專利名稱：：用7-(2,5-二氫-4-咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-2,5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1,2,3,4...的制作方法用7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，1-jk][1,4]苯并二氮萆增強(qiáng)癌癥的化學(xué)療法本發(fā)明的背景任何癌癥化學(xué)療法的效力受到特定癌癥對于具體治療的敏感性所限制。即使當(dāng)癌癥對于特殊的化學(xué)療法有響應(yīng)，但是與化學(xué)療法有關(guān)的急性和慢性毒害作用常常迫使減少劑量或還有治療的中斷。非響應(yīng)性癌癥的治療或克服劑量限制型毒性的一種途徑是結(jié)合那些經(jīng)由不同作用機(jī)理起作用的藥物。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些有利的化學(xué)療法結(jié)合，但是對于特殊的癌癥顯示出改進(jìn)效力或被患者更好耐受的那些藥物的組合的確定仍然是基本上憑經(jīng)驗(yàn)的。糖原合酶激酶313(GSK3P)是在已知可調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能的各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中所牽涉的絲氨酸/蘇氨酸激酶。GSK3P在癌癥治療中的作用是不清楚的。雷帕霉素，例如，被報道在乳腺癌細(xì)胞中通過GSK313的活化來顯著加強(qiáng)紫杉醇、長春瑞濱和卡鉑的作用，但是不會加強(qiáng)阿霉素或吉西他濱的作用。這一增強(qiáng)作用被眾所周知的GSK3P抑制劑氯化鋰、SB216763和SB415286所抑制。(Dong等人，CancerResearch,65(5)，1961-1972(2005))。相反，氯化鋰和SB216763作為GSK3P的抑制劑已經(jīng)表明在亞中毒濃度下同時在p53陽性和p53陰性前列腺癌細(xì)胞中顯著地加強(qiáng)腫瘤壞死因子相關(guān)的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)的抗腫瘤效力。(Liao等人，MolecularCancerTherapeutics,2，1215-1222(2003))。類似地，氯化鋰已顯示在人橫紋肌肉瘤細(xì)胞和鼠纖維肉瘤細(xì)胞中使腫瘤細(xì)胞對腫瘤壞死因子(TNF)敏感，但是GSK313抑制劑Ro31-8220，丙戊酸和靛玉紅_3'-單肟沒能加強(qiáng)同一作用。(Schoette等人，TheJournalofBiologicalChemistry，276(28)，25939-25945(2001))。最后，GSK3P抑制劑氯化鋰和LY2119301被報道在p53陽性結(jié)腸癌細(xì)胞中加強(qiáng)阿霉素、依托泊苷和5-氟尿嘧啶的作用，但是SB216763或SB415286都沒有加強(qiáng)所試驗(yàn)的任何藥物的效果，并且全部的所試驗(yàn)GSK313抑制劑沒能在p53陰性結(jié)腸細(xì)胞系中表明所希望的增強(qiáng)作用。(Tan等人，CancerResearch,65(19)，9012-9020(2005))。仍然需求藥物的特定結(jié)合物，后者在患有特定癌癥的癌癥患者的治療中顯示出改進(jìn)的效力，或允許癌癥患者更好地容忍化學(xué)療法。GSK3P抑制劑7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]-吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩會加強(qiáng)某些化療劑對特定癌癥的作用。本發(fā)明的概述本發(fā)明提供治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的方法，該方法包括對需要該治療的癌癥患者施用有效量的選自CPT-11、培美曲塞(pemetrexed)、吉西他濱(gemcitabine)、依托泊苷(etoposide)、阿霉素(doxorubicin)和鉬化療劑中的化療劑和相結(jié)合施用有效量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3_基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)—吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。本發(fā)明進(jìn)一步提供治療胃癌的方法，該方法包括對需要該治療的癌癥患者施用有效量的選自5-氟尿嘧啶和鉑化療劑中的化療劑和結(jié)合施用有效量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。本發(fā)明還提供7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]吡啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3_基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備藥物的用途，該藥物與選自CPT-ll、培美曲塞(pemetrexed)、吉西他濱(gemcitabine)、依托泊苷、阿霉素和鉑化療劑中的化療劑相結(jié)合用于卵巢癌癥、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌癥的治療。本發(fā)明還提供7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]吡啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3_基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備藥物的用途，該藥物與選自5-氟尿嘧啶和鉑化療劑中的化療劑相結(jié)合用于胃癌的治療。本發(fā)明進(jìn)一步提供通過包括以下的步驟獲得的藥物組合物a)將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-l，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物添加到含有至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD和任選地含藥物學(xué)上可接受的緩沖劑的pH低于5.5的水溶液中；b)用藥物學(xué)上可接受的酸或堿調(diào)節(jié)所得溶液的pH在2.5和3.5之間；禾口c)任選地凍干所得到的溶液。本發(fā)明還提供能夠用水重新組成為適合于由注射或灌注給藥于患者的溶液的藥物組合物，該組合物包括一摩爾當(dāng)量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-lH-吡咯_3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫_2_(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l_jk][l，4]苯并二氮苯或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，至少一摩爾當(dāng)量的SBE7-13-CD和任選地藥物學(xué)上可接受的緩沖劑。本發(fā)明的另一方面是藥物組合物，它包括一摩爾當(dāng)量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯_3_基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩和至少一摩爾當(dāng)量的SBE7-I3-CD。另夕卜，本發(fā)明提供了包括7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩的藥物組合物的制備方法，該組合物能夠用水重新組成為適合于由注射或灌注法給藥于患者的溶液，該方法包括以下步驟a)將7-(2，5-二氫_4_咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-l，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物添加到含有至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD和任選地含藥物學(xué)上可接受的緩沖劑的pH低于5.5的水溶液中；b)用藥物學(xué)上可接受的酸或堿調(diào)節(jié)所得溶液的pH在2.5和3.5之間；禾口c)凍干所得到的溶液。本發(fā)明還提供在需要治療的癌癥患者中使用CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素和鉑化療劑來治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的改進(jìn)方法，其中改進(jìn)之處包括7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代_1H_吡咯-3_基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的共同給藥。本發(fā)明還提供在需要治療的癌癥患者中使用5-氟尿嘧啶和鉑化療劑來治療胃癌的改進(jìn)方法，其中改進(jìn)之處包括7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]吡啶_3_基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的共同給藥。本發(fā)明的詳細(xì)說明化合物CPT-ll也已知為依立替康(irinotecan)并且以商品名稱CAMPTOSAR⑧銷售。CPT-ii是用于治療患有治療大腸和結(jié)腸的晚期癌癥的患者的化療藥物。它是在六星期治療周期中以120-180mg/m2的劑量通過大丸劑或灌注注射劑定期給藥。CPT-ll典型地與5-氟尿嘧啶(5-FU)和甲酰四氫葉酸(LV)相結(jié)合給藥?；衔锱嗝狼且陨唐访QALIMTA⑧銷售的。培美曲塞是用于在先前的化學(xué)療法之后治療患有局部晚期或轉(zhuǎn)移型非小細(xì)胞肺癌的化學(xué)療法藥物。培美曲塞與順氯氨鉑相結(jié)合被指定用于患有惡性胸膜間皮瘤的患者，該患者的疾病是不可切除的或其另外不是治療外科的候選者。典型地，在用葉酸、維生素B12和地塞米松預(yù)治療之后500mg/m2的培美曲塞每21天由灌注法經(jīng)過10分鐘施用于患者。術(shù)語"鉬化療劑"是指含有鉑的癌癥化療劑。本發(fā)明的方法設(shè)想的特定的鉑化療劑包括順氯氨鉑，卡鉑，和奧沙利鉑。順氯氨鉑或卡鉑的使用是優(yōu)選的?；衔镯樎劝便K是以商品名稱PLATINOL⑧-AQ銷售的。順氯氨鉑被施用于治療患有轉(zhuǎn)移性卵巢腫瘤的患者，該患者已接受合適的外科和/或放射治療程序。作為單種藥劑，順氯氨鉑典型地以每周期100mg/m2IV的劑量給藥，每四周一次。順氯氨鉑還可與CYTOXAN⑧相結(jié)合給藥?；衔锟ㄣK是以商品名稱PARAPLATIN⑧銷售的?？ㄣK被施用來治療患有卵巢癌的患者。作為單種藥劑，卡鉑典型地以每周期360mg/m2IV的劑量，每四周一次，來給藥?？ㄣK還可與環(huán)磷酰胺相結(jié)合給藥?；衔飱W沙利鉑以商品名稱ELOXATIN⑧銷售。奧沙利鉑被施用于患有結(jié)腸直腸癌癥的患者。它典型地以每周期85mg/m2IV的劑量，每兩周一次，與5-FU和LV相結(jié)合給藥?；衔锇⒚顾匾陨唐访QADRIAMYCIN⑧和RUBEX⑧銷售。阿霉素已經(jīng)成功地用于在彌散性腫瘤癥狀中產(chǎn)生退行，這些腫瘤例如有急性淋巴細(xì)胞性白血病，急性髓母細(xì)胞性白血病，維耳姆斯瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，軟組織和骨肉瘤，乳腺癌，卵巢癌，移行細(xì)胞膀胱癌，甲狀腺癌，胃癌，肉芽腫性淋巴瘤病，惡性淋巴瘤和支氣管癌。它典型地以60-75mg/m2IV的劑量以21天的時間間隔給藥。化合物依托泊苷是以商品名稱ETOPOPHOS,TOPOSAR和VEPESID⑧銷售的。依托泊苷通過給藥來治療患有睪丸癌或肺癌的患者。它典型地以5-100mg/m2的劑量由注射法來給藥?；衔?-氟尿嘧啶(5-FU)是以商品名稱ADRUCIL⑧銷售。它被給藥來治療患有結(jié)腸癌，直腸癌，乳腺癌，胃癌和胰臟癌的患者。5-FU典型地以12mg/kg的劑量每天一次給藥，總共四個連續(xù)天數(shù)。吉西他濱(Gemcitabine)是以商品名稱GEMZAR⑧銷售。它最通常用于治療非小細(xì)胞肺癌，胰腺癌，膀胱癌，和乳腺癌。它典型地以1000mg/m2的劑量由靜脈內(nèi)(IV)灌注法經(jīng)過一周一次30分鐘給藥，每4個星期3個連續(xù)星期給藥。本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員會認(rèn)識到，治療患者所需要的以上所述藥物中的任何一種的準(zhǔn)確劑量和治療周期的次數(shù)是由醫(yī)生考慮到疾病的階段和嚴(yán)重性以及個體患者的具體需要和響應(yīng)來確定?；衔?_(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2_a]吡啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮萆在WO03/076442中被教導(dǎo)是GSK-3P的抑制劑，其中它被稱作3_(9_氟_6_(哌啶-I-基)羰基)_6，7-二氫普[l，4]二氮萆基-[6，7，l-hi]吲哚-1-基)-4-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-2，5-二氧代吡咯(實(shí)施例365，第113頁)。如上所述的兩個命名規(guī)則被認(rèn)為是同義詞并且各自用于確定下列結(jié)構(gòu)化合物I化合物I是堿，因此可以與許多無機(jī)和有機(jī)酸中的任何一種進(jìn)行反應(yīng)而形成藥物學(xué)上可接受的酸加成鹽。優(yōu)選的藥物學(xué)上可接受的鹽是用HCl，HBr，硫酸，或甲磺酸形成的那些鹽。化合物I與例如水、甲醇和乙醇形成溶劑化物。優(yōu)選的溶劑化物是與乙醇形成的那些。雖然化合物I本身缺少有用的抗癌活性，但是當(dāng)與CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素或鉑化療劑相結(jié)合給藥時，相對于用CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素或鉑化療劑單獨(dú)進(jìn)行的治療而言實(shí)現(xiàn)了在卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的治療上的顯著治療益處。這一結(jié)合的一個益處是CPT-11，培美曲塞，吉西他濱，依托泊苷，阿霉素和鉑化療劑的治療效果通過與化合物I共同給藥而得到加強(qiáng)。也就是說，與典型給藥的劑量相比更低劑量的CPT-ll，培美曲塞，吉西他濱，依托泊苷，阿霉素或鉑化療劑將為患者提供類似的治療效果。此外，當(dāng)CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素或鉑化療劑與化合物I共同給藥時這些藥物的更大治療效果將在典型的劑量下由患者實(shí)現(xiàn)。這一治療方法為患者和醫(yī)生提供了方便的附加優(yōu)點(diǎn)，允許化合物I在與CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素或鉑化療劑相同的治療程序中給藥。本發(fā)明的聯(lián)合治療是治療患有卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的患者的改進(jìn)方法。該患者是哺乳動物，且優(yōu)選的哺乳動物是人。雖然化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與化療劑之間的全部上述組合是有用的，但是某些組合是優(yōu)選的。一種優(yōu)選的組合是7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與鉑化療劑的共同給藥。另一個實(shí)施方案是7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3-基_2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟_1，2，3，4-四氫-2_(1_哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與順氯氨鉑或卡鉑的共同給藥。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3-基_2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與培美曲塞和鉑化療劑的共同給藥。優(yōu)選的是7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3_基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與培美曲塞和卡鉑一起給藥。短語"有效量的化療劑"是指，當(dāng)化療劑與化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物聯(lián)合給藥時，為了破壞目標(biāo)癌細(xì)胞或減緩或阻止在患者中癌癥的發(fā)展所需要的具體化療劑的劑量。短語"有效量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]吡啶_3-基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物"是指為了破壞目標(biāo)癌細(xì)胞或減緩或阻止在患者中癌癥的發(fā)展而加強(qiáng)特定劑量的具體化療劑的效果所需要的化合物I或該化合物的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的劑量。化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的預(yù)測劑量是在5-600mg/患者/天的范圍內(nèi)。優(yōu)選的劑量是在50-400mg/患者/天的范圍內(nèi)。最優(yōu)選的劑量是在100-400mg/患者/天的范圍內(nèi)。治療患者所需要的準(zhǔn)確劑量將由醫(yī)生考慮到疾病的階段和嚴(yán)重性以及個體患者的特定需要和響應(yīng)來確定。短語"加強(qiáng)特定劑量的具體化療劑的效果"是指，與典型給藥的劑量相比而言化療劑的更低劑量將是有效劑量，或當(dāng)化療劑與化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物共同給藥時，在典型劑量下由患者實(shí)現(xiàn)化療劑的更大治療效果。在這里使用的術(shù)語"共同給藥的"和"共同給藥"以及短語"與...相結(jié)合"和"與...相結(jié)合(聯(lián)合)給藥"是指，化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物是在與CPT-11、培美曲塞或鉑化療劑相同的治療周期中施用于患者。也就是說，化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物可以在醫(yī)生考慮腫瘤類型、疾病的階段、所使用的特定化療劑以及患者的癥狀和敏感性的情況下在CPT-11、培美曲塞或鉑化療劑的給藥之前、過程中或之后給藥。下列活體外試驗(yàn)和活體內(nèi)試驗(yàn)證明了這些結(jié)合的優(yōu)點(diǎn)。活體外效力實(shí)施例細(xì)胞凋亡或細(xì)胞程序死亡通過一組生物化學(xué)反應(yīng)來表征，其中的一種化學(xué)反應(yīng)是半胱氨酸蛋白酶(caspase)的誘導(dǎo)?；罨陌腚装彼岬鞍酌甘菂⑴c一連串劈裂事件中的蛋白酶類，所述劈裂事件使負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境平衡和修復(fù)的關(guān)鍵酶失活。半胱氨酸蛋白酶3和7在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮關(guān)鍵作用并且能夠由熒光生物化學(xué)分析法檢測和測量。在細(xì)胞中半胱氨酸蛋白酶-3/7活性的提高直接與細(xì)胞凋亡活性相關(guān)。(D.W.Nicholson等人,Nature,376,37-43(1995))。使用PromegaApo-ONEHomogeneousCaspase-3/7分析藥盒(AssayKit)(Catalog#G7791)。分析緩沖劑由30mMHEPES(N_(2-羥乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)pH7.4，150mMNaCl，50mMKCl，10mMMgCl2，0.4mMEGTA(乙二醇四乙酸)，0.5%NonidetP40(辛基苯酚聚(乙二醇醚))，0.1%CHAPS(3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨]_1_丙烷磺酸鹽水合物和10%蔗糖(它溶解/滲透所培養(yǎng)的細(xì)胞)以及偶合于前熒光若丹明110上的半胱氨酸蛋白酶3/7底物，Z-DEVD(Z-Asp(0Me)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe))所組成。當(dāng)緩沖劑_底物混合物被添加到試驗(yàn)樣品中時，DEVD肽被半胱氨酸蛋白酶3/7活性的劈裂和后續(xù)去除導(dǎo)致若丹明110離去基團(tuán)的強(qiáng)熒光，它通過在499nm處的激發(fā)來檢測。熒光產(chǎn)品的量與在樣品中半胱氨酸蛋白酶3/7劈裂活性的量成正比。為了測量試驗(yàn)化合物的細(xì)胞凋亡作用，腫瘤細(xì)胞以1乂104個細(xì)胞/每孔的量接種在96孔板中，并在37t:下用5%C02培養(yǎng)一夜。腫瘤細(xì)胞用試驗(yàn)化合物在所需濃度下一式三份進(jìn)行處理，其中包括未處理/負(fù)對照孔。該分析板被再培養(yǎng)48小時。在培養(yǎng)期結(jié)束時，分析緩沖劑和底物的混合物被添加到各樣品孔中。在各孔中的熒光是在485+/-20nm的激發(fā)波長下和530+/-25nm的發(fā)射波長下測量的。在已處理細(xì)胞中半胱氨酸蛋白酶活性的％提高是相對于未處理的對照物來計算的。HCT-116和colo-205是結(jié)腸癌，A2780和SK0V3是卵巢癌，A549、Calu-6和NCIH-460是非小細(xì)胞肺癌，以及AGS、KAT0III和MKN45是胃癌。在下表中術(shù)語"化合物I"是指7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮簞?；焺┦窃谙铝袧舛认逻M(jìn)行測試<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表1-12中的數(shù)據(jù)被表達(dá)為相對于未處理對照組的半胱氨酸蛋白酶活性的％提高，除非另作說明。表1:順氯氨鉑與化合物I相結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*化合物I的濃度因細(xì)胞系不同而改變HCT-116(300nM);Colo_205(110nM);A2780(60nM);A549(300nM);NCI_H460(300nM)表2:卡鉑與化合物I相結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*化合物I的濃度因細(xì)胞系不同而改變A549(300nM);NCI_H460(lOOnM)表3:CPT-ll與化合物I相結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*化合物1的濃度因細(xì)胞系不同而改變HCT-116(330nM);Colo_205(33nM);A2780(330nM)表4:培美曲塞與化合物I相結(jié)合細(xì)胞系培養(yǎng)介質(zhì)化合物I*培美曲塞化合物I*+培美曲塞與培美曲塞相比的成倍提高HCT-11600231255.4Calu-601392431913.3A2780010035***化合物I的濃度對于全部的細(xì)胞系都是30nM**不能計算，無培美曲塞單獨(dú)的測量效果。表5:HCT-116藥物化合物I濃度藥物濃度化合物I藥物化合物I+藥物與藥物相比的成倍提高5-FU12nM5uM47553055.5吉西他濱60nM30nM03245951.8表6:A2780藥物化合物I濃度藥物濃度化合物I藥物化合物1+藥物與藥物相比的成倍提高卡鉬*300nM5uM55782373*這些板培養(yǎng)72小時表7:S麗3藥物化合物I濃度藥物濃度化合物I藥物化合物1+藥物與藥物相比的成倍提高阿霉素300nMluM01842701.5表8:Calu6藥物化合物I濃度藥物濃度化合物I藥物化合物1+藥物與藥物相比的成倍提高順氯氨鉑33nM2uM154974714.8表9:NCIH-460<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表10:AGS<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*這些板培養(yǎng)72小時。表11:KATOIII<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表12:MKN45<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>*這些板培養(yǎng)72小時。表1-12中的成倍提高數(shù)據(jù)反映了在細(xì)胞中化療藥物媒介的細(xì)胞凋亡作用通過化合物I的共同給藥所導(dǎo)致的增強(qiáng)，相對于化療藥物單獨(dú)的細(xì)胞凋亡作用而言?；铙w內(nèi)效力實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的細(xì)胞在雌性CD-l皿/皿品系小鼠的背后側(cè)腹中皮下植入，該小鼠在從供應(yīng)商那里接收之后已經(jīng)在動物試驗(yàn)設(shè)備中適應(yīng)一周。這些小鼠被隨機(jī)分成7或8只小鼠/每組的各個組，并且當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到100mm3時處理才開始?；衔颕按劑量靜脈內(nèi)給藥，且化療劑腹腔注射給藥。當(dāng)藥物相結(jié)合給藥時，化療劑在化合物I之前60分鐘按劑量給藥。每周通過電子卡尺測量腫瘤2次以描繪生長曲線。腫瘤生長延遲是當(dāng)與對照組相比時腫瘤達(dá)到1000mm3體積所花費(fèi)的中值時間的增加。動物還被監(jiān)測體重的波動和存活率。表13:順氯氨鉑與化合物I相結(jié)合用于A2780人卵巢癌異種移植5mg/kg順氯氨鉑通過腹腔注射途徑按劑量單獨(dú)給藥以及與5mg/kg化合物I(注射靜脈內(nèi))相結(jié)合給藥?；衔颕以5mg/kg(注射靜脈內(nèi))也按劑量單獨(dú)給藥，作為對照組。動物接收3個連續(xù)周期的順氯氨鉑和化合物I，每一個周期相隔7天。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*順氯氨鉑和化合物I各5mg/kg**相結(jié)合給藥的效果，相對于順氯氨鉑單獨(dú)而言表14:順氯氨鉑與化合物I相結(jié)合用于HCT-116人結(jié)腸直腸癌異種移植10mg/kg順氯氨鉑通過腹腔注射途徑按劑量單獨(dú)給藥以及與5mg/kg化合物I(注射靜脈內(nèi))相結(jié)合給藥。化合物I以5mg/kg(注射靜脈內(nèi))也按劑量單獨(dú)給藥，作為對照組。動物接收3個連續(xù)周期的順氯氨鉑和LY2090314,每一個周期相隔7天。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*5mg/kg的化合物I和10mg/kg順氯氨鉑**相結(jié)合給藥的效果，相對于順氯氨鉑單獨(dú)而言表15:順氯氨鉑與化合物I相結(jié)合用于Colo-205人結(jié)腸直腸癌異種移植5mg/kg順氯氨鉑通過腹腔注射途徑按劑量單獨(dú)給藥以及各自與5mg/kg化合物I(注射靜脈內(nèi))相結(jié)合給藥?；衔颕以5mg/kg(注射靜脈內(nèi))也按劑量單獨(dú)給藥，作為對照組。動物接收3個連續(xù)周期的順氯氨鉑和化合物I，每一個周期相隔7天。處理組腫瘤生長延遲平均士標(biāo)準(zhǔn)誤差(天)p—ft**Captisol載體0±1.4鹽水載體4.8±2.1化合物I(5mg/kg)10.9±2.2順氯氨鉑(5mg/kg)18±3.5化合物1+順氯氨鉬*31.5±18.6<0.001*順氯氨鉑和化合物I各5mg/kg**相結(jié)合給藥的效果，相對于順氯氨鉑單獨(dú)而言表16:卡鉑與化合物I相結(jié)合用于NCI-H460人非小細(xì)胞肺癌異種移植化合物I是通過靜脈內(nèi)途徑以5mg/kg的劑量單獨(dú)給藥以及與50mg/kg卡鉑(腹腔注射)相結(jié)合給藥。劑量給藥是每14天X3周期。對于同時接受化合物I和卡鉑的處理組，卡鉑是在化合物I之前的60分鐘給藥。處理組腫瘤生長延遲平均士標(biāo)準(zhǔn)誤差(天)p—ft**Captisol載體2.4±0鹽水載體2.9±2.7化合物I(5mg/kg)3±1.4卡鉑(50mg/kg)2±2.9化合物1+卡鉬*8.6±13.5<0.01*50mg/kg卡鉬和5mg/kg的化合物I**相結(jié)合給藥的效果，相對于卡鉑單獨(dú)而言表17:卡鉑和培美曲塞與化合物I相結(jié)合用于NCI-H460人非小細(xì)胞肺癌異種移植化合物I通過靜脈內(nèi)途徑以5mg/kg的劑量單獨(dú)給藥，與10mg/kg卡鉑(腹腔注射)相結(jié)合給藥，與300mg/kg培美曲塞(腹腔注射)相結(jié)合給藥，和與10mg/kg卡鉑和300mg/kg培美曲塞(腹腔注射)相結(jié)合給藥。劑量給藥是每14天X3周期。對于同時接受化合物I和卡鉑的處理組，卡鉑是在化合物I之前的60分鐘給藥。對于同時接受化合物I和培美曲塞的處理組，培美曲塞是在化合物I給藥之前的24小時給藥。對于接受化合物1、卡鉑和培美曲塞的處理組，培美曲塞是在化合物I給藥之前的24小時給藥，卡鉑是在化合物I之前的60分鐘給藥。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*培美曲塞、卡鉑和化合物I相對于卡鉑+培美曲塞而言的效果表13-17中的數(shù)據(jù)表明，由化合物I所實(shí)現(xiàn)的化療藥物誘導(dǎo)的腫瘤生長延遲的增強(qiáng)相對于由化療藥物單獨(dú)引起的腫瘤生長延遲而言在統(tǒng)計上是顯著的。制備例l2-咪唑并[l，2_a]吡啶-3-基-乙酰胺4，4-二甲氣某-丁-2-烯酸乙酯將碳酸鉀(16.5g，120mmol)添加到由二甲氧基乙醛(在水中60%wt)(15mL，lOOmmol)和膦酸基乙酸三乙酯(20mL，lOOmmol)在210mL四氫呋喃和30mL水中形成的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時。將反應(yīng)混合物傾倒在乙醚(200mL)中并用飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機(jī)相經(jīng)過硫酸鈉干燥并在減壓下濃縮而得到黃色油形式的所需化合物(15.8g，90%)。'H-NMR(300MHz,CDC13):S6.77(dd，J=15.9，4.OHz，1H)，6.13(dd，J=15.9，1.4Hz，1H)，4.95(dd，J=4.0，1.4Hz，1H)，4.22(q，J=7.1Hz，2H)，3.34(s，6H)，1.30(t，J=7.1Hz，3H)。咪唑并「1,2-a]吡啶-3-某-乙酸乙酯將4，4-二甲氧基-丁-2-烯酸乙酯(43.5g，250mmo1)和對甲苯磺酸(4.75g，25mmol)在乙腈(240mL)和水(15mL)中的混合物在回流下加熱2小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫和添加2-氨基吡啶(18.8g，200mmo1)。將混合物在回流下加熱16小時，然后冷卻到室溫。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(1200mL)稀釋，然后順序用飽和碳酸氫鈉水溶液(600mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(600mLX2)洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮，得到棕色油形式的所需化合物(30g，73%)。^-畫R(300MHz，CDC13):S8.06(d，J=6.6Hz，1H)，7.63(d，J=9.1Hz，lH)，7.56(s，1H)，7.20(dd，J=8.9，6.8Hz，1H)，6.84(t，J=6.7Hz，1H)，4.17(q，J=7.3Hz，2H)，3.93(s，2H)，1.25(t，J=7.3Hz，3H)。麵艦將咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基_乙酸乙酯(30g，147,1)在NH3/MeOH(7N溶液，250mL)中形成的溶液在密封管中在85t:下加熱15小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，然后在減壓下濃縮。用二氯甲烷處理殘留物，超聲波處理，過濾所得沉淀物，得到黃色固體形式的所需化合物(8.9g，35%)。力-NMR(300MHz，DMSO):S8.30(d，J=6.9Hz，1H)，7.62(brs，1H)，7.54(d，J=9.OHz，1H)，7.42(s，1H)，7.21(dd，J=7.7，6.7Hz，1H)，7.18(brs，1H)，6.91(t，J=6.8Hz，lH)，3.81(s，2H)。制備例29-氟-7-甲氧基草?；?3，4-二氫-lH-[1，4]二氮萆并[6，7，1-hi]吲哚-2-羧酸叔丁酯2-二丁氧基甲基-4-氟-1-硝基-苯將5-氟-2-硝基-苯甲醛(10g，59.17mmol)、丁醇(20mL，219mmo1)和對甲苯磺酸(600mg，3.15mmo1)在甲苯(200mL)中形成的溶液在裝有迪安_斯達(dá)克榻分水器的燒瓶中在回流下加熱2小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用乙酸乙酯(400mL)稀釋，和順序地用飽和水碳酸氫鈉水溶液(300mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(300mLX2)洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮得到淺黃色油形式的所需化合物(17g，96%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):S7.91(dd，J=8.9，4.9Hz，1H)，7.53(dd，J=9.3，2.9Hz，1H)，7.15-7.09(m，1H)，6.04(s，1H)，3.67-3.50(m，4H)，1.63-1.54(m，4H)，1.44-1.32(m，4H)，0.92(t，J=7.3Hz，6H)。5-氟-1H-吲哚-7-甲醛將乙烯基鎂溴化物(在四氫呋喃中1M，85.2mL，85.2mmo1)在-78。C下滴加到由2-二丁氧基甲基-4-氟-l-硝基-苯(8.5g，28.4mmo1)在四氫呋喃(250mL)中形成的溶液中。溫?zé)岱磻?yīng)混合物到-45t:至-5(rC保持30分鐘，冷卻到_78°C，和然后滴加乙烯基鎂溴化物(在四氫呋喃中1M，85.2mL，85.2mmo1)。溫?zé)岱磻?yīng)混合物到-45。C至-5(TC保持20分鐘，然后添加飽和氯化銨水溶液(300mL)。溫?zé)峄旌衔锏绞覝睾陀靡颐?200mLX2)萃取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液(400mLX2)洗滌，在硫酸鈉上干燥，和在減壓下濃縮。將殘留物溶解在四氫呋喃(lOOmL)中，添加O.5NHC1(10mL)，然后攪拌20分鐘?；旌衔镉靡颐?200mL)稀釋，然后順序用飽和碳酸氫鈉水溶液(200mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(200mLX2)洗滌。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮。對殘留物進(jìn)行硅膠色譜分離，用5%_10%乙酸乙酯(在己烷中)洗脫，得到淺黃色固體形式的所需化合物(2.6g，56%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):S10.07(s，1H)，10.05(brs，1H)，7.62(d，J=7.6Hz，1H)，7.42-7.39(m，2H)，6.60(d，J=5.4Hz，1H)。2-「(5-氟-1H-吲哚-7-某甲某)_氨某V乙醇添加2-氨基乙醇(1.93mL，32.0,1)，隨后將乙酸(2.01mL，48.0,1)添加到由5-氟-lH-吲哚-7-甲醛(2.6g，16.Ommol)在l，2-二氯乙烷(40mL)中形成的溶液中。在室溫下攪拌15分鐘。分幾份添加三乙酰氧基硼氫化鈉(4.07g，19.2mmo1)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時。緩慢地添加飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)，隨后添加1NNaOH至達(dá)到pH9。用乙酸乙酯萃取(100mLX3)。有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液(200mLX2)洗滌，在硫酸鈉上干燥，然后在減壓下濃縮得到淺黃色固體形式的所需化合物(3.2g，96%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):S9.71(brs，1H)，7.24(d，J=2.7Hz，1H)，7.19(dd，J=9.5，2.3Hz，1H)，6.79(dd，J=9.8，2.2Hz，1H)，6.49(dd，J=3.1，2.2Hz，1H)，4.15(s，2H)，3.77(t，J=5.2Hz，2H)，2.84(t，J=5.2Hz，2H)。(5-tt-1H-吲哚-7-某甲某)-(2-羥某-乙某)-氡某甲酸叔丁酯在(TC下將重碳酸二叔丁酯(3.63g，16.65mmo1)在四氫呋喃(40mL)中形成的溶液滴加到由2-[(5-氟-lH-卩引哚-7-基甲基)-氨基]-乙醇(3.15g，15.14,1)在四氫呋喃(60mL)中形成的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時。添加乙酸乙酯(200mL)，然后用飽和氯化鈉水溶液洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮得到淺黃色油形式的所需化合物(4.9g，>100%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):Sl0.17(brs，1H)，7.27—7.23(m，2H)，6.81(dd，J=9.4，2.4Hz，1H)，6.50(dd，J=2.9，2.2Hz，1H)，4.67(s，2H)，3.72(brs，2H)，3.33(t，J=5.3Hz，2H)，1.50(s，9H)。甲磺酸2-「叔丁氧某羰某-(5-氟-1H-吲哚-7-某甲某)_氨某V乙酯在0。C下將三乙胺(4.64mL，33.3mmo1)和然后甲烷磺酰氯(1.29mL，16.65mmo1)添加到由(5-氟-1H-吲哚-7-基甲基)-(2-羥乙基)-氨基甲酸叔丁酯(4.9g，假設(shè)15.14mmo1)在二氯甲烷(70mL)中形成的溶液中。在0。C下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘?；旌衔镉靡宜嵋阴?200mL)稀釋，然后順序用飽和碳酸氫鈉水溶液(200mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(200mLX2)洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮得到黃棕色油形式的所需化合物(5.9g，>100%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):Sl0.07(brs，1H)，7.28-7.2(m，2H)，6.83(dd，J=9.3，2.3Hz，1H)，6.50(dd，J=2.9，2.2Hz，1H)，4.67(s，2H)，4.17(t，J=5.5Hz，2H)，3.51(t，J=5.6Hz，2H)，2.79(s，3H)，1.51(s，9H)。9-氟-3，4-二氫-lH-「l，"二氮!并「6，7，l-hi]吲哚_2_羧酸叔丁酯在(TC下將氫化鈉(60%)(666mg，16.65mmo1)作為一份添加到由甲磺酸2_[叔丁氧基羰基_(5-氟-1H-吲哚-7-基甲基)-氨基]-乙酯(5.9g，假設(shè)15.14,1)在二甲基甲酰胺(40mL)中形成的溶液中。將反應(yīng)混合物在ot:下攪拌io分鐘，然后在室溫下攪拌30分鐘。緩慢地添加水(200mL)。過濾和干燥所得黃色沉淀物，得到所需化合物(4.14g，94%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):S7.15(d，J=9.lHz，1H)，7.07(s，1H)，6.78(dd，J=14.7，8.8Hz，1H)，6.49(d，J=3.lHz，1H)，4.81(s，1H)，4.76(s，1H)，4.25—4.23(m，2H)，3.94-3.83(m，2H)，1.49(s，9H)。9-氟-7-甲氣某草酰某-3，4-二氫-lH-「l，"二氮^并「6，7，l_hi]吲哚_2_羧磁汀酉旨在-5。C下將草酰氯(1.62mL，18.56mmo1)添加到由9-氟_3，4_二氫_1H_[1，4]二氮萆并[6，7，l_hi]吲哚-2_羧酸叔丁酯(4.14g，14.28mmol)在甲基叔丁基醚(lOOmL)中所形成的溶液中。經(jīng)過1.5小時溫?zé)岱磻?yīng)混合物到室溫，然后冷卻到-5t:。添加甲醇(11.6mL，286mmo1)，然后在-5t:下攪拌30分鐘。添加飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)，然后用乙酸乙酯萃取(100mLX3)。合并的有機(jī)相順序地用飽和碳酸氫鈉水溶液(200mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(200mLX2)洗滌。用硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮，得到黃色固體形式的標(biāo)題化合物(5.13g，93%)。'H-NMR(300MHz，CDC13):S8.38(s，1H)，8.04(d，J=6.8Hz，1H)，6.89(dd，J=19.7，8.6Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.81(s，1H)，4.45—4.43(m，2H)，4.05—3.93(m，2H)，3.95(s，3H)，1.42(s，9H)。制備例33-(9-氟-1，2，3，4_四氫_[1，4]二氮罩并[6，7，1-hi]噴哚_7_基)_4_咪唑并[1，2-a]-吡啶-3-基-吡咯-2，5-二酮二鹽酸化物將叔丁醇鉀(4.58g，40.92mmol)作為一份添加到由9-氟-7-甲氧基草?；?3，4-二氫-lH-[1，4]二氮萆并[6，7，l-hi]吲哚-2-羧酸叔丁酯(5.13g，13.64,1)和2-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-乙酰胺(2.39g，13.64mmo1)在二甲基甲酰胺(80mL)中所形成的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌三小時。添加飽和氯化銨水溶液(200mL)，然后用乙酸乙酯萃取(200mLX3)。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液(200mLX3)洗滌，在硫酸鈉上干燥，和在減壓下濃縮。將殘留物溶解在二氯甲烷(20mL)中，將在二噁烷(40mL)中的4NHC1滴加進(jìn)去，然后在室溫下攪拌4小時。過濾所得沉淀物，用乙醚洗滌，得到紅色固體形式的標(biāo)題化合物(4.4g，68%)。MS(APCI):m/z=402[C22H16FN502+H]+。實(shí)施例17-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并將哌啶-l-碳酰氯(0.5mL，4.Ommol)添加到由3-(9-氟-1，2，3，4-四氫-[l，4]二氮簞并[6，7，l_hi]吲哚-7_基)-4-咪唑并[l，2_a]吡啶-3-基-吡咯-2，5_二酮(1.42g，3.0mmol)和三乙胺(2.09mL，15.Ommol)在甲醇(80mL)中所形成的溶液中。在室溫下攪拌一夜。添加三乙胺(1.04mL，7.5mmo1)和哌啶-1-碳酰氯(0.5mL，4.Ommol)。在室溫下攪拌5小時。添加乙酸乙酯(500mL)，順序地用飽和碳酸氫鈉水溶液(300mLX3)和飽和氯化鈉水溶液(200mL)洗滌。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相，然后在減壓下濃縮。對殘留物進(jìn)行硅膠色譜分離，用在乙酸乙酯中的0%_3%甲醇洗脫，得到紅色固體形式的標(biāo)題化合物(700mg，45%)。m.p.=188-190°C。MS(APCI):m/z=513[C28H25FN603+H]+。實(shí)施例2甲磺酸7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮萆將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩(500mg，0.976mmol)在甲醇(2.5mL)中形成的淤漿加熱到64°C。經(jīng)過5分鐘將甲磺酸(64iiL，0.976mmo1)在甲醇(1.OmL)中的溶液添加進(jìn)去。將混合物在64。C下攪拌15分鐘，然后經(jīng)過30分鐘添加異丙醇(5.OmL)。經(jīng)過1小時讓所得淤漿冷卻至室溫，然后在室溫下攪拌4小時。過濾該淤漿，用異丙醇洗滌，然后在減壓下在42t:下干燥，得到桔黃色固體形式的標(biāo)題化合物(478mg，88.5%(調(diào)整為在起始原料中9.9%揮發(fā)分和在產(chǎn)品中1.0%揮發(fā)分))。m.p.=282.3°C(DSC)實(shí)施例37-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩乙醇鹽將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩(2.0g，3.9mmo1)在乙醇(30mL)中形成的淤漿加熱到70°C。將5MHC1(0.73mL)—次性添加進(jìn)去?；旌衔镌?(TC下攪拌10分鐘，經(jīng)過3分鐘添加1NNaOH(3.63mL)。混合物在7(TC下攪拌2小時。經(jīng)過1小時讓所得淤槳冷卻至室溫，然后在室溫下攪拌3.5小時。過濾該淤漿，用乙醇洗滌，然后在減壓下在42t:下干燥，得到桔黃色固體形式的標(biāo)題化合物(1.84g，92%(調(diào)整為在起始原料中7.5%揮發(fā)分和在產(chǎn)品中7.7%揮發(fā)分))。m.p.=179.4°C(DSC)粉末X射線主峰(角度29，強(qiáng)度)8.989°，100%;9.787°，48.7%;12.846°，20.0%;和7.444°，17.5%。實(shí)施例47-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]妣啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩水合物I將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮萆乙醇鹽(198.5mg)在水(lOmL)中形成的淤漿加熱到8(TC保持2.75小時。添加3.llmL的INHC1。當(dāng)溫度已經(jīng)回到8(TC時，快速添加3.llmL的INNaOH。讓溫度在8(TC下保持約15分鐘，然后讓懸浮液冷卻至室溫。通過使用Whatman#l濾紙的真空過濾收集固體物，松散地覆蓋而干燥一夜。粉末X射線主峰(角度29，強(qiáng)度)12.089°，100%;10.485°，83.6%;13.227°，56.0%;和7.660°，8.0%。實(shí)施例57-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯_3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮苯水合物II將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯_3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩乙醇鹽(200.6mg)在水(25mL)中形成的淤漿加熱到75。C保持0.5小時。添加0.72mL的INHC1和繼續(xù)加熱0.75小時?？焖偬砑?.72mL的1NNa0H。讓懸浮液冷卻至室溫。通過使用Whatmarrfl濾紙的真空過濾收集固體物，用20mL去離子水漂洗，然后松散地覆蓋而干燥2天。粉末X射線主峰(角度2e，強(qiáng)度)6.878°，100%;5.732°，58.7%;11.550°，82.8%;18.426°，20.7%;和10.856°，44.2%。實(shí)施例67-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯_3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩二水合物將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2_a]卩比啶_3_基_2，5_二氧代_1H_吡咯_3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮萆乙醇鹽(200.8mg)在水(25mL)形成的淤漿加熱到75。C保持0.67小時。添加0.72mL的INHC1和繼續(xù)加熱1.75小時。以每5分鐘lmL增量添加0.INNaOH，直到加入了7.2mL為止。在最后添加之后，讓懸浮液在75t:下保持0.67小時，然后讓懸浮液冷卻至室溫。通過使用Whatmarrfl濾紙的真空過濾收集固體物，用20mL去離子水漂洗，然后松散地覆蓋而干燥2天。粉末X射線主峰(角度29，強(qiáng)度)5.498°，100%;22.149°，100%;14.921°，32.9%;11.399°，36.7%;和11.019°，20.5%。在給藥于患者之前，化合物I優(yōu)選被配制成藥物組合物。有用的配制劑包含化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與SBE7-P-CD?；衔颯BE7-P-CD是描述在US專利5，134，127中的e-環(huán)糊精的磺基丁基醚。它以商品名稱CAPTISOL⑧銷售。具體的配制劑已描述在下面的配制劑實(shí)施例中。有用的藥物組合物可以通過將化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物(50mg/mL)溶解在2-吡咯烷酮(SOLUPHOR_P)中來制備。該溶液然后用SBE7-|3-CD(30體積％)和泊洛沙姆188(Lutrol-F68)(10體積％)的水溶液稀釋。配制劑實(shí)施例1通過將30.0gSBE7-P-CD添加到71.25mL的水中，然后攪拌或攪動直到完全溶解為止，來制備第一種溶液。添加10.0g泊洛沙姆188和繼續(xù)攪拌，直到完全溶解為止。通過根據(jù)以下公式將化合物I乙醇鹽添加到2-吡咯烷酮中來制備第二種溶液mL2-吡咯烷酮=(實(shí)際化合物I乙醇鹽wt(mg)/50mg/mL)X0.5。將第一種溶液添加到第二種溶液中。經(jīng)由0.2ymSUPOR(親水性聚醚砜)過濾器(PallCorporation)將所得溶液過濾到無灰塵的容器中。另一藥物組合物實(shí)施方案是通過將化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與等摩爾量的藥物學(xué)上可接受的酸在水中摻混來制備。該混合物然后與至少一摩爾當(dāng)量的作為水溶液的SBE7-P-CD摻混。優(yōu)選的藥物學(xué)上可接受的酸包括HCl，HBr，硫酸和甲磺酸。HC1的使用是尤其優(yōu)選的。配制劑實(shí)施例2通過將20.0gSBE7-P-CD添加到80.OOmL的水中，然后攪拌或攪動，直到完全溶解為止，來制備第一種溶液。根據(jù)以下公式將該溶液添加到化合物I乙醇鹽中mL第一種溶液=(實(shí)際化合物I乙醇鹽wt(mg)/20mg/mL)-(實(shí)際化合物I乙醇鹽wt(mg)/1200mg/mL)-(實(shí)際化合物I乙醇鹽wt(mg)XO.00195107mL的INHCl/mg化合物I乙醇鹽)。根據(jù)以下計算添加INHC1:mL所要添加的INHC1=(實(shí)際化合物I乙醇鹽wt(mg)XO.00195107mL的INHCl/mg化合物I乙醇鹽)。攪拌或浴超聲波處理，直到全部化合物已經(jīng)溶解為止。優(yōu)選的藥物組合物實(shí)施方案是通過如下制備的將1摩爾當(dāng)量的化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物添加到至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD的在低于5.5的pH(初始溶液pH)下的水溶液中，任選地是在有藥物學(xué)上可接受的緩沖劑存在下，然后混合，直到化合物I或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物已經(jīng)溶解為止。該pH然后用藥物學(xué)上可接受的堿調(diào)節(jié)到在2.5和3.5之間(最終溶液pH)。所得溶液配制劑可以直接施用于患者，或該溶液優(yōu)選被凍干，得到能夠用水重新組成的固體配制劑。SBE7-P-CD可以1摩爾當(dāng)量到為了在1天中對患者施用不超過13.4g的SBE7-P-CD所需要的用量的范圍存在。SBE7-P-CD的優(yōu)選量是1.0_4.0摩爾當(dāng)量，更優(yōu)選是2.0-3.0摩爾當(dāng)量，以及相對于化合物I的2.5-2.7摩爾當(dāng)量是尤其優(yōu)選的。雖然低于5.5的任何初始溶液pH是可接受的，但是低于3.0的初始溶液pH是優(yōu)選的，在1.0至2.0范圍內(nèi)的初始溶液pH是更優(yōu)選的，以及在1.2和1.4之間的初始溶液pH是最優(yōu)選的。通過添加能夠調(diào)節(jié)溶液的pH到低于5.5的pH的任何藥物學(xué)上可接受的酸來達(dá)到目標(biāo)初始溶液pH。鹽酸的使用是優(yōu)選的。該配制劑可任選含有藥物學(xué)上可接受的緩沖劑。藥物學(xué)上可接受的緩沖劑是由藥物配制劑領(lǐng)域中技術(shù)人員用于將最終溶液的pH穩(wěn)定在特定pH范圍內(nèi)的那些化合物。藥物學(xué)上可接受的緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑以及檸檬酸，甘氨酸，和酒石酸或它們的藥物學(xué)上可接受的鹽。這些酸的藥物學(xué)上可接受的鹽包括鈉和鉀鹽。優(yōu)選的是藥物學(xué)上可接受的緩沖劑存在于配制劑中。酒石酸是優(yōu)選的藥物學(xué)上可接受的緩沖劑。重要的是在pH調(diào)節(jié)到最終溶液pH之前化合物I完全溶解。溶解可以通過任何機(jī)械混合方式或通過調(diào)節(jié)溶液的溫度來協(xié)助，如果需要或希望的話。在室溫下攪拌溶液是優(yōu)選的。通過添加能夠調(diào)節(jié)溶液的pH到2.5-3.5范圍內(nèi)的pH的任何藥物學(xué)上可接受的堿來達(dá)到最終溶液pH。氫氧化鈉的使用是優(yōu)選的。最終溶液pH可以在2.5至3.5之間，但優(yōu)選是在2.5至3.l之間。在2.7至3.1范圍內(nèi)的最終溶液pH是最優(yōu)選的。一旦最終溶液pH已經(jīng)實(shí)現(xiàn)，如果需要或希望的話，該溶液可以在標(biāo)準(zhǔn)冷凍干燥條件下被凍干，得到適合于用水重新組成的固體藥物組合物。配制劑實(shí)施例3制備O.15g酒石酸和12g(5.55mmol)SBE7-e-CD在70mL的水中的溶液。添加5mL的1.0NHC1，然后在室溫下混合。添加1.lg(2.15mmo1)化合物I乙醇鹽并在室溫下攪拌，直到溶解為止。添加1N氫氧化鈉至達(dá)到約2.9的pH。添加足夠的水以達(dá)到100mL的最終體積。凍干這一溶液獲得無定形橙紅色固體。權(quán)利要求治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的方法，它包括對需要該治療的癌癥患者施用有效量的選自CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素和鉑化療劑中的化療劑以及與其相結(jié)合的有效量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，1-jk][1，4]苯并二氮或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。F2008800231969C00011.tif2.在需要治療的患者中使用CPT-11、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素或鉑化療劑來治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的改進(jìn)方法，其中改進(jìn)之處包括7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3-基-2，5-二氧代-111-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的共同給藥。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中化療劑是鉑化療劑或培美曲塞與鉑化療劑。4.權(quán)利要求3的方法，其中鉑化療劑是順氯氨鉑或卡鉑。5.7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基_2，5_二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]-苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備藥物的用途，該藥物與選自CPT-ll、培美曲塞、吉西他濱、依托泊苷、阿霉素和鉑化療劑中的化療劑相結(jié)合用于治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌。6.權(quán)利要求5的用途，其中化療劑是鉑化療劑或培美曲塞與鉑化療劑。7.權(quán)利要求6的用途，其中鉑化療劑是順氯氨鉑或卡鉑。8.治療胃癌的方法，該方法包括對需要該治療的癌癥患者施用有效量的選自5-氟尿嘧啶和鉑化療劑中的化療劑以及與其相結(jié)合的有效量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。9.在需要治療的患者中使用5-氟尿嘧啶或鉑化療劑來治療胃癌的改進(jìn)方法，其中改進(jìn)之處包括7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶_3_基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基-羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的共同給藥。10.7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]卩比啶-3-基_2，5_二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]-苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備藥物的用途，該藥物與選自5-氟尿嘧啶和鉑化療劑中的化療劑相結(jié)合用于治療胃癌。11.藥物組合物，通過以下步驟獲得a)將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-l，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物添加到含有至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD和任選地含藥物學(xué)上可接受的緩沖劑的在低于5.5的pH下的水溶液中；b)用藥物學(xué)上可接受的酸或堿將所得溶液的pH調(diào)節(jié)在2.5和3.5之間；禾口c)任選地凍干所得溶液。12.能夠用水重新組成為適合于由注射或灌注法施用于患者的溶液的藥物組合物，它包含l摩爾當(dāng)量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]吡啶_3_基-2，5-二氧代_1H_吡咯-3_基)_9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，l-jk][1，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD，和任選地含藥物學(xué)上可接受的緩沖劑。13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中存在藥物學(xué)上可接受的緩沖劑。14.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中藥物學(xué)上可接受的緩沖劑是酒石酸。15.藥物組合物，它包含l摩爾當(dāng)量的7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]吡啶_3-基_2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2_(1_哌啶基羰基)_吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并-二氮雜草和至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD。16.包含7-2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]卩比啶-3-基-2，5-二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-l，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩的藥物組合物的制備方法，該組合物能夠用水重新組成為適合于由注射或灌注法施用于患者的溶液，該方法包括以下步驟a)將7-(2，5-二氫-4-咪唑并[l，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代_1H_吡咯-3-基)-9-氟-l，2，3，4-四氫-2-(l-哌啶基-羰基)吡咯并[3，2，l-jk][l，4]苯并二氮罩或它的藥物學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物添加到含有至少1摩爾當(dāng)量的SBE7-P-CD和任選地含藥物學(xué)上可接受的緩沖劑的在低于5.5的pH下的水溶液中；b)用藥物學(xué)上可接受的酸或堿將所得溶液的pH調(diào)節(jié)在2.5和3.5之間；禾口c)凍干所得溶液。全文摘要描述了治療患者的胃癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌或結(jié)腸直腸癌的改進(jìn)方法，以及用于該方法的藥物組合物和制備該組合物的方法，所述組合物含有7-(2，5-二氫-4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-2，5-二氧代-1H-吡咯-3-基)-9-氟-1，2，3，4-四氫-2-(1-哌啶基羰基)-吡咯并[3，2，1-jk][1，4]苯并二氮文檔編號A61K31/7068GK101743005SQ200880023196公開日2010年6月16日申請日期2008年6月20日優(yōu)先權(quán)日2007年7月2日發(fā)明者A·阿布努布,M·徹迪德,T·A·恩格勒,V·瓦蘇德文申請人:伊萊利利公司