專(zhuān)利名稱(chēng)：：用于綴合疫苗的經(jīng)過(guò)修飾的多糖的制作方法用于綴合疫苗的經(jīng)過(guò)修飾的多糖1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及制備免疫原性糖綴合物(特別是用于在受試者中誘導(dǎo)治療性免疫應(yīng)答的藥物組合物中使用的免疫原性糖綴合物)的方法。本發(fā)明的免疫原性糖綴合物包含一種或多種低聚糖或多糖，該低聚糖或多糖通過(guò)活性醛基綴合于一種或多種載體蛋白質(zhì)。因此，本發(fā)明提供了制備以下物質(zhì)的方法(i)不飽和的微生物的N-?；苌锏途厶腔蚨嗵?；(ii)不飽和的N-?；苌锏男路f的綴合物；以及(iii)糖綴合物組合物，其包含用作一種或多種蛋白質(zhì)的共價(jià)連接體的微生物的不飽和N-?；苌锏钠蔚木Y合物分子。本發(fā)明另外包括所述免疫原性糖綴合物藥物組合物用于預(yù)防或治療感染性疾病的用途。2.
背景技術(shù)：
：在全世界，由革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌引起的微生物感染引起嚴(yán)重的發(fā)病率，所述革蘭氏陽(yáng)性菌例如鏈球菌(Str印tococcus)、葡萄球菌(St即hylococcus)、腸球菌(Enterococcus)、芽孢桿菌(Bacillus)、棒狀桿菌(Corynebacterium)、李其jf特菌(Listeria)、丹毒絲菌(Erysipelothrix)和梭狀芽孢桿菌(Clostridium)，所述革蘭氏陰性菌例如嗜血桿菌(Haemophilus)、志賀氏菌(Shigella)、霍亂弧菌(Vibriocholerae)、奈瑟氏球菌(Neisseria)和某些類(lèi)型的大腸桿菌(Escherichiacoli)。例如，鏈球菌是革蘭氏陽(yáng)性菌的一個(gè)大的和變化的屬，該屬基于鏈球菌的細(xì)胞壁多糖的抗原性和結(jié)構(gòu)而被分成幾群(Lancefield，R.C.1933，Aserologicaldifferentiationofhumanandothergroupsofhemolyticstreptococci.J.Exp.Med.57:571—595;Lancefield，R.C.1938，Amicro—precipitintechniqueforclassifyinghemolyticstreptococciandimprovedmethodsforproducingantigen.Proc.Soc.Exp.Biol,andMed.38:473-478;其各自被全文并入本文作為參考)。例如，B群鏈球菌基于莢膜多糖被分類(lèi)為若干不同的類(lèi)型，例如Ia、Ib、II、III、IV、V、VI、VI1和VIII型，它們負(fù)責(zé)產(chǎn)生大部分的致病性。與使用許多其它人細(xì)菌性病原體的發(fā)現(xiàn)相似，在用于疫苗時(shí)，B群鏈球菌的莢膜多糖可以提供有效的針對(duì)這些細(xì)菌感染的保護(hù)(參見(jiàn)，Wessels等人，1990.Imm皿ogenicityinanimalsof即olysaccharide-proteinconjugatevaccineagainsttypeIIIgroupBStr印tococcus.J\Clin.Invest.86:1428-1433;Wessels等人1993，StimulationofprotectiveantibodiesagainsttypelaandlbgroupBstr印tococcibyatypelapolysaccharide—teta皿stoxoidconj卿tevaccine.Infect.I匪n.61:4760-4766;其各自被全文并入本文作為參考)。革蘭氏陰性菌也是發(fā)病率和死亡率的重要原因。在針對(duì)b型流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)細(xì)菌(Hib)的多糖_蛋白質(zhì)疫苗的新近開(kāi)發(fā)和使用之前，Hib細(xì)菌感染導(dǎo)致嬰兒精神發(fā)育遲緩的許多病例。嬰兒和幼年兒童典型地具有差的對(duì)多糖抗原的免疫原性應(yīng)答。這些應(yīng)答的特征是不依賴(lài)T細(xì)胞，并且因此不涉及例如記憶、同種型轉(zhuǎn)換或親和力成熟的重要屬性，所述重要屬性是賦予針對(duì)隨后感染的長(zhǎng)期免疫學(xué)防護(hù)所必需的。為了解決在嬰兒和幼年兒童對(duì)多糖的有效免疫原性應(yīng)答的缺乏，本領(lǐng)域中已經(jīng)努力開(kāi)發(fā)用于通過(guò)將多糖細(xì)菌抗原共價(jià)偶聯(lián)于載體蛋白以形成綴合物分子而將不依賴(lài)T細(xì)胞的應(yīng)答轉(zhuǎn)換為T(mén)細(xì)胞依賴(lài)性應(yīng)答的方法。參見(jiàn)，Je皿ings等人美國(guó)專(zhuān)利第4，356，170號(hào)，其全文并入本文作為參考。佐劑是加強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的物質(zhì)，因此已經(jīng)在許多疫苗和疫苗候選物中有所應(yīng)用。佐劑的免疫剌激作用不是抗原特異性的，因?yàn)樗鼈兗訌?qiáng)針對(duì)許多不同類(lèi)型抗原的免疫應(yīng)答。目前被FDA批準(zhǔn)人用的唯一的佐劑是鋁鹽，但是用于動(dòng)物接種和在較新的疫苗候選物中使用的許多佐劑在來(lái)源上是微生物的(White,R.G.，1976，Theadjuvanteffectofmicrobialproductsontheimmuneresponse.Ann.Rev.Microbiol.30:579-595，被全文并入本文作為參考)。這種佐劑包括弗氏佐劑、小棒狀桿菌、胞壁酰二肽、破傷風(fēng)類(lèi)毒素等。多糖對(duì)載體蛋白的綴合可以有效地使多糖更具免疫原性。本領(lǐng)域中已知的載體蛋白質(zhì)包括破傷風(fēng)毒素/類(lèi)毒素、CRM^、得自革蘭氏陰性菌的外膜蛋白質(zhì)(例如，高分子量蛋白質(zhì))、得自不可分類(lèi)的流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)的P6和P4、得自粘膜炎莫拉氏菌(Moraxellacatarrhalis)的CD和USPA、白喉毒素/類(lèi)毒素、去毒的綠膿假單胞菌毒素(Pseudomonasaeruginosatoxin)A、霍舌L菌毒素/類(lèi)毒素、百曰咳毒素/類(lèi)毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)外毒素/類(lèi)毒素、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、輪狀病毒VP7蛋白質(zhì)或呼吸道合胞病毒F和G蛋白質(zhì)。由于作為載體的這種能力，破傷風(fēng)類(lèi)毒素已經(jīng)使用了數(shù)十年，并且已經(jīng)確定了其安全性特征。針對(duì)多種細(xì)菌感染的莢膜多糖(CP)綴合物疫苗目前處于開(kāi)發(fā)和臨床評(píng)價(jià)階段。在單獨(dú)的注射劑中包含被組合的多種CP血清型目前正在研究之中。然而，將CP綴合物疫苗組合在單獨(dú)的多價(jià)注射劑中可以導(dǎo)致不同組分之間的競(jìng)爭(zhēng)并且不利地影響任何單獨(dú)綴合物的免疫原性(Fattom等人，1999，Vaccine17:126-33，被全文并入本文作為參考)。本領(lǐng)域中已經(jīng)描述了多種用于將莢膜多糖綴合于蛋白質(zhì)的方法。多糖對(duì)載體蛋白的綴合可以有效地使多糖更具免疫原性(Robbins，J.B.和R.Schneerson.1990，Polysaccharide—proteinconjugates:Anewgenerationofvaccines.J.Infect.Dis.161:821-832;被全文并入本文作為參考)。另一個(gè)綜述參見(jiàn)ContributionstoMicrobiologyandlmm皿ology，vol10，ConjugateVaccines,volumeeditionsJ.M.Cruse和R.E.Lewis,Jr.，1989(被全文并入本文作為參考)。在一個(gè)方法中，多糖經(jīng)過(guò)弱酸水解，產(chǎn)生能夠與蛋白反應(yīng)以形成共價(jià)鍵的還原性端基(Anderson,P.A.，1983，Infect.Immun.，39:233-238;被全文并入本文作為參考)。然而，參與綴合于蛋白質(zhì)的末端糖基團(tuán)在半縮醛和醛之間存在有平衡，因此對(duì)蛋白質(zhì)的偶聯(lián)效率低。為了克服末端還原糖的差反應(yīng)性，本領(lǐng)域中轉(zhuǎn)向輕度氧化以便在用于綴合于蛋白質(zhì)的多糖的末端位置引入穩(wěn)定的醛基(參見(jiàn)，Jennings等人，美國(guó)專(zhuān)利第4，356，170號(hào)，同上)。其它可用的方法，例如一些多糖的通過(guò)104—氧化進(jìn)行活化，僅能產(chǎn)生每個(gè)多糖分子的一個(gè)活性部位并且隨后對(duì)載體蛋白的偶聯(lián)產(chǎn)生單一末端的糖綴合物疫苗。這種方案出現(xiàn)在例如用于C型、B型腦膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)的糖綴合物疫苗和用于鏈球菌A群的糖綴合物疫苗中。然而，每分子的單一活性部位限制了免疫原性增強(qiáng)的程度。63.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供具有多個(gè)活性部位的多糖，其允許通過(guò)綴合于適當(dāng)?shù)妮d體蛋白而生成免疫原性交聯(lián)的糖綴合物疫苗。此外，所述方法還適用于任何包含氨基糖的多糖，這是優(yōu)于現(xiàn)有的I04—氧化方法的明顯的優(yōu)點(diǎn)，所述I04—氧化方法需要在糖鏈中具有兩個(gè)相鄰的(即鄰位的)游離羥基(-0H)基團(tuán)。本發(fā)明涉及制備免疫原性糖綴合物(特別是用于在受試者中誘導(dǎo)治療性免疫應(yīng)答的藥物組合物中使用的免疫原性糖綴合物)的方法。本發(fā)明的免疫原性糖綴合物包含一種或多種低聚糖或多糖，該低聚糖或多糖通過(guò)活性醛基綴合于一種或多種載體蛋白質(zhì)。與本領(lǐng)域中已知的先前的綴合方法不同，本發(fā)明提供適用于任何包含至少一個(gè)氨基糖的多糖的方法，該方法還產(chǎn)生保持抗原性的充分界定的可溶性綴合物。本發(fā)明提供制備免疫原性糖綴合物的方法，其包括以下步驟使包含一個(gè)或多個(gè)氨基糖的低聚糖或多糖中的至少一個(gè)N-乙酰基脫乙?；纬删哂兄辽僖粋€(gè)，優(yōu)選多個(gè)氨基糖的低聚糖或多糖，所述氨基糖包含伯氨基；用包括至少4個(gè)碳長(zhǎng)度的不飽和烴基部分的N-?；糠秩〈霾被械闹辽僖粋€(gè)，從而產(chǎn)生在一個(gè)或多個(gè)烴基部分的不飽和位置處包括至少一個(gè)，優(yōu)選多個(gè)活性部位的低聚糖或多糖；使所述化合物與氧化劑接觸，在低聚糖或多糖的一個(gè)或多個(gè)不飽和位置上產(chǎn)生活性醛(-CH0)基團(tuán)；以及使所述化合物與載體蛋白綴合，從而產(chǎn)生免疫原性糖綴合物。在可供選擇的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備免疫原性糖綴合物的方法，其包括以下步驟用包括至少4個(gè)碳長(zhǎng)度的不飽和烴基部分的N-?；糠秩〈途厶腔蚨嗵侵械闹辽僖粋€(gè)N-乙?；?，從而產(chǎn)生在一個(gè)或多個(gè)烴基部分的不飽和位置處包括至少一個(gè)，優(yōu)選多個(gè)活性部位的低聚糖或多糖；使所述化合物與氧化劑接觸，在低聚糖或多糖上的烴基部分的一個(gè)或多個(gè)不飽和位置產(chǎn)生活性醛(-CH0)基團(tuán)；以及使所述化合物與載體蛋白綴合，從而產(chǎn)生免疫原性糖綴合物。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述N-?；糠职ú伙柡偷臒N基部分。在某些實(shí)施方案中，所述不飽和的烴基部分是C3、Q、C5、Ce、C7、C7、C8、C9、Q?；駽n部分，并且可以在碳主鏈內(nèi)包括一個(gè)或多個(gè)雙鍵。在某些實(shí)施方案中，所述不飽和的烴基部分僅包括一個(gè)雙鍵，即，一個(gè)不飽和位置。在其它實(shí)施方案中，N-?；糠质荖-戊烯酰基部分。所述不飽和的N-酰基部分可以包含本文中所述的或本領(lǐng)域中已知的適合于在不飽和位置氧化為活性醛并且隨后與載體蛋白綴合的任何不飽和的烴基部分，例如，不飽和的?；狒?例如，戊烯酸酐)或不飽和的?；u(例如，戊烯酰氯、丙烯酰氯)。本發(fā)明的分子的氧化優(yōu)選局限于不飽和N-?；糠值碾p鍵(即，不飽和烴基部分的不飽和位置)的氧化，因此在本文中定義的或本領(lǐng)域中已知的溫和條件下進(jìn)行，例如，如本領(lǐng)域中已知的，在pH4-9.5的范圍內(nèi)使用高碘酸鹽進(jìn)行氧化。由于溫和的氧化條件，位置太接近?；牟伙柡臀恢貌荒鼙谎趸?或不能形成活性醛基以允許隨后與載體蛋白綴合。因此，為了用于本發(fā)明的方法，不飽和的烴基的不飽和位置(即，雙鍵的位置)既不在不飽和烴基的碳1和碳2之間，也不在碳2和3之間(關(guān)于本領(lǐng)域中接受的和本申請(qǐng)中使用的烴基的編號(hào)，參見(jiàn)例如，圖1)。在某些實(shí)施方案中，所述不飽和的烴基部分僅包括一個(gè)雙鍵。在其它實(shí)施方案中，不飽和的烴基部分包括在主鏈碳鏈的末端兩個(gè)碳之間的雙鍵。本發(fā)明另外提供免疫原性糖綴合物，其包含a)包含一個(gè)或多個(gè)氨基糖的至少一7個(gè)低聚糖或多糖，以及b)與所述低聚糖或多糖綴合的載體蛋白；所述低聚糖或多糖制備如下i)將所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖的N-乙?；撘阴；?；ii)將所得到的氨基糖的伯氨基用包括至少4個(gè)碳的不飽和烴基的N-酰基取代；以及iii)將所述不飽和烴基氧化，以生成在主鏈的末端具有活性醛基的至少3個(gè)碳的烴基；根據(jù)本發(fā)明的方法，不飽和烴基的不飽和(即，雙鍵)的位置既不在主鏈的碳1和碳2之間，也不在主鏈的碳2和碳3之間(關(guān)于碳的編號(hào)，參見(jiàn)例如，圖1)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述不飽和的烴基鏈具有至少5個(gè)碳的長(zhǎng)度。在其它實(shí)施方案中，在氧化之前，烴基鏈的不飽和位置在不飽和烴基鏈的末端兩個(gè)碳之間。根據(jù)本發(fā)明的方法，載體蛋白通過(guò)本領(lǐng)域中已知的和/或本文中所述的任何方法經(jīng)由活性醛基綴合于至少一個(gè)多糖或低聚糖。本發(fā)明還提供免疫原性糖綴合物，其包含a)包含一個(gè)或多個(gè)氨基糖的至少一個(gè)低聚糖或多糖，所述氨基糖包括一個(gè)或多個(gè)N-乙?；渲兴鲆粋€(gè)或多個(gè)N-乙?；呀?jīng)被包括至少3個(gè)碳的烴基并在所述烴基主鏈的末端包括活性醛基的N-酰基取代；以及b)與所述低聚糖或多糖綴合的載體蛋白。在優(yōu)選實(shí)施方案中，包括活性醛基的烴基鏈具有至少4個(gè)碳的長(zhǎng)度。根據(jù)本發(fā)明的方法，載體蛋白通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法(例如，還原胺化)和/或本文中所述的任何方法，經(jīng)由活性醛基，綴合于至少一個(gè)多糖或低聚糖。根據(jù)本發(fā)明，多糖或低聚糖的一個(gè)或多個(gè)氨基糖上的至少一個(gè)N-乙?；蝗〈?，以形成如下(式I)的化合物suga產(chǎn)NH其中&是不飽和的c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c1Q或cn烴基部分，其中fsugarj表示多糖或低聚糖的所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。在某些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在其它實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖不是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在特定的實(shí)施方案中，&是例如C3或C4，使得分別形成N-丁烯酰基或N-戊烯?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方案中，Rd又包含一個(gè)雙鍵，即，不飽和位置，所述雙鍵處于烴基主鏈的末端2個(gè)碳之間。所述不飽和的N-酰基部分用作通過(guò)將不飽和位置氧化為活性醛基并且隨后綴合于所述蛋白質(zhì)，使低聚糖或多糖與載體蛋白綴合的連接部分。烴基部分的不飽和位置的氧化可以通過(guò)本文中所述的和/或本領(lǐng)域中已知的任何方法進(jìn)行，例如使用高碘酸鹽。因?yàn)檠趸梢粤呀舛嗵擎?，所以本發(fā)明包括的氧化步驟僅在溫和條件下進(jìn)行，例如，在約4約9.5的pH范圍，在低溫(例如，約fC約27°C)進(jìn)行。由于溫和的氧化條件，為了使不飽和位置被有效地氧化，不飽和烴基部分的雙鍵不能處于不飽和烴基主鏈的碳1和碳2之間或碳2和碳3之間(關(guān)于碳的編號(hào)，參見(jiàn)例如，圖1)。在根據(jù)這個(gè)實(shí)施方案的非限制性實(shí)例中，其中&是不飽和的C3部分(形成式1中的N-丁烯酰基)，所述N-?；ㄌ幱跓N基主鏈的碳3和碳4之間的雙鍵。在其它實(shí)施方案中，其中&包括多于3個(gè)碳的鏈，不飽和位置可以處于大于碳4的位置。根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品和方法，在氧化和綴合之后，糖綴合物的蛋白質(zhì)和低聚糖或多糖通過(guò)如下所示的連接共價(jià)連接(式II中的框內(nèi)部分)其中R2是飽和C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9或C1Q烴基部分，并且其中NH(框內(nèi))屬于蛋白質(zhì)的伯NH2基團(tuán)之一，例如，賴(lài)氨?；蚓滨；鶜埢?。式n的fsugar)表示多糖或低聚糖的所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。在某些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在其它實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖不是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。式n的&衍生自式i的iv選擇式i的Rjs卩，不飽和的烴基部分)，使得在氧化和綴合之后，如本領(lǐng)域中已知的和/或本文中描述的，得到期望的連接部分R2或式II(即，飽和的烴基部分)。根據(jù)本發(fā)明的方法，多糖或低聚糖的一個(gè)或多個(gè)氨基糖的N-乙酰基可以在任何位置連接于氨基糖，包括糖的1、2、3、4或5位。氨基糖的結(jié)構(gòu)為本領(lǐng)域中公知的，因此，所述連接的位置可以按照慣例確定。例如，在氨基糖是GlcNAc時(shí)，糖的N-乙?；幱谔?位；在氨基糖是唾液酸時(shí)，糖的N-乙?；幱谔?位。在特定的實(shí)施方案中，糖分子的N-乙?；籒-戊烯?；〈渲蠳-戊烯?；米魇沟途厶腔蚨嗵桥c載體蛋白綴合(例如通過(guò)還原胺化來(lái)綴合)的連接部分。在特定的實(shí)施方案中，在氧化和綴合之后，所述連接基團(tuán)是具有飽和的C4主鏈的飽和N-?；?。根據(jù)本發(fā)明的方法，被取代的N-乙?；梢允侨魏伟被?包括但不限于GlcNAc、ManNAc、GalNAc和唾液酸)的N-乙酰基。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，使用堿進(jìn)行N-乙?；娜〈饔谩１景l(fā)明包括使用適合于在免疫原性綴合物疫苗中使用并且功能在于將不依賴(lài)T細(xì)胞的免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化為T(mén)細(xì)胞依賴(lài)性免疫應(yīng)答的本領(lǐng)域中已知的和/或本文中描述的任何載體蛋白。在某些實(shí)施方案中，載體蛋白是細(xì)菌蛋白或其片段，例如，細(xì)菌毒素或類(lèi)毒素或其片段?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明的方法使用的載體蛋白的非限制性實(shí)例包括破傷風(fēng)毒素或類(lèi)毒素、CRM^、得自革蘭氏陰性菌的外膜蛋白質(zhì)、得自不可分類(lèi)的流感嗜血桿菌的P6和P4、產(chǎn)生自B型流感嗜血桿菌的蛋白質(zhì)、得自粘莫炎莫拉氏菌的CD和USPA、白喉毒素/類(lèi)毒素、去毒的綠膿假單胞菌毒素A、霍亂菌毒素/類(lèi)毒素、百日咳毒素/類(lèi)毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素/類(lèi)毒素、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、輪狀病毒VP7蛋白質(zhì)和呼吸道合胞病毒F蛋白質(zhì)和G蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法使用的低聚糖或多糖是得自細(xì)菌的多糖或其抗原性片段。該細(xì)菌包括但不限于鏈球菌、葡萄球菌、腸球菌、芽孢桿菌、棒狀桿菌、李斯特菌、丹毒絲菌、梭狀芽孢桿菌、志賀氏菌、克雷伯氏菌、霍亂弧菌、奈瑟氏球菌和埃希氏菌。在相關(guān)的實(shí)施方案中，低聚糖或多糖是產(chǎn)生自任何有莢膜的細(xì)菌的莢膜多糖，例如Ia型、Ib型、11型、111型、V型、VI型或VIII型B群鏈球菌；A群鏈球菌；B型、C型、Y型或W135型腦膜炎奈瑟球菌；III型、IV型或XIV型肺炎鏈球菌；或大腸桿菌Kl。在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇低聚糖或多糖，使得能夠誘導(dǎo)針對(duì)衍生得到該低聚糖或多糖的細(xì)菌的免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，低聚糖或多糖不是天然存在的低聚糖或多糖，例如，可以是通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何技術(shù)合成的，或者是可以產(chǎn)生自天然存在的化合物但是經(jīng)過(guò)修飾的，使得得到的低聚糖或多糖在自然界中沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)。例如，多糖或低聚糖可以經(jīng)過(guò)修飾，以增加針對(duì)野生型多糖或低聚糖對(duì)應(yīng)物的抗原性，例如，誘導(dǎo)得到增強(qiáng)的免疫應(yīng)答。根據(jù)本發(fā)明的方法，有用的多糖包括至少一個(gè)能夠誘導(dǎo)免疫特異性應(yīng)答的抗原性抗原表位。這種多糖或低聚糖優(yōu)選包含至少7個(gè)糖部分，但是可以在僅有兩個(gè)糖部分的情況下表現(xiàn)出活性。多糖或低聚糖可以是無(wú)支鏈的或有支鏈的，并且可以具有約iooo到幾百萬(wàn)道爾頓的分子量。在某些實(shí)施方案中，所述多糖或低聚糖具有一個(gè)或多個(gè)化學(xué)修飾。本發(fā)明所包括的化學(xué)修飾的非限制性實(shí)例包括多糖的羧化、磺化、硫酸酯化和磷酸酯化衍生物、它們的鹽、及其混合物。本發(fā)明還包括組合物(特別是藥物組合物)的用途，所述組合物包括用于在受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的治療有效濃度的一種或多種免疫糖綴合物。誘導(dǎo)對(duì)所述免疫糖綴合物的低聚糖或多糖的免疫應(yīng)答可用于治療和/或預(yù)防致病生物引起的感染，所述低聚糖或多糖產(chǎn)生自該致病生物。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的糖綴合物可用作用于預(yù)防的疫苗或作為治療劑。在某些實(shí)施方案中，免疫糖綴合物包含產(chǎn)生自多個(gè)類(lèi)型或菌株的細(xì)菌的多種多糖和/或低聚糖，從而誘導(dǎo)針對(duì)所述多個(gè)物種/類(lèi)型或菌株的細(xì)菌免疫應(yīng)答。在其它實(shí)施方案中，合成用于生產(chǎn)本發(fā)明的免疫糖綴合物的低聚糖或多糖，以包括得自多個(gè)物種/菌株的細(xì)菌和/或其它致病生物(例如，原生動(dòng)物)的多種抗原性結(jié)構(gòu)域，使得在將其對(duì)受試者給予時(shí)產(chǎn)生多價(jià)免疫應(yīng)答。本發(fā)明還涉及用于人或動(dòng)物的免疫原性制劑，尤其涉及包含一種或多種本發(fā)明的免疫糖綴合物的免疫原性組合物。在某些實(shí)施方案中，所述免疫原性制劑包括多種免疫糖綴合物和/或多種載體蛋白質(zhì)。因?yàn)榭梢栽O(shè)計(jì)所述免疫糖綴合物，以包括得自多個(gè)類(lèi)型或菌株的細(xì)菌的多糖或低聚糖和/或設(shè)計(jì)其以包括嵌合的多糖或低聚糖(即，包括得自多個(gè)類(lèi)型和/或菌株的細(xì)菌的表位的多糖或低聚糖)，所以可以設(shè)計(jì)本發(fā)明的免疫原性制劑，用于針對(duì)多個(gè)細(xì)菌類(lèi)型、一種菌株變體和或多種菌株變體的預(yù)防或治療。可以使用本領(lǐng)域中公知的和常規(guī)的許多方法，以使用本發(fā)明的免疫原性制劑使受試者免疫，所述方法包括但不限于鼻內(nèi)、氣管內(nèi)(intratrachial)、經(jīng)口、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮下的途徑。3.1術(shù)語(yǔ)如本申請(qǐng)中使用的，在與數(shù)字一起使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"約"或"大約"是指在所引述的數(shù)字的1%、5%或10%范圍內(nèi)或在用于測(cè)量和/或確定所述數(shù)字的標(biāo)準(zhǔn)方法的典型實(shí)驗(yàn)誤差范圍內(nèi)的任何數(shù)字。術(shù)語(yǔ)"載體"、"載體蛋白"或"載體多肽"可互換地使用，是指共價(jià)連接有多糖抗原10的多肽部分。載體蛋白經(jīng)常是免疫原性的，因此也可以有助于疫苗的效價(jià)。與載體蛋白的連接典型地增加綴合的碳水化合物分子的抗原性。所述載體蛋白可以與連接于其上的多糖得自相同的目標(biāo)生物體，或者可以得自不同的生物體。例如，載體蛋白可以是細(xì)菌蛋白，包括但不限于細(xì)菌毒素或類(lèi)毒素。在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇載體蛋白，使得其起到將不依賴(lài)T細(xì)胞的免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化為T(mén)細(xì)胞依賴(lài)性免疫應(yīng)答的作用。如本申請(qǐng)中使用的，在對(duì)受試者給予一種或多種治療的情況中使用的術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合"是指使用超過(guò)一種的治療(例如，不止一種的預(yù)防劑和/或治療劑)。使用術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合"沒(méi)有限制對(duì)受試者給予治療(例如，預(yù)防劑和/或治療劑)的順序。第一治療(例如，第一預(yù)防劑或治療劑)可以在對(duì)受試者給予第二治療(例如，第二預(yù)防劑或治療劑)之前(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)之前)、與其同時(shí)或在其之后(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí))給予。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性糖綴合物可用于與本領(lǐng)域中已知用于預(yù)防或治療感染性疾病(例如，由感染一個(gè)或多個(gè)物種/菌株的細(xì)菌所引起的疾病)的一種或多種另外的治療(例如，疫苗)聯(lián)合。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"控制"、"應(yīng)對(duì)"和"管理"是指受試者從治療(例如，預(yù)防劑或治療劑)得到的有利作用，所述治療沒(méi)有引起疾病的治愈。在某些實(shí)施方案中，對(duì)受試者給予一種或多種治療(例如，預(yù)防劑或治療劑，例如本發(fā)明的組合物)來(lái)控制感染性疾病或與其相關(guān)的病況或癥狀，以便防止疾病/障礙的進(jìn)展或惡化。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"預(yù)防"、"阻止"和"防止"是指由于給予了治療(例如，預(yù)防用組合物或治療用組合物)而預(yù)防了受試者的疾病/障礙(例如，細(xì)菌感染)的發(fā)病、復(fù)發(fā)或減少其一種或多種癥狀。如本申請(qǐng)中使用的，"預(yù)防"還包括預(yù)防被與用作疫苗的本發(fā)明的免疫用綴合物有關(guān)的一個(gè)或多個(gè)細(xì)菌類(lèi)型和/或菌株的感染。本申請(qǐng)中使用的"多糖"和"低聚糖"以其最廣泛的意義使用，是指包括多個(gè)重復(fù)單位的糖，包括但不限于具有2到2，000個(gè)以上重復(fù)單位的糖。典型地，如本領(lǐng)域中所接受的和本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"多糖"是指具有約50到約2，000或更多個(gè)重復(fù)單位的糖。如本領(lǐng)域中所接受的和本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"低聚糖"是指具有約5到約40、45或50個(gè)重復(fù)單位的糖。多糖的重復(fù)單位可以是單一的單糖分子，或者可以是二糖分子。在某些實(shí)施方案中，所述重復(fù)單位是3個(gè)或更多個(gè)單糖分子。根據(jù)本發(fā)明的方法，可以將得自不同類(lèi)型和/或菌株的細(xì)菌的多糖或低聚糖片段化學(xué)結(jié)合或合成接合，以形成單獨(dú)的多糖或低聚糖鏈，所述多糖或低聚糖鏈包括最初得到所述片段的多個(gè)類(lèi)型和/或菌株的細(xì)菌的多種抗原表位，所述片段衍生自所述細(xì)菌和/或從所述細(xì)菌中鑒定；因此，在整個(gè)糖鏈上，本發(fā)明的多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組成不必須是不變的。本發(fā)明的方法所包括的多糖或低聚糖包含一個(gè)或多個(gè)氨基糖。在某些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在其它實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖不是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"受試者"或"患者"可互換地使用。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"受試者"和"多個(gè)受試者"是指動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物)。在一些實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物，包括非靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，駱駝、驢、斑馬、牛、馬、貓、狗、大鼠和小鼠)和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，猴子、黑猩猩和人)。在一些實(shí)施方案中，受試者是非人類(lèi)的哺乳動(dòng)物。在其它實(shí)施方案中，受試者是人。在某些實(shí)施方案中，受試者是人類(lèi)的嬰兒、幼兒、青少年、女性或妊娠的女性。本申請(qǐng)中使用的術(shù)語(yǔ)"治療性免疫應(yīng)答"是指通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)量的體液免疫和/或細(xì)胞免疫的增強(qiáng)，所述免疫是以糖綴合物為目標(biāo)。優(yōu)選地，但非限制性地，誘導(dǎo)的針對(duì)糖綴合物的體液免疫水平與對(duì)受試者給予本發(fā)明的組合物之前針對(duì)糖綴合物的體液免疫水平相比至少大四倍、八倍或十倍，優(yōu)選至少大16倍。借助適當(dāng)?shù)捏w外試驗(yàn)或體內(nèi)試驗(yàn)，還可以定性地測(cè)量免疫應(yīng)答，其中受試者的感染性疾病或其癥狀的進(jìn)展受到抑制或有所緩解被認(rèn)為是誘導(dǎo)了治療性免疫應(yīng)答。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"治療"和"療法"可以是指可用于預(yù)防、治療、管理或改善疾病/障礙(例如，細(xì)菌感染或與此相關(guān)的病況或癥狀)的任何方案、方法和/或藥物。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"治療"和"療法"是指可用于治療、管理、預(yù)防或改善疾病或與之相關(guān)的病況或癥狀、感染或與之相關(guān)的病況或癥狀的生物學(xué)療法、支持療法和/或其它療法，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"治療劑"和"藥物"是指可用于預(yù)防、治療、管理或改善疾病(例如細(xì)菌感染或與此相關(guān)的病況或癥狀)的任何藥物。優(yōu)選地，治療劑是已知可用于或已經(jīng)用于或目前用于預(yù)防、治療、管理或改善疾病或與之相關(guān)的癥狀(例如，細(xì)菌感染或與之相關(guān)的病況或癥狀)的藥物。如本申請(qǐng)中使用的，在對(duì)受試者給予療法以應(yīng)對(duì)疾病的情況下，術(shù)語(yǔ)"治療"、"處理"或"處置"是指根除、減輕或改善所述疾病/障礙(例如，細(xì)菌性病癥)的癥狀。4.附圖簡(jiǎn)述圖1顯示合成N-酰化的糖綴合物的一般方法的示意流程圖，其中n=重復(fù)單位個(gè)數(shù)，所述重復(fù)單位的個(gè)數(shù)隨低聚糖/多糖的類(lèi)型變化，并且可以是i-i，000或更大。圖2顯示多糖_蛋白質(zhì)綴合的一般方法的示意流程圖，例如通過(guò)N-戊烯?；苽銩群鏈球菌多糖-蛋白質(zhì)綴合物。n=重復(fù)單位的個(gè)數(shù)，其取決于多糖或低聚糖的性質(zhì)，并且可以是l到l，OOO或更大。圖3描繪了天然的和經(jīng)過(guò)修飾的A群鏈球菌多糖的600腿？H-NMR譜。圖4顯示多糖_蛋白質(zhì)綴合的一般方法的示意流程圖，例如通過(guò)N-戊烯酰化制備腦膜炎球菌B多糖-蛋白質(zhì)，其中n=重復(fù)單位的個(gè)數(shù)。圖5描繪了經(jīng)過(guò)修飾的腦膜炎球菌B多糖的600MHz力-NMR譜。圖6顯示在BalbC小鼠中通過(guò)用A群鏈球菌多糖_破傷風(fēng)類(lèi)毒素綴合物接種所產(chǎn)生的針對(duì)多糖的免疫應(yīng)答。圖例免疫前在用綴合物免疫之前的針對(duì)A群鏈球菌多糖的血清IgG濃度。GASP-TT:在用A群鏈球菌多糖_蛋白質(zhì)綴合物免疫之后的針對(duì)A群鏈球菌多糖的血清IgG濃度，所述綴合物是通過(guò)常規(guī)方法制備的(將天然的多糖還原并且通過(guò)溫和的Na-偏高碘酸鹽氧化作用生成每個(gè)多糖分子僅一個(gè)的活性部位)。N-But-GASP-TT(l):在用A群鏈球菌多糖_蛋白質(zhì)綴合物免疫之后的針對(duì)A群鏈球菌多糖的血清IgG濃度，所述綴合物是通過(guò)新方法制備的(通過(guò)對(duì)天然的多糖進(jìn)行N-戊烯酰基化和氧化，使每個(gè)多糖分子生成多個(gè)活性部位)。GlcNAc殘基的大約5-10X被戊烯?；?。N-But-GASP-TT(2):在用A群鏈球菌多糖_蛋白質(zhì)綴合物免疫之后的針對(duì)A群鏈球菌多糖的血清IgG濃度，所述綴合物是通過(guò)新方法制備的(通過(guò)對(duì)天然的多糖進(jìn)行N-戊烯?；脱趸?，使每個(gè)多糖分子生成多個(gè)活性部位)。GlcNAc殘基的大約15_20%被戊烯?；?.發(fā)明詳述總的說(shuō)來(lái)，本發(fā)明提供以下物質(zhì)的制備方法(i)不飽和的微生物用N-?；苌锏途厶腔蚨嗵?；(ii)由與載體蛋白共價(jià)結(jié)合的所述不飽和的N-?；苌锒嗵腔虻途厶堑玫降男路f的免疫原性綴合物；以及(iii)包括本發(fā)明的分子和藥學(xué)上可接受的載體的免疫原性糖綴合物組合物。本發(fā)明另外包括將這些組合物用作疫苗的方法。如本文中公開(kāi)的，本發(fā)明提供可以促進(jìn)每個(gè)低聚糖或多糖生成多個(gè)活性部位的方法，特別是用于與一種或多種蛋白質(zhì)(例如，載體蛋白質(zhì))綴合。本發(fā)明還提供形成具有多個(gè)活化位置的低聚糖或多糖的方法，所述低聚糖或多糖在與一種或多種適當(dāng)?shù)妮d體蛋白質(zhì)綴合時(shí)產(chǎn)生與現(xiàn)有技術(shù)先前已知的制備方法相比效率得到增強(qiáng)的交聯(lián)的糖綴合物疫苗。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還產(chǎn)生表現(xiàn)出與本領(lǐng)域中已知的相似疫苗相比表現(xiàn)出免疫原性增強(qiáng)的糖綴合物疫苗。本文中提供的方法還適用于任何包含至少一個(gè)氨基糖的多糖，這是優(yōu)于現(xiàn)有的需要在糖鏈中具有兩個(gè)相鄰的游離羥基的高碘酸鹽氧化方法的顯著的優(yōu)點(diǎn)。使包含具有N-乙?；闹辽僖环N氨基糖的低聚糖或多糖(例如但不限于包括一個(gè)或多個(gè)GlcNAc、ManNAc、GalNAc和/或唾液酸的那些)經(jīng)過(guò)處理，以便將一個(gè)或多個(gè)N-乙?；撘阴；诘途厶腔蚨嗵侵挟a(chǎn)生一種，優(yōu)選多種包含伯氨基的氨基糖。然后使所述至少一個(gè)伯氨基用N-酰基部分取代，使每個(gè)多糖或低聚糖分子產(chǎn)生至少一個(gè)，優(yōu)選多個(gè)的活性部位。為了允許進(jìn)行隨后的氧化，使用至少5-碳不飽和脂肪鏈進(jìn)行所述N-酰化(例如，戊烯?；?。本發(fā)明還包括使用長(zhǎng)度大于5個(gè)碳的不飽和脂肪鏈(例如，6、7、8、9、10、11、12、13或14或更多碳數(shù)的不飽和脂肪鏈)，條件是所述不飽和位置不在所述部分的碳1和碳2之間或碳2和碳3之間(參見(jiàn)圖1或式I，在醛基碳和&的Q之間或在&的Q和C2之間)。因?yàn)檠趸梢詫⒍嗵腔虻途厶擎溋呀?，所以本發(fā)明所包括的氧化方法經(jīng)過(guò)選擇(如本文中所述的和/或本領(lǐng)域中已知的)，以便僅氧化不飽和脂肪鏈的不飽和位置。這種氧化條件在本領(lǐng)域中通常稱(chēng)為"溫和的"并且可以通過(guò)常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。因此，本發(fā)明的方法包括在溫和條件(例如，在強(qiáng)緩沖的溶液中、使用約4t:約27t:的溫度范圍和約4約9.5的pH范圍)下使用氧化不飽和基團(tuán)的氧化劑(例如，使用03(進(jìn)行臭氧分解)或H^)，以在所述烴基部分的不飽和位置產(chǎn)生活性醛(-CHO)基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，烴基部分的不飽和位置處于烴基主鏈末端的兩個(gè)碳之間。雙鍵的氧化使主鏈烷基鏈在不飽和位置裂解并且在新的烷基鏈末端產(chǎn)生活性醛基團(tuán)。例如，在其中不飽和脂肪鏈?zhǔn)窃赾;和c5之間具有單個(gè)雙鍵的C5鏈時(shí)，氧化將產(chǎn)生在C4位置具有醛的4個(gè)碳的鏈。在其中不飽和脂肪鏈具有不止一個(gè)雙鍵(即，不飽和位置)的實(shí)施方案中，氧化反應(yīng)可以影響一個(gè)不飽和位置或所有兩個(gè)不飽和位置；然而因?yàn)榉磻?yīng)使主鏈碳鏈裂解，醛基總是處于新形成的脂肪鏈的末端。因此，在包括不飽和基團(tuán)的主鏈具有不止一個(gè)不飽和位置時(shí)，氧化反應(yīng)可以產(chǎn)生不同長(zhǎng)度(分別取決于是一個(gè)不飽和位置還是所有的不飽和位置被氧化，以及取決于雙鍵的位置)的不飽和或飽和的N-?；欢?，每個(gè)部分在脂肪族主鏈的末端包括一個(gè)活性醛基團(tuán)。本發(fā)明的多糖或低聚糖通過(guò)本文中所述的和/或本領(lǐng)域中已知的任何方法(例如，還原胺化)與載體蛋白綴合，以產(chǎn)生免疫原性糖綴合物。一般方法的示意流程圖顯示在圖1中。因此，本發(fā)明涉及式I的微生物的不飽和N-?；苌锏途厶腔蚨嗵?3其中&是包括至少一個(gè)不飽和碳的不飽和C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C1Q或Cu烴基部分，fsugar子表示多糖或低聚糖的所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。在某些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在其它實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖不是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。盡管本發(fā)明包括含多個(gè)不飽和碳(即，多個(gè)雙鍵)的Rp根據(jù)本文中提供的方法，Ri只需要具有單個(gè)的不飽和碳(即，單個(gè)雙鍵，該雙鍵不處于&的Q和c2之間)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，式i的&是包括單個(gè)雙鍵的不飽和C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10或Cu烴基部分。在本發(fā)明的另外的實(shí)施方案中，式I的&是不飽和c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、C1Q或cn烴基部分，且所述雙鍵的位置處于脂肪鏈末端的兩個(gè)碳之間。在特定的實(shí)施方案中，不飽和的N-?；糠直谎趸癁槿┗?在烴基部分的主鏈的末端)，在與載體蛋白綴合時(shí)用作連接體。N-?；糠稚系娜┗缓罂梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的和/或本文中描述的任何綴合方法(例如，通過(guò)還原胺化)與載體蛋白連接。在又一個(gè)實(shí)施方案中，氨基(=NH)基團(tuán)連接于低聚糖或多糖的糖殘基的任何位置上，包括糖的1、2、3、4或5位。氨基糖的結(jié)構(gòu)為本領(lǐng)域中公知的，因此，所述連接的位置可以按照慣例確定。例如，在氨基糖是GlcNAc時(shí)，糖的N-乙?；幱谔?位，而在氨基糖是唾液酸時(shí)，糖的N-乙酰基處于碳4位?？捎糜诒景l(fā)明的經(jīng)過(guò)修飾的式I的多糖(例如，N-?；苌锒嗵?的非限制性實(shí)例是N-戊烯酰化衍生的多糖，包含至少一個(gè)N-戊烯酰基(CH2=CH-CH2-CH2-C0NH_)基團(tuán)，如以下式III中所示-sugar"、CCH:CH一其中N-戊烯?；米骶Y合蛋白質(zhì)的連接體?？梢圆捎萌魏尉Y合模式來(lái)使經(jīng)過(guò)修飾的低聚糖或多糖與載體蛋白綴合。一個(gè)示例性的方法(其依靠存在于末端鄰位的羥基來(lái)形成活性醛基)描述在美國(guó)專(zhuān)第4，356，170號(hào)('170專(zhuān)利)中，所述專(zhuān)利被全文并入本文作為參考)。'170專(zhuān)利描述了將末端醛基引14入到多糖中并通過(guò)還原胺化使醛基與蛋白質(zhì)氨基偶聯(lián)。由此通過(guò)以下式II中所示的基團(tuán)(方框中)使多糖和蛋白質(zhì)連接其中R2是飽和的C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9或C1Q烴基部分，并且其中方框內(nèi)的NH是所述蛋白質(zhì)的伯叫基團(tuán)，(例如，賴(lài)氨?；蚓滨；鶜埢牟被?。式ii的fsugar]表示多糖或低聚糖的所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。在某些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分。在其它實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖不是多糖或低聚糖的重復(fù)單位的組分?？梢栽谛∈笾畜w內(nèi)檢驗(yàn)所得到的本發(fā)明的N-?；亩嗵?蛋白質(zhì)綴合物，并且通常表現(xiàn)出具有與本領(lǐng)域中已知的N-丙?；嗵?例如，在美國(guó)專(zhuān)利第5，902，586號(hào)；被全文并入本文作為參考中描述的那些)相比得到改善的免疫原性性質(zhì)。因此，可以預(yù)期本發(fā)明的疫苗可用于對(duì)抗由B型腦膜炎奈瑟球菌或大腸桿菌K1生物體引起的腦膜炎。特別的利益在于保護(hù)大部分處于細(xì)菌感染(例如，細(xì)菌性腦膜炎)危險(xiǎn)之中的受試者，例如無(wú)免疫應(yīng)答的個(gè)體和嬰兒。在本發(fā)明的特定的非限制性實(shí)施方案中，期望包括不止一種的低聚糖或多糖和/或不止一種的載體蛋白，以便優(yōu)化免疫應(yīng)答。這種方法對(duì)于預(yù)防或治療以快速發(fā)生導(dǎo)致逃避免疫應(yīng)答的突變?yōu)樘卣鞯母腥?例如，原生動(dòng)物感染)可能是特別有利的。此外，本發(fā)明的免疫原性糖綴合物可以包括不止一種的免疫原性/抗原性結(jié)構(gòu)域和/或不止一個(gè)抗原表位。例如，本發(fā)明包括多價(jià)綴合物，其中對(duì)于不同的抗原為特異性的至少兩種不同的多糖或低聚糖與單個(gè)的載體分子綴合，和/或其中對(duì)于不同的抗原為特異性的兩種不同的多糖或低聚糖被合并為與載體蛋白綴合的單獨(dú)的多糖或低聚糖分子。本發(fā)明另外包括含多種多糖或低聚糖和/或多種載體蛋白的綴合物。因?yàn)楸景l(fā)明的方法使每個(gè)多糖或低聚糖分子產(chǎn)生至少一個(gè)并且優(yōu)選多個(gè)活性部位，所述多糖或低聚糖可以在一個(gè)或多個(gè)位置上共價(jià)結(jié)合于載體蛋白；另外，多糖或低聚糖可以結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)載體蛋白。因此，在某些實(shí)施方案中，所述綴合物是多糖分子和載體蛋白質(zhì)的點(diǎn)陣(lattice)。在本發(fā)明的糖綴合物組合物中使用的多糖或低聚糖可以具有不同的大小。如本文中定義的，在本發(fā)明中使用的低聚糖包括至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5個(gè)、至少6個(gè)、至少7個(gè)、至少8個(gè)、至少9個(gè)或至少10個(gè)重復(fù)單位(例如，糖殘基)并且優(yōu)選具有10約50個(gè)重復(fù)單位。如本文中定義的多糖大于50個(gè)重復(fù)單位，并且可以有約600約2，000個(gè)重復(fù)單位那么大或更大。在一些情況中，期望大的構(gòu)建體來(lái)增強(qiáng)免疫原性。本發(fā)明的方法提供了非常大的多糖的用途，因?yàn)榭梢詫⒃S多活性部位引入到單個(gè)多糖中。蛋白質(zhì)5.1多糖及其分離適合用于優(yōu)選實(shí)施方案的多糖包括得自被囊細(xì)菌的多糖和低聚糖。所述多糖和低聚糖可以來(lái)自于任何來(lái)源，例如，可以產(chǎn)生自天然存在的細(xì)菌、基因工程細(xì)菌，或者可以合成生產(chǎn)。多糖和低聚糖可以在活化之前經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)處理步驟，例如，純化、官能化、使用溫和的氧化條件解聚、脫乙?；?。如果需要還可以進(jìn)行后處理步驟?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知用于合成、制備和/或純化適合的多糖和低聚糖的任何適當(dāng)?shù)姆椒?。根?jù)本發(fā)明的方法使用的多糖和低聚糖包括但不限于血清型為例如1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F型的肺炎球菌多糖；血清型為A、B、C、W135和Y的腦膜炎球菌多糖；b型流感嗜血桿菌、多糖多核糖基核糖醇磷酸酯、血清型為III和V的B群鏈球菌多糖和傷寒沙門(mén)氏菌Vi多糖。肺炎球菌和B群鏈球菌血清型、以及腦膜炎球菌血清群的其它多糖也適合于本發(fā)明的用途，同樣其它典型地不依賴(lài)T的多糖和低聚糖抗原也是適合的，例如得自A群鏈球菌、葡萄球菌、腸球菌、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、大腸桿菌、綠膿假單胞菌和炭疽桿菌(Bacillusanthracis)的多糖或低聚糖。盡管特別優(yōu)選細(xì)菌的多糖和低聚糖，但是也可以使用陰性細(xì)菌的脂多糖和低聚脂多糖和它們的多糖和低聚糖衍生物、以及病毒的多糖和低聚糖。通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法從細(xì)菌莢膜分離多糖。例如，在一個(gè)這種方法中，使例如B群腦膜炎球菌(菌株981B)的細(xì)菌在發(fā)酵罐中在37t:生長(zhǎng)，每升蒸餾水使用30克的脫水的ToddHewittBroth(DifcoLaboratories，Detroit,Mich.)。在發(fā)酵罐生長(zhǎng)之前，最初使凍干的菌株在燭罐中，在37t:，在5%(v/v)的She印BloodAgar(DifcoLaboratories,Detroit，Mich.)板中生長(zhǎng)。然后將細(xì)菌轉(zhuǎn)移到在錐形瓶中的1.0升ToddHewittBroth(如上所述)上，將其以190r.p.m在37t:搖動(dòng)7小時(shí)。然后將接種物轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐中。在發(fā)酵罐生長(zhǎng)(16小時(shí))之后，通過(guò)添加最終濃度0.75%的福爾馬林殺死細(xì)菌。通過(guò)連續(xù)的離心除去細(xì)菌，并從上層清液分離多糖并基本上如Bundle等人，J.Biol.Chem.，249，4797-4801(1974)所述進(jìn)行純化，不同之處在于通過(guò)將粗制的多糖的溶液與冷(4°C)的而不是熱(50-60°C)的90%苯酚攪拌來(lái)提取蛋白質(zhì)。后一種處理確保了產(chǎn)生多糖的高分子量形式，例如B群腦膜炎球菌多糖(GBMP)的高分子量形式。在其它特定的實(shí)施方案中，可以通過(guò)在包含濃度為37g/升蒸餾水的腦心浸液(BHI)(DifcoLaboratories,Detroit,Mich.)的發(fā)酵罐中在37"C培養(yǎng)從細(xì)菌(例如，大腸桿菌(018:K1:H7)(NRCC4283))分離多糖或低聚糖。操作培養(yǎng)物可以從凍干的原料開(kāi)始，將原料重構(gòu)并在錐形瓶中在50mlBHI溶液(同上)中初始培養(yǎng)，將錐形瓶以200r.p.m在37t:搖動(dòng)7小時(shí)。然后將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到1.5升的BHI(如上)中并使其在與如上所述相同的條件下生長(zhǎng)7小時(shí)。然后將接種物轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐中。在這些條件下培養(yǎng)的細(xì)菌(例如，大腸桿菌K1)的莢膜多糖的分離和純化可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的和/或本文中所述的任何方法進(jìn)行。應(yīng)該理解，上述的分離和純化方法并不是可以采用的唯一的方法，還有其它公布的方法可用，例如由Watson等人，J.Immunol,81，331(1958)和上述美國(guó)專(zhuān)利第4，727，136號(hào)描述的那些；所述文獻(xiàn)各自被全文并入本文作為參考。5.2低聚糖或多糖的N-乙?；娜〈烊坏牡途厶腔蚨嗵堑腘-乙?；梢员蝗〈?，以在分子的唾液酸殘基部分中提供反應(yīng)性的胺基。所述取代可以通過(guò)任何已知的方法進(jìn)行，例如通過(guò)堿(例如，在堿性含水介質(zhì)中)在高溫(例如，約90°C-ll(TC)和在約13-14的pH。在某些實(shí)施方案中，取代包括將N-乙?；撘阴；孕纬刹被?。所述堿性的含水介質(zhì)可以包括堿性金屬氫氧化物水溶液，例如，約2M濃度的氫氧化鈉?；蛘?，可以使用肼的水溶液。根據(jù)本發(fā)明，可以使用的堿的非限制性實(shí)例是NaOH、K0H、LiOH、NaHC03、Na2C03、K2C03、KCN、Et3N、NH3、H2N2H2、NaH、NaOMe、NaOEt或KOtBu。諸如NaOH、KOH、LiOH、NaH、NaOMe或KOtBu的堿在0.5N-5.ON的范圍內(nèi)使用時(shí)最有效。諸如NaHC03、Na2C03、K2C03和KCN的堿可以以其溶解度允許的濃度使用。諸如朋3或112^112的堿可以以差不多任何濃度(包括100%)使用?？梢允褂弥T如水、醇(優(yōu)選c「c;)、二甲亞砜、二甲基甲酰胺的溶劑或這些和其它有機(jī)溶劑的混合物。最優(yōu)選包括水的堿溶液。在特定的實(shí)施方案中，取代多糖或低聚糖的N-乙?；膬?yōu)選pH范圍為約9約14，最佳pH為約12。其后，通過(guò)本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)方法使用膜或透析進(jìn)行超提純而從殘余的試劑純化經(jīng)過(guò)N-取代的多糖。N-乙?；〈某潭瓤蓮牡途厶腔蚨嗵堑闹辽僖粋€(gè)N-乙?；娜〈?00%的N-乙?；蝗〈兓?。在某些實(shí)施方案中，N-乙?；〈某潭葹榧s2%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%。優(yōu)選地，天然的N-乙?；?0-99%被取代。被取代的低聚糖或多糖通過(guò)例如冷卻、中和、純化和冷凍干燥來(lái)回收。關(guān)于N-乙?；〈某潭纫约氨蝗〈a(chǎn)物的純化的分析可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的和/或本文中所述的任何方法來(lái)進(jìn)行。例如，可以使用Spectra/Por⑧Membrane麗CO:3，500使低聚糖和/或多糖相對(duì)于去離子水進(jìn)行透析，以便進(jìn)行純化/回收?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中公知的方法通過(guò)500MHz的力-NMR來(lái)分析N-脫乙酰的程度。在N-乙?；〈僮髦?，天然的低聚糖或多糖具有寬范圍的平均分子量，例如，在約1，000到約1，000，000道爾頓的范圍內(nèi)，通過(guò)N-乙?；〈磻?yīng)使該平均分子量顯著減小。例如，B群腦膜炎球菌多糖(GBMP)具有約500，000約800，000道爾頓的平均分子量；在根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行N-乙?；〈螅ǔ．a(chǎn)生平均分子量為約3，000約50，000道爾頓的N-乙?；蝗〈亩嗵堑钠?。全長(zhǎng)的多糖或多糖片段都可以用于本發(fā)明的方法。例如，全長(zhǎng)的多糖或低聚糖可以經(jīng)過(guò)分段以產(chǎn)生更適合于綴合物疫苗的大小。例如，采用平均分子量為10，000-40，000道爾頓，優(yōu)選約10，000約15，000道爾頓的N-?；镔|(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法來(lái)獲得期望大小的片段，所述方法包括例如，離心或過(guò)濾的方法。在某些實(shí)施方案中，可以通過(guò)使用分餾柱，實(shí)現(xiàn)期望的分子量范圍的大小分級(jí)或分離，例如，從已經(jīng)引入原材料(例如，N-?；腉BMP物質(zhì))的篩分柱(sizingcolumn)(例如，分子篩)的洗脫物收集級(jí)分。在某些實(shí)施方案中，收集具有較高平均分子量的(例如在30，000-40，000道爾頓的范圍內(nèi))N-?；奈镔|(zhì)，將其用于本發(fā)明的方法。然后將N-乙?；〈亩嗵瞧位蛉L(zhǎng)多糖N-?；?，以產(chǎn)生相應(yīng)的N-酰化產(chǎn)物。所述N-?；梢匀缦逻M(jìn)行，在溫和的堿性條件下，將N-乙?；〈亩嗵侨芙庠诤慕?jīng)過(guò)緩沖的介質(zhì)中。優(yōu)選地，這種溫和的經(jīng)過(guò)緩沖的水溶液具有約7.5-9.0的pH。然后將?；噭┘尤氲桨堑娜芤褐胁⒗鋮s到低于l(TC，直到反應(yīng)完成。?；噭┗诰Y合17完成時(shí)所期望的烷基(例如，式II中的期望的R》來(lái)選擇。?；噭┑牟伙柡臀恢脮?huì)被氧化為活性醛并因此決定&的長(zhǎng)度。例如，?；噭┛梢允遣伙柡偷孽；狒?乙酸酐或丙酸酐)或不飽和的?；u(例如戊烯?；?。任選地將反應(yīng)與醇混合，以提高溶解度。如果需要，可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法純化反應(yīng)介質(zhì)?？梢允褂玫募兓椒ǖ姆窍拗菩詫?shí)例是透析并隨后通過(guò)冷凍干燥回收N-?；漠a(chǎn)物。反應(yīng)基本上在約10-20小時(shí)內(nèi)完成。然后通過(guò)本領(lǐng)域中已知的分析方法測(cè)定N-乙?；腘-?；潭龋绺叻直媛?例如，500MHz)的111NMR，并且優(yōu)選N-酰化程度最低為90%、更優(yōu)選約100%。所述N-?；磻?yīng)不會(huì)產(chǎn)生片段的任何顯著的分子量減小。5.3載體蛋白選擇與多糖綴合的蛋白質(zhì)，以將對(duì)疫苗的糖組分的不依賴(lài)T細(xì)胞的免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化為T(mén)細(xì)胞依賴(lài)性的免疫應(yīng)答。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，載體蛋白可以是天然的毒素或去毒的毒素(即，類(lèi)毒素)。另外，還可以使用蛋白質(zhì)毒素的無(wú)毒的突變形式。優(yōu)選地，這種突變保持天然毒素的抗原表位。這種突變的毒素已經(jīng)被稱(chēng)為"交叉反應(yīng)物質(zhì)"或CRM。CRM197與活性白喉毒素相比僅有單獨(dú)的氨基酸變化，并且與該活性毒素在免疫學(xué)上不可區(qū)分。CRM197已經(jīng)作為流感嗜血桿菌綴合物疫苗的組分廣泛用于嬰兒。將活化的多糖或低聚糖與蛋白質(zhì)偶聯(lián)，得到綴合物疫苗。適合的蛋白質(zhì)包括細(xì)菌毒素，該毒素是已經(jīng)通過(guò)化學(xué)或基因手段被賦予適合于對(duì)受試者給予的安全性的免疫有效的載體。實(shí)例包括滅活的細(xì)菌毒素，例如白喉類(lèi)毒素、CRM^、破傷風(fēng)類(lèi)毒素、百日咳類(lèi)毒素、大腸桿菌LT、大腸桿菌ST和得自綠膿假單胞菌的外毒素A。還可以使用細(xì)菌外膜蛋白質(zhì)，例如，外膜復(fù)合物c(OMPC)、膜孔蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)、肺炎球菌溶血素(pneumolysis)、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附素蛋白(PsaA)或肺炎球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11。還可以使用其它蛋白質(zhì)，例如炭疽桿菌的保護(hù)性抗原(PA)、卵清蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)和經(jīng)過(guò)純化的結(jié)核菌素蛋白衍生物(PPD)。優(yōu)選蛋白質(zhì)是無(wú)毒的和非-致反應(yīng)的并且可以以適合于優(yōu)選實(shí)施方案的綴合方法的充分的量和純度得到的蛋白質(zhì)。例如，可以從白喉棒狀桿菌(Corynebacteriadiphtheriae)的培養(yǎng)物純化得到白喉毒素并且使用甲醛化學(xué)去毒，以得到適合的蛋白質(zhì)。載體蛋白的非限制性實(shí)例包括破傷風(fēng)毒素/類(lèi)毒素、CRM197、Ca、CP蛋白質(zhì)(例如，得自B群鏈球菌，包括非IgA結(jié)合C-l3蛋白)、白喉類(lèi)毒素、a溶血素或Panton-Valentine殺白細(xì)胞毒素(PVL)、得自革蘭氏陰性菌的外膜蛋白，例如腦膜炎奈瑟球菌外膜蛋白、高分子量蛋白質(zhì)、得自未分型流感嗜血桿菌的P6和P4，得自粘膜炎莫拉氏菌的CD和USPA、白喉毒素/類(lèi)毒素、去毒的綠膿假單胞菌毒素/類(lèi)毒素A、霍亂菌毒素/類(lèi)毒素、百日咳毒素/類(lèi)毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素/類(lèi)毒素、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、輪狀病毒VP7蛋白質(zhì)、呼吸道合胞病毒F、G蛋白、霍亂菌毒素亞單位B、pneumolysoid、百日咳類(lèi)毒素、包含賴(lài)氨酸或半胱氨酸殘基的人工合成蛋白質(zhì)等等。載體蛋白可以是天然蛋白質(zhì)、經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的蛋白質(zhì)、去毒的蛋白質(zhì)或重組蛋白質(zhì)。就蛋白質(zhì)組分而言，根據(jù)本發(fā)明制備的綴合物分子可以是單體、二聚體、三聚體和更高度交聯(lián)的分子。本發(fā)明提供了產(chǎn)生綴合物分子的能力，在所述綴合物分子中載體蛋白連接于包含N-乙酰基的多糖或低聚糖。多糖或低聚糖的大小可以顯著變化。一種或多種多糖或低聚糖18可以與一種或多種蛋白質(zhì)交聯(lián)。本發(fā)明的綴合物優(yōu)選是點(diǎn)陣結(jié)構(gòu)。5.4綴合物本領(lǐng)域中已知許多將活化的多糖(即，包括至少一個(gè)必需被賦予能夠共價(jià)結(jié)合于蛋白質(zhì)的部分)綴合于蛋白質(zhì)的方法，并且它們適合于本文中的應(yīng)用。例如，授權(quán)給Je皿ings的美國(guó)專(zhuān)利第4，356，170號(hào)描述了，使用氰基硼氫化物進(jìn)行還原胺化使包含活性醛基的多糖與載體蛋白綴合。本發(fā)明的方法允許每個(gè)多糖或低聚糖分子產(chǎn)生至少一個(gè)，優(yōu)選多個(gè)活性部位(即，活性醛基)。活化的多糖分子可以與一種或多種載體蛋白反應(yīng)并與一種或多種載體蛋白形成不止一個(gè)連接。因此，在某些實(shí)施方案中，綴合物產(chǎn)物可以是各種交聯(lián)的矩陣式或點(diǎn)陣結(jié)構(gòu)的混合物。在綴合之后，可以通過(guò)任何適合的方法純化綴合物。純化用于除去未反應(yīng)的多糖、蛋白質(zhì)或小分子反應(yīng)副產(chǎn)物。如本領(lǐng)域中已知的，純化方法包括超濾、大小排阻色譜法、密度梯度離心、疏水作用層析、硫酸銨分級(jí)分離等。在某些實(shí)施方案中，不需要純化，或者可能期望僅微小程度的純化。綴合物可以根據(jù)需要經(jīng)過(guò)濃縮或稀釋或者處理為用于藥物組合物中的任何適合的形式。5.5藥物組合物優(yōu)選地，組合物(例如，藥物組合物)包括藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑與作為活性成分的本文中所述的一種或多種生物活性劑(例如，糖綴合物、低聚糖、多糖、多肽或肽)的混合物。包含生物活性劑作為活性成分的藥物組合物的制備是本領(lǐng)域中公知的。典型地，這種組合物制備為液體溶液或懸浮液，然而還可以制備適合于在給藥之前溶解于或懸浮于液體中的固體形式。制備物還可以被乳化?；钚缘闹委熡贸煞纸?jīng)常與藥學(xué)上可接受的且與活性成分相容的賦形劑(例如，滲透促進(jìn)劑)混合。適合的賦形劑是例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等，及其混合物。優(yōu)選的本發(fā)明的載體、賦形劑和稀釋劑包括生理鹽水(即，0.9XNaCl)。另外，如果需要，組合物可以包含增強(qiáng)活性成分的有效性的微量的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑。本發(fā)明的組合物包括可用于生產(chǎn)藥物組合物的散裝藥物組合物(例如，不純的或未經(jīng)滅菌的組合物)和可用于制備單位劑型的藥物組合物(即，適合于對(duì)受試者或患者給藥的組合物)。這種組合物包括預(yù)防或治療有效量的本文中公開(kāi)的預(yù)防劑和/或治療劑或那些藥物與藥學(xué)上可接受的載體的組合。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包括免疫原性量的至少一種免疫原性糖綴合物和任選的藥學(xué)上可接受的載體。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包括預(yù)防或治療有效量的至少一種免疫原性糖綴合物和任選的藥學(xué)上可接受的載體。在特定的實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的"是指生理學(xué)相容的。優(yōu)選地，藥學(xué)上可接受的是指由聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或在美國(guó)藥典或其它通常已知的藥典中列舉的用于動(dòng)物(更特別用于人)的。術(shù)語(yǔ)"載體"是指將治療劑與其一起給藥的稀釋劑、賦形劑、滲透促進(jìn)劑(在如上所述的本領(lǐng)域中)或媒介物。這種藥物載體包括但不限于滅菌的液體，例如水和油類(lèi)，包括由石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的那些，例如花生油、豆油、礦物油、芝麻油等。常見(jiàn)的適合的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如果需要，組合物還可以包含微量的潤(rùn)濕劑或乳化劑或pH緩沖劑。這些組合物可以為溶液、懸浮液、乳液、片劑、丸劑、膠囊、粉末、持續(xù)釋放的制劑等形式。包括如上所述的免疫原性糖綴合物的本發(fā)明的藥物組合物在本文中被稱(chēng)為"疫苗"。術(shù)語(yǔ)疫苗用于表明本發(fā)明的組合物可用于誘導(dǎo)預(yù)防性或治療性免疫應(yīng)答。本發(fā)明的疫苗可以包括具有單獨(dú)的抗原性結(jié)構(gòu)域或抗原表位的糖綴合物，或者具有多個(gè)抗原性結(jié)構(gòu)域或抗原表位的糖綴合物。另外，疫苗可以包括具有單個(gè)抗原性結(jié)構(gòu)域或抗原表位或具有多個(gè)抗原性結(jié)構(gòu)域或抗原表位的糖綴合物的混合物或前述物質(zhì)的任何組合。包括本發(fā)明的綴合物疫苗的藥物組合物可以提供優(yōu)于常規(guī)疫苗的多種優(yōu)點(diǎn)，包括增強(qiáng)弱免疫原性抗原(例如，細(xì)菌的多糖或低聚糖)的免疫原性、所用抗原的量的潛在減小、較低頻率的加強(qiáng)免疫、改善的效力、免疫性的優(yōu)先剌激或免疫反應(yīng)的潛在靶向。包括一種或多種本發(fā)明的免疫原性糖綴合物的疫苗組合物可以經(jīng)皮、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、非腸道、肺內(nèi)、陰道內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、經(jīng)鼻、經(jīng)口或局部給藥。疫苗組合物可以通過(guò)注射、粒子轟擊、經(jīng)口或通過(guò)氣霧劑來(lái)遞送。本發(fā)明的疫苗組合物可以另外包括各種另外的物質(zhì)，例如藥學(xué)上可接受的載體。適合的載體包括任何標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)接受的載體，例如，磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳液(例如油/水乳液或甘油三酯乳液)、各種類(lèi)型的潤(rùn)濕齊U、片齊U、包衣片劑和膠囊?？捎糜诨衔锏撵o脈內(nèi)和腹膜內(nèi)給藥的可接受的甘油三酯乳液的實(shí)例是商業(yè)上被稱(chēng)為Intralipid.RTM.的甘油三酯乳液。典型地，這種載體包含賦形劑，例如淀粉、奶、糖、某些類(lèi)型的粘土、明膠、硬脂酸、滑石、植物脂肪或油類(lèi)、樹(shù)膠、二醇或其它已知的賦形劑。這種載體還可以包括矯味劑和著色附加料或其它成分。本發(fā)明的疫苗組合物還可以包括適合的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑(例如，磷酸鋁、氫氧化物或硫酸鹽)和/或載體。這種組合物可以為液體或凍干或以其它形式干燥的制劑的形式，并且可以包括不同緩沖能力(例如，Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強(qiáng)度的稀釋劑；用于防止吸附于表面的添加劑，例如白蛋白或明膠；洗滌劑(例如，吐溫20、吐溫80、PluronicF68、膽汁酸鹽)；增溶劑(例如，甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、焦亞硫酸鈉)、防腐劑(例如，硫柳汞、芐醇、對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi))、增量劑或張力調(diào)節(jié)劑(例如，乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇)、聚合物(諸如聚乙二醇)與蛋白質(zhì)的共價(jià)連接、與金屬離子的絡(luò)合或?qū)⑽镔|(zhì)摻入到聚合化合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠等)的粒狀制備物中或結(jié)合在該聚合化合物的粒狀制備物上、或結(jié)合在脂質(zhì)體上、微乳狀液、膠束、單層或多層囊泡、紅細(xì)胞血影或原生質(zhì)球狀體上。這種組合物會(huì)影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放的速率、以及體內(nèi)清除速率。組合物的選擇取決于疫苗的物理和化學(xué)性質(zhì)。例如，由多糖和/或載體蛋白的膜結(jié)合形式所衍生的產(chǎn)物可能需要包含去污劑的制劑?？刂漆尫呕虺掷m(xù)釋放組合物包括在親脂性?xún)?chǔ)庫(kù)(例如，脂肪酸、蠟、油類(lèi))中的制劑。本發(fā)明的組合物的其它實(shí)施方案結(jié)合了用于各種給藥途徑(包括肌肉內(nèi)、非腸道、經(jīng)肺、經(jīng)鼻和經(jīng)口的途徑)的顆粒形式保護(hù)涂層、蛋白酶抑制劑或滲透促進(jìn)劑。本發(fā)明的組合物可以配制成中性形式或鹽的形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于與例如產(chǎn)生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的那些陰離子所形成的那些鹽以及與產(chǎn)生自例如鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的那些陽(yáng)離子所形成的那些鹽。本發(fā)明的組合物(例如，疫苗)可以另外包括一種或多種佐劑，以便增強(qiáng)組合物的免疫原性效力。所用的佐劑可以是本領(lǐng)域中已知適合與基于多糖的疫苗使用的任何佐劑(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利第5，773，007號(hào)，被全文并入本文作為參考)。適合的佐劑包括但不限于水包油型乳液制劑(包含或不包含其它特異性免疫剌激劑，例如胞壁?；幕蚣?xì)菌細(xì)胞壁組分)，諸如例如，(a)MF59.TM.(WO90/14837;在Vaccinedesign:thesubunitandadjuvantapproach,eds.Powell緒ewman，PlenumPress1995中，第IO章)，其包含5%的角鯊烯、0.5%吐溫80和O.5X司盤(pán)85(任選地包含MTP-PE)，使用微流化器將其配制為亞微粒子，(b)SAF，包含10%角鯊?fù)椤?.4%吐溫80、5%pluronic-嵌段共聚物L(fēng)121和thr-MDP，微流化為亞微米乳液或經(jīng)過(guò)渦旋以產(chǎn)生較大粒徑乳液，和(c)RIBI.TM.佐劑系統(tǒng)(RAS)，(RibiImmunochem，Hamilton，Mont.)，包含2%角鱉烯、0.2%吐溫80和一種或多禾中細(xì)菌細(xì)胞壁組分(例如，單磷酰脂質(zhì)A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和細(xì)胞壁骨架(CWS)，優(yōu)選MPL+CWS(Detox.TM.))。其它佐劑包括皂甙佐劑(例如QS21或Stimulon.TM.(CambridgeBioscience,Worcester,Mass.)或由其產(chǎn)生的粒子，例如ISCOM(免疫剌激性復(fù)合物)，所述ISCOM可以不含另外的去污劑，例如WO00/07621);完全弗氏佐劑(CFA)和弗氏不完全佐劑(IFA);細(xì)胞因子(例如，白細(xì)胞介素(例如IL-I，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL_7，IL-12(W099/44636)等)，干擾素(例如，Y干擾素)、巨噬細(xì)胞集落剌激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)等)；單磷酰脂質(zhì)A(MPL)或3-0-脫乙?；腗PL(3dMPL)(例如GB-2220221、EP-A-0689454，在與肺炎球菌的糖一起使用時(shí)任選地在基本上沒(méi)有明礬的存在下，例如WO00/56358);3dMPL與例如QS21和/或水包油型乳劑的組合物(例如EP-A-0835318，EP-A-0735898，EP-A-0761231);包括CpG基序的寡核苷酸(KriegVaccine2000，19，618-622;KriegCurropinMolTher20013:15-24;Roman等人，Nat.Med，1997，3，849-854;Weiner等人，PNASUSA，1997，94，10833-10837;Davis等人，J.Immunol,1998，160，810-876;Chu等人，J.Exp.Med，1997，186，1623-1631;Lipford等人，Ear.J.Immunol,1997,27,2340-2344;Moldoveami等人，Vaccine,1988，16，1216-1224，Krieg等人，Nature,1995，374，546-549;Kli麗n等人，PNASUSA，1996，93，2879-2883;Ballas等人，J.Immunol,1996，157，1840-1845;Cowdery等人，J.Immunol,1996，156，4570-4575;Halpern等人，CellImmunol,1996，167,72-78;Yamamoto等人，Jpn.J.CancerRes.，1988,79,866-873;Stacey等人，J.Immunol,1996，157,2116—2122;Messina等人，J.Immunol,1991，147，1759-1764;Yi等人，J.Immunol,1996，157，4918-4925;Yi等人，J.Immunol,1996，157,5394-5402;Yi等人，J.Immunol,1998，160，4755-4761;以及Yi等人，J.Immunol,1998，160,5898-5906;國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)W096/02555，W098/16247，W098/18810、W098/40100、W098/55495、W098/37919和W098/52581]即，包含至少一個(gè)CG二核苷酸，其中胞嘧啶是未甲基化的)；聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯(例如W099/52549);與辛苯昔醇組合的聚氧乙烯山梨糖醇酯表面活性劑(W001/21207)或與至少一種另外的非離子型表面活性劑(例如辛苯昔醇)組合的聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性劑(W001/21152);皂甙和免疫剌激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷酸)(W000/62800);免疫剌激劑和金屬鹽粒子(例如WO00/23105);皂甙和水包油型乳劑，例如W099/11241;皂甙(例如QS21)+3dMPL+IM2(任選地+甾醇))，例如，W098/57659;以及/或起到免疫剌激劑作用以增強(qiáng)組合物效力的其它物質(zhì)。21藥物組合物可以包含用于接近生理?xiàng)l件所需的藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，例如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、毒性調(diào)節(jié)劑等，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉等。這些制劑中的抗原濃度可以廣泛地不同(例如，以重量計(jì)，低于約0.1%，通常為至少約2%_多達(dá)20%_50%以上)并且根據(jù)所選的具體給藥方式和患者的需要，主要通過(guò)用液量、粘度、體重等來(lái)選擇。所得到的組合物可以是溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、粉末、凝膠、霜?jiǎng)?、洗劑、膏劑或氣霧劑的形式。根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案制備的綴合物可以以適合于治療和/或預(yù)防感染性疾病的形式并以免疫有效劑量對(duì)受試者給藥。本申請(qǐng)中使用的術(shù)語(yǔ)"受試者"是指動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物。例如，所考慮的哺乳動(dòng)物包括人、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、狗、貓、羊、牛、山羊、豬、馬、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等。術(shù)語(yǔ)"受試者"、"患者"或"宿主"可互換地使用。如本申請(qǐng)中使用的，綴合物疫苗的"免疫有效"劑量是適合于引起免疫應(yīng)答的劑量。特定的劑量取決于要治療的受試者的年齡、體重和醫(yī)學(xué)狀況，以及取決于給藥方法。適合的劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。在實(shí)施用于治療和/或預(yù)防指定疾病的免疫方案時(shí)，將治療有效量的綴合物對(duì)受試者給藥。如本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語(yǔ)"有效量"是指治療劑(例如，綴合物)或其它活性組分的總量足以表現(xiàn)出對(duì)受試者產(chǎn)生有意義的利益，例如，增強(qiáng)免疫應(yīng)答，相關(guān)醫(yī)學(xué)狀況(疾病、感染等)的治療、治愈、預(yù)防或改善，或這種狀況的治療、治愈、預(yù)防或改善的比例有所增加。在"有效量"適用于單獨(dú)給藥的單一的治療劑時(shí)，該術(shù)語(yǔ)是指單獨(dú)的該種治療劑。在適用于組合物時(shí)，無(wú)論組合給藥、順序給藥或同時(shí)給藥，該術(shù)語(yǔ)是指引起治療效果的各成分的總量。如本申請(qǐng)中使用的，短語(yǔ)"以有效量給予"治療劑是指在用所述治療劑治療受試者時(shí)，所述治療劑的量和治療的時(shí)間足以引起反映所述疾病、感染或障礙的嚴(yán)重程度的至少一種指標(biāo)得到改善、并且優(yōu)選得到持續(xù)的改善。本發(fā)明的綴合物疫苗可以作為單劑量給藥，或者作為包括一個(gè)或多個(gè)加強(qiáng)的系列給藥。例如，嬰兒或兒童可以在早年接受單劑量，然后在直到1、2、3、4、5、6、7、S、9、10年或更長(zhǎng)時(shí)間之后給予加強(qiáng)劑量。加強(qiáng)劑量從最初的B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，S卩，回憶應(yīng)答。綴合物疫苗在嬰兒或兒童中引起高的初級(jí)功能性抗體應(yīng)答，并且能夠在加強(qiáng)給藥之后引起回憶應(yīng)答，證明由該綴合物疫苗引起的保護(hù)性免疫應(yīng)答是長(zhǎng)期有效的。本發(fā)明的疫苗可以配制為液體制劑，該制劑用于例如經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)肛門(mén)、經(jīng)直腸、經(jīng)頰、經(jīng)陰道、口服、胃內(nèi)、經(jīng)粘膜、經(jīng)舌、經(jīng)肺泡、經(jīng)齒齦、經(jīng)嗅覺(jué)粘膜或呼吸道粘膜的給藥。適合于這種給藥的形式包括懸浮液、糖漿和酏劑。綴合物疫苗還可以配制為用于非腸道給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥或靜脈內(nèi)給藥、可注射給藥、從植入物持續(xù)釋放給藥或通過(guò)滴眼劑給藥。適合于這種給藥的形式包括滅菌的懸浮液和乳液。這種綴合物疫苗可以與適合的載體、稀釋劑或賦形劑混合，所述適合的載體、稀釋劑或賦形劑例如是無(wú)菌水、生理鹽水、葡萄糖等。綴合物疫苗還可以?xún)龈伞＞Y合物疫苗可以包含輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑、膠凝添加劑或粘度增強(qiáng)添加劑、防腐劑、矯味劑、著色劑等，這取決于給藥途徑和期望的制劑?？梢圆殚啒?biāo)準(zhǔn)教科書(shū)，例如"Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy",LippincottWilli咖s&Wilkins;20th片反(Jim.1，2003)和"Remington'sPharmaceuticalSciences"，MackPub.Co.;第18增補(bǔ)版和第19增補(bǔ)版(分別在1985年12月和1990年6月)，來(lái)制備適合的制劑，無(wú)需過(guò)度的實(shí)驗(yàn)，所述文獻(xiàn)都被全文并入本文作為參考。這種制劑可以包括絡(luò)合劑、金屬離子、聚合物(例如，聚乳酸、聚乙醇酸)、水凝膠、右旋糖酐等、脂質(zhì)體、微乳狀液、膠束、單層或多層囊泡、紅細(xì)胞血影或原生質(zhì)球狀體。用于脂質(zhì)體制劑的適合的脂質(zhì)包括但不限于單酸甘油酯、甘油二酯、腦苷脂、溶血卵磷脂、磷脂、皂甙、膽汁酸等。這種另外的組分的存在可以影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)適當(dāng)?shù)乃俾屎腕w內(nèi)清除速率，因此根據(jù)預(yù)定的應(yīng)用進(jìn)行選擇，使得載體的特征適合于所選的給藥途徑。本發(fā)明藥物組合物與接受者的血液或其它體液優(yōu)選是等滲的。組合物的等滲性可以使用酒石酸鈉、丙二醇或其它無(wú)機(jī)或有機(jī)的溶質(zhì)來(lái)獲得。特別優(yōu)選氯化鈉。可以使用緩沖劑，例如乙酸及其鹽、檸檬酸及其鹽、硼酸及其鹽和磷酸及其鹽。非腸道媒介物包括氯化鈉溶液、林格右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸化的林格溶液或固定油類(lèi)。靜脈內(nèi)媒介物包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(例如，基于林格右旋糖的那些)等。本發(fā)明的藥物組合物和/或疫苗可以對(duì)處于獲得疾病或障礙(例如，細(xì)菌感染)的危險(xiǎn)之中的受試者給藥，以用于預(yù)防或至少部分抑制疾病和/或與之相關(guān)的癥狀或并發(fā)癥的進(jìn)展。用于治療用途的有效量取決于例如，抗原組成、給藥方式、患者的體重和一般健康狀態(tài)和處方醫(yī)生的判斷?？梢越o予抗原組合物的單劑量或多劑量，這取決于患者所需要和耐受的劑量和頻率、以及給藥途徑。5.5.l免疫方案本發(fā)明的藥物組合物和/或疫苗以產(chǎn)生選擇性抗多糖或抗低聚糖抗體的方式對(duì)宿主給藥，優(yōu)選沒(méi)有或只有很少的可檢測(cè)的宿主自身抗體產(chǎn)生。在特定的實(shí)施方案中，將本文中所述的疫苗組合物順序給藥。首先，將致免疫有效劑量的本發(fā)明的疫苗給予受試者。第一個(gè)劑量通常以有效引起免疫應(yīng)答(例如，活化T細(xì)胞)的量給予。首次免疫的量通常為約0.001mg約1.0mg/70千克患者，更通常為約0.OOlmg約0.2mg/70千克患者，通常為約0.005mg約0.015mg/70千克患者。可以使用每名患者每天0.001直到約10mg的劑量，特別是在抗原不是給予到血流中的情況中，例如給予到體腔中或器官的內(nèi)腔中。在經(jīng)口、經(jīng)鼻或局部給予時(shí)可能使用顯著更高的劑量(例如，10-100mg或更高)。在給予第一個(gè)疫苗劑量之后，在受試者通過(guò)暴露于第一個(gè)劑量而已經(jīng)免疫接觸過(guò)抗原之后，對(duì)受試者給予治療有效的本發(fā)明疫苗的第二劑量。加強(qiáng)可以在首次免疫之后的數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月給予，這取決于患者的應(yīng)答和狀況。第一次疫苗給藥的免疫應(yīng)答的存在可以通過(guò)已知的方法來(lái)確定(例如，在首次免疫之前和之后從個(gè)體取得血清，并且證明個(gè)體免疫狀態(tài)的變化，例如，免疫沉淀試驗(yàn)或ELISA或殺菌試驗(yàn)或蛋白質(zhì)印跡或流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析等)和/或證明對(duì)第二次注射的免疫應(yīng)答的程度比使用用于第二次注射劑的物質(zhì)的組合物進(jìn)行第一次免疫(例如，初次免疫)的對(duì)照動(dòng)物的免疫應(yīng)答更高。初次免疫和/或?qū)Φ谝淮我呙缃o藥的免疫應(yīng)答的存在還可以通過(guò)在第一次免疫之后等一段時(shí)間來(lái)假定，基于先前的經(jīng)驗(yàn)，所述時(shí)間是足以發(fā)生免疫應(yīng)答和/或初次免疫的時(shí)間_例如2、4、6、10或14周。第二次免疫的加強(qiáng)劑量典型地為約0.OOlmg約1.Omg抗原，這取決于免疫原的性質(zhì)和免疫途徑。在某些實(shí)施方案中，在個(gè)體已經(jīng)初次免疫和/或?qū)Φ诙€(gè)疫苗組合物的免疫應(yīng)答之后對(duì)受試者給予治療有效劑量的第三個(gè)疫苗組合物。所述第三加強(qiáng)免疫可以在第二次免23疫之后的數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月給予，這取決于受試者的應(yīng)答和狀況。本發(fā)明另外考慮了使用相同或不同的疫苗制劑進(jìn)行第四、第五、第六或更多次的加強(qiáng)免疫。在某些實(shí)施方案中，將抗原組合物給予對(duì)于免疫綴合物的多糖或低聚糖的細(xì)菌來(lái)源為首次進(jìn)行免疫的哺乳動(dòng)物受試者(例如，人)。在特定的實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是約5歲或年齡更小的兒童，優(yōu)選約兩歲大或更小，并且在以下時(shí)間中的任何一個(gè)或多個(gè)時(shí)間給予所述抗原組合物出生后的二周、一個(gè)月、2、3、4、5、6、7、8、9、10或ll個(gè)月或一年或15、18或21個(gè)月或2、3、4或5歲。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在疾病癥狀的第一個(gè)征兆之前開(kāi)始對(duì)任何哺乳動(dòng)物給藥，或者在可能暴露于或?qū)嶋H暴露于感染或疾病(例如，暴露于奈瑟氏球菌或大腸桿菌K1或被奈瑟氏球菌或大腸桿菌K1感染)的第一個(gè)征兆時(shí)給予。藥物或疫苗組合物可以以與劑型相容的方式以治療有效量給予。給藥的量取決于要治療的受試者、受試者免疫系統(tǒng)利用活性成分的能力和所需的調(diào)節(jié)程度。要給予的活性成分的確切量取決于醫(yī)師的判斷并且對(duì)于每名個(gè)體都是特定的。然而，對(duì)于人類(lèi)的嬰兒，在本發(fā)明的藥物組合物內(nèi)的免疫原性糖綴合物的治療有效劑量包括每千克體重為約5約7.g、約5約10ug、約5約12.g、約5約15ug、約5約17.g、約5約20iig、約5約25iig、約5約30iig、約5約35iig、約5約40iig、約5約45iig或約5約50iig;以及/或在約1約1.5iig、約1約2iig、約1約2.5iig、約1約3iig、約1約3.5iig、約1約4iig、約1約5iig、約1約6iig、約1約7iig、約1約8iig、約1約9yg或約1約10iig范圍內(nèi)。本發(fā)明的藥物或疫苗組合物可以與涉及用于人或非人類(lèi)受試者的目前在使用的或在開(kāi)發(fā)的各種疫苗聯(lián)合給藥。用于人類(lèi)受試者并且針對(duì)感染性疾病的疫苗的實(shí)例包括聯(lián)合的白喉和破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗；百日咳全細(xì)胞疫苗；滅活流感疫苗；23-價(jià)的肺炎球菌疫苗；麻疹活疫苗；流行性腮腺炎活疫苗；風(fēng)疹活疫苗；卡介菌(BCG)結(jié)核肝菌疫苗；甲型肝炎疫苗；乙型肝炎疫苗；丙型肝炎疫苗；狂犬病疫苗(例如，人二倍體細(xì)胞疫苗)；滅活的脊髓灰質(zhì)炎疫苗；腦膜炎球菌多糖疫苗；四價(jià)的腦膜炎球菌菌苗；黃熱病活病毒疫苗；殺死的傷寒全細(xì)胞疫苗；霍亂菌苗；殺死的日本乙型腦炎病毒疫苗；腺病毒疫苗；巨細(xì)胞病毒疫苗；輪狀病毒疫苗；水痘疫苗；炭疽菌苗；牛痘疫苗；以及其它市售的和實(shí)驗(yàn)的疫苗。5.6治療應(yīng)用的表征和證明在人類(lèi)中使用之前，優(yōu)選在體外(例如，在細(xì)胞培養(yǎng)物系統(tǒng)中)測(cè)試，然后在體內(nèi)(例如，在動(dòng)物模型生物體中，例如嚙齒動(dòng)物模型系統(tǒng))測(cè)試本發(fā)明的藥物組合物的若干方面的期望治療活性?？捎糜谠u(píng)價(jià)對(duì)特定的疫苗組合物產(chǎn)生治療型免疫應(yīng)答的可能性的分析方法為本領(lǐng)域中公知的。在人用之前，可以在適合的動(dòng)物模型系統(tǒng)中測(cè)試預(yù)防劑和/或治療劑的聯(lián)合。這種動(dòng)物模型系統(tǒng)包括但不限于大鼠、小鼠、雞、牛、猴、豬、狗、兔等?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中公知的任何動(dòng)物系統(tǒng)。在本發(fā)明的特定的實(shí)施方案中，在小鼠模型系統(tǒng)中測(cè)試預(yù)防劑和/或治療劑的組合。預(yù)防劑和/或治療劑可以重復(fù)給藥。操作的幾個(gè)方面可以變化，例如給予預(yù)防劑和/或治療劑的時(shí)間方案、以及這些藥物是分別給藥還是作為混合物給藥。5.7毒性研究可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)操作在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中測(cè)定本發(fā)明組合物的毒性和/或效力，例如，確定LD5。(導(dǎo)致群體的50%致死的劑量)和ED5。(在群體的50%中治療有效的劑量)。毒性效能和治療效能之間的劑量比值是治療指數(shù)，其可以表示為比值LD5。/ED5。。優(yōu)選表現(xiàn)出大治療指數(shù)的療法。盡管可以使用表現(xiàn)出毒性副作用的療法，但是應(yīng)該注意，要設(shè)計(jì)用于將這種藥物靶向到患病組織的位置的遞送系統(tǒng)，以便使對(duì)于未患病細(xì)胞的潛在損害最小化，并且從而減少副作用。得自動(dòng)物研究的數(shù)據(jù)可用于制定用于受試者的治療劑量范圍。這種藥物的劑量?jī)?yōu)選落入包括ED5。在內(nèi)的濃度范圍內(nèi)，而只有很少的毒性或沒(méi)有毒性。所述劑量可以在這個(gè)范圍內(nèi)有所變化，這取決于使用的劑型和利用的給藥途徑。對(duì)于在本發(fā)明的方法中使用的任何療法，最初可以從動(dòng)物分析估算治療有效劑量?？梢栽趧?dòng)物模型中制定劑量，以便獲得包括在動(dòng)物模型中確定的IC5。(S卩，實(shí)現(xiàn)癥狀的半數(shù)最大抑制作用的試驗(yàn)化合物的濃度)在內(nèi)的給藥的濃度范圍。這種信息可用于在受試者(例如，人)中更精確地確定有用的劑量。5.8試劑盒本發(fā)明還包括試劑盒，其具有以?xún)?chǔ)存穩(wěn)定形式存在的、可溶解或可稀釋為期望劑量的組合物的單位劑量，以及適當(dāng)?shù)陌b和操縱設(shè)備，以便于在滴注之前進(jìn)行混合和保持無(wú)菌。這種試劑盒可以包括，例如，第一容器，其包含儲(chǔ)存穩(wěn)定形式的活性成分，為儲(chǔ)備溶液形式的單位劑量或作為凍干的粉末的單位劑量；以及第二容器，其包含分開(kāi)的或合并的稀釋劑或溶劑和稀釋劑，該稀釋劑或溶劑和稀釋劑的體積將提供在適合于給藥的體積中的治療用化合物的單位劑量；源于將稀釋劑與儲(chǔ)備溶液或凍干的粉末合并在一起的設(shè)備；以及任選地的用于對(duì)患者給予劑量的設(shè)備。用于將稀釋劑轉(zhuǎn)移到儲(chǔ)備溶液或凍干的粉末中的設(shè)備可以包括但不限于注射器或多室容器(其具有使活性成分與稀釋劑分開(kāi)的可裂開(kāi)的內(nèi)部密封)。本發(fā)明提供包括一個(gè)或多個(gè)容器的藥物包裝或試劑盒，所述一個(gè)或多個(gè)容器填充有本發(fā)明的藥物組合物或其一部分。另外，還可以在藥物包裝或試劑盒中包括可用于治療疾病或障礙的一種或多種其它預(yù)防劑或治療劑。本發(fā)明還提供包括一個(gè)或多個(gè)容器的藥物包裝或試劑盒，其中所述一個(gè)或多個(gè)容器填充有本發(fā)明的藥物組合物的一種或多種成分。任選地，與這種容器結(jié)合的可以是由管理藥物或生物制品的生產(chǎn)、使用或銷(xiāo)售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式的通知，所述通知表明得到關(guān)于人類(lèi)給藥的生產(chǎn)、使用或銷(xiāo)售的機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。通常，本發(fā)明的組合物的成分被單獨(dú)提供，或共同混合成單位劑型，例如，作為在指示活性劑量的氣密容器(例如，安瓿或小藥袋)中的干燥的凍干粉末或無(wú)水濃縮物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物另外包括增量劑，例如氯化鈉、甘露糖醇、聚乙烯吡咯烷酮等，以便提供在冷凍干燥之后容易操縱的足夠的物質(zhì)。本發(fā)明提供可用于上述方法的試劑盒。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒包括一種或多種本發(fā)明的藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒例外在一個(gè)或多個(gè)容器中包括可用于治療感染性疾病或與之相關(guān)的癥狀的一種或多種其它預(yù)防劑或治療劑。盡管已經(jīng)通過(guò)例如特定的實(shí)施方案公開(kāi)了本發(fā)明，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其它的實(shí)施方案、方法、組合物、活性成分、適應(yīng)癥、組合物和試劑盒是顯而易見(jiàn)的。所有這種變化和擴(kuò)展都被包括在本文中公開(kāi)和要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。6.實(shí)施例6.1實(shí)施例I:綴合圖l提供了本發(fā)明的一般方法的示意性流程圖。使用堿，使多糖中的至少一個(gè)N-乙?；?例如，來(lái)自GlcNAc、ManNAc、GalNAc和唾液酸)被N_?；糠秩〈孕纬墒絀的化合物，隨后進(jìn)行N-戊烯?；?使用5-碳不飽和的脂肪鏈)。然后將得到的經(jīng)過(guò)?；幕衔镅趸?，在戊烯酰基的不飽和位置產(chǎn)生活性醛基。然后通過(guò)被活化的多糖的還原胺化而使經(jīng)過(guò)氧化的化合物與載體蛋白綴合，產(chǎn)生免疫原性糖綴合物?？梢允褂脛?dòng)物模型證明產(chǎn)物的免疫原性(如前所述)。對(duì)于所有的實(shí)驗(yàn)，通過(guò)裝備有Superose12柱的BiologicSystem(Bio-Rad)分析綴合的進(jìn)展。通過(guò)在所述柱的空隙體積中洗脫的通過(guò)測(cè)量在280nm的UV吸光度監(jiān)測(cè)的峰的遞增表明多糖對(duì)抗原性蛋白質(zhì)的綴合。在綴合完成之后，用0.INHC1將溶液中和到pH7，然后相對(duì)于PBS進(jìn)行透析。如下純化綴合物使綴合物通過(guò)Superdex200PG(Pharmacia)的1.6x60cm柱并用包含0.01%硫柳汞的PBS洗脫。將對(duì)應(yīng)于空隙體積峰值的級(jí)分合并。通過(guò)Dubois等人(51)的苯酚-硫酸分析法和Bradford(9)的Coomassie分析法估算綴合物中的碳水化合物和蛋白質(zhì)含量。6.2實(shí)施例II:A群鏈球菌(GAS)多糖-蛋白質(zhì)綴合物GAS多糖的部分(35-40%)N_乙酰某的取代:在室溫((RT)，約20-25°C)下，在攪拌下用NaBH4(8mg/ml)處理含GAS多糖(30mg/ml)的O.012NNaOH75分鐘。在攪拌下將3NNa0H(0.012NNaOH體積的1/2)加入到反應(yīng)混合物中，以實(shí)現(xiàn)20mg/ml的GAS多糖最終濃度。然后將反應(yīng)混合物在8(TC保持1小時(shí)。然后將其冷卻到室溫并用水稀釋到4mg/ml的最終的GAS多糖濃度。使用3K再生纖維素膜使其在Stir-cell中相對(duì)于水進(jìn)行滲濾。使用15x體積的水進(jìn)行滲濾，以實(shí)現(xiàn)24mg/ml的GAS濃度。通過(guò)^-NMR光譜法監(jiān)測(cè)具有伯氨基的N-乙?；娜〈潭?。N-乙?；蝗〈腉AS多糖的N-?；?例如，N_戊烯?；?(15-25%):在室溫?cái)嚢璧那闆r下，在75分鐘內(nèi)將含4-戊烯酰氯(lml/100mg多糖)的l，4-二噁烷(lml/ml4-戊烯酰氯)滴加到N-乙?；蝗〈腉AS多糖(24mg/ml)的溶液中。通過(guò)滴加3NNaOH保持溶液的pH為6.8_9.5。通過(guò)滴加3NNaOH將反應(yīng)混合物的pH提高到12.7，并在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后通過(guò)在室溫滴加INHC1將反應(yīng)混合物的pH降低到7.7。將反應(yīng)混合物用水稀釋到4mg/mlGAS多糖的最終濃度，并使用3K膜，在stircell中，用水進(jìn)行滲濾。收集10x體積的水作為滲透物。最后，將滲余物濃縮到24mg/ml的多糖濃度并儲(chǔ)存在_20°C。N-乙?；蝗〈?例如，N-戊烯?；?的GAS多糖的任選封端(例如N_乙?；?(參見(jiàn)圖2):在室溫下，在75分鐘時(shí)間內(nèi)將乙酸酐(0.6ml/100mg多糖)滴加到攪拌的N-戊烯酰基化的GAS多糖(24mg/ml)的溶液中。通過(guò)滴加3NNaOH保持溶液的pH為6.8_9.5。然后通過(guò)滴加3NNaOH將反應(yīng)混合物的pH提高到12.7，并在室溫?cái)嚢?0分鐘。然后通過(guò)在室溫滴加1NHCl，將反應(yīng)混合物的pH降低到7.7。將反應(yīng)混合物用水稀釋到4mg/mlGAS多糖的最終濃度，并使用3K膜，在stircell中，用水進(jìn)行滲濾。收集15x體積的水作為滲透物。最后，將滲余物濃縮到24mg/ml的多糖濃度并儲(chǔ)存在-2(TC。通過(guò)600MHz力-NMR分析估算多糖中結(jié)合的戊烯?；?參見(jiàn)圖3)。26N-酰某被取代(例如，N-戊'琉酰某化)的GAS多糖的氧,化(參見(jiàn)圖2):在室溫下，將甲醇(多糖溶液體積的1/2)緩慢加入到攪拌的N-戊烯酰基GAS多糖的水溶液(24mg/ml)中。使用干冰_乙醇浴將混合物冷卻到約_15到_20°C。將臭氧(使用臭氧發(fā)生器Ozomax1從空氣產(chǎn)生)鼓泡通過(guò)緩慢攪拌的反應(yīng)混合物40分鐘，同時(shí)保持溫度為-15到-2(TC。然后使氮?dú)夤呐萃ㄟ^(guò)混合物IO分鐘，以便逐出過(guò)量的臭氧。然后將反應(yīng)混合物用水稀釋到5mg/ml多糖的最終濃度，并使用3K膜，在stircell中，用水進(jìn)行滲濾。收集25x體積的水作為滲透物并將滲余物濃縮到20mg/ml的多糖濃度。然后將其凍干，用于下一步。輛Mf,歸/翻論,歸服C白鄉(xiāng)A:將含N-丁氧基(N-BuO)GAS多糖(96mg/ml，1ml)(得自N_戊烯?；鵊AS多糖的氧化)的O.2mM磷酸鹽緩沖液(pH7.7)加入到破傷風(fēng)類(lèi)毒素的磷酸鹽緩沖液(pH7.7)溶液(濃度120mg/ml，0.25ml)中。向所述溶液添加氰基硼氫化鈉(40mg)，并攪拌反應(yīng)混合物，以實(shí)現(xiàn)均勻的混合物。在溫和的搖動(dòng)下，將反應(yīng)混合物在37°C保溫24小時(shí)。在24小時(shí)之后，加入另外的16mg的氰基硼氫化鈉，并使反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行另外的48小時(shí)。在48小時(shí)之后，加入另外的4mg氰基硼氫化鈉，并將反應(yīng)在37t:搖動(dòng)另外的24小時(shí)。然后加入含5%硼氫化鈉的0.05NNaOH溶液(0.5ml)，并在室溫溫和地?cái)嚢?小時(shí)。然后，在室溫下，在攪拌下加入1N的乙酸溶液(0.72ml，分三部分加入)。將反應(yīng)用PBS(pH7.4)稀釋到32ml，并在LabscaleTFF系統(tǒng)中，使用30K膜進(jìn)行純化。收集30x體積的滲透物。使?jié)B余物(30ml)過(guò)濾通過(guò)O.2微米過(guò)濾器，并向綴合物溶液中加入含10%硫柳汞的PBS溶液(0.3ml)。將綴合物溶液儲(chǔ)存在2-8°C。GAS多糖_蛋白質(zhì)綴合物的組成表示在表1中。6.3實(shí)施例III.腦膜炎球菌B多糖-蛋白質(zhì)綴合物N-乙酰某被取代的腦膜炎球菌B多糖的N-?；?例如，N-戊烯酰某化)(15-25%):在室溫?cái)嚢璧那闆r下，在75分鐘內(nèi)，將含4-戊烯酰氯(lml/100mg多糖)的1，4-二噁烷(lml/ml4-戊烯酰氯)滴加到N-乙酰基被取代的多糖(24mg/ml)的溶液中。通過(guò)滴加3NNaOH，保持溶液的pH為6.8_9.5。然后通過(guò)滴加3NNaOH，將反應(yīng)混合物的pH提高到12.7，并在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后通過(guò)在室溫滴加1NHC1，將反應(yīng)混合物的pH降低到7.7。然后將反應(yīng)混合物用水稀釋到4mg/ml多糖的最終濃度，并在stircell中，使用3K膜，用水進(jìn)行滲濾。收集10x體積的水作為滲透物。最后，將滲余物濃縮到24mg/ml的多糖濃度，并儲(chǔ)存在_20°C。N-乙?；蝗〈?例如，N-戊烯?；?的腦膜炎球菌B多糖的任選封端(例如，N-丙烯?；?(參見(jiàn)圖4):在室溫?cái)嚢柘?，?5分鐘時(shí)間內(nèi)，將丙酸酐_乙醇混合物(2.5:1，0.84ml/100mg多糖)滴加到N-戊烯酰基化的多糖(24mg/ml)的溶液中。通過(guò)滴加3NNaOH，保持溶液的pH為6.8-9.5。然后通過(guò)滴加3NNaOH，將反應(yīng)混合物的pH提高到12.7，并在室溫?cái)嚢?0分鐘。然后通過(guò)在室溫滴加1NHCl，將反應(yīng)混合物的pH降低到7.7。將反應(yīng)混合物用水稀釋到4mg/ml多糖的最終濃度，并在stircell中，使用3K膜，用水進(jìn)行滲濾。收集15x體積的水作為滲透物。最后，將滲余物濃縮到24mg/ml的多糖濃度，并儲(chǔ)存在-2(TC。通過(guò)600MH^H-NMR分析估算多糖中結(jié)合的戊烯?；?參見(jiàn)圖5)。N-酰某取代(例如，N-戊'琉酰某化)的和仵詵封端(例如，N-丙酰某化)的B群腦臘炎球菌B多糖(GBMP)的氧化(參見(jiàn)圖4):在室溫?cái)嚢柘?，將甲?多糖溶液體積的1/2)緩慢加入到N-戊烯酰基-N-丙?；鵊BMP的水溶液(24mg/ml)中。然后使用干冰_乙醇浴，將混合物冷卻到約_15到_20°C。將臭氧(使用臭氧發(fā)生器Ozomax1從空氣產(chǎn)生)鼓泡通過(guò)溫和地?cái)嚢璧姆磻?yīng)混合物40分鐘，同時(shí)保持溫度在大約-15到_20°C。然后使氮?dú)夤呐萃ㄟ^(guò)混合物10分鐘，以便逐出過(guò)量的臭氧。然后將反應(yīng)混合物用水稀釋到5mg/ml多糖的最終濃度，并在stircell中，使用3K膜，用水進(jìn)行滲濾。收集25x體積的水作為滲透物，并將滲余物濃縮到20mg/ml的多糖濃度。然后將其凍干，用于下一步。與重會(huì)目腦臘炎球菌蛋白(rPorB)/得自腦臘炎球菌的外臘蛋白(OMPC)的綴合:將含活化的N-叔丁酰氧基_(NbuO)N-PrGBMP(N-But-[-CH=0]-N-Pr-GBMP，17mg/ml，lml)的HEPES緩沖液(pH8.5)加入到含rPorB/0MPC(濃度為15mg/ml)的HEPES緩沖液(pH8.5)溶液中。反應(yīng)混合物中的蛋白質(zhì)和多糖的最終濃度是l:3。加入氰基硼氫化鈉(多糖質(zhì)量的0.5倍)，并攪拌反應(yīng)混合物，以確?；旌衔锞鶆颉Ｔ跍睾偷膿u動(dòng)下，將反應(yīng)混合物在37t:保溫24小時(shí)。在24小時(shí)之后，再加入氰基硼氫化鈉(多糖質(zhì)量的0.125倍)，并使反應(yīng)繼續(xù)另外的48小時(shí)。在48小時(shí)之后，向混合物加入另外量的氰基硼氫化鈉(多糖質(zhì)量的0.032倍)，并在搖動(dòng)下將反應(yīng)在37t:保持24小時(shí)。然后加入含5%硼氫化鈉的0.05NNa0H溶液(原始反應(yīng)體積的O.2x)，并在室溫溫和地?cái)嚢?小時(shí)。在室溫?cái)嚢柘?，加?N的乙酸溶液(0.3x的原始反應(yīng)體積，分三部分加入)。將反應(yīng)用PBS(pH7.4)稀釋?zhuān)缓笤贚abscaleTFF系統(tǒng)中，使用30K膜進(jìn)行純化。收集30x體積的滲透物。使?jié)B余物過(guò)濾通過(guò)0.2微米過(guò)濾器，并向綴合物溶液中加入含10%硫柳汞的PBS溶液(硫柳汞的最終濃度為0.01%)。將綴合物溶液儲(chǔ)存在2-8°C。腦膜炎球菌B多糖-蛋白質(zhì)綴合物的組成表示在表1中。6.4實(shí)施例IV.腦膜炎球菌C多糖-蛋白質(zhì)綴合物根據(jù)如上所述的方法進(jìn)行N-乙酰基部分的取代、?；?、氧化和與蛋白質(zhì)的綴合。腦膜炎球菌C多糖-蛋白質(zhì)綴合物的組成表示在表1中。6.5實(shí)施例V.III型B群鏈球菌多糖_蛋白質(zhì)綴合物根據(jù)與如上所述相似的實(shí)驗(yàn)步驟，進(jìn)行B群鏈球菌III型多糖-蛋白質(zhì)的活化和綴合。B群鏈球菌III型多糖-蛋白質(zhì)綴合物的組成表示在表1中。表1.多糖-蛋白質(zhì)綴合物的組成28<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>6.6實(shí)施例VI.用GASP-TT綴合物使BALBC小鼠免疫用無(wú)水凝膠(anhydrogel)(lmg/ml)配制綴合物(10yg/ml，在PBS緩沖液中)。將綴合物溶液(200ml，2iig當(dāng)量的綴合多糖)在無(wú)水凝膠中的懸浮液以2周的間隔注射到BalbC小鼠中。在3次連續(xù)注射之后，在最后一次注射之后的1周收集血樣。從樣品分離血清，并通過(guò)ELISA量化血清中的抗_多糖抗體。在BalbC小鼠中由A群鏈球菌多糖_破傷風(fēng)類(lèi)毒素綴合物誘導(dǎo)的針對(duì)多糖的免疫應(yīng)答的結(jié)果表示在圖6中。6.7實(shí)施例VII.用MENGB-RPORB綴合物使CDl小鼠免疫用無(wú)水凝膠(lmg/ml)配制綴合物(10g/ml，在PBS緩沖液中)。將綴合物溶液(200ml，2iig當(dāng)量的綴合多糖)在無(wú)水凝膠中的懸浮液以2周的間隔注射到CDl小鼠中。在3次連續(xù)注射之后，在最后一次注射之后的1周收集血樣，并分離血清。通過(guò)ELISA測(cè)定血清中的多糖特異性抗體。通過(guò)測(cè)量在血清的存在下對(duì)巧克力瓊脂涂層板中的細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用來(lái)測(cè)定血清的殺菌活性。CDl小鼠中的血清產(chǎn)生的腦膜炎球菌B多糖-rPorB綴合物的殺菌活性表示在表2中。在第42和52天放血后的由3個(gè)單獨(dú)批次(根據(jù)本發(fā)明制備的，分別為批次1到批次3)的NPr-(NbuO)-GBMP-rPorB綴合物所產(chǎn)生的血清的血清殺菌活性(SBA)顯著高于從NPr-GBMP-rPorB綴合物(通過(guò)唾液酸鏈末端的常規(guī)還原胺化制備的)產(chǎn)生的血清的SBA(參見(jiàn)表2)。認(rèn)為根據(jù)本發(fā)明制備的綴合物由于使用了相對(duì)較大的多糖部分，實(shí)現(xiàn)了改善的免疫應(yīng)答，所述相對(duì)較大的多糖部分在沿著多糖鏈的多個(gè)位置被活化并改善綴合物的交聯(lián)。表2.CD1小鼠中的血清產(chǎn)生的腦膜炎球菌B多糖-rPorB綴合物的殺菌活性<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*血清殺菌活性。應(yīng)該理解，盡管顯示了示例性的實(shí)施方案，但是本說(shuō)明書(shū)、特定的實(shí)施例和數(shù)據(jù)只是作為示例給出，而非意在限制本發(fā)明。通過(guò)本文中所包含的討論、公開(kāi)和數(shù)據(jù)，在本發(fā)明內(nèi)的各種變化和變體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，因此被考慮為本發(fā)明的一部分。權(quán)利要求制備免疫原性糖綴合物的方法，其包括a)將包含一個(gè)或多個(gè)氨基糖的抗原性低聚糖或多糖上的至少一個(gè)N-乙?；撘阴；?，以形成具有至少一個(gè)包含伯氨基的氨基糖的低聚糖或多糖；b)用包含至少4個(gè)碳的不飽和烴基部分的N-?；糠秩〈鲋辽僖粋€(gè)伯氨基，其中雙鍵位于所述不飽和烴基部分的除碳1和碳2之間或碳2和碳3之間以外的兩個(gè)碳之間；c)使所述低聚糖或多糖與氧化劑接觸，以在所述烴基部分的不飽和位置產(chǎn)生至少一個(gè)活性醛基；以及d)使所述低聚糖或多糖通過(guò)所述至少一個(gè)活性醛基與載體蛋白綴合，從而產(chǎn)生免疫原性糖綴合物。2.制備免疫原性糖綴合物的方法，其包括a)用包含至少4個(gè)碳的不飽和烴基部分的N-?；糠秩〈粋€(gè)或多個(gè)氨基糖的抗原性低聚糖或多糖上的至少一個(gè)N-乙?；?，其中雙鍵位于所述不飽和烴基部分的除碳1和碳2之間或碳2和碳3之間以外的兩個(gè)碳之間；b)使所述低聚糖或多糖與氧化劑接觸，以在所述烴基部分的不飽和位置產(chǎn)生至少一個(gè)活性醛基；以及c)使所述低聚糖或多糖通過(guò)所述至少一個(gè)活性醛基與載體蛋白綴合，從而產(chǎn)生免疫原性糖綴合物。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述伯氨基被不飽和的N-酰基取代以形成式I:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中&是不飽和的c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c1Q或cn烴基部分，并且fsugari表示所述-個(gè)或多個(gè)氨基糖。4.權(quán)利要求2的方法，其中所述N-乙?；徊伙柡偷腘-酰基取代以形成式I:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中&是不飽和的c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c1Q或cn烴基部分，并且fsugar子表示所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述不飽和的烴基的長(zhǎng)度是5個(gè)碳。6.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中雙鍵位于所述不飽和烴基部分的末端兩個(gè)碳之間。7.權(quán)利要求5的方法，其中雙鍵位于所述不飽和烴基部分的末端兩個(gè)碳之間。8.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述不飽和烴基部分具有一個(gè)雙鍵，該雙鍵位于所述烴基部分的末端兩個(gè)碳之間。9.權(quán)利要求5的方法，其中所述不飽和烴基部分具有一個(gè)雙鍵，該雙鍵位于所述烴基部分的末端兩個(gè)碳之間。10.權(quán)利要求6的方法，其中所述活性醛基處于所述烴基部分的末端部分。11.權(quán)利要求7的方法，其中所述活性醛基處于所述烴基部分的末端部分。12.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述氨基在所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖的1、2、3、4或5位與所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖相連。13.權(quán)利要求1或2的方法，其中將包含不飽和烴基部分的所述N-?；糠盅趸园┗?，并且所述N-?；糠钟米魇顾龅途厶腔蚨嗵桥c載體蛋白綴合的連接體。14.權(quán)利要求1或2的方法，其中通過(guò)還原胺化，使所述低聚糖或多糖經(jīng)由N-?；糠值娜┗c載體蛋白綴合。15.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述糖綴合物的載體蛋白和低聚糖或多糖通過(guò)如下連接共價(jià)連接<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>蛋白質(zhì)其中R2是飽和的C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9或C1Q烴基部分，其中所述連接的NH是所述蛋白質(zhì)的伯nh2基團(tuán)，并且其中fsugar^表示所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖。16.權(quán)利要求2的方法，其中用N-戊烯?；〈鯪-乙?；?，并且其中N-戊烯?；米魇够衔锱c載體蛋白綴合的連接體。17.權(quán)利要求1或2的方法，其中N-乙?；撬鲆粋€(gè)或多個(gè)氨基糖的部分，所述一個(gè)或多個(gè)氨基糖是GlcNAc、ManNAc、GalNAc和唾液酸中的一個(gè)或多個(gè)。18.權(quán)利要求2的方法，其中使用堿，用N-?；糠秩〈鯪-乙?；?，以形成式I。19.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述載體蛋白是破傷風(fēng)毒素或類(lèi)毒素、CRM^、得自革蘭氏陰性菌的外膜蛋白質(zhì)、得自不可分類(lèi)的流感嗜血桿菌的P6和P4、得自粘膜炎莫拉氏菌的CD和USPA、白喉毒素/類(lèi)毒素、去毒的綠膿假單胞菌毒素A、霍亂菌毒素/類(lèi)毒素、百日咳毒素/類(lèi)毒素、產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素/類(lèi)毒素、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、輪狀病毒VP7蛋白質(zhì)或呼吸道合胞病毒F蛋白和G蛋白或其活性部分。20.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述低聚糖或多糖是得自細(xì)菌的低聚糖或多糖。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)菌是鏈球菌、葡萄球菌、腸球菌、芽孢桿菌、棒狀桿菌、李斯特菌、丹毒絲菌、梭狀芽孢桿菌、嗜血桿菌、志賀氏菌、克雷伯氏菌、霍亂弧菌、奈瑟氏球菌或埃希氏菌。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述低聚糖或多糖是產(chǎn)生自B群鏈球菌、A群鏈球菌、腦膜炎奈瑟球菌、肺炎鏈球菌或大腸桿菌的莢膜多糖。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述莢膜多糖產(chǎn)生自Ia、Ib、II、III、V、VI或VIII型B群鏈球菌。24.權(quán)利要求22的方法，其中所述莢膜多糖產(chǎn)生自B、C、Y或W135型腦膜炎奈瑟球菌。25.權(quán)利要求22的方法，其中所述莢膜多糖產(chǎn)生自ni、IV或XIV型肺炎鏈球菌。26.權(quán)利要求22的方法，其中所述莢膜多糖產(chǎn)生自大腸桿菌K1。27.權(quán)利要求1的方法，其中預(yù)先將所述載體蛋白與相同或不同的抗原性低聚糖或多糖綴合。28.權(quán)利要求2的方法，其中預(yù)先將所述載體蛋白與相同或不同的抗原性低聚糖或多糖綴合。29.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1、2、27或28的免疫原性糖綴合物和藥學(xué)上可接受的載體。28.權(quán)利要求27的藥物組合物，其包含多種低聚糖或多糖。29.權(quán)利要求27的藥物組合物，其包含多種載體蛋白。30.權(quán)利要求28的藥物組合物，其包含多種載體蛋白。31.權(quán)利要求27的藥物組合物，其包含多種免疫原性糖綴合物。32.權(quán)利要求27的藥物組合物，其另外包含一種或多種佐劑。33.引起針對(duì)一類(lèi)或多類(lèi)細(xì)菌的免疫應(yīng)答的方法，其包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求27的藥物組合物。34.治療或預(yù)防有此需要的受試者的細(xì)菌感染的方法，其包括對(duì)所述受試者給予治療有效量的權(quán)利要求27的藥物組合物。全文摘要本發(fā)明涉及制備免疫原性糖綴合物(特別是用于在受試者中誘導(dǎo)治療性免疫應(yīng)答的藥物組合物中使用的免疫原性糖綴合物)的方法。本發(fā)明的免疫原性糖綴合物包含一種或多種低聚糖或多糖，該低聚糖或多糖通過(guò)活性醛基綴合于一種或多種載體蛋白質(zhì)。因此，本發(fā)明提供了制備以下物質(zhì)的方法(i)不飽和的微生物的N-?；苌锏途厶腔蚨嗵?；(ii)不飽和的N-酰基衍生物的新穎的綴合物；以及(iii)糖綴合物組合物，其包含用作一種或多種蛋白質(zhì)的共價(jià)連接體的微生物的不飽和N-?；苌锏钠蔚木Y合物分子。本發(fā)明另外包含所述免疫原性糖綴合物藥物組合物用于預(yù)防或治療感染性疾病的用途。文檔編號(hào)A61K39/395GK101754773SQ200880025103公開(kāi)日2010年6月23日申請(qǐng)日期2008年6月18日優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日發(fā)明者A·薩卡,F·米瓊申請(qǐng)人:巴克斯特國(guó)際有限公司;巴克斯特保健股份有限公司