專(zhuān)利名稱(chēng)：穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法
專(zhuān)利說(shuō)明穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法 本發(fā)明涉及一種用于穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法，并且涉及容器在根據(jù)本發(fā)明的方法中的用途。
生物聚合物(例如蛋白質(zhì)、多糖或核酸和它們的混合物)的儲(chǔ)存根據(jù)對(duì)產(chǎn)物的要求以可溶解的、冷凍的(含水的)或凍干的狀態(tài)進(jìn)行。對(duì)于藥品來(lái)說(shuō)，根據(jù)穩(wěn)定性或應(yīng)用類(lèi)型采用各種儲(chǔ)存形式或劑型。這同樣適用于包含單獨(dú)(純化的)蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)混合物(生物藥物)或者其與其它物質(zhì)例如脂質(zhì)的組合的溶液。任選地，添加穩(wěn)定劑、尤其是使各種要求最優(yōu)化的穩(wěn)定劑，使得產(chǎn)物盡可能長(zhǎng)時(shí)間地保持天然和活性狀態(tài)。
例如，從血漿分離的蛋白質(zhì)以各種狀態(tài)儲(chǔ)存，所述蛋白質(zhì)例如凝血因子(因子II、V、VII、VIII，血管性血友病因子(VWF)，VWF/FVIII復(fù)合物，F(xiàn)IX、X、XI、XII、XIII，纖維蛋白原，其組合及其活化形式)，F(xiàn)VII激活蛋白酶(FSAP)，蛋白酶抑制劑，例如α-1抗胰蛋白酶，抗凝血酶III，肝素輔因子II，C1-酯酶抑制劑，抗纖維蛋白溶素，蛋白C及其輔因子蛋白S，蛋白Z和其它抑制劑，免疫球蛋白，例如IgG、IgA、IgE、IgM和相應(yīng)的亞型，纖維蛋白溶解和補(bǔ)體系統(tǒng)的蛋白質(zhì)，例如血纖維蛋白溶酶原，血纖維蛋白溶酶原激活物，補(bǔ)體因子，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)例如白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，生長(zhǎng)因子，和支持傷口愈合的蛋白質(zhì)例如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)，纖連蛋白，玻連蛋白等及其組合，以及血漿本身及其亞級(jí)分，例如冷沉淀物和其它專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員熟知的亞級(jí)分，例如來(lái)自根據(jù)Cohn、Kistler-Nitschmann血漿分級(jí)的中間產(chǎn)物和它們的改性物。
免疫球蛋白根據(jù)產(chǎn)物以液體或凍干形式使用，考慮到應(yīng)用和便利性?xún)?yōu)選液體方案，因?yàn)槠洳恍枰孪戎貥?gòu)。
對(duì)于例如用于輸血目的的血漿本身而言，液態(tài)儲(chǔ)存、液態(tài)冷凍以及凍干的方案都是已知的，并且根據(jù)要求使用。
對(duì)來(lái)自重組和轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)物以及最終產(chǎn)物制備過(guò)程的中間產(chǎn)物可以進(jìn)行相應(yīng)的步驟。凍干產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn)是在0℃以上直至室溫的溫度下進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存，除此之外，通常伴隨重量降低(由于含水量降低)。雖然凍干產(chǎn)物需要在適當(dāng)?shù)娜芤褐兄貥?gòu)，但是所述優(yōu)點(diǎn)在某些情況下是突出的。特別是在急診醫(yī)學(xué)中，優(yōu)選在非常艱苦的治療條件下(例如在專(zhuān)業(yè)的醫(yī)院環(huán)境之外)的操作中，由于玻璃瓶的重量和可能破碎的風(fēng)險(xiǎn)，因此玻璃瓶不如更柔軟且更輕的材料。另外，對(duì)冷凍產(chǎn)物(例如血漿)進(jìn)行冷卻或解凍費(fèi)時(shí)。
血漿或其它蛋白質(zhì)溶液在玻璃瓶或安瓿中的凍干對(duì)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員是已知的。在完成凍干工藝之后，使用適當(dāng)?shù)娜臃忾]容器，從而最大限度地減少水蒸氣的再進(jìn)入。這通常沒(méi)有問(wèn)題，因?yàn)槿萜鏖_(kāi)口與整個(gè)容器和凍干粉的表面積相比非常小/窄，因此在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境濕度下對(duì)水(蒸氣)的再吸收進(jìn)行得相對(duì)慢。在需要的情況下，產(chǎn)物的溶解通過(guò)添加水或其它適當(dāng)?shù)娜芤簛?lái)實(shí)現(xiàn)。
前面已經(jīng)部分提到了在某些情況下在玻璃容器中凍干和儲(chǔ)存的不利特性。此外，根據(jù)容器開(kāi)口，對(duì)凍干來(lái)說(shuō)可獲得相對(duì)小的出口表面積，由此導(dǎo)致相當(dāng)長(zhǎng)的凍干時(shí)間。因此，還期望一種能夠促進(jìn)凍干但在之后的密封過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)大范圍的對(duì)水分的快速吸收的方法。
凍干過(guò)程在專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的實(shí)施方案下從冷凍物質(zhì)中除去水蒸氣。在包含例如二氧化碳的溶液中，還可以(至少部分)除去二氧化碳，這可能導(dǎo)致用水或其它溶液重構(gòu)之后所得產(chǎn)物的pH值向堿性轉(zhuǎn)變。這例如可以由含蛋白質(zhì)的溶液，例如血漿觀察到。如下面給出的實(shí)施例中進(jìn)一步說(shuō)明的，在凍干之前7.0至7.6的pH值在重構(gòu)之后可能達(dá)到大于8.0的pH制。這種pH值變化可能對(duì)產(chǎn)物和患者產(chǎn)生后果。具體而言，可能對(duì)特定活性成分的完好性或在延長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)的穩(wěn)定性產(chǎn)生不利影響。此外，如果使用較大的量，則在施用經(jīng)重構(gòu)的pH更堿性的產(chǎn)物過(guò)程中需要對(duì)輸血患者增加注意。
US-A-2005/0124589涉及利用緩沖溶液對(duì)異環(huán)磷酰胺進(jìn)行重構(gòu)。
EP-A-1 417 972涉及包含乙酸甘露醇酯或酒石酸甘露醇酯以及間甲酚或苯甲醇作為防腐劑的穩(wěn)定的特立帕肽溶液。
WO-A-01/24817公開(kāi)了纖溶酶或溶栓劑的凍干組合物的重構(gòu)，其中pH值保持在pH 8.0。纖溶酶是一種得自蛇毒的酶。
EP-A-0 284 249涉及淋巴細(xì)胞因子的凍干，EP-B-0 124 018涉及在凍干之前將pH值調(diào)至6.5至7.5的凍干的纖連蛋白制劑的制備。
WO-A-95/05845涉及凍干的神經(jīng)生長(zhǎng)因子制劑的制備，其中在用氯化鈉和檸檬酸的溶液重構(gòu)之后組合物具有5.2的pH值。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供避免或至少減少在凍干粉的處理中、特別是在醫(yī)學(xué)應(yīng)用中所描述的缺點(diǎn)的改進(jìn)方法。
該目的通過(guò)一種用于穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中 -在凍干工藝中，將所述血漿組分置于包含至少兩種不同的降低pH值的物質(zhì)的溶液中，所述兩種不同的降低pH值的物質(zhì)使重構(gòu)后形成的溶液調(diào)節(jié)到預(yù)先確定的pH值范圍。
根據(jù)本發(fā)明的方法使得專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員能夠通過(guò)適當(dāng)?shù)拇胧┢胶忸A(yù)期的或重構(gòu)時(shí)發(fā)生的pH值轉(zhuǎn)變。
根據(jù)本發(fā)明，使用至少兩種不同物質(zhì)的方案可有利地提供在水溶液中吸收重構(gòu)之后已經(jīng)具有期望的pH值的凍干粉。相對(duì)于利用單一物質(zhì)調(diào)節(jié)pH值，這是有利的，因?yàn)槔脝我晃镔|(zhì)調(diào)節(jié)pH值的情況下不能保證緩沖物質(zhì)的濃度保持在允許的極限值以下。
在根據(jù)本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，總共使用三種調(diào)節(jié)措施，即一方面用CO2氣體處理待凍干的產(chǎn)物，例如將溶液的pH調(diào)節(jié)到6.5至7，然后添加無(wú)機(jī)酸、特別是磷酸以獲得pH的進(jìn)一步降低。例如降低0.2個(gè)pH單位，最后添加不同于第一種酸的其它酸例如檸檬酸，從而再次獲得pH的降低，例如再降低0.2至0.3個(gè)pH單位。如此制備的樣品隨后可以通過(guò)凍干來(lái)獲得重構(gòu)溶液中所期望的pH，這不損害溶液中存在的活性蛋白質(zhì)。因此，本發(fā)明還提供給專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員一種技術(shù)教導(dǎo)，即如何可以使用簡(jiǎn)單的常規(guī)試驗(yàn)來(lái)確定可用于設(shè)定所涉及體系的最佳pH值的準(zhǔn)確數(shù)量。
根據(jù)本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“溶液”應(yīng)理解為一種體系，其中組分溶解在主要含水的相中，而不是溶解在如US-A-5,690,963中所述的含不溶固體部分的相中。
在根據(jù)本發(fā)明的方法中，可以預(yù)期所述至少兩種不同的物質(zhì)防止pH值被調(diào)到至對(duì)凍干粉中血漿組分的結(jié)構(gòu)有不利影響的范圍，所述不利影響為至少部分損失活性和/或天然性、變性、斷裂、聚集、化學(xué)改性例如氧化。
通過(guò)將待凍干的溶液中的pH值降至不影響血漿組分例如產(chǎn)物的主要活性成分的范圍，在凍干和重構(gòu)之后可以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物的pH值在預(yù)先確定的pH范圍內(nèi)。對(duì)血漿來(lái)說(shuō)，所述預(yù)先確定的范圍通常可以是pH 6.95至7.9，特別是pH 7.0至7.6，然而對(duì)其它生物聚合物溶液來(lái)說(shuō)可以要求相當(dāng)不同的pH值。在每種情況下專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員均可以通過(guò)簡(jiǎn)單的試驗(yàn)來(lái)確定例如不同pH值條件下組分的基本參數(shù)例如天然性、有效性、聚集特性等以設(shè)定待調(diào)節(jié)的pH值。
在根據(jù)本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中，就在凍干之前得到酸性更強(qiáng)的溶液而言，所述pH值調(diào)節(jié)是降低pH值，通過(guò)添加適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)、緩沖溶液或(稀釋的)酸溶液，從而在產(chǎn)物重構(gòu)之后得到期望的pH值。
凍干之前溶液pH值范圍的調(diào)節(jié)可以如下進(jìn)行當(dāng)用重構(gòu)溶液重構(gòu)凍干粉時(shí)，設(shè)定應(yīng)存在于由此產(chǎn)生的溶液中重構(gòu)之后的pH值(預(yù)先確定的pH值或pH值范圍)。也就是說(shuō)，不設(shè)定的話(huà)，經(jīng)重構(gòu)的溶液的pH值可能明顯偏離凍干之前的pH值，如果可以容忍的話(huà)。因此，例如可以用水將例如含有血漿組分的溶液的pH值從7.4調(diào)至6.0，從而在重構(gòu)之后達(dá)到6.6至7.0的pH值范圍。
另一種可以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物重構(gòu)之后所要達(dá)到的pH值的方法是在凍干粉溶解過(guò)程中或之后調(diào)節(jié)pH值。這可以通過(guò)利用適當(dāng)?shù)木彌_液調(diào)節(jié)產(chǎn)物溶液，或通過(guò)后續(xù)引入相應(yīng)的酸化溶液來(lái)實(shí)現(xiàn)。分別滴定各個(gè)容器或取出的溶液需要時(shí)間，并且在快速和安全應(yīng)用方面例如輸血情況下是不太實(shí)際的。然而，利用適當(dāng)?shù)淖陨砭哂兴崽匦缘娜芤喝芙猱a(chǎn)物并且得到產(chǎn)物所要達(dá)到的pH值，這同樣是可行的方案。
在根據(jù)本發(fā)明的方法中，例如使用緩沖物質(zhì)，例如無(wú)機(jī)或有機(jī)酸和堿的鹽，特別是磷酸鹽或碳酸鹽來(lái)作為也可以通過(guò)引入CO2來(lái)調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)。另外，可以使用磷酸二氫鹽或磷酸一氫鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、有機(jī)酸或堿的鹽、三(羥基甲基氨基)甲烷和/或氨基酸作為用于調(diào)節(jié)預(yù)先確定的pH值的物質(zhì)。特別地，凍干粉的重構(gòu)可以在包含生理上相容的酸水解鹽或生理上相容的酸的水溶液中進(jìn)行。
如果血漿組分的凍干在包含對(duì)在重構(gòu)過(guò)程中形成的溶液中預(yù)先確定的pH值范圍起到調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)的溶液中進(jìn)行，則重構(gòu)可以有利地利用基本上中性的注射用水來(lái)進(jìn)行。
以示例性的方式進(jìn)一步說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的方法。可以利用適當(dāng)?shù)哪茉谒卯a(chǎn)物溶解之后調(diào)節(jié)到相應(yīng)pH值范圍的溶液和物質(zhì)進(jìn)行凍干前產(chǎn)物的酸化。例如可以使用適當(dāng)濃度的檸檬酸，以將血漿的pH值調(diào)節(jié)至pH 6.0至6.95，優(yōu)選pH 6.5至6.95的pH范圍，從而在凍干的血漿重構(gòu)時(shí)達(dá)到7.0至7.9的pH值。對(duì)于血漿特別優(yōu)選的是添加濃度范圍為0.1至20.0mM(在產(chǎn)物中添加的溶液的最終濃度)，優(yōu)選1至5mM的檸檬酸。用于凍干血漿重構(gòu)的檸檬酸溶液也在這些濃度范圍內(nèi)。對(duì)于其它蛋白質(zhì)溶液，就凍干前和重構(gòu)過(guò)程中pH值調(diào)節(jié)而言，添加濃度范圍為0.1至50mM(加酸產(chǎn)物中的最終濃度)的檸檬酸是有用的。應(yīng)該注意到，如果在添加前已經(jīng)存在檸檬酸/檸檬酸鹽，則產(chǎn)物中得到的檸檬酸含量或得到的檸檬酸鹽含量總的來(lái)說(shuō)可能較高。這以相應(yīng)的方式同樣適用于其它可以添加的用于這種調(diào)節(jié)的物質(zhì)，例如磷酸鹽緩沖液等。
因此，其它試劑和添加其它緩沖液和酸溶液是可以的。應(yīng)該提及，溶液的pH值還可以通過(guò)在凍干之前將CO2氣體引入溶液(利用攪拌溶液向表面提供氣體或通過(guò)在溶液中引入軟管或者類(lèi)似的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員熟知的技術(shù))來(lái)調(diào)節(jié)。
比較而言，凍干的容器在包裝前也可以暴露于如上所述的酸性氣氛中。例如可以通過(guò)引入氣體形式的CO2擴(kuò)散到容器中，使得得到的凍干粉和后來(lái)的相應(yīng)的產(chǎn)物溶液達(dá)到期望的pH值。
所述用于在凍干之前、產(chǎn)物儲(chǔ)存過(guò)程中以及重構(gòu)過(guò)程中調(diào)節(jié)期望的pH值的措施可以通過(guò)所述措施來(lái)實(shí)現(xiàn)。這些可以單獨(dú)或組合使用。因此，還可以在酸性pH條件下儲(chǔ)存凍干粉，有利且已知的是例如免疫球蛋白，隨后將它們?nèi)芙庠谒胁⑶冶３炙嵝越橘|(zhì)以防止一種或更多種組分快速聚集。
在對(duì)患者施用之前為了達(dá)到所需的治療效果調(diào)節(jié)產(chǎn)物溶液的pH可能也是必需的。
在待凍干的和/或重構(gòu)溶液中，可以存在血漿組分的穩(wěn)定劑，特別是治療上重要的血漿組分的穩(wěn)定劑。作為穩(wěn)定劑，特別可以提及的是多糖、寡糖，例如糖，多元醇，例如甘露醇或山梨糖醇，氨基酸或它們的組合。
在根據(jù)本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，如下得到凍干粉，將血漿組分置于主要含水的溶液中，將其裝到至少部分由不透水但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料構(gòu)成的容器中，在完成凍干工藝之后防止吸收超過(guò)預(yù)先確定的殘留含水量的水蒸氣。
許多用于實(shí)施凍干的容器是已知的。因此，US-A-2004/0081588涉及允許在凍干過(guò)程中收縮且包含由可透過(guò)水蒸氣，但不透水的膜制成的微孔壁的容器。
US-B-6,773,425涉及一種用于收集、凍干、儲(chǔ)存、重構(gòu)和施用生物溶液，特別是血液制品的容器。
EP-A-0 343 596涉及用于在無(wú)菌條件下凍干的方法和容器。說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的容器包括具有可透過(guò)水蒸氣的至少部分疏水、多孔、對(duì)細(xì)菌密閉的膜的面(side)。
WO-A-95/27180涉及一種用于將對(duì)凍干產(chǎn)物的污染降至最低的容器。所提出的容器還包括允許水蒸氣逸出的部位。
WO-A-96/31748涉及用于容納待凍干的溶液的袋，其還具有設(shè)置在支持材料上的可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌阻擋層。
在這方面，可以提及的是凍干粉的所謂殘留含水量在許多情況下對(duì)產(chǎn)物的儲(chǔ)存穩(wěn)定性非常重要。含有敏感血漿組分(例如治療性蛋白質(zhì))的凍干粉應(yīng)根據(jù)儲(chǔ)存條件(溫度)以低于5％的殘留水分、優(yōu)選低于3％儲(chǔ)存，從而能夠長(zhǎng)期保持活性、天然性和安全性。
在根據(jù)本發(fā)明的方法中，可以通過(guò)若干種措施來(lái)防止或阻止水蒸氣快速地再進(jìn)入塑料容器中。降低移除區(qū)域內(nèi)的相對(duì)大氣濕度和/或利用氮或其它適當(dāng)?shù)拇胧┏錆M(mǎn)凍干粉是可行的。特別是通過(guò)適當(dāng)?shù)拇胧﹣?lái)快速覆蓋或密封膜表面，例如施加不透水蒸氣的無(wú)菌片或?qū)⑷萜骺焖俜忾]在適當(dāng)?shù)钠锌梢宰柚够蛏踔练乐刮账帧＿@可以在氮?dú)庵谢驅(qū)Υ檎婵諄?lái)進(jìn)行。作為附加方案或替代方案，根據(jù)待調(diào)節(jié)的殘留水分的范圍，可以向袋中添加專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的結(jié)合水(蒸氣)的材料。
可以推薦的是將所述由不透水，但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料制成的容器置于支撐材料上。
在某些情況下，在可以根據(jù)本發(fā)明重構(gòu)的凍干粉中可以存在已經(jīng)提到的血漿組分。但是，根據(jù)本發(fā)明的方法不限于這些血漿蛋白質(zhì)。對(duì)治療重要的血漿組分尤其是來(lái)自血液、血漿或血清的蛋白質(zhì)，以及重組或轉(zhuǎn)基因制備的血漿蛋白質(zhì)。
舉例來(lái)說(shuō)，可以提及的特別是從血漿分離的蛋白質(zhì)，例如凝血因子(因子II、V、VII、VIII，血管性血友病因子(VWF)，VWF/FVIII復(fù)合物，F(xiàn)IX、X、XI、XII、XIII，纖維蛋白原，其組合及其活化形式)，F(xiàn)VII激活蛋白酶(FSAP)，蛋白酶抑制劑，例如α-1抗胰蛋白酶，抗凝血酶III，肝素輔因子II，C1-酯酶抑制劑，抗纖維蛋白溶素，蛋白C及其輔因子蛋白S，蛋白Z和其它抑制劑，免疫球蛋白，例如IgG、IgA、IgE、IgM和相應(yīng)的亞型，纖維蛋白溶解和補(bǔ)體系統(tǒng)的蛋白質(zhì)，例如血纖維蛋白溶酶原，血纖維蛋白溶酶原激活物，補(bǔ)體因子，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)例如白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，生長(zhǎng)因子，和支持傷口愈合的蛋白質(zhì)例如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)，纖連蛋白，玻連蛋白等及其組合，以及血漿本身及其亞級(jí)分，例如冷沉淀物和其它專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員熟知的亞級(jí)分，例如來(lái)自根據(jù)Cohn、Kistler-Nitschmann血漿分級(jí)的中間產(chǎn)物和它們的改性物。
類(lèi)似地，還可以考慮包含在生物來(lái)源例如體液的血漿組分，或者轉(zhuǎn)基因或重組制備的蛋白質(zhì)的部分。
在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法在可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料由氟化塑料材料、聚酯或聚乙烯構(gòu)成的容器中實(shí)施。
為了縮短被認(rèn)為不利的相對(duì)長(zhǎng)的凍干時(shí)間，在根據(jù)本發(fā)明方法的該實(shí)施方案中，提供相對(duì)于(冷凍的)產(chǎn)物表面來(lái)說(shuō)適于水蒸氣排出的盡可能大的表面。為了降低容器的總重量和便于操作，作為用于在其中進(jìn)行凍干的容器的支撐材料，還可以使用適合的容器形式例如袋的塑料材料。其可以由材料(例如聚丙烯、聚乙烯、乙烯基醋酸乙酯、聚氯乙烯、聚氨酯或其它合適的材料或它們的組合)和層(例如可以由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的多層體系構(gòu)成的

聚合物型的那些，及其與其它材料的組合)組成。

聚合物是苯乙烯/丁二烯/苯乙烯、苯乙烯/異戊二烯/苯乙烯、苯乙烯/乙烯-丁烯/苯乙烯、苯乙烯/乙烯-丙烯/苯乙烯的嵌段聚合物，其中的每一個(gè)也可以具有官能團(tuán)，例如馬來(lái)酸酐。
這些材料通常不能透過(guò)水蒸氣，因此可以使用可透過(guò)水蒸氣的膜來(lái)確保凍干過(guò)程中可能發(fā)生適當(dāng)高的氣體交換。這種膜可以由聚四氟乙烯(含氟聚合物)、聚丙烯、聚乙烯或其它合適的膜及其組合組成。每種膜材料與袋材料在緊密制備粘合例如焊接方面都不是簡(jiǎn)單相容的。對(duì)應(yīng)的組合通過(guò)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的技術(shù)組合，例如通過(guò)熱焊接和/或機(jī)械錨接或其它合適的方法。優(yōu)選的組合是聚丙烯和/或Kraton聚合物的容器材料與基于含氟聚合物、優(yōu)選聚四氟乙烯或聚丙烯的膜，優(yōu)選聚乙烯的容器與基于聚乙烯例如所謂的高密度聚乙烯的膜。為了確保穩(wěn)定性、無(wú)菌性以及水和氣體的密封性，多層體系也可以作為容器的基礎(chǔ)，并且可以與適當(dāng)?shù)哪げ牧辖Y(jié)合。
膜可以構(gòu)成整個(gè)袋，但是通常優(yōu)選只有部分袋是這種膜形式的。一個(gè)原因是，凍干通常以如下方式進(jìn)行，將凍干器中的塑料容器置于固體表面(冷卻的或待冷卻的)上，因此部分膜表面不能提供最大水蒸氣排出。另外，在打開(kāi)凍干器之后通常相對(duì)于具有優(yōu)化的膜部分的塑料容器來(lái)說(shuō)，水蒸氣再進(jìn)入凍干粉明顯加快。
這種容器的一個(gè)具體的實(shí)施方案是例如聚丙烯袋，其表面在一側(cè)大部分(這一側(cè)大于50％的表面面向凍干器空間)由在凍干過(guò)程中自由接近的膜構(gòu)成，也就是說(shuō)遠(yuǎn)離放置所述裝置的冷卻表面。這種可接近的表面的膜部分應(yīng)盡可能大，從而可以有效地進(jìn)行凍干工藝。例如，如果膜表面相對(duì)于袋表面太小(例如，如果膜邊緣與袋邊緣和下面的溶液距離太遠(yuǎn))，在蒸發(fā)過(guò)程中水蒸氣分子必須首先沿著溶液/凍干粉水平移動(dòng)，從而可以穿過(guò)膜排出。除了延長(zhǎng)的凍干時(shí)間之外，這可能導(dǎo)致不期望的凍干粉的不均勻(包括未完全干燥的區(qū)域)。
在根據(jù)本發(fā)明的方法中還有用的是，將可透過(guò)水蒸氣的容器置于可由塑料材料或鋁箔構(gòu)成的不透水蒸氣的容器中。
根據(jù)本發(fā)明的方法可以在專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員熟知的凍干工藝中進(jìn)行。特別是還可以在包括第一步驟和第二步驟的凍干工藝中進(jìn)行，其中與第一步驟相比，在第二步驟中輸入凍干工藝的解吸能較少。這種工藝是歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP-A-1 870 649的主題，其中更詳細(xì)地描述了所述工藝。EP-A-1 870 649的內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。
根據(jù)本發(fā)明的方法特別可以利用在附圖
中示意性示出的容器來(lái)實(shí)施。用于凍干的容器具有壁10和連接元件21、22。壁10至少部分由不透水但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料15構(gòu)成。連接元件22可以被設(shè)計(jì)成短的凸出的連接器并通過(guò)隔板23來(lái)封閉?？梢酝ㄟ^(guò)例如填充軟管21進(jìn)行袋的填充。壁10在此被其可見(jiàn)部分中的窗15中斷。窗15由可透過(guò)水蒸氣但不透水的材料構(gòu)成。這種材料上面詳細(xì)描述過(guò)。
下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1 本試驗(yàn)的目的主要是研究?jī)龈僧a(chǎn)物再次吸收水蒸氣的動(dòng)力學(xué)以及環(huán)境溫度和大氣濕度的影響。因此，用5ml血漿分別填充(填充高度1cm)具有窄的瓶頸/瓶口的玻璃瓶(20ml)并凍干。將對(duì)照物氣密密封，而將其它瓶?jī)?chǔ)存在室溫/60％大氣濕度或40℃/75％大氣濕度下至多7小時(shí)，立即用氮?dú)鉀_洗瓶子的氣體空間并將瓶子氣密密封。通過(guò)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的KarlFischer法分析凍干粉的殘留含水量。
結(jié)果 結(jié)果顯示，凍干粉中殘留水分的增加發(fā)生的較快，并且取決于環(huán)境溫度和大氣濕度。因此，可以采取措施來(lái)限制不期望的高殘留含水量。對(duì)照樣品(0小時(shí)，即在剛剛從凍干器中取出后)顯示，采用適當(dāng)?shù)墓に?快速氣密密封)可以將殘留水分保持在期望的范圍內(nèi)。
實(shí)施例2 在本實(shí)施例中，考慮到上面得到的知識(shí)，將包含凍干粉的容器在從凍干器中取出之后立即氣密密封在塑料袋中。
為此，使用附圖中繪出的袋形聚丙烯容器，其中在其一側(cè)二維地施加聚四氟乙烯膜(在袋的一側(cè)事先制備對(duì)應(yīng)的窗)以產(chǎn)生液密結(jié)合。設(shè)置用于填充袋的入口和出口元件，以及任選的通風(fēng)口(就用進(jìn)入的液體替代存在于袋中的空氣而言)。另外，入口和出口元件還能夠在凍干之后引入重構(gòu)液體，在對(duì)患者輸液的實(shí)際應(yīng)用中用于待移出的經(jīng)重構(gòu)的液體的出口。這些入口/出口連接可以由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的塑料材料構(gòu)成，在所述實(shí)施例中是聚丙烯。
在對(duì)容器消毒之后，在無(wú)菌條件下將200ml血漿分別填充到這些袋中，熱封入口連接，冷凍所述袋，并進(jìn)行冷凍干燥。干燥之后，從凍干器中取出所述袋并且立即氣密熱封在塑料袋中。
對(duì)于凍干粉的重構(gòu)，將包含凍干粉的容器從保護(hù)袋中取出(將它們切開(kāi)之后)，隨后添加184ml下面描述的液體以獲得200ml重構(gòu)血漿的最終體積。輕微晃動(dòng)塑料袋，在5分鐘內(nèi)完成重構(gòu)形成透明溶液。
殘留含水量 儲(chǔ)存所述袋之后對(duì)凍干粉的分析顯示，對(duì)于非常快地密封在袋中的容器而言，殘留含水量為1.0-1.5％，如果延遲包裝容器，則殘留含水量為2.0-2.5％。這些結(jié)果對(duì)于密封在袋中儲(chǔ)存幾天和幾周的容器而言是可以再現(xiàn)的。比較而言，沒(méi)有熱封在適當(dāng)?shù)拇械膬龈煞墼趲仔r(shí)后殘留含水量即明顯大于3％，這原則上可以從實(shí)施例1的結(jié)果中推測(cè)出來(lái)。
實(shí)施例3 采用與實(shí)施例2中所列出的同樣的步驟，包括使用塑料材料、冷凍干燥條件和操作。用200ml血漿填充包括膜部分的袋狀容器。在本實(shí)施例中，使用根據(jù)WO-A-2005/058334或EP-A-0 991 416的經(jīng)促凝溶劑/清潔劑處理的人血漿和普遍適用的血漿。兩種促凝產(chǎn)品都是在GMP條件下利用嚴(yán)格監(jiān)控的制備工藝解凍和混合成最高1520單個(gè)血漿捐贈(zèng)而制備的。在生產(chǎn)工藝中實(shí)施的溶劑/清潔劑法在最小化殘余感染風(fēng)險(xiǎn)(對(duì)于輸血相關(guān)的包膜病毒)方面達(dá)到了非常高的安全度，個(gè)人捐贈(zèng)篩選以及其它安全措施和有效的方法步驟也明顯有助于產(chǎn)品的安全性。普遍適用的血漿通過(guò)以所描述的混合比(如EP-A-0 991 416和EP-A-1 696 940中所述)最佳地整合個(gè)人捐贈(zèng)的A、B和AB血型而獲得，這樣能夠不根據(jù)血型而應(yīng)用于患者。
下面的人血漿制備方法根據(jù)P.Hellstern等人的Vox Sang 1992；63178-185來(lái)實(shí)施。
可以使用個(gè)人捐獻(xiàn)者的血漿或通過(guò)其它方法處理的個(gè)人和混合血漿產(chǎn)品以及本發(fā)明意義上的聚合物。在本實(shí)施例中檢驗(yàn)三種不同的樣品，包括對(duì)照樣品 A.向經(jīng)S/D處理的血漿混合物(人血漿和普遍適用的血漿方法)中逐滴加入檸檬酸，通過(guò)攪拌徹底混合成“添加的檸檬酸”的最終濃度為3至4mM，pH值從pH 7.0-7.4降至pH 6.5-6.7。在無(wú)菌過(guò)濾后，將得到的血漿填充到容器中用于隨后冷凍干燥。通過(guò)分別添加184ml注射用水(WFI)進(jìn)行凍干粉的重構(gòu)。
B.不添加降低pH的溶液來(lái)制備人血漿/普遍適用的血漿，并填充到袋中。通過(guò)分別添加184ml包含濃度為3至4mM檸檬酸的WFI進(jìn)行凍干粉的重構(gòu)。
C.不添加降低pH的溶液來(lái)制備人血漿/普遍適用的血漿，并填充到袋中。通過(guò)分別添加184ml不加檸檬酸的WFI來(lái)進(jìn)行凍干粉的重構(gòu)。
D.將人血漿/普遍適用的血漿填充到市售的袋中并冷凍儲(chǔ)存。使用非凍干的產(chǎn)物作為對(duì)照。
如上所述(或在解凍之后)重構(gòu)每種樣品的代表性容器，并且測(cè)量各pH值。另外，通過(guò)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員已知的活性試驗(yàn)確定重要的凝血因子(因子II、V、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、ADAMTS13)、抑制劑(抗凝血酶、蛋白C和S、α-1抗胰蛋白酶、抗纖維蛋白溶素和C1抑制劑)的量。另外，測(cè)定所謂的通用凝血參數(shù)(globale Gerinnungsparameter)，其可以給出一種或更多種因子的任何劣化指示活化的部分凝血活酶時(shí)間(aPTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)和蛇毒凝血酶時(shí)間(RT)。通過(guò)所謂的標(biāo)記物，例如凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物(TAT)、凝血酶原片段(F1+2)、活化因子VII(FVIIa)和D二聚體指示任意因子的活化。
結(jié)果 各pH值 樣品ApH 7.5至7.9 樣品BpH 7.3至7.6 樣品CpH 8.1至8.4 對(duì)照pH 7.0至7.4 對(duì)于如上所述的所有試驗(yàn)參數(shù)樣品A和B在實(shí)驗(yàn)誤差(相對(duì)于對(duì)照物+/-20％)內(nèi)均沒(méi)有表現(xiàn)出活性損失。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)活化標(biāo)記物的濃度有明顯變化。
比較而言，經(jīng)重構(gòu)的樣品C與對(duì)照物相比顯示出因子VIII和蛋白S的活性降低以及延長(zhǎng)的蛇毒凝血酶時(shí)間。
為了避免對(duì)重構(gòu)產(chǎn)品質(zhì)量的顯著影響，可以在凍干之前達(dá)到期望的pH范圍(A)或通過(guò)用相應(yīng)的溶液重構(gòu)(B)來(lái)調(diào)節(jié)pH值。
實(shí)施例4 在本實(shí)施例中，通過(guò)凍干之前添加單獨(dú)的降低pH的組分和它們的組合測(cè)試pH調(diào)節(jié)的影響，從而檢驗(yàn)它們對(duì)相應(yīng)的凍干粉中或其重構(gòu)(在水、WFI中)之后對(duì)pH值的影響。使用初始pH值為7.4的混合血漿作為本試驗(yàn)的起始樣品。制備三種不同的試驗(yàn)樣品，包括對(duì)照樣品。
A.血漿混合物(對(duì)照樣品)。
B.通過(guò)引入CO2氣體將血漿混合物的pH值調(diào)至6.9。隨后向血漿混合物中逐滴加入磷酸，通過(guò)攪拌徹底混合至添加的磷酸最終濃度為2mM，pH值(進(jìn)一步)降至6.7。
C.向樣品B中的血漿混合物中另外逐滴加入檸檬酸，通過(guò)攪拌徹底混合至添加的檸檬酸最終濃度為1mM，pH值(進(jìn)一步)降至6.5。
D.向樣品B中的血漿混合物中另外逐滴加入檸檬酸，通過(guò)攪拌徹底混合至添加的檸檬酸最終濃度為2mM，pH值(進(jìn)一步)降至6.4。
將來(lái)自樣品A至D的血漿裝到容器中用于隨后冷凍干燥。分別測(cè)量?jī)龈芍昂陀肳FI重構(gòu)每種樣品的凍干粉之后的pH值，匯總于表中。
結(jié)果

樣品的結(jié)果顯示，通過(guò)在凍干之前添加不同的降低pH值的組分/用不同的降低pH值的組分處理或其組合，可以在經(jīng)重構(gòu)的血漿凍干粉中調(diào)節(jié)期望的pH范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法，其中
-在凍干工藝中，將所述血漿組分置于包含至少兩種不同的降低pH值的物質(zhì)的溶液中，所述兩種不同的降低pH值的物質(zhì)使重構(gòu)后形成的溶液調(diào)節(jié)到預(yù)先確定的pH值范圍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中
-以如下方式得到所述凍干粉將所述血漿組分置于主要含水的溶液中，并將其裝到容器中，所述容器至少部分由不透水但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料構(gòu)成，以及
-完成所述凍干工藝之后，防止吸收超過(guò)所述凍干粉的預(yù)先確定的殘留含水量的水蒸氣。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中將所述不透水但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料設(shè)置在支撐材料上。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述至少兩種不同的物質(zhì)防止pH值被調(diào)節(jié)到對(duì)所述凍干粉中的血漿組分例如蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有不利影響的范圍，所述不利影響為至少部分損失活性和/或天然性、變性、斷裂、聚集、化學(xué)改性例如氧化。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述至少兩種物質(zhì)選自緩沖物質(zhì)例如無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的鹽，特別是通過(guò)引入CO2，磷酸二氫鹽或磷酸一氫鹽、碳酸氫鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽，有機(jī)酸或堿的鹽，三(羥基甲基氨基)甲烷和/或氨基酸。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述血漿組分選自生物聚合物例如蛋白質(zhì)、多糖、核酸、脂質(zhì)和它們的混合物。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述血漿組分是來(lái)自血液、血漿或血清的蛋白質(zhì)。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中穩(wěn)定劑例如糖、多糖、寡糖、多元醇、氨基酸或其組合存在于所述凍干粉中或經(jīng)重構(gòu)的溶液中。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述血漿組分，特別是生物聚合物，包含在生物來(lái)源中，例如體液如血液或血漿、轉(zhuǎn)基因或重組制備的蛋白質(zhì)部分。
10.根據(jù)權(quán)利要求2～9中至少一項(xiàng)的方法，其中所述可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料由氟化塑料、聚酯或聚乙烯構(gòu)成。
11.根據(jù)權(quán)利要求3～10中至少一項(xiàng)的方法，其中所述支撐材料由聚丙烯、聚乙烯、乙烯基醋酸乙酯、聚氨酯、多層聚合物，例如苯乙烯/丁二烯/苯乙烯、苯乙烯/異戊二烯/苯乙烯、苯乙烯/乙烯/丁烯/苯乙烯、苯乙烯/乙烯/丙烯/苯乙烯型的嵌段聚合物或其組合構(gòu)成。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述凍干工藝包括第一步驟和第二步驟，其中與所述第一步驟相比，在第二步驟中輸入凍干工藝的解吸能較少。
13.根據(jù)權(quán)利要求212中至少一項(xiàng)的方法，其中將所述可透過(guò)水蒸氣的容器置于由塑料材料或鋁箔構(gòu)成的不透水蒸氣的容器中。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述凍干粉的重構(gòu)在包含生理上相容的酸水解鹽或生理上相容的酸的水溶液中進(jìn)行。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中至少一項(xiàng)的方法，其中所述血漿組分的凍干在包含使重構(gòu)過(guò)程中形成的溶液調(diào)節(jié)到預(yù)先確定的pH值范圍的物質(zhì)的溶液中進(jìn)行，所述重構(gòu)利用基本上中性的注射用水進(jìn)行。
16.容器在根據(jù)權(quán)利要求2～15中任一項(xiàng)的方法中的用途，其中用于凍干的容器包括壁(10)、連接元件(21、22)，所述壁(10)至少部分由不透水但可透過(guò)水蒸氣的無(wú)菌材料(15)構(gòu)成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于穩(wěn)定凍干粉中血漿組分的方法，所述血漿組分在凍干工藝中存在于包含至少兩種不同的降低pH值的物質(zhì)的溶液中，所述兩種不同的降低pH值的物質(zhì)使重構(gòu)后形成的溶液調(diào)節(jié)到預(yù)先確定的pH值范圍。
文檔編號(hào)A61K9/00GK101610756SQ200880005119
公開(kāi)日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2008年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月15日
發(fā)明者基姆·比約恩斯特魯普, 馬丁·克恩, 安德烈亞·黑格爾, 格哈德·格魯貝爾, 漢斯·薩克斯, 雷蒙德·許茨, 于爾根·勒米施, 托爾-艾納·斯韋 申請(qǐng)人:奧克塔法馬股份有限公司