類互變異構(gòu)體形式。
游離或可藥用加成鹽形式的本發(fā)明化合物，特別是列舉的，顯示出藥 理學(xué)活性并且用作藥物，特別用于治療和/或預(yù)防病毒感染，例如由黃病毒 科成員引起的那些感染?；衔锾貏e用于治療和/或預(yù)防感染，例如由登革 病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金 病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉 病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黃病毒科病毒引起的 那些感染。
實施例1-10的化合物是優(yōu)選的本發(fā)明化合物。例如已經(jīng)確定本發(fā)明化 合物(包括實施例1-10的化合物)在基于細胞的黃病毒免疫(CFI)試驗、基于 細胞的黃病毒細胞病變效應(yīng)(CPE)試驗和HCV復(fù)制子試驗以及體內(nèi)登革 病毒感染的小鼠模型中顯示出活性。這些試驗如實施例部分描述的那樣進 行。
在登革病毒的CFI試驗中，本發(fā)明化合物顯示出ECso值小于14 ^M、 優(yōu)選小于5 ^M、優(yōu)選小于3 pM、更優(yōu)選小于2 ^M、甚至更優(yōu)選小于1 pM、 最優(yōu)選小于0.8iiM。例如，實施例l的化合物的ECs。值為約0.2inM(例如 用登革病毒血清型1和登革病毒血清型4)，實施例4的化合物的ECs。值為
19約0.4 pM(例如用登革病毒血清型2)，實施例8的化合物的ECso值為約0.6 pM(例如用登革病毒血清型2)。
在黃熱病病毒的CFI試驗中，本發(fā)明化合物顯示出ECso值小于5 |nM、 優(yōu)選小于3iuM、更優(yōu)選小于2^M、甚至更優(yōu)選小于1.5|xM、最優(yōu)選小于 0.9 |LiM。例如，實施例1的化合物的ECso值為約0.9 nM。
在西尼羅河病毒的CPE試驗中，本發(fā)明化合物顯示出ECso值小于5 pM、優(yōu)選小于3nM、優(yōu)選小于2pM、更優(yōu)選小于1.5iaM、最優(yōu)選小于 1.3 ^M。例如，實施例l的化合物的ECs。值為約3.75nM。
在日本腦炎病毒的CPE試驗中，本發(fā)明化合物顯示出ECso值小于5 ^M、更優(yōu)選小于4nM。例如，實施例1的化合物的ECso值為約1.3pM。
在HCV復(fù)制子試驗中，本發(fā)明化合物顯示出ECso值小于5 |iM、優(yōu) 選小于2 |aM、更優(yōu)選小于1 nM、更優(yōu)選小于0.7 pM、甚至更優(yōu)選小于0.5 fiM、甚至更優(yōu)選小于0.3 jiM、甚至更優(yōu)選小于0.2 ^M、最優(yōu)選小于0.1 pM。 例如，實施例1的化合物的ECso值為約0.1 |iM。
CFI試驗是以病毒包膜蛋白質(zhì)E的定量免疫檢測為基礎(chǔ)的，作為靼細 胞中病毒載量的讀數(shù)。在CFI試驗中，本發(fā)明化合物顯示出對抗登革病毒 和黃熱病病毒的活性。另夕卜，本發(fā)明化合物在CPE試驗中顯示出對抗日本 腦炎病毒的活性。在該試驗中，本發(fā)明化合物的活性是通過評價抑制耙細 胞中病毒誘導(dǎo)的CPE來確定的。本發(fā)明化合物在HCV復(fù)制子試驗中也顯 示出對抗HCV活性。
因此，其表明對于治療病毒感染，例如由黃病毒科的病毒引起的那些 感染，例如登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、日本腦炎病毒、蜱媒 腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、奧馬斯克出血熱病毒、 牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黃病毒 科病毒引起的感染，本發(fā)明化合物可以通過常規(guī)所用的類似的施用方式以 類似的劑量施用于更大的哺乳動物，例如人。
另外，應(yīng)當(dāng)理解的是，用于治療和/或預(yù)防病毒感染的本發(fā)明化合物的 劑量范圍取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的因素，包括所治療的宿主、性質(zhì)和 病癥的嚴(yán)重程度、施用方式和所用的特別物質(zhì)。本發(fā)明化合物的日劑量將根據(jù)所用的化合物、施用方式、所需的治療 和指定的疾病以及其它因素(例如患者年齡、體重、 一般健康狀況、病癥、 先前的醫(yī)療史和性別以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中已知的因素)而不同。例如，本發(fā)明化
合物以日劑量范圍約0.5 mg/kg體重至約15 mg/kg體重、例如約1 mg/kg 體重至約10 mg/kg體重施用。典型的是，對于70 kg的人，當(dāng)本發(fā)明化合 物以日劑量約0.001 g至約1.5 g、例如不超過約1 g、例如約0.1 g至約0.5 g，每天至多4次施用時，可以獲得滿意的結(jié)果。
例如，對于實施例l的化合物，對于70 kg的人，用于治療登革病毒 感染的指定的日劑量是約200-400 mg，優(yōu)選每天施用一次。
對于藥物用途，可以應(yīng)用一種或多種本發(fā)明化合物，例如應(yīng)用一種、 或者兩種或多種本發(fā)明化合物的組合，優(yōu)選一種本發(fā)明化合物。
當(dāng)本發(fā)明化合物作為藥物施用于患者、例如施用于哺乳動物、例如人 時，它們可以以本身施用或者作為藥物組合物施用?？梢詫⒈景l(fā)明化合物 配制成多種藥物形式，用于這些施用目的。對于全身施用的藥物，可以應(yīng) 用通常所用的任何適合的組合物?？梢詫⒈景l(fā)明化合物配制用于通過任何 適合途徑施用，例如口服施用、非腸道施用、通過p及入噴霧劑施用、經(jīng)皮 施用、鼻內(nèi)施用(例如通過噴霧劑)、局部施用(例如通過散劑、軟膏劑或滴 劑)、直腸施用、陰道施用、舌下施用、含服或經(jīng)過植入的儲庫施用。在某 些實例中，本發(fā)明化合物是口服施用的。
為了制備本發(fā)明的藥物組合物，將有效量的任選加成鹽形式的本發(fā)明 化合物(作為活性成分)與可藥用栽體以直接混合物混合。通常，制劑是通
混::制備的，然后，如果需要r將產(chǎn)物成;:可藥用載體包括適;將本
發(fā)明化合物施用于患者的可藥用材料、組合物或栽體。載體包括液體或固 體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包嚢材料，其參與將本發(fā)明化合物從 機體的一個器官或部分?jǐn)y帶或轉(zhuǎn)運至機體的另一個器官或部分。取決于施 用所需的制劑形式，載體可以采用多種形式。在一定意義上與制劑的其它 成分相容并且對患者沒有危害的載體是可接受的。適合的栽體包括但不限 于糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其^f生物，例如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；西 黃蓍膠粉；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，例如可可脂和栓劑石蠟；油類， 例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇 類，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯類， 例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁； 海藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液； 在口服液體制劑的情況中，水、二醇類、油類、醇類等；固體栽體例如高
嶺土；其它稀釋劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑和藥物制劑中所用的其它無 毒相容物質(zhì)。
在組合物中還可以存在潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉 和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑、 防腐劑和抗氧化劑。
可藥用抗氧化劑的實例包括水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸 半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，例如 抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥茴醚(BHA)、 丁羥曱苯(BHT)、卵磷脂、沒食子 酸丙酯、a-生育酚等；以及金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、 山梨醇、酒石酸、磷酸等。
優(yōu)選的藥物組合物包括適合口服施用或非腸道注射施用的單位劑型的 那些。
對于口服施用，可以將化合物配制為固體或液體制劑，例如片劑、膠 嚢劑、散劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、酏劑、乳劑和*劑。在 制備這些口服劑型中，可以應(yīng)用任何通常的藥物介質(zhì)，例如在口服液體制 劑的情況中，可以應(yīng)用水、二醇類、油類、醇類等，或者固體載體，例如 淀粉、糖類、高嶺土、稀釋劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等?？梢约尤肫?它組分，例如著色劑、餘朱劑或矯p木劑。由于它們易于施用，片劑和膠嚢 劑代表了最有利的口服劑量單位形式，在這種情況中可以應(yīng)用固體藥物栽 體。
適合口服施用的本發(fā)明制劑可以M嚢劑、扁嚢劑、丸劑、片劑、錠 劑(應(yīng)用矯味的基質(zhì)，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)、散劑、顆粒劑、或在水或非水液體中的溶液劑或混懸劑，或者水包油或油包水的液體乳劑， 或者酏劑或糖漿劑，或者軟錠劑(應(yīng)用惰性基質(zhì)，例如明膠和甘油，或蔗糖 和阿拉伯膠)和/或漱口劑等形式，每個包含預(yù)定量的本發(fā)明化合物作為活
性成分。本發(fā)明化合物還可以作為大丸劑、藥糖劑(electuary)或糊劑施用。 在口服施用的本發(fā)明固體劑型(膠嚢劑、片劑、丸劑、糖錠劑、散劑、 顆粒劑等)中，將活性成分與一種或多種可藥用載體(例如檸檬酸鈉或磷酸 二鈣)和/或任選以下物質(zhì)混合填充劑或膨脹劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、 葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、 聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；保濕劑，例如甘油；崩解劑，例如 瓊脂、碳酸釣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽類和碳酸鈉；溶 液阻滯劑，例如石蠟；吸收促進劑，例如季胺類化合物；潤濕劑，例如鯨 蠟醇和單硬脂酸甘油酯；吸收劑，例如高嶺土和皂粘土；潤滑劑，例如滑 石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂^^SL酸鈉以及它們的混 合物；以及著色劑。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況中，藥物組合物還可以 包含緩沖劑。類似類型的固體組合物在軟和硬填充的明膠膠嚢劑中還作為 填充劑應(yīng)用，應(yīng)用這些賦形劑，例如乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇 等。
片劑可以是通過任選與 一種或多種附加成分壓制或模制來制備的。壓 制片可以是應(yīng)用粘合劑(例如明膠或羥丙基曱基纖維素)、潤滑劑、惰性稀 釋劑、防腐劑、崩解劑(例如羥乙酸淀粉鈉或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面 活性或*劑來制備的。模制片可以是通過在適合的裝置中模制用惰性液 體稀釋劑潤濕的粉末化合物的混合物來制備的。
可以將片劑和本發(fā)明的藥物組合物的其它固體劑型(例如糖錠劑、膠嚢 劑、丸劑和顆粒劑)任選壓痕或與包衣和外殼、例如腸溶包衣和藥物配制領(lǐng) 域中眾所周知的其它包衣一起制備。還可以將它們配制成能夠提供其中的 活性成分的緩釋或控釋，應(yīng)用例如多種比例的羥丙基甲基纖維素以提供所 需的釋放特性，其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球?？梢詫⑺鼈兺ㄟ^例如 經(jīng)濾菌器過濾或者通過引入無菌固體組合物形式的滅菌劑(可以將其溶于 無菌水中)或者在應(yīng)用前立即引入某些其它無菌可注射介質(zhì)來滅菌。這些組
23合物還可以任選包含遮光劑并且可以是僅釋放活性成分的組合物，或者優(yōu) 選在胃腸道的某部分，任選以延緩的方式來釋放活性成分的組合物?？梢?應(yīng)用的包埋組合物的實例包括聚合物和石蠟?；钚猿煞诌€可以是微嚢形式， 如果適合，其與一種或多種上述的賦形劑組合。
用于本發(fā)明化合物口服施用的液體劑型包括可藥用乳劑、微乳劑、溶 液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除了活性成分，液體劑型可以包含本領(lǐng)域 常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異
丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸千酯、丙二醇、1，3-丁二醇、 油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、,油、蓖麻油和m油)、 甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨醇脂肪酸酯以及它們的混合物。
除了惰性稀釋劑，口服組合物還可以包含佐劑，例如潤濕劑、乳化劑 和助懸劑、甜^^木劑、矯^^木劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。
除了活性化合物，混懸劑可以包含助懸劑，例如乙氧基化異硬脂醇、 聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、皂粘土、瓊
脂和黃蓍膠以及它們的混合物。
用于直腸或陰道施用的本發(fā)明藥物組合物的制劑可以作為栓劑存在， 其是通過將一種或多種本發(fā)明化合物與一種或多種適合的、無刺激性的賦 形劑或載體(包括例如可可脂、聚乙二醇、栓劑石蠟或水楊酸脂)混合來制 備的，并且其在室溫下是固體，但是在體溫下是液體，因此其在直腸或陰 道腔內(nèi)將熔化并且釋放活性化合物。
的陰道環(huán)、衛(wèi)生栓、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑。 '
用于局部或經(jīng)皮施用本發(fā)明化合物的劑型包拾歉劑、噴霧劑、軟膏劑、 糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑?？梢詫⒒钚曰?物在無菌條件下與可藥用栽體以及與任何可能需要的防腐劑、緩沖劑或拋 射劑混合。
除了本發(fā)明活性化合物，軟青劑、糊劑、乳青劑和凝膠劑可以包含賦 形劑，例如動物和植物脂肪、油類、蠟類、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素 衍生物、聚乙二醇、硅酮、皂粘土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或它們的混合物。
除了本發(fā)明化合物，散劑和噴霧劑可以包含賦形劑，例如乳糖、滑石 粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鉤和聚酰胺粉末或者這些物質(zhì)的混合物。噴霧 劑還可以包含常規(guī)的拋射劑，例如氯氟烴和揮發(fā)性未取代的烴類，例如丁 烷和丙烷。
經(jīng)皮貼劑具有額外的優(yōu)勢，能將本發(fā)明化合物可控地遞送進入機體。 此類劑型可以通過將化合物溶于或分歉于適合的介質(zhì)中來制備。還可以應(yīng) 用吸收增強劑以增加穿過皮膚的化合物通量。該通量的速率可以通過提供 速率控制膜或者將活性化合物*在聚合物基質(zhì)或凝膠中來控制。 眼用制劑、眼膏劑、散劑、溶液劑等也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。 適用于非腸道施用的本發(fā)明藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明化合 物，與一種或多種可藥用無菌等滲水或非水溶液、M液、混懸液或乳液， 或無菌粉末(其可以僅在應(yīng)用前重新配制成無菌可注射溶液劑或分散劑)組 合，其可以包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、能使制劑與預(yù)期受試者的血 液等滲的溶質(zhì)或者助懸劑或增稠劑。對于非腸道組合物，栽體通常將包含 無菌水，盡管有其它成分，但是至少包括大部分，例如以有助于溶解度。 例如可以制備可注射溶液劑，其中載體包括鹽溶液、葡萄糖溶液或者鹽和 葡萄糖溶液的混合物。還可以制備可注射混懸劑，在這種情況中，可以應(yīng) 用適合的液體栽體、助懸劑等。還包括固體形式制劑，在應(yīng)用前將其轉(zhuǎn)化 為液體形式制劑。
可以應(yīng)用于本發(fā)明藥物組合物的適合的水和非水載體的實例包括水、 乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它們適合的混合物、植
物油(例如^Mt油)以及可注射有機酯(例如油酸乙酯)。適合的流動性可以例 如通過應(yīng)用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散劑的情況中通過維持所需的粒 徑以及通過應(yīng)用表面活性劑來維持。
這些組合物還可以包含佐劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分狀劑。 防止微生物的作用可以通過包含多種抗細菌劑和抗真菌劑(例如對羥基苯 曱酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)來保證。組合物還需要包含等滲劑，例如 糖、氯化鈉等。另外，可注射藥物形式的延長吸收可以通過包含延緩吸收
25的試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實現(xiàn)。
在某些情況中，為了延長藥物的作用，需要延緩皮下或肌內(nèi)注射的藥 物的吸收。這可以通過應(yīng)用具有弱水溶性的結(jié)晶或無定形物質(zhì)的液體混懸 液來實現(xiàn)。然后藥物的吸收速率取決于其溶出速率，相反，其可能取決于 晶體大小和結(jié)晶形式?？蛇x擇的是，延緩非腸道施用的藥物形式的吸收通 過將藥物溶于或懸浮于油性載體中而實現(xiàn)。
可注射儲庫形式通過將目標(biāo)化合物的微嚢基質(zhì)在生物可降解聚合物 (例如聚乳酸-乙醇酸交酯)中成型來制備。取決于藥物與聚合物的比例和所 用的特別聚合物的性質(zhì)，可以控制藥物釋放速率。其它生物可降解的聚合 物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲庫可注射制劑還通過將藥物包埋于 與機體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。
本文所用的術(shù)語"非腸道施用，，或類似的表示除了腸內(nèi)和局部施用之 外的施用方式，通常通過注射施用，并且包括但不限于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動 脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮 下、關(guān)節(jié)內(nèi)、嚢下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)和胸骨內(nèi)注射和輸注。
取決于施用方式，藥物組合物將優(yōu)選包含0.05至99.5%重量、更優(yōu)選 0.1至70%重量、更優(yōu)選30至70%重量的活性成分，和0.05至99.95%重 量、更優(yōu)選0.1至70%重量、更優(yōu)選30至70%重量的可藥用載體，所有 百分?jǐn)?shù)基于總的組合物。
藥物組合物還可以包含本領(lǐng)域已知的多種其它成分，例如潤滑劑、穩(wěn) 定劑、緩沖劑、乳化劑、粘度調(diào)節(jié)劑、表面活性劑或防腐劑。
為了 ^^于施用和劑量均勻，配制單位劑型的藥物組合物是特別有利的。 本文所用的單位劑型指的是適合作為單一劑量的物理上分離的單位，每個 單位包含預(yù)定量的活性成分，計算該量以與所需的藥物載體組合產(chǎn)生所需 的治療效果。此類單位劑型的實例是片劑(包括刻痕片或包衣片)、膠嚢劑、 丸劑、散劑包、糯米紙嚢劑、栓劑、可注射溶液劑或混懸劑等，以及它們 分開的多組分。
本發(fā)明化合物可以單獨施用或與第二種藥物組合施用。
另一方面，本發(fā)明提供了-本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥物的組合；
-藥物組合，該藥物組合包含本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥物組
合；
-藥物組合物，該藥物組合物包含本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥 物以及一種或多種可藥用賦形劑組合；
-本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥物組合，例如以藥物組合或組合 物的形式，用于本文定義的任何方法，例如
-組合、藥物組合或藥物組合物，其包含本發(fā)明化合物和至少一 種第二種藥物，用作藥物；
-作為本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥物組合應(yīng)用，例如以藥 物組合或組合物的形式；
-在需要的患者中用于治療和/或預(yù)防病毒感染的方法，該方法包 括共同施用、相伴或依次施用治療有效量的本發(fā)明化合物和至少一種 第二種藥物，例如以藥物組合或組合物的形式；
-本發(fā)明化合物與至少一種第二種藥物組合，例如以藥物組合或 組合物的形式，用于制備用于治療和/或預(yù)防病毒感染的藥物。 本文所用的術(shù)語"共同施用"或類似的表示包括將所選的第二種藥物 施用于單個患者，并且旨在包括治療方案，其中第二種藥物不必通過相同 的施用途徑或在相同時間施用?？梢詫⒈景l(fā)明化合物和任何第二種藥物配 制在分開的劑型中?？蛇x自的是，為了減少施用于患者的劑型數(shù)量，可以 將本發(fā)明化合物和任何第二種藥物一起配制在任何組合中。例如，可以將 本發(fā)明化合物配制成一種劑型并且可以將第二種藥物一起配制成另 一種劑 型。任何分開的劑型可以在相同時間或不同時間施用。
組合包括固定組合，其中本發(fā)明化合物和至少一種第二種藥物在相同 制劑中；藥盒，其中在相同包裝中提供了在分開的制劑中的本發(fā)明化合物 和至少一種第二種藥物，例如帶有用于共同施用的說明書；以及游離組合， 其中本發(fā)明化合物和至少一種第二種藥物是分開包裝的，但是給出相伴或 依次施用的"i兌明書。
另一方面，本發(fā)明提供了-藥物包裝，除了用于組合施用的說明書之外，該藥物包裝包含第一
種藥物(其是本發(fā)明化合物)和至少 一種第二種藥物；
-藥物包裝，除了用于組合施用的說明書之外，該藥物包裝包含本發(fā) 明化合物和至少一種第二種藥物；
-藥物包裝，除了用于組合施用的說明書之外，該藥物包裝包含至少 一種第二種藥物和本發(fā)明化合物。
與單一治療相比，用本發(fā)明的組合的治療可以提供改善。 另一方面，本發(fā)明提供了
-藥物組合，該藥物組合包含一定量的本發(fā)明化合物和一定量的第二 種藥物，其中一定量是適合產(chǎn)生協(xié)同治療作用的；
-改善本發(fā)明化合物的治療功效的方法，該方法包括共同施用(例如相 伴或依次)治療有效量的本發(fā)明化合物和第二種藥物；
-改善第二種藥物的治療功效的方法，該方法包括共同施用(例如相伴 或依次)治療有效量的本發(fā)明化合物和第二種藥物。
本發(fā)明化合物和第二種藥物的組合(作為組合伴侶)可以通過任何常規(guī) 途徑(例如本文對于本發(fā)明化合物所述的)施用。第二種藥物可以以適合的 劑量施用，例如劑量范圍類似于單獨治療所用的那些，或者例如在協(xié)同的 情況中，低于常規(guī)劑量范圍。
可以適當(dāng)?shù)?，例如根?jù)，例如類似于常規(guī)方法，或者本文對于本發(fā)明 組合物所描述的那樣提供本文所描述的包含本發(fā)明組合的藥物組合物和包 含第二種藥物的藥物組合物。
兩種或多種藥物(例如本發(fā)明化合物和第二種藥物)的有效劑量是一起 施用的，或者在可選擇的或序列步驟治療中施用，其中每個藥物的有效劑 量是連續(xù)或依次施用的。通常，第一種選擇典型地優(yōu)于可選擇的治療，因 為其對病毒誘導(dǎo)多重同時存在的應(yīng)激。給定的劑量將取決于藥物的吸收、 失活和排泄速度以及其它因素。應(yīng)當(dāng)注意的是，劑量值還將隨所減輕的病
癥的嚴(yán)重程度而不同。應(yīng)當(dāng)進一步理解的是，對于任何特別的患者，特別 劑量方案和時間表可以根據(jù)個體需要和施用或指導(dǎo)組合物施用的人的職業(yè) 判斷隨時間而調(diào)整。在實施這些方法中所需的日劑量將取決于例如所用的本發(fā)明化合物、 宿主、施用方式、所治療的病癥的嚴(yán)重程度而不同。以上描述了口服施用 于患者的適合的日劑量和單位劑型。在劑型中第二種藥物的量可以變化很 大，并且可以通過常規(guī)試驗來確定。例如，取決于所需的藥理作用，本發(fā) 明化合物和第二種藥物的劑量指定為大約相同數(shù)量級，例如對于相同化合 物，施用一半，例如單獨或與另一種化合物施用。
術(shù)語"第二種藥物"表示化學(xué)治療藥物，其可能是或可能不是式(I)或
(n)化合物，特別是除了式(i)或(n)化合物之外的任何化學(xué)治療藥物。
例如，本文所用的第二種藥物包括例如具有抗病毒活性、特別是抗黃 病毒科活性、最特別是抗登革熱或丙型肝炎活性的藥物，例如蛋白酶抑制
劑、核苷/核苷酸類似物、病毒i^v抑制劑、病毒聚合酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)
劑、抗體和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。此類抗病毒藥物包括但不限于利巴韋林、阿 糖腺苷、阿昔洛韋、更昔洛韋、扎那米韋、磷酸奧司他韋、泛昔洛韋、阿 扎那韋、金剛烷胺、去羥肌苷、依法韋倫、膦甲酸、茚地那韋、拉米夫定、 奈非那韋、利托那韋、沙奎那韋、司他夫定、伐昔洛韋、纈更昔洛韋、齊
多夫定、替比夫定(telbivudine)、干擾素，例如干擾素-a-2a或干擾素-a-2b， 例如Intron⑧A、 Roferon 、 Avonex⑧、Rebif⑧或Betaferon ,復(fù)合干擾
素、淋巴細胞樣干擾素、干擾素T或結(jié)合水溶性聚合物或人白蛋白的干擾
素，例如a-干擾素白蛋白(albuferon);拉米夫定，美國專利第6,812,219號 和WO 2004/002422 A2中公開的化合物(將該公開的全部內(nèi)容并入本文作 為參考)；抗纖維化藥物，例如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物，例如伊馬替尼； 免疫調(diào)節(jié)劑，例如麥考酚酸、其鹽或前藥，例如麥考酚酸鈉或麥考酚酸嗎 乙酯；或S1P受體激動劑，例如FTY720或其任選磷酸化的類似物，例如 EP627406A1、 EP778263A1、 EP1002792A1、 WO02/18395、 WO02歸95、 WO 02/06268、 JP2002316985、 WO03/29184、 WO03/29205、 WO03/62252 和WO03/62248中乂^開的(將該公開的全部內(nèi)容并入本文作為參考)。
其它第二種藥物包括但不限于鎮(zhèn)痛藥和抗炎化合物，例如NSAID。其 它第二種藥物的實例包括但不限于對乙酰氨基酚、阿司匹林、雙7JC楊酯、 二氟尼柳、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、吡羅昔康、萘普生、雙氯芬酸、吲咮美辛、舒林酸、托美丁、依托度酸、酮咯酸、奧沙普秦和塞來昔布； 呋痿米；維生素K;碳酸氬鹽；鉤；止吐藥，例如多潘立酮、曱氧氯普胺、 溴必利和阿立必利；雷尼替??；西咪替??；法莫替?。荒嵩娑。焕啄崽???；羅沙替??；米索前列醇；恩前列素；埃索美拉唑；蘭索拉哇；奧美拉
唑；泮托拉唑；雷貝拉唑；替那拉唑；甘珀酸；硫糖鋁；哌侖西平；抗驚 厥藥，例如乙酰唑胺、阿普唑侖、異戊巴比妥、卡馬西平、加巴噴丁、氯 氮萆、氯巴占、氯美噻唑、氯硝西泮、卡馬西平、地西洋、苯妥英、雙丙 戊酸鈉、丙戊酸鈉、乙琥胺、氟桂利溱、磷苯妥英、左乙拉西坦、拉莫三 溱、勞拉西泮、普瑞巴林、硫酸鎂、苯巴比妥、咪達唑侖、奧卡西平、樸 米酮、氨己烯酸、托吡酯、丙戊酸、丙戊酰胺、唑尼沙胺、佐匹克??；和 J難激素，例如倍美力。
本發(fā)明化合物可以例如與另外的丙型肝炎病毒調(diào)節(jié)化合物(其是或不 是式(I)或(II))組合用于治療患者的丙型肝炎病毒相關(guān)障礙。
WO 2005/042020(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)描述了多種丙型肝 炎病毒抑制劑和細胞色素P450( "CYP")抑制劑的組合。任何適合的CYP 抑制劑可以與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用。這些CYP抑制劑包括但不限于利托 那韋(WO 94/14436，將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)、酮康唑、醋竹桃霉 素、4-甲基吡唑、環(huán)孢菌素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、 咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、奈法唑酮、舍曲林、茚地那韋、奈非那韋、 氨普那韋、呋山那韋、沙套那韋、洛匹那韋、地拉韋啶、紅霉素、VX-944 和VX-497。優(yōu)選的CYP抑制劑包括利托那韋、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、環(huán)孢菌素和氯美噻唑。
測量化合物抑制CYP活性的能力的方法是已知的(參見例如US 6,037,157和Yun等人，Drug Metabolism & Disposition(藥物^R謝與分布)， 第21巻，第403-407頁(1993);將其并入本文作為參考)。例如，可以將用 于評價的化合物與0.1、 0.5和1.0 mg蛋白質(zhì)/mL或者其它適合濃度的人肝 微粒體(例如可商購獲得的混合的特征肝微粒體)在產(chǎn)生NADPH體系的存 在下培養(yǎng)0、 5、 10、 20和30分鐘或其它適合的時間。對照培養(yǎng)是在沒有 肝微粒體的存在下進行0和30分鐘(三份)。樣品可以在化合物的存在下分析。產(chǎn)生化合物代謝線性速率的培養(yǎng)條件將被用作其它研究的指導(dǎo)?？梢?應(yīng)用本領(lǐng)域已知的試驗來確定化合物代謝的動力學(xué)(Km和Vmax)。可以確定
化合物的消除速率并且根據(jù)Michaelis-Menten動力學(xué)，通過應(yīng)用 Lineweaver-Burk、 Eadie-Hofstee或非線性回歸分析來分析數(shù)據(jù)。
然后進行代謝抑制試驗。例如，可以將化合物(一個濃度，^Km)與混合 的人肝孩史粒體在CYP抑制劑(例如利托那韋)不存在或存在下、在以上確定 的條件下培養(yǎng)。正如所公認的，對照培養(yǎng)可以包含與用CYP抑制劑培養(yǎng)相 同濃度的有機溶劑?？梢远繕悠分械幕衔锏臐舛?，并且可以確定母體 化合物的消除速率，速率表示為對照活性的百分?jǐn)?shù)。
評價個體中共同施用本發(fā)明化合物和CYP抑制劑的影響的方法也是 已知的(參見例如US2004/0028755;將其并入本文作為參考)。任何此類方 法可以與本發(fā)明結(jié)合用于確定組合的藥物代謝動力學(xué)影響。然后選擇將從 本發(fā)明的治療中獲益的個體。
因此，本發(fā)明的一個實施方案提供了施用CYP3A4的抑制劑和本發(fā)明 化合物的方法。本發(fā)明的另一個實施方案提供了施用同工酶 3A4( "CYP3A4")、同工酶2C19( "CYP2C19")、同工酶2D6( "CYP2D6")、 同工酶1 A2("CYP1 A2")、同工酶2C9("CYP2C9")或同工酶2E1("CYP2E1") 的抑制劑的方法。
應(yīng)當(dāng)理解的是，在人體內(nèi)能廣泛觀察到CYP3A4活性。因此，涉及抑 制同功酶3A4的本發(fā)明的實施方案將預(yù)期可應(yīng)用于大范圍的患者。
因此，本發(fā)明提供了以下方法，其中CYP抑制劑與本發(fā)明化合物在相 同的劑型或分開的劑型中一起施用。
如以上所示，所用的關(guān)于第二種藥物的日劑量將取決于例如所用的化 合物、宿主、施用方式和所治療的病癥的嚴(yán)重程度而不同。例如，拉米夫 定可以以日劑量100mg施用。聚乙二醇化的干擾素可以每周1至3次、優(yōu) 選每周1次以總的周劑量范圍200至1000萬IU、更優(yōu)選500至1000萬IU、 最優(yōu)選800至1000萬IU非腸道施用。由于可以應(yīng)用的第二種藥物的不同 類型，量可以變化4艮大，并且可以通過上述的常規(guī)試驗確定。
目前治療丙型肝炎的護理標(biāo)準(zhǔn)是聚乙二醇化的干擾素a和利巴韋林的組合，其中推薦劑量是1.5嗎/kg/wk聚乙二醇化的干擾素ot-:2b或l洲峰/wk 聚乙二醇化的干擾素a-2a，對于基因型1的患者，每天加上1000至1200 mg 利巴韋林，施用48周；或者對于基因型2/3的患者，每天加上800 mg利 巴韋林，施用24周。
本發(fā)明化合物和第二種藥物可以通過任何常規(guī)途徑施用，特別是腸內(nèi) 施用，例如口服，例如以飲用的溶液劑、片劑或膠嚢的形式，或者非腸道 施用，例如以可注射溶液劑或混懸劑的形式。
干擾素與水溶性聚合物的結(jié)合物意指特別包括與聚環(huán)氧烷均聚物例如
聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化的多元醇、它們的共聚物和它們 的嵌段共聚物的結(jié)合物。作為可選擇的基于聚環(huán)氧烷的聚合物，可以應(yīng)用 有效的無抗原材料，例如右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙 烯醇、基于碳水化合物的聚合物等。此類干擾素-聚合物的結(jié)合物在美國專 利第4,766,106、 4,917,888號、歐洲專利申請第0 236 987號、歐洲專利申 請第0 510 356號和國際申請^>布第WO 95/13090號中描述，將其公開的 全部內(nèi)容并入本文作為參考。由于聚合物4務(wù)飾充分地降低了抗原響應(yīng)，因 此外來干擾素?zé)o需完全是自體的。用于制備聚合物結(jié)合物的干擾素可以由 哺乳動物提取物(例如人、反芻動物或牛干擾素)制備，或者重組制備。優(yōu) 選的是干擾素與聚乙二醇的結(jié)合物，也稱為聚乙二醇化的干擾素。
特別優(yōu)選的干擾素結(jié)合物是聚乙二醇化的a-干擾素，例如聚乙二醇化 的干擾素-a-2a、聚乙二醇化的干擾素-a-2b;聚乙二醇化的復(fù)合干擾素或 聚乙二醇化的純化的干擾素a產(chǎn)品。聚乙二醇化的干擾素-a-2a例如在歐洲
的，例如商品名為PEGASYS (Hoffmann-La Roche)。聚乙二醇化的干擾 素-ot-2b例如在歐洲專利975，369(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)中描述 并且是可商購獲得的，例如商品名為PEG-INTRON A⑧(Schering Plough)。 聚乙二醇化的復(fù)合干擾素在WO 96/11953(將其全部內(nèi)容并入本文作為參 考)中描述。優(yōu)選的聚乙二醇化的a-干擾素是聚乙二醇化的干擾素-a-2a和 聚乙二醇化的干擾素-a-2b。還優(yōu)選聚乙二醇化的復(fù)合干擾素。
其它優(yōu)選的第二種藥物包括干擾素的融合蛋白，例如干擾素-a-2a、干
32擾素-a-2b、復(fù)合干擾素或純化的干擾素-a產(chǎn)品的融合蛋白，它們每種是與 另一種蛋白質(zhì)融合的。某些優(yōu)選的融合蛋白包括美國專利6，973，322和國際 公布WO02/60071 、 WO05/003296和WO05/077042(Human Genome Sciences)中描述的干擾素(例如干擾素-a-2b)和白蛋白。優(yōu)選的與人白蛋白 結(jié)合的干擾素是a-干擾素白蛋白(Human Genome Sciences)。
環(huán)孢菌素類(其強力地與親環(huán)蛋白結(jié)合，但是沒有免疫抑制)包括美國 專利5,767,069和5，981，479中敘述的那些環(huán)孢菌素類，并且將其并入本文 作為參考。[Mellef-環(huán)孢菌素是優(yōu)選的非免疫抑制的環(huán)孢菌素。某些其它 環(huán)孢菌素f汴生物在 WO2006039668(Scynexis)和 WO2006038088 (Debiopharm SA)中描述，并且將其并入本文作為參考。當(dāng)環(huán)孢菌素在混合 淋巴細胞反應(yīng)(MLR)中的活性不超過環(huán)孢菌素A的活性的5%，優(yōu)選不超 過2%時，環(huán)孢菌素被認為是非免疫抑制的?；旌狭馨图毎磻?yīng)是由T. Meo 在"Immunological Methods(免疫學(xué)方法)"，L. Lefkovits和B. Peris編輯， Academic Press, N.Y.第227-239頁(1979)中描述。將Balb/c小鼠(雌性， 8-10周)的脾細胞(0.5xl(^個)與0.5xl(^個輻照的(2000 rads)或絲裂霉素C 處理的CBA小鼠(雌性，8-10周)的脾細胞共同培養(yǎng)。輻射的同種異型細胞 誘導(dǎo)Balb/c脾細J包的增殖響應(yīng)，其可以通過摻入DNA中的標(biāo)記前體測量。 由于刺激細胞是受輻射的(或絲裂霉素C處理的)，因此它們對Balb/c細胞 的增殖沒有響應(yīng)，但是保留了它們的抗原性。將試驗化合物在MLR中測 得的ICs()與環(huán)孢菌素A在平行試驗中測得的進行比較。另外，非免疫抑制 的環(huán)孢菌素缺乏抑制CN和下游NF-AT通路的能力。[Melle、環(huán)孢菌素是 本發(fā)明優(yōu)選應(yīng)用的非免疫抑制結(jié)合親環(huán)蛋白的環(huán)孢菌素。
利巴韋林(l-P-D-呋喃核糖基-l-l，2，4-三唑-3-甲酰胺)是合成的、非干擾 素誘導(dǎo)的、廣譜抗病毒核苷類似物，商品名為Virazole(The Merck Index, 第11版，編輯Budavar， S， Merck & Co" Inc., Rahway， NJ，第1304頁， 1989)。美國專利第3,798,209和RE29，835號(將其全部內(nèi)容并入本文作為 參考)公開和要求了利巴韋林。利巴韋林在結(jié)構(gòu)上與鳥苷類似，并且具有體 外對抗數(shù)種DNA和RNA病毒(包括黃病毒科)的活性(Gary L. Davis, Gastroenterology 118:S104-S114， 2000)。其它組合包括本發(fā)明化合物與非免疫抑制的結(jié)合親環(huán)蛋白的環(huán)孢菌
素、與麥考酚酸、其鹽或前藥和/或與S1P受體激動劑(例如FTY720)的那些組合。
可以與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用的第二種藥物的另外的實例包括(1)干擾素，包括干擾素a-2a或2b和聚乙二醇化的(PEG)干擾素a-2a或2b，例:^:
(a) Intron-A⑧，干擾素a-2b(Schering Corporation, Kenilworth， NJ);
(b) PEG-Intron ，聚乙二醇化的干擾素a-2b(Schering Corporation,Kenilworth, NJ);
(c) Roferon ,重組干擾素a畫2a(Hoffmann-La Roche, Nutley， NJ);
(d) Pegasys ,聚乙二醇化的干擾素a-2a(Hoffmann畫La Roche, Nutley，
NJ);
(e) Berefor ， 可獲得的干擾素a-2(Boehringer IngelheimPharmaceutical, Inc., Ridgefield， CT);
(f) Sumiferon ,純化的天然a干擾素的混合物(Sumitomo， Japan);
(g) Wellferon ,淋巴細胞樣干擾素a nl(GlaxoSmithKline);
(h) Infergen ， 復(fù)合a干擾素(InterMune Pharmaceuticals, Inc.,Brisbane, CA)
(i) Alferon , 天然a干擾素的混合物(Interferon Sciences, and PurdueFrederick Co., CT);
①Viraferon ;
(k)復(fù)合ct干擾素，來自Amgen， Inc., Newbury Park, CA。其它形式的干擾素包括干擾素P、 y、 T和①，例如Serono的Rebif(干擾素P-la)、 Viragen的Omniferon(天然干擾素)、Ares-Serono的REBIF(干擾素(3-la)、 BioMedicines的co干擾素、Amarillo Biosciences的口月艮干擾素a、與水溶性聚合物或人白蛋白結(jié)合的干擾素，例如ot-干擾素白蛋白(Human Genome Sciences)、抗病毒藥物、復(fù)合干擾素、羊或牛干擾素-T。干擾素與水溶性聚合物的結(jié)合物指的是特別包括與聚環(huán)氧烷均聚物例如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物和其嵌段共聚物的結(jié)合物。作為可選擇的基于聚環(huán)氧烷的聚合物，可以應(yīng)用有效的無抗原材料，例如右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、基于碳水化合物的聚合物等。由于聚合物修飾充分地降低了抗原反應(yīng)，因此外來干擾素?zé)o需完全是自體的。用于制備聚合物結(jié)合物的干擾素可以由哺乳動物提取物(例如人、反芻動物或牛干擾素)制備，或者重組制備。優(yōu)選的是，干擾素與聚乙二醇的結(jié)合物，也稱為聚乙二醇化的干擾素。
(2) 利巴韋林，例如來自Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa的利巴韋林(l-P-D-呋喃核糖基-lH-l，2，4-三唑-3-甲酰胺)；來自ScheringCorporation, Kenilworth, NJ的Rebeto條和來自 Hoffmann-La Roche,Nutley， NJ的Copegus ;以及在研的新利巴韋林類似物，例如Valeant的Levovirin和Viramidine。
(3) 蓉峻烷衍生物，其在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC試驗中顯示出相關(guān)抑制(Sudo K.等人，/4w"v/m/ / ew"rcA， 1996， 32，9-18)，特別是化合物RD-l-6250(具有被長烷基鏈取代的稠合的肉桂?；?、RD4 6205和RD4 6193。
(4) 塞唑烷和苯曱酰苯胺，其在KakiuchiN.等人，丄F￡^S1"&/^421，217-220; Takeshita N.等人，爿wa/y/c"/肌oc/ie附/^j， 1997， 247， 242-246中鑒定。
(5) 菲醌，其在SDS-PAGE和放射自顯影試驗中具有對抗蛋白酶的活性，其是從鏈霉菌屬物種(A/r/;to附j(luò);c" w.)的發(fā)酵培養(yǎng)基中分離的，Sch68631(Chu M.等人，r"r"/ie^wi Z^股ra， 1996， 37， 7229-7232)和Sch
351633，其是從灰黃青霉菌(/^附'"'///"附^/5 /"/^1附)中分離的，其在閃爍
迫近試驗中顯示出活性(Chu M.等人，5/卯rg""/c做rfAf^Z/drtfl/ C7^附/W/j￡" 9， 1949-1952)。
(6) 蛋白酶抑制劑；實例包括基于底物的NS3蛋白酶抑制劑(Attwood等人，爿wrt'v/ni/ /7印"V/e ^Ww"v^(抗病毒肽衍生物)，PCT WO 98/22496，1998; Attwood等人，Jw//w>"/ C/re附/st/j a/icf Ote附o,/rem/y;(抗病毒化學(xué)和化學(xué)治療)1999， 10， 259-273; Attwood等人，尸r印am,/ow 騰。/畫"o鎖V/ ^7v""Ves flw a",《'-v/m/ age"to(作為抗病毒藥物的^^酸衍生物的制備和用途)，德國專利公布DE 19914474; Tung等人，/wA/6/tors ^"Vie/7rofcflses1， /7flW/cw/"/7y /re/m故/s1 C v/rws17V5^ pro/ea5^(絲氨酸蛋白酶、特另'J是丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制劑)；PCT WO 98/17679)，包括a酮酰胺類和肼基脲類，以及能終止親電子物質(zhì)(例如硼酸和磷酸酯)的抑制劑(Llinas畫Brunet等人，份戸故/s C /w/r/6/tor /7e/7ftVfc flw"/ogMes(丙型肝炎抑制劑肽類似物)，PCT WO 99/07734)正在研究之中。
基于非底物的NS3蛋白酶抑制劑，例如2，4，6-三羥基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等人，必/oc/re附/5T"/ ffwd 5—/r戶'ca/ / &yea/rACV 附附朋/airtVm51， 1997, 238 643-647; Sudo K.等人，Jwriv/m/ C/re附/欲j; a dC7^附W/icfl/^, 1998,9， 186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被14碳鏈取代和后者具有對苯氧基苯基也正在研究之中。
Sch 68631(菲醌)是丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑(Chu M等人，7Wm/^^wi37:7229-7232， 1996)。在同一個作者的另 一個實例中，Sch 351633(從真菌灰黃青霉菌中分離的)鑒定為蛋白酶抑制劑(Chu M.等人.B^wgaw/c A/^//c/"a/ C/re附/5t/j丄Cers 9:1949-1952)。通過i殳i十基于高分子水蛭蛋白酶抑制劑c的選擇性抑制劑，已經(jīng)獲得對抗丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的納摩爾能力。水蛭蛋白酶抑制劑c(從水蛭中分離)是數(shù)種絲氨酸蛋白酶例如灰色鏈霉菌(S. griseus)蛋白酶A和B、 V-胰凝乳蛋白酶、類胰凝乳蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶)的有效的抑制劑(Qasim M.A.等人，腸c/i簡,一 36:1598-1607， 1997)。
公開用于治療丙型肝炎病毒的蛋白酶抑制劑的美國專利包括例如美國專利第6,004,933號，Spruce等人(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)，其公開了一類用于抑制丙型肝炎病毒內(nèi)肽酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制劑；美國專利第5，9卯，276號，Zhang等人(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)，其公開了丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成抑制劑；美國專利第5,538,865號，Reyes等人(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。作為丙型肝炎病毒的NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的肽類7>開于WO 02/008251(Corvas International,Inc.)以及WO 02/08187和WO 02/008256(Schering Corporation)中，(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。丙型肝炎病毒抑制劑三肽公開于美國專利第6，534，523、 6,410,531和6,420,380號(Boehringer Ingelheim)以及WO02/060926(Bristo1 Myers Squibb)中，(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。作為丙型肝炎病毒的NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的二芳基肽類公開于WO02/48172(Schering Corporation)中，(將其并入本文作為參考)。作為丙型肝炎病毒的NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的咪唑啉酮公開于WO02/18198(Schering Corporation)和WO 02/48157(Bristo1 Myers Squibb)中，(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。WO 98/17679(Vertex Pharmaceuticals)和WO 02/48116(Bristo1 Myers Squibb)也公開了丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。
丙型肝炎病毒NS3-4A絲氨酸蛋白酶抑制劑，包括BoehringerIngelheim的BILN 2061、 Vertex的VX-950、 Schering-Plough的SCH 6/7以及目前處于臨床前研究的其它化合物。
基于底物的NS3蛋白酶抑制劑，包括a酮酰胺類和肼基脲類，以及能終止親電子物質(zhì)(例如硼酸和磷酸酯)的抑制劑；基于非底物的NS3蛋白酶抑制劑，例如2，4，6-三羥基-3-硝基-苯曱酰胺衍生物，包括RD3-4082和RD3-4078,前者在酰胺上被14碳鏈取代并且后者具有對苯氧基苯基；以及Sch68631、菲醌、丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑。
Sch 351633(從真菌灰黃青霉菌中分離)被鑒定為蛋白酶抑制劑。水蛭蛋白酶抑制劑c(從水蛭中分離)是數(shù)種絲氨酸蛋白酶(例如灰色鏈霉菌蛋白酶A和B、 a-胰凝乳蛋白酶、類胰凝乳蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶)的有效的抑制劑。
美國專利第6004933號(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)公開了一類用于抑制丙型肝炎病毒內(nèi)肽酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制劑；丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成抑制劑；丙型肝炎病毒抑制劑三肽；二芳基肽，例如丙型肝炎病毒的NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑；作為丙型肝炎病毒的NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的咪唑啉二酮。
噻唑烷和苯甲酰苯胺。噻唑烷衍生物，其在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC試驗中顯示出相關(guān)抑制，特別是化合物RD-16250(具有被長烷基鏈取代的稠合的肉桂酰基)、RD4 6205和RD46193。
菲醌，其在SDS-PAGE和放射自顯影試驗中具有對抗蛋白酶的活性，其是從鏈霉菌屬物種的發(fā)酵培養(yǎng)基中分離的，Sch 68631和Sch 351633，其是從灰黃青霉菌中分離的，其在閃爍迫近試驗中顯示出活性。
(7)丙型肝炎病毒NS5B RNA-依賴性RNA聚合酶的核苷或非核苷抑制劑，例如WO 2004/002422 A2中公開的2'-C-甲基-3，-0-L-纈氨酸酯吹喃核糖基胞苷(Idenix)(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)、R803(Rigel)、JTK-003(Japan Tabacco)、 HCV畫086(ViroPharma/Wyeth)和目前處于臨床
前研究的其它化合物；
膠霉毒素和天熱產(chǎn)物淺藍菌素；
2，-氟核苷；
WO 02/057287 A2、 WO 02/057425 A2、 WO0謂121、 WO 01/92282和美國專利第6,812,219號公開的其它核苷類似物，將其公開的全部內(nèi)容并入本文作為參考。
Idenix Pharmaceuticals在國際公布第WO 01/卯121和WO 01/92282
號中公開了支鏈核苷在治療蟲媒病毒(包括丙型肝炎病毒)和瘋病毒中的用途(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)。特別的是，Idenix公布中公開了治療人和其它宿主動物的丙型肝炎感染(以及蟲媒病毒和瘟病毒)的方法，該方法包括施用有效量的生物活性1，、 2，、 3，或4，-支鏈(3-D或(3-L核苷或其可藥用鹽或前藥，單獨施用或與另一種抗病毒藥物組合施用，任選在可藥用載體中。某些優(yōu)選的生物活性l，、 2，、 3，或4，-支鏈(3-D或(3-L核普(包括替比夫定)在美國專利6,395,716和6,875,751中描述，將每個并入本文作為
參考o(jì)
其它公開了某些核苷類似物在治療丙型肝炎病毒中的用途的專利申請
包括BioChem Pharma， Inc.(現(xiàn)在為Shire Biochem， Inc.)提交的PCTCA00/01316(WO 01/32153 ; 2000年11月3日提交)和PCT/CA01/00197(WO 01/60315; 2001年2月19日提交)；Merck & Co., Inc.提交的PCT/US02/01531(WO 02/057425; 2002年1月18日提交)和PCT/US02/03086(WO 02/057287; 2002年1月18日提交)；Roche提交的
38PCT/EP01/09633(WO 02/18404; 2001年8月21日公布)；以及Pharmasset，Ltd的PCT公布第WO 01/79246(2001年4月13日提交)、WO02/32920(2001年10月18日提交)和WO 02/48165，(將其公開的全部內(nèi)容并入本文作為參考)。
Emory University的PCT公布第WO 99/43691號(將其公開的全部內(nèi)容并入本文作為參考)，標(biāo)題為"2，-氟核苷"，公開了某些2，-氟核苷在治療丙型肝炎病毒中的用途。
Eldrup等人(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16thInternational Conference on Antiviral Research (2003年4月 27 日，Savannah, GA))描述了 2，-修飾的核苷在抑制丙型肝炎病毒中的結(jié)構(gòu)活性關(guān)系。
Bhat等人(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae， 2003 (OralSession V， Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International conferenceon Antiviral Research (2003年4月27日，Savannah, Ga); p A75)描述了作為丙型肝炎病毒RNA復(fù)制的可能的抑制劑的核苷類似物的合成和藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)。作者報道了 2，-修飾的核苷在基于細胞的復(fù)制子試驗中顯示出有效的抑制活性。
Olsen等人(Oral Session V， Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16thInternational Conference on Antiviral Research (2003年4月 27 日,Savannah, Ga)p A76)還描述了 2，-修飾的核苷對丙型肝炎病毒RNA復(fù)制的作用。
(8) 核苷酸聚合酶抑制劑和膠霉毒素(Ferrari R等人，/o"rmi/ o/Wra/o^v, 1999， 73， 1649-1654)，和天然產(chǎn)物淺藍菌素(Lohmann V，等人，W油gy， 1998， 249， 108-118)。
(9) 丙型肝炎病毒NS3解旋酶抑制劑，例如ViroPhama的VP—50406和Vertex的化合物。其它解旋酶抑制劑(Diana G.D.等人，0 附/w"mfe，co附/7w7/o"s1 附"/ro^fe/or fmj^附e"f /re/ fl故/s C(治療丙型肝炎的化合物、組合物和方法)，美國專利第5,633,358號(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)；Diana G.D.等人，t/mVflrives, /;Aflr簡acewtor/ c0附/7asitow幼e ,re^附ew/0//^/7"ft他C(p底咬f汴生物、其藥物組合物以及它們在治療丙型肝炎中的用途)，WO 97/36554)。
(10) 反義硫代磷酸寡脫氧核苷酸(S-ODN)，與病毒的5，非編碼區(qū)(NCR)中的伸展序列(Alt M.等人，7/e/7 to/0gj， 1995， 22， 707-717)，或核苷酸326-348(包括NCR的3，末端)和位于丙型肝炎病毒RNA的核心編碼區(qū)的核普酸371-388(Alt M.等人，爿/tA/vm F/w/o^v， 1997， 142， 589-599;Galderisi U.等人，/ow/7ifl/o/CW/m/"/ 尸/^wWo^j， 199， 181， 251-257)互補；例如Isis Pharm/Elan的ISIS 14803、 Hybridon的反義序列、AVI bioPharma的反義序列。
(11) IRES-依賴性翻譯的抑制劑(Ikeda N等人，爿ge^/o〃/^/^evew^Ai
^Tfl^ie"f 6 / /^/7"故/s C(預(yù)防和治療丙型肝炎的藥物)，日本專利>^布
JP-08268890; Kai Y等人,尸/"eve"A》rt朋</ 6>/v/m/ fZ/s^ases^病毒疾
病的預(yù)防和治療)，日本專利公布JP-10101591);例如Isis Pharm/Elan的ISIS 14803、 Anadys的IRES抑制劑、Immusol的1RES抑制劑、PTCTherapeutics的乾向的RNA化學(xué)。
(12) 核酶，例如核酸酶4氐抗的核酶(Maccjak， D丄等人，i/e/mto/^yl"9， 30，摘要"5)和美國專利第6，0"，077號(Barber等人)和美國專利第5，869，253和5,610,054號(Draper等人)中指出的那些(將其全部內(nèi)容并入本文作為參考)，例如RPI的HEPTAZYME。
(13) 直接對抗丙型肝炎病毒基因組的siRNA。
(14) 任何其它機制的丙型肝炎病毒復(fù)制抑制劑，例如ViroPharama/Wyeth的VP50406、 Achillion， Arrow的抑制劑。
(15) 丙型肝炎病毒生命周期中的其它靶標(biāo)(包括病毒ii^、組裝和成熟)的抑制劑。
(16) 免疫調(diào)節(jié)劑，例如IMPDH抑制劑、麥考酚酸、其鹽或前藥、麥考酚酸鈉或麥考酚酸嗎乙酯或美泊地布(Merimebodib)(VX-497);胸腺素a-l(SciClone的日達仙)；或S1P受體激動劑，例如FTY720或其類似物，任選磷酸化。
(17) 抗纖維化藥物，例如N-苯基-2-嘧淀-胺衍生物，伊馬替尼(Glivec)、Indevus的IP-501和InterMune的干擾素y-lb。
(18) Intercell, Epimmune/Genecor， Merix， Tripep (Chron-VacC)的治療疫苗；Avant的免疫療法(Therapore); CellExSys的T細胞療法；STL的單克隆抗體XTL-002、 Anadys的ANA 246和ANA 246。
(19) 其它各種化合物，包括l-M-烷基環(huán)己烷(美國專利第6,034,134號，Gold等人)、烷基類月旨(美國專利第5,922,757號，Chojkier等人)、維生素E和其它抗氧化劑(美國專利第5,922,757號，Chojkier等人)、金剛烷胺、膽酸(美國專利第5,846,99964號，Ozeki等人)、N-(膦酰基乙?；?畫L-天冬氨酸(美國專利第5，830，卯5號，Diana等人)、苯二甲酰胺(美國專利第5,633,388號，Diane等人)、聚腺苷酸衍生物(美國專利第5,496,546號，Wang等人)、2，，3，-雙脫氧肌苷(美國專利第5,026,687號，Yarchoan等人)、苯并咪唑類(美國專利第5,891,874號，Colacino等人)、植物提取物(美國專利第5，837，257號，Tsai等人;美國專利第5，725，859號，Omer等人;和美國專利第6,056,961號)和哌啶類(美國專利第5,830,905號，Diana等人)；將其全部內(nèi)容并入本文作為參考。還包括角鯊烯、替比夫定、N-(膦?；阴；?-L-天冬氨酸、苯二曱酰胺、聚腺苷酸衍生物、糖基化抑制劑和非特異細胞保護藥(能阻止由病毒感染引起的細胞損傷)。
(20) 目前在臨床前或臨床研究中用于治療丙型肝炎病毒的任何其它化合物，包括白細胞介素-10(Schering-Plough)、 Endo Labs Solvay的金剛烷胺(鹽酸金剛烷胺制劑(Symmetrel))、 Idun Pharma的胱天蛋白酶抑制劑IDN-6556、 Chiron的HCV/MF59、 NABI的CIVACIR(丙型肝炎免疫球蛋白)、Maxim的CEPLENE(組胺二氯化物)、Idun PHARM的IDN-6556、Tularik的T67(P-孩i管蛋白抑制劑)、Innogenetics的針對E2的治療疫苗、Fujisawa Hdathcare的FK788、 Trimeris的IdB1016(Siliphos， 口月艮水飛薊賓-磷酯酰膽堿砩脂復(fù)合物(phytosome))(融合抑制劑)、Immtech的Dication 、 Aethlon Medical的hemopurifier、 United Therapeutics的UT231B。
(21) TlR7(toll樣受體)的嘌呤核苷類似物拮抗劑，由Anadys開發(fā)，例如Isotorabine(ANA245)和它的前藥(ANA975)，其在歐洲申請EP348446和EP636372、國際公布WO03/045968、 WO05/121162和WO05/25583以及美國專利6/973322中描述，將每個并入本文作為參考。
(21) 非核苷抑制劑，由Genelabs開發(fā)并且在國際公布WO2004/108687、 WO2005/12288和WO2006/076529中描述，將每個并入本文作為參考。
(22) 其它第二種藥物(例如，非免疫調(diào)節(jié)或免疫調(diào)節(jié)化合物)，其可以與本發(fā)明化合物組合應(yīng)用，包括但不限于WO 02/18369中說明的那些，將其并入本文作為參考。
另一方面，本發(fā)明提供了方法，該方法包括施用本發(fā)明化合物和另一種抗病毒藥物、優(yōu)選抗黃病毒科、例如抗登革熱或抗丙型肝炎病毒藥物。此類抗病毒藥物包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑，例如a、 (3和5干擾素、聚乙二醇化的衍生的干擾素-a化合物和胸腺素；其它抗病毒藥物，例如利巴韋林、金剛烷胺和替比夫定；其它丙型肝炎蛋白酶抑制劑(NS2-NS3抑制劑和NS3-NS4A抑制劑)；黃病毒科生命周期中的其它靶標(biāo)的抑制劑，包括解旋酶、聚合酶和金屬蛋白酶抑制劑；內(nèi)部核糖體ii^抑制劑；廣譜病毒抑制劑，例如IMPDH抑制劑(例如，美國專利5,807,876、 6,498,178、 6,344,465、6,054,472、 WO 97/40028、 WO 98/40381、 WO 00/56331的化合物，以及麥考酚酸及其衍生物，并且包括但不限于VX-497、 VX-148和/或VX-944);或任何以上的組合。
本發(fā)明組合的每個組分可以是分開、 一起或以其任何組合來施用的。技術(shù)從業(yè)人員所公認的是，干擾素的劑量典型地以IU來測量(例如，約400萬IU至約1200萬IU)。
每個組分可以以一個或多個劑型施用。每個劑型可以以任何順序施用于患者。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本文公開的任何亞范圍(例如關(guān)于X、 Rl、 R2、 R3、R4、 R5、 R6和/或R7)可以與本文公開的任何其它亞范圍組合，以產(chǎn)生進一步的亞范圍。
以下通用方法可以用于制備式(I)和(II)化合物。參考以下描述的特別實施例，本發(fā)明的特別化合物的制備對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。對于本文沒有特別描述的任何特別方法，其可以以常規(guī)或已知的方法或以與已知方法類似的方法來進行。通用方法1
中間體化合物1-4可以根據(jù)通用方法1制備，并且與任何適合的堿基團偶聯(lián)以獲得本發(fā)明化合物。通用方法1應(yīng)用二保護的(在4-羥基和5-羥基甲基取代基)4-羥基-5-羥基甲基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯，例如(3R，4R，5R)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯作為原料。乙酸酯基團是在堿性條件下除去的，例如應(yīng)用NaOMe或另一種適合的堿，例如醇鈉或碳酸鉀。氧化步驟可以應(yīng)用任何適合的氧化劑/條件(例如Swern氧化、TEMPO或Dess-Martin過碟烷)進行，以獲得呋喃-3-酮。轉(zhuǎn)化為亞炔基可以應(yīng)用適合的格氏試劑(例如炔基卣化鎂，例如炔基溴化鎂，例如乙炔基溴化鎂)或用有機鋰試劑(例如炔基鋰試劑，例如乙炔基鋰)來完成?？梢詫⒒衔?-4與任何適合的堿基團偶聯(lián)，所述的堿基團例如腺噤呤或鳥噤呤衍生物，其中X:N、 CH或CR4， Rl，=閨素、NR5R6或OR7， R2， = H、卣素或NR5R6，并且R3、 R4、 R5、R6和R7如本文定義的。在某些實例中，X可以是CH。在其它實例中，X可以是CR4。在某些實例中，R4可以是囟素，例如F或I。在其它實例中，R4可以是炔基，例如乙炔基。在某些實例中，Rl，可以是卣素，例如Cl。在其它實例中，Rl，可以是氨基或烷氧基，例如甲氧基。在某些實例中，R2，可以是H。 ^/堿類似物的其它實例包括例如4-氯-7H-吡咯并2，3-dl嗜啶、4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dj嘧啶、4-氯-5-碘-吡咯并l2，3-dl嘧啶、7H-吡咯并[2，3-dj嘧啶-4-基-異吲哚-l，3-二酮和4-氯-5-乙炔-吡咯并2，3-d]嘧咬。保護基可以例如應(yīng)用適合的路易斯酸(例如BCb)除去，以獲得所需的核苷類似物。
43<formula>formula see original document page 44</formula>
r1. r2和r3如本文定義的
通用方法1步驟1: (3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 芐基氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇(I-2)
在(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯-節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2畫甲 氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1(10 g， 19.1 mmol)的MeOH(150 mL)溶液中加 入30。/oNaOMe的MeOH溶液(5.37mL， 28.6 mmol， 1.5當(dāng)量)，并且將反 應(yīng)在室溫下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物濃縮并且溶于乙酸乙酯(180 mL) 中，用1 NHC1溶液和飽和的鹽水洗滌，干燥(無水Na2S04)并且濃縮，獲 得(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-曱氧基-四 氫呋喃-3-醇1-2，為淡黃色油狀物。將獲得的粗化合物用于下一步而無需 進一步純化。
通用方法1步驟2: (4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千 基氧基)-2-甲氧基-二氫呋喃-3-酮(I-3)
在-78。C下，在冷卻的草酰氯(2.15mL,25.1 mmol， 1.3當(dāng)量)的DCM(20 mL)溶液中加入DMSO(2.85 mL， 36.5 mmol, 1.9當(dāng)量)的DCM(30 mL)溶 液，并且在-78。C下攪拌30分鐘。然后緩慢加入(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯千基 氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇1-2(9.6 g， 18.8 mmol， 1當(dāng)量)的DCM(50mL)溶液，并且在-78。C下攪拌約2小時。然后， 將三乙胺(15.8 mL， 114 mmol, 6.0當(dāng)量)加入至反應(yīng)混合物中并且緩慢達 到室溫并且攪拌l小時。反應(yīng)完成后，將混合物用水(100 mL)和DCM(50 mL)稀釋。將DCM層分離并且用1 N HC1溶液和飽和的鹽水洗滌，干燥(無水Na2S04)、濃縮并且通過快速色譜(己烷乙酸乙酯=70:30)純化，得到 (41^，51^-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-二氫呋 喃-3-酮I-3，為淡黃色油狀物。
通用方法1步驟3: (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 節(jié)基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇(I-4)
在冷的(0。C)0.5 M乙炔基溴化鎂(R3 = -H)的THF溶液(137.5 mL， 68.5 mmol， 5當(dāng)量)中加入(4R，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧 基)-2-甲氧基-二氬呋喃國3-酮1-3(6.6 g, 13.7 mmol， 1當(dāng)量)的THF(15 mL) 溶液，并且在相同溫度下攪拌3小時。將反應(yīng)混合物用冷的飽和的NH4C1(50 mL)猝滅并且用乙酸乙酯(2x60 mL)萃取。將有機層用1 N HC1溶液和飽和 的鹽水洗滌，干燥(無水Na2S04)、濃縮并且通過快速色鐠(己烷乙酸乙酯 =85:15)純化，得到(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(3，5-二氯千基氧 基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇1-4，為淡黃色形式。
通用方法1步驟4: (211，311，41^，51^)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-011嘧啶-7-基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-5-(2，4-二氯芐基氧基曱基)-3-乙炔基-四氫呋喃-3-醇(I-5)
在(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔 基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇1-4(500 mg, 1 mmol， 1當(dāng)量)的干燥的DCM(5 mL)溶液中加入33。/oHBr-AcOH(0，88mL， 5 mmol， 5當(dāng)量)溶液，并且在 室溫下攪拌1.5小時。原料消耗后，將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)(l mbar， 35°C)， 獲得溴化物中間體，為稠的油狀物。然后將其溶于干燥的乙腈(10mL)中。 在另一個燒瓶中，在先前在室溫下攪拌0.5小時的4-氯吡咯并2，3-d]嘧啶 (R,， = C1， R2， = H， X = CH)(153.0mg， 1 mmol， 1當(dāng)量)和NaH(200 mg， 5 mmol， 5當(dāng)量)在乙腈(15 mL)中的混合物中加入以上獲得的溴化物中間 體溶液，并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時。將溶劑除去并且用乙酸 乙酯(60mL)稀釋，用水、鹽水洗滌，干燥(無水Na2S04)并且濃縮，獲得稠 的液體。將粗產(chǎn)物通過快速色語(己烷乙酸乙酯=80:20)純化，得到 (2R，3R，4R，5R)_2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-4-(2，4- 二氯千基氧 基)-5-(2，4-二氯芐基氧基曱基)-3-乙炔基-四氫呋喃-3-醇1-5，為淡黃色固體。
45通用方法1步驟5: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫-呋喃-3，4-二醇(I-6)
在冷的(-78。C)(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-4-(2，4畫 二氯芐基氧基)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲基)-3-乙炔基-四氫呋喃-3-醇1-5(150 mg， 0.24 mmol， 1當(dāng)量)的干燥DCM(20 mL)溶液中滴加入l M BC13的 DCM溶液(2.4 mL， 2.4 mmol， 10當(dāng)量)，并且在-78。C下攪拌約5小時。 將反應(yīng)混合物在0。C下用MeOH(15 mL)猝滅，并且攪拌30分鐘。將溶劑 蒸發(fā)并且和硅膠(4 mL)—起干燥，將在硅膠上的粗產(chǎn)物通過快速色語 (DCM:曱醇=卯:10)純化，得到(211，311，411，511)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-111嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3,4-二醇1-6，為棕色泡沫狀物。
通用方法1步驟6: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇(1)
將(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲 基-四氫呋喃-3,4-二醇1-6(96 mg， 0.31 mmol, 1當(dāng)量)和NH3.H20(R1 = NH2)(10 mL的28-30%氨水)的混合物在玻璃壓力管中在100。C下加熱5小 時。將反應(yīng)混合物濃縮至干燥，并且通過制備HPLC純化，梯度為在水中 的乙腈30分鐘內(nèi)從0%至35%。將純的級分合并并且凍干，獲得 (2R,3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四 氫呋喃-3，4-二醇(X:CH， R1=NH2， R2 = H， R3 = H)I，為淡黃色泡沫狀 物。
通用方法2:制備中間體二保護的(在4-羥基和5-羥基甲基取代 基)-(3R，4R，5R)-3-炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-2，3，4-三醇(II國l)
中間體化合物可以根據(jù)下述的通用方法2a、 2b或2c制備。 通用方法2a應(yīng)用二保護的(在4-羥基和5-羥基甲基取代基)4-羥基-5-羥基曱基-2-曱氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯，例如(3R，4R，5R)-4-(2,4-二氯千基氧 基)-5-(2，4-二氯千基氧基曱基)-2-甲氧基-四氫-呋喃-3-乙酸酯作為原料。乙 酸酯基團是在堿性條件下除去的，例如應(yīng)用NaOMe或另一種適合的堿， 例如醇鈉或碳酸鉀等。氧化步驟可以應(yīng)用任何適合的氧化劑/條件(例如 Swern氧化、TEMPO或Dess-Martin過珙烷)來進行，以獲得吹喃-3-酮。
46轉(zhuǎn)化為亞炔基可以應(yīng)用適合的格氏試劑(例如炔基囟化鎂，例如炔基溴化 鎂，例如乙炔基溴化鎂)或用有機鋰試劑(例如炔基鋰試劑，例如乙炔基鋰) 來冗成。
通用方法2b應(yīng)用三保護的(在2-羥基、4-羥基和5-羥基曱基取代基)四 氫呋喃-3-醇，例如l，3，5-三-0-苯曱?；?a-D-呋喃核糖作為原料。氧化步驟 可以應(yīng)用任何適合的氧化劑/條件(例如TEMPO、 Dess-Martin過碘烷或 Swern氧化)來進行，以獲得呋喃-3-酮。轉(zhuǎn)化為亞炔基可以如通用方法2a 描述的來完成，應(yīng)用適合的格氏試劑(例如炔基卣化鎂，例如炔基溴化鎂， 例如乙炔基溴化鎂)或用有機鋰試劑(例如炔基鋰試劑，例如乙炔基鋰)。2-保護基的選擇性除去可以在堿性條件下應(yīng)用K2C03/MeOH進行。
依照通用方法2c，可以將可商購獲得的二丙酮-D-葡萄糖用作原料。氧 化步驟可以應(yīng)用任何適合的氧化劑/條件(例如TEMPO、 Dess-Martin過碘 烷或Swern氧化)來進行，以獲得呋喃-4-酮。轉(zhuǎn)化為亞炔基可以如通用方 法2a和2b描述的來完成，應(yīng)用適合的格氏試劑(例如炔基卣化鎂，例如炔 基溴化鎂，例如乙炔基溴化鎂)或用有機鋰試劑(例如炔基鋰試劑，例如乙 炔基鋰)。3-羥基可以應(yīng)用任何適合的試劑來保護，例如2，5-二氯千基溴、 2，4-二氯節(jié)基溴、烯丙基卣化物或曱硅烷基囟化物。類似地，4-羥基和5-羥基甲基取代基上的羥基可以應(yīng)用任何適合的試劑來保護，例如苯甲酰基 卣化物、曱苯?；栈锏?。
通用方法2a
R8' = 2,4- 二氯芐基 R3如本文定義的通用方法2a步驟1: (3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲基)-4-(2，4-二氯
千基氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇
在在MeOH(150 mL)中的(3R，4R，5R)-5-(2，4- 二氯節(jié)基氧基甲 基)_4-(2，4-二氯千基氧基)-2-曱氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯(10 g， 19.1 mmol)中 加入30。/。NaOMe的MeOH溶液(5.37 mL， 28.6 mmol)，并且將反應(yīng)在20 。C下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物濃縮并且溶于IPAC(100 mL)中，用1N HC1溶液(50 mL)和水(50 mL)洗滌并且濃縮，獲得(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯節(jié) 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯節(jié)基氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇，為淡黃色油狀
物。將獲得的粗化合物用于下一步而無需進一步純化。
'H-NMR(CDCl3， 400MHz): 6 7.43(d， J=8.1Hz， 1H)， 7.35-7.31(m， 3H)， 7.23(dd， J = 2.1， 4.0 Hz， 1H)， 7.21-7.10(dd， J=2.1， 4.0Hz， 1H)， 4.92(d, J = 4.6 Hz， 1H)， 4.77(d， J=13.4Hz， 1H)， 4'68(d， J=13.4Hz, 1H); 4.60(d, J=13.0Hz， 1H)， 4.56(d， J=13.0Hz， 1H), 4.25(q， J=4.0Hz， 1H)， 4.19(dd， J=6.8， 4.8 Hz， 1H)， 3.86(dd， J=6.9，7.0 Hz， 1H)， 3.60(d， J=10.5Hz， 2H)， 3.48(s， 3H); 13C-NMR(CDC13， 100MHz): & 134.2， 134.1， 133.9， 133.5， 133.4， 129.9， 129.8， 129.1， 129.08， 127.11， 127.08， 102.8, 81.6， 77.4， 72.0， 70.8, 70.0， 69.5， 55.6(— 個碳重疊)；ESI-MS:計算值C20H20Cl4O5(M+NH4+， 480.0);實測值498.0。
通用方法2a步驟2: (4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千 基氧基)-2-甲氧基-二氫呋喃-3-酮
在在水浴中的(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯爺基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基 氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇(9.20 g， 19.08 mmol)的無水CH2C12(70 mL) 和三氯異氰尿酸(4.88 g， 21 mmol)的溶液中加入TEMPO(160 mg， 0.95 mmol)。反應(yīng)混合物變成黃色懸浮液并且在20。C下攪拌1小時。將反應(yīng)通 過HPLC確定完成，并且過濾。將溶劑蒸發(fā)并且加入曱苯(100mL)。將有 機相用飽和的NaHC03溶液(50 mL)和HC1水溶液(l N， 50 mL)洗滌。將 有機層干燥(MgS04)，過濾并且濃縮，獲得(4R，5R)-5-(2,4-二氯千基氧基甲 基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-2-甲|^-二氫呋喃-3-酮，為淡綠色油狀物，將其 直接用于下一步。
通用方法2a步驟3: (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇(I-4)
在冷的(-20。C)(4R，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯芐基氧 基)-2-甲氧基-二氫呋喃-3-酮(9.16 g， 19.07 mmol)的干燥THF(20 mL)溶液 中滴加入0.5M炔基溴化鎂(例如，其中R3-H,炔基溴化鎂是乙炔基溴化 鎂)的THF溶液(57.2 mL， 28.6 mmol)。將黃色反應(yīng)混合物在相同溫度下攪 拌l小時，并且用飽和的NH4C1(50 mL)摔滅，并且用IPAC(2x70 mL)萃 取。將有機層用水(50mL)洗滌，濃縮，獲得(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯芐基氧 基甲基)-4-(2,4- 二氯千基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氫呋喃-3-醇 (I-4)(R3=H)，為深紅色油狀物，將其直接用于下一步。
通用方法2a步驟4: (3R，4R,5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 節(jié)基氧基)-3-乙炔基-四氫呋喃-2，3-二醇
將(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔 基-2-曱氧基-四氫呋喃-3-醇(1-4)(9.65 g， 19.08 mmol)的TFA和水(30 mL:1.5 mL)溶液加熱至55。C。紅色溶液變成黑色溶液，并且在相同溫度下攪拌24 小時。將溶劑蒸發(fā)，并且用DCM(70 mL)稀釋。將有機層用飽和的 Na2CO3(50mL)、水(50 mL)洗滌并且濃縮，獲得黑色油狀物。將凈且產(chǎn)物通 過柱色譜(庚烷:EA 2:1)純化，獲得(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲 基)-4-(2，4-二氯-節(jié)基氧基)-3-乙炔基-四氫呋喃-2，3-二醇，為紅色油狀物(兩 種端基異構(gòu)體的混合物)。(約1.4:1，基于NMR分析和HPLC分析)。 ESI-MS:計算值QnH,8Cl4O5(M+NH4+，4卯.0);實測值508.0。<image>image see original document page 49</image>通用方法2b步驟1: (2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲?；趸?5-苯甲酰基 氧基曱基-二氫呋喃-3-酮
將1，3，5-三-0-苯甲酰基-a-D-呋喃核糖(10.0 g， 21.62 mmol， 1.0當(dāng)量) 溶于二氯甲烷(60 mL)中，并且在冰下冷卻。加入三氯異氰尿酸(5.52 g， 23.80 mmol， 1.1當(dāng)量)，然后加入催化量的TEMPO。將冰浴除去，并且將混合 物在室溫下攪拌1小時，然后在Cdite⑧上過濾。將有機相用飽和的Na2C03 水溶液洗涂，然后用1 N HC1和鹽水洗滌。將有機層干燥(MgS04)并且將 溶劑蒸發(fā)，獲得(2R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲?；趸谆?二氫 呋喃-3-酮，為白色泡沫狀物。lH-NMR(400MHz， CDC13): 3 8.13-8.01(m， 6H)， 7.65-7.37(m， 9H)， 6.20(d, 1H， J = 1.2Hz)， 5.88(dd， 1H， J = 1.2Hz， 8.8Hz), 5.05(m， 1H， J = 1.2Hz, 4Hz， 8.8Hz)， 4.84(dd， 1H， J = 4Hz， 12.4Hz)， 4.65(dd， 1H， J = 4Hz， 12.4Hz)。
通用方法2b步驟2: (2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲?；趸?5-苯甲酰基 氧基甲基-3-乙炔基-四氫呋喃-3-醇
在N;j下，在干燥的三頸燒瓶中^V CeCl3(23.6 g， 95.48 mmol， 4,4 當(dāng)量)和THF(100mL)，將其冷卻至-50。C。歷經(jīng)20分鐘，加入1 M乙炔基 溴化鎂(186.8 mL, 93.4 mmol， 4.3當(dāng)量)。將懸浮液在-50。C下攪拌1.5小 時。歷經(jīng)10分鐘，加入(2R，4R，5R)-2,4-二苯甲?；趸?5-苯甲?；趸鶗?基-二氫呋喃-3-酮(10.0 g， 21.7 mmol， 1.0當(dāng)量)的THF(80 mL)溶液。加入 后，將懸浮液在-50。C下攪拌4小時。將反應(yīng)用飽和的NH4C1(200 mL)猝滅。 溫至環(huán)境溫度后，將反應(yīng)混合物過濾并且用CH2C12(200 mLx3)萃取。將有 機相經(jīng)無水Na2S04干燥并且濃縮，獲得泡沫狀(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲 酰基氧基-5-苯甲?；趸谆?3-乙炔基-四氫呋喃-3-醇。 1H-NMR(400MHz， CDC13): S 8.05-8.01(m， 6H)， 7.65-7.37(m， 9H)， 6.59(s， 1H)， 5.53(d， 1H， J = 2.8Hz)， 4.80-4.77(m， 1H)， 4.70(dd， 1H， J = 5.2Hz， 12Hz). 4.65(dd， 1H， J = 6Hz， 12Hz)， 3.02(bs， 1H)， 2,65(s， 1H)。
可選擇的是，可以應(yīng)用步驟2中描述的相同方法，除了反應(yīng)溫度是-30 °C并且反應(yīng)時間是3小時，應(yīng)用(2R，4R，5R)-2，4-二苯甲?；鵩u^-5-苯甲酰 基氧基甲基-二氬吹喃-3-酮(1.0g， 2.17mmo1, 1.0當(dāng)量)、1 M乙炔基溴化鎂(13 mL， 6.51 mmol, 3當(dāng)量)、CeCl3(1.77 g， 7.16 mmol， 3.3當(dāng)量)和 THF(18 mL)，獲得(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯曱?；趸?5-苯甲?；趸?基-3-乙炔基-四氫呋喃-3-酮。
通用方法2b步驟3: (2R,3R，4R，5R)-4-苯曱酰基氧基-5-苯甲?；趸?曱基-3-乙炔基-四氫呋喃-2，3-二醇
將中間體(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲?；趸?5-苯甲?；趸鶗趸?3-乙炔基-四氫-呋喃-3-醇(2.048 g， 4.21 mmol, 1.0當(dāng)量)溶于曱醇(IO mL)和 THF(10mL)中。加入K2C03(176 mg， 1.26 mmol， 0.3當(dāng)量)，將反應(yīng)在環(huán) 境溫度下攪拌2小時，在硅膠上過濾，濃縮并且通過快速色鐠純化，獲得 (2R，3R，4R，5R)-4-苯甲?；趸?5-苯甲酰基氧基甲基-3-乙炔基-四氫呋喃 -2，3畫二醇，為泡沫狀物。lH-NMR(400MHz， CDC13): S 8.06畫7.96(m， 4H)， 7.54-7.26(m， 6H)， 5.88(d， 0.26H， J = 6.4Hz)， 5.54(s， 0.72H), 5.53(d， 0.72H， J =5.2Hz)， 5.41(s， 0.28H), 5.28(bs， 1H)， 4.67-4.49(m， 3H)， 4.22(bs， 1H)， 2.67(s， 0.26H), 2.59(s， 0.71H); 13C-匪R(100MHz， CDC13): S 166.74， 166.61， 165.74， 165.66， 133.79， 133.71， 133.52， 133.33， 133.24， 130.11， 130.05， 130.02, 129.89, 129.81， 129.44， 129.41, 128.86， 128.75， 128,57， 128.41， 128.36， 81.87， 80.07, 79.23， 77.89， 77.21， 76.61， 76.39， 75.77， 75.58， 72.83， 65.29， 64.26。
通用方法2e
51OR8' OH l卜1
通用方法2c步驟1: 1，2:5，6-二-O-異亞丙基-0t-D-核己呋喃-3-酮糖 將二丙酮-D-葡萄糖(2.0 g， 6.9 mmol)溶于CH2C12(40 mL)中。加入 Dess-Martin過珙烷(7.5 g， 13.8 mmol， 2.0當(dāng)量)并且將反應(yīng)在室溫下攪拌 過夜。然后加入10%Na2S2O3溶液(20 mL)和飽和的NaHC03溶液(20 mL) 并且將反應(yīng)攪拌15分鐘直至有機層變成澄清溶液。加入另外40 mL CH2C12，并且將CH2Ch層分離，用NaHCO;j溶液(20 mL)、鹽水(20 mL) 洗滌，干燥(Na2S04)，過濾并且濃縮，獲得粗中間體1，2:5，6-二-0-異亞丙 基-a-D-核己呋喃-3-酮糖。將粗中間體1，2:5，6-二-0-異亞丙基-a-D-核己吠 喃-3-酮糖用曱苯(2x25 mL)共沸蒸餾，溶于曱苯(20 mL)并且用于下一步。
通用方法2c步驟2: 1，2:5，6-二-0-異亞丙基-3-C-乙炔基-a-D-異呋喃糖 (allofuranose)
將在甲苯(20 mL)中的中間體1，2:5，6-二-0-異亞丙基-a-D-核己呋喃-3-酮糖(1.82g， 6.9mmo1， 1當(dāng)量)冷卻至0。C，然后加入0.5 M乙炔基溴化鎂的THF溶液(55.2 mL， 27.6 mmol， 4當(dāng)量)，并且將混合物在室溫下攪拌 1小時。將反應(yīng)用10。/。NH4Cl溶液(40mL)猝滅，并且將粗產(chǎn)物在乙酸乙酯 (100mL)和7JC相之間分配。將7jC相進一步用乙酸乙酯(3x20mL)萃取，并且 將合并的乙酸乙酯用鹽水(40mL)洗滌，干燥(Na2S04)，過濾并且濃縮至干 燥，獲得粗中間體l，2:5，6-二-0-異亞丙基-3-C-乙炔基-a-D-異呋喃糖，為淡 黃色泡沫狀物。
通用方法2c步驟3:3-C-乙炔基-l,2:5，6-雙-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯芐基)-a-D-異呋喃糖
將中間體1，2:5，6-二-0-異亞丙基-3-C-乙炔基-a-D-異呋喃糖(2.84 g， 10 mmol)溶于DMF(15mL)中并且在冰下冷卻。加入NaH(600 mg， 60%的油 M液，15mmo1， 1.5當(dāng)量)并且將反應(yīng)攪拌2分鐘，然后加入2，5-二氯千 基溴(3.6 g， 15 mmol， 1.5當(dāng)量)并且將混合物在室溫下攪拌3小時。加入 乙酸乙酯(120mL)，并且用1 N HCl(3x25 mL)、鹽水(2x25 mL)洗滌，干 燥(Na2S(Xt)，過濾并且濃縮至干燥，獲得粗中間體3-C-乙炔基-l，2:5，6-雙 -O-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯千基)-a-D-異呋喃糖，為淡黃色油狀物。
通用方法2c步驟4: 3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2,5-二氯 千基)-a-D-異呋喃糖
將粗中間體3-C-乙炔基-l，2:5，6-雙-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯節(jié) 基)-a-D-異呋喃糖(5.91 g， 10 mmol)溶于乙腈(50 mL)中。加入5體積％ H2S04溶液(12 mL)并且將混合物在室溫下攪拌過夜。加入NaOAc溶液(O.l M， 20 mL)并且將混合物真空蒸發(fā)。在溶液殘留物中加入乙酸乙酯(120 mL)。將乙酸乙酯層用飽和的NaHC03溶液(2x25mL)、鹽水(2x25 mL)洗 滌，干燥(Na2S04)，過濾并且濃縮，獲得粗中間體3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲 基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯千基)-a-D-異呋喃糖。
通用方法2c步驟5: 3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯 爺基)-5，6-雙(4-曱基苯曱酸酯)-a-D-異呋喃糖-二苯甲酸月旨
將粗中間體3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯節(jié) 基)-a-D陽異p夫喻糖(5.6 g， 10 mmo l)溶于乙腈(30 mL)中。加入吡咬(7.9 mL， lOOmmol, 10當(dāng)量)，然后加入對甲苯酰氯(3.11 mL， 30 mmol， 3當(dāng)量)。將反應(yīng)在55。C下攪拌3小時并且真空濃縮。加入乙酸乙酯(120 mL)并且用 1 NHCl溶液(3x25mL)、鹽水(2x25 mL)洗滌，干燥(Na;jS04)，過濾并且濃 縮至干燥，獲得粗中間體3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯 辛基)-5，6-雙(4-甲基苯甲酸酯)-a-D-異呋喃糖，為油狀物。
通用方法2c步驟6: 3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯千基)-5，6-雙(4-曱基苯 甲酸酯)-D-阿洛糖
將粗中間體3-C-乙炔基-l，2-0-(l-曱基亞乙基)-3-0-(2，5-二氯節(jié)基)-雙 (4-甲基苯曱酸酯)-a-D-異呋喃糖(7.4 g， 10 mmol)溶于乙腈(35 mL)中，加 入用7 mL水稀釋的50。/oHBF4的水溶液(6.3 mL， 50 mmol， 5當(dāng)量)。將 反應(yīng)混合物在60。C下攪拌3小時。將乙酸乙酯(200 mL)加入至反應(yīng)混合物 中并且用飽和的NaHC03溶液(2x30 mL)、 1 N HC1溶液(2x30 mL)、鹽水 (2x30mL)洗滌，干燥(Na2S04)，過濾，濃縮并且通過快速色鐠(己烷乙酸 乙酯=70: 30)純化，獲得3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯千基)-5，6-雙(4-甲基苯曱 酸酯)-D-阿洛糖，為白色泡沫狀物(4.41 g， 7.36 mmol，歷經(jīng)四步產(chǎn)率 73.6°/o)。 1H-NMR(CDC13): 3 7.92-7.80(m, 4H)， 7.38(d， 0.79H, J = 2.4 Hz)， 7.34(d， 0.23H, J = 2.1 Hz)， 7.30醫(yī)7.09(m， 6H)， 5.84-5.60(m, IH)， 5.51(d, 0.76H, J = 3.9 Hz )， 5.40(d， 0.22 H， J = 1.5 Hz)， 4.94-4.50(m， 5H)， 4'29(d， 1H， J = 4.2 Hz)， 2'87(s， 0.23H)， 2.80(s， 0.76H)， 2.34(s， 6H)。 13C-NMR(CDC13): & 166.71， 166.59， 165.66, 165.63， 144.08， 143.88， 136.59， 136.41， 133.01， 132.98. 131.59， 131.25， 130.61， 130.48， 129.97， 129.91， 129.75， 129.45， 129.30， 129.26, 129.22， 127.16， 127.06， 102.76, 96.78， 81.53， 81.25， 80.91， 80.83， 80.67， 80.55， 80.21， 77.83， 77.74， 76.81， 76.70， 72.10， 71.24， 65.67， 65,61， 64.07， 63.84， 21.80,21.78。
通用方法2c步驟7: 2-C-乙炔基-2-0-(2，5-二氯千基)-3，5-雙(4-甲基苯 曱酸酯)-D-核糖
將中間體3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯節(jié)基)-5，6-雙(4-甲基苯甲酸酯)-D-阿洛糖(2.20 g， 3.67 mmol)溶于乙腈(20 mL)中并且冷卻至0。C。加入高碘 酸(1.25g， 5.50 mmol， 1,5當(dāng)量)的H2O(5.0 mL)溶液，并且將反應(yīng)攪拌30 分鐘。加入乙酸異丙酯(50mL)，并且用飽和的NaHCO3溶液(50mL)、 5% 石克代碌L酸鈉水溶液(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，干燥(Na;jS04)，過濾并且
54濃縮至干燥。將MeOH(20mL)加入至油狀殘留物中并且冷卻至0。C。加入 三乙胺(1.09mL， 7.84 mmol， 2.1當(dāng)量)，并且將反應(yīng)在4。C下攪拌60小時。 加入乙酸乙酯(200 mL)，并且將有機相用1 N HCl溶液(2x40 mL)、鹽水 (2x30mL)洗滌，干燥(Na2S04)，過濾，濃縮并且通過快速色鐠(己烷乙酸 乙酯=75:25)純化，獲得標(biāo)題化合物，為淡黃色糊狀物。1H-NMR(CDC13): 3 7.99-7.84(m， 4H)， 7.51(d， 0.53H， J = 2.4 Hz)， 7.33(d， 0.43H, J = 2.4 Hz)， 7.28-7.10(m， 6H)， 5.94(d, 0.53H, J = 5.7 Hz)， 5.73(d, 0.43H, J = 4.2 Hz)， 5.57(s， 0.45H)， 5.46(s， 0.53H)， 4.98-4.85(m， 2H)， 4.80-4.54(m， 3H)， 2.81(s， 0.48H), 2.80(s, 0.40H)， 2.44-2.34(m， 6H)。 13C-NMR(CDC13):《166.65， 166.47， 165.62， 165.44， 144.89, 144.73， 144.07， 144.05， 137.64， 136.75， 133.04， 130.82， 130.46， 130.24， 130.21， 130.10， 130.06， 129.60， 129.51， 129.29， 129.26， 129.06, 128.94， 128.60， 128.39, 127.14， 127.12， 126.31， 126.13， 100.36， 100.34， 81.54， 80.24， 80.07, 79.51， 78.64， 78.48， 76.89， 76.60， 76.45， 66.34， 65.38， 64.76， 64.25,21.95， 21.88。
通用方法2c步驟8: (3R，4R，5R)-4-(4-曱基苯甲?；鵯L&)-5-(4-甲基苯 甲酰基氧基甲基)-3-乙炔基-四氫-p夫喃-2，3-二醇
將中間體2-C-乙炔基-2-0-(2，5-二氯千基)-3，5-雙(4-曱基苯甲酸酯)-D-核糖(1.H3 g, 1.95 mmol)溶于CH2C12(30 mL)中并且冷卻至-35。C(鄰二甲苯 和干冰，加入乙腈)。加入lMBCl3的CH2Cl2溶液(15.6mL， 15.6 mmol， 8當(dāng)量)，并且將混合物在-35。C下攪拌3小時。將冷的曱醇(IO mL)加入至 反應(yīng)中，然后加入KHC03粉末(3.9 g， 39.0 mmol， 20當(dāng)量)。攪拌10分 鐘后，將混合物過濾。加入CH2C12(30 mL)和1 N HC1溶液(20 mL),并且 將兩層分離。將水層進一步用CH2C12(20 mL)萃取。將合并的<:112(:12溶液 用鹽水(15mL)洗滌，千燥(Na2S04)，過濾，濃縮并且通過快速色譜(己烷: 乙酸乙酯=70:30)純化，獲得(311，41^，511)-4-(4-曱基苯甲酰基氧基)-5-(4-曱基 苯甲?；趸谆?-3-乙炔基-四氫呋喃-2，3-二醇，為白色泡沫狀物。原料 可以回收。1H-NMR(CDC13): S 7.96-7.84(m， 4H)， 7.28-7.10(m， 4H)， 5.80畫5,30(m， 2H)， 4.70-4.45(m， 3H), 2.67(s， 0.16H)， 2.59(s， 0.63H)， 2.44-2.34(m， 6H)。 13C-NMR(CDC13): 8 166.80， 166.61， 165.79， 165.67， 144.93， 144.78， 144.10， 144.07， 130.20， 130.08， 130.02， 129.50， 129.47， 129.26129.22， 127.02， 126.27， 101.73， 100.18， 81.85， 80.07， 79.57， 78.47， 76.75， 76.50， 76.13， 75.63， 73.07， 65.10， 64.16， 21.91， 21.84。
通用方法3:由中間體二保護的(在4-羥基和5-羥基曱基取代 基):(3R，4R，5R)-3-炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-2，3，4-三醇(II-l)制備本發(fā)明化 合物
應(yīng)用任何適合的磺酰氯(例如Ms-Cl或Ts-Cl)或磺酸酐(例如Ms-O-Ms 或Ts-O-Ts)可以將化合物II-l轉(zhuǎn)化為環(huán)氧化物。將該環(huán)氧化物與適合的堿 或堿類似物偶聯(lián)，獲得核苷類似物。盡管通用方法3描述了堿類似物4-氯 -7H-吡咯并[2，3-dj嘧啶，應(yīng)當(dāng)理解的是，可以應(yīng)用任何適合的堿基團，例 如腺噤呤或鳥嘌呤類似物，其中X=N、 CH或CR4， Rl，^卣素、NR5R6 或OR7， R2，=H、卣素或NR5R6并且R3、 R4、 R5、 R6和R7如本文定 義的。在某些實例中，X可以是CH。在其它實例中，X可以是CR4。在 某些實例中R4可以是鹵素，例如F或I。在其它實例中R4可以是炔基， 例如乙炔基。在某些實例中Rl，可以是囟素，例如C1。在其它實例中，Rl， 可以是氨基或烷氡基，例如甲氧基。在某些實例中R2，可以是H。 >^堿類 似物的其它實例包括例如4-氯-7H-吡咯并2，3-d嘧啶、4-氯-5-氟-吡咯并 [2，3_(11嘧啶、 一氯-5-碘-吡咯并[2，3-d]嘧啶、7H-吡咯并2，3-dl嘧啶-4-基-異 吲咪-l，3-二酮和4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶。偶聯(lián)步驟可以應(yīng)用任何適 合的試劑(例如適合的堿，例如NaH)進行。保護基R8，可以是任何適合的 保護基，例如2，4-二氯千基或2，5-二氯千基、甲苯酰基、苯甲?；蚯Щ?。 這些可以通過適合的試劑(例如應(yīng)用BCl3或適合的堿，例如甲醇鈉)除去。20
FV-2,4-二氯芐基、甲笨酰基、笨甲跣基或芐基
X = N, CH或CR4
R，'=卣素，NR5R6或OR7
FV = H, d秉或NR5R6
R3, R4, R5, R6和R7如本文定義的
通用方法3步驟1: 1,2-脫7jC-2-C-乙炔基-3，5-雙(4-曱基苯曱酰基)-a-D-吹喃核糖
將中間體(3只，41^，511)-4-(4-甲基苯甲?；趸?-5-(4-甲基苯甲?；趸?甲基)-3-乙炔基-四氬-呋喃-2，3-二醇(11-1)(304 mg， 0.74 mmo)溶于 CH2C12(4 mL)中。加入三乙胺(308.4 ^L, 2.22 mmol， 3當(dāng)量)并且將混合 物加熱至30。C。歷經(jīng)10分鐘，滴加入曱磺酸酐(167.6mg， 0.96 mmol, 1.3 當(dāng)量)的CH2C12(1 mL)溶液。將反應(yīng)在40。C下攪拌2.5小時并且加入 CH2C12(50 mL)。將CH2Cl2溶液用H20(2x5 mL)、鹽水(IO mL)洗滌，千 燥(NazS04)，過濾并且濃縮至干燥，獲得粗中間體1，2-脫水-2-C-乙炔基-3，5-雙(4-甲基苯曱?；?-oc-D-呋喃核糖。
通用方法3步驟2: (2議，31^，41^511)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-(11嗜咬-7-基)_4_(4_甲基苯甲?；趸?-5-(4-甲基苯甲?；趸鶗趸?-3-乙炔基-四氫 呋喃-3-醇
在裝有4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(227.3 mg， 1.48mmo1, 2當(dāng)量)的干燥燒瓶中加入NaH(59.2mg， 60。/o的油^t液，1.48 mmol， 2當(dāng)量)和乙腈 (4 mL)，攪拌10分鐘。加入溶于乙腈(2 mL)中的粗中間體1，2-脫水-2-C-乙炔基-3，5-雙(4-曱基苯曱?；?-a-D-呋喃核糖(383mg， 0.74mmo1, 1當(dāng)量) 并且將反應(yīng)在50。C下加熱15小時。通過加入1 N HC1溶液將混合物中和 至pH7.0，并且真空蒸發(fā)。將乙酸乙酯(50mL)加入至殘留溶液中并且將其 用1 NHCl溶液(8mL)、 H20(8 mL)、鹽水(IO mL)洗滌，千燥( 32804)， 過濾并且濃縮至干燥，獲得粗中間體(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl 嘧咬-7-基)-4-(4-曱基苯曱?；趸?-5-(4-曱基苯甲?；趸谆?-3-乙炔基 -四氫呋喃-3-醇(434 mg)。
通用方法3步驟3: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇
將粗中間體(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-4-(4-甲基 苯甲?；趸?-5-(4-甲基苯甲?；趸谆?-3-乙炔基-四氫-呋喃-3-醇(434 mg， 0.74 mmol)溶于MeOH(5 mL)和CH2Cl2(5 mL)中。加入30%甲醇鈉 的曱醇溶液(1.38 mL， 7.4 mmol， 10當(dāng)量)，并且將混合物在室溫下攪拌 15分鐘。通過加入lNHCl溶液將混合物中和至pH7.0，并且真空蒸發(fā)至 干燥，通過快速色鐠(CH2Cl2:MeOH-92:8)純化，獲得(21^，311，411，511)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇。 1H-NMR(CDC13): 3 8.58(s， 1H)，謹(jǐn)(d， 1H， J = 3.9 Hz)， 6.68(d， 1H， J = 3.9 Hz)， 6.49(s， 1H)， 4,51(d， 1H， J = 9.0 Hz)， 4.20國3.75(m， 3H)， 2.51(s， 1H)。 ESI-MS:計算值C13H12ClN3O4(309.05);實測值310.3。
通用方法3步驟4: (211，311，411，5議)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-(11嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇
將(2R，3R^R，5R)-2-(4-氯-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲 基-四氫呋喃-3，4-二醇(198.0 mg， 0.64 mmol)和NH3.H2O(30 mL)的混合物 在玻璃壓力管中在100。C下加熱5小時。將反應(yīng)混合物濃縮至千燥并且通 過快速色譜(CH2Cl2:MeOHN80:20)純化，獲得(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氨基-吡 咯并12，3-dj嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇，為淡黃色 固體。1H匪R(300MHz， MeOD): 6 8.07(1H， s)， 7.48(1H， d， J = 3.9 Hz)，6'58(1H, d， J = 3.6 Hz)， 6.29(1H， s)， 4.49(1H， d， J = 8.4 Hz)， 4.08-3.96(2H， m)， 3.90-3.75(lH， m)， 2.52(1H， s) 。 1H NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 8.05(1H, s)， 7.41(1H, d， J = 3.6 Hz)， 6.97(2H， s), 6.55(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.23(1H， s)， 6.16(1H， s), 5.61(1H， d， ，J = 7.5 Hz)， 5.13(1H， t, J = 4.9 Hz)， 4.33(1H， t, J = 7.8 Hz), 3.卯-3.70(2H， m)， 3.78-3.68(lH， m)， 3.01(1H， s)。 13C NMR(75MHz， DMSO-d6): S 157.4， 151.6, 150.1， 121.6， 102.4， 99.6， 89.6, 82.1， 81.8， 76.5, 75.8,74.0,59.7。 ESI畫MS:計算值C13H14N4O4(290.1);實 測值291.2。 實施例
本發(fā)明參考以下實施例進行描述。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不限制于 這些實施例。 縮略語
DMSO二甲亞砜
THF四氫吹喃
DMAP4-二曱基氨基吡啶
醒R核磁共振
TEA三乙胺
MS質(zhì)譜
DMF二曱基甲酰胺
DCM二氯甲烷
PBS磷酸緩沖鹽溶液
FBS胎牛血清
HRP辣根過氧化物酶
TMB3，3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺
DMEMDulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基
I.制備本發(fā)明化合物 實施例1
(2R，3R，4R,5R)-2-(4-氨基-吡咯并l2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱 基-四氫呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 60</formula>
標(biāo)題化合物根據(jù)通用方法1由可商購獲得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-2-曱氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 吡咯并[2，3-dj嘧啶制備。
可選擇的是，該化合物根據(jù)通用方法2a、 2b或2c和通用方法3制備。
黃色固體。1H醒R(300MHz， MeOD): 3 8，07(1H， s), 7.48(1H， d， J = 3.9 Hz)， 6.58(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.29(1H， s)， 4.49(1H, d， J = 8.4 Hz)， 4.08-3.96(2H, m)， 3.90-3.75(lH， m)， 2.52(1H， s) 。 1H NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 8.05(1H， s)， 7.41(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.97(2H， s)， 6.55(1H， d， J =3.6 Hz)， 6.23(1H, s)， 6.16(1H， s)， 5.61(1H， d， J = 7.5 Hz)， 5.13(1H， t， J = 4.9 Hz)， 4.33(1H， t， J = 7.8 Hz)， 3.90-3,70(2H， m)， 3.78曙3.68(1H， m)， 3.01(1H， s)。 13C匪R(75MHz， DMSO-d6): 6 157.4， 151.6， 150.1， 121.6, 102.4， 99.6， 89.6， 82.1， 81.8, 76.5， 75.8， 74.0， 59.7 。 ESI國MS : 計算值 C13H14N404(2卯.1);實測值291.2(M+l)。
laJD: +160.0。(ATAGO AP-100旋光計；甲醇溶劑；100mm觀察管； 23.4。C;波長589腿)。
實施例2
(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇
<formula>formula see original document page 60</formula>
標(biāo)題化合物根據(jù)通用方法1由可商購獲得的(3R,4R，5R)-5-(2,4-二氯節(jié)基氧基曱基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-2-甲氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯
吡咯并[2 ，3-d]嘧啶制備。
可選擇的是，該化合物根據(jù)通用方法2a、 2b或2c和通用方法3制備。 白色固體。lH陽NMR(300MHz， MeOH-d4): S 8.59(1H， s), 8.01(1H, d， J
=4.2 Hz)， 6.69(1H， d， J = 3.9 Hz)， 6.49(1H， s)， 4.50(1H， d， J = 9.3 Hz)，
4.06-3.99(2H， m)， 3.87畫3.82(1H， m)， 2.52(1H， s) 。
ESI-MS: 計算值
C13H12ClN3O4(309.2);實測值310.6(M+l)。
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基 曱基-四氬呋喃-3,4-二醇
標(biāo)題化合物才艮據(jù)通用方法2a或2b和通用方法3由可商購獲得的 (3R,4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-四 氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dl嘧啶制備。
1H NMR(300MHz， MeOD): S 8.60(1H， s)， 7.92(1H， d， J = 2.1 Hz)， 6.54(1H， d， J = 2.1 Hz)， 4.46(1H， d， J = 8.7 Hz)， 4.05-3.95(2H， m)， 3.90-3.80(lH，m)，2.56(lH，s)。 ESI-MS:計算值C13HllClFN3O4(327.0); 實測值328.2。
(211，311，411，511)-2-(4畫氨基-5-氟-吡咯并12，3畫d j嘧啶-7-基)-3畫乙炔基-5畫羥 基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇
標(biāo)題化合物才艮據(jù)通用方法2a或2c和通用方法3由可商購獲得的 (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯節(jié)基氧基甲基)-4-(2,4-二氯節(jié)基氧基)-2-甲氧基-四
實施例3
實施例4氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dj嘧啶制備。
1H醒R(300MHz， MeOD): 3 8.08(1H， s)， 7.39(1H， d， J = 2.1 Hz)， 6，34(1H， d， J = 2.1 Hz)， 4.44(1H， d， J = 9.0 Hz)， 4.05-3.95(2H， m), 3.85-3.75(lH， m)， 2.58(1H， s)。 ESI-MS:計算值C13H13FN4O4(308.1);實 測值309.2。
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-5-碘-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基 曱基-四氫呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 62</formula>
標(biāo)題化合物才艮據(jù)通用方法1由可商購獲得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯節(jié) 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-2-曱氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 -5-碘-吡咯并l2，3-d嘧咬制備。
可選擇的是，該化合物根據(jù)通用方法2a和通用方法3制備。 白色固體。'H-NMR(300MHz, DMSO-d6): 3 8.69(1H， s)， 8.36(1H， s)， 6.39(1H， s)， 6,33(1H, s)， 5.70(1H， d， J = 7.60 Hz)， 5.33(1H， t， J = 4.85 Hz)， 4.34(dd， J = 8.94， 7.47 Hz， 1H)， 3.92國3.81(2H， m)， 3.71-3,64(1H， m)， 3.04(1H s)。
ES1-MS:計算值C,3HuClIN304(435.6);實測值436.1.2(M+l)。 13C醒R(75MHz， DMSO-d6): S 151.67， 151.32, 144.28， 133.96， 117.00, 90.85， 83.06， 82.08， 77.46， 76.61， 73.85， 59.54， 53.76。
(2R，3R，4R，5R)-3-乙炔基-5-羥基甲基-2-(5-碘-4-甲氧基-吡咯并[2，3-dJ 嘧啶-7-基)-四氫呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 62</formula>
實施例5
實施例6標(biāo)題化合物根據(jù)通用方法1由可商購獲得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯芐基氧基)-2-曱氧基-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 -5-碘-吡咯并[2，3-€1嘧啶制備，然后通過用甲醇處理將氯代化合物轉(zhuǎn)化為曱 氧基化合物。
可選擇的是，該化合物根據(jù)通用方法2a和通用方法3制備。
白色固體。'H曙NMR(300MHz， DMSO-d6): S 8.44(1H， s)， 7.97(1H, s), 6.28(2H, s), 5.66(1H， d， J = 7.34 Hz)， 5.24(1H， t， J = 4.73 Hz)， 4.33(t， J = 7.76， Hz， 1H)， 4.05(3H， s)， 3.88-3.79(2H， m)， 3.67-3.62(lH， m)， 3.03(1H， s)。 ESI-MS:計算值C14H14IN305(431.2);實測值432.1.2(M+l)。
13C NMR(75MHz, DMSO-d6): S 162.82， 152.19， 144,62， 144.54， 144.41， 129.81， 107.02， 82.79, 82,26， 76.58， 73.98， 59.68, 54.37， 51.69。
實施例7
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥 基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇
標(biāo)題化合物才艮據(jù)通用方法1由可商購獲得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯爺 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯-芐基氧基)-2-甲fL^-四氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯—5-碘-吡咯并12，3-dl嘧啶制備。
可選擇的是，該化合物根據(jù)通用方法2a和通用方法3制備。
白色固體。'H-NMR(300MHz， DMSO-d6): S 8.10(1H， s)， 7.75(1H， s)， 6.62(2H， bs)， 6.20(2H， d， J = 2.38 Hz)， 5.60(1H， d， J = 7.38 Hz), 5.18(1H， t， J =5.18 Hz)， 4.31(dd， J = 8.64， 7.47 Hz， 1H)， 3.84-3.76(2H， m)， 3.65國3.64(1H， m)， 3.07(1H， s)。 ESI-MS:計算值C13H13IN404(416.2);實測值417.2(M+1)。
13C匪R(75MHz， DMSO-d6): 6 157.80， 150.71， 144.96， 127.45， 103.48， 90.16， 82.63， 82.49， 77.31， 76.50， 74.18， 59.85， 52.29。
實施例8
(21^，311，411,511)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-司嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫-呋喃-3，4-二醇
HO
標(biāo)題化合物根據(jù)通用方法2a和通用方法3由可商購獲得的 (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯芐基氧基甲基)-4-(2，4-二氯-芐基氧基)-2-曱氧基-四 氫呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶或4-氯-5-三甲基甲硅 烷基乙炔基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制備。
可選擇的是，標(biāo)題化合物和實施例9和10化合物是由 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并12，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲 基-四氫呋喃-3，4-二醇(實施例7)制備的。在干燥并且預(yù)冷的25 mL圓底燒 并瓦中加入溶于無水THF(l.O mL)和無7JC DMF(0.5 mL)、三乙胺(0.04 mL， 0.288 mmol)、三甲基甲硅烷基乙炔(0.024 mL ， 0.173 mmol)中的 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲 基-四氫呋喃-3，4-二醇(0.060 g， 0.144 mmol)、碘化銅(1)(0.006 g， 0.028 mmol)、四(三苯膦)鈀(0)(0.016 g， 0.014 mmol)。將反應(yīng)混合物在0。C至室 溫下、在氬氣下攪拌30分鐘。將溶劑真空除去，并且將獲得的殘留物溶于 曱醇(0.60 mL)和30%氨溶液(0.60 mL)中。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在室溫下攪 拌1小時。將溶劑真空除去。將獲得的粗殘留物通過反相制備HPLC在 Atlantis C"柱(250x20mm)上純化，梯度為5至95%在水中的乙腈。將包 含所需產(chǎn)物的級分分離，蒸發(fā)并且從水中凍干，獲得(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基甲基-四氫-咬喃 一3，4-二醇(實施例8)、 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并l2,3-dl嘧咬 -7-基)-3-丁-1，3-二炔基-5-羥基曱基-四氫-呋喃-3，4-二醇(實施例9)和 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-丁-l,3-二炔基5-羥基甲基-四氫-呋喃-3,4-二醇(實施例10)，為白色固體。
白色固體。，H-NMR(300MHz， DMSO-d6): 8 8.14(1H， s)， 7.88(1H， s)， 6.62(1H， bs)， 6.26-6.20(2H， m)， 5.70(1H， bs)， 5.25(1H， bs)， 4.33(d， J = 8.79Hz， 1H)， 4.26(1H， s)， 3.85-3.62(4H， m), 3,06(1H， s)。
ESI-MS:計算值C15H14IN404(314.3);實測值315.3(M+1)。 實施例9
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-丁-l，3-二炔基-5-羥基甲基-四氫-呋喃-3，4-二醇
標(biāo)題化合物如以上實施例8描述的制備。
白色固體。1H-NMR(300MHz， DMSO-d6): 8 8.15(1H， s)， 7.92(1H， s)， 6.60(2H， bs)， 6.21(1H， s)， 5.80(1H， bs)， 5.25(1H， bs)， 4.36(d， J = 9.08 Hz， 1H) 4.28(1H， s)， 3.88-3.78(2H， m)， 3.67-3.62(2H， m), 3.54(1H， s)。
ESI-MS:計算值C17H14N404(338.3);實測值339.3(M+1)。
實施例10
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-丁-l，3-二炔 基-5-羥基甲基-四氫-呋喃-3，4-二醇
標(biāo)題化合物如以上實施例8描述的制備。
白色固體。ESI-MS:計算值ClsH13IN4O4(440.2);實測值441.2(M+1)。 實施例11:合成堿基團
尜氯-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶是可商購獲得的。4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dl 嘧咬可以3口 X Wang， P P Seth， R Ranken， E E Swayze和M T Migawa， Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 23:1， 161-170中描述的合成。 7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-4-基-異吲哚-l，3-二酮可以如M M Bio， F Xu， M Waters, J M Willimas, K A Savery， C J Cowden, C Yang， E Buck, Z J Song, D M Tschaen， R P Volante， R A Reamer, E J J Grabowski， J. Org.Chem. 2004， 69, 6257-6266中描述的合成。4-氯-5-碟-吡咯并[2，3-d嘧^和 4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶可以由以下描述的4-氯-7H-吡咯并[2，3-dj嘧 咬合成。其中如通用方法3描述的，將堿7H-吡咯并[2，3-d嘧咬-4-基-異p引 咮-l，3-二酮與糖基團偶聯(lián)，保護基可以在偶聯(lián)步驟之后在堿性條件下(例如 l-丁基胺，在甲醇中)除去(例如在65。C下加熱12小時)。從而可以獲得相應(yīng) 的4-氨基-吡咯并12，3-d嘧咬-7-基核苷。
實施例ll.l:在用鋁箔避光的250 mL圓底燒瓶中，加入溶于無水DMF 中的4-氯-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶1(2.15 g， 14.0 mmol)和N-碟琥珀酰亞胺 (3.37 g， 14.98 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下、在氮氣下攪拌16小時。 將溶劑真空除去，并且將殘留物溶于二氯曱烷(250 mL)中。將反應(yīng)混合物 用鹽水(50mL)洗滌，并且將有才幾層分離，經(jīng)Na2S04千燥并且真空濃縮。 將粗殘留物通過快速色傳在硅膠上純化，并且用60。/。在環(huán)己烷中的EtOAc 洗脫。將包含所需產(chǎn)物的級分(TLC)合并并且蒸發(fā)，獲得4-氯-5-碘-吡咯并 12，3-dl嘧啶，為淡黃色固體。
ESI畫MS:計算值C6H3C1IN3(279.4);實測值280.07(M+1)。 實施例11.2:在用鋁箔避光的250 mL圓底燒瓶中，加入溶于無水 THF(60 mL)、無水DMF(20 mL)和三乙胺(0.64 mL， 4.65 mmol)的4-氯畫5-碘-7H畫吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.3 g， 4.6mmo1)、 ^Ht銅(1)(0.17 g， 0.93 mmol)、 三甲基曱珪烷基乙炔(0.96 mL， 6.97mmol)和四(三苯膦"巴(0)(0.26 g， 0.23 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下、在氮氣下攪拌16小時。將溶劑真空除去， 并且將殘留物溶于二氯甲烷(250 mL)中。將反應(yīng)混合物用水(3x50 mL)洗 滌，并且將合并的有機層經(jīng)Na2S04干燥并且真空濃縮。將粗殘留物通過 快速色譜在珪膠上純化，并且用70。/。在環(huán)己烷中的EtOAc洗脫。將包含所需產(chǎn)物的級分(TLC)合并并且蒸發(fā)，獲得4-氯-5-三甲基甲硅烷基乙炔基 -711-吡咯并2，3-^嘧啶，為黃褐色白色固體。
'H國NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 12.92(1H， s)， 8.62(1H， s)， 8.06(1H， s), 0.23(9H， s)。
ESI-MS:計算值CnH，2ClN3Si(249.7);實測值250.2(M+l)。 或者將4-氯-5-三甲基曱硅烷基乙炔基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶直接用于 偶聯(lián)步驟，如通用方法3中所示，在該情況中，三甲基甲硅烷基是在偶聯(lián) 反應(yīng)條件下裂解的，或者應(yīng)用例如氨、NaOH或KOH通過脫甲硅烷基反 應(yīng)可以將其轉(zhuǎn)化為4-氯-5-乙炔-p比咯并2，3-d嘧啶。 II.本發(fā)明化合物的抗病毒活性
本發(fā)明化合物具有對抗黃病毒科的多種成員的活性。本發(fā)明化合物的 活性可以在標(biāo)準(zhǔn)體外和體內(nèi)試驗中顯示。
50y。有效濃度(ECso)是降低50%的病毒所產(chǎn)生的信號的試驗化合物的 濃度。其是應(yīng)用非線性回歸分析計算的，應(yīng)用變量斜率S形的劑量響應(yīng)曲 線和商購的軟件，例如Prism或ActivityBase。
實施例12
基于細胞的黃病毒屬(FlavMrus)免疫檢測(CFI)試驗 將BHK21或A549細胞用胰蛋白酶消化、計數(shù)并且在Hams F-12培 養(yǎng)基(對于A549細胞)或添加2。/。胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素的 RPMI-1640培養(yǎng)基(對于BHK21細胞)中稀釋至2xl()5個細胞/mL。將2xl04 個細胞/孔分布在透明的96-孔組織培養(yǎng)板中，并且在37°C、 5。/。C02下放 置過夜。第二天，將細胞在多種濃度的試驗化合物的存在下、在37。C和 5。/。C02下、在相同培養(yǎng)基中以0.3復(fù)合感染(MOI)用病毒感染1小時。將 包含病毒和化合物的培養(yǎng)基除去，用僅包含試驗化合物的新鮮培養(yǎng)基替代 并且在37°C、 5。/。C02下再培養(yǎng)48小時。將細胞用PBS洗滌一次并且用冷 的甲醇固定10分鐘。用PBS洗滌兩次后，將固定的細胞用包含1%FBS 和0.05吐溫-20的PBS在室溫下封閉1小時。然后加入濃度為1:20至 1:100(在包含1%FBS和0,05吐溫-20的PBS中)的一抗溶液(4G2)達3小時。 然后將細胞用PBS洗滌3次，然后與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合的抗鼠
67IgG(Sigma， 1:2000稀釋)培養(yǎng)1小時。用PBS洗滌3次后，將50 pL 3,3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物溶液(Sigma)加入至每孔中達2分鐘。將反應(yīng)通過 加入0.5 M硫酸來終止。將板在450 nm處讀取吸光度，用于病毒載量定量。 測量后，將細胞用PBS洗滌3次，然后用碘化丙咬培養(yǎng)5分鐘。將板在 TecanSafire讀板儀(激發(fā)537 nm，發(fā)射617nm)中讀數(shù)，用于細胞數(shù)量定 量。劑量響應(yīng)曲線是用平均吸光度對試驗化合物濃度的對數(shù)來繪制的。EC5() 是通過非線性回歸分析來計算的。可以應(yīng)用陽性對照，例如N-壬基-脫氧 野尻霉素。
實施例13
基于細胞的黃病毒屬致細胞病變作用(CPE)試驗
為了試驗對抗西尼羅河病毒或日本腦炎病毒，將BHK21細胞用胰蛋 白酶消化并且在添加2%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng) 基中稀釋至濃度為4xl()5個細胞/mL。為了試驗對抗登革病毒，將Huh7 細胞用胰蛋白酶消化并且在添加5。/。胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素的 DMEM培養(yǎng)基中稀釋至濃度為4xl()5個細胞/mL。將50 細胞懸浮液 (2xl04個細胞)/孔分布在96-孔底部透光的PIT聚合基質(zhì)板(Nunc)中。將細 胞在培養(yǎng)基中、在37。C、 5。/。C02下培養(yǎng)過夜，然后以MObO,3用西尼羅 河病毒(例如B956菌林)或日本腦炎病毒(例如Nakayama菌林)或者以 MOI=l用登革病毒(例如DEN-2 NGC菌林)，在不同濃度的試驗化合物的 存在下感染。將包含病毒和化合物的板進一步在37。C、 5。/。C02下培養(yǎng)72 小時。培養(yǎng)結(jié)束后，將100iaLCellTiter-Glo⑧試劑加入至每孔中。將內(nèi)容 物在定軌振蕩器上混合2分鐘，以誘導(dǎo)細胞裂解。將板在室溫下培養(yǎng)10 分鐘，以穩(wěn)定發(fā)光信號。發(fā)光讀數(shù)是應(yīng)用讀板儀記錄的?？梢詰?yīng)用陽性對 照，例如N-壬基-脫氧野尻霉素。
實施例14
基于細胞的丙型肝炎病毒(HCV)復(fù)制子試驗
將包含HCV復(fù)制子的細胞(Huh-luc/neo-ET)保持在包含2 mM L-谷氨 酸鹽、0.1 mM非必需氨基酸溶液、10%熱滅活的胎牛血清和250 mg/mL Geneticin⑧、G418硫酸鹽溶液的DMEM培養(yǎng)基中。將細胞保持在20至80。/。的融合并且用胰蛋白酶(0.05。/。)/EDTA溶液進行胰蛋白酶消化。胰蛋 白酶消化后，將細胞重新懸浮于添加的DMEM無酚紅的培養(yǎng)基(添加2 mM L-谷氨酰胺、0.1 mM非必需氨基酸溶液、10。/。熱滅活的胎牛血清和1 mM 丙酮酸鈉的DMEM無酚紅的培養(yǎng)基)中，并且以420 g離心沉淀5分鐘。 計算細胞密度并且用無酚紅的培養(yǎng)基稀釋至lxl05個細胞/mL。
制備兩套板，白色不透光96-孔板用于熒光素酶讀數(shù)，96-孔透明板用 于細胞毒性測量。將每個孔4妾種IO，OOO個細胞/孔，并且在37。C、 5%C02 下培養(yǎng)過夜。培養(yǎng)后，將培養(yǎng)基吸出并且加入添加多種濃度化合物的無酚 紅的培養(yǎng)基，并且將板進一步在37。C、 5。/。C02下再培養(yǎng)48小時。作為陽 性對照，可以應(yīng)用例如NM107(2，-C-曱基胞苷)。
為了測量熒光素酶活性，將板從培養(yǎng)箱中取出，使得它們平衡至室溫 達30分鐘，并且熒光素酶活性是在加入100 |uL根據(jù)廠商說明書制備的 Britelite⑧(PerKin Elmer)后測量的。
III.本發(fā)明化合物在登革熱感染的小鼠模型中的抗病毒活性
實施例15
本發(fā)明化合物在登革熱感染的小鼠模型體內(nèi)也顯示出活性(Schul等人， Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74)。簡而言之，將AG129小 鼠(B&K Universal Ltd, Hull, UK)飼養(yǎng)在單獨通風(fēng)的籠里(TechniPlast， Italy)并且應(yīng)用6至10周齡。將小鼠腹膜內(nèi)注射0.4 mL TSV01登革病毒2 懸浮液。血樣是在異氟烷麻醉下通過后眼眶穿刺獲取的。將血樣收集在包 含終濃度為0.4%的檸檬酸鈉的試管中，并且立刻以6000 g離心3分鐘， 獲得血漿。將20 nL血漿稀釋在780 RPMI 1640培養(yǎng)基中并且迅速凍 存在液氮中，用于噬菌斑試驗分析。剩余的血漿用于細胞因子和NSl蛋白 質(zhì)水平測定。小鼠l艮成登革病毒血癥在數(shù)天內(nèi)上升，在感染后第3天達 到峰值。
為了試驗抗病毒活性，將本發(fā)明化合物溶于介質(zhì)液中，例如10%乙醇、 30%PEG300和60%05\￥(5%葡萄糖水溶液)；或6 N HC1(L5當(dāng)量):l N NaOH(pH調(diào)節(jié)至3.5):100 mM檸檬酸鹽緩沖液pH 3.5(0.9 %v/v : 2.5 %v/v : 96.6%v/v)。將36只6-10周齡的AG129小鼠分成6組，每組6只小鼠。如以上描述的，將所有的小鼠用登革病毒感染(O天)。組l通過口服 管飼法施用200 mL/只小鼠0.2 mg/kg的本發(fā)明化合物， 一天兩次(早晨一 次、傍晚一次)，從0天開始連續(xù)3天(首劑量恰好在登革熱感染前給藥)。 組2、 3和4以相同方法分別施用1 mg/kg、 5 mg/kg和25 mg/kg本發(fā)明化 合物。可以應(yīng)用陽性對照，例如抗病毒化合物或(2R，3R，4R，5R)-2-(2-氨基-6-羥基-嘌呤-9-基)-5-羥基甲基-3-甲基-四氫-呋喃-3,4-二醇，采用先前組的相 同方法通過口服管飼法施用200 pL/只小鼠。另外一組僅用介質(zhì)液體處理。
感染后第3天，約100 ^L血樣(用檸檬酸鈉抗凝)是在異氟烷麻醉下通 過后眼眶穿刺從小鼠中獲取的。血漿是通過離心從每個血樣中獲得的，并 且迅速凍存于液氮中，用于噬菌斑試驗分析。將收集的血漿樣品通過噬菌 斑試驗分析，如Schul等人，Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74 中描述的。細胞因子也如Schul等人，Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74中描述的進行分析。NSl蛋白質(zhì)水平應(yīng)用Platelia⑧試劑盒 (BioRad Laboratories)分析?？共《咀饔檬峭ㄟ^細胞因子水平和/或NSl蛋 白質(zhì)水平的減少來指示的。
本發(fā)明化合物以劑量為5-50 mg/kg(—天兩次)顯示出劑量響應(yīng)抑制， 與對照組相比，獲得病毒血癥降低約5-100倍、例如約10-60倍、例如約 20-30倍。例如，實施例1的化合物以劑量為25mg/kg(—天兩次)顯示出劑 量響應(yīng)抑制，獲得病毒血癥降低約20倍。
IV.用于登革熱臨床試驗的臨床試驗方案
臨床試驗例如以以下方法進行。I期研究是在64位健康成年志愿者中 進行隨機的，安慰劑可控的劑量增加試驗，以評價單個和多個口服劑量后 的安全性、耐受性和藥物代謝動力學(xué)?；诘歉锊《狙Y典型地持續(xù)5-7 天，進行7天給藥。食物對血漿藥物水平的影響是在一個同期組志愿者中 評價的。
IIa期研究是隨機的、安慰劑可控的劑量增加試驗，以評價本發(fā)明化合 物在急性登革熱成年患者中的抗病毒活性。有3個同期組，總共約60個個 體。將適合的住院患者在發(fā)病的48小時內(nèi)隨機分入藥物或安慰劑組，以提 供觀察抗病毒或臨床作用的最好機會。每天給藥或根據(jù)藥物的藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)所示的給藥，至多3天。臨床、血液學(xué)、生物化學(xué)和病毒學(xué)的指 標(biāo)每天測量4次，直至退熱后72小時。主要的試驗室終點是病毒血癥消退 的時間。主要的臨床終點M燒消退的時間。病毒血癥消退的及時顯著的 降低是成功的說明。次要的測量可以包括NS1抗原血癥消退的時間、血小 板減少癥恢復(fù)的時間以及任何靜脈內(nèi)補液的需求。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本文描述的實施例和實施方案僅用于說明目的并且關(guān) 于它的多種修飾或變化將提供給本領(lǐng)域技術(shù)人員以建議，并且包括在本申 請書的精神和范圍內(nèi)以及附屬權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或者其可藥用鹽或前藥其中X是CH或CR4；R1是鹵素、NR5R6或OR7；R2是H、鹵素或NR5R6；R3是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基或雜芳基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；R4是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、鹵素、氰基、硝基、羥基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或烷基氧基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；R5和R6獨立地選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羥基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；并且R7是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷基羰基或芳基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代。
2.權(quán)利要求1中要求的化合物，其是式(II)化合物或者其可藥用鹽或 前藥<formula>formula see original document page 3</formula>其中X是CH或CR4; Rl是卣素、NR5R6或OR7; R2是H、卣素或NR5R6;R3是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基或雜芳基， 它們每個任選被一個或多個取代基取代；R4是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、閨素、 氰基、硝基、羥基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或烷基氧基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；R5和R6獨立地選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán) 烷基、雜芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羥基、烷氧基、芳基羰基和 烷基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代；并且R7是H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、環(huán)垸基、雜環(huán)烷基、雜芳基、 烷基羰基或芳基羰基，它們每個任選被一個或多個取代基取代。
3.化合物，其選自
4. (211，311，411，511)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-(1嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羥基 曱基-四氫呋喃-3，4-二醇。
5. (2議，311，411，51^)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔 基-5-羥基甲基-四氫呋喃-3，4-二醇或(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-氟-吡咯并 [2，3-dj嘧淀-7-基)-3-乙炔基-5-羥基曱基-四氫呋喃-3，4-二醇。
6. 藥物組合物，該藥物組合物包含權(quán)利要求1至5中任意一項要求的 化合物或者其可藥用鹽或前藥，與可藥用賦形劑、稀釋劑或栽體組合。
7. 權(quán)利要求1至5中任意一項要求的化合物或者其可藥用鹽或前藥， 其用作藥物。
8. 權(quán)利要求1至5中任意一項要求的化合物或者其可藥用鹽或前藥在 制備用于治療和/或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的藥物中的用途。
9. 治療和/或預(yù)防由病毒感染引起的疾病的方法，該方法包括給需要的 患者施用有效量的權(quán)利要求1至5中任意一項的化合物。
10. 權(quán)利要求8中要求的用途或權(quán)利要求9中要求的方法，其中病毒 感染是由選自以下的病毒引起的登革病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒、 日本腦炎病毒、蜱媒腦炎病毒、昆金病毒、墨累谷腦炎、圣路易斯腦炎、 奧馬斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、齊卡病毒和丙型肝炎病毒。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)的核苷化合物，其具有多種醫(yī)藥應(yīng)用，例如用于治療和/或預(yù)防病毒感染。
文檔編號A61P31/12GK101600726SQ200880003104
公開日2009年12月9日 申請日期2008年2月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日
發(fā)明者J·杜賴斯瓦米, Y·L·陳, 正 尹 申請人:諾瓦提斯公司