專利名稱：：針對(duì)cxcr3的人源化抗體的制作方法針對(duì)CXCR3的人源化抗體縱斬青柳^絲本申請(qǐng)要求于2007年2月1日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第60/898，709號(hào)的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)申請(qǐng)的公開內(nèi)容在此全部引作參考。
背景技術(shù)：
：趨化因子及其受體之間的相互作用是控制白細(xì)胞遷移的重要步驟。趨化因子還介導(dǎo)許多不依賴趨化性的效應(yīng)，包括誘導(dǎo)和增強(qiáng)細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子應(yīng)答。人細(xì)胞表面蛋白CD183為G蛋白偶聯(lián)受體，對(duì)包括IP10(y干擾素誘導(dǎo)性10kDa蛋白)、Mig(y干擾素誘導(dǎo)性單核因子)、以及I-TAC(干擾素誘導(dǎo)性T細(xì)胞a-化學(xué)引誘物)的三種趨化因子具有選擇性。這三種趨化因子屬于"CXC"型趨化因子的結(jié)構(gòu)亞家族，在"CXC"型趨化因子中，四個(gè)高度保守的Cys殘基的前兩個(gè)Cys殘基之間隔有單個(gè)氨基酸殘基。從歷史上來(lái)看，CD183是被發(fā)現(xiàn)的第三個(gè)CXC趨化因子受體，因此，通常將CD183稱為"CXCR3"。趨化因子與CXCR3的結(jié)合誘導(dǎo)包括白細(xì)胞遷移(leukocytetraffic)、最為突出的是整聯(lián)蛋白的活化、細(xì)胞骨架的改變和趨化性移行在內(nèi)的細(xì)胞應(yīng)答。CXCR3表達(dá)于效應(yīng)性/記憶性T細(xì)胞上和/或多種類型炎癥組織的T細(xì)胞(例如，T-輔助1細(xì)胞即Thl細(xì)胞和CD8+Tcl細(xì)胞)中。另外，IplO、Mig和I-TAC通常由炎癥病灶處的局部細(xì)胞產(chǎn)生，提示CXCR3及其趨化因子參與了白細(xì)胞到炎癥位點(diǎn)的募集作用。因此，CXCR3是抗體和拮抗劑的開發(fā)靶標(biāo)，所述抗體和拮抗劑可用于治療和診斷各種炎癥性和免疫疾病和病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、局限性腸炎和炎癥性腸病、慢性阻塞性肺病、銀屑病、I型糖尿病和移植排斥。由于CXCR3在B細(xì)胞淋巴瘤的亞群上表達(dá)，因此CXCR3還可作為治療和診斷淋巴瘤和白血病的靶標(biāo)。發(fā)明簡(jiǎn)述本文公開了特異性結(jié)合趨化因子受體CXCR3(參見(jiàn)GenBankgi:4504099)的抗原結(jié)合性多肽分子。所述多肽包含人源化重鏈可變區(qū)和人源化輕鏈可變區(qū)。例如，所述多肽在基本保留母體單克隆抗體的抗原結(jié)合特異性的同時(shí)，可包含人抗體的輕鏈可變區(qū)及重鏈可變區(qū)的框架(FR)區(qū)。除CDR之外，所述人源化重鏈可變區(qū)和/或人源化輕鏈可變區(qū)為至少約90%人源化(優(yōu)選至少約95%人源化、更優(yōu)選至少約98%人源化、甚至更優(yōu)選至少約100%人源化)。所述抗原結(jié)合性多肽分子可來(lái)源于單克隆抗體的供體(例如，小鼠單克隆抗體的供體)，并且可包含所述單克隆抗體的CDR(例如，小鼠單克隆的CDR)。所述多肽可起到CXCR3受體拮抗劑的作用。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合CXCR3的抗原結(jié)合性多肽包含(a)人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(l)包含氨基酸序列(NYMAS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYF{D，Y}Y)的CDR-H3;以及(b)人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(l)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR-L3。所述多肽可包含含有氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)的CDR-H3。在某些實(shí)施方案的多肽中(l)CDR-Hl由氨基酸序列(NYMAS)組成；(2)CDR_H2由氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)組成；(3)CDR-H3由氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYF{D，Y}Y)組成；(4)CDR-L1由氨基酸序列(RASSSVKYMY)組成；(5)CDR-L2由氨基酸序列(YTSNLAP)組成；(6)CDR-L3由氨基酸序列(QQFTTSPYT)組成。舉例而言，所述CDR-H3可由氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)組成。在某些實(shí)施方案中，所述多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)({E，D}{1，N，V}V{L，M}TQSPA{T，F(xiàn)，1}{L，M}S{L，A，V}{S，T}{L，P}GE{R，K}{A，V}T{L，M，1}{S，T，N}CRASSSVKYMYWYQQK(S,P}{G，D}{Q，A}{A，S}P{R，K}L{L，W}I{Y，K}YTSNLAPG{I,V}P{A，S}RFSGSGSG{T，N}{D，S}{F，Y}{T，S}仏，F(xiàn)}TISS{M，UE{A，G，P}ED{F，A}A{V，T}YYC^Y化FTTK,YlPYTFGGGTKLEIKR)例如，所述多肽可包含人源化抗體重鏈可變區(qū)(EVQLLESMNSLRAEDTAVYYCAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)在某些實(shí)施方案中，所述多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)(E{I，N}VLTQSPA{T，F(xiàn)，1}{L，M}S{L，A，V}{S，T}{L，P}GE{R，K}{A，V}T{L，M，1}{S，T，N}CRASSSVKYMYWYQQK{S,P}{G，D}{Q，A}{A，S}P{R，K}L{L，W}IYYTSNLAPG(I,V}P{A，S}RFSGSGSG{T，N}{D，S}{F，Y}{T，S}{L，F(xiàn)}TISS{M，L}E{A，G}ED{F，A}A{V，T1YYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)例如，所沭多肽可包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)(EIVLTQSPATLSLSLGERATLSCRASSSVKYMYWYQQKSGQAPRLLIYYTSNLAPGIPARFSGSGSGTDFTLTISSMEAEDFAVYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)、或(ENVLTQSPAFLSVTPGEKVTITCRASSSVKYMYWYQQKPD本文還公開了人源化抗體重鏈可變區(qū)。所述人源化抗體重鏈區(qū)可包含(l)包含氨基酸序列({N，S，Y}YAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列({T，A，Y}I{S，Y}{S，G，T，Y}{G，S}{G，Y}G{F，S，Y}TYY{P，A}DS{L，Y，V}KG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列({H，Y}{G，Y}{A，Y}PM{T，Y}T{V，Y}ITY{A，Y}PYYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS{N，S，Y}YAMSWVRQAPGKGLEWVS{T，A，Y}I{S，Y}{S，G，T，Y}{G，S}{G，Y}G{F，S，Y}TYY{P，A}DS{L，Y，V}KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK但，I]{G，I]{A，Y}PM{T，Y}T{V，I]ITY(A，Y}PYYFYYWGQGTTVTVSS)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(l)包含氨基酸序列(NYAIS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TYSSGGVYTYYRDSLKG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HGAAMTTVITYAPFYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ELYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGAAMTTVITYAPFYFYYWGQGTTVTVSS)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(YYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TIYSGGSYTFYPDSLEG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HGAPMSTEITYAPYYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ELYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGAPMSTEITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(NYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TIYSGGGYTFYLDSLKG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HSYPMTTVITYAPYYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ELYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHSYPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(NYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ELYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(NYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;和(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)的CDR-H3。例如，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ELYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)本文還公開了人源化抗體輕鏈可變區(qū)。所述人源化抗體輕鏈區(qū)可包含(l)包含氨基酸序列(RASSSVK預(yù)Y)的CDR-Ll;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序SSMEAEDFAVYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-Ll;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EIVLTQSYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)。在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-Ll;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(YQFTTSPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EIVLTQSYYCYQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-Ll;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQYTTSPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EIVLTQSYYCQQYTTSPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-Ll;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQFTTYPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EIVLTQSYYCQQFTTYPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(l)包含氨基酸序列(RAS化，Q}11SV(K,S}SY{M,U{Y,A})的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列"Y,Dl{T,A畫L,R旨，T})的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(Q,Y驗(yàn)，Yl德，YlPYT)的CDR_L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAS{S,Q}SV{K,S}SY{M,U{Y,AiWYQQKPGQAPRLLIY(Y,D}{T,A化N(L,RiA(P,T}GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC{Q,Y化(F,Y}TT(S,YiPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體的輕鏈可變區(qū)包含(l)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR-L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列(ENVLTQSYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)在另一個(gè)實(shí)例中，人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(l)包含氨基酸序列(RAS(S,Q}SV(K,S化Y(M,U(Y,Al)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列"Y,Dl{T,A畫L,R旨，T})的CDR-L2;和(3)包含氨基酸序列(Q,Y驗(yàn),Y1德，YlPYT)的CDR_L3。例如，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)可包含氨基酸序列((E，D)(N，V)V(L，M)TQSPAFLSVTPGEKVTITCRASSSVK預(yù)YWYQQKPDQAPKL(W，L)I(Y，K)YTSNLAPGVPSRFSGSGSG(N，T)D(Y，F(xiàn))TFTISSLEAEDAATYYC(Q,Y)Q(F,Y)TT(S,Y)PYTFGGGTKLEIKR)。前述人源化重鏈和人源化輕鏈可存在于特異性結(jié)合CXCR3的抗原結(jié)合性多肽中。所述抗原結(jié)合性多肽可選自以下的抗體分子Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、以及scFv分子。在某些實(shí)施方案中，多肽為抗體分子。抗體分子可包括含有人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)的嵌合抗體。例如，所述抗體分子可為IgG分子(例如IgGl分子或IgG4分子)，其中所述多肽包含IgG分子的重鏈恒定區(qū)及輕鏈恒定區(qū)。所述多肽可為scFv分子。舉例而言，scFv可選自下式NH2-L-VH-X-VK-C00H和NH2-L_VK-X-VH-C00H;上式中，L為前導(dǎo)序列；VH為人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；VK為人源化抗體輕鏈可變區(qū)。所述抗原結(jié)合性多肽可進(jìn)一步與治療藥物或診斷藥物綴合或融合。例如，治療藥物可選自細(xì)胞毒劑、放射性標(biāo)記、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、酶、寡核苷酸、光活化治療藥物或其組合。診斷藥物的實(shí)例可包括放射性標(biāo)記、光活化診斷藥物、超聲促進(jìn)劑或非放射性標(biāo)記。所述抗原結(jié)合性多肽可為CXCR3的拮抗劑。通常所述多肽并非CXCR3的激動(dòng)劑。所述抗原結(jié)合性多肽與CXCR3受體特異地并以高親和力結(jié)合。通常所述多肽與CXCR3以至少約106M—、優(yōu)選至少約107M—、更優(yōu)選至少約108M—、甚至更優(yōu)選至少約109M—0的親和常數(shù)結(jié)合。本文還公開了包含前述抗原結(jié)合性多肽和載體(例如稀釋劑或賦形劑)的藥物組合物。所述藥物可進(jìn)一步包含本文所公開的另外的治療藥物或診斷藥物。本文還公開了治療或診斷疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予所公開的藥物組合物。例如，可給予所述藥物組合物以治療或診斷炎癥性疾病或病癥、免疫疾病或病癥和/或惡性疾病或病癥。疾病或病癥的實(shí)例可包括自身免疫病(例如狼瘡)、炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(C0PD)、關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、局限性腸炎、銀屑病、1型糖尿病和白血病或淋巴瘤(例如慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL))。本文還公開了編碼前述多肽的多核苷酸。所述多核苷酸可有效連有用于使所編碼多肽在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。因此，制備由重組多核苷酸所編碼的多肽的方法可包括a)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化有重組多核苷酸的細(xì)胞，以表達(dá)所編碼多肽；和b)回收如此表達(dá)的多肽。附圖簡(jiǎn)述圖1闡述了鼠抗CXCR3mAb對(duì)125I-IP-10與Thl細(xì)胞結(jié)合的抑制作用。Ab#l_5D4A;Ab#2-8A5A;Ab#3_19G2;Ab#4_V36E5A;Ab#5_V44D7A;Ab#6_37B5A;Ab#7_21A4A;Ab#8_V15F4A;Ab#9_V3G6A;Ab#10-23E12A;Ab#ll-35C4;Ab#12-39E10。圖2闡述了鼠抗CXCR3mAb對(duì)IP-10誘導(dǎo)的Thl細(xì)胞遷移的抑制作用。Ab#l_5D4A;Ab#2_8A5A;Ab#3_19G2;Ab#4_V36E5A;Ab#5_V44D7A;Ab#6_37B5A;Ab#7_21A4A;Ab#8-V15F4A;Ab#9_V3G6A;Ab#10_23E12A。圖3闡述了鼠抗CXCR3mAb與Thl細(xì)胞(上圖)、CXCR3+/NS0細(xì)胞(中圖)、和CXCR-/NS0細(xì)胞(下圖)結(jié)合的FACs分析結(jié)果。圖4闡述了鼠抗CXCR3mAb和人源化抗CXCR3mAb對(duì)趨化因子與CXCR3結(jié)合的抑制作用。圖5闡述了鼠抗CXCR3mAb和人源化抗CXCR3mAb對(duì)趨化因子介導(dǎo)的趨化性的抑制作用。圖6闡述了5個(gè)抗CXCR3克隆的VH結(jié)構(gòu)域的比對(duì)結(jié)果。圖7闡述了5個(gè)抗CXCR3克隆的VK結(jié)構(gòu)域的比對(duì)結(jié)果。圖8闡述了抗CXCR3克隆V44D7的VH結(jié)構(gòu)域與表達(dá)最接近的人IgGVH和人種系VH的比對(duì)結(jié)果。圖9闡述了使抗CXCR3克隆V44D7的VH結(jié)構(gòu)域完全人源化所需的氨基酸改變的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。所述所需的氨基酸改變于主要序列之下出示，其通過(guò)與人VH3-23進(jìn)行比對(duì)得出。種系基因和所表達(dá)抗體描述于GenBank登錄號(hào)AAD53829中。圖10闡述了使抗CXCR3克隆V44D7的VH結(jié)構(gòu)域完全人源化所需的氨基酸改變的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。所述所需的氨基酸改變于主要序列之下出示，其通過(guò)與人VH3-23進(jìn)行比對(duì)得出。種系基因和所表達(dá)抗體描述于GenBank登錄號(hào)AAD53829中。圖11闡述了抗CXCR3克隆V3G6的VK結(jié)構(gòu)域與表達(dá)最接近的人IgGVK和人種系VK的比對(duì)結(jié)果。圖12闡述了使抗CXCR3克隆V3G6的VK結(jié)構(gòu)域完全人源化所需的氨基酸改變的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。圖13闡述了市售CXCR3mAb對(duì)小鼠抗CXCR3mAb與CXCR3+NS0細(xì)胞結(jié)合的抑制作用。在各個(gè)濃度的未標(biāo)記市售CXCRmAb的存在下，將約0.5nM的Eu-CXCR3mAb與轉(zhuǎn)染有CXCR3的NSO細(xì)胞一同溫育。觀察到Eu-CXCR3mAb與CXCR3+NS0細(xì)胞結(jié)合的劑量依賴性抑制。圖14闡述了CXCR3在Thl細(xì)胞上的表達(dá)。Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞從臍帶血中獲得，通過(guò)FACS來(lái)確定CXCR3和CCR4的表達(dá)情況。CXCR3只存在于Thl細(xì)胞中。圖15闡述了125I_CXCL10結(jié)合試驗(yàn)。在96孔板中，不存在或存在各個(gè)濃度CXCRmAb下，Thl細(xì)胞與125I-CXCL10—同溫育。通過(guò)油柱將結(jié)合有125I_CXCL10的細(xì)胞與非放射性細(xì)胞分離，并用Y計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。用Prizm軟件計(jì)算IC5。值。主要的侯選抗體(leadcandidate)用綠色突出顯示。圖16闡述了125I_CXCL11結(jié)合試驗(yàn)。在96孔板中，不存在或存在各個(gè)濃度CXCRmAb下，Thl細(xì)胞與125I-CXCL11—同溫育。通過(guò)油柱將結(jié)合有125I_CXCL11的細(xì)胞與非放射性細(xì)胞分離，并用Y計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。用Prizm軟件計(jì)算ICs。值。主要的候選抗體用綠色突出顯示。圖17闡述了Eu-CXCR3mAb與Thl細(xì)胞的結(jié)合情況。不存在或存在10倍過(guò)量的未標(biāo)記CXCR3mAb下，Thl細(xì)胞與濃度不斷增大的Eu-CXCR3mAb—同溫育。溫育后(室溫下一小時(shí))，通過(guò)洗滌三次，將結(jié)合有Eu-CXCR3mAb的細(xì)胞與無(wú)銪的細(xì)胞分離，并用Vctor2熒光計(jì)讀板。圖18闡述了CXCR3mAb雜交瘤上清液對(duì)125I_CXCL11與Thl結(jié)合的抑制作用。在96孔板中，不存在或存在各種CXCR3mAb雜交瘤上清液下，將Thl細(xì)胞與125I_CXCL11室溫溫育1小時(shí)。通過(guò)油柱將結(jié)合有1251-配體的細(xì)胞與非放射性細(xì)胞分離，并用Y計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。選出7種抑制CXCL11與Thl細(xì)胞結(jié)合的雜交瘤上清液，作進(jìn)一步的開發(fā)。圖19闡述了CXCR3mAb雜交瘤上清液對(duì)125I_CXCL10與Thl結(jié)合的抑制作用。在96孔板中，不存在或存在各種CXCR3mAb雜交瘤上清液下，將Thl細(xì)胞與125I_CXCL10室溫溫育1小時(shí)。通過(guò)油柱將結(jié)合有1251-配體的細(xì)胞與非放射性細(xì)胞分離，并用Y計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。選出7種抑制CXCL10與Thl細(xì)胞結(jié)合的雜交瘤上清液，作進(jìn)一步的開發(fā)。圖20闡述了小鼠CXCR3mAb與大鼠Thl細(xì)胞之間不存在交叉反應(yīng)。進(jìn)行FACS分析以確定小鼠CXCR3mAb對(duì)極化的大鼠Thl細(xì)胞的反應(yīng)性。只有兔抗鼠CXCR3Ab與大鼠Thl細(xì)胞結(jié)合。鼠抗人CXCR3Ab并不與大鼠Thl細(xì)胞結(jié)合。作為對(duì)照，小鼠抗CXCR3mAb與人Thl細(xì)胞的結(jié)合情況也顯示出來(lái)(下圖)。圖21闡述了人源化CXCR3Ab對(duì)Eu_CXCR3mAb的抑制作用。在96孔板中，不存在或存在各個(gè)濃度人源化CXCRmAb下，Thl細(xì)胞與Eu_CXCR3mAb—同溫育。溫育后(室溫下一小時(shí))，通過(guò)洗滌三次，將結(jié)合有Eu-CXCR3mAb的細(xì)胞與無(wú)銪的細(xì)胞分離，并用Vctor2熒光計(jì)讀板。用Prizm軟件計(jì)算出ICs。值。Abl具有IgGl骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#1的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab2具有IgGl骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#7的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。人源化Ab(IgG4)具有IgG4骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和原始小鼠抗CXCR3V44D7VK的輕鏈序列。圖22闡述了人源化CXCR3Ab對(duì)Eu-CXC10的抑制作用。在96孔板中，不存在或存在各個(gè)濃度人源化CXCRmAb下，Thl細(xì)胞與Eu-CXCLIO—同溫育。溫育后(室溫下一小時(shí))，通過(guò)洗滌三次，將結(jié)合有Eu-CXCLIO的細(xì)胞與無(wú)銪的細(xì)胞分離，并用Vctor2熒光計(jì)讀板。用Prizm軟件計(jì)算出ICs。值。圖23闡述了人源化CXCR3Ab對(duì)CXCL10誘導(dǎo)的Thl細(xì)胞趨化性的抑制作用。趨化性測(cè)定在ChemoTx96孔板(NeuroProbe，Inc)中進(jìn)行。將約29yL的CXCL10或緩沖液對(duì)照加入底孔(bottomwell)。不存在或存在各個(gè)濃度人源化抗體下，將25iiL的Thl細(xì)胞懸14液直接加入過(guò)濾器的孔上。在37。C下溫育2小時(shí)后，通過(guò)細(xì)胞滴度glo法(Promega)測(cè)定遷移至底孔的細(xì)胞。圖24闡述了Thl細(xì)胞內(nèi)Ca++流(flux)的分析結(jié)果。使Thl細(xì)胞負(fù)載Fluo-4，AM(分子探針)，用所述各種小鼠CXCR3mAb抗體進(jìn)行剌激。細(xì)胞內(nèi)Ca++的升高情況通過(guò)FLIPR來(lái)確定。優(yōu)選實(shí)施方案詳述本文所述抗體是指全長(zhǎng)的(即天然存在的或由正常免疫球蛋白基因片段經(jīng)重組過(guò)程所形成的)免疫球蛋白分子(例如IgG抗體)或具有免疫活性的(即特異性結(jié)合的)免疫球蛋白分子部分，比如抗體片段。抗體片段是抗體的一部分，例如F(ab')2、F(ab)2、Fab'、Fab、FV、scFv等等。不考慮結(jié)構(gòu)，抗體片段與完整抗體所識(shí)別的相同抗原相結(jié)合。術(shù)語(yǔ)"抗體片段"還包括任何合成蛋白或基因工程蛋白，所述蛋白作用類似于抗體，通過(guò)與特定抗原結(jié)合形成復(fù)合物。例如，抗體片段包括由可變區(qū)組成的分離片段(例如由重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)組成的"Fv"片段)、其中輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)由連接肽相連的重組單鏈多肽分子("scFv蛋白")、和由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單位。人源化抗體是一種重組蛋白，其中來(lái)自一個(gè)物種的抗體(例如嚙齒類動(dòng)物抗體)的CDR，從嚙齒類動(dòng)物抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)中轉(zhuǎn)換到人重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，或轉(zhuǎn)換到已誘變?yōu)榘辽僖徊糠秩酥劓溈勺兘Y(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列(正如由"人源化百分率"所示)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中。所述抗體分子的恒定結(jié)構(gòu)域可從人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域得到。本文所用的"人源化百分率"通過(guò)確定在人源化結(jié)構(gòu)域和種系結(jié)構(gòu)域之間構(gòu)架氨基酸差異(即非-CDR差異)的數(shù)目，從氨基酸總數(shù)減去該數(shù)目，然后除以氨基酸總數(shù)，并乘以100來(lái)計(jì)算。本文所用的"CDR"意指存在于抗體重鏈的可變結(jié)構(gòu)域(VH)或抗體輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(VL或VK)中的"互補(bǔ)決定區(qū)"。每個(gè)可變結(jié)構(gòu)域包含三個(gè)CDR，那些存在于重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的CDR稱為CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，而那些存在于輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的CDR稱為CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。本文使用的是Kabat編號(hào)系統(tǒng)。就以上的CDR而言，CDR-H1起始于大概第31個(gè)氨基酸(即第一個(gè)半胱氨酸殘基后大概9個(gè)殘基)處，包含約5-7個(gè)氨基酸，終止于下一個(gè)酪氨酸殘基處。CDR-H2起始于CDR-H1末端后的第15個(gè)殘基處，包含約16-19個(gè)氨基酸，終止于下一個(gè)精氨酸殘基或賴氨酸殘基處。CDR-H3起始于CDR-H2末端后的大概第33個(gè)氨基酸殘基處，包含3-25個(gè)氨基酸，終止于序列W-G-X-G，其中X為任意氨基酸。CDR-L1起始于大概第24個(gè)殘基(即在半胱氨酸殘基后)處，包含約10-17個(gè)氨基酸，并且終止于下一個(gè)酪氨酸殘基處。CDR-L2起始于CDR-L1末端后的大概第16個(gè)殘基處，包含約7個(gè)殘基。CDR-L3起始于CDR-L2終止后的大概第33個(gè)殘基處，包含約7_11個(gè)殘基，終止于序列F-G-X-G處，其中X為任意氨基酸。本文所公開的抗原結(jié)合性多肽可與治療藥物綴合或融合，所述治療藥物可包括放射性標(biāo)記、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、光活化治療藥物、細(xì)胞毒劑(其可為藥物或毒素)及其組合。藥物可包括那些治療性藥物，這樣的藥物選自抗有絲分裂藥、抗激酶、烷化劑、抗代謝藥、抗菌素、生物堿、抗血管生成藥、細(xì)胞凋亡劑及其組合。更具體地，這些藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、磺酸烷基酯、亞硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、鉬配位絡(luò)合物、長(zhǎng)春花生物堿、經(jīng)取代的尿素、甲肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、拮抗劑、內(nèi)皮抑素、紫杉醇、喜樹堿、蒽環(huán)霉素、紫杉烷類及其類似物、和它們的組合。本發(fā)明所包含的毒素可選自蓖麻毒、相思豆毒蛋白、a毒素、皂草素、核糖核酸酶(RNase)例如onconase、DNA酶1、葡萄球菌腸毒素A、美洲商陸抗病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。免疫調(diào)節(jié)劑可選自細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、淋巴細(xì)胞毒素、血細(xì)胞生成因子、集落剌激因子(CSF)、干擾素(IFN)、促紅細(xì)胞生成素、促血小板生成素及其組合。特別有用的是淋巴細(xì)胞毒素(例如腫瘤壞死因子(TNF))、血細(xì)胞生成因子(例如白細(xì)胞介素(IU)、集落剌激因子(例如粒細(xì)胞集落剌激因子(G-CSF)或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落剌激因子(GM-CSF))、干擾素(例如干擾素_a、干擾素-13或干擾素-Y)、以及干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(例如稱為"SI因子")。更具體地，免疫調(diào)節(jié)劑可包含IL-I、IL-2、IL-3、IL-6、IL-IO、IL_12、IL_18、IL-21、干擾素-P、TNF-a或其組合。本文所公開的抗原結(jié)合性多肽可與診斷藥物綴合或融合。診斷藥物可包括能量在60-4，000千電子伏特(keV)之間的光活化診斷藥物或放射性標(biāo)記、或非放射性標(biāo)記。優(yōu)選所述放射性標(biāo)記為Y同位素、P同位素、和正電子發(fā)射同位素，并且所述放射性標(biāo)記選自,251，I23l24l、86Y、版Re88Re、62Cu、64Cu、min、67Ga、68Ga、"mTc、94mTc8F、"C3N、150、76Br及其組合。診斷藥物可包含造影劑，例如錳、鐵或釓。實(shí)施例利用雜交瘤技術(shù)分離小鼠IgGukCXCR-3結(jié)合抗體用表達(dá)CXCR-3的NSO細(xì)胞對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行免疫。在典型步驟中，向后腳墊內(nèi)(25u1/腳)注射含5X106細(xì)胞的50ulRIBI佐劑(Sigma)。每間隔2周，給予另外的兩劑RIBI佐劑中的注射液，然后給予PBS中的最后一次增強(qiáng)劑量。三天后處死小鼠，收獲其胭淋巴結(jié)并分離其淋巴細(xì)胞用于融合。淋巴細(xì)胞與P3X63Ag8.653漿細(xì)胞瘤細(xì)胞按5:l的比例，用PEG/匿SO(Sigma)作為融合劑來(lái)進(jìn)行融合。融合后將細(xì)胞重懸于選擇性HAT培養(yǎng)基中，按106細(xì)胞每孔接種于96孔板中。根據(jù)小鼠IgG的存在情況，用ELISA篩選經(jīng)HAT選擇而存活的雜交瘤的上清液。鑒定產(chǎn)IgG的雜交瘤并將其上清液進(jìn)一步通過(guò)FACS分析篩選出與表達(dá)CXCR3的NSO細(xì)胞(CXCR3+NS0)結(jié)合的抗體。然后，將鑒定為與CXCR3+NS0細(xì)胞結(jié)合呈陽(yáng)性的雜交瘤進(jìn)行篩選，選出與CXCR3+NS0細(xì)胞和PC-NSO(載體對(duì)照)細(xì)胞結(jié)合有差異的雜交瘤，以鑒定出CXCR3特異性克隆。通過(guò)有限稀釋將CXCR3特異性的雜交瘤進(jìn)行兩次亞克隆。在無(wú)血清的培養(yǎng)基中使雜交瘤亞克隆增殖，在蛋白-A柱上純化抗體，并進(jìn)一步表征以挑選出主要侯選抗體。人源化策略使抗CXCR3抗體人源化的一個(gè)目標(biāo)是獲得保留了90-100%的原有結(jié)合親和力和結(jié)合特異性的60_80%人源化VH結(jié)構(gòu)域和人源化VK結(jié)構(gòu)域。在保持結(jié)合親和力和結(jié)合特異性的同時(shí)，用VH和VK中的各個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)位置的定點(diǎn)誘變進(jìn)一步使抗體人源化。通過(guò)CDR移植、基于結(jié)構(gòu)的分析和可變區(qū)表面重建(resurface)來(lái)進(jìn)行人源化(參見(jiàn)Jones等，NATURE(1986)5月29日-6月4;321(6069):522-5;Roguska等，PROTEINENGINEERING,1996,9(10):895-904;以及Xoma，對(duì)小鼠抗體構(gòu)架的人源化以及3D結(jié)構(gòu)的保留(HumanizingMouseAntibodyFrameworksWhilePreserving3_DStructure.)PROTEINENGINEERING,1994，第7巻，第805頁(yè))。利用抗體的一級(jí)結(jié)構(gòu)序列和3-D結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)來(lái)確定維持結(jié)合親和力和結(jié)合特異性所需的關(guān)鍵構(gòu)架殘基。對(duì)九種(9)不同的Fab分子和IgG分子(人和小鼠，有或無(wú)配體)的3-D結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。在將鼠抗CXCR3V44VH和VK與最接近的人種系基因進(jìn)行比對(duì)后，評(píng)估每個(gè)位置上氨基酸對(duì)結(jié)合和免疫原性的潛在影響。用該信息對(duì)每個(gè)位置的突變賦予低、中或高風(fēng)險(xiǎn)值。一般而言，只有低風(fēng)險(xiǎn)位置和中風(fēng)險(xiǎn)位置才能突變，而要避免高風(fēng)險(xiǎn)位置。在經(jīng)過(guò)以上步驟后，所述重鏈相對(duì)于小鼠重鏈(除CDR之外)有98%被人源化。然后通過(guò)在CDR3的每個(gè)位置上摻入成對(duì)的酪氨酸來(lái)進(jìn)行親和力成熟策略，包括平均提高兩倍親和力的Y115D的取代。2種侯選抗體中所用的重鏈包含兩個(gè)在97位和98位的另外突變，使其100%的人源化(忽略CDR不計(jì))。在對(duì)輕鏈進(jìn)行相同策略后，將該VK與A14種系基因進(jìn)行比對(duì)，并對(duì)低和中風(fēng)險(xiǎn)位置進(jìn)行突變。在確定該種系基因在正常人中極少表達(dá)后，用L6種系作為模板，重復(fù)該過(guò)程。用NCBI中提供的〃BlastforIgsequences"網(wǎng)頁(yè)鑒定與本研究中所用小鼠VH區(qū)和VK區(qū)最匹配的VH區(qū)和VK區(qū)。用MRC的V-base網(wǎng)頁(yè)確定人種系序列。根據(jù)與小鼠VH序列和VK序列的最佳匹配序列來(lái)選擇人種系VH基因和VK基因。對(duì)于小鼠VH序歹l」，確定人種系序列VH3-23(如V-base中所命名)為最佳匹配序列VH3_23DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK)對(duì)于小鼠VK序列，確定人種系序列A14和L6(如V-base中所命名)為最佳匹配序列L6種系(EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRS麗P);和A14種系(DVVMTQSPAFLSVTPKHP)由雜交瘤細(xì)胞系克隆鼠抗CXCR3VH結(jié)構(gòu)域和VK結(jié)構(gòu)域并測(cè)序?qū)㈦s交瘤細(xì)胞沉淀，用PBS將其洗滌3次，并用Trizol試劑(Invitrogen，產(chǎn)品目錄號(hào)15596-026)按照生廠商的方案來(lái)提取RNA。用5'RACE試劑盒(快速擴(kuò)增cDNA末端(R即idAmplificationofcDNAEnds)，Invitrogen,產(chǎn)品目錄號(hào)18374-058)按照生廠商的方案來(lái)將總RNA轉(zhuǎn)換為cDNA。簡(jiǎn)而言之，將RNA連接到隨機(jī)六聚體引物RandomN6上，用superscriptIIRNAaseH陰性反轉(zhuǎn)錄酶(negativereversetranscriptase)制備第一條cDNA鏈。用該試劑盒中提供的GlassMax離心柱來(lái)純化cDNA，然后將cDNA與TdT(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶)在dCTP的存在下進(jìn)行反應(yīng)，使cDNA的5'端附上C堿基對(duì)。對(duì)于VH而言，具有dC尾的cDNA用特異性針對(duì)dC尾的錨定引物和能與小鼠重鏈恒定區(qū)l(CHl)的高度保守的DNA序列雜交的基因特異性引物來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；而對(duì)于VK而言，用特異性針對(duì)dC尾的錨定引物和能與小鼠k恒定區(qū)(CK)的高度保守的DNA序列雜交的基因特異性引物來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。所得PCR產(chǎn)物通過(guò)凝膠電泳來(lái)分析相對(duì)于完整VH結(jié)構(gòu)域或VK結(jié)構(gòu)域的正確大小，然后將其純化并按照生廠商的方案將產(chǎn)物連接至TopoTA載體(Invitrogen產(chǎn)品目錄號(hào)45-0071)中。在將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到細(xì)菌后，從含有正確大小插入片段的克隆中制備DNA，并用BigDye末端測(cè)序反應(yīng)混合儀(AppliedBiosystems，PartNo.4336699)和3700ABI/PrismDNA分析儀按照生廠商的方案來(lái)確定該DNA的序列。小鼠杭CXCR3杭休的人源化首先，根據(jù)上述得到的結(jié)合數(shù)據(jù)和序列數(shù)據(jù)鑒定單個(gè)主要的(lead)小鼠抗CXCR3抗體，V44D7。利用目前有效的公共數(shù)據(jù)庫(kù)(即NCBI的BlastforIgG以及MRC的V-base)，將該抗體的VH結(jié)構(gòu)域和VK結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列與所有已知的人種系VH結(jié)構(gòu)域和VK結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)。通過(guò)觀察構(gòu)架區(qū)內(nèi)氨基酸的比對(duì)結(jié)果，確定了高度同源的人種系VH結(jié)構(gòu)域即VH3-23以及兩個(gè)不同的人種系VK結(jié)構(gòu)域即A14和L6。在構(gòu)架中小鼠序列與人種系序列不同的那些位置，用反復(fù)的方法轉(zhuǎn)換或突變小鼠構(gòu)架，使之與相對(duì)應(yīng)的人種系構(gòu)架相匹配。另外，VH和VK中CDR3的某些殘基通過(guò)用酪氨酸置換來(lái)進(jìn)行突變(即親和力成熟)，潛在地有助于彌補(bǔ)由于改變構(gòu)架殘基而造成的親和力的任何缺損。用一組重疊的合成DNA寡核苷酸，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法得到親和力成熟并人源化的小鼠VH結(jié)構(gòu)域和VK結(jié)構(gòu)域。作為合成基因設(shè)計(jì)方法的一部分，使用密碼子最優(yōu)化策略，即對(duì)于每個(gè)氨基酸而言，將優(yōu)選被哺乳動(dòng)物細(xì)胞用于基因表達(dá)的三聯(lián)體密碼引入每個(gè)位置。將合成VH結(jié)構(gòu)域和VK結(jié)構(gòu)域克隆至特化的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中，該表達(dá)載體使相應(yīng)的結(jié)構(gòu)域能夠在完整的人IgGl、G4或k抗體骨架中表達(dá)。通過(guò)用lipofectamine(Invitrogen)按照生廠商的方案將IgGl構(gòu)建體或G4構(gòu)建體與k構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染至293F細(xì)胞中，進(jìn)行人源化抗體的小批量制備。將瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的上清液通過(guò)蛋白A或G樹脂，純化IgG至均一，用于在以細(xì)胞為基礎(chǔ)的測(cè)定中進(jìn)行檢測(cè)。杭原表位競(jìng)爭(zhēng)研窮.在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)中，使用銪(Eu)標(biāo)記的小鼠CXCR3mAb檢測(cè)各種市售的CXR3mAb。各種商業(yè)來(lái)源的CXCR3mAb抑制Eu_CXCR3mAb與CXCR3的結(jié)合。該數(shù)據(jù)表明小鼠CXCR3mAb和市售抗體結(jié)合到CXCR3的重疊表位上(圖13)?？贵w親和力通過(guò)各種競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定，用1251_標(biāo)記的趨化因子和Eu-標(biāo)記的趨化因子以及Eu-標(biāo)記的CXCR3mAb來(lái)測(cè)定小鼠CXCR3mAb和人源化CXCR3mAb的結(jié)合親和力和結(jié)合活性。Thl趨化性測(cè)定包括125I-CXCL10結(jié)合測(cè)定,5l-CXCL11結(jié)合測(cè)定、Eu-CXCLIO結(jié)合測(cè)定、Thl趨化性測(cè)定和Eu-小鼠CXCR3mAb結(jié)合測(cè)定。Th1細(xì)胞從臍帶血中獲得的初始Thl細(xì)胞用于所有的結(jié)合測(cè)定。如參考文獻(xiàn)中所描述，只在Thl細(xì)胞而非Th2細(xì)胞上觀察到CXCR3的表達(dá)，如通過(guò)FACS分析所確定(圖14)。Th2細(xì)胞特異性表達(dá)CCR4。^卜CXCL10和1^-CXCL11結(jié)合測(cè)定小鼠CXCR3mAb抗體的結(jié)合親和力根據(jù)其抑制放射性標(biāo)記的CXCL10和CXCL11對(duì)Thl細(xì)胞結(jié)合的能力來(lái)確定(圖15、16、18和19以及表1)。根據(jù)這些結(jié)合情況研究和趨化性測(cè)定，選出三種小鼠CXCRmAb作進(jìn)一步研究。表1抗CXCR3mAb的表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>Ab#l-5D4A;Ab#2-8A5A;Ab#3_19G2;Ab#4_V36E5A;Ab#5_V44D7A;Ab#6_37B5A;Ab#7_21A4A;Ab#8_V15F4A;Ab#9_V3G6A;Ab#10_23E12A;Ab#ll-35C4;Ab#12-39E10.Eu-CXCRmAb飽和結(jié)合測(cè)定小鼠CXCR3抗體與CXCR3的結(jié)合親和力通過(guò)用銪標(biāo)記的小鼠CXCR3抗體的直接飽和結(jié)合測(cè)定來(lái)確定。用一種小鼠CXCR3mAb的該測(cè)定的實(shí)例如圖17所示。該研究的數(shù)據(jù)表明Eu-CXCR3mAb與CXCR3的結(jié)合具有特異性，而且在低于納摩爾級(jí)Kd(O.47nM)的結(jié)合親和力下飽和。杭休特異性小鼠抗體雜交瘤(20000)通過(guò)差示篩選測(cè)定，用含Eu-第二抗體(DELFIA)的CXCR3+和CXCR3-NS0膜進(jìn)行篩選。結(jié)合在CXCR3+膜上的抗體(約2000)進(jìn)一步用CXCR3+/CXCR3—NSO和Thl細(xì)胞通過(guò)FACS進(jìn)行檢測(cè)。CXCR3mAb與CXCR3表達(dá)細(xì)胞特異性結(jié)合的實(shí)例在圖3中出示。通過(guò)FACS檢測(cè)母本小鼠CXCR3mAb對(duì)極化的大鼠Thl細(xì)胞的結(jié)合情況。只有兔抗鼠的CXCR3Ab(陽(yáng)性對(duì)照)與大鼠Thl細(xì)胞結(jié)合。如圖20所示，小鼠的母本CXCR3mAb并不結(jié)合大鼠Thl細(xì)胞。結(jié)合測(cè)定CXCR3mAb特異性抑制了1251_標(biāo)記的IP-10和125I-I_Tac與初始Thl細(xì)胞的結(jié)合。由于標(biāo)記的Mig無(wú)效，因此沒(méi)有在結(jié)合試驗(yàn)中對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。趨化性測(cè)定CXCR3mAb抑制了CXCR3趨化因子介導(dǎo)的Thl細(xì)胞遷移。通過(guò)結(jié)合測(cè)定和趨化性測(cè)定來(lái)檢測(cè)人源化抗體。Eu-CXCRmAb競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定的結(jié)果顯示于圖21中。Eu-CXCLIO結(jié)合測(cè)定的結(jié)果顯示于圖22中。Thl趨化性測(cè)定的結(jié)果顯示于圖23中。小鼠杭休的CXCR3導(dǎo)休激動(dòng)作用檢測(cè)檢測(cè)小鼠CXCR3mAb的誘導(dǎo)Thl細(xì)胞內(nèi)鈣轉(zhuǎn)運(yùn)的激動(dòng)活性。如圖24中所示，無(wú)任何抗體顯示出任何誘導(dǎo)&++流的激動(dòng)活性。表2.不同人源化抗體在結(jié)合測(cè)定和趨化性測(cè)定中所確定的ICs。值<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>N.D.=未確定在表2中，Ab1具有IgGl骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#1的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab2具有IgGI骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#7的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab3具有IgGI骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#2的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab4具有IgGI骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#3的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab5具有IgGI骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5的重鏈氨基酸序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#4的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。Ab6具有IgGI骨架中的人源化抗CXCR3V44D7VH主要#5氨基酸的重鏈序列和人源化抗CXCR3V44D7VK主要#5的輕鏈序列(參見(jiàn)非正式序列表)。權(quán)利要求一種特異性結(jié)合CXCR3的抗原結(jié)合性多肽，所述多肽包含(a)人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(NYMAS)的CDR-H1；(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2；和(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYF{D，Y}Y)的CDR-H3；以及(b)人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1；(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2；和(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR-L3。2.權(quán)利要求1的多肽，其中CDR-H3包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)。3.權(quán)利要求1或2的多肽，其中CDR-H3包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFDY)。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的多肽，其中(1)CDR-Hl由氨基酸序列(NYMAS)組成；(2)CDR-H2由氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)組成；(3)CDR-H3由氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYF(D，Y}Y)組成；(4)CDR-L1由氨基酸序列(RASSSVKYMY)組成；(5)CDR-L2由氨基酸序列(YTSNLAP)組成；而(6)CDR-L3由氨基酸序列(QQFTTSPYT)組成。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的多肽，其中所述CDR-H3由氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)組成。6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽，其中所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EV{M，Q}L{V，L}ESGGGLV{K，Q}PGGSL{K，R}LSCAASGFTFSNYAMSWVRQ{T，A}P{E，G}K{R，G}LEWV{A，S}TISSGGGYTYYPDSLKGRFTISRDN{A，S}KNTL{F，Y}LQM{S，N}SLR{S，A}EDTAVYYC{V，A}{R，K}HGAPMTTVITYAPYYF{D，YjYWGQGTT{L，V}TVSS)。7.權(quán)利要求6的多肽，其中所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLDTAVYYCAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的多肽，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列({E，D}{I，N，V}V{L，M}TQSPA{T，F(xiàn)，1}{L，M}S{L，A，V}{S，T}{L，P}GE{R，K}{A，V}T{L，M，1}{S，T，N}CRASSSVKYMYWYQQK{S，P}{G，D}{Q，A}{A，S}P{R，K}L{L，W}I{Y，K}YTSNLAPG(I，V}P{A，S}RFSGSGSG{T，N}{D，S}{F，Y}{T，S}仏，F(xiàn)}TISS{M，L}E{A，G，P}ED{F，A}A{V，T}YYCdY}QFTT{S，Y}PYTFGGGTKLEIKR)。9.權(quán)利要求8的多肽，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)。10.權(quán)利要求8的多肽，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(ENVLTQSPAFQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)。11.權(quán)利要求I-IO中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽選自以下的抗體分子Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、以及scFv分子。12.權(quán)利要求ll的多肽，所述多肽分子為抗體分子。13.權(quán)利要求12的多肽，其中所述抗體為包含人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)的嵌合抗體。14.權(quán)利要求12或13的多肽，其中所述抗體為IgG分子(例如IgGl分子或IgG4分子)。15.權(quán)利要求1的多肽，其中所述多肽為scFv分子。16.權(quán)禾l」要求15的多肽，其中所述scFv選自下式NH2-L-VH-X-VK-C00H和NH2-L-VK_X-VH-C00H;上式中，L為前導(dǎo)序列；VH為人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；VK為人源化抗體輕鏈可變區(qū)。17.權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的多肽，所述多肽與治療藥物或診斷藥物綴合。18.權(quán)利要求17的多肽，其中所述治療藥物選自細(xì)胞毒劑、放射性標(biāo)記、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、酶、寡核苷酸、光活化治療藥物或其組合。19.權(quán)利要求18的多肽，其中所述診斷藥物選自放射性標(biāo)記、光活化診斷藥物、超聲促進(jìn)劑或非放射性標(biāo)記。20.權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽為CXCR3的拮抗劑。21.權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽并非CXCR3的激動(dòng)劑。22.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽與CXCR3以至少約106M—、優(yōu)選至少約107M—^更優(yōu)選至少約108M—^甚至更優(yōu)選至少約109M—0的親和常數(shù)結(jié)合。23.—種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的多肽和載體。24.權(quán)利要求23的藥物組合物，所述藥物組合物進(jìn)一步包含另外的治療藥物或診斷藥物。25.—種治療或診斷炎癥性疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求23或24中任一項(xiàng)的組合物。26.—種治療或診斷免疫疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求23或24中任一項(xiàng)的組合物。27.—種治療或診斷惡性疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求23或24中任一項(xiàng)的組合物。28.權(quán)利要求24-27中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥選自自身免疫病(例如狼瘡)、炎癥性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(C0PD)、關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、局限性腸炎、銀屑病、白血病或淋巴瘤(例如慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL))。29.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的多肽。30.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼包含人源化抗體重鏈可變區(qū)的多肽，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(NYMAS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYF{D，Y}Y)的CDR-H3。31.權(quán)利要求30的多肽，其中所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EV{M，Q}L{V，L}ESGGGLV{K，Q}PGGSL{K，R}LSCAASGFTFSNYAMSWVRQ{T,A}P{E，G}K{R，G}LEWV{A，S}TISSGGGYTYYPDSLKGRFTISRDN{A,S}KNTL{F，Y}LQM{S，N}SLR{S，A}EDTAVYYC{V，A}{R，K}HGAPMTTVITYAPYYF{D,YiYWGQGTT{L，V}TVSS)。32.權(quán)利要求31的多肽，其中所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EVQLLESGGAEDTAVYYCAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。33.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)的多肽，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR_L3。34.權(quán)利要求33的多核苷酸，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列({E，D}{1，N，V}V{L，M}TQSPA{T，F(xiàn)，1}{L，M}S{L，A，V}{S，T}{L，P}GE{R，K}{A，V}T{L，M，1}{S，T，N}CRASSSVKYMYWYQQK{S,P}{G，D}{Q，A}{A，S}P{R，K}L{L，W}I{Y，K}YTSNLAPGU,V}P{A，S}RFSGSGSG{T，N}{D，S}{F，Y}{T，S}{L，F(xiàn)}TISS{M，L}E{A，G，P}ED{F，A}A{V，TiYYC(Q,Y}QFTT{S,YiPYTFGGGTKLEIKR)。35.權(quán)利要求34的多核苷酸，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(EINVLFAVYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)。36.權(quán)利要求34的多核苷酸，其中所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列(ENVLTATYYCQQFTTSPYTFGGGTKLEIKR)。37.—種重組多核苷酸，所述多核苷酸包含與權(quán)利要求29-36中任一項(xiàng)的多核苷酸有效連接的啟動(dòng)子序列。38.—種分離的細(xì)胞，所述細(xì)胞轉(zhuǎn)化有權(quán)利要求37的多核苷酸。39.—種制備由權(quán)利要求37的重組多核苷酸所編碼多肽的方法，所述方法包括a)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化有重組多核苷酸的細(xì)胞，以表達(dá)所編碼多肽；禾口b)回收如此表達(dá)的多肽。40.—種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列({N，S，Y}MAS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列({T，A，Y}I{S，Y}{S，G，T，Y}{G，S}{G，Y}G{F，S，Y}TYY{P，A}DS{L，Y，V}KG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列{H，Y}{G，Y}{A，Y}PM{T，Y}T{V，Y}ITY{A，Y)PYYFYY的CDR_H3。41.權(quán)利要求40的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS{N，S，Y}YAMSWVRQAPGKGLEWVS{T，A，Y}I{S，Y}{S，G，T，Y}{G，S}{G，Y化(F，S，Y}TYY{P，A化S化，Y，V化GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK{H，Y}{G，Y}{A，Y}PM{T，Y}T{V，YUTY{A，Y}PYYFYYWGQGTTVTVSS)。42.—種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(NYAIS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TYSSGGVYTYYRDSLKG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HGAAMTTVITYAPFYFYY)的CDR_H3。43.權(quán)利要求42的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRAKHGAAMTTVITYAPFYFYYWGQGTTVTVSS)。44.一種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(YYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TIYSGGSYTFYPDSLEG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HGAPMSTEITYAPYYFYY)的CDR_H3。45.權(quán)利要求44的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRAKHGAPMSTEITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。46.—種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(NYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TIYSGGGYTFYLDSLKG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HSYPMTTVITYAPYYFYY)的CDR_H3。47.權(quán)利要求46的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRAKHSYPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。48.—種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(NYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)的CDR_H3。49.權(quán)利要求48的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。50.—種人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(NYYAMS)的CDR-H1;(2)包含氨基酸序列(TISSGGGYTYYPDSLKG)的CDR-H2;禾口(3)包含氨基酸序列(HGAPMTTVITYAPYYFYY)的CDR_H3。51.權(quán)利要求50的人源化抗體重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EVQLLESGGGLVQPGGSLRAKHGAPMTTVITYAPYYFYYWGQGTTVTVSS)。52.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR_L3。53.權(quán)利要求52的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSLGERAFGGGTKLEIKR)。54.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR_L3。55.權(quán)利要求54的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERAFGGGTKLEIKR)。56.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(YQFTTSPYT)的CDR_L3。57.權(quán)利要求56的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERAFGGGTKLEIKR)。58.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQYTTSPYT)的CDR_L3。59.權(quán)利要求58的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERAFGGGTKLEIKR)。60.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTSNLAP)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQFTTYPYT)的CDR_L3。61.權(quán)利要求60的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERAFGGGTKLEIKR)。62.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RAS{S，Q]SV{K，S}SY{M，U{Y，A})的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列"Y，m(TMSN(L，劇P，T"的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列((Q，Y}Q{F，Y}TT{S，Y}PYT)的CDR_L3。63.權(quán)利要求62的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAS(S，Q化V(K，S}SY{M，U(Y，A}WYQQKPGQAPRLLIY{Y，D}{T，AlS腺，R}A{R，T}GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC{Q，Y}Q{F，Y}TT{S，Y}PYTFGGGTKLEIKR)。64.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RASSSVKYMY)的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列(YTS證)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(QQFTTSPYT)的CDR_L3。65.權(quán)利要求64的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列(ENVLTQSPAFLSVTPGEKVFGGGTKLEIKR)。66.—種人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含(1)包含氨基酸序列(RAS(S,Q化V(K,S化Y(M,U(Y,A})的CDR-L1;(2)包含氨基酸序列"Y,Dl(T,魏(L,R旨，T1)的CDR-L2;禾口(3)包含氨基酸序列(Q,Y驗(yàn)，Y1德，YlPYT)的CDR_L3。67.權(quán)利要求66的人源化抗體輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列({E，D}{N，V}V{L，M}TQSPAFLSVTPGEKVTITCRAS(S,Q化V(K,S化Y(M,U{Y,AiWYQQKPDQAPKL(W,L}I{Y，K}{Y,D}{T,A}SN{L,R}A{P,T}GVPSRFSGSGSG{N，T}D{Y，F(xiàn)}TFTISSLEAEDAATYYC(Q,Y化(F,Y}TT(S,Y}PYTFGGGTKLEIKR)。68.—種特異性結(jié)合CXCR3的抗原結(jié)合性多肽，所述多肽包含權(quán)利要求40-51中任一項(xiàng)的人源化重鏈和權(quán)利要求52-67中任一項(xiàng)的人源化輕鏈。69.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求52或53的人源化輕鏈。70.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求64或65的人源化輕鏈。71.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求54或55的人源化輕鏈。72.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求56或57的人源化輕鏈。73.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求58或59的人源化輕鏈。74.權(quán)利要求68的多肽，所述多肽包含權(quán)利要求48或49的人源化重鏈和權(quán)利要求60或61的人源化輕鏈。75.權(quán)利要求68-74中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽選自以下的抗體分子Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段以及scFv分子。76.權(quán)利要求75的多肽，其中所述多肽為抗體分子。77.權(quán)利要求76的多肽，其中所述多肽為包含人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)的嵌合抗體。78.權(quán)利要求76或77的多肽，其中所述抗體為IgG分子(例如IgGl分子或IgG4分子)。79.權(quán)利要求75的多肽，其中所述多肽為scFv分子。80.權(quán)禾U要求79的多肽，其中所述scFv選自下式NH2-L-VH-X-VK-C00H和NH2-L-VK_X-VH-C00H;上式中，L為前導(dǎo)序列；VH為人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；VK為人源化抗體輕鏈可變區(qū)。81.權(quán)利要求68-80中任一項(xiàng)的多肽，所述多肽與治療藥物或診斷藥物綴合。82.權(quán)利要求81的多肽，其中所述治療藥物選自細(xì)胞毒劑、放射性標(biāo)記、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、酶、寡核苷酸、光活化治療藥物或其組合。83.權(quán)利要求81的多肽，其中所述診斷藥物選自放射性標(biāo)記、光活化診斷藥物、超聲促進(jìn)劑或非放射性標(biāo)記。84.權(quán)利要求68-83中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽為CXCR3的拮抗劑。85.權(quán)利要求68-84中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽并非CXCR3的激動(dòng)劑。86.權(quán)利要求68-85中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽與CXCR3以至少約106M—、優(yōu)選至少約107M—^更優(yōu)選至少約108M—^甚至更優(yōu)選至少約109M—0的親和常數(shù)結(jié)合。87.—種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求68-86中任一項(xiàng)的多肽和載體。88.權(quán)利要求81的藥物組合物，所述藥物組合物進(jìn)一步包含另外的治療藥物或診斷藥物。89.—種治療或診斷炎癥性疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求87或88的組合物。90.—種治療或診斷免疫疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求87或88的組合物。91.一種治療或診斷惡性疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的患者給予權(quán)利要求87或88的組合物。92.權(quán)利要求89-91中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥選自自身免疫病(例如狼瘡)、炎癥性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(C0PD)、關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、局限性腸炎、銀屑病、白血病或淋巴瘤(例如慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL))。93.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求40-51中任一項(xiàng)的人源化重鏈可變區(qū)。94.一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求52-67中任一項(xiàng)的人源化輕鏈可變區(qū)。95.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求68-86中任一項(xiàng)的多肽。96.—種重組多核苷酸，所述多核苷酸包含與權(quán)利要求93-95中任一項(xiàng)多核苷酸有效連接的啟動(dòng)子序列。97.—種分離的細(xì)胞，所述細(xì)胞轉(zhuǎn)化有權(quán)利要求96的多核苷酸。98.—種制備由權(quán)利要求96的重組多核苷酸所編碼多肽的方法，所述方法包括a)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化有重組多核苷酸的細(xì)胞，以表達(dá)所編碼多肽；禾口b)回收如此表達(dá)的多肽。全文摘要本發(fā)明公開了特異性結(jié)合CXCR3受體的人源化抗體。所述人源化抗體可為拮抗劑，并且其可用于治療或診斷與CXCR3功能相關(guān)的疾病。文檔編號(hào)A61K39/395GK101796073SQ200880010471公開日2010年8月4日申請(qǐng)日期2008年1月29日優(yōu)先權(quán)日2007年2月1日發(fā)明者P·卡納卡拉,R·史密斯,V·羅施克申請(qǐng)人:聯(lián)合基因系統(tǒng)公司