專利名稱：：用于癌癥治療的水合的喜樹堿酯晶體的制作方法
技術領域：
：本申請要求根據(jù)35U.S.C.§120于2007年10月25日提交的在先美國專利申請No.11/923，727的優(yōu)先權，在此將其整體引入作為參考。本發(fā)明涉及喜樹堿酯和應用喜樹堿酯治療癌癥、惡性腫瘤，等等。發(fā)明的
背景技術：
：病人在化療的過程中由于服用抗癌藥物而遭受的毒性(或副作用)仍然是與癌癥治療相關的最大敵人。抗癌劑的治療指數(shù)(TI)定義為最大耐受劑量與有效劑量的比值。眾所周知，如今臨床上應用的大多數(shù)抗癌劑具有很窄的TI范圍(1到1.2)。換句話說，由于與抗癌劑相關的治療指數(shù)窄，大多數(shù)抗癌劑在接受化療患者身上的毒性作用在有效劑量水平是不可避免的。藥劑之間毒性的嚴重程度和遭受的類型是不同的。氟尿嘧啶(5-FU)是最常用的化療劑之一，用于發(fā)生在胃腸道、乳腺、頭部和頸部的癌癥患者的全身治療和姑息治療。二氫嘧啶脫氫酶(DPD)是5-FU分解代謝的起始酶和限速酶。人們逐漸認識到，在5-FU相關的嚴重毒性反應的病因?qū)W中，DPD缺乏是一種重要的遺傳藥理病癥。據(jù)報道，對于那些編碼DPD基因的突變等位基因在遺傳學上是雜合的或純合的癌癥患者，他們在給藥5-FU后會遭受嚴重的毒性，包括死亡。VanKuilenburgABP，HaasjesJ，RichelDJ等，Clinicalimplicationsofdihydropyrimidinedehydrogenase(DPD)deficiencyinpatientswithsevere5_fluorouracil-associatedtoxicity:identificationofnewmutationsintheDPDgene，ClinicalCancerRes2000，6:4705-4712。VanKuilenburgABP，MullerEW，HaasjesJ等，Lethaloutcomeofacompletedihydropyrimidinedehydrogenase(DPD)deficiencyafteradministrationof5_fluorouraci1:frequencyofthecommonIVS14+1G>AmutationcausingDPDdeficiency，ClinCancerRes2001,7:1149-1153。鉬藥劑也常用于治療。大量文獻記載了鉑化合物的副作用。順鉑有多種毒性腎毒性、神經(jīng)毒性、耳毒性、惡心和嘔吐。DeVitaVT，HellmanS禾卩RosenbergSA.Cancer,PrinciplesandPracticeofOncology,第7版，LippincottWilliams&Wilkins2005,335。順鉑的腎毒性幾乎導致將其放棄，直到Cvitkovi和他的合作者引入活性水合(aggressivehydration)，該水合防止急性腎衰竭的發(fā)展。CvitkovicE，SpauldingJ，BethuneV，等.Improvementofcis_dichlorodiamineplati皿m(NSCl19875):therapeuticindexinananimalmodel.Cancer1977,39,1357。HayesD，CvitkovicE，GolbeyR，等.Highdosecis-platinumdiaminedichloride-ameliorationofrenaltoxicitybymamnitoldiuresis.Cancer1977,39，1372。由于順鉑的副作用，其毒性曾在歷史上被一些研究者認為是尋找低毒類似物和更有效治療方法的推動力。作為順鉑不常見的一種嚴重毒性，骨髓抑制是卡鉑的劑量限制性毒性。EvensB，RajuK.CalvertA，等.PhaseIIstudyofJM8，anewplatinumanalogue,inadvancedovariancarcinoma.CancerTreat.Rep.，67,997，1983。奧沙利銷的齊U量限制性毒性是感覺性神經(jīng)病——這是所有含DACH的鉑衍生物的一個特點。DeVitaVT，HellmanS，禾卩RosenbergSA.Cancer,PrinciplesandPracticeofOncology,第7片反，LippincottWilliams&Wilkins2005,335。烷基化試劑在癌癥治療中也起重要作用。每種烷基化試劑都與一種具體的毒性相關，在此不分別討論。下列毒性是烷基化試劑作為一類所共有的造血毒性、胃腸毒性、生殖腺毒性、肺毒性、脫發(fā)癥、致畸性、致癌性和免疫抑制。DeVitaVT，HellmanS，禾口RosenbergSA.Cancer,PrinciplesandPracticeofOncology，第7版，LippincottWilliams&Wilkins2005，335。烷基化試劑的常見劑量限制性毒性是造血毒性。拓撲異構酶干擾劑(interactiveagent)因其獨特的作用機制而已經(jīng)受到臨床腫瘤學家日益增多的注意。拓撲替康是從天然存在的io-羥基喜樹堿得到的半合成產(chǎn)物，用于進展期難治的(refractorg)卵巢癌及小細胞肺癌的第二線治療，在造血系統(tǒng)惡性腫瘤，包括骨髓發(fā)育不良綜合癥和多發(fā)性骨髓瘤的治療中也具有活性。HuininkW，GoreM，CarmichaelJ，等.Topotecanversuspaclitaxolforthetreatmentofrecurrentepithelialovariancancer.JClinOncol1997，15，2183^SchillerJH，AdakS，CellaD，等.Topotecanversusobservationaftercisplati叩lusetoposideinextensive—stagesmall—celllungcancer:E7593-即haseIItrialodtheEasternCooperativeOncolgyGroup.JClinOncol2001，19，2114;vonPawelJ，SchillerJH，ShepherdFA，等.Topotecanversuscyclophosphamide,doxorubicin,andvincristineforthetreatmentofrecurrentsmall—celll皿gcancer.JClinOncol1999，17，658。PizzolatoJF，SaltzLB.Thecamptothecins.Lancet2003,361,2235。該藥劑的劑量限制性毒性是骨髓抑制。雖然拓撲替康已與各種其它治療方法(包括放療、順鉑、紫杉醇和多柔比星)在臨床試驗中組合應用，但這些組合應用還沒有一項實現(xiàn)在臨床腫瘤學的常規(guī)應用中。這可能部分地歸因于拓撲替康頻繁發(fā)生骨髓抑制毒性，這導致其難于在高劑量時與其它骨髓抑制藥劑的組合。MillerAA，LilenbaumRC，LynchTJ等.Treatment-relatedfatalsepsisfromtopotecan/cisplatinandtopotecan/paclitaxol.JClinOncol1996,14,1964。伊立替康也是從喜樹堿家族半合成的產(chǎn)物。該化合物單獨給藥或與氟尿嘧啶(florouracil)和亞葉酸*丐組合用于治療患結(jié)腸直腸癌的患者，還發(fā)現(xiàn)與順鉑組合時對小細胞肺癌有活性，并已發(fā)現(xiàn)此組合對非小細胞肺癌也有活性。SaltzLB，CoxJV，BlankeC，等.Irinotecanplusflorouracilandleucovorinformetastaticcolorectalcancer.Irinotecanstudygroup.NEnglJMed2002，343，905;DouillardJY，CunninghamD，RothAD，等.Irinotecancombinedwithflorouracilcomparedwithflorouracilaloneasfirstlinetreatmentformetastaticcolorectalcancer:amulticancerrandomizedtrial丄ancet2000，355，1041;PizzolatoJF，SaltzLB.Thecamptothecins.Lancet2003,361,2235。伊立替康的劑量限制性毒性是嗜中性粒細胞減少癥和延遲性腹瀉，在臨床腫瘤學上的應用也因此受到限制。所有其它各種各樣的抗癌藥劑，包括最近上市的愛必妥(erbitux)和阿瓦斯汀(avastin)，可能都僅用于有限數(shù)量的特定治療，但也都伴隨著毒性。因此，對于癌癥研究者和臨床腫瘤學家來說，尋找在治療時具有更寬的治療指數(shù)的更好藥劑仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。已經(jīng)證明喜樹堿，即首先由Wall及其合作者從喜樹(CamptothecaAcuminata)(珙桐科(Nyssaceae))的木材和樹皮分離出的細胞毒性生物堿(J.Am.Chem.Soc.88，3888，1966)，具有對小鼠白血病L1210系統(tǒng)的抗腫瘤活性。喜樹堿是一種具有通常存在的吲哚生物堿基團的生物堿(Heckendorf等，JOrg.Chem.41，2045，1976)，其結(jié)構為如下式(X)所不。(X)該化合物("CPT")具有五環(huán)環(huán)體系，該環(huán)體系僅在環(huán)E上有一個具有20(S)-構型的不對稱中心。該五環(huán)環(huán)體系包括吡咯并[3，4_b]喹啉部分(環(huán)A、B和C)，共軛吡啶酮(環(huán)D)和含有a-羥基的6-元內(nèi)酯(環(huán)E)。喜樹堿從其開始被分離以來因其在小鼠白血病L1210系統(tǒng)中的顯著活性而具有重要意義。喜樹堿的抗腫瘤活性早期數(shù)據(jù)通過使用實驗移植的惡性腫瘤，諸如小鼠的白血病L1210，或大鼠的Walker256腫瘤獲得(Chem.Rev.23,385，1973，CancerTreat.R印.60，1007，1967)。隨后的臨床研究說明該化合物因其高毒性而不能用作體內(nèi)抗癌藥。喜樹堿自身不溶于水。因此，早期在臨床上評價了喜樹堿的水溶性羧酸鈉鹽。這種形式的喜樹堿產(chǎn)生嚴重的毒性并且看起來沒有抗癌活性(Gottlieb等，CancerChemother.R印.54,461，1970，禾口56，103，1972，Muggia等，CancerChemother.Rep.56，515，1972，Moertel等，CancerChemother.Rep.56，95，1972，禾口Scha印pi等，CancerChemother.R印.5:25，1974)。這些結(jié)果導致II期試驗中斷。對該藥劑的持續(xù)評價表明羧酸鈉鹽僅有具有完整閉合內(nèi)酯環(huán)的天然喜樹堿有效性的10%(Wall等，InlnternationalSymposiumonBiochemistryAndPhysiologyofTheAlkaloids,Mothes等，eds.，Academie-Verlag,Berlin,77，1969，Giovanella等，Cancerres.51,3052,1991)。此夕卜，已經(jīng)取得喜樹堿家族中抗腫瘤活性的重要參數(shù)(Wall等，Ann.Rev.，Pharmacol.Toxicol.17，117,1977)。這些結(jié)果表明完整的內(nèi)酯環(huán)E和a-羥基對抗腫瘤活性是必需的。20世紀80年代中期，發(fā)現(xiàn)喜樹堿的分子靶點是新的核酶(nuclearenzyme)拓撲異構酶I。HsiangYH，LiuLF.IdentificationofmammalianDNAtopoisomeraseIasanintracellulartargetofanticancerdrugcamptothecin.CancerRes1988，48，1722。大約在此同時，幾個新的水溶性喜樹堿衍生物，包括前面已經(jīng)討論過的兩個化合物(拓撲替康和伊立替康)，被制備并進行了生物學評價。接下來這兩個化合物的臨床評價證實了預期的毒性禾口有益的抗癌活性。TakimotoCH，ArbuckSG.TopoisomeraseItargetingagents:thecamptothecins.In:ChabnerBA，LongoDL，eds.，Cancertherapy&biotherapy:principlesandpractice,第3片反，Philadelphia丄ippincottWilliams&Wilkins2001，579。1996年拓撲替康被批準用于進展期卵巢癌的第二線治療，隨后用于治療難治的小細胞肺癌患者的適應癥的量大增。與此同時，伊立替康被注冊用于治療5-氟尿嘧啶難治的進展期結(jié)腸直腸癌。這實際上是美國近40年獲得批準用于治療此病的第一個新藥劑。在1989年，Giovanella等發(fā)現(xiàn)喜樹堿的某些非水溶性衍生物對人腫瘤的異種移植物具有高度抗腫瘤活性(Giovanella等，Science,246，1046，1989)。這還說明給予具有閉合內(nèi)酯環(huán)的喜樹堿優(yōu)于注射水溶性羧酸鹽(Giovanella等，CancerRes.，51，3052，1991)。這些發(fā)現(xiàn)進一步證明完整內(nèi)酯環(huán)對生物活性的重要性。20(S)-喜樹堿的開環(huán)導致在小鼠中的抗癌活性遠比在人中更有效。實際上已經(jīng)證明，對于小鼠中的人腫瘤，也就是當其作為異種移植物在裸小鼠中生長時，經(jīng)肌內(nèi)("i.m.")、皮下("s.c.")和胃內(nèi)("i.s.")給藥的CPT是很有效的抗癌藥劑(Giovanella等，CancerRes.，51:3052,1991)。然而，當在人體中用CPT治療腫瘤時，在人體中顯示出比在小鼠中更低程度的抗癌活性(Stehlin等，InCamptothecins:NewAnticancerAgents,1995，CRCPress,pp.59-65)。其它CPT-衍生物也觀察到了相同的現(xiàn)象。在小鼠中，已經(jīng)證明9-硝基喜樹堿("9NC")對人體腫瘤異種移植物的有效性比CPT大2-3倍，能全部根除所有被治療的人體惡性月中瘤(Pantazis等，CancerRes.53:1577，1993;Pantazis等，Int.J.Cancer53:863，1995)。由于喜樹堿存在兩種不同的形式，開環(huán)是個顯著問題。天然存在的喜樹堿具有S-構型，其生物活性比R-異構體大10到100倍。S-構型的內(nèi)酯形式被認為是抗腫瘤活性所必需的，羧酸鹽形式通常與臨床毒性有關。在水溶液中分子存在平衡，此平衡是pH依賴性的，在生理pH，即7或以上，平衡反應式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>在較高pH下喜樹堿的生物活性內(nèi)酯環(huán)與水的水解反應得到生物學上無活性的開環(huán)形式。另外，CPT及其類似物水解的問題在人體血液中加劇，因為主要的人血清白蛋白(HSA)優(yōu)先結(jié)合羧酸鹽形式，這使得內(nèi)酯/羧酸鹽平衡向無活性形式方向移動(J.Biochem.，212，285-287，1993;Biochemistry，33，10325-10336，1994;Biochemistry，33，12540-12545，1994)。因此，保持該分子的內(nèi)酯環(huán)足夠的時間以使腫瘤細胞通過S_期循環(huán)成為一個主要的挑戰(zhàn)并且已經(jīng)成為大量研究的焦點。已經(jīng)進行了許多嘗試以便得到具有較高生物活性和增加的穩(wěn)定性的喜樹堿衍生物。這些化合物中的許多為分子的A、B和C環(huán)上的修飾產(chǎn)物，但這些修飾中很少在生理條件下增加內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性。其它手段更為成功，例如，酰化20-0H基團提供了保護內(nèi)酯環(huán)E的有用方法。Wall等在美國專利No.4，943，579中描述了幾種具有水溶性的?；南矘鋲A化合物，不過，該內(nèi)酯在生理條件下可能無法完整保留。Cao等的美國專利No.5，968，943中披露了作為有效抗腫瘤藥的CPT-衍生物。在文獻中報道了制備喜樹堿酯的許多不同反應。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>使用吡啶作為催化劑用有機酸酐直接?；矘鋲A用于制備烷基和鏈烯基喜樹堿酯(如上所示)。該反應通常得到高產(chǎn)率，但有機酸酐的有效利用率限制了該反應的范圍。因此，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)/二甲基氨基吡啶(DMAP)試劑系統(tǒng)用于羧酸與醇和硫醇的?；磻Ｔ摲椒ㄒ郧坝糜谥苽浞甲逑矘鋲A酯(如下所示)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>然而，該方法僅在羧酸非常親電子時得到良好的反應產(chǎn)率。當酸為低親電子時，反應得到較低產(chǎn)率或完全沒有預期的產(chǎn)物。例如，當利用該方法使用丙酸制備喜樹堿丙酸酯時，基本上未獲得該酯產(chǎn)物，原料喜樹堿幾乎為100%回收。還將壬酰氯用作?；瘎セ矘鋲A，其中在二氯甲烷中使用吡啶作HCl-捕獲劑。該反應(如下所示)以低產(chǎn)率(6%)進行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>由于喜樹堿特有的結(jié)構特征為癌癥研究者修飾其結(jié)構來獲得更好的抗癌劑提供了理想的平臺，很多不同的喜樹堿酯已經(jīng)得以合成和評價。已發(fā)現(xiàn)，酯化產(chǎn)物大大增加了分子在體內(nèi)的生物學壽命。還顯示了用合成的喜樹堿酯對在裸小鼠中生長的異種移植的人腫瘤的治療是有效的，對小鼠的毒性是最小的。Cao，Z.;Pantazis，P.;Mendoza，J.;Early，J.;Kozielski，A.;Harris，N.;Vaideman，D.;Liehr，J.;Stehlin，J.;Giovanella，B.Ann.N.Y.Acad.Sci.2000,922,122;Cao，Z.;Pantazis，P.;Mendoza，J.;Early，J.;Kozielski，A.;Harris，N.;Giovanella，B.ActaPharmacologicaSinica2003，24，109。雖然存在很多方法制備喜樹堿酯，然而每種方法正如前面討論的都具有一些局限。因此，仍然需要研發(fā)既保留母體化合物CPT的抗腫瘤活性、又具有比CPT低得多的毒性、且能用制備喜樹堿酯的可選方法生產(chǎn)喜樹堿酯。發(fā)明才既述因此，本發(fā)明的一個方面(feature)是提供一種顯示廣譜抗癌活性和相當?shù)蜕踔劣^察不到毒性的喜樹堿酯水合物晶體。本發(fā)明的另一方面是提供一種治療指數(shù)范圍比如今應用的大多數(shù)抗腫瘤藥劑更寬的喜樹堿酯水合物晶體。本發(fā)明的又一方面是提供一種制備喜樹堿酯水合物晶體的安全而簡單的方法。本發(fā)明的又一方面是提供一種保留與母體化合物CPT相當?shù)娘@著抗腫瘤活性、同時毒性比母體化合物低得多的喜樹堿酯水合物晶體。本發(fā)明的又一方面是提供一種在活體內(nèi)吸收度良好的喜樹堿酯水合物晶體。為了實現(xiàn)上述方面和根據(jù)本發(fā)明的目的，如本文具體說明和廣泛描述的，本發(fā)明部分涉及喜樹堿酯水合物晶體(例如喜樹堿的脂肪酸酯水合物晶體，像喜樹堿-20-0-丙酸酯("CA48")水合物晶體)，包含喜樹堿的脂肪酸酯水合物晶體的藥物組合物，應用喜樹堿酯水合物晶體治療癌癥或惡性腫瘤的方法，以及制備水合的喜樹堿酯晶體的方法，該方法包括使喜樹堿化合物與至少一種?；噭┓磻?，該?；噭┙?jīng)至少一種酸質(zhì)子化。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點部分列在下文的描述中，部分從該描述中顯而易見，或可以通過實施本發(fā)明認識到。通過在說明書和所附的權利要求書中具體指出的要素和組合會實現(xiàn)和達到本發(fā)明的目的和其它優(yōu)點。將本申請中提及的所有專利、申請和出版物完整地引入本文作為參考并構成本申請的組成部分。應理解上面一般性描述和下文的詳細描述僅為示例性和解釋性的，并且用于提供要求保護的本發(fā)明的進一步說明。附圖的簡要說明圖1是本產(chǎn)品的單分子0RTEP圖。圖2是表示通過水橋連接在一起的兩分子喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的0RTEP圖。圖3是表示喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的三維結(jié)構(a，b維)的0RTEP圖。圖4是表示喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的三維結(jié)構(a，c維)的0RTEP圖。圖5是表示喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的三維結(jié)構(b，c維)的0RTEP圖。發(fā)明詳述喜樹堿("CPT")具有明顯的抗腫瘤和抗癌活性，但這些化合物在正常生理條件下容易降解，并且產(chǎn)生的代謝物常常顯示出毒性。在實驗室進行的人血漿中喜樹堿的代謝研究顯示，唯一檢測到的代謝產(chǎn)物是毒性的且無活性的開環(huán)的羧酸鈉鹽。人血漿中CPT的藥物代謝動力學測定表明具有完整內(nèi)酯環(huán)的藥物的半衰期大約是30分鐘，這些結(jié)果意思是在患者服用藥物后的非常短的時間內(nèi)藥物將喪失90%的活性并產(chǎn)生大量的有毒物。本發(fā)明公開了CPT轉(zhuǎn)化為脂溶性更高的和水合的酯分子晶體，下文中有時稱為前藥。當被患者服用時，前藥迅速進入患者的血流中，在體內(nèi)迅速地轉(zhuǎn)化為母體化合物。應當指出的是前藥本身也可以是有活性的，和/或能部分地或全部被轉(zhuǎn)化。根據(jù)各實施方案，本發(fā)明的化合物可以包括水合形式的CPT脂肪酸酯晶體，其具有下式在該式中，n可以代表l到IO范圍內(nèi)或更大的任何數(shù)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。R2代表C廠Ce烷基，例如C廠Q烷基。在一個或多個實施方案中，12是-(^2(^3、-(^2(^2。H3、-CH2CH2CH2CH3或_CH2CH2CH2CH2CH2CH3。如一個特定實施方案中，n代表3且R2是_CH2CH3或-<:113。根據(jù)至少一個實施方案，本發(fā)明的化合物可以包括下式所示的喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體在該式中，n可以代表l到IO范圍內(nèi)的任何數(shù)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。作為一個實例，喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的結(jié)構由單晶X-射線分析確定，并表示在圖1-5中。圖1表示本產(chǎn)品的單分子ORTEP圖。一分子喜樹堿-20-0-丙酸酯和大約3分子水通過強的氫鍵連接在一起。在一個晶體單元中多于一個喜樹堿-20-0-丙酸酯分子可以通過水分子組成的橋彼此連接。圖2表示兩分子喜樹堿-20-0-丙酸酯通過水分子橋彼此連接。圖3-5表示該晶體的三維結(jié)構。本發(fā)明的其它CPT酯除酯鏈長度外具有相同的結(jié)構。本發(fā)明的前藥可以是液態(tài)或固態(tài)。根據(jù)本發(fā)明，這些化合物是晶體。在至少某些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以是晶體或固體，其組成原子、分子或離子按規(guī)則的順序排列(pack)，重復點陣(pattern)在整個三維空間方向延伸。晶體可以是大小為(0.10至0.50)X(0.Ol至O.10)X(0.Ol至O.05)咖3，體積為100到5000人3的單斜晶系，例如體積為200到4500A3或500到4000人3，或750至"500入3，或1000至"000人3，或1250到2500A3，或1500到2200A3。這里所用的"晶體(crystalline)"指包含特定化合物的物質(zhì)，該特定化合物可以是水合的或溶劑化的，并且該物質(zhì)含有足夠的結(jié)晶成分(crystalcontent)，通過XRPD或其它衍射技術顯示出可識別的衍射圖譜。通常，通過將溶解于溶液中的化合物從溶劑中直接結(jié)晶，或者通過將不同結(jié)晶條件下得到的晶體轉(zhuǎn)化而得到晶體物質(zhì)，該晶體物質(zhì)具有包含溶劑的晶體，稱為晶體溶劑化物。晶體性質(zhì)的實例包括在晶體內(nèi)化合物的化學基團彼此之間的取向，以及化合物特殊形式的優(yōu)勢形式，該優(yōu)勢形式在溶劑組分中存在酸的情況下優(yōu)先形成。根據(jù)至少一個實施方案，本發(fā)明的化合物可具有大約90%至大約100X的AUC(曲線下面積)純度。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物可具有大約95X至大約100X的AUC純度。在至少一個實施方案中，本發(fā)明的化合物可具有大約99%至大約100X的AUC純度，例如99.3%至99.999%，99.5%至99.999%，99.75%至99.999%，99.85%至99.999%，均為AUC純度。在至少一個實施方案中，本發(fā)明化合物可具有大約24(TC至大約243t:的熔點，例如242t:或大約242°C。此熔點對于R2是_CH2CH3的酯的水合物晶體特別優(yōu)選。當R2是CH3或C3H7或C4H9或C6H13基團時，本發(fā)明化合物的熔點可以比上述范圍更低或更高。根據(jù)各實施方案，本發(fā)明可包括具有S-構型、R-構型、和/或S-和R-異構體的外消旋混合物的CPT的脂肪酸酯水合物晶體。在某些實施方案中，從天然喜樹堿衍生的CPT的脂肪酸酯水合物晶體僅具有S-構型，或者主要是S-構型，例如90%或更高，95%或更高，98%或更高，99%或更高，或99%到99.99%。將前藥轉(zhuǎn)化為母體化合物，CPT，可通過存在于很多動物包括人血液中的被稱為酯酶的一組酶介導(mediate)。由于前藥在傳輸后很短的時間內(nèi)迅速分布到全身各處，所以這些化合物在經(jīng)酶水解并釋放母體喜樹堿的同時以非常低的濃度存在，這防止CPT在血流中沉淀。因此，本發(fā)明提供水合的CPT衍生物或其類似物的晶體，其優(yōu)選在人或動物體內(nèi)，尤其是在人體內(nèi)更長時間保持完整，從而增強抗腫瘤和抗癌效果而不產(chǎn)生不需要的副作用。本發(fā)明還提供包含藥學上有效量的一種或多種本發(fā)明化合物和可選的一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑或輔劑的藥物組合物。例如，本發(fā)明化合物可以配制成片劑、丸劑、粉末混合物、膠囊、注射劑、溶液、栓劑、乳劑、分散劑、預混食品，或者其它合適的形式。它們還可以配制成無菌固體組合物形式，例如冷凍干燥的形式，如果希望，與其它藥學上可接受的賦形劑組合。這種固體組合物在胃腸外給藥前可以用無菌水、生理鹽水、或水與有機溶劑例如丙二醇、乙醇等的混合物、或者其它無菌注射用介質(zhì)立即重新溶解配制(reconstituted)。典型的藥學上可接受的載體是，例如，甘露醇、尿素、葡聚糖、乳糖、非還原糖、馬鈴薯和玉米淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、聚亞烷基二醇、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、碳酸鈣、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、苯甲酸芐酯、碳酸鈉、明膠、碳酸鉀、硅酸。所述藥物制劑還可以包括非毒性輔助物質(zhì)例如乳化劑、防腐劑、和/或潤濕劑，等等，例如，脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯單硬脂酸酯、甘油三棕櫚酸酯、磺基琥珀酸二辛酯鈉，坐坐寸寸。"藥物組合物"指一種或多種本文描述的化合物或其藥學上可接受的鹽與其他化學成分(例如藥學上可接受的載體和/或賦形劑)的混合物。藥物組合物的目的是方便將化合物給藥到有機體。這里應用的短語"藥學上可接受的載體"意思是藥學上可接受的物質(zhì)、組合物或介質(zhì)，例如液體或固體填充物、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包囊材料，包括從機體的一個器官或部分運載或運輸目標藥劑到機體的另一個器官或部分。每種載體在與制劑中其它成分相容的意義上必須是"可接受的"并且對患者無損害的。可作為藥學上可接受的載體物質(zhì)的一些實例包括(1)糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)西黃蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；(9)由類，例如花生油、棉花籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二元醇類，例如丙二醇；(ll)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁;(15)海藻酸;(16)無熱源水;(17)等滲鹽水;(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸緩沖液；以及(21)在藥物制劑中應用的其它無毒的相容物質(zhì)。生理學上可接受的載體應當對生物體不引起明顯的剌激，并且不消除所給藥化合物的生物活性和性質(zhì)。賦形劑可以指添加到藥物組合物中更便于給藥化合物的惰性物質(zhì)。賦形劑的實例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和各種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、脂肪、脂類、植物油和聚乙二醇。"藥學上的有效量"的另一層含義是能提供治療和/或預防效果的量。當然，為了獲得治療和/或預防效果，根據(jù)本發(fā)明給藥的化合物的特定劑量將通過圍繞病例的特定情況而確定，病例的特定情況包括例如給藥的具體化合物、給藥途徑、治療的疾病和治療的個體情況。典型的每日劑量(單次或多次給藥劑量)包含從大約0.01mg/kg體重到大約50-100mg/kg體重劑量水平的本發(fā)明活性化合物。每日劑量可以是從大約0.05mg/kg到大約20mg/kg或從大約0.lmg/kg到大約10mg/kg。在某些實施方案中，優(yōu)選的治療效果是在一定程度上抑制具有增殖異常特點的細胞的生長，例如乳腺癌或胰腺癌。治療效果也可能通常地，但并非必須，將一種或多種癥狀減輕到某種程度，而不是細胞生長或細胞群的大小。治療效果可以包括例如下列效果中的一種或多種1)減少細胞的數(shù)量；2)減小細胞的大??；3)抑制(例如減慢到一定程度，優(yōu)選停止)細胞浸入鄰近器官，例如癌癥轉(zhuǎn)移的情況；3)抑制(即，減慢到一定程度，優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；4)抑制細胞生長到某種程度；和/或5)將與病癥相關的一種或多種癥狀減輕到一定程度。本發(fā)明的方法中應用的藥物組合物也可包括活性成分用于口服的適當形式，例如片劑、含錠、糖錠、含水或含油混懸劑、分散粉或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊、糖漿劑或酏劑?？诜玫慕M合物可根據(jù)本領域已知的用于生產(chǎn)藥物組合物的任何方法制備，這些組合物可包含甜味劑、調(diào)味劑、調(diào)色劑和/或防腐劑。片劑包含活性成分與非毒性的藥學上可接受的賦形劑，該賦形劑適合于生產(chǎn)片劑。例如，這些賦形劑可以是惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑，如微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，如淀粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸和滑石粉。片劑可以不包衣或用已知技術包衣來掩蓋藥物的味道或延遲在胃腸道中崩解和吸收，從而提供長時間的持續(xù)作用。例如，水溶性的味道掩蓋材料如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延時材料如乙基纖維素或醋酸丁酸纖維素可在適當時應用?？诜玫膭┬鸵部梢杂裁髂z膠囊提供，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或以軟明膠膠囊提供，其中活性成分與水溶性載體如聚乙二醇或含油介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。含水混懸劑可包含活性物質(zhì)與適于生產(chǎn)含水混懸劑的賦形劑。該賦形劑可以是助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤濕劑，可以是天然存在的磷脂如卵磷脂，或亞烷基氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，如十七亞乙基-氧鯨蠟醇，或環(huán)氧乙烷與脂肪酸和己糖醇得到的偏酯(partialester)的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與脂肪酸和己糖醇酸酐得到的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚乙烯山梨醇單油酸酯。含水混懸劑也可包含一種或多種防腐劑(例如對羥基苯甲酸乙基酯或正丙基酯)、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑、一種或多種甜味劑(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。含油混懸劑可以通過將活性成分混懸于植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中配制，或混懸于礦物油例如液體石蠟中配制。含油混懸劑可以包含增稠劑例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。添加如上文所述的甜味劑及調(diào)味劑可以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過添加抗氧化劑如丁基羥基茴香醚或a-生育酚防腐。分散粉或顆粒適合于通過加入水制備成含水混懸劑，提供活性成分與分散劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑的混合物。合適的分散劑或潤濕劑和助懸劑的例子在上文已經(jīng)提到。也可以存在另外的賦形劑，例如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。這些組合物可以添加抗氧化劑如抗壞血酸防腐。本發(fā)明的方法所用的化合物和藥物組合物還可以是水包油乳劑形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或者礦物油例如液體石蠟，或者它們的混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂，和脂肪酸與己糖醇酸酐形成的酯或偏酯例如山梨醇單油酸酯，以及所述的偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。乳劑中可以包含甜味劑、調(diào)味劑、防腐劑和/或抗氧化劑。糖漿劑和酏劑可以用甜味劑如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。該制劑還可以包含濕潤劑(demulcent)、防腐劑、調(diào)味劑、著色劑和抗氧化劑。藥物組合物可以是無菌注射用水溶液形式。在可以采用的可接受的載體(vehicles)和溶劑中，包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射用制劑也可以是無菌注射用水包油微乳劑，其中活性成分溶解在油相中。例如，活性成分可以首先溶解在大豆油和卵磷脂的混合物中，然后油溶液加入到水和甘油混合物中并形成微乳劑形式。藥物組合物可以是用于肌肉內(nèi)和皮下給藥的無菌注射用含水或含油混懸劑形式。該混懸劑可根據(jù)已知技術利用上文提及的適合的分散劑或潤濕劑和助懸劑進行配制。無菌注射制劑可以是在腸胃外可接受的非毒性稀釋劑或溶劑中的無菌注射用溶液或混懸液，例如l，3-丁二醇溶液。另外，無菌的不揮發(fā)性油常規(guī)地用作溶劑或混懸介質(zhì)。任何溫和的不揮發(fā)性油包括合成的單或二甘油酯可用作此目的。另外，脂肪酸例如油酸可用于制備注射制劑。用于本發(fā)明的方法中的本發(fā)明化合物還可以以藥物的直腸栓劑形式給藥。該組合物可通過混合抑制劑和適合的非剌激性賦形劑制備，該賦形劑在常溫下是固體但在直腸溫度下是液體，因此其在直腸中熔化并釋放藥物。該賦形劑包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇混合物以及聚乙二醇脂肪酸酯。對于局部使用，可以應用包含本發(fā)明的化合物或組合物的霜劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液劑或混懸劑等。這里所采用的局部使用可以包括漱口水或含漱劑。本發(fā)明方法中應用的化合物可以是通過局部使用合適的鼻內(nèi)輸送器和傳遞裝置或者通過透皮途徑的鼻內(nèi)形式給藥，應用這些形式的透皮貼是本領域普通技術人員所熟知的。當然，對于透皮傳遞系統(tǒng)給藥的形式，給藥劑量在整個給藥方案中是連續(xù)的而不是斷斷續(xù)續(xù)的。本發(fā)明的方法、化合物和組合物也可以與其他已知治療劑組合應用，該已知治療劑根據(jù)其對所治療的疾病的特殊用途而選擇。例如，本發(fā)明化合物與已知的抗癌劑和細胞毒性藥劑組合可能是有用的。此外，本發(fā)明的方法和化合物與信號途徑的其他部分抑制劑組合也可能是有用的，該信號途徑將細胞表面生長因子受體與啟動核信號的細胞增殖聯(lián)系起來。本發(fā)明的一個方面是對治療溫血動物癌癥有用的藥物組合物，該組合物包含至少一種本文定義的本發(fā)明化合物以及藥學上可接受的賦形劑。該組合物根據(jù)已知的配制技術制備，提供適合于口服、局部應用、透皮給藥、直腸給藥、吸入給藥、腸胃外給藥(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi))等的組合物。制備本發(fā)明的組合物的詳細指南可以在參考文獻雷明登氏制藥科學(Remington'sPharmaceutical.Science)第18版或第19版，麥克出版公司出版，Easton，Pa，第18040頁中找到，相關部分在此引入作參考。單劑量或多劑量形式都被關注，每種形式都在某些臨床應用中有優(yōu)點。單劑量包含經(jīng)計算的預定劑量的活性化合物，在治療癌癥的裝置(setting)中產(chǎn)生希望的效果。當需要多個單劑量或部分劑量以達到預期目的時，多劑量形式可能特別有用。任一劑量形式都具有確定規(guī)范或直接取決于特定化合物的獨特的特點、要達到的特定治療效果和技術上制備治療癌癥的特定化合物的固有局限。單劑量可包含足以治療患者癌癥的治療有效量，并且可包含從大約1.0到1000mg的化合物，例如大約50到500mg?；衔锟梢酝谭?ingestibletablet)、含片、膠囊劑、囊片(c即let)、酏劑、混懸劑、糖漿劑、含錠(trouche)、糯米紙囊劑(wafer)、糖錠等適合的劑型口服給藥。通常最簡單的劑型是片劑和膠囊劑(分別或統(tǒng)稱為"口服劑量單位")。適合的制劑根據(jù)使化合物的特點與可用于配制合適的組合物的賦形劑匹配的標準配制技術制備。片劑或膠囊劑包含大約50到大約500mg的本發(fā)明化合物。制劑形式可以迅速傳遞化合物或者可以是緩釋制劑?；衔锟梢匝b入硬或軟膠囊中，可以壓制成片劑，或可以加入到飲料、食物中或者另外做成食物。當然，最終的組合物和制劑的百分含量可以變化，可以常規(guī)地占最終劑型如片劑重量的1到90%之間的范圍。該治療用途的組合物的用量是獲得該治療用途的合適劑量。根據(jù)本發(fā)明的組合物可制成這樣的口服劑量單位形式，包含重量在50和1000mg之間的劑量單位的大約5到大約50%(%w)?？诜┝繂挝坏暮线m制劑也可以包含粘合劑，如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠；甜味劑如乳糖或蔗糖；崩解劑如玉米淀粉、海藻酸，等等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；或調(diào)味劑如薄荷、冬青油等?？梢源嬖诟鞣N其它材料作為包衣，或另外用來改進口服劑量單位物理形式?？诜┝繂挝豢梢杂孟x膠、糖或同時用二者進行包衣。糖漿劑或酏劑可包含所述化合物、蔗糖作為甜味劑、對羥基苯甲酸甲酯或丙酯作為防腐劑、染料和調(diào)味劑。所應用的任何材料應該是藥學上可接受的和基本上無毒的。有用的賦形劑種類的詳細信息可以在第十九片反"Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,，，麥克出片反公司出片反，Easton，Pa.，尤其是第91-93章中找到更全面的討論?；衔锟梢阅c外給藥，例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)給藥。載體或賦形劑或賦形劑混合物可以是溶劑或分散介質(zhì)，該溶劑或分散介質(zhì)包含例如各種極性或非極性溶劑、其合適的混合物、或者油。這里所用的"載體"或"賦形劑"意思是藥學上可接受的載體或賦形劑，包括任何和所有的溶劑、分散劑或介質(zhì)、包衣劑、抗微生物劑、等/低/高滲試劑、吸收調(diào)節(jié)劑，等等。為藥物活性物質(zhì)而應用這些物質(zhì)和試劑是公知技術。任何常規(guī)的介質(zhì)或試劑在治療性組合物中都被考慮使用，除非其與活性成分不相容。此外，其它或輔助活性成分也可加入到最終組合物中?；衔锏娜芤嚎梢栽诤线m的稀釋劑，例如水、乙醇、甘油、液體聚乙二醇、各種油、和/或它們的混合物，及本領域技術人員已知的其它稀釋劑中制備。適合注射用的藥物形式包括無菌溶液、分散劑、乳劑和無菌粉末。最終形式在制備和儲存條件下必須是穩(wěn)定的。而且，最終的藥物形式必須防止被污染，并因此應該能抑制微生物如細菌或真菌的生長?？梢砸詥我坏撵o脈內(nèi)或腹膜內(nèi)劑量給藥?；蛘?，可以應用慢速長時間輸液或多次短時間的每日輸液，典型地持續(xù)l到8天。也可以應用隔日或每幾天給藥一次。無菌的注射溶液可以這樣制備，將需要量的化合物加入到一種或多種合適的溶劑中，上文中提到的或者本領域技術人員熟知的其它活性成分可以根據(jù)需要加入到其中。無菌的注射溶液通過將需要量的化合物加入包含需要的各種其它成分的合適的溶劑中而制備。然后緊接著是滅菌過程，例如過濾。典型地，分散劑由將化合物加入到也包含如上所述的分散介質(zhì)和需要的其它活性成分的無菌載體(vehicle)中制備。在無菌粉末的情況中，優(yōu)選的方法包括真空干燥或冷凍干燥，其中可以加入任何需要的成分。在所有情況中，正如所述，最終形式必須是無菌的并且還必須能夠迅速地通過注射裝置例如空心針。合適的粘度可以通過適當選擇溶劑或賦形劑獲得或保持。而且，應用分子或微粒包衣例如卵磷脂、適當選擇分散劑中粒徑大小，或者選用具有表面性質(zhì)的物質(zhì)都可被應用。阻止或抑制微生物的生長可以通過加入一種或多種抗微生物劑例如氯丁醇、抗壞血酸、對羥基苯甲酸酯類、thermerosal等實現(xiàn)。還可以優(yōu)選包括改變張力(tonicity)的試劑如糖類或鹽類。在某些情況中，例如其中本發(fā)明的化合物是非常難溶于水的，提供脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)是有用的。該系統(tǒng)通過脂囊泡或脂質(zhì)體或膠束結(jié)合、包封、包圍或裹入本發(fā)明化合物來限制本發(fā)明的化合物。在本發(fā)明的一個或多個實施方案中，本發(fā)明涉及治療各種形式癌癥、惡性腫瘤、和/或癌癥或惡性腫瘤的前體的方法。該方法可包括通過給藥本發(fā)明化合物或包含本發(fā)明化合物的組合物治療患者的癌癥或惡性腫瘤。該方法包括給藥有效量的本發(fā)明化合物或包含本發(fā)明化合物的組合物治療患者的癌癥或惡性腫瘤，其中的癌癥或惡性腫瘤對采用本發(fā)明化合物或包含本發(fā)明化合物的組合物的治療有響應(responsive)。如以下的進一步描述，各種癌癥或惡性腫瘤可用本發(fā)明治療。本發(fā)明化合物對治療患有癌癥、惡性腫瘤、贅生物或癌癥前體的人或動物患者是有效的。具體實例包括但不限于白血病、黑素瘤、肝癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、直腸癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、膀胱癌、促結(jié)締組織增生性小圓細胞瘤(DSRCT)、胰腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤或其任意組合。這里所用的術語"惡性腫瘤"意思是包含發(fā)生于低分化、中度分化和高度分化形式的所有形式的人或動物癌、肉瘤和黑素瘤。本發(fā)明化合物的另一個重要特征涉及根據(jù)這里的教導，給藥的前藥具有相對低或沒有明顯的整體毒性。整體毒性可用各種標準判斷。例如，患者體重損失超過初始記錄體重(即，治療前)的10%可被考慮作為一個毒性的標志。另外，患者的整體移動性和活動性的損失和腹瀉跡象或膀胱炎也可解釋為毒性的證據(jù)。CPT脂肪酸酯水合物晶體在小鼠中在可變劑量范圍內(nèi)顯示廣譜活性，沒有可觀察到的毒性。治療指數(shù)可通過在裸小鼠中測試來確定，例如來自具有腫瘤異種移植物的測試鼠的平均治療指數(shù)，該腫瘤異種移植物是膀胱、乳腺、結(jié)腸、腎、肺、黑素瘤、胰腺、前列腺、卵巢的癌癥腫瘤，和/或這里提及的任何癌癥。此外，這種藥劑的治療指數(shù)與如今臨床腫瘤學家在臨床應用的大多數(shù)抗癌藥劑相比有極大地提高。當2000mg/kg被認為是最大耐受劑量時，CPT脂肪酸酯水合物晶體的治療指數(shù)可以是2到500的范圍(例如3到500，4到50，3到10，4到15，5到20，8到20，10到20，25到500，50到500，75到500，100到500，150到500，200到500，250到500，300到500，350到500，400到500，450到500)。然而，臨床月中瘤學上目前應用的大多數(shù)抗癌藥劑的治療指數(shù)大約是l，非常窄。而且，目前應用的抗癌藥劑沒有一個能夠在有效劑量下長時間連續(xù)應用。本發(fā)明的化合物能夠以每日或每周或每月為基礎連續(xù)應用2個月、3個月到12個月、4個月到15個月、5個月到15個月、6個月到24個月，或者更長。根據(jù)各種實施方案，CPT脂肪酸酯水合物晶體可能與藥學上可接受的載體或稀釋劑組合給藥。例如，該藥物組合物可常規(guī)地含有如藥學上可接受的鹽、緩沖劑、防腐劑和/或相容的載體。這里所用的"藥學上可接受的載體"指一種或多種適合于向哺乳動物包括人給藥的相容的固體或液體填充物、稀釋劑或包囊物質(zhì)。藥學上可接受的載體可以是例如一種或多種明膠膠囊、膽固醇顆粒、脂質(zhì)以及類脂乳劑中的微混懸液(英脫利匹特10(Intralipid10)、英脫利匹特20(Intralipid20)或天然油類)、或其它適合的親脂化合物的乳化劑。包含于本發(fā)明藥物組合物中的活性成分(CPT脂肪酸酯水合物晶體)的用量可根據(jù)很多因素例如給藥途徑和使用的化合物所針對的靶標類型(如癌癥的類型)而不同。根據(jù)本發(fā)明在治療或延緩哺乳動物的惡性腫瘤中，本發(fā)明的化合物或其藥物組合物通過本領域技術人員已知的方式給藥，例如肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮或者口服?？梢詰猛ǔＲ阎姆椒?，例如口服給藥的明膠膠囊、還有用于肌肉內(nèi)給藥的脂質(zhì)和類脂乳劑中的微混懸液制劑(例如英脫利匹特20、棉籽油和花生油)，以及用于皮下長期給藥的膽固醇顆粒包含物。本發(fā)明化合物的另一種給藥方法是透皮或經(jīng)皮途徑。該實施方案的一個實例是采用貼劑。具體地，該貼劑可用本發(fā)明公開的化合物在例如二甲基亞砜(匿SO)，或匿SO與棉籽油的混合物中的微細混懸液制備，使其與離開膚用袋(skinpouch)內(nèi)的腫瘤部位的有腫瘤的哺乳動物的皮膚接觸。其它介質(zhì)或其與其它溶劑和固體載體的混合物也相同地處理。該貼劑可以包含本發(fā)明的CPT水合物的溶液或混懸液形式。該貼劑可應用于患者的皮膚，例如通過如下方式進行將其插入到患者的膚用袋中，并通過縫合、固定夾或其它固定裝置將皮膚與袋疊合并固定在一起。該膚用袋應當以這種方式來使用，保證與皮膚連續(xù)接觸而不會對哺乳動物產(chǎn)生不利影響。除了應用膚用袋外，任何能確保穩(wěn)固貼劑與皮膚接觸的裝置都可采用。例如，粘性繃帶可用來將貼劑固定在皮膚上適當位置。這里使用的"有效量"的本發(fā)明化合物是指這樣數(shù)量的化合物，其將抑制生長、或者延緩癌癥、或者殺死惡性細胞，并且引起惡性腫瘤的消退和減緩，即減小該腫瘤的體積或者大小或者完全消除腫瘤。對于哺乳動物，包括人，有效量可根據(jù)體表面積給藥。對各種大小和種類的動物以及對人的劑量變化的相互關系(基于mg/MM本表面積)描述在E.J.Freireich等，CancerChemother.Rep.，50(4):219(1966)中。體表面積可根據(jù)個體的身高和體重大致測定(參見，例如，ScientificTables,GeigyPharmaceuticals，Ardsley，N.Y.第537-538頁(1970))。本發(fā)明的喜樹堿化合物的有效量范圍每天從大約10到大約1000mg/n^體表面積。本發(fā)明的化合物或前藥優(yōu)選的有效量或有效劑量是每周兩次經(jīng)肌肉內(nèi)途徑大約1到大約100毫克前藥/千克體重，和經(jīng)口服途徑大約1到大約500毫克前藥/千克/天。本發(fā)明的CPT的衍生物或前藥的有效量或有效劑量是，例如，經(jīng)透皮給藥途徑大約1毫克/千克/周到大約100毫克/千克/周的前藥。對于所有的給藥途徑，給藥劑量的精確時間可以改變以獲得最佳的結(jié)果。通常，當使用英脫利匹特20作為前藥的載體時，到達病人的前藥的實際劑量將較少。這歸因于前藥在注射器、針頭和配制容器的壁上損失一部分，這在英脫利匹特20的混懸液中普遍存在。當應用載體例如棉籽油時，上述的損失沒有這么普遍，因為前藥粘連到注射器、針頭和配制容器等的表面沒有那么多。例如和優(yōu)選地，發(fā)現(xiàn)以肌肉內(nèi)途徑給藥，一般大約2.5毫克前藥/千克體重每周兩次應用棉籽油與4.0毫克前藥/千克體重每周兩次應用英脫利匹特20作為載體將傳遞相同量給病人。通常，大約l毫克到大約4毫克前藥加入到大約0.1毫升到大約1毫升載體中。本發(fā)明的一個或多個實施方案中，一種或多種本發(fā)明的化合物(或者包含本發(fā)明化合物的組合物)可以溶解于脂質(zhì)體中。該脂質(zhì)體可以包括，例如，脂類如膽固醇，磷脂類，或者由表面活性劑(如十二烷基磺酸鈉、辛基酚聚氧乙烯二醇或者脫水山梨醇單油酸酯)組成的膠束。通常，前藥高親和性地結(jié)合到脂質(zhì)體的脂雙層膜。該結(jié)合了脂質(zhì)體的前藥能優(yōu)先嵌入到脂質(zhì)的酰基鏈之間。喜樹堿衍生物的內(nèi)酯環(huán)、膜結(jié)合的前藥因此從脂質(zhì)體的內(nèi)部和外部的含水環(huán)境中被轉(zhuǎn)移開，從而防止水解作用。由于脂質(zhì)體結(jié)合藥物防止被水解，藥物的抗腫瘤活性得以保護。對于喜樹堿前藥來說，其對脂質(zhì)體膜具有更低的親和性，因此喜樹堿前藥從脂質(zhì)體膜分離而停留在脂質(zhì)體內(nèi)部，脂質(zhì)體內(nèi)部的PH值可能被降低，因此防止喜樹堿前藥的水解。根據(jù)本發(fā)明能應用的一組脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)包括描述在美國專利號5，552，156和5，736，156中的系統(tǒng)，在此將其全文引入作為參考。根據(jù)本發(fā)明可能應用的其它脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)，包括描述在美國專利號5，827，533和5，882，679中的含有活性藥劑與脂類或表面活性劑聚集的脂質(zhì)體；描述在美國專利號5，874，105中的用烷基銨脂肪酸鹽形成的脂囊泡；描述在美國專利號5，783，211中的包封活性藥劑干粉組合物的脂質(zhì)體；描述在美國專利號5，718，914中的用作局部貼劑的脂質(zhì)體藥物傳遞系統(tǒng)；描述在美國專利號5，631，237中的脂質(zhì)體；描述在美國專利號5，549，910和5，077，057中的脂質(zhì)體和類脂復合組合物；描述在美國專利號5，043，165中的用于緩釋類固醇藥物的脂質(zhì)體；描述在美國專利號5，013，556中的脂質(zhì)體；以及描述在美國專利號4，663，161中的脂質(zhì)體；所有這些在此全文引入作為參考。單層脂質(zhì)體，也稱單層泡囊，是由一層限定封閉腔室的類脂雙層膜所構成的球形泡囊。該雙層膜由兩層類脂構成，一個內(nèi)層和一個外層。外層的類脂分子取向是其親水的頭部部分朝向外部的含水環(huán)境，其疏水的尾部向下指向脂質(zhì)體的內(nèi)部。類脂層的內(nèi)層在外層的正下方，類脂取向是其頭部面向脂質(zhì)體的含水內(nèi)部，尾部朝向類脂外層的尾部。多層脂質(zhì)體，也稱為多層泡囊，由不止一層類脂雙層膜構成，該膜確定了不止一個封閉腔室。這些膜同心排列，以致于不同的膜通過腔室彼此分離，很像洋蔥皮。這里使用的短語"脂質(zhì)體前藥"意思是一些或所有喜樹堿前藥位于脂質(zhì)體或者膠束的一個或多個腔室中，或者喜樹堿前藥結(jié)合到脂質(zhì)體的膜上。這種傳遞系統(tǒng)可以是由捕獲喜樹堿前藥的類脂雙層膜構成的脂質(zhì)體。在此使用的短語"結(jié)合到類脂膜"意思是一些或所有喜樹堿前藥的至少內(nèi)酯環(huán)結(jié)合到脂質(zhì)體的類脂膜上，并且該脂質(zhì)體包含不止一個雙分子膜，喜樹堿前藥結(jié)合到至少l層膜上。那些對這種膜有高親合力的喜樹堿前藥傾向于保持結(jié)合在膜上，對脂質(zhì)體膜有低親合力的那些喜樹堿前藥將至少部分地從脂質(zhì)體膜上解離下來并存在于脂質(zhì)體腔室內(nèi)。這里定義的膠束是由單一的單層膜構成的球狀貯器(rec印tacle)，該單個的單層膜確定封閉的腔室，并且該膜由表面活性劑分子構成，烴的尾部指向腔室，極性頭部指向外部的含水環(huán)境。當與膠束結(jié)合時，喜樹堿前藥或者在腔室內(nèi)結(jié)合于膠束膜，或者結(jié)合在膠束的外表面上。脂質(zhì)體已經(jīng)被成功地用于將藥物給藥給癌癥病人，并且在傳遞抗癌藥物例如多柔比星、柔紅霉素和順鉑復合物的過程中已經(jīng)顯示在臨床上是有用的。Forssen等，CancerRes.1992,52:3255-3261;Perez-Soler等，CancerRes.1990,50:4260-4266;和Khokhar等，J.Med.Chem.1991,34:325-329，所有這些在此全文引入作為參考。類似地，膠束也已經(jīng)用于將藥物傳送給病人(Brodin等，ActaPharm.Suec.19267-284(1982))，膠束已經(jīng)被用作藥物載體和傳送耙向藥物，(D.D.Lasic，Nature335:279-280(1992);和Supersaxo等，Pharm.Res.8:1286-1291(1991))，包括癌癥藥物(Fung等，Biomater.Artif.Cells.Artif.0rgansl6:439及以后(1988);和Yokoyama等，CancerRes.51:3229-3236(1991))，所有這些在此全文引入作為參考。包含喜樹堿前藥的本發(fā)明的脂質(zhì)體和/或膠束可以給藥于癌癥病人，通常通過靜脈內(nèi)給藥。脂質(zhì)體和/或膠束被循環(huán)系統(tǒng)帶到癌癥細胞，在那里泡囊膜與癌癥細胞膜融合，從而將喜樹堿前藥釋放到癌癥細胞；或者脂質(zhì)體和/或膠束保持鄰接癌細胞，喜樹堿前藥從脂質(zhì)體和/或膠束中擴散出來被癌細胞攝取。形成脂質(zhì)體和/或膠束的任何類脂或者類脂混合物都適用于本發(fā)明。磷脂酰膽堿是合適的，其包括例如L-a-二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、L-a-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和L-a-二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)。磷脂酰甘油也是合適的，其包括例如L-a-二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)。DMPC和DMPG在37。C都是液態(tài)相，而DSPC在37°C是固態(tài)相。由于脂質(zhì)體膜中存在帶負電荷的類脂，導致脂質(zhì)體彼此互相排斥，少量的，例如大約10%的帶負電荷的類脂，例如二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)可以混入DSPC脂質(zhì)體中。其它合適的磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和包含月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、花生四烯酸、山崳酸和木蠟酸的磷脂酸。其它合適的類脂包括膽固醇。脂質(zhì)體和/或膠束可用聚乙二醇或幫助粒子避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的GM1蛋白包衣。DSPC，由于其在37°C(人的平均溫度)是固態(tài)相，限制了喜樹堿前藥(drug)從脂質(zhì)體擴散，因此可以被用來延時釋放喜樹堿前藥。DMPG、DPPC和DSPC可從AvantiPolarLipids,Alabaster,Ala.獲得，不需進一步純化直接使用。全部其他化學試劑可以是試劑級并且不需進一步純化直接使用。形成膠束的任何表面活性劑或者其混合物都適用于本發(fā)明。合適的表面活性劑包括十二烷基硫酸鈉(SDS)，其由Kodak,Rochester,N.Y.得到，辛基苯酚聚氧乙烯乙二醇，其由AldrichChemicalCo.，Milwaukee,Wis.以商品名"TritonX-100"得至lj，以及脫水山梨醇單油酸酯，其由SigmaChemicalCo.以商品名"聚山梨酯80"和"吐溫80"得到。其它合適的表面活性劑包括，例如脫氧膽酸鈉鹽、膽酸鈉鹽和聚氧乙烯-10-十六烷基醚，以商品名稱"BRIJ-56"得到；這些表面活性劑都可從SigmaChemicalCo.得到。另外，膠束可由類脂構成，例如磷脂、和類脂混合物。膠束也可以由類脂和表面活性劑二者組成。脂質(zhì)體混懸液可以由Burke和TrittonBiochemistry24:1768-1776(1985)的方法制備，在此將該文獻整體引入作為參考。脂質(zhì)體優(yōu)選是小單層泡囊(SUV)而不是多層囊泡(MLV)。不過，SUV和MLV都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。然而MLV在限制相關的喜樹堿前藥的擴散速率方面具有優(yōu)點，與SUV相比他們的缺點是更容易被巨噬細胞清除。在含有8mMNa2HP04、lmMKH2P04、137mMNaCl和3mMKC1、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)中的含有200mg/ml類脂的stock類脂混懸液可以被應用，其通過在類脂的凝膠液晶相轉(zhuǎn)變溫度1以上由渦流混合5-10分鐘制備。然后類脂混懸液在由LaboratorySuppliesCo.，Hicksville，N.Y.提供的浴式超聲波發(fā)生器中超聲處理3-4小時，直到其變成光學透明。在DMPG的SUV制備過程中可能會觀察到pH值從7.4降低至6.8;因此，這些SUV混懸液的pH值優(yōu)選用少量2.5MNaOH的PBS溶液調(diào)節(jié)到7.4，再次超聲處理。每種類型的脂質(zhì)體混懸液優(yōu)選在37。C退火(anneal)30分鐘。很多脂質(zhì)體和膠束的制備描述在美國專利號5，552，156、7，244，449和5，736，156中，在此整體引入作為參考。"前藥"可以是通過基團加成衍生化以賦予希望傳遞的化合物更高溶解性的衍生化合物。一旦進入體內(nèi)，前藥通常通過酶例如酯酶、酰胺酶或者磷酸酶的作用，產(chǎn)生活性化合物。術語"烷基"，單獨或組合使用，是指具有1到6個碳原子，優(yōu)選2到4個碳原子，任選取代的直鏈、任選取代的支鏈、或任選取代的環(huán)狀烷基。烷基的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、叔戊基、戊基、己基，等等。術語"環(huán)烷基"具有環(huán)狀結(jié)構，包含在烷基的定義中，并且具體地指單環(huán)、二環(huán)、三環(huán)和高級的多環(huán)烷基，每個環(huán)狀部分具有3到約6個碳原子。環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。"有效量"或者"有效劑量"可以指為抑制不希望的細胞生長，例如防止不希望的細胞生長，或者降低現(xiàn)有的細胞生長，例如腫瘤細胞生長，所必要或足夠的數(shù)量。有效量可以依賴于為本領域技術人員所知曉的因素而不同，例如細胞生長的類型、給藥的方式和方案、患者的大小(size)、細胞生長的嚴重程度，等等。本領域技術人員能夠考慮到這些因素并且對有效量作出決定。這可以從本發(fā)明獲得。"治療上有效的抗腫瘤療法"指有效地保持或者減少原發(fā)腫瘤或者轉(zhuǎn)移性腫瘤的大小(如體積)的治療方法。這可以從本發(fā)明獲得。根據(jù)本發(fā)明的一個或多個實施方案，提供了制備喜樹堿脂肪酸酯水合物晶體的方法，該方法包括使起始喜樹堿化合物與至少一種經(jīng)至少一種酸(例如硫酸)質(zhì)子化的酰化劑反應的步驟。?；瘎┛砂瑢⒃谄鹗枷矘鋲A上形成的酯基。產(chǎn)生的喜樹堿酯是CPT的脂肪酸酯水合物晶體。在至少一個實施方案中，產(chǎn)生的喜樹堿酯是喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體(CZ48水合物)。根據(jù)至少一個實施方案，起始喜樹堿化合物是CPT。起始喜樹堿化合物的量可以是任何希望的量，只要存在足夠的?；瘎⒅辽僖徊糠制鹗枷矘鋲A轉(zhuǎn)化為在此描述的喜樹堿酯。例如，起始喜樹堿化合物的數(shù)量可以是從大約lg到大約100g或更多。關于酰化劑，在一個或多個實施方案中，?；瘎┩ǔ０谄鹗枷矘鋲A上形成的酯基。?；瘎┛梢允怯袡C酸衍生物，例如酸酐。例如，酰化劑可具有式0^C0h0，其中W代表有機基團，一般地W基團是形成連接到起始喜樹堿化合物上的酯的有機部分的基團。更具體地，僅為舉例的目的，R1基團可以是烷基，例如C「Ce烷基。R1基團的具體例子包括，但不限于_CH2CH3、-CH2CH2CH3、_CH2CH2CH2CH3或_CH2CH2CH2CH2CH2CH3。用于本發(fā)明反應的?；瘎┑牧靠梢允亲銐虻牧?，以便在起始喜樹堿化合物上形成酯基。酰化劑的適宜量包括但不限于，基于酰化20g到30g的起始喜樹堿，從大約10mL到大約1L的?；瘎?。如下所述的例子提供了可以用于反應的?；瘎┑拇砹?。關于本發(fā)明的反應中應用的酸，該酸可以是催化量，以便于用有機酸衍生物例如酸酐?；鹗枷矘鋲A的反應能發(fā)生。該酸可以是硫酸或者其他酸例如HCl、HN03或HC104。該酸可以是濃酸例如濃硫酸。該酸可以是任何摩爾濃度，例如從大約0.0001到大約0.02M或更高。用于反應的酸的量可以是催化量，例如與每20g到30g的起始喜樹堿反應用從大約0.1ml到大約1.Oml，更優(yōu)選從大約0.20ml到大約0.75ml或者大約0.5ml的酸。用來催化酯化反應的酸的量依賴于有關反應的規(guī)?？梢圆煌?。本發(fā)明中，根據(jù)一個或多個實施方案，各種反應物可以按任意順序組合在一起，或者逐個加入、同時加入或者任意組合加入。任何反應器都可使用。該反應可以在反應物的凝固點以上的任何溫度發(fā)生，例如從大約2(TC或者更高。該反應可以在環(huán)境溫度或者升高的溫度下發(fā)生，例如大約2(TC到大約ll(TC或者更高。該反應可以在短時間內(nèi)發(fā)生，例如從l分鐘到l小時或更長。反應時間由使用的反應物的量、以及起始CPT到喜樹堿酯的需要轉(zhuǎn)化的量決定。該反應能在惰性環(huán)境中或者在空氣中發(fā)生。惰性環(huán)境的例子可以是氮氣環(huán)境或者氬氣環(huán)境。根據(jù)各實施方案，反應的產(chǎn)率可以是至少起始喜樹堿反應物(product)重量的95%到100%轉(zhuǎn)化成喜樹堿酯。在至少一個實施方案中，反應的產(chǎn)率是喜樹堿反應物的大約97%到100%轉(zhuǎn)化成喜樹堿酯。起始CPT或者反應物的純度和/或濃度是不重要的。不同的純度和不同的濃度可能會影響由反應形成CPT酯的百分比產(chǎn)率。優(yōu)選地，起始CPT反應物的純度從大約30%到大約100%。更優(yōu)選地，純度從約80%到約100%或者90%到99.9%或者更高。優(yōu)選地，反應物CPT或者CPT衍生物的量是反應物總量的大約0.1到大約50%;更優(yōu)選地，該量是反應物總量的從大約0.5到大約5.0%。只要酸中的雜質(zhì)不與CPT或者?；瘎┢鸱磻岬膒H值、濃度和純度就是不重要的。酸的酸度應該足夠強，能將反應所用的酰化劑質(zhì)子化。強無機酸例如H^(VHC1、HN03和HC104具有這種能力。其他酸如A1C13和BF3可以用于這類催化的酯化反應。酸的pH值可以是從大約0.5到大約5。優(yōu)選地，該酸是濃酸并且是高純度的。例如，濃度可以是從大約60%到大約100%。優(yōu)選地，濃度從大約95%到大約98%。酸的純度可以是從大約30%到大約100%。優(yōu)選地，純度是從大約90%到大約100%。優(yōu)選地，酸例如濃硫酸的用量是反應物總量的大約0.1到大約10%。更優(yōu)選地，用量是反應物的總量的大約0.5%到大約8.5%。優(yōu)選地，在混合物攪拌過程中，向CPT和酸酐的混合物中加入酸。優(yōu)選地，加入到混合物中的酸的量足以使酸作為催化劑。優(yōu)選地，向大約70-100ml酰鹵中可以用玻璃移液管加入大約4到大約8滴酸(當?；瘎┎皇酋｛u時可加入相當量的酸)。然而，如有必要，或多或少的酸可以加入到CPT和酸酐的混合物中，優(yōu)選地是在混合物攪拌過程中加入。CPT、酸酐和酸的混合物可以放于反應器中，反應器優(yōu)選包括惰性氣氛，例如N2，并且可以加熱到大約8(TC到大約120°C。優(yōu)選地，該混合物加熱到大約9(TC到大約ll(TC，和更優(yōu)選地，該反應器加熱到大約100°C。優(yōu)選地，反應將進行直到需要的產(chǎn)物形成。反應時間可以短至幾小時到長達幾天。優(yōu)選地，在惰性氣氛例如N2中反應時間可以是大約15個小時。該反應的一個例子描述在下面的方案1中方案l盡管不希望受任何理論約束，但是認為用酸例如硫酸將?；瘎?RC0X)質(zhì)子化形成活性中間體A。中間體A的陽離子羰基碳原子與喜樹堿連接形成中間體B，隨后從B消除一分子XH得到最終的酯產(chǎn)物。反應完成后(這可通過溶液的顏色變化確定)，可以將溶液冷卻到室溫。通過任何通常已知的分離方法，例如蒸發(fā)法或過濾法可以除去溶劑。在除去反應溶劑后，獲得的粗產(chǎn)物可以通過在醇溶劑例如乙醇中回流純化。最終產(chǎn)物通過從醇中重結(jié)晶和/或重沉淀以晶體形式獲得。已經(jīng)制備了具有極低毒性的并保留抗腫瘤活性的新喜樹堿酯，例如CPT的脂肪酸酯水合物晶體如喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體。根據(jù)一個或多個實施方案，CPT的脂肪酸酯可以通過如下反應所描述的H2S04催化的?；磻苽?。方案2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>如上所示，起始喜樹堿可與丙酸酐在濃硫酸催化下反應。然后反應混合物用過量水結(jié)束反應，除去未反應的丙酸酐和反應中形成的丙酸。粗產(chǎn)物從無水乙醇(或者其他溶劑，如其他醇)中結(jié)晶，幾乎以定量產(chǎn)率得到最終的喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體。這也將適用于本發(fā)明的其它CPT酯。應當理解在此所用的短語"定量產(chǎn)率"可包括97%-100%的重量百分比產(chǎn)率。從反應獲得的產(chǎn)物的純度是大約99%-100%。產(chǎn)物的熔點是大約240°C-243°C。本發(fā)明通過下面的實施例將得到進一步闡述，但這些實施例僅僅是本發(fā)明的舉例說明。實施例實施例1喜樹堿-20-0-丙酸酯(CZ48)水合物晶體按如下方法制備。將大約20克喜樹堿(0.05747摩爾)和大約100毫升丙酸酐(97%，AldrichChemicalCo.，Milwaukee,WI)加入到裝有磁力攪拌器和沙浴的200毫升圓底燒瓶中?；旌衔镌跀嚢柘陆?jīng)沙浴加熱。當沙浴溫度達到8(TC時滴加幾滴(8到10滴)濃硫酸(95-98%，A.C.S.試劑，AldrichChemicalCo.)。然后該混合物在110士1(TC攪拌過夜(14小時)。冷卻至室溫后，攪拌下將反應混合物一份一份地傾倒入1000毫升冰水中。攪拌大約45分鐘后，過濾混合物。從過濾獲得的濾渣風干24小時，將干燥的粗產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到裝有加熱套的500毫升圓底燒瓶中。向該粗產(chǎn)物中加入200毫升無水乙醇(99.5%，200proof，AldrichChemicalCo.)，混合物回流2小時，然后冷卻到室溫。從乙醇中結(jié)晶后得到晶體形式的純的產(chǎn)物。使用高效液相色譜法(HPLC)測定顯示99.8%的純度，熔點(mp)測定為242。C。在制備的全部反應中干燥的氮氣常規(guī)地用作反應氣氛。使用前所有的玻璃器具都在70+/-101:烘烤最少2小時。通過MEL-TEMP⑧熔點儀得到熔點，未經(jīng)校正。喜樹堿從中華人民共和國購買并且像購買的那樣使用。體內(nèi)抗腫瘤活性的測定。在此討論的用于實驗的人腫瘤包括1個膀胱癌細胞株(bladderline)，3個乳腺癌細胞株，4個結(jié)腸癌細胞株，1個DSRCT細胞株，1個腎癌細胞株，2個黑素瘤細胞株，2個肺癌細胞株，7個胰腺癌細胞株和1個前列腺癌細胞株。將水合的CZ48晶體藥物微細地懸浮于棉籽油中并于冰箱中保存?zhèn)溆?。對負荷人腫瘤的小鼠通過口服給藥混懸液，每天一次連續(xù)5天再停藥2天，或者在整個治療過程中每天一次給藥七天。對不同的腫瘤細胞株的治療周期不同，從兩周到一年。對于測試的這些腫瘤細胞株中，18株獲得了陽性反應，換句話說，采用5天給藥2天不給藥的時間表，在腫瘤生長抑制作用中超過50%的抑制作用，有2個胰腺腫瘤細胞株沒能得到陽性反應。在連續(xù)的時間表(每天治療)中，在5/2時間表中顯示陰性反應的兩個胰腺腫瘤細胞株之一得到了陽性反應。表1總結(jié)了這些結(jié)果。表1.水合的CZ48晶體對裸小鼠中的人異種移植物的抗腫瘤活性<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>a.陽性反應意思是生長抑制率超過50%。b.陰性反應意思是生長抑制率低于50%。雖然陽性反應定義為至少50%的生長抑制率，實際上，很多腫瘤細胞株得到了完全的生長抑制作用。得到陽性反應需要的有效劑量因腫瘤的類型不同而不同。對于CLO-乳腺癌，測試腫瘤庫中最敏感的腫瘤細胞株，用水合的CZ48晶體的低劑量例如4mg/kg就得到了完全的抑制作用，但是，對于3種低敏感的細胞株，CAK-腎癌、PANC1-胰腺癌和SU86.86-胰腺癌得到陽性反應需要的劑量高達1000mk/kg。實施例2體內(nèi)抗腫瘤活性的測定。全部動物試驗都在NIH的高生育率株的瑞士裸小鼠上進行。它們在嚴格的無病原條件下的實驗室中喂養(yǎng)。對于抗腫瘤活性的測定，大約lcm3大小的在裸小鼠體內(nèi)生長的腫瘤異種移植物在無菌條件下通過外科手術切除，用虹膜切除術剪刀切碎，按l:10(v/v)比例懸浮于細胞培養(yǎng)基中。半毫升該混懸液，包含濕重大約50mg的腫瘤切碎物，皮下接種到小鼠胸背(dosalthorax)的上半部。每組用四或五只動物。水合的CZ48晶體微細地懸浮于棉籽油中，然后用26號針頭通過前腹壁注射到小鼠的胃腔里。用于水合的CZ48晶體口服給藥的每周時刻表是每天一次連續(xù)7天，或者五天給藥2天不給藥。該時間表在動物試驗的整個過程中使用。當腫瘤達到大約200mmM本積即血管形成良好、可測量和呈指數(shù)生長時開始治療。動物體內(nèi)生長的腫瘤每周一次檢查和用卡尺測量。當小鼠中的陽性反應出現(xiàn)時，確定了有效劑量。結(jié)果顯示在表2中。表2.水合的CZ48晶體對腫瘤細胞株的有效劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>-McC3007-SQU3067-SW4810020DSRCT-MYE10020腎癌-CAK10002肺癌-DOY15133-SPA10020黑素瘤-BRO10020-FOSS3007胰腺癌-ASPC13007-HS766T10020-LIE10020-MiaPaCa2濯20-PANCl10002-SU86.8610002前列A泉癌-PC3P623007a.TI根據(jù)假定最大耐受劑量2000mg/kg計算。如表2中所示，如果假定2000mg/kg是最大耐受劑量，喜樹堿_20_0-丙酸酯水合物晶體具有寬的治療指數(shù)，從三個不敏感(tough)細胞株的2到最敏感細胞株(CLO-乳腺癌)的500。實施例3體內(nèi)毒性測定。每組選擇具有幾乎相同年齡和具有相同的體重的4或5只動物，分別用CZ48水合物晶體以1500mg/kg和2000mg/kg的劑量口服給藥治療，連續(xù)60天。選出用于毒性研究的3組小鼠為健康鼠，具有相同的年齡和體重，沒有負荷腫瘤。一組用作對照，其它兩組用兩個高劑量水平藥物，分別為1500mg/kg和2000mg/kg治療大約兩個月。從第0天開始到第60天結(jié)束的治療期間，將治療組與未治療組動物的體重變化記錄下來。結(jié)果如表3所示。表3.裸小鼠中CZ48水合物晶體的毒性a<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>a.測定體重所用的標準每年修訂和認證。b.圓括號內(nèi)的數(shù)字是SD。最引人注目地，任何測試的劑量水平下沒有觀察到受試小鼠中顯著的毒性。體重減輕用作評價藥劑毒性的一個參數(shù)。通常，在治療中小鼠的體重減輕10%或更多被認為是一種毒性癥狀。更多的體重減輕表示更大的毒性。此治療沒有導致顯著的體重減輕，這表明所用的劑量水平對小鼠是無毒的，以及小鼠能耐受甚至高于2000mg/kg的劑量。用喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體在小鼠體內(nèi)連續(xù)治療產(chǎn)生更寬的治療指數(shù)范圍，并且沒有導致任何顯著的毒性。實施例4CZ48水合物晶體的PK參數(shù)的測定。在向裸小鼠口服給藥后記錄了在2000mg/kg單劑量下喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體的藥物代謝動力學特征。相應的Cmax和Tmax分別是284.86±85.55ng/mL和2.0±0.0小時。喜樹堿-20-0-乙酸酯是CZ48的類似物，不是水合物晶體，它用作測定CZ48水合物的所有PK參數(shù)的內(nèi)標。將來自經(jīng)CZ48水合物晶體在2000mg/kg劑量下治療的小鼠的100iiL血槳轉(zhuǎn)移到一個2ml的試管中，然后向試管中加入100iiL內(nèi)標工作溶液(400ng/ml)。向混合物中加入200yL的1%的醋酸溶液和lmL乙醚。在旋渦混合10秒之后，該混合物于室溫下在振動器上培養(yǎng)10分鐘，然后在10000Xg下離心15分鐘，從離心獲得的上層轉(zhuǎn)移到潔凈的試管內(nèi)，用蒸發(fā)器在氮氣流下于4(TC蒸發(fā)至干。殘余物重新溶解在200iiL水/乙腈(50/50，v/v)溶劑系統(tǒng)中，將一份20yL等分試樣注射到分析用HPLC系統(tǒng)。為了研究，將100iiL來自沒經(jīng)治療的小鼠的空白血漿以與經(jīng)治療的同樣方式處理。從HPLC分析得到了48只小鼠中CZ48水合物和CPT的重要PK參數(shù)并且列表4中。表4.小鼠中以2000mg/kg劑量口服給藥后水合的CZ48晶體及其主要代謝物CPT的藥物代謝動力學參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例5在小鼠中CZ48水合物晶體的百分比吸收度的測定。吸收研究也采用喜樹堿-20-0-丙酸酯水合物晶體，通過在4只裸小鼠上使用小鼠灌注操作進行。在原位單通道灌注操作之前，制備由9.801g/LHBSS粉、0.372g/LNaHC03、3.502g/L葡萄糖、5.963g/LHEPES和1.164g/LNaCl構成的HBSS緩沖液(pH值7.4)并保存在冰箱里。該方法的灌注液通過混合一定量的藥物CZ48水合物晶體和一定量HBSS緩沖液制備。該混合物在臨用前加熱到37t:(體溫)。將體重范圍從25到30克、年齡范圍從9到11個月的一組4只小鼠麻醉并放在一個加熱板上。該加熱板保持恒溫37t:。在對小鼠的灌注系統(tǒng)準備好以后，腸的兩個部分(小腸(IS)和結(jié)腸)用新制備的灌注液同時灌注。在整個灌注過程中泵保持0.191mL/分鐘的恒定流速。兩個灌注樣品每30分鐘從每個出口(SI或結(jié)腸)收集。來自出口的灌注液中藥物的濃度用HPLC分析法測定，相應的百分比吸收度相對于開始的藥物量計算，并顯示在表5中。表5.小鼠灌腸的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>如表5所示，顯著的吸收度發(fā)生在小腸道。記錄的結(jié)腸道負的百分比吸收度表明從結(jié)腸道出來的藥物量比最初投入小鼠的十二指腸入口(mouthtract)的量多。這可能歸因于由于多重吸收/流出循環(huán)而導致藥物在結(jié)腸道積累。CZ48水合物晶體的晶體結(jié)構的確定。單晶X-射線分析用裝有CCD面積檢測器的西門子SMART衍射儀測定。在-6(TC的冷氮氣流下，將具有0.4X0.08X0.02毫米的尺寸的晶體固定在玻璃纖維上。用單色M。Kw輻射'(AK).71073A)通過窄框法(narrow-framemethod)來收集完整的半球數(shù)據(jù)。該數(shù)據(jù)用西門子SAINT程序積分，根據(jù)洛倫茲因子、極化作用、空氣吸收和路徑長度變化引起的吸收校正強度。使用經(jīng)驗吸收校正并平均多余的反射。最終的晶胞參數(shù)用I>10。(I)的1971反射精修(refine)。四方晶胞參數(shù)是a=15.008(2)A,b=6.977(1)A，c=21.810(3)A，P=99.959°，V=2249.2(5)A3,Z=4，P=1.354g/cm3，2emax=56.66°。該結(jié)構以空間群P2工(No.4)直接法計算，并且以F2全矩陣最小二乘法精修，所有C、N、0原子的熱運動經(jīng)各向異性處理。最后的R指數(shù)[I>2o(I)]，Rl=0.0454，wR2=0.0763，R指數(shù)[全部數(shù)據(jù)]，Rl=0.1105，wR2=0.0933。全部計算都由西門子SHELXTL程序包執(zhí)行。[C23H2。N205]3H20的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構精修顯示在表7中。[C23H2。N205]'3H2。的原子坐標(X104)和等價各向同性位移參數(shù)(A2X103)顯示在表8中。[C23H2。N205]3H20的鍵長[A]和鍵角[°]顯示在表9中。[C23H2。N205]3H20的各向異性位移參數(shù)(A2xIO"顯示在表10中。0176]表7.[C23H20N205]31120的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構精修0177]識別碼T940178]經(jīng)驗式C23H26N2080179]分子量458.460180]溫度213(2)K0181]波長0.71073A0182]晶系單斜晶系0183]空間群P2丄0184]單胞尺寸a=15駕(2)Aa=90°0185]b=6.9769(10)AP=99.959(2)°0186]c=21.810(3)Ay=90°0187]體積2249.2(5)A30188]z40189]密度(計算)1.354g/cm30190]吸收系數(shù)0.103mm—10191]F(000)9680192]晶體大小0.40X0.08X0.02mm30193]e數(shù)據(jù)收集范圍1.53到28.33°0194]指數(shù)范圍-20《h《15，-8《k《9，-28《1《210195]收集反射141620196]獨立反射14162R(int)=0.04960197]完全9=28.33°95.6%0198]吸收校正根據(jù)經(jīng)驗最大和最小透射(transimission)精修方法數(shù)據(jù)/約束(restraints)/參數(shù)F2的擬合度最終R指數(shù)[I>2o(I)]R指數(shù)(全部數(shù)據(jù))消光系數(shù)最大衍射峰和空穴表8.[C23H2。N205]3H20的原子坐標0.8092和0.7004F2全矩陣最小二乘法14162/1/6330.780Rl=0.0454，wR2=0.0763Rl=0.1105，wR2=0.09330.00000(11)0.168和-0.172e.A-3(xio4)和等價各向同性位移參數(shù)(A2xi03)yzU(eq)c(i)-1249(2)734(5)1218(2)45(1)C(2)-2180(2)697(5)1137(2)51(1)C(3)-2705(2)747(5)543(2)54(1)C(4)-2300(2)845(5)31(2)47(1)C(5)-1338(2)864(5)89(2)37(1)C(6)-816(2)826(4)697(2)3S(1)C(7)-894(2)886(4)-432(2)39(1)C(8)27(2)877(4)-327(2)33(1)C(9)491(2)903(4)291(1)30(1)C(IO)695(2)831(5)-764(1)36(1)c(ii)1471(2)938(4)284(2)33(1)C(12)2388(2)759(5)-528(2)35(1)C(13)3157(2)772(4)-34(2)34(1)C(14)3067(2)920(4)572(1)32(1)C(15)2199(2)993(4)744(1)35(1)C(16)4063(2)652(5)-223(1)39(1)C(17)4698(2)-38(5)863(2)43(1)C(18)3920(2)1101(5)1050(1)36(1)C(19)4191(2)3246(4)1112(1)39(1)C(20)5039(2)3639(5)1599(2)53(1)C(21)3547(2)-1319(5)1731(2)42(1)C(22)3391(2)-1700(5)2375(2)55(1)C(23)3057(2)-3713(5)2462(2)69(1)C(24)-1296(2)7496(5)6345(2)43(1)C(25)-2208(2)7380(5)6318(2)50(1)C(26)-2779(2)7338(5)5734(2)52(1)C(27)-2434(2)7452(5)5201(2)46(1)C(28)-1494(2)7557(4)5214(2)33(1)C(29)-919(2)7572(4)5799(2)34(1)C(30)-1101(2)7601(4)4672(2)37(1)C(31)-179(2)7612(5)4735(2)310)C(32)338(2)7628(5)5341(2)30(1)C(33)448(2)7597(5)4262(1)36(1)28C(34)]296(2:7576(5)5291(2)32(1)C(35)2136(2〕7419(4)4429(2)35(1)C(36)2932(2〕7290(4)柳3(2)33(1)C(37)2卯1(2〕7376(4)5517(2)31(1)C(38)2060(2〕7521(4)5730(1)33(1)C(39)3818(2)7072(5)4672(2)45(1)C(40)4509(2)6193(5)5742(2)42(1)C(41)3786(2)7434(5)5964(1)32(1)C(42)4111(2)9549(4)6027(2)42(1)C(43)4985(2)9880(5)6493(2)52(1)C(44)3461(2)4998(5)6663(2)37(1)C(45)3447(2)4602(5)7329(2)51(1)C(46)3242(2)2520(5)7463(2)63(1)N(l)120(2)881(4)797(1)38(1)N(2)1565(2)84(4)-331(])33(1)N(3)17(2)7618(4)5863(1)34(1)N(4)1344(2)7534(4)4668(1)31(1)O(l)2435(1)639(3)-1088(1)44(1)0(2)4756(1)-117(3)255(1)49(1)0(3)5289(2)-760(3;)1231(1)57(1)0(4)3788(1)526(3)I658()39(1)0(5)3469(1)-2474(3)1308(1)54(1)0(6)2142(1)7384(3)3柳(！)45(1)0(7)4502(1)6092(3)5127(1)48(1)0(8)5108(1)5412(3)60910)55(1)0(9)3704(1)6866(3)6584(1)35(1)o(io)3291(1)3905(3)6238(1)47(1)0(11)柳(2)8164(4)2777(1)59(1)0(12)1226(2)1248(4)2025(1)56(1)0(13)602(2)4974(4)2037(1)即)0(14)1264(2)7001(4)7044(2)63(1)0(15)802(2)3200(5)7072(2)83(1)0(16)-1229(3)5058(4)2183(2)59(1)>q)定義為正交U"'張it的跡(trace)的三分之一表9.[C23H20N205]3H20的鍵長[A]和鍵角[°]C(l)-C(2)1.378(4)C(1)國C(6)1.404(4)C(2>C(3)1.393(5)C(3)-C(4)1.362(4)C(4)-C(5)1.428(4)C(5)-C(7)1.413(4)C(5)-C(6)1.418(4)C(6)隱即)1.385(3)C(7)-C(8)1.362(4)C(8)-C(9)1.407(4)1.498(4)C(9)-N(1)1-317(4)C(9>C(11)1.473(4)C(10)-N(2)1.473(3)C(ll)-C(15)1.351(4)C(l1)-N(2)1.375(4)C(12)鄰)1.238(3)C(12)-N(2)1.377(3)C(12)-C(13)1.437(4)C(13)-C(14)1.355(4)C(13>C(i6>1.490(4)C(14)-C(15)1.4,)C(14)-C(18)1.510(4)C(16)-0(2)1.443(3)C(17)-0(3)1.199(3)C(i7>0(2)1,345(4)C(17)-C(18)1.526(4)C)1.433(3)C(18)鄰9)1.551(4)C(19>C(20)1.536(4)C(21)鄰)1.215(4)印1)-0(4)1.354(4)C(21>-C(22)1.487(4)C(22)"C(23)1.515(5)C(24)-C(25)1.361(4)C(24>C(29)1.405(4)C(25)-C(26)1.409(5)C(26)-C(27)1.354(4)C(27)-C(28)1.409(4)C(28)"C(30)1.408(4)C(28)-C(29)1.413(4)C,N(3)1.388(3)C(30)-C(31)1.368(4)C(31)-C(32)1.411(4)C(3I>C(33)1,512(4)C(32)-N(3)].31〗(4)C(32)-C(34)1.460(4)C(33)-N(4)1,477(3)C(34)-C(38).362(4)C(34)-N(4)1.373(4)C(35)部)1.223(3)C(35)-N(4)1-380(3)C(35)"C(36)1.440(4)C(36)-C(37>1.348(4)C(36)-C(39)1.508(4)C(37)-C(38)1.423(4)C(37)隱C(41)1.507(4)C(39)-0(7)1.468(3)C(40)-O(8)1.204(3)C,0(7)1.340(4)C(40)-C(41)1.531(4)C(41)-0(9)1.434(3)C(41)隱C(42)1.553(4)C(42)-C(43)1.532(4)C(44)-O(10)U92(4>C(44)-0(9)1.372(4)C(44)-C(45)1.483(4)C(45)-C(46)1,524(4)C(2)-C(l)-C(6)119.8(3)C(l)-C(2)《(3)121.1(3)C(4)-C(3>C(2)120.1(3)C(3)-C(4)-C(5)121.0(3)C(7)-C(5)-C(6)119.5(3)0(5)-C(21》0(4)C(20>C(19K:(18)c(17)-C(18K;(,.9)C(14)-C(18)-c(，9)0(4)-C(18〕-c(19)C(14)-C(18KX17)0(4>c(18)-C(17)0(4)-C(，8)-C(14)0(2)-C(〗7)"c(18)0(3)-c(17)-C(18)0(3》c(17)-0(2)0(2)-c(16)-C(13)c(")響c(15k:(14)c(15)-C(14)-C(18)C(13>c(14)-c(18)C(I3)-c(14)陽C(15)C(12)-C(13)-C(16)C(4)-C(13H:(16)C(14)-c(13)-C(12)N(2》C(12)-C(13)0(1>C(〗2)-c(3)0(1KX")-N(2)N(2)_c(11)-c(9)C(15)-C(ll)-c(9)c(I5)-c(11)-N(2)N(2)-C(10)-C(8)C(8)-c(9)-c(ll)N(ll)N(l)-C粉CWC(9)-c(8)-C(10)C(7)-C(8)"c(10)c(7)-C(8)-C(9)C(8)-C(7)-C(5)C(l)-C(6)-c(5)N(1>C(6)-C(I)C(6>C(5>C(4)C(7)-C(5)-c(4)00—ONOn00LA《〔0215U0(5)-c(21)-c(22)0(4丫c(21)-c(22)c(21)-c(22)-c(23)c(25)，c(24)-c(29)C(24)，G(25)-C(26)c(27丫c(26)-c(25)c(26)-c(27)-c§c(30).c(28)-c(27)c(30)—c(28)-c(29)c(27)-c(28)-c(29)N(3)-c(29)-c(24)Ns-C(29)-C(28)c(24)-c(29)-c(28)門(31)-c(30)-c(28)C(30)-C(31KX32)c(30)-c(31)-c(33>C(32K!(31)，0(33)N(3YC(32丫C(31)N(3)-c(32)-c(34)C(3I)-C(32YC(34)N(4)-C(33丫c(31)C(38)-C(34)，N(4)c(38)，c(34)-c(32)N(4)-c(34)-。(32)0(6)-c(35)-N(4)GK6)-C(35)-C(36)N(4YC(35K:(36)c(37)-c(36)-c(35)C(37)-C(36K:(39)c(35)-c(36)，c(39)c(36)-c(37)-c(38)c(36)-0(37)-c(41)C(38)-C(37YC(41)門(34)-c(38)，G(37)CX7K:(39丫C(36)os,G(40)-o(7)O(s)，o(40)-C(41)o(7)-c(40YC(41)126.1(3)111.6(3)113.2(3)121.0(3)119.4(4)120.9(3)121.1(3)123.2(3)H8.6(3)117.8(3)122.6(3)119.5(3)118.5(3)132.1(3)109.4(3)126.0(3)125.3(3)108.6(3)101.6(2)120.8(3)132.0(3)107.1(3)122.2(3)124.5(3)113.2(3)122.9(3)121.3(3)115.83120.9(3)117.8(3)121.2(3)117.3(3)112.1(3>119.0(3)123.2(3)117.63330外C(41)-C(37)13.2(2)O(9)"C(4I)-C(40)108.9(3)C(37)-C(41)-C(40)1]1.9(3)0(9>C(41)-C(42)104.9(2)C(37)-C(4I)-C(42)108.1(3)C(40)-C(41>C(42)109.7(2)C(43》C(42)-C(41)114.9(3)O(10)"C(44)-O(9)122.5(3)O(10)-C(44)-C(45)127.1(3)0(9>C(44)-C(45)110.4(3)C(44)-C(45)~C(46)113.8(3)C(9)-N(l)-C(6)1]5.7(3)C(1>N(2)-C(12)123.8(3)C(ll)-N(2)-C(10)113.3(2)C(12)-N(2KX10)122.9(3)C(32)-N(3)-C(29)115.6(3)C(34>N(4)-C(35)124.8(3)C(34)-N(4)鄰3)113.2(2)C(35)-N(4)-C(33;)122.0(3)C(17)-0(2)-C(16)122.4(2)C(21)-0(4)-C(18)117.1(3)C(40)-O(7)-C(39)122.4(2)C(44)-0(9)-C(41.)116.6(2)-~—r使用對稱變換以產(chǎn)生等價原子表10.[C23H2。N205]3H20的各向異性位移參數(shù)(人2><103)<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>C(35)50(2)22(2)32(2)0(2)7(2)1(2)C(36)41(2)27(2)31(2)2(2)8(2)1(2)C(37)33(2)23(2)35(2)0(2)2(2)0(2)C(38)39(2)30(2)28(2)-2(2)4(2)1(2)C(39)46(2)48(2)41(2)6(2)6(2)0(2)C(40)43(2)42(2)43(2)2(2>12(2)2(2)C(41)35(2)36(2)26(2)3(2)7(2)5(2)C(42)42(2)37(2)44(2)0(2)1(2)鄰)C(43)51(2)54(3)49(2)-6(2)4(2)-9(2)C(44)37(2)41(2)31(2)4(2)3(2)10(2)C(45)61(2)50(2)44(2)8(2)13(2)2(2)C(46)70(3)64(3)55(3)17(2)9(2)-7(2)N(l)39(2)31(2)43(2)1(2)6(1)-4(1)N(2)35(2)32(2)30(2)-10)1(1)-4(1)N(3)38(2)26(2)36(2)o(i)4(1)2(1)N(4)36(2)28(2)28(2)2(1)1(1)0(1)O(l)47(1)52(2)33(1)1(1)2(1)-4(1)0(2)43(2)67(2)37(2)00)5(1)15(1)0(3)49(2)68(2)50(2)o(i)鄰)23(1)0(4)44(1)41(2)32(1)1(1)4(1)2(1)0(5)78(2)40(2)40(2)0(1)3(1)2(1)0(6)57(2)52(2)26()-1(1)8(1)3(1)0(7)45(1)63(2)38(2)3(1)14(1)13(1)0(8)47(2)68(2)49(2)5(1)7(1)22(1)0(9)39(1)33(1)32(1)-2(1)4(1)1(1)O(IO)62(2)43(2)34(2)-5(1)2("3(1)o(ii)63(2)58(2)48(2)-2(2)-10(2)-1(2)0(12)62(2)64(2)38(2)2(1)10)-1(1)0(13)58(2)69(2)73(2)-6(2)1(2)9(2)0(14)63(2)70(3)52(2)12(2)o(i)2(2)0(15)灘)即)94(3)24(2)鄰)1(2)0(16)67(2)59(3)46(2)鄰)o(i)2(2)各向異性位移因子指數(shù)(e鄧onent)采用形式_22[h2a*2U"+.+2hka*b*U12]這些研究清楚地表明，本發(fā)明化合物顯示驚人水平的抗癌活性。這既適用于所覆蓋的腫瘤譜，也適用于應答的性質(zhì)。本發(fā)明的方法已經(jīng)能完全阻斷生長和完全消退癌(例如肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、骨肉瘤和卵巢癌)和惡性黑素瘤的人異種移植物。這在沒有任何可觀察得到的毒性下完成。連續(xù)治療六個月的許多哺乳動物顯示既沒有病態(tài)反應，它們曾經(jīng)帶有的腫瘤也沒有再生長。本發(fā)明的脂肪酸酯水合物晶體應該全部具有幾乎相同程度的有效性和治療指數(shù)值。申請人:特別將所有引用的參考文獻的全部內(nèi)容引入本說明書。此外，當將用量、濃度或其它值或參數(shù)給定為任一范圍，優(yōu)選范圍或一組上限優(yōu)選值和下限優(yōu)選值時，應當將其理解為具體披露了由任一對上限范圍或優(yōu)選值和任何下限范圍或優(yōu)選值構成的所有范圍，與是否單獨披露該范圍無關。除非另外說明，如果本文描述了一定范圍的數(shù)值，那么該范圍用于包括其端值和在該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分數(shù)。并不意指將本發(fā)明的范圍限制于限定范圍時描述的具體值。本發(fā)明的其它實施方案對本領域技術人員而言從研究本說明書和實踐本文披露的本發(fā)明中顯而易見。意指僅將本說明書和實施例視為僅舉例說明的，本發(fā)明的確切范圍和精神由權利要求書及其等同方案表示。權利要求式(I)的喜樹堿水合物晶體其中，n包含1至10范圍內(nèi)的數(shù)，且R1是C2-C6烷基。FPA00001010530300011.tif2.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中&是直鏈C2-C4烷基。3.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中&是乙基。4.權利要求3的喜樹堿水合物晶體，其中喜樹堿水合物晶體具有大約24(TC至大約243"C的熔點。5.權利要求3的喜樹堿水合物晶體，其中所述化合物具有大約242t:的熔點。6.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中所述化合物具有大約99%至大約100%的純度。7.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中n包含1至3范圍內(nèi)的數(shù)。8.治療患者的癌癥或惡性腫瘤的方法，所述方法包括給藥含有有效量的權利要求l的喜樹堿水合物晶體的組合物，其中所述的癌癥或惡性腫瘤對該組合物有響應。9.權利要求8的方法，其中W是乙基。10.權利要求8的方法，其中所述的癌癥是白血病、黑素瘤、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、膀胱癌、促結(jié)締組織增生性小圓細胞瘤(DSRCT)、胰腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥。11.權利要求10的方法，其中R1是乙基。12.權利要求8的方法，其中喜樹堿水合物晶體經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或透皮給藥。13.權利要求8的方法，其中喜樹堿水合物晶體經(jīng)口服給藥。14.藥物組合物，其包含有效量的權利要求l的喜樹堿水合物晶體和藥學上可接受的載體。15.權利要求14的藥物組合物，其中所述的載體是脂類或類脂乳化劑。16.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中通過將所述的喜樹堿水合物晶體給藥于具有異種移植腫瘤的裸小鼠進行測定，當使用2000mg/kg作為最高耐受劑量時，所述的喜樹堿水合物晶體具有2到500的治療指數(shù)。17.權利要求16的喜樹堿水合物晶體，其中所述的治療指數(shù)為10至100。18.權利要求1的喜樹堿水合物晶體，其中所述的喜樹堿水合物晶體具有大小為(0.10至0.50)X(0.01至0.10)X(0.01至0.05)咖3、體積為100至5000入3的單斜晶系。19.權利要求18的喜樹堿水合物晶體，其中所述的喜樹堿水合物晶體是喜樹堿-20-丙酸酯水合物晶體。全文摘要本發(fā)明公開了水合的喜樹堿酯晶體，例如喜樹堿的脂肪酸酯水合物晶體，包含喜樹堿的脂肪酸酯水合物晶體的藥物組合物，利用喜樹堿酯水合物晶體治療癌癥或惡性腫瘤的方法，以及其制備方法。文檔編號A61P35/00GK101730701SQ200880013536公開日2010年6月9日申請日期2008年10月24日優(yōu)先權日2007年10月25日發(fā)明者曹志松申請人:克里斯特斯斯特林癌癥研究基金會