專利名稱：：對降低腎毒性有用的組合物及其使用方法對降低腎毒性有用的組合物及其使用方法本申請于2008年5月22日以弗農D羅(VernonD.Rowe)申請人的名義作為PCT國際專利申請遞交，指定全部成員國，并要求2007年5月25日遞交的申請?zhí)枮镹o.11/753,883的美國發(fā)明專利申請的優(yōu)先權，該申請通過引用而并入于此。
背景技術：
：已知多種藥物及其他的物質具有腎毒性，并能通過各種機制引起腎衰竭，包括對腎小管的直接毒性、過敏性間質腎炎以及可能導致少尿型腎衰竭(oliguricrenalfailure)的藥物在腎小管內發(fā)生結晶。腎毒性的藥物包括抗癌劑，例如順鉑(cisplatin)、曱氨蟲某呤和阿霉素；非固醇類抗炎藥(nonsteroidalantiinflammatories,NSAIDs),例如COX-2抑制劑；抗生素(例如，氨基糖普類、兩性霉素)；抗病毒藥(例如，阿昔洛韋(acyclovir),茚地那韋(indinivir));乙酰膽堿酯酶抑制劑；血管緊張素II受體阻斷劑(ARBs);鋰和射線造影劑。需要降低由腎毒性的藥物造成的腎損傷。
發(fā)明內容本發(fā)明提供了用來降低由腎毒性藥物造成的腎損傷的組合物和方法。本發(fā)明提供的組合物含有被陰離子取代的寡糖、腎毒性的藥物以及藥學上可接受載體，其中，所述寡糖存在有效的量用于抑制所述藥物的腎毒性作用。本發(fā)明還提供了一種降低了腎毒性作用的組合物，該組合物含有具有腎毒性作用的藥物活性化合物和多陰離子寡糖(polyanionicoligosaccharide)，其中，所述寡糖存在有效的量用于降低所述藥物活性化合物的腎毒性作用。本文還公開了降低藥物活性化合物的腎毒性的方法，該方法包括使該化合物與多陰離子寡糖接觸。此外，公開了抑制由腎毒性的藥物引起的腎毒性的方法，該方法包括用藥物組合物進行給藥，所述藥用組合物含有環(huán)狀多糖硫酸酯，所述腎毒性藥物包括藥物和任選的藥學上可接受的載體。圖1所示為甲氨蝶呤(MTX)和卡普替索(captisol)在酸性水溶液中的溶解度研究結果。圖2所示為指示了由髓鞘少突月M細胞糖蛋白(MOG)誘導的實驗性自身免疫'!"生月畝脊骨遺炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)小鼠才莫型中用MTX和MTX+卡普替索進行處理的總腎損傷的腎病理性得分。圖3所示為對EAE小鼠用MTX或MTX+卡普替索進行處理后的臨床得分。圖4所示為正常小鼠中進行單次靜脈推注(bolus)MTX(共存有或沒有不同摩爾比的卡普替索)后的腎組織中的腎病理性得分。圖5所示為對小鼠用MTX(共存有或沒有不同摩爾比的卡普替索)進行處理24小時后和48小時后的腎組織中的腎病理性得分。圖6所示為阿霉素誘導的腎毒性模型中，各個處理組在淺層腎皮質水平上的平均病理性得分。圖7所示為對個體小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索進行處理后在淺層腎皮質水平上的腎病理性得分。圖8所示為阿霉素誘導的腎毒性模型中，各個處理組在深層腎皮質+外髓質水平上的平均病理性得分。圖9所示為對個體小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索進行處理后在深層'i皮質+外髓質水平上的腎病理性得分圖10所TF力用順鑰^順鄰+卞骨膂豕近仃^:埋的組杜x平均得分。圖11所示為順鉑誘導的腎毒性個體小鼠模型中，各個處理組在淺層腎皮質水平上的病理性得分。平均得分。圖13所示為順鉑誘導的腎毒性個體小鼠模型中，各個處理組在深層腎皮質和外髓質水平上的病理性得分。圖14所示為順鉑/HP卩CD(2-羥丙基p-環(huán)糊精)和單獨使用順鉑對白血4病細胞生長產生的效果的比4交。具體實施例方式本發(fā)明的組合物通常含有被陰離子取代的寡糖、腎毒性的藥物和藥學上可接受載體或其他本領域常用的賦形劑。所述寡糖存在有效的量用于抑制所述藥物的腎毒性作用。在一種實施方式中，所述寡糖被極性部分或帶電部分取代，例如陽離子取代基或陰離子取代基。在一個實施例中，所述被陰離子取代的寡糖為多陰離子s^唐，該多陰離子寡糖包括具有一個或多個選自由磺酸基、硫酸基、羧酸基、膦酸基和磷酸基所組成的組的陰離子取代基的環(huán)糊精。在另一種實施方式中，所述寡糖為環(huán)狀多糖硫酸酯，優(yōu)選為a-環(huán)糊精硫酸酯、|3-環(huán)糊精石克酸酯或Y-環(huán)糊并fr琉酸酯。本發(fā)明還提供了具有降低的腎毒性作用的組合物，該組合物含有誘導腎毒性作用的藥用活性化合物和多陰離子寡糖。本文所用的腎毒性表示的是對腎的毒害或損害，或它們中的任意一種所表示的。被取代的寡糖被取代的寡糖通常指的是至少具有1個取代基/分子的寡糖，所述取代基優(yōu)選為帶電取代基或極性取代基。所述寡糖優(yōu)選為具有約5至約10個糖單位(sugarunits)的且未被取代時的分子量為約650-約1300的糖化物。其中該寡糖被陰離子取代時，取代基通常優(yōu)選為選自由磺酸基、硫酸基、羧tt、膦酸基和磷酸基和它們的組合所組成的組中。所述取代基在分子中的含量為約0.5-約3個取代基/糖單位。特別優(yōu)選的組合物是那些基于具有約1個磺酸取代基/糖單元的寡糖的組合物。其他優(yōu)選的組合物是建立在具有約2-約3個取代基/糖單元的寡糖的&出上，其中，所述取代基包括碌u酸取代基、磺酸取代基和/或磷酸取代基。所述寡糖為通過糖苷氧原子連接多個糖單位(例如葡萄糖單位)而成的鏈。前綴"寡"用于本文時，表示的是與一個或最多兩個(例如在蔗糖中)的單支糖單位和與含有20個或更多的糖單位且具有高分子量的多糖相比，糖單位或糖化物的數(shù)目居間。雖然認為所有這些寡糖在本發(fā)明的范圍內具有可操作性，但本文中的寡糖優(yōu)選具有約5-約10個糖化物單位/分子。該范圍相對于分子量范圍為約650-約1300的未被取代的糖化物。在本文中，通常將具有約5-10個通過對淀粉或纖維素進行降解來獲得寡糖，由此得到大小相差很大的寡糖碎片。一族稍微相關的物質為糖胺聚糖(glycosaminoglycans)。這種結構含有被各種取代基(包括氮原子、硫原子和氧原子)修飾的多糖骨架，并含有多種片段例如葡萄糖胺、艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸等。它們的結構可以在同名基團的不同樣品中變化，例如軟骨素(chondroitans)、皮膚素、透明質酸、硫酸乙酰肝素(heparansulfate)和肝素。已知每一族都是異源的，即，組合物的混合物。它們的分子量范圍通常為10000-25000。被取代的寡糖，更具體地說，具有極性取代基或帶電取代基的簡單且低分子量的寡糖具有保護腎不受到某種類別藥物的腎毒性效應的損害。雖然也可以使用其他的極性取代基(例如OH)，優(yōu)選至少部分被陰離子取代的環(huán)糊精，這是由于該化合物具有相對的一致性、得到改善的在水溶液(例如血流)中的溶解度、降低的毒性、改善的體內清除率以及易于生產。陰離子取代基包括在美國專利No.3,426,011中通過實施例的方式描述的那些。所述寡糖可以具有以下通式寡糖-[(O-R-Y)-(Me)l其中，R為選自由直鏈或支鏈的Cwo的烷基、烯基或炔基；(:3_8的環(huán)烷基和C3-s的芳基，各個環(huán)上任選地含有1個或更多個選自S、N和O的雜原子；以及每一個前述基團可選自地被卣素(即，F(xiàn)、Cl、Br、I)或羥基取代；Y為酸性基團，例如OH、COOH、S03、S04、P03H或P04,或亞磷酸、三價膦酸(Phosphinousacid)、膦酸(phosphonicacid)、次膦酸、硫代膦酸、疏代次膦酸和磺酸；或者不存在Y;Me為藥學上可接受的陰離子或陽離子，例如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂或鋁；或者有機類伯胺、仲胺、或叔胺，例如，曱胺、二曱胺、三曱胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二曱基替苯胺、N-曱基哌啶、N-曱基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因(procaine)、二芐胺、N,N-二芐基苯乙胺(N,N-dibenzylphenethylamine)、l誦二苯羥甲胺(l畫ephenamine)，和N,N'漏二芐乙二胺(N,N'-dibenzylethylenediamine)、乙二胺、乙醇胺(ethanolamine)、二乙醇胺、哌啶、派溱等；且n為每個寡糖中的取代基的數(shù)量，每個取代基都是被獨立選擇地，即，各個取代基可以相同或不同。"n"可以為大于1的整數(shù)，其上限與具體的寡糖有關。可以理解的是，許多S^唐中的n表示的是每分子中的平均取代基數(shù)量。根據一種實施方式，R為Cwo的烷基，優(yōu)選為選自甲基、乙基、丙基和丁基的Cw的烷基，它們中的每一個任意地被面素或羥基取代。特別優(yōu)選的是這樣的寡糖在一個或多個基團中，Y為S03。結果優(yōu)選的多陰離子取代的寡糖具有約1600-約4000的分子量。環(huán)糊精在一種優(yōu)選的實施方式中，所述寡糖為環(huán)狀多糖，優(yōu)選為環(huán)糊精，并且更優(yōu)選為衍生的環(huán)糊精。環(huán)糊精(也被稱為"CD"或"CDs")是由至少6個吡喃葡萄糖單位組成的環(huán)狀寡糖。雖然已知CDs具有高達12個吡喃葡萄糖單位，但僅對前三種同系物進行了大量的研究——分別具有6個、7個和8個吡喃葡萄糖單位的a型、P型和y型。例如說，P-環(huán)糊精分子由7個通過a-l,4-連接的吡喃葡萄糖單位形成，這形成的錐形分子具有疏水性外表面并在中心具有親脂性空腔。人們認為環(huán)糊精以錐形分子的形式存在，該錐形分子的d、端處具有伯醇羥基且在錐形的大開口處具有仲醇羥基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>從形狀上來看，可以將CDs表示成紋孔塞(torus),它的上緣排列有一級-CH20H基團，其下緣排列有仲醇羥基。與環(huán)面同軸排列的是分別相應于a-CDs、卩-CDs和y-CDs的5個、6個或7.5個任意單位直徑的通道狀空腔。這些空腔是的環(huán)糊精能與具有合適直徑的疏水性客分子(guestmolecule)形成包合物。已經制備了相當大量的CD衍生物并記載于文獻中。通常來說，這些被化學修飾的CDs是在不干擾o(1—4)半縮醛鍵的前提下，通過對附著在2號、3號或6號碳原子上的伯醇羥基或仲醇羥基進行反應而形成的?？肆_夫特(Croft)等人對這種制備進行了評論，四面體(Tetrahedron(1983)39(9):1417-1474)，該評論通過引用而被結合于此。吡喃葡萄糖單位上通過幾基進行的取代基對于a-CD來說可以高達18個，對于(3-CD來i兌可以高達21個，且對于y-CD來說可以高達24個。所述環(huán)糊精可以選自具有下列通式糊精環(huán)糊精-[(0-R-Y)—(Me)+]n其中，R、Y、Me和n如上文所述。顯而易見的是，對于a-CD來說n為1-18，對于(3-CD來說n為1-21,且對于，CD來說n為1-24。優(yōu)選地，所述環(huán)糊精可以具有一個或多個選自由羥基、磺酸基、硫酸基、羧基、膦酸基和磷酸基所組成的組的取代基。根據一種實施方式，R為直鏈或支鏈的Cwo的烷基，優(yōu)選為選自甲基、乙基、丙基和丁基的C,-4的烷基，它們中的每一個任意地-陂卣素或羥基取代。特別優(yōu)選的是這樣的寡糖在一個或多個基團中，Y為S03。優(yōu)選的CDs是a-環(huán)糊精、(3-環(huán)糊精和Y-環(huán)糊精的-克酸酯衍生物或磺酸酯衍生物。現(xiàn)有技術中已經描迷了大環(huán)糊精(cycloamylose)硫酸酯和大環(huán)糊精磺酸酯的制備，和被修飾的環(huán)糊精硫酸酯和環(huán)糊精石黃酸酯。例如，參見美國專利號No.2,923,704、No.4,020,160、No.4,247,535、No.4,258,180、No.4,596,795和No.4,727,064,它們中的每一個通過引用而被結合于此。這些環(huán)糊精硫酸鹽和環(huán)糊精磺酸鹽通常與生理可接受陽離子相連。根據另一種實施方式，羥基被具有下列通式的烷基醚磺酸酯(alkylethersulfonate)取代一O—(C廣Cs的烷基)-S03。在一個實施例中，可以使用商購得到的卡普替索⑧(塞克列斯(Cyclex)),它是P-環(huán)糊精的磺基丁基醚衍生物，每個環(huán)糊精分子中平均含有7個磺基丁基醚基(即，O-R-Y為-0-(CH2)4-S03"Na+)(可選擇地，本文中還將其稱為磺基丁基醚p環(huán)糊精或SEB-PCD)?？ㄆ仗嫠髋c未被衍生的p-環(huán)糊精一起不表現(xiàn)出腎毒性。其他的環(huán)糊精書亍生物公開于美國專利No.5,134,127、No.6,165,995、No.6,479,467(例如，羥基丁烯基國環(huán)糊升青(hydroxybutenyl畫cyclodextrins))，和No.6，060，597中，以及專利公開20060258537(SAE-AE-CD)，這些申請中的每一個通過引用而被結合于此。其他的CDs包括例如，平均MS為14的曱基化衍生物，和具有單糖-(Gl-b-CD)和二糖-(G2-b-CD)取代基的葡萄糖基CDs和麥芽糖基CDs。其他的環(huán)糊精在列舉如下(選自莫舍(Mosher)等人，制劑技術大全(EncyclopediaofPharm.Tech.(2002)531-58))。被修飾的CDs的系統(tǒng)命名法基取代基結構取代基位置取代基結構a命名法^-XYZ、弁d-CDe^始尿樹潛a-CD-OHa-CD(3-CD-OHP-CDY-CD-OHY-CD豕樹撈^^/4f差夢二曱基2,6--0-CH32,6-DM14-CD甲基隨機-0-CH3M#-CD三曱基2,3,6--0-CH32,3,6-TM-CD乙基衍生物隨機-0-CHrCH3E#-CD羥烷基衍生物2-羥乙基隨機-0-CH2-CH2OH(2HE)#-CD2-羥丙基隨機-0-CH2-CHOH-CH3(2HP)#-CD或HP#-CD3-羥丙基隨機-0-CH2-CH2-CH2OH(3HP)#-CD2，3-二鞋丙基隨機-0-CH2-CHOH-CH2OH(2，3-DHP)#-CDiQ^橫^厲庠子凝屑發(fā)謬軀凝說明書第8/32頁羧基6--C02M6-C#-CD羧基烷基羧甲基隨機-0-CH2-C02MCM#-CD羧乙基隨機-0-CH2-CH2-C02MCE#-CD羧丙基隨機-0-CH2-CH2-CH2-C02MCP弁-CD羧甲基乙基2,6-;3--0-CH2-C02M;-0-CH2-CH3CME#-CD辟u系書于生物硫酸酯2,6-隨機-0-S03MS弁-CD烷基硫酸酯6--0-(CH2)u-S03MSU#-CD磺酸酯6--S03M6-SA#-CD烷基磺酸酯磺基乙基醚隨機-0-(CH2)2-S03MSEE#-CD^"基丙基瞇隨機-0-(CH2)3-S03MSPE#-CD磺基丁基醚隨機-0-(CH2)4-S03MSBE#-CD,M:陽離子':數(shù)字表示了在知道的情況下取代基的位置；如果制備方法是隨機分布的，則不使用標記以表示在2-、3-和6-位上的不確定分布e:字母代表了取代基的縮寫符號d:數(shù)字代表了四舍五入到整數(shù)的平均MSe:表示了原始CD結構，即a-CD在另一種優(yōu)選的實施方式中，環(huán)糊精具有以下通式環(huán)糊精-[(0-R)—(Me)+]n其中，R為選自由直鏈或支鏈的Cwo的垸基、烯基或炔基；被l個或更多個羥基取代。在一種實施方式中，O-R為0-CH2CH(OH)CH3,即，環(huán)糊精為2-羥丙基p-環(huán)糊精(HP(3CD)。在一種實施方式中，取代度為4.7,如以下實施例中所用。腎毒性的藥物可以為任何的藥用制劑，包括向主體進行給藥時會造成腎損傷的小分子和肽。這種藥物包括(通過列舉的方式)，利尿劑、非甾體抗炎藥10(NSAID)、血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、環(huán)孢霉素、他克莫司、放射性造影劑、白細胞介素-2、血管擴張劑(肼苯噠嗪、鈣-通道阻斷劑、米諾地爾(minoxidil),二氮。秦)、絲裂霉素C、結合雌激素(conjugatedestrogens)、奎寧、5-氟尿嘧啶、噻氯匹定、氯吡格雷、干擾素、伐昔洛韋(valacyclovir)、吉西他濱(gemcitabine)、博萊霉素、肝素、華法林(warfarin)、鏈激酶、氨基糖苷類抗生素、順鉑、奈達鉑(nedaplatin)、甲氧氟烷、四環(huán)素、兩性霉素B、頭孢菌素(cephaloridine)、鏈脲佐菌素、他克莫司(tacrolimus)、卡馬西平(carbamazepine)、光神霉素(mithramycin)、p奎i若酮類、膦曱酸(foscamet)、戊烷脒、靜脈注射y球蛋白、環(huán)膦酰胺(fosfamide)、唑來磷酸、西多福韋(cidofovir)、阿德福韋(adefovir)、替諾福韋(tenofovir)、甘露醇、葡聚糖、羥乙基淀粉、洛伐他汀(lovastatin)、乙醇、可待因(codeine)、巴比妥類、安定、奎寧、奎尼丁、磺胺類藥物、肼苯歧"秦、氨苯蟲萊啶、呋喃妥因、美芬妥因、青霉素、曱氧西林、氨千西林、利福平、磺胺類藥物、瘞溱類、西咪替丁、苯妥英、別噤呤醇、先鋒霉素族抗菌素(cephalosporins)、阿糖胞苷(cytosineambinoside)、速尿、干擾素、環(huán)丙沙星、克拉霉素、泰利霉素(telithromycin)、羅非考昔(rofecoxib)、泮4乇4i峻(pantoprazole)、奧美4立哇(omeprazole)、阿扎那韋(ataza麗ir)、黃藥(gold)、青霉胺、卡托普利(captopril)、鋰、甲芬那酸(mefenamate)、非諾洛芬(fenoprofen)、汞、干擾素、氨羥二磷酸二鈉、芬氯酸(fenclofenac)、托美汀(tolmetin)、膦曱酸、阿昔洛韋、曱氨蝶呤、磺胺、氨苯蝶P定、茚地那韋、膦甲酸、更昔洛韋(ganciclovir),二曱麥角新堿、麥角胺、二氫麥角胺、曱基多巴、吲哚洛爾(pindolol)、肼苯噠嗪、阿替洛爾(atenolol),紫杉醇、腫瘤壞死因子、苯丁酸氮芥、白細胞介素、博萊霉素、依托泊苦(etoposide)、氟尿嘧啶、長春堿、阿霉素、順鉑等(一般來說，參見帝瓦斯邁塔(Devasmita)等人，自然腎病學臨床應用(NatureClinicalPracticeNephrology(2006)2，80-91)。曱氨蝶呤根據一種實施方式，所述腎毒性的藥物為曱氨蝶呤，或其衍生物或藥學上可接受載體。曱胺嘌呤(N-[4-[[(2,4-二氨基-6蝶。錄)曱基]甲基氨基]苯甲酰]丄-谷氨酸)用來治療各種癌瘤(特別是中樞神經系統(tǒng)(CNS)淋巴癌)的6期化極為廣泛使用的抗癌癥劑，并且用于癌瘤性疾病的治療中，例如妊娠性絨毛膜癌(gestationalchoriocarcinoma)、骨肉瘤(osteosarcoma),惡性葡萄胎、葡萄胎、急性淋巴細胞性白血病、乳腺癌、頭部和頸部的表皮癌、晚期蕈樣肉芽腫病、肺癌和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphomas)(醫(yī)生案頭參考(第45版)，經濟化學有限公司，1185-89，(得梅因，愛荷華州(1991))(PhysiciansDeskReference(45thed.),MedicalEconomicalCo"Inc.,1185-89(DesMoines,Iowa(1991))。MTX還是一種有效的治療。因此，MTX可以用來治療嚴重且難以治愈的牛皮癬和風濕性關節(jié)炎(霍夫麥斯特，美國醫(yī)學雜志(1983)30:69-73(Hoffineister,TheAmericanJournalofMedicine(1983)30:69-73);杰變，關節(jié)炎與風濕病(1988)31:299(Jaffe,ArthritisandRheumatism(1988)31:299))。但是，以"高劑量法"施用曱氨蝶呤時會具有對腎和肝的毒性，而這種"高劑量法，，是達到最大效果所通常需要的(巴拉克等人，美國大學營養(yǎng)期刊(1984)3:93-96(Baraketal"J.AmericanColl.Nutr.(1984)3:93-96))。有許多專利公開了MTX與MTX類似物，這些專利中的任意一個可以用于實踐本發(fā)明。例如，參見美國專利申請?zhí)朜o.2,512,572、No.3,892,801、No.3,989,703、No.4,057,548、No.4,067,867、No.4,079，056、No.4,080,325、No.4,136,101、No.4,224,446、No.4,306,064、No.4,374,987、No.4,421,913、No.4,767,859、No.3,981,983、No.4,043,759、No.4,093,607、No-4,279,992、No.4，376,767、No.4,401,592、No.4,489,065、No.4,622,218、No.4,625,014、No.4,638,045、No.4,671,958、No.4,699,784、No.4,785,080、No.4，816，395、No.4,886,780、No.4,918,165、No,4,925,662、No.4,939,240、No.4,983,586、No.4,997,913、No.5,024,998、No.5，028，697、No-5,030,719、No.5,057,313、No-5,059,413、No.5,082,928、No.5,106,950、No.5,108,987、No.4,106,488、No.4,558,690、No.4,662,359、No.6,559,149,這些專利通過引用而被結合于此。其他的MTX類似物及相關的抗葉酸化合物，包括曲美沙特(trimetrexate)、依達曲沙(edatrexate)、AG331、吡曲克辛(piritrexim)、1843U89、LY231514、ZD9331、雷替曲塞(raltritrexed)、洛美曲索(lometrexol)、MTA和AG337(瀧本，肺瘤學論文集(1997)24:S18-40-51(Takimoto，SeminarsinOncology(1997)24:S18-40-51);索爾貝羅等人，血液學(2001)86:121-27(Sorbelloetal.,Haematoligica(2001)86:121-27)))、CB3717、LY309887(卡爾弗特，肺瘤學論文集(1999)26:S6，3-10(Calvert,SeminarsinOncology(1999)26:S6,3-10);羅守斯基，藥用化學進展(1989)26:1-237(Rosowsky,ProgressinMed.Chem.(1989)26:1-237))。因此，本文^^開的組合物可以用來治療癌癥或抑制癌癥的生長；并且可以用來治療多發(fā)性硬化及與其相關的癥狀。該組合物可以于其他活性劑(例如干擾素)聯(lián)合或結合使用。此外，該組合物可以用來治療自身免疫性疾病，例如狼瘡和風濕性關節(jié)炎。抗生素氨14唐苷類抗生素(例如慶大霉素類、卡那霉素、鏈霉素和托普霉素)通常被用于能有效地抵抗例如革蘭氏陽性、革蘭氏陰性和耐酸細菌的光譜殺菌劑。然而，氨14t苷類通常引起不期望的負效應，例如對神的毒性和對耳的毒性。其他可以用于實施本發(fā)明的抗生素包括阿昔洛韋、萬古霉素(vancomicin)和先鋒霉素族抗菌素，例如羅氏芬⑧(Rocephin)和凱復卓(Kefzol)。非甾體抗炎藥(NSAIDs)NSAIDs均表現(xiàn)出對腎的毒性。通常將NSAIDs用來減少疼痛而避免使用阿片衍生物(叩iatederivatives)。兩種得到廣泛使用的NSAIDs為吲哚美辛(Indomethacin)和羅氏制藥生產的妥拉多⑧(Toradof)。抗真菌劑已知卡泊芬凈(Caspoflingin)和兩性霉素B二者均具有腎毒性，并可以用于本發(fā)明實踐中?？拱┌Y劑許多的抗癌癥劑表現(xiàn)出了劑量限制性腎毒性，并可以用于本發(fā)明實踐中。這些試劑包括(以列舉的方式)順鉑、阿霉素、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、白消安(butasulfane)等。造影劑在進行X光掃描之前，將造影劑注入患者體內。造影劑是高度濃縮(50-66%溶液)的碘化合物。鑒于這種高濃度，造影劑與環(huán)糊精僅為1:l的最小比值是必要的，并且該比值高達約10:l或更高。環(huán)糊精可能用來保護腎不受到由于影劑引起的損害的實施例包括使用碘海醇和碘佛醇(Ioversol)。其他可以用來實施本發(fā)明的造影劑包括泛影葡胺(diatrizoatemeglumine)和碘克酸(ioxaglate)。給藥雖然認為寡糖對組合物的抗腎毒性作用不是必要的，可以使所述寡糖與腎毒性的藥物進行復合?？紤]到藥物經過腎的通過時間，藥物與寡糖的比例范圍優(yōu)選使藥物不會在腎內的正常pH下發(fā)生沉淀。在一些情況中，希望使寡糖在體內的量最小化。樣品在體外的溶解度實驗(例如在實施例中所描述的)可以用來測定能有效地保護肝臟不受損害的最小量的寡糖?？蛇x擇地，能有效地防止肝臟受到損害所需的最小量的寡糖可以通過動物實驗中寡糖對藥物引起的腎病理學的效果而確定。在一種實施方式中，藥物寡糖的摩爾比大于l:1，并且可以為約l.l:1至約50:1，優(yōu)選為約1.25:1至約25:1，更優(yōu)選為約1.75:1至約2:1至約10:1。在使用了曱氨蝶呤的情況中(僅通過舉例的方式)，發(fā)現(xiàn)摩爾比約為2:l的曱氨蝶呤卡普替索能在體外較好地保持溶液中的曱氨蝶呤，并提供了期望的腎毒性。在需要較低量的寡糖的情況中，只要組合物中寡糖的量足以提供對腎的保護效果，可以設計使用額外的增溶劑。通過舉例的方式，在使用造影劑碘海醇的情況中，如實施例中所示，摩爾比約為10:l的碘海醇SBEbCD能較好地作用，從而顯著地降低了由碘海醇誘導的腎損傷中小鼠的腎病理。在一些情況中，可以期望藥物與寡糖的比低于1:1,例如，其中結合造影劑的藥物低或者其中腎對藥物進行處理的速率低于環(huán)糊精，因此寡糖的摩爾數(shù)過量可能是有利的。這對于許多種類的藥物是正確的，其中，產生治療效果所需的藥物的劑量低，因此，雖然寡糖可能具有較高的摩爾比，但在體內的絕對量或濃度不一定增加。這樣一來，組合物可能含有約2-約50優(yōu)選約2-約20或約2-約IO倍過量的的寡糖，或優(yōu)選寡糖藥物的摩爾比的范圍為約1-約5:1，更優(yōu)選為約2-約5:1。還提供了降低藥用活性化合物的腎毒性作用的方法，該方法包括使所述組合物與多陰離子寡糖接觸。所包括的用來抑制或降低由腎毒性藥物引起的腎毒性的方法包括用含有多陰離子寡糖、腎毒性的藥物和任選的藥學上可接受載體的藥用組合物進行給藥。雖然優(yōu)選以單劑量進行給藥(特別是寡糖促進了藥物的溶解時)，該方法還可以通過用含有多陰離子寡糖的藥用組合物和含有誘導腎毒性的藥物的藥用組合物進行協(xié)同給藥(即，分別按劑量進行給藥)而發(fā)揮作用。其中，所述藥物和寡糖結合為單個劑量單位，它們可以與藥學上可接受的載體結合，例如共溶液*于惰性藥學上可接受的溶劑或分散劑等中?？蛇x擇地，所述寡糖可以分別地與藥學上可接受的物質進行配制，并進行獨立給藥；或者同時與藥物一起，或者在給藥前或給藥后1小時內進行給藥。協(xié)同給藥表示的是，基本上按不同的劑量進行同時給藥以使寡糖和藥物存在于體內?？蛇x擇地，可以依次進行給藥，前提是寡糖能隨著藥物在腎中的濃度增加至引起藥物的毒性作用時仍然能存在于腎環(huán)境中。給藥模式、劑量和劑量頻率(frequencyofdosage)受到通常與藥物制劑一起使用的給藥模式和劑量考慮的控制。因此，可以將例如本發(fā)明的各種組合通過肌肉注射或靜脈注射進行給藥，或者，根據與所用具體藥物或制劑的期望用途相關的藥物和藥理學實踐的規(guī)定進行而給藥。可以通過經口或腸道外途徑進行給藥，尤其包括局部施用、靜脈注射、動脈灌注或皮下注射，并包括吸收和注射并i^7v體穴(bodyapertures)或體藥(bodyorifices)內?？梢岳斫獾氖牵瑢τ谔囟ɑ颊叩木唧w劑量水平取決于各種因素，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、給藥實踐、給藥途徑、排泄率、聯(lián)合用藥(drugcombination)以及正在治療中的特定疾病的嚴重程度。接下來對示例性實施方式進行的描述將使本發(fā)明的其他特征變得明確，這些實施方式是為了闡述本發(fā)明而給出的，并不意味著本發(fā)明局限于此。實施例實施例1pH對MTX的溶解度產生的作用進行溶解度研究來測定，卡普替索是否能夠在超過MTX經過腎的通過時間(即，短于2分鐘)的時期內防止MTX發(fā)生沉淀。按表1所示制備溶液。用HC1對每一種溶液進行酸化、離心并將移出的上清液的等分試樣作為時間的函數(shù)，通過分光光度計測量MTX在溶液中的濃度。如圖1所示，卡普替索防止了MTX以濃度依賴性的速率發(fā)生沉淀。當摩爾比為l:l時，MTX無限期地存在于溶液中。當摩爾比較低時，以濃度依賴的速率發(fā)生沉淀。當卡普替索MTX的摩爾比為0.50:1時，MTX在溶液中至少保留15分鐘，并且當摩爾比為0.25:1時，大部分的MTX保留IO分鐘。考慮到在腎中濾過的快速通過時間，可以進行體內試驗來測定MTX:卡普替索的最佳比值以防止對腎造成損害。表1MTX-卡普替索溶解度添加的MTX:0.91mg/mlMTX濃度0.002MPH為5.0時存在或不存在卡普替索時的MTX的沉淀速率卡普替索MTX的摩爾比為1:1302-304nm處的光密度(OD)溶液中MTX的量稀釋校正1:25稀釋MTX的濃度卡普替索/MTX的比值Og/mL)|ag/mlmg/ml(M)0.00252.710.002102.2910.002152.2960.002202.1270.002302.0670.002402.2020.002502.0780.002602.00433.28800989832.200228.10877627702.719428.17058096704.264526.0815822652.039625.33992583633.498127.00865266675.216325.47589617636.897424.56118665614.02970.83220.00183080.7027190.0015460.7042650.00154940.652040.00143450.6334980.00139370.6752160.00148550.6368970.00140120.614030.0013509添力口的卡普替索(mM)加之的長.s添酸后時，E16表l-續(xù)PH為MTX-卡普替索溶解度添加的MTX:0.91mg/mlMTX濃度0.002M.0時存在或不存在卡普替索時的MTX的沉淀速率卡普替索MTX的摩爾比為1:1卡普替索MTX的摩爾比為0.5:1302-304證處的光密度(OD)溶液中MTX的量(|ag/mL)1:500稀釋的校正1:25稀釋|_ig/mlmg/mlMTX的濃度(M)卡普替索/MTX的比值0,00151.85422.70704574567.67610.5676760.00124890.5:10.001102.26327.76266996694.06670.6940670.00152690.5:1o扁152.59431.85414091796.35350.7963540週7520.5:1o細201.53118.7144623467.86160.4678620.00102930.5:1o逮301.04412.6946848317.36710.3173670.00069820.5:10.001400.95911.64400494291.10010.29110.00064040.5:1o扁500.86410.4697157261.74290.2617430.00057580.5:10.001600.86110.43263288260.81580.2608160.00057380.5:1添力口的卡普替索(M)0扁552.3630扁5101.7980細5151.1730扁5200.8640細5300.6860細5400.6330扁5500.5560扁5600.55628.99876391724.969122.01483313550.370814.28924598357.231110.4697157261.74298.26946848206.73677.61433869190.35856.662546354166.56376.662546354166.56370.7249690.00159490.250.5503710.00121080.250.3572310.00078590.250.2617430.00057580.250.2067370扁45480.250.1903580扁41880.250.1665640扁36640.250.1665640.00036640.25卡普替索MTX的摩爾比為O:1302-304nm處的光密度(OD)MTX的濃度(嗎/mL):500稀釋mg/mlMTX的摩爾濃度(M)卡普替索/MTX的比值0.2960.220.2740.3280.3253.4487021012.5092707053.1767614343.8442521633.80716934586.2175562.7317779.41卯496.106395.179230.0862180.0627320.0794190.0961060.0951790.00018970細D70細17470.00021140.00020940:10:10:10:10:1卡普替索MTX的摩爾比為0.25:1302-30=MTx的濃度1:5，稀的卡普替處的光密度釋摩爾濃度索/mtx(OD)的比值(pg/mL)(ig/mlmg/ml(M)加之的長的添脧后時扭加之的長.m添酸后時ta^o5o的替A卡索looooo加之的長.m添酸后時to.的替^加普，添卡索<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實施例2卡普替索-MTX的保護性效果在由髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG)誘導的實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的C57B6小鼠中，進行40mg/kgMTX含或不含卡普替索@(摩爾比為1:1)的效果比較。對臨床癥狀、中樞神經系統(tǒng)(CNS)病理學以及腎病理學進行測量。根據以下進行EAE誘導。用阿佛丁(Avertin)(222三溴乙醇)將小鼠麻醉，并兩次皮下注射150jug的在磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中的MOG(總劑量為300pg)，它已經在相同體積的含有250pg的結核分枝桿菌(M似6^rw/a^)H,37RA的弗氏不完全佐劑中進行乳化(總劑量為500嗎)。一次在頸部(nape)進行注射，第二次在背部(dorsum)進行注射。在給藥致腦炎因子(encephalitogen)后第0天、第3天和第7天給藥百日咳毒素(100ng，通過尾靜脈進行靜脈注射)。按25mg/ml使用MTX抹(貝德佛德實驗室(Bedfordlaboratories))。用PBS將MTX抹(stock)稀釋3.67倍(2ml的MTX株+5.34ml的PBS)以使總體積達到7.34ml,濃度為6.8mg/ml(14.9mM)。將3.00ml等分試樣的稀釋后的MTX溶液加入96.6mg的卡普替索粉末中，隨后將溶液攪拌混合。得到的溶液為幾乎澄清的淺黃。在進行注射前，將所有的溶液在室溫(RT)下避光保存。96.6mg/3ml=32.228mg/ml=14.9mM;MTX:卡普替索的摩爾比為1:1。用測試混合物對5組小鼠進行給藥(組I-V;參見表2)表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>癥狀發(fā)作后二十四(24)小時后，通過尾靜脈給藥MTX(40mg/kg體重)。注射體積為100-120pl。通過尾靜脈注射的MTX+卡普替索的體積為100-120^1。通過尾靜脈僅注射卡普替索(32.22mg/ml)的體積為100-120nl。進行MTX注射4個小時之后，通過尾靜脈注射亞葉酸(20mg/kg體重)，并在24小時后再次進行注射。作為葉酸的活性代謝產物，亞葉酸通常在抗癌化療中與曱氨蝶呤一起使用以保護正常細胞。每天測量動物體重并對臨床癥狀進行打分。得分建立在以下標記的基礎上0-正常1-尾部+〉弛(flaccidtail),豎毛(piloerection),和/或體重下降2-后肢無力，難以直立3-后肢無力導致不能直立4-后肢輕度癱瘓，跛行，和/或失禁5-后肢局部癱瘓6-后肢完全癱瘓而且前肢無力7-后肢完全癱瘓而且前肢輕度癱瘓或癱瘓8-死亡或垂死，需要將其處死每天對小鼠的疾病嚴重程度進行評分，并在患病第10天將其處死。用福爾馬林將大腦、腎和脾進行固定。為了評價T細胞向中樞神經系統(tǒng)(CNS)的浸潤，在石蠟包覆的厚度為8微米的未被處理的EAE小鼠后腦切片和用MTX和卡普替索進行協(xié)同處理的EAE小鼠后腦切片進行CD3+免疫組織化學法。對于光學顯微研究，將腎固定在10%的緩沖福爾馬林中，并進行常規(guī)石蠟包覆。用蘇木精和曙紅對5微米的組織切片進行染色，并在尼康酷片(Nikoncoolpix)光學顯微鏡下進行檢測。通過對所描述的損害進行定量測量來評估總腎損傷的嚴重程度。評價每個腎組織切片的腎小球結構的變性、腎小球阻塞和充血、腎小嚢腔的擴張、近端腎小管和遠端腎小管的變性、和腎小管的擴張、血管充血和炎癥細胞的浸潤。對于腎小管的變性，將含有20個以上的核的腎小球計"0"分，而那些含有少于10個核的計"4"分。中間階段為l、2和3。其他的標準按0-3進行計分0=無；1=輕度；2=中度；3=嚴重。根據各個標準累加計算每個組織的顯微得分，并每個切片中至少對100個腎單位(腎小球加上周圍的腎小管)進行分析。數(shù)據表示為平均值±SEM(參見圖2)。MOG處理后的小鼠從第10-11天開始產生了嚴重的臨床表現(xiàn)。繼續(xù)喂養(yǎng)它們直到第13天將其處死。所有的動物都受到了感染。后肢局部癱瘓或完全癱瘓(臨床得分)。40mg/kg的MTX+卡普替索的功效與單獨使用MTX進行處理所觀察到的功效相當。CNS病理學結果——CD3+免疫染色反映了未被處理的EAE小鼠在后腦和脊髓中發(fā)生了大范圍的CD3+T細胞浸潤(未示出)。發(fā)生癥狀后用MTX+卡普替索(40mg/kg+卡普替索，摩爾比為1:1)進行協(xié)同處理的EAE小鼠表現(xiàn)出減少了80-90%的T細胞浸潤(未示出)。使用MTX+卡普替索的功效與單獨使用MTX進行處理所觀察到的藥效相當。圖3顯示了腎病理性得分。來自3只不同的用40mg/kg的MTX處理過的EAE小鼠的腎切片顯示了腎小管的擴張和近端腎小管的變性。來自使用MTX+卡普替索進行協(xié)同處理的小鼠的腎切片顯示了對腎小管的保護性效果。用40mg/kg的MTX進行單次靜脈推注注射(bolusinjection)造成了腎形態(tài)的變化，這大多局限于皮質內腎小管的擴張。使用卡普替索與MTX進行協(xié)同給藥使得EAE小鼠中的病理性得分降低。實施例3各種摩爾比的卡普替索-MTX進行單次推注靜脈注射MTX(沒有協(xié)同有或協(xié)同有不同摩爾比的卡普替索)后，對腎發(fā)生的組織病理學改變進行研究。按以下配制MTX溶液。由25mg/ml的儲備溶液(來自Bedford實驗室的甲氨蝶呤)在無菌PBS中制備溶液A(24mg/ml(53mM))(總體積為6mL)。將3ml的溶液A在PBS中按1:1.33進行稀釋得到18mg/mL(39.6mM)且pH為7.4的工作稀釋液從而制備溶液B。將2ml的溶液A按l:2進行稀釋得到12mg/mL(26.4mM)且pH為7.2的工作稀釋液從而制備溶液C。按以下配置MTX+卡普替索溶液。向500微升試樣量溶液A中加入57.32mg的卡普替索而制得溶液D(摩爾比為1:1，pH為中性)。通過向1mL試樣量的溶液B中加入85.6mg的卡普替索而制得溶液E(摩爾比為1:1,pH為中性)。通過向1mL試樣量的溶液C中加入57.10mg的卡普替索而制得溶液F(摩爾比為1:1，pH為中性)。通過向lmL試樣量的溶液B中加入42.8mg的卡普替索而制得溶液G。通過向1mL試樣量的溶液C中加入28.6mg的卡普替索而制得溶液H。通過尾靜脈單次注射向8組小鼠給藥MTX和卡普替索(組I-VIII，參見表3),注射體積為100-120^1。48小時后將動物處死。記錄下臨床癥狀和體重。將腎保存起來(一個進行冷凍，另一個用福爾馬林固定)進行病理學研究。4小時和18小時后加入亞葉酸。尿液未發(fā)生》威化。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>圖4示出了用80mg/kg的MTX、120mg/kg的MTX和MTX+卡普替索的組合(MTX:卡普替索的摩爾比為1:1和1:0.5)進行處理后，對小鼠中的總腎損傷進行的半定量分析。對于對照腎的得分為3-4(圖中未示出)之間。在顯微鏡下分析包覆有石蠟的腎的蘇木精和曙紅切片中的腎損傷程度。數(shù)據表示為平均值士SEM。圖中未包括160mg/kg的MTX的數(shù)據，這是由于該組中僅有一只小鼠。用蘇木精和曙紅進行染色的腎的石蠟切片(未示出)顯示，來自用80mg/kg的MTX進行給藥的小鼠的腎中發(fā)生了腎小管擴張、腎小管的退行性病變、腎小球細胞增多以及間質細胞和彎曲腎小管的非典型性聚集。來自用80mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩爾比為1:1)和80mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩爾比為1:0.5)進行給藥的小鼠的腎顯示出較輕微的腎小管的變性、正常的腎小球，且沒有發(fā)生炎癥細胞的浸潤。然而，當MTX:卡普替索的摩爾比為1:0.5時對腎的保護程度更高。用蘇木精和曙紅進行染色的腎的石蠟切片(未示出)顯示，來自用120mg/kg的MTX進行靜脈注射給藥的小鼠的腎中發(fā)生了腎小球萎縮、腎小嚢基膜的變性、腎小管的退行性病變、腎小球細胞增多以及單核細胞的浸潤。來自用120mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩爾比為1:1)和120mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩爾比為1:0.5)進行給藥的小鼠的腎顯示了大部分為正常的腎小球、對近端腎小管和遠端腎小管的保護，且沒有發(fā)生炎癥細胞的浸潤。實施例4卡普替索-MTX的倍數(shù)研究按表4所列出的給藥MTX-卡普替索混合物。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>對于光學顯《敫研究，將腎固定在10%的緩沖福爾馬林中，并進行常規(guī)石蠟包覆。用蘇木精和曙紅對5微米的組織切片進行染色，并在尼康coolpix光學顯微鏡下進行檢測，使用尼康Coolpix相機完成攝影。通過對所描述的損害進行定量測量來評估總腎損傷的嚴重程度。評價每個腎組織切片的腎小球結構的變性、腎小球聚集和充血、腎小嚢腔的擴張、近端腎小管和遠端腎小管的變性、和腎小管的擴張、血管充血和炎癥細胞的浸潤。對于腎小管的變性，將含有20個以上的核的腎小球計"0"分，而那些含有少于IO個核的計"4"分。中間階#爻為1、2和3。其他的標準按0-3進行計分0=無；1=輕度；2=中度；3=嚴重。根據各個標準累加計算每個組織的顯微得分并每個切片中至少對100個腎單位(腎小球加上周圍的腎小管)進行分析。參見例如巴特等人，美國國家科學院院刊(2003)100(7)(Bhatetal.,PNAS(2003)100(7));賽內爾等人，細胞生物學與毒理學(Seneretal,,CellBiolToxicol(2006)22:470-60)。參見圖5，24小時和48小時后發(fā)生的大規(guī)模組織病理學改變。在第24小時和48小時處，發(fā)生了腎小球萎縮、腎小嚢腔的變性和擴張，并且炎癥細胞浸潤到間質中和腎小管發(fā)生變性。使用卡普替索+MTX進行處理的組顯示出了較輕微的腎小球和腎小管的改變，且較少發(fā)生炎癥細胞的浸潤。然而，由于第48小時的累積病理性得分比第24小時的低，因此24小時之后觀察到的改變似乎具有可逆性。對注射MTX(同時給藥或不給藥卡普替索)后24小時的腎組織病理學改變進行研究。使用MTX或MTX+卡普替索進行協(xié)同給藥24小時后，處死小鼠。使用蘇木精和曙紅對腎的石蠟切片進行染色(未示出)。用160mg/kg的MTX進行給藥導致了腎小管結構的變性和腎小嚢腔的擴張、近端腎小管和遠端腎小管的變性以及炎癥細胞的浸潤。在摩爾比為1:1的160mg/kg的MTX十卡普替索中觀察到了較輕微的腎小球和腎小管變性。摩爾比為1:0.5的160mg/kg的MTX+卡普替索能最有效地維護了腎小球和腎小管的結構。完全沒有發(fā)生炎癥細胞的浸潤。摩爾比為1:0.25的160mg/kg的MTX+卡普替索不能保護腎不受到損害。對注射MTX(同時給藥或不給藥卡普替索)后48小時的腎組織病理學改變進行研究。使用MTX或MTX+卡普替索進行協(xié)同給藥48小時后，處死小鼠。用蘇木精和曙紅對腎的石蠟切片進行染色(未示出)。進行注射后第48小時處，給藥160mg/kg的MTX(靜脈注射)引起了腎小管結構的的變性、腎小嚢腔的擴張、近端腎小管和遠端腎小管的變性以及炎癥細胞的浸潤。在160mg/kg的MTX+卡普替索(MTX:卡普替索的摩爾比為1:l)中觀察到了較輕微的腎小球和腎小管變性。160mg/kg的MTX+卡普替索(摩爾比為1:0.5)能相對較好地維持腎小球和腎小管的結構。完全沒有發(fā)生炎癥細胞的浸潤。摩爾比為1:0.25的160mg/kg的MTX+卡普替索不能有效地保護腎不受到MTX引起的損害。當MTX:卡普替索的摩爾比為1:0.5時觀察到了最大的保護性。還對給藥MTX—周后的腎病理組織學改變進行了研究。用160mg/kg的MTX進行單次靜脈注射一周后，處死小鼠。用蘇木精和曙紅對腎的石蠟切片進行染色(未示出)。單獨給藥MTX主要導致了近端腎小管和遠端腎小管的變性，偶爾會發(fā)生腎小球萎縮或聚集。核脹大了的變性細胞排列在近端腎小管和遠端腎小管上。偶爾會發(fā)現(xiàn)一些腎小管由兩層細胞進行排列。一些腎小管與嗜酸性物質聚積在一起。大部分的病理學改變發(fā)現(xiàn)于腎的皮質區(qū)。大多數(shù)腎小球結構是正常的。記錄進行MTX+卡普替索注射后一周發(fā)生的組織病理學改變。進行MTX+卡普替索共同給藥后一周，處死小鼠。使用蘇木精和曙紅對腎的石蠟切片進行染色(未示出)。用MTX:卡普替索的摩爾比為1:1的160mg/kg的MTX+卡普替索進行共同給藥的小鼠的腎表現(xiàn)出少得多的腎小球破壞和對腎小管更高的保護。沒有發(fā)生炎癥細胞的浸潤。實施例5對卡普替索在阿霉素誘導的腎毒性小鼠模型中的腎損害保護效果的評價。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的劑量單次靜脈注射阿霉素。72小時后處死小鼠。通過腎組織學的方法來評估使用阿霉素和阿霉素+卡普替索后發(fā)生的腎小球和腎小管間質性損傷。切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過捵酸希夫(periodicacidSchiff,PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。對30個淺層皮質(接近腎小嚢的表面)的腎小球及周圍的腎小管進行評分。對100個深層腎皮質和外髓質外側水平上的腎小J求及周圍的腎小管進行評分。圖6所示為各個處理組在淺層腎皮質水平上的平均病理學得分。圖7所示為對個體小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索進行處理后在淺層腎皮質水平上的腎病理性得分。圖8所示為在深層腎皮質+外髓質水平上各個處理組的平均病理性得分。圖9所示為對個體小鼠用阿霉素或阿霉素+卡普替索進行處理后在深層腎皮質+外髓質水平上的腎病理性得分。對照組或用卡普替索進行處理的小鼠均沒有產生任何的腎小管間質性改變。使用阿霉素進行處理的組表現(xiàn)出了腎小管管型(tubularcasts)、大量的腎小管擴張以及在一些近端腎小管中發(fā)生中等程度的刷狀緣脫落。一些腎小球發(fā)生崩潰并處于不同變性階,爻。發(fā)現(xiàn)病理更主要地發(fā)生于在腎皮質的外周。沒有發(fā)現(xiàn)腎小管萎縮或中性粒細胞的浸潤。在使用阿霉素+卡普替索進行處理的小鼠中發(fā)生了減少了幾乎71%的變性并降低了幾乎72%的腎小管擴張。在更深層腎皮質和外髓質處，降低了90%的腎小球變性并降低了50°/。的腎小管擴張。實施例6對卡普替索在順鉑誘導的腎毒性小鼠模型中的腎損害保護效果的評價。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的劑量單次靜脈注射順柏(N=5)或順鉑+卡普替索(順鉑卡普替索的摩爾比為1:1、1:0.5和1:0.25(分別為N=5，N-4和N二6))。72小時后處死該動物。通過腎組織學的方法來評估使用順鉑后發(fā)生的腎小球和腎小管間質性損傷和由順鉑+卡普替索產生的保護性。切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過硪酸希夫(PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。對30個淺層皮質(接近腎小嚢的表面)的腎小球及周圍的腎小管進行評分。對100個深層腎皮質和外髓質外側水平上的腎小球及周圍的腎小管進行評分。圖10所示為用順鉑和順鉑+卡普替索(順鉑卡普替索的摩爾比為l:1，1:0.5和l:0.25)進行處理的組在淺層皮質水平上的平均得分。圖11所示為各個處理組中的個體小鼠在淺層腎皮質水平上的病理性得分。圖12所示為用順柏和順鉑+卡普替索(順鉑卡普替索的摩爾比為1:1,1:0.5和l:0.25)進行處理的組在深層皮質水平上的平均得分。圖13所示為各個處理組中的個體小鼠在深層腎皮質和外髓質水平上的病理性得分。對照組中的小鼠沒有發(fā)生任何的腎小管間質性改變。用順鉑進行處理的小鼠表現(xiàn)出了壞死、腎小管上皮細胞掉落并在一些近端腎小管中發(fā)生刷狀緣的脫落。由順鉑引起的腎毒性的主要特征是具有許多擴張的腎小管。一些腎小球發(fā)生崩潰并且一些腎小球表現(xiàn)出了早期的變性改變。這些改變在使用順鉑+卡普替索進行處理后的顯著性要小得多，這證明了在順鉑卡普替索為1:1以及順鉑卡普替索為1:0.5的情況下，卡普替索均能對腎進行保護。實施例7對SBE-卩CD在慶大霉素誘導的腎毒性小鼠中的腎損害保護效果早期的研究已經顯示，以相當于臨床劑量給藥慶大霉素不能在小鼠內產生可測量的毒性。然而，這些劑量在人體中會產生腎毒性。因此，對SBE-卩CD在輕度腎抵抗力不足小鼠中的腎損害保護效果進行評估。這些小鼠表現(xiàn)出對相當于臨床劑量發(fā)生病理學改變。為了得到輕度腎抵抗力不足小鼠，在第一次注射慶大霉素前15-20分鐘，向該動物經腹腔注射10mg/kg的L-NAME(L精氨酸曱酯)和10mg/kg的吲咮美辛。向雌性C57BL/6小鼠以4.0mg/kg的慶大霉素(N=4)或4.0mg/kg的慶大霉素+19.2mg/kg的SBE-卩CD(N=4)的劑量進行連續(xù)10天推注靜脈注射。慶大霉素SBE-卩CD的摩爾比分別為1:l和1:2。最后一次注射48小時后將動物處死。通過在光學顯微鏡下對腎的蘇木精和曙紅切片進行分析來對腎病理學進行評價。實驗數(shù)據列于下表5中。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過硤酸希夫(PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。對各個切片中40倍放大下的5個任意視野(filed)的下述參數(shù)進行評價，并根據所提及的標準進行評分。擴張的腎小管0-正常，無擴張的腎小管1-輕度，l-2個擴張的腎小管2=中度，3-5個擴張的腎小管3=嚴重，6-8個擴張的腎小管4=非常嚴重，超過8個擴張的腎小管腎小管管型0-無管型1-輕度，1-2個管型/視野(field)2=中度，3-5個管型/視野3=嚴重，6-8個管型/#見野4=非常嚴重，超過8個管型/視野空泡(Vacuoles)0=正常，無空泡1=輕度，1-4個空泡2=中度，5-8個空泡3=嚴重，9-12個空泡4=非常嚴重，13-16個空泡腎小管變性(degeneration)0=無1=輕度，高達25%的視野中具有變性的腎小管2=中度，高達50%的視野中具有變性的腎小管3=嚴重，高達75%的視野中具有變性的腎小管4=非常嚴重，超過75%的視野中具有變性的腎小管炎癥0=無，沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細胞1=輕度，高達25%的視野被炎癥細胞覆蓋2=中度，高達50%的視野被炎癥細胞覆蓋283=嚴重，高達75%的視野被炎癥細胞覆蓋4=非常嚴重，超過75°/。的視野被炎癥細胞覆蓋水腫0=無1=輕度2=中度3=嚴重4=非常嚴重在本發(fā)明的條件下，通過靜脈注入的低劑量的慶大霉素(4mg/kg)在健康腎中沒有造成顯著的改變。然而，當輕度地降低了小鼠腎抵抗力時，4mg/kg的慶大霉素在腎皮質中造成了大規(guī)^莫的腎小管空泡狀改變和壞死；腎小管細胞變得扁平并部分不連續(xù)，而且腔室被拓寬。在遠端腎小管、導尿管和腎小球處沒有發(fā)現(xiàn)顯著的變化。摩爾比為l:l和l:2的慶大霉素與SBE-卩CD的組合對由慶大霉素誘導的腎毒性產生了極大的保護作用。全部6個計算參數(shù)的平均降低的腎病理性約為62%。腎小管擴張和近端腎小管空泡狀變化以及腎小管管型的形成發(fā)生了衰減，并且腎小管壞死和單核細胞的浸潤也減少了。SBE-卩CD的效果與劑量有關，并且對于大多數(shù)的參數(shù)來說，摩爾比為l:2的慶大霉素SBE-卩CD比摩爾比為1:1的更有效。實施例8對SBE-PCD在阿昔洛韋誘導的腎毒性小鼠中的腎損害保護效果早期的研究已經顯示，以相當于臨床劑量給藥阿昔洛韋不能在小鼠內產生可測量的毒性。然而，這些劑量在人體中會產生腎毒性。因此，對磺基丁基醚卩環(huán)糊精(sulfobutylether卩cyclodextrin,SBE-卩CD)在輕度腎抵抗力不足小鼠中的腎損害保護效果進行評估。這些小鼠表現(xiàn)出對相當于臨床劑量的阿昔洛韋發(fā)生病理學改變。為了得到輕度腎抵抗力不足小鼠，在第一次注射阿昔洛韋前15-20分鐘，向該動物經腹腔注射10mg/kg的L-NAME(L精氨酸曱酯)和10mg/kg的吲哚美辛。向雌性C57BL/6小鼠以10mg/kg的阿昔洛韋(N=3)或10mg/kg的阿昔洛韋+173mg/kg的SBE-卩CD(N=3),或30mg/kg的阿昔洛韋(N=3)或30mg/kg的阿昔洛韋+520mg/kg的SBE-J3CD(N=3)的劑量進行連續(xù)10天推注靜脈注射(表6)。上述情況中，阿昔洛韋SBE-卩CD的摩爾比均為1:2。最后一次注射48小時后將動物處死。通過在光學顯微鏡下對腎的蘇木精和曙紅切片進行分析來對腎病理學進行評價。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過硪酸希夫(PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。根據以下所述參數(shù)對各個切片中在40倍放大下的5個任意視野進行評價，并根據所提及的標準進行評分。擴張的腎小管0=正常，無擴張的腎小管1=輕度，l-2個擴張的腎小管2=中度，3-5個擴張的腎小管3=嚴重，6-8個擴張的腎小管4=非常嚴重，超過8個擴張的腎小管空泡(Vacuoles)0=正常，無空泡1=輕度，1-4個空泡2=中度，5-8個空泡3=嚴重，9-12個空泡4=非常嚴重，13-16個空泡炎癥0=無，沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細胞1=輕度，高達25%的視野被炎癥細胞覆蓋2=中度，高達50%的視野被炎癥細胞覆蓋3=嚴重，高達75%的視野被炎癥細胞覆蓋4=非常嚴重，超過75%的視野被炎癥細胞覆蓋腎小管細胞數(shù)量的增加0=無1=輕度，高達25%的腎小管細胞數(shù)增加或具有重疊的細胞2=中度，高達50%的腎d、管細胞數(shù)增加或具有重疊的細胞3=嚴重，高達75%的腎小管細胞數(shù)增加或具有重疊的細胞4=非常嚴重，超過75%的腎小管細胞數(shù)增加或具有重疊的細胞對輕度腎抵抗力不足小鼠進行長期的阿昔洛韋給藥導致了與劑量有關的腎形態(tài)學上的病理學改變的增加。沖艮據大量擴張的腎小管和近端腎小管上皮的不規(guī)則空泡狀變化所指示的，阿昔洛韋處理導致了中毒至嚴重的癥狀。沒有發(fā)現(xiàn)其他的腎小管發(fā)生損害的癥狀，例如上皮細胞的微鈣化或壞死。在軟組織中發(fā)現(xiàn)了單核細胞的輕度浸潤。大多數(shù)的病理，特別是腎小管擴張發(fā)現(xiàn)于皮質外周。腎小球的病理纟及少。與SBE卩CD按摩爾比為1:2進行協(xié)同給藥使外皮質和髓質中的腎小管擴張和腎小管內的空泡形成發(fā)生了顯著的減少。此外，腎小管管型和軟組織內的單核細胞浸潤也發(fā)生了降低。多個評估參數(shù)的平均降低的腎病理性對于30mg/kg的劑量為62%，而對于10mg/kg的劑量為67%。實施例9對SBE-PCD在碘海醇誘導的腎毒性小鼠中的腎損害保護效果碘海醇對人類具有腎毒性并能在腎抵抗力不足的患者內引起急性腎衰竭。因此，通過輕度腎抵抗力不足小鼠對磺基丁基醚卩環(huán)糊精(SBE-PCD)在由造影劑誘導的腎病模型中的腎損害保護性效果進行評估。這些小鼠表現(xiàn)出對相當于臨床劑量發(fā)生病理學改變。為了得到輕度腎抵抗力不足小鼠，在注射碘海醇前15-20分鐘，向雌性C57BL/6小鼠經腹腔注射10mg/kg的一氧化氮合成酶抑制劑L-NAME(L精氨酸甲酯)和10mg/kg的前列腺素抑制劑吲哚美辛。向小鼠以1.5g/kg的碘海醇(N-4)或1.5g/kg的碘海醇+1.3g/kg的SBE-卩CD(N=4)進行單次靜脈注射，或進行硤海醇注射前30分鐘、協(xié)同注射或注射后30分鐘用1.5g/kg的石典海醇+1.3mg/kg的SBE-(3CD(N=4)進行給藥(表7)。在這兩種情況中，協(xié)同劑量中的碘海醇SBE-卩CD的摩爾比為1:0.1。然而，在第二種情況中，摩爾濃度在體內會更高。進行碘海醇注射后24小時后將動物處死。通過在光學顯微鏡下對腎的蘇木精和曙紅切片進行分析來對腎病理學進行評價。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過^^典酸希夫(PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。對各個切片中40倍放大下的5個任意視野的下述參數(shù)進行評價，并根據所提及的標準進行盲法評分。每個腎進行全部4個切片進行分析。對輕度腎抵抗力不足小鼠(renal-compromisedmice)給藥造影劑碘海醇造成了腎小管形態(tài)學上的病理變化。根據存在大量的擴張的腎小管、腎小管管型、近端腎小管上皮的空泡狀變化以及近端腎小管的變性所指示的，碘海醇處理造成了腎小管病的中毒至嚴重的癥狀。沒有發(fā)現(xiàn)其他的腎小管損害癥狀，例如嗜堿性細胞、上皮細胞的孩"丐化或壞死。大多數(shù)的病理，特別是腎小管擴張發(fā)現(xiàn)于皮質外周。絕大多數(shù)的腎小球表現(xiàn)為正常的。與SBE-卩CD—切按照碘海醇SBE-(3CD的摩爾比為1:0.1進行協(xié)同給藥使外皮質和外髓質中的腎小管擴張、腎小管管型的形成以及腎小管上皮空泡狀變化發(fā)生了顯著的降低。當分3次劑量(極性》典海醇注射前、注射時和注射后)給藥使SBE-PCD的保護性效果得到了增強。但是，在這些小鼠中發(fā)現(xiàn)了增加的空泡狀變化,這可能是由于SBE-PCD在小鼠腎中具有了高的局部濃度。更高劑量的SBE-卩CD(小鼠中)表現(xiàn)出引起可逆的近端腎小管空泡狀變化。雖然1.3g/kg低于在小鼠內引起空泡狀變化的量，累積性劑量可以更高。當將SBE卩CD與碘海醇進行單劑量協(xié)同給藥時，多個評估參數(shù)的平均降低的腎病理性約為72o/0。實施例10對HP卩CD在曱氨蝶呤誘導的腎毒性模型小鼠中的腎損害保護效果為了測定其他的環(huán)糊精分子，對2-羥丙基P-環(huán)糊精(2-hydroxypropyl(3-cyclodextrin，HP卩CD)進行評估。向雌性C57BL/6小鼠以80mg/kg的劑量單次靜脈注射曱氨蝶呤，或靜脈注射甲氨蝶呤+HP(3CD(曱氨蝶呤HP卩CD)的摩爾比為l:l和l:0.5。24小時后處死該動物。用光學顯微鏡通過腎組織學的方法來評估甲氨蝶呤后發(fā)生的腎小球和腎小管間質性損傷。4小時和18小時后加入亞葉酸。尿液未發(fā)生堿化。切下5pM的石蠟切片，并用蘇木精和曙紅以及過碘酸希夫(PAS)進行染色。通過光學顯微鏡對它們進行測定，并以盲法進行打分。對各個切片中40倍放大下的5個任意視野的實施例7中所述參數(shù)進行評價，并根據實施例7中的標準進行評分。正常小鼠中，用80mg/kg的MTX進行單次靜脈注射對腎產生了腎小球發(fā)生輕度萎縮、腎小管變性、管型的形成、單核細胞的擴張和浸潤的形式的組織病理學改變。在用MTX+HP卩CD(摩爾比均為1:1和1:0.5)進行協(xié)同處理的小鼠中，發(fā)現(xiàn)腎小管的病理發(fā)生了顯著的降低，并的腎小球的結構得到了更好的保持?？傮w上來說，摩爾比為1:0.5的MTX:HP卩CD比摩爾比為1:0.05更有效。多個測得參數(shù)的腎病理性的平均減少約為55%。以上的說明書、實施例和數(shù)據提供了對本發(fā)明的組合物的制造和使用的全面的描述。由于在不背離本發(fā)明的實質和范圍的前提下可以進行本發(fā)明的多個實施方式，因此本發(fā)明在隨附的權利要求書的范圍內。權利要求1.一種組合物，該組合物含有以下通式的被取代的寡糖環(huán)糊精-[(O-R)-(Me)+]n其中，R選自由直鏈或支鏈的C1-10的烷基、烯基或炔基所組成的組中；且被一個或多個羥基取代；Me為藥學上可接受的陽離子或陰離子；且n為大于1的整數(shù)；腎毒性的藥物或制劑；和藥學上可接受的載體；所述寡糖存在有效的量用于基本上抑制所述藥物或制劑的腎毒性作用。2.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述R為0-CH2CH(OH)CH3。3.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述環(huán)糊精為選自由a-環(huán)糊精、卩-環(huán)糊精或，環(huán)糊精所組成的組中的一種或多種。4.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述藥物所述寡糖的摩爾比大于l:1。5.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述藥物所述寡糖的摩爾比至少為約2:1。6.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述藥物為曱氨蝶呤或它的衍生物或它的藥學上可4妄受的鹽。7.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述藥物為抗生素。8.根據權利要求1所述的組合物，其中，，所述制劑為造影劑。9.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述藥物為抗癌藥物。10.—種抑制癌生長的方法，該方法包括向需要的受治者給藥有效量的權利要求9所述的組合物。11.根據權利要求10所述的方法，其中，所述藥物為順鉑。12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述寡糖為羥丙基卩環(huán)糊精。全文摘要本發(fā)明提供了一種用來降低由腎毒性的藥物造成的腎損傷的組合物和方法。本發(fā)明提供的組合物包括陰離子取代的寡糖、腎毒性的藥物和藥學上可接受的載體，其中，所述寡糖存在有效的量用于基本上抑制所述藥物的腎毒性作用。文檔編號A61K31/715GK101686991SQ200880017313公開日2010年3月31日申請日期2008年5月22日優(yōu)先權日2007年5月25日發(fā)明者弗農·D.·羅申請人:韋羅制藥有限公司