專利名稱：：用于治療創(chuàng)傷的藥物組合物以及相關(guān)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本公開涉及用于加速創(chuàng)傷愈合、增加皮膚創(chuàng)傷閉合以及減少皮膚創(chuàng)傷部位感染的組合物和方法。
背景技術(shù)：
：皮膚是復(fù)雜的組織，其構(gòu)成為不同的層，即表皮、真皮和皮下組織，每一個都擁有不同的細(xì)胞特征和生理重要性(Fuchs和Byrne1994；Goldsmith1991)。表皮是分層的鱗狀上皮組織，其中嚴(yán)格區(qū)分了進(jìn)行生長和分化的細(xì)胞(Fuchs和Byrne1994)。在正常的生理階段，增殖被限制到與基底膜相粘附的基底細(xì)胞。分化是一個空間過程，其中基底細(xì)胞喪失了其與基底膜的粘附，停止DNA合成并進(jìn)行一系列形態(tài)和生物化學(xué)改變。最終的成熟步驟是角質(zhì)層的產(chǎn)生，其形成了皮膚的保護(hù)屏障(Termenbaum等，1991；ffysocki1999)。真皮主要由基質(zhì)纖維構(gòu)成并含有各種細(xì)胞類型。此外，所有的皮膚附屬部分，即微脈管系統(tǒng)、汗腺和皮脂腺、感覺神經(jīng)和毛囊均位于真皮中。真皮起到了支持皮膚營養(yǎng)、維持真皮和下述途徑的作用，其中通過該途徑信號從身體的其它部分到達(dá)外部層(Green1977；ffysocki1999)。皮下組織是皮膚的最深層，其主要由脂肪細(xì)胞組成，也被稱為皮下脂肪層。直到最近，還認(rèn)為這一層具有隔離外部溫度變化的作用并且給皮膚的上層提供機(jī)械支持(Nash等2004；Querleux等2002)。在皮膚中，分層表皮的持續(xù)更新是由導(dǎo)致產(chǎn)生沒有活力的、角質(zhì)化的鱗的順序的且高度特化的過程維持的，所述鱗與衍生自分泌的片層體的脂質(zhì)一起構(gòu)成了身體的保護(hù)性水屏障。正在增殖的基底細(xì)胞與表皮特異性的基底膜粘附。角質(zhì)化細(xì)胞的分化過程與和基底膜接觸的細(xì)胞的喪失緊密相關(guān)；當(dāng)基底細(xì)胞遷移至更外表的棘層時，它們喪失了增殖能力。進(jìn)一步成熟為顆粒細(xì)胞區(qū)域，隨后形成硬的角質(zhì)化的包層，這與細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的自溶以及程序性細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生成熟的鱗(Adams和Watt1990；Eckert1989；Yuspa等1980)。開放的皮膚創(chuàng)傷通常通過包括6個主要要素的過程愈合(i)發(fā)炎；(ii)成纖維細(xì)胞增殖；(iii)血管增生；(iv)結(jié)締組織合成；(V)上皮形成；以及(vi)創(chuàng)傷收縮。當(dāng)這些要素個別地或作為整體不恰當(dāng)?shù)匕l(fā)揮作用時，創(chuàng)傷愈合即會受損。許多因素可影響創(chuàng)傷愈合，包括營養(yǎng)不良、感染、藥劑(例如，放線菌素和類固醇)、高齡和糖尿病(Keast和Orsted1998；Kirsner禾口Eaglstein1993；Williams禾口Armstrong1998)。糖尿病(Diabetesmellitus)是糖尿病(Diabetes)的常見形式，其特征在于受損的胰島素信號傳導(dǎo)、升高的血漿葡萄糖和在若干個特定組織上發(fā)生慢性并發(fā)癥的易感性。12在所有糖尿病的慢性并發(fā)癥中，導(dǎo)致足部潰爛的受損的創(chuàng)傷愈合是研究最少的(Goodson和Hunt1979；Grunfeldl992)。然而糖尿病患者的皮膚潰瘍花費了大量人力和財力。而且，足部潰爛以及爾后的下肢截斷是最常見的糖尿病患者住院的原因。在糖尿病中，創(chuàng)傷愈合過程受到損壞，以及愈合的創(chuàng)傷的特征在于創(chuàng)傷強(qiáng)度減小(Shaw和Boulton1997)。組織修復(fù)中的缺陷與幾種因素有關(guān)，這些因素包括神經(jīng)病、血管病和感染(Mousley2003；Silhi1998)。但是，尚不明了其它機(jī)制，通過該機(jī)制，與反常的胰島素信號傳導(dǎo)相關(guān)的糖尿病狀態(tài)損壞創(chuàng)傷的愈合并改變皮膚生理。還有一個普遍存在的問題是在身體各個部分中的外科手術(shù)之后的創(chuàng)傷愈合受到年齡和諸如糖尿病和肥胖病等的慢性病發(fā)展的影響。在外科手術(shù)設(shè)置中，三分之一的患者由于它們的生理狀態(tài)以及在創(chuàng)傷部位的相關(guān)感染的發(fā)展而延遲創(chuàng)傷愈合(Diegelmann禾口Evans2004)。皮膚創(chuàng)傷通常在包括馬、狗、貓和家畜的動物中被發(fā)現(xiàn)。在動物創(chuàng)傷中，有各種常見的疾病提示需要創(chuàng)傷管理。因此，獸醫(yī)皮膚病學(xué)是獸醫(yī)醫(yī)學(xué)中增長最快的學(xué)科之一。一般而言，許多這些創(chuàng)傷通過第二期愈合而治愈。這一過程花費很長的時間，尤其是涉及四肢時尤其如此。在動物中，以及在人類中，創(chuàng)傷愈合過程可能因諸如污染、感染或骨間裂隙的因素而被復(fù)雜化，這些因素通常是延長愈合時間或不恰當(dāng)?shù)膭?chuàng)傷閉合的原因(Grunfeld1992；Knol和Wisselink1996；Yeruham等，1992；Yim等，2007)。典型地，創(chuàng)傷愈合需要誘導(dǎo)(活化)新表皮和肉芽組織的形成以及減少感染。這些過程在動物中對于各種急性和慢性創(chuàng)傷，諸如手術(shù)后創(chuàng)傷、肢端舔的潰瘍和糖尿病潰瘍等的愈合也是必要的。馬遭受由肉芽組織過剩引起的慢性創(chuàng)傷(例如，“贅肉”)，其中成纖維細(xì)胞增殖和血管發(fā)生均病理學(xué)地升高。這一反常的肉芽組織過度生長在上皮組織水平之上，并且物理地阻斷鄰近皮膚的接近，否則該鄰近皮膚可能生長在這一區(qū)域之上。成纖維細(xì)胞的這一不受控制的生長的機(jī)制還是未知的。僅有的可利用的治療涉及手術(shù)移除過度無約束的組織、壓力包扎和皮質(zhì)類固醇。該治療花費延長的時間(5-8個月)并且病損常常復(fù)發(fā)(De、我和Theoret2004；Stone1986)。動物中其它特定的病理包括狗中的肢端舔的皮膚炎和咬的潰瘍。肢端舔的皮膚炎是狗中常見的問題，其是指與狗病損相關(guān)的增加的變紅、粗糙、有彈力的組織，其產(chǎn)生自相同區(qū)域的反復(fù)舔。盡管在肢端舔的皮膚炎的治療中有許多策略，但是治愈率和效果都還不足并且在許多情況下會發(fā)生潰瘍的復(fù)發(fā)(White1990；Yeruham等1992)。蛋白激酶C(PKC)是磷脂依賴性酶家族，其催化磷酸從ATP共價轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)的絲氨酸和蘇氨酸殘基上，并且其在調(diào)節(jié)皮膚生理中起著重要的作用。底物蛋白質(zhì)的磷酸化誘導(dǎo)構(gòu)象改變，其導(dǎo)致它們功能性質(zhì)的修飾。到目前為止，發(fā)現(xiàn)了11種同種型參與各種細(xì)胞功能和調(diào)節(jié)增殖、分化、細(xì)胞存活和死亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑(Nishizuka1995)。特異性輔因子的需求、組織定位和細(xì)胞區(qū)室化提示對于每一同種型的不同功能和特定信號傳導(dǎo)級聯(lián)的精確調(diào)諧。因此，通過由它們在特定生物設(shè)定中的表達(dá)、定位和磷酸化狀態(tài)調(diào)節(jié)的同種型特異性的PKC信號，特異性的刺激可以導(dǎo)致不同的反應(yīng)。PKC同種型被各種細(xì)胞外信號活化，并且依次修飾細(xì)胞蛋白質(zhì)的活性，所述蛋白質(zhì)包括受體、酶、細(xì)胞骨架蛋白和轉(zhuǎn)錄因子。因此，PKC家族在細(xì)胞信號處理中起著中心作用。絲氨酸/蘇氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族的原型首先被Nishizuka及其同事(Kikkawa等，1989)描述，它們首先發(fā)現(xiàn)了被作為磷脂酰肌醇的降解產(chǎn)物的二?；视?DAG)活化的PKC(CaStagna等，1982)。其它研究揭示了PKC是促進(jìn)腫瘤的佛波酯的細(xì)胞內(nèi)受體。所有的PKC家族成員共有一個結(jié)構(gòu)骨架，其可被劃分為兩個主要的結(jié)構(gòu)域處于N端的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域和處于C端的催化結(jié)構(gòu)域。將這些區(qū)域分類為保守區(qū)(C1-C4)和在同種型之間變化的區(qū)(V1-V5)(NiShizukal988)，同上。此外，PKC在調(diào)節(jié)區(qū)還展示出與底物識別基序密切相似的假底物結(jié)構(gòu)域，其封閉識別位點并阻止活化(Blumberg1991；House和Kemp1987)?；谒鼈兊慕Y(jié)構(gòu)特征和輔因子需求，可將PKC同種型家族劃分為3個大組。它們包括典型的cPKC(a、日I、日II和？)、新的1^1(((6、e、n、0)和非典型的aPKC(4和i/入)同種型(Azzi等1992；Kikkawa等1989；Svetek等1995)。對于它們的活化，所有同種型均需要磷脂雙層的成分。典型的cPKC是鈣(Ca2+)依賴性的，并且對于活化還需要DAG或DAG類似物諸如佛波酯。新的nPKC不依賴于Ca2+，但對于最大化活化仍需要DAG或佛波酯(Kazanietz等1993)。非典型的aPKC不依賴于Ca2+，也不需要DAG或佛波酯，但對于活化需要磷脂酰絲氨酸(Chauhan等1990)。此外，底物識別的主要部件是在調(diào)控結(jié)構(gòu)域內(nèi)的假底物區(qū)，其控制與細(xì)胞信號中PKC同種型的特異性活性有牽連的調(diào)控機(jī)制，并且與不同靶底物的磷酸化相關(guān)聯(lián)(Eichholtz等1993；Hofmann1997)。已經(jīng)在體內(nèi)在皮膚表皮中和在培養(yǎng)的角質(zhì)化細(xì)胞中鑒定了五種PKC同種型(a、s、e、n和4)。然而，在皮膚的真皮層中檢測到了諸如3和Y的其它PKC同種型。此外，PKC同種型的類型和PKC分布模式在不同的組織中不同，并且可能還作為表現(xiàn)型的函數(shù)而變化。重要的是，在體內(nèi)和體外中，PKC同種型均分布在基底和分化的皮膚角質(zhì)化細(xì)胞中，并且可能在創(chuàng)傷愈合中起著重要的作用。因此，需要調(diào)控PKC活性以幫助治療皮膚創(chuàng)傷和其它慢性創(chuàng)傷的改進(jìn)的組合物和方法。公開概述本公開大體上涉及含有不含鈣及鎂離子的生物活性的皮膚創(chuàng)傷愈合劑和或抗炎劑的藥物組合物，并且還涉及使用該藥物組合物治療皮膚創(chuàng)傷和/或炎癥的方法。該藥物組合物優(yōu)選地適用于局部或本地給藥，尤其是皮下給藥。本公開的一個方面是包含5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本公開的另一方面是包含胰島素、由SEQIDN0:1中所示氨基酸序列組成的并且在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢碾囊约安缓珻a2+和Mg2+陽離子的水性的藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述的藥學(xué)上可接受的載體包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04。所述藥學(xué)上可接受的載體優(yōu)選地包括適于緩沖該組合物的磷酸鹽或含有磷酸鹽的化合物。特別優(yōu)選的實施方案包括0.2LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04。此類藥學(xué)上可接受的載體也是本發(fā)明的一個方面，并且可以通過混合所需要的組分以提供不含有鈣或鎂離子的藥學(xué)上可接受的載體而制備該載體。本公開的另一方面是包含5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑、不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體以及藥物流出支架的藥物組合物。本公開的另一方面是由包括以下步驟的方法制得的藥物組合物提供5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；以及混合所述6-PKC活化劑、a-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；由此制得藥物組合物。本公開的另一方面是用于增加動物皮膚創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟提供包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉1=1o本公開的另一方面是減少動物皮膚創(chuàng)傷部位上的炎癥的方法，其包括以下步驟提供包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。本公開的另一方面是包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的另一方面是包含約0.0001單位/L至0.1單位/L的胰島素和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的另一方面是用于增加動物創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟提供包含6-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物，其中所述的創(chuàng)傷是選自由糖尿病潰瘍、肢端舔的創(chuàng)傷、贅肉創(chuàng)傷、外科手術(shù)創(chuàng)傷、慢性日光性膿腫創(chuàng)傷和骨髓炎創(chuàng)傷組成的組中的至少一種；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。本發(fā)明的另一方面是包含5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是包含5-PKC活化劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是包含a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是減少動物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟提供包含a"PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。本發(fā)明的其它方面包括應(yīng)用本發(fā)明的諸如本文描述的組合物促進(jìn)肉芽組織的形成、表皮增殖和皮膚生長。最后，本文公開的組合物可以完全不含Ca2+和Mg2+陽離子，或含有不含這些陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。附圖簡述圖1A提供了細(xì)胞培養(yǎng)皿的照片，其顯示了應(yīng)用所指示的在不同的制劑中配制的藥物組合物的體外創(chuàng)傷愈合效力。(在Axiovert25Zeiss顯微鏡下放大50倍)。圖1B以處理24小時后的閉合百分比顯示了創(chuàng)傷閉合。圖2A是顯示了在制劑A中的藥物組合物促進(jìn)顯著的創(chuàng)傷閉合的圖。圖2B是采用各種制劑處理后的代表性創(chuàng)傷的照片。圖3是顯示了在各種制劑中處理后的創(chuàng)傷部位的炎癥負(fù)擔(dān)的圖。圖4是顯示了采用各種制劑處理后的肉芽組織形成的圖。圖5是顯示了在各種制劑中Myr-假底物PKCa肽抑制PKCa活性的能力的圖。圖6A是細(xì)胞培養(yǎng)皿的放大圖(在Axiovert25Zeiss顯微鏡下放大200倍)，其顯示了在各種制劑中胰島素對創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖的影響。圖6B是顯示了以采用各種制劑在胰島素存在或不存在的情況下處理24小時后占對照的百分比形式表示的體外創(chuàng)傷閉合的圖。圖6C是顯示了根據(jù)通過胸腺嘧啶摻入測量的細(xì)胞增殖的圖。圖7是顯示了在更換細(xì)胞培養(yǎng)基之前或之后胰島素和胰島素+PKCa抑制劑對來自7個月大至2年大的小鼠的角質(zhì)化細(xì)胞增殖的影響的圖。圖8A提供了顯示采用在各種制劑中的藥物組合物治療慢性足潰瘍及其增加的閉合的照片和圖。圖8B是顯示了在各種制劑中在第0天和第60天時患者的慢性糖尿病創(chuàng)傷的治療和增加的閉合的照片。圖9提供了顯示在第0天、3個月和6個月時采用藥物組合物治療馬慢性贅肉創(chuàng)傷的照片。圖10提供了顯示在第0、30和60天時用藥物組合物治療伴隨骨髓炎的慢性日光性膿腫的照片。圖11提供了顯示在第0天、2個月和3.5個月時采用藥物組合物治療由自損傷引起的未愈合肢端舔的創(chuàng)傷的進(jìn)展的照片。圖12是表示以商標(biāo)HUMALOG而為人所知的人類胰島素類似物賴脯胰島素(rDNA起源)的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。圖13是表示以商標(biāo)NOVOLOG而為人所知的人類胰島素類似物天冬胰島素(rDNA起源)的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。圖14是表示商標(biāo)LANTUS而為人所知的人類胰島素類似物甘精胰島素(rDNA起源)的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。圖15是表示也以商標(biāo)NOVOLINR而為人所知的人類胰島素類似物HUMULINR的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。圖16是顯示了在用胰島素類似物(單獨在制劑A中提供的)治療后通過表皮和肉芽組織的形成而測量的創(chuàng)傷愈合的百分比并與未治療的對照創(chuàng)傷比較的圖。所研究的胰島素類似物是賴脯胰島素(HumL)、天冬胰島素(Novo)、甘精胰島素(LANTUS)和優(yōu)泌林R(HumR)。圖17是顯示了單獨用優(yōu)泌林R(HumR)、USP胰島素(InsUSP)和PKCa假底物抑制肽(P印)或與胰島素類似物以及抑制肽組合治療的、通過肉芽組織的形成測量的促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的圖。圖18是顯示了單獨用優(yōu)泌林R(HumR)、賴脯胰島素(HumL)和PKCa假底物抑制肽(pep)治療或與胰島素類似物以及抑制肽協(xié)同組合治療的嚴(yán)重炎癥的百分比的圖。圖19是顯示了在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中培養(yǎng)的原代皮膚角質(zhì)化蛋白中，在用內(nèi)臟16脂肪素(visfatin)或L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽處理后，在7個月大至2年大的小鼠角質(zhì)化細(xì)胞中角蛋白1的表達(dá)的圖。發(fā)明詳述本公開的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和PKCa抑制劑和/或胰島素，其中所述的藥學(xué)上可接受的載體包含在各種溶劑中的不同的無機(jī)鹽和有機(jī)鹽。示范性的藥學(xué)上可接受的載體的制劑組合物可以含有水、鉀、氯化鈉和生理上可耐受的磷酸鹽，并且可如下制備A)氯化鉀0.2g/L(KCl)B)磷酸二氫鉀(無水)0.2g/L(KH2P04)C)氯化鈉8.0(g/L)(NaCl)D)磷酸氫二鈉(無水)1.15(g/L)(Na2HP04)該制劑必須不含有鈣或鎂離子。盡管可以使用任何PKCa抑制劑，但優(yōu)選地該P(yáng)KCa抑制劑為豆蔻?；南鄳?yīng)于PKCa的假底物區(qū)的肽(Myr*-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-OH(SEQIDNO:1CAS[147217-25-2])0該P(yáng)KCa假底物區(qū)對這一特定同種型的底物區(qū)具有特別高的親和力?？墒褂玫钠渌黀KC抑制劑的實例包括下列表1中所示的肽表1.PKC抑制劑肽<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>此外，以下PKC抑制劑也可在根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中應(yīng)用A)NPC15437-二鹽酸鹽水合物(Sigma)，也被稱為(S)_2，6_二氨基_N_[(1_(1_氧代十三烷基)_2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物。分子式-C25H5QN4022HC1xH20分子量-511.61(無水基礎(chǔ)上)CAS號-141774-20-1(無水的)MDL號-MFCD00210207PubChemSubstanceID-24897504B)CGP41251_[4’_N_苯甲?；切捂呔豜[米哚妥林]。該星形孢菌素衍生物PKC412(CGP41251)是蛋白激酶C(CGP41251)的常規(guī)同種型的更具選擇性的抑制劑。分子式-C35H3。N404分子量-570.65<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>C)Ro31-8220-雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽(UpstateBitotechnology)。分子式-C25H23N502SCH403S分子量-553.66目錄號#19-163，結(jié)構(gòu)式顯示如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>D)Go6976，其為12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑，一種a和PKC31抑制劑。E)GF-109203X2_[1_(3-二甲基氨基丙基)_1H_吲哚_3_基]-3_(lH-吲哚-3-基)馬來酰亞胺，一種強(qiáng)有力的且選擇性的蛋白激酶C抑制劑。F)ISIS3521/LY900003，也被稱為阿普卡生(aprinocarsen)，20-核苷酸硫代磷酸脫氧寡核苷酸，可購自IsisPharmaceuticals,Inc.，Carlsbad，CA，其具有以下序列(SEQIDNO56)5’-GTTCTCGCTGGTGAGTTTCA-3’在優(yōu)選的實施方案中，本公開的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體、活化PKCS的常規(guī)胰島素或其功能類似物以及商業(yè)上可獲得的由9個氨基酸構(gòu)成的抑制PKCa的合成肽。一種優(yōu)選的藥物組合物，其包括a)氯化鉀0.2g/L(KCl)b)磷酸二氫鉀(無水)0.2g/L(KH2P04)c)氯化鈉8.0(g/L)(NaCl)d)磷酸氫二鈉(無水)1.15(g/L)(Na2HP04)e)豆蔻酰化的肽(1-100uM)，諸如Myr*-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg_Gln-0H(SEQIDNO1)f)常規(guī)胰島素或其功能類似物(治療劑量0.1-10單位/ml)上面列出的濃度是優(yōu)選的在組合物中的最終濃度。可以通過在不含有鈣和鎂離子的藥學(xué)上可接受的載體中混合胰島素或其功能類似物和PKCa抑制劑來制備該藥物組合物。預(yù)期可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法以溶液、凝膠、軟膏、霜劑或乳化劑的形式制備根據(jù)本公開的藥物組合物。當(dāng)配制在溶液中時，兩種生物活性成分即胰島素和PKCa抑制肽一起作用以誘導(dǎo)創(chuàng)傷愈合。胰島素或其功能類似物的濃度可以是0.1-10單位/ml。PKCa的肽抑制劑的濃度可以是1至100iiM。優(yōu)選的濃度是在1ml溶液中0.1單位的胰島素(10_6M)和1yg肽(10_6M)。用于根據(jù)本公開的藥物組合物的胰島素可以是重組的或來自天然來源，諸如人類胰島素或適于人類應(yīng)用的非人類哺乳動物胰島素。還預(yù)期可以用胰島素類似物諸如胰島素功能類似物來制備該藥物組合物。胰島素類似物的非限制性實例是賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素和重組的人胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽(本文也稱為L-a)。這些胰島素類似物中的一些與常規(guī)的人胰島素共享基本的一級結(jié)構(gòu)。賴脯胰島素與人胰島素不同，因為在該類似物中B-28處的脯氨酸和B-29處的賴氨酸顛倒了。天冬胰島素與人胰島素不同是因為B-28處的脯氨酸被天冬氨酸替代了。甘精胰島素與人胰島素不同，因為A-21位的氨基酸天冬酰胺被甘氨酸替代了，并且將兩個精氨酸殘基添加到0_鏈的C-端。重組的人胰島素可與人胰島素在結(jié)構(gòu)上相同并且通過rDNA技術(shù)來制備，例如通過應(yīng)用釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)以產(chǎn)生所述的肽。內(nèi)臟脂肪素是脂質(zhì)細(xì)胞因子，其可作為胰島素類似物而起作用并且是能夠結(jié)合并活化胰島素受體的胰島素模擬物。L-a是活化Ca2+_不敏感的PKC同工酶8、￡和n的有機(jī)化合物。其通過血小板_白細(xì)胞C激酶底物同源性(PH)結(jié)構(gòu)域與磷酸肌醇-l(GRPl)蛋白的通用受體結(jié)合，并且還報道其增加NIH/3T3細(xì)胞的運動性以及產(chǎn)生肌動蛋白重組和膜邊緣波動。在優(yōu)選的實施方案中，將治療有效量的藥物組合物給藥到有需要的受試者?？赏ㄟ^有效地提供期望治療的任何已知的給藥途徑給藥該藥物組合物，優(yōu)選地通過以溶液、軟膏、凝膠、霜劑形式局部應(yīng)用或任意局部應(yīng)用(諸如皮下注射)來給藥該藥物組合物。還可通過藥物流出裝置，諸如紗布、貼片、墊片或藥棉來給藥該藥物組合物。根據(jù)本公開的本藥物組合物的進(jìn)一步方面是使用該藥物組合物治療受損的皮膚或皮膚創(chuàng)傷。應(yīng)當(dāng)以有序地治療該創(chuàng)傷及達(dá)到期望端點(例如，直到創(chuàng)傷完全消除)所需要的頻率和所需要的時間長度來給藥該組合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員能很容易地確定應(yīng)用根據(jù)本公開的組合物和方法的合適療程。根據(jù)本公開的藥物組合物的進(jìn)一步方面是促進(jìn)肉芽組織形成、表皮增殖和皮膚生長。根據(jù)本公開的藥物組合物的另一方面是治療炎癥，例如由炎性皮膚病引起的炎癥的方法。本文中所使用的術(shù)語“a-PKC抑制劑”的意思是能夠通過任何機(jī)制抑制PKCa同種型活性的分子。PKCa同種型的實例包括由登錄號NM_002737[人PKCa]、XM_548026[家犬(Canislupusfamiliaris)PKCa]、XM_001494589[馬(Equuscaballus)PKCa]和NM_011101[小鼠PKCa]描述的核酸編碼的PKCa同種型，或者與這些PKCa同種型的成熟形式至少95%同一的肽鏈，如應(yīng)用CLUSTALW算法的缺省設(shè)置所確定的那樣。a-PKC抑制劑分子可通過結(jié)合、共價修飾或涉及此類分子與PKCa同種型物理相互作用的其它機(jī)制而直接地抑制PKCa同種型。a-PKC抑制劑分子還可以通過調(diào)節(jié)參與PKCa同種型活化的第二分子的活性(例如通過調(diào)節(jié)PKCa同種型相關(guān)信號傳導(dǎo)級聯(lián)的成分的活性以抑制PKCa同種型的活性，或通過使阻止PKCa同種型表達(dá)的RNA沉默)而間接地抑制PKCa同種型。本文中所使用的術(shù)語“5-PKC活化劑”意思是能夠在細(xì)胞或組織中通過任何機(jī)制活化PKCS同種型或增加PKCS同種型活性的分子。PKCS同種型的實例包括由登錄號NM_006254[人PKCS]、XM_001008716[家犬PKCS]、XM_001915127[馬PKCS]和NM_011103[小鼠PKCS]描述的核酸編碼的PKCS同種型，或者與這些PKCS同種型的成熟形式至少85%同一的肽鏈，如應(yīng)用CLUSTALW算法的缺省設(shè)置所確定的那樣。S-PKC活化劑分子可通過結(jié)合、共價修飾或涉及此類分子與PKC6同種型物理相互作用的其它機(jī)制來直接地活化PKCS同種型，并且可包括PKCS同種型底物和輔因子。S-PKC活化劑分子還可通過調(diào)節(jié)參與PKCS同種型活化的第二分子的活性來間接地活化PKCS同種型(例如，通過調(diào)節(jié)PKC6同種型相關(guān)的信號傳導(dǎo)級聯(lián)的成分，諸如胰島素受體的活性來活化PKC6同種型)。S-PKC活化劑分子還可通過在細(xì)胞或組織中產(chǎn)生PKCS同種型的升高的表達(dá)從而增加細(xì)胞或組織中的PKCS同種型活性。本文中所使用的術(shù)語“藥物流出支架”的意思是能夠釋放生理活性分子的固定材料。藥物流出支架可以包含固定相材料，其可以是不溶的、可溶的、非生物可吸收的或生物可吸收的。本文中所使用的術(shù)語“胰島素”的意思是那些天然存在的肽激素或它們的前胰島素原和胰島素原前體形式，在它們的成熟形式中，其包含二硫鍵連接的A鏈和B鏈，其可以活化胰島素受體并且已知可用于治療糖尿病。來自許多不同的動物物種，諸如人類、牛和豬的胰島素是公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可很容易地識別。重要的是，胰島素可以是重組產(chǎn)生的。本文中所使用的術(shù)語“胰島素類似物”的意思是包含沒有在天然存在的胰島素中發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)的分子，其能夠通過任何機(jī)制活化胰島素受體。此類分子可以是胰島素的結(jié)構(gòu)類似物，其中天然存在的胰島素的一個或多個結(jié)構(gòu)方面已經(jīng)被修飾。此類分子還可以是模擬分子，其不包含在天然存在的胰島素中發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。胰島素類似物還可以包括胰島素樣生長因子(例如，胰島素樣生長因子-1)。胰島素類似物可通過結(jié)合、共價修飾或涉及與此類受體物理相互作用的其它機(jī)制而直接地活化胰島素受體。胰島素類似物還可通過調(diào)節(jié)參與此類受體活化的第二分子的活性而間接地活化胰島素受體。不希望被理論所束縛，相信胰島素受體的活化導(dǎo)致PKCS的間接活化。許多不同的胰島素類似物是已知的并且本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易地識別。本文中所使用的術(shù)語“標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)”的意思是25°C+/_2°C的溫度以及1個大氣壓的壓力。在本文中描述并且以每單位體積為基礎(chǔ)表示(例如，mol/L、M、單位/ml、ug/ml等)的溶液、懸浮液和其它制劑的濃度均是在“標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)”下被確定的。在本領(lǐng)域中術(shù)語“標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)”不是用來指單個領(lǐng)域認(rèn)可的溫度或壓力設(shè)置，而是一種參照狀態(tài)，所述參照狀態(tài)應(yīng)用特定溫度和壓力以描述在參照“標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)”條件下具有特定組成的溶液、懸浮液或其它制劑。這是因為溶液的體積部分地是溫度和壓力的函數(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到可在其它溫度和壓力下制備與本文公開的那些組合物等價的組合物。本文中所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”的意思是適于向人或其它動物給藥的一種或多種相容的固態(tài)或液態(tài)填充劑稀釋劑或包封物質(zhì)。本公開的一個方面是包含5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。理想地，藥學(xué)上可接受的載體應(yīng)當(dāng)是高純度的并且低毒性的，以使得它們適于向待治療的人類或動物給藥。此類藥學(xué)上可接受的載體還應(yīng)當(dāng)維持S-PKC活化劑和a-PKC抑制劑的生物活性。此類藥學(xué)上可接受的載體還可包括，例如，基于醋酸鹽的緩沖劑、基于2-嗎啉代乙磺酸(MES)的緩沖劑、基于鄰苯二甲酸氫鉀的緩沖劑、基于KH2PO4W緩沖劑、基于三(羥甲基)甲胺的緩沖劑和基于硼酸鈉(Na2B4O^lOH2O)的緩沖劑。IOOmL0.IM鄰苯二甲酸氫鉀+體積指示的(以ml)0.IMNaOH。此類緩沖液可以被制得或可包含以下配方IOOmL的0.IMKH2PO4,用0.IMNaOH調(diào)節(jié)至期望的pH；IOOmL的0.IM三(羥甲基)甲胺，用0.IMHCl調(diào)節(jié)至期望的pH；以及IOOmL的0.025MNa2B4O7·IOH2O(硼酸鈉)，用0.IMHCl調(diào)節(jié)至期望的pH。合適的藥學(xué)上可接受的載體的實例包括水，石油膏，礦脂，礦物油，植物油，動物油，有機(jī)和無機(jī)蠟，例如微晶蠟、石蠟和地蠟，天然聚合物諸如蒼耳烷，麥芽，滑石，明膠，糖，纖維素，膠原，淀粉，或阿拉伯樹膠，合成的聚合物，醇，多元醇，磷酸鹽緩沖液，可可脂，乳化齊U，洗滌劑，例如吐溫等。載體可以是基本上可在水中混溶的水可混溶的載體組合物，例如諸如，醇。水可混溶的局部藥學(xué)上可接受的載體可以包括用上述一種或多種組分制得的那些，并且還可包括持續(xù)或延遲釋放的載體，包括含水的、水可分散的或水可溶的組合物，例如脂質(zhì)體、微海綿物、微球體或微膠囊，水基油膏，油包水或水包油乳液，或凝膠等。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識其它藥學(xué)上可接受的載體。其它相容的藥物活性劑和添加劑可以被包括在用于本發(fā)明組合物的藥學(xué)上可接受的載體中。例如，局部麻醉劑諸如N0V0CAINE、利多卡因等可以被包括在藥學(xué)上可接受的載體中。添加劑諸如苯甲醇和其它防腐劑也可以被包括在藥學(xué)上可接受的載體中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能很容易地識別其它可藥用活性劑和添加劑。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，δ-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-α-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽組成的組中的至少一種。其它胰島素類似物的實例包括谷賴胰島素(insulinglulisine)、地特胰島素和白蛋白胰島素(albulin)。這些胰島素類似物中的某些也通過商標(biāo)名APIDRA、HUMALOG.LANTUS、LEVEMIR、NOVOLIN、優(yōu)泌林、NOVOLOG等為人所知。此外，可將優(yōu)泌林配制為包含o.16mg/ml甘油和0.7μg/ml氯化鋅?？捎肐N鹽酸或IN氫氧化鈉將這些優(yōu)泌林R組合物的pH調(diào)節(jié)至PH7.4。本文中公開的組合物還可包含如上所述的包括Zn2+離子的優(yōu)泌林R胰島素類似物制劑的成分。內(nèi)臟脂肪素可包含SEQIDNO:63中所示的人內(nèi)臟脂肪素氨基酸序列。內(nèi)臟脂肪素也可包含SEQIDNO:64所示的小鼠內(nèi)臟脂肪素氨基酸序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員將識別其它的內(nèi)臟脂肪素分子，諸如與SEQIDNO63或SEQIDNO64具有超過90%的同一性、或超過95%的同一性的那些分子，或它們的生物活性片段或變體。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員還將認(rèn)識到氨基末端處的甲硫氨酸殘基典型地被從多肽鏈例如體內(nèi)表達(dá)的內(nèi)臟脂肪素和其它的成熟形式中切除。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，胰島素是重組表達(dá)的?？赏ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)實施通過用重組的DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的重組表達(dá)。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞、古細(xì)菌細(xì)胞或真核細(xì)胞?？赏ㄟ^本領(lǐng)域公知的技術(shù)實施重組表達(dá)的多肽(諸如重組胰島素肽鏈)的分離和純化，例如，制備色譜法以及應(yīng)用抗體或與給定多肽特異性地結(jié)合的其它分子的親和純化。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，α-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6-二氨基-N-[(1-(1-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-Ν-苯甲酰星形孢菌素；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5Η-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到在所公開的組合物中，PKC抑制劑可以呈鹽、水合物和復(fù)合物的形式。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員還將認(rèn)識到PKC抑制劑可以被混合在公開的組合物中。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，α-PKC抑制劑是選自由具有以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDNO:2、SEQIDN0:3、SEQIDNO:4、SEQIDN0:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:1USEQIDNO:12、SEQIDNO13,SEQIDNO14,SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQEDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO35,SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO47,SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO54和SEQIDNO:55。可通過這樣的通常使用的方法合成此類肽，所述方法例如為t-B0C或FMOC保護(hù)α-氨基基團(tuán)。這兩種方法均涉及逐步的合成，由此從肽的羧基末端處開始，每一步添加單個氨基酸(Coligan等，CurrentProtocolsinlmmunology,WileyInterscience,1991,單元9)。還可通過在Merrifield(85J.Am.Chem.Soc.2149(1962))和Stewart及Young，SolidPhasePeptidesSynthesis,(Freeman,SanFrancisco,1969,第27-62頁)中描述的公知的固相肽合成方法，使用含有0.1-1.OmMol的胺/g聚合物的共聚(苯乙烯-二乙烯基苯)，來合成本發(fā)明的肽。在化學(xué)合成完成之后，可以使肽脫保護(hù)，并通過用HF-10%苯甲醚在0°C處理約1/4-1小時而將肽從聚合物上切下。在蒸發(fā)試劑后，用乙酸溶液從聚合物中提取肽，然后將其凍干以產(chǎn)生粗材料。這通?？梢酝ㄟ^諸如應(yīng)用5%乙酸作為溶劑在Si^phadexG-15上凝膠過濾的方法對其進(jìn)行純化。將適當(dāng)?shù)闹募壏謨龈蓪a(chǎn)生均勻的肽或肽衍生物，然后可通過這樣的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如氨基酸分析、薄層色譜、高效液相色譜法、紫外吸收光譜、摩爾旋光和基于溶解度的方法對其進(jìn)行表征。還可通過任何生物學(xué)方法，例如通過在哺乳動物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母和細(xì)菌以及無細(xì)胞系統(tǒng)(諸如體外轉(zhuǎn)錄和翻譯系統(tǒng))中重組表達(dá)蛋白質(zhì)來合成肽?？赏ㄟ^大家接受的方法針對每一系統(tǒng)將蛋白質(zhì)表達(dá)最優(yōu)化?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)方法(FrederichM.Ausubel，等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,WileyInterscience,1989)純化蛋白質(zhì)。例如，可如描述的那樣(Erangionic和Neel，AnalyticalBiochemistry,210179,1993)在細(xì)菌中以GST-融合蛋白形式表達(dá)并通過谷胱甘肽瓊脂糖珠(Sigma)純化蛋白質(zhì)。備選地，可在哺乳動物細(xì)胞中以分泌產(chǎn)物形式表達(dá)并從條件培養(yǎng)基中純化蛋白質(zhì)(Cadena和Gill，ProteinExpressionandPurification4:177，1993)?？蓱?yīng)用自動肽合成儀[諸如AppliedBiosystems43IA-Ol月太gj^ft(MountainView,Calif.)]g/SffiHoughten,Proc.Natl.Acad.Sci.，USA82=5131(1985)描述的人工肽合成技術(shù)合成通過Merrifield的方法制備的肽。還可通過使用共價修飾、液相肽合成或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何其它方法合成肽?？蓱?yīng)用氨基酸或氨基酸類似物來合成肽，可如需要的那樣應(yīng)用例如二碳酸叔丁酯(t-BOC)基團(tuán)或芴基甲氧羰基(FMOC)基團(tuán)保護(hù)氨基酸或氨基酸類似物的活性基團(tuán)。氨基酸和氨基酸類似物可商購(SigmaChemicalCo.；AdvancedChemtec)或應(yīng)用本領(lǐng)域已知的方法合成。本文中公開的肽中的氨基酸可通過示范性肽中所示的一個或多個特定氨基酸的氨基酸替換而被修飾。氨基酸替換改變可包括一個堿性氨基酸替換另一個堿性氨基酸，一個疏水氨基酸替換另一個疏水氨基酸或其它保守替換。氨基酸替換還可以包括使用非天然存在的氨基酸，例如，例如鳥氨酸(Orn)或高精氨酸(homoArg)替換Arg。還可通過其它分子的共價連接或肽中存在的官能團(tuán)的反應(yīng)來修飾肽。此類修飾的實例包括連接聚乙二醇分子、脂質(zhì)、糖類或其它分子。此類修飾的特定實例還包括豆蔻酰化和酰胺化。用于肽共價修飾的技術(shù)是本領(lǐng)域中公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉許多此類技術(shù)。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，α-PKC抑制劑是由SEQIDNO25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，α-PKC抑制劑是由SEQIDNO1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKCl、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HPO4的水性載體。本公開的另一方面是組合物，其包含胰島素、由SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列組成并且在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢碾囊约鞍?.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HPO4的不含Ca2+和Mg2+陽離子的水性藥學(xué)上可接受的載體。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，所述組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約1μM至約100μM的所述肽。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，所述組合物包含0.0001單位/L的胰島素和ΙμΜ的所述肽。本公開的另一方面是包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑、不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體以及藥物流出支架的藥物組合物。所述藥物流出支架可以是能夠遞送藥物組合物的任何固相結(jié)構(gòu)。該藥物流出支架可以保持藥物組合物并隨時間通過手段例如擴(kuò)散、毛細(xì)管作用、重力或其它用于使分子流動的物理過程遞送藥物組合物。藥物流出支架可以包括，例如，層狀纖維或紡織纖維、纖維墊、泡沫、凝膠、不同固體的基質(zhì)或任何其它的固相結(jié)構(gòu)，并且可以以任何形式，例如支架被提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉其它合適的藥物流出支架。在該組合物的一個實施方案中，藥物流出支架包含多孔固體。此類多孔固體的實例包括海綿、泡沫、紗布、凝膠或其它基質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉藥物流出支架的其它實例。在該組合物的一個實施方案中，藥物流出支架是海綿。本公開的另一方面是由包括以下步驟的方法制得的藥物組合物a)提供δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；以及b)混合所述δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；由此制得藥物組合物。本文中公開的其它組合物還可通過類似地涉及提供該組合物的成分并然后混合這些成分以制備此類組合物的步驟的方法制備。本公開的另一方面是用于增加動物皮膚創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟a)提供包含S-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。可通過鑒定包含正常組織的未受影響的創(chuàng)傷邊緣并確定創(chuàng)傷邊緣內(nèi)未治愈的區(qū)域來評估皮膚創(chuàng)傷閉合。當(dāng)創(chuàng)傷邊緣內(nèi)未治愈的區(qū)域相對于之前的測量值下降時，則發(fā)生了創(chuàng)傷的閉合。最終，增加皮膚創(chuàng)傷的閉合導(dǎo)致創(chuàng)傷的完全閉合，使得沒有未治愈的區(qū)域。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉用于評估創(chuàng)傷閉合及其是否增加的其它技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易操作的常規(guī)實驗，通過組織學(xué)、H&E染色、角蛋白14染色或免疫化學(xué)或通過觀察膿腫形成、過度的白細(xì)胞增多和血管中高的RBC/WBC比值來確定藥物組合物的有效量。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可通過簡單地觀察或測量治療之前和治療之后合理時間的創(chuàng)傷面積的改變來鑒定有效量的藥物組合物已經(jīng)被給藥到具有皮膚創(chuàng)傷的受試者。適用于在本公開的方法中給藥的藥物組合物可以以溶液、油膏、乳液、霜劑、凝膠、顆粒、薄膜和硬膏的形式被提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉適用于給藥的所公開的藥物組合物的其它形式。本發(fā)明的另一方面是用于減少動物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟a)提供包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。當(dāng)以下參數(shù)中的至少兩個存在于皮膚創(chuàng)傷部位時，則發(fā)生了炎癥在創(chuàng)傷的區(qū)域形成膿腫；過度的白細(xì)胞增多(在200倍的固定視野中>100個細(xì)胞)；以及在血管中高的WBC/RBC(白細(xì)胞/紅細(xì)胞)比，其中在固定視野(200倍)中顯示在血管內(nèi)>20%的WBC含量。當(dāng)沒有或僅有上述參數(shù)中的一個存在于皮膚創(chuàng)傷部位時，則可認(rèn)為炎癥下降了。備選地，可通過其它公知的臨床征兆，例如腫脹、紅色、膿等來評估皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。當(dāng)這些臨床征兆的嚴(yán)重性下降或完全消失時，則可認(rèn)為炎癥下降了。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將知曉用于評估炎癥及其是否下降的其它技術(shù)。本公開的另一方面是包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，該組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素或胰島素類似物。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，該組合物包含約0.0001單位/L的胰島素或胰島素類似物。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，該組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本公開的另一方面是用于增加動物創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟提供包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物，其中所述的創(chuàng)傷是選自由糖尿病潰瘍創(chuàng)傷、肢端舔的創(chuàng)傷、贅肉創(chuàng)傷、外科手術(shù)創(chuàng)傷、慢性日光性膿腫創(chuàng)傷和骨髓炎創(chuàng)傷組成的組中的至少一種；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。本公開的另一方面是包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。K+陽離子的來源的實例包括氯化鉀(KCl)、碳酸氫鉀(KHCO3)和磷酸鉀(KH2PO4)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將很容易地知曉其它K+陽離子來源。本公開的另一方面是包含δ-PKC活化劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本公開的另一方面是包含α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，該藥物組合物包含約ΙμΜ至約ΙΟΟμΜ的α-PKC抑制劑肽。在本公開的組合物和方法的一些實施方案中，該藥物組合物包含1μM的α-PKC抑制劑肽。本公開的另一方面是減少動物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟提供包含α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。實施例材料和實驗方法材料組織培養(yǎng)基和血清是從BiologicalIndustries(BeitHaEmek，Israel)購買的。增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光(EnhancedChemicalLuminescence,ECL)使用從BioRad(Israel)購買的試劑盒進(jìn)行。單克隆抗P-tyr抗體購于UpstateBiotechnologyInc.(LakePlacid,NY,USA)。PKC同種型的多克隆和單克隆抗體購于SantaCruz(California,USA)和TransductionLaboratories(Lexington，KY)。辣根過氧化物酶抗兔和抗小鼠IgG獲自Bio-Rad(Israel)。亮肽素、抑肽酶、PMSF、DTT、原釩酸鈉和胃蛋白酶抑制劑購自SigmaChemicals(St.Louis，M0)。胰島素(優(yōu)泌林R-重組人胰島素)購自EliLillyFranceSA(Fergersheim,France)。IGFl購自Cytolab(Israel)。角蛋白14抗體購自Babco-Convance(Richmond，CA)。BDGF-BB購自R&D系統(tǒng)(Minneapolis)，豆蔻?；?myristolated)的PKCα假底物購自Calbinochem(SanDiego,CA)快速細(xì)胞增殖試劑盒購自Calbiochem(SanDiego,CA)。所使用的胰島素類似物是賴脯胰島素(Humalog,EliLilly)、天冬胰島素(NovoLog,NovoNordisk)、甘精胰島素(LantUS,SanofiAventis)和重組常規(guī)胰島素(優(yōu)泌林R，EliLilly)。其它所使用的胰島素類似物是鼠內(nèi)臟脂肪素(ALEXISCorporation,Lausen,Switzerland,ProductNumberALX-201-318-C050)禾口L-α-憐月旨酷肌醇_3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；?，七銨鹽(Calbiochem；目錄號524615)(L-α)。角蛋白1特異性抗體和蛋白質(zhì)印記分析二抗可商業(yè)獲得。鼠角質(zhì)化細(xì)胞的分離和培養(yǎng)如之前所述從新生皮膚上分離原代角質(zhì)化細(xì)胞。在含有8%的Chelex(Chelex-100，BioRad)處理的胎牛血清的Eagle’s最小必需培養(yǎng)基(EMEM)中培養(yǎng)角質(zhì)化細(xì)胞。為了維持增殖的基底細(xì)胞的表型，將最終的Ca2+濃度調(diào)節(jié)為0.05mM。鋪板后五天到七天進(jìn)行實驗。培養(yǎng)基A和B都是含有經(jīng)8%CHELEX處理的胎牛血清的來自BiologicalIndustries(以色列)的EMEMeagle’s最小必需培養(yǎng)基。CHELEX是強(qiáng)螯合劑，其與游離的Ca2+和Mg2+結(jié)合以防止這些離子可以被培養(yǎng)的細(xì)胞生物利用。培養(yǎng)基A不含有KCl，培養(yǎng)基B含有KC10.4mg/ml。用于免疫沉淀的細(xì)胞裂解物的制備將含有角質(zhì)化細(xì)胞的培養(yǎng)皿用不含Ca2VMg2+的PBS洗滌。用機(jī)械力使細(xì)胞分離，并且在含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的混合物(20μg/ml亮肽素、10μg/ml抑肽酶；0.ImMPMSF；ImMDTT；200μM原釩酸鹽；2μg/ml胃蛋白酶抑制劑)的RIPA緩沖液(50mMTris.HClpH7.4；150mMNaCl；ImMEDTA；IOmMNaF；1%TritonxlOO；0.1%SDS，脫氧膽酸鈉)中裂解。將此制備物在4°C在微型離心機(jī)中以最大速度離心20分鐘。將上清液用于免疫沉淀。免疫沉淀通過將300μg細(xì)胞裂解物與25μ1蛋白A/G瓊脂糖凝膠(SantaCruz,CA,USA)混合，并將懸浮液在4°C連續(xù)旋轉(zhuǎn)30分鐘，進(jìn)行裂解物的預(yù)處理。然后將制備物在40C以最大速度離心10分鐘，向上清液中加入30μ1A/G瓊脂糖凝膠以及個別抗原的特異性多克隆或單克隆抗體(稀釋率1100)。將樣品在4°C旋轉(zhuǎn)過夜。然后將懸浮液在4°C以最大速度離心10分鐘，用RIPA緩沖液洗滌沉淀。然后將懸浮液以15，OOOxg再次離心(4°C,10分鐘)，用TBST洗滌四次。加入樣品緩沖液(0.5MTris-HClρΗ6·8；10%SDS；10%甘油；4%2-β-巰基乙醇；0.05%溴酚藍(lán))，將樣品煮沸5分鐘，然后進(jìn)行SDS-PAGE。腺病毒構(gòu)建體按照Saito等人54J.Virol.711(1985)之前描述的那樣構(gòu)建重組腺病毒載體。用PKC同種型基因轉(zhuǎn)導(dǎo)角質(zhì)化細(xì)胞吸出培養(yǎng)基，用編碼特定PKC同種型(諸如PKCa)的PKC重組腺病毒感染角質(zhì)化細(xì)胞培養(yǎng)物一小時。然后用MEM洗滌所述培養(yǎng)物兩次并重新培養(yǎng)。感染后十小時，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無血清的含低Ca2+的MEM中24小時。PKC活性在從經(jīng)適當(dāng)處理后的角質(zhì)化細(xì)胞培養(yǎng)物新鮮制備的免疫沉淀物中測定特定PKC活性。在不含NaF的RIPA緩沖液中制備這些細(xì)胞裂解物。用SigmaTECT蛋白激酶C分析系統(tǒng)(Promega，Madison,WI,USA)測定活性，根據(jù)制造商的說明操作。在這些研究中用PKCa假底物作為底物。細(xì)胞增殖在6孔板中通過[3H]胸苷摻入測定細(xì)胞增殖。將細(xì)胞用[3H]胸苷(3μCi/ml)脈沖一小時。溫育后，用PBS洗滌細(xì)胞五次，將5%TCA加入每個孔中持續(xù)1小時。除去溶液，將細(xì)胞溶于IMNaOH中。在TRI-CARB液體閃爍計數(shù)器的3H窗口中對摻入細(xì)胞的標(biāo)記的胸苷進(jìn)行計數(shù)。PKC免疫激酶檢測純化的和標(biāo)準(zhǔn)化的PKC同工酶由P.Blumberg博士(NCI，NIH,U.S.)和MarcelloG.Kazanietz博士(賓夕法尼亞州大學(xué)，醫(yī)學(xué)院)慷慨提供。將原代角質(zhì)化細(xì)胞收集在500μ1Triton裂解緩沖液(在IxPBS中的1%TritonX-100、10μg/ml抑肽酶和亮肽素、2μg/ml胃蛋白酶抑制劑、ImMPMSFUmMEDTA、200μMNa2VO4,IOmMNaF)中。在4°C培育胞溶產(chǎn)物30分鐘，在4°C以16，OOOxg旋轉(zhuǎn)30分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移至新鮮試管中。用5μg/個樣品的抗α6/GoH3(PharMingen)和30μ1/個樣品的蛋白A/G-+瓊脂糖漿(SantaCruz)在4°C對細(xì)胞裂解物進(jìn)行免疫沉淀過夜。用RIPA緩沖液洗滌珠子一次，用50mMTris/HClpH7.5洗滌兩次。向每個檢測中加入35μ1反應(yīng)緩沖液(ImMCaCl2,20mMMgCl2,50mMTris·HClpH7.5)。對于每個檢測，向所述漿中加入5.5μ1/個檢測的含有DMSO或IOmMTPA的磷脂囊泡懸浮液以及標(biāo)準(zhǔn)化量的特異性PKC同工酶。加入10μ1/個檢測的125mMATP(1.25μCi/個檢測[y-32P]ATP,Amersham)起始反應(yīng)，在30°C持續(xù)10分鐘。用RIPA緩沖液洗滌珠子兩次。加入30μ1/個樣品的負(fù)載蛋白質(zhì)的染料(3xLaemmli，5%SDS)，將樣品在水浴中煮沸5分鐘。用SDS-PAGE在8.5%的凝膠上分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移到氯丙嗪膜(Schleicher&Schuell)上，用放射自顯影顯像。將組蛋白的磷酸化和PKC底物肽的磷酸化用作PKC活性的對照。體內(nèi)切開創(chuàng)傷的產(chǎn)生和炎癥的誘導(dǎo)在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。其它技術(shù)應(yīng)用公知的標(biāo)準(zhǔn)方案，例如描述于Sambrook等，MolecularCloning=ALaboratoryManual(第3版，2001)中的那些進(jìn)行其它技術(shù)例如蛋白質(zhì)印記等。除非另外指出，在實施例和附圖中的PKCa抑制劑是豆蔻?；脑赟EQIDNO=I中所示的肽。類似地，除非另外指出，胰島素是人重組胰島素，并且被稱為“胰島素”、“USP胰島素”或“InsUSP”。實施例1進(jìn)行了以下試驗，以應(yīng)用在各種制劑中制備的胰島素(10_6M;0.1單位/ml)和PKCa抑制劑(Myr-假底物PKCα肽，1μΜ)來確定體外創(chuàng)傷愈合的效果。首先，分離并培養(yǎng)鼠角質(zhì)化細(xì)胞。簡而言之，根據(jù)Alt等人2004；Li等人1996，從新生皮膚上分離原代角質(zhì)化細(xì)胞。在含有經(jīng)8%Chelex(Chelex-100，BioRad)處理的胎牛血清的Eagle’s最小必需培養(yǎng)基(EMEM)中培養(yǎng)角質(zhì)化細(xì)胞。為了維持增殖的基底細(xì)胞的表型，將最終的Ca2+濃度調(diào)節(jié)為0.05mM。5天后，使匯合的角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行體外劃傷測試并隨后愈合傷口。創(chuàng)傷形成后，將在各種制劑中的胰島素+PKCa抑制劑加入細(xì)胞培養(yǎng)物中制劑ADulbecco磷酸緩沖鹽水(DPBS-)；制劑B含有磷酸鹽、鉀、鈣和鎂的磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)；制劑C三羥甲基氨基乙烷(CASNo.[77-86-1])以及含有三羥甲基氨基乙烷(CASNo.[77-86-1])和KCl0.4mg/ml的制劑D。在約7.2的pH下提供制劑，并且其可包含用來維持給定滲透壓所需的其它組分，例如鹽等。隨后是創(chuàng)傷閉合。在處理24小時后，與未處理的對照相比，僅有用在制劑A中的胰島素+PKCa抑制劑處理的培養(yǎng)物顯示出創(chuàng)傷閉合。這一試驗以一式三份進(jìn)行。代表性的細(xì)胞培養(yǎng)皿被顯示于圖IA中。圖IB顯示了在處理24小時后以閉合百分?jǐn)?shù)表示的創(chuàng)傷閉合。實施例2進(jìn)行了以下試驗以進(jìn)一步評估由在各種制劑中制備的胰島素+PKCa抑制劑介導(dǎo)的創(chuàng)傷閉合。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于傷口上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的胰島素(ΙΟ—Μ；0.1單位/ml)；假底物PKCα肽，lyM(PKCa抑制劑)；或胰島素+PKCα抑制劑(1μMMyr-假底物PKCα肽和胰島素0.1單位)治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，并通過檢查創(chuàng)傷的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)來評估愈合創(chuàng)傷的百分比。以愈合創(chuàng)傷相對于每組創(chuàng)傷總數(shù)的百分?jǐn)?shù)形式顯示結(jié)果。與在制劑B和制劑C中的創(chuàng)傷邊緣閉合相比，通過在制劑A中施用的胰島素+PKCa抑制劑的治療顯著地誘導(dǎo)了創(chuàng)傷的完全愈合。對于所有制劑，相對于僅單獨用制劑治療的對照組，單獨用胰島素或假底物肽治療沒有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。結(jié)果顯示于圖2Α中。治療7天后創(chuàng)傷的代表性照片被提供于圖2Β中。實施例3進(jìn)行了以下試驗以評估假底物PKCα肽(PKCα抑制劑)的抗炎效果。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于傷口上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的ΙμΜMyr-假底物PKCα肽治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，并進(jìn)行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)。當(dāng)以下3個參數(shù)中的至少2個存在于皮膚創(chuàng)傷缺口時，則認(rèn)為炎癥負(fù)擔(dān)是嚴(yán)重的(1)在創(chuàng)傷區(qū)域形成膿腫；(2)過度的白細(xì)胞增多(在200倍的固定視野中>100個細(xì)胞)；(3)在血管中高的WBC/RBC比，其中在固定視野(x200)中顯示在血管內(nèi)>20%的WBC含量。以具有嚴(yán)重炎癥的創(chuàng)傷相對于該組中創(chuàng)傷數(shù)的百分?jǐn)?shù)形式概述和展示結(jié)果。如圖3中所示，僅當(dāng)在制劑A中施用假底物PKCα肽時，注意到嚴(yán)重炎癥的顯著減少。當(dāng)在制劑B或制劑C中施用治療時，沒有觀察到炎癥負(fù)擔(dān)的減少。實施例4進(jìn)行了以下試驗以評估藥物組合物對肉芽組織形成的效果。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于傷口上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的ΙμΜMyr-假底物PKCα肽和0.1單位/ml的胰島素治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法固定并在H&E染色后以組織化學(xué)方式進(jìn)行評估。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并且根據(jù)在創(chuàng)傷床處所形成的肉芽組織占總創(chuàng)傷面積的百分?jǐn)?shù)來打分。當(dāng)用胰島素+PKCα抑制劑治療時，僅每天用在制劑A中的胰島素+PKCα抑制劑治療的創(chuàng)傷顯示出與對照和制劑B及制劑C治療的組相比的肉芽組織形成的顯著增力口。結(jié)果被顯示于圖4中。實施例5進(jìn)行了以下實驗以確定制劑的含量是否影響假底物PKCα肽抑制PKCα活性的能力。如上所述那樣分離并培養(yǎng)鼠角質(zhì)化細(xì)胞。5天后，用PKCα重組腺病毒感染匯合的角質(zhì)化細(xì)胞。如Alt等人2001；Alt等人2004；Gartsbein等人2006描述的那樣構(gòu)建重組的腺病毒載體。用含有PKCa重組腺病毒的上清夜感染角質(zhì)化細(xì)胞培養(yǎng)物1小時。然后用MEM洗滌所述培養(yǎng)物兩次并重新培養(yǎng)。感染后十小時，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無血清的低Ca2+的MEM中24小時。感染后24小時，用在上述各種制劑(制劑A和B)中的PKCα抑制劑(Myr-假底物PKCα肽，ιμΜ)處理細(xì)胞15分鐘。然后對細(xì)胞提取物進(jìn)行PKC活性分析。首先，將原代角質(zhì)化細(xì)胞收集在500μ1Triton裂解緩沖液(在IxPBS中的1%TritonX-100、10μg/ml抑肽酶和亮肽素、2μg/ml胃蛋白酶抑制劑、ImMPMSFUmMEDTA,200μMNa2VO4UOmMNaF)中。然后在4°C培育胞溶產(chǎn)物30分鐘，使其在4°C以16，OOOxg旋轉(zhuǎn)30分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移至新鮮試管中。用5μg/個樣品的抗α6/GoH3(PharMingen)和30μ1/個樣品的蛋白A/G-Plus瓊脂糖漿(SantaCruz)在4°C對細(xì)胞裂解物進(jìn)行免疫沉淀過夜。用RIPA緩沖液洗滌珠子一次，用50mMTris/HClpH7.5洗滌兩次。向每個檢測中加入35μ1反應(yīng)緩沖液(ImMCaCl2,20mMMgCl2、50mMTris·HClρΗ7·5)。對于每個檢測，向漿中加入5.5μ1/個檢測的含有DMSO或IOmMTPA的磷脂囊泡懸浮液，以及標(biāo)準(zhǔn)化量的特異性PKC同工酶。通過加入10μ1/個檢測的125mMATP(1.25μCi/個檢測[y-32P]ATP,Amersham)使反應(yīng)開始，讓其在30°C持續(xù)10分鐘。然后用RIPA緩沖液洗滌珠子兩次。加入30μ1/個樣品的負(fù)載蛋白的染料(3xLaemmli,5%SDS)，將樣品在水浴中煮沸5分鐘。通過SDS-PAGE在8.5%的凝膠上分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移到氯丙嗪膜(Schleicher&Schuell)上，并且通過放射自顯影顯像。將組蛋白的磷酸化和PKC底物肽的磷酸化用作PKC活性的陽性對照。應(yīng)用SignaTECT蛋白質(zhì)激酶C分析系統(tǒng)(Promega，Madison，WI，USA)，根據(jù)制造商的說明書測量特異性的PKC活性。在這些研究中，應(yīng)用PKCd假底物作為底物。僅有在制劑A中的PKCα抑制劑能相對于對照制劑和未處理的細(xì)胞培養(yǎng)板顯著地抑制過表達(dá)細(xì)胞中的PKCa活性。一式兩份地進(jìn)行試驗。將結(jié)果以PKCa活性相對于過表達(dá)PKCα的對照細(xì)胞中PKCa活性的減少百分?jǐn)?shù)形式顯示于圖5中。實施例6進(jìn)行了進(jìn)一步試驗以體外評估由在各種制劑中的胰島素介導(dǎo)的創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖。如上所述那樣分離并培養(yǎng)鼠角質(zhì)化細(xì)胞。5天后，使匯合的角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行體外劃傷測試以跟蹤創(chuàng)傷愈合。創(chuàng)傷形成后，將在上述各種制劑(制劑C和D)中的胰島素(胰島素ΙΟ—ΜΑ.1單位/ml)加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。跟蹤創(chuàng)傷閉合48小時。一式三份地進(jìn)行這一試驗。代表性的細(xì)胞培養(yǎng)皿顯示于圖6A中。在圖6B中，以處理48小時后閉合的百分?jǐn)?shù)形式表示創(chuàng)傷閉合。然后，應(yīng)用胸苷摻入評估所培養(yǎng)的創(chuàng)傷中的細(xì)胞的增殖(圖6C)。在6孔板中通過[3H]胸苷摻入測定細(xì)胞增殖。將細(xì)胞置于24孔板中，并用[3H]胸苷(3yCi/ml)脈沖一小時。溫育后，用PBS洗滌細(xì)胞五次，將5%TCA加入每個孔中持續(xù)1小時。然后除去溶液，將細(xì)胞溶于IMNaOH中。在液體閃爍計數(shù)器的3H窗口中對摻入細(xì)胞的標(biāo)記的胸苷進(jìn)行計數(shù)。如圖6A-C中所示，KCl的加入改變了胰島素誘導(dǎo)的創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖。實施例7評估了在培養(yǎng)基B中預(yù)溫育角質(zhì)化細(xì)胞對胰島素和胰島素+PKCa抑制劑對細(xì)胞體外增殖效果的影響。允許5天齡的、來自成年小鼠(7-10個月至2年)尾部的匯合的角質(zhì)化細(xì)胞的培養(yǎng)物在體外增殖。在MEM(培養(yǎng)基A)中5天后，將生長培養(yǎng)基更換為培養(yǎng)基B(上述的)。與培養(yǎng)基更換平行或在更換后24小時，用胰島素或胰島素+PKCa抑制劑處理細(xì)胞。用可商購的快速細(xì)胞增殖試劑盒(目錄號QIA127；Calbiochem)測量細(xì)胞的增殖率。一式六份地進(jìn)行該試驗。以占未處理的細(xì)胞(對照)的百分?jǐn)?shù)形式展示結(jié)果。正如可從圖7所看到的那樣，在培養(yǎng)基B中預(yù)溫育細(xì)胞24小時增強(qiáng)了胰島素和胰島素+PKCa抑制劑對細(xì)胞增殖的效果。實施例8A通過每天局部應(yīng)用在制劑A(結(jié)果顯示于圖8A的下圖)或制劑C(結(jié)果顯示于圖8A的上圖)中應(yīng)用的胰島素+PKCa抑制劑來治療患有慢性足潰瘍的人類患者，歷時12周。盡管在制劑A中應(yīng)用的胰島素+PKCα抑制劑顯示出在第12周前完全的閉合,在用制劑C中的胰島素+PKCa抑制劑治療的患者的潰瘍中沒有觀察到顯著的愈合。每周跟蹤患者創(chuàng)傷并應(yīng)用Visitrak(Smith&Nephew)測量。對于兩個患者的每周一次的12個測量值，顯示了創(chuàng)傷寬度和創(chuàng)傷長度的隨訪圖(下圖)。實施例8B通過局部每日應(yīng)用在制劑A(結(jié)果顯示于圖8B的左圖)或制劑C(結(jié)果顯示于圖8B的右圖)中應(yīng)用的胰島素+PKCa抑制劑來治療患有糖尿病創(chuàng)傷的人類患者，歷時60天。盡管在制劑A中應(yīng)用的胰島素+PKCα抑制劑顯示出在第60天前完全的創(chuàng)傷閉合及愈合，在用制劑C中的胰島素+PKCα抑制劑治療的創(chuàng)傷中沒有觀察到顯著的愈合。圖8Β顯示了在第0天和第60天時的創(chuàng)傷隨訪記錄。實施例9一年齡的雌性夸特馬(quarterhorse)患有冗長肉芽組織(贅肉)創(chuàng)傷，數(shù)月未治愈。用在制劑A中的胰島素+PKCα抑制劑每天治療該創(chuàng)傷，歷時3個月。這一階段后，該創(chuàng)傷完全閉合并治愈。6個月的隨訪顯示完全的組織再生。結(jié)果被顯示于圖9中。實施例10兩年齡的馬具有蹄創(chuàng)傷，被診斷為伴有骨髓炎的慢性日光性膿腫。持續(xù)幾個月的階段沒有發(fā)生這一創(chuàng)傷的愈合。通過將該組合物直接應(yīng)用于該創(chuàng)傷持續(xù)30分鐘，用在制劑A中的胰島素+PKCa抑制劑每天進(jìn)行治療。如圖10中所示，在一個月的治療內(nèi)，該創(chuàng)傷大小顯著減小，在兩個月內(nèi)，該創(chuàng)傷完全閉合并治愈。實施例11使用常規(guī)治療來治療由于經(jīng)常的舔(肢端舔)而在其爪子上患有創(chuàng)傷的狗，歷時幾個月而未任何愈合。每天應(yīng)用在制劑A中的胰島素+PKCα抑制劑進(jìn)行治療，該創(chuàng)傷在2個月內(nèi)完全閉合并治愈。在治療3.5個月后，觀察到完全的毛皮再生。結(jié)果被顯示在圖11中。實施例12研究了在制劑A中制備的四種胰島素類似物以確定胰島素是否能單獨促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接置于傷口上的在制劑A(上述)中的0.1單位/ml的各種胰島素類似物治療創(chuàng)傷。所研究的胰島素類似物是賴脯胰島素(HumL)、天冬胰島素(Novo)、甘精胰島素(LANTUS)和優(yōu)泌林!^。7天后，切下創(chuàng)傷，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。通過測量表皮基底層形成和肉芽組織形成而獨立地評估創(chuàng)傷愈合的百分?jǐn)?shù)。通過應(yīng)用角蛋白14染色以檢測表皮基底層形成，從而評估表皮閉合。展示出完全的表皮重建的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并根據(jù)在創(chuàng)傷床處所形成的肉芽組織在總創(chuàng)傷面積中所占的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行打分。展示出>70%肉芽組織形成的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。結(jié)果表明，在制劑A中單獨的胰島素類似物相對于對照增加了創(chuàng)傷愈合及創(chuàng)傷閉合。結(jié)果顯示于圖16中。在圖16中，通過商標(biāo)名的縮寫稱呼胰島素類似物“HumL”是賴脯胰島素、“Novo”是天冬胰島素、“Lantus”是甘精胰島素，以及“HumR”是優(yōu)泌林⑧R。實施例13在如圖17中所指示的那樣，在用正常重組人胰島素和USP胰島素PKCα假底物抑制肽治療后，通過評估肉芽組織形成來測量創(chuàng)傷愈合，從而鑒定協(xié)同作用。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接置于創(chuàng)傷上的如圖17中指示的在制劑A(上述)中的PKCa假底物抑制肽(1μg/ml)或0.1單位/ml的常規(guī)重組人胰島素、USP胰島素和PKCa假底物抑制肽(1μg/ml)治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并根據(jù)所形成的肉芽組織在創(chuàng)傷床的總創(chuàng)傷面積中所占的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行打分。展示出>70%肉芽組織形成的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。當(dāng)與對照創(chuàng)傷或與單獨給藥每一種化合物比較時，結(jié)果表明與PKCα假底物抑制肽組合的USP胰島素產(chǎn)生了與常規(guī)人胰島素+PKCd假底物抑制肽類似的對創(chuàng)傷愈合的協(xié)同作用。這一數(shù)據(jù)指示胰島素類似物和PKCα假底物抑制肽的組合可能有助于促進(jìn)肉芽組織的形成和治療創(chuàng)傷。結(jié)果顯示于圖17中。在圖17中，分別通過縮寫“HumR”和“InsUSP”來表示常規(guī)重組人胰島素和USP胰島素。PKCd假底物抑制肽被稱為“P印”。實施例14測量了在用胰島素類似物、重組人胰島素和PKCa假底物抑制肽治療后的炎癥，以確定這些治療對炎癥的效果。在C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的皮膚創(chuàng)傷部位測量嚴(yán)重炎癥水平。如上所述那樣通過切開制備創(chuàng)傷。如圖18中所指示的那樣，每天用在制劑A中的PKCa假底物抑制肽(1μg/ml)、0.1單位/ml的重組人胰島素、或0.1單位/ml的賴脯胰島素進(jìn)行治療。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法制備乳液，并用紗布繃帶(其作為藥物流出支架起作用)遞送至皮膚。7天后，切下皮膚組織，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。應(yīng)用以下參數(shù)評估嚴(yán)重炎癥(如上所述)(1)膿腫形成；(2)過度的白細(xì)胞增多(在200倍的固定視野中>100個細(xì)胞)；(3)在血管中高的WBC/RBC比，其中在固定視野(x200)中顯示在血管內(nèi)>20%的WBC含量。通過合并根據(jù)對每一標(biāo)本觀察到的上述參數(shù)的每一個所記錄的數(shù)據(jù)來確定嚴(yán)重炎癥的總百分?jǐn)?shù)。當(dāng)上述3個參數(shù)中的至少2個存在于創(chuàng)傷缺口處時，則認(rèn)為炎癥負(fù)擔(dān)是嚴(yán)重的。結(jié)果證實，當(dāng)與制劑A中的PKCa抑制肽組合時，與對照相比，胰島素類似物和重組人胰島素協(xié)同地促進(jìn)了嚴(yán)重發(fā)炎的皮膚中炎癥反應(yīng)的減少。這一數(shù)據(jù)指示可應(yīng)用圖18中顯示的治療來治療皮膚的炎癥疾病，例如由炎性皮膚疾病引起的炎癥。這一數(shù)據(jù)還指示乳液制劑和藥物流出支架例如紗布繃帶可用于遞送本發(fā)明公開的藥物組合物。結(jié)果被描繪在圖18中。在圖18中，分別通過縮寫“HumR”和“HumL”來表示常規(guī)重組人胰島素和賴脯胰島素。PKCa假底物抑制肽被稱為“P印”。實施例15在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中溫育角質(zhì)化細(xì)胞以及使用鼠內(nèi)臟脂肪素和L-α-磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽(L-α)(Calbiochem；目錄號=524615)治療對角蛋白1表達(dá)的影響。如上所述那樣，在培養(yǎng)基A(MEM)中維持從成年小鼠(7_10月至2年)尾部分離的原代皮膚角質(zhì)化細(xì)胞。在(培養(yǎng)基A)中5天后，將一半的培養(yǎng)板中的生長培養(yǎng)基更換為培養(yǎng)基B(如上述)。隨后將內(nèi)臟脂肪素或L-α單個地加入到在培養(yǎng)基A(圖19A)中培養(yǎng)的細(xì)胞以及在培養(yǎng)基B(圖19B)中培養(yǎng)的細(xì)胞中，如圖19所示。內(nèi)臟脂肪素在培養(yǎng)基中的終濃度是0.0001μg/ml內(nèi)臟脂肪素。在培養(yǎng)基中L-α的終濃度是lOOng/ml。如上所述那樣，通過將鈣從0.05mM升高至0.12mM而誘導(dǎo)細(xì)胞分化。在分化二十四(24)小時后，收集細(xì)胞并進(jìn)行蛋白質(zhì)印記分析。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印記技術(shù)使用角蛋白1的特異性抗體評估角蛋白1的表達(dá)。然后應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)密度方法量化角蛋白1的表達(dá)。角蛋白1是棘分化標(biāo)記。在角質(zhì)化細(xì)胞中角蛋白1的表達(dá)與表皮角質(zhì)化細(xì)胞有絲分裂活性的喪失相關(guān)，并且被限制在終端分化的中間階段。減少的角質(zhì)化細(xì)胞分化與角質(zhì)化細(xì)胞遷移及增殖相關(guān)，并且因此與表皮形成相關(guān)聯(lián)。結(jié)果指示，在培養(yǎng)基A中用內(nèi)臟脂肪素和L-α處理后，角蛋白1的表達(dá)相對于對照樣本下降了(圖19Α)。相反，在培養(yǎng)基B中培養(yǎng)的角質(zhì)化細(xì)胞的角蛋白1的表達(dá)沒有受到內(nèi)臟脂肪素或L-α處理的顯著影響(圖19B)。一并考慮，這些結(jié)果指示，當(dāng)在培養(yǎng)基A中提供時，胰島素類似物例如內(nèi)臟脂肪素或L-α能夠抑制角蛋白分化并促進(jìn)表皮形成。附圖詳述S1應(yīng)用在各種制劑中制備的胰島素+PKCa抑制劑的體外創(chuàng)傷愈合的效力。對5天齡的、匯合的角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行體外劃傷測試并檢查創(chuàng)傷愈合。創(chuàng)傷形成后，將在上述各種制劑(制劑A-C)中的胰島素和PKCa抑制劑(胰島素10_6M；0.1單位/ml),Myr-假底物PKCα肽，1μΜ)加入到細(xì)胞培養(yǎng)物中，并跟蹤創(chuàng)傷閉合。在處理24小時后，僅有用在制劑A中提供的胰島素和PKCα抑制劑處理的細(xì)胞相對于未處理的對照顯示出創(chuàng)傷閉合。這一試驗以一式三份進(jìn)行。圖IA顯示了代表性的細(xì)胞培養(yǎng)板的照片。圖IB顯示了處理24小時后的閉合百分?jǐn)?shù)(ρ<0.05)。圖2只有在制劑A中，胰島素+PKCα抑制劑促進(jìn)顯著的創(chuàng)傷閉合。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于傷口上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的胰島素(10_6M;0.1單位/ml)；PKCα抑制劑(假底物PKCα肽，1μΜ)；或胰島素+PKCα抑制劑(1μMMyr-假底物PKCα肽和胰島素0.1單位)治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，并通過創(chuàng)傷的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)評估愈合創(chuàng)傷的百分比。在圖2Α中，以愈合創(chuàng)傷占每一組的創(chuàng)傷總數(shù)的百分?jǐn)?shù)顯示結(jié)果。通過在制劑A中施用的胰島素+PKCα抑制劑的治療顯著地誘導(dǎo)了創(chuàng)傷的完全愈合。相反，在制劑B和制劑C中僅觀察到創(chuàng)傷邊緣閉合。對于所有制劑條件，與僅用各種制劑治療的對照組相比，單獨用胰島素或假底物肽治療沒有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的效力。圖2Β顯示了來自代表性的創(chuàng)傷活組織的照片。圖3僅當(dāng)在制劑A中施用時，PKCa抑制劑才減少創(chuàng)傷床處的嚴(yán)重炎癥負(fù)擔(dān)。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于傷口上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的PKCa抑制劑(1μM假底物PKCa肽)治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，并進(jìn)行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)。當(dāng)以下3個參數(shù)中的至少2個存在于皮膚創(chuàng)傷缺口處時，則認(rèn)為炎癥負(fù)擔(dān)是嚴(yán)重的(1)在創(chuàng)傷區(qū)域形成膿腫；(2)過度的白細(xì)胞增多(在200倍的固定視野中>100個細(xì)胞)；(3)在血管中高的WBC/RBC比，其中在固定視野(χ200)中顯示在血管內(nèi)>20%的WBC含量。以具有嚴(yán)重炎癥的創(chuàng)傷在該組中每總創(chuàng)傷數(shù)中所占的百分?jǐn)?shù)概括和展示結(jié)果。如柱狀圖所示，僅當(dāng)在制劑A中施用PKCa抑制劑時，才觀察到嚴(yán)重炎癥的顯著減少。當(dāng)在制劑B或制劑C中應(yīng)用治療時，沒有觀察到炎癥負(fù)擔(dān)的減少。S4當(dāng)在制劑A中治療時，胰島素+PKCα抑制劑誘導(dǎo)肉芽組織形成。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接施用于創(chuàng)傷上的在上述各種制劑(制劑A-C)中的胰島素和PKCa抑制劑(1μM假底物PKCα肽和0.1單位/ml胰島素)治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織化學(xué)評估。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并且根據(jù)所形成的肉芽組織相對于創(chuàng)傷床處的總創(chuàng)傷面積的百分?jǐn)?shù)來打分。僅每天用在制劑A中的胰島素和PKCa抑制劑治療的創(chuàng)傷顯示出與對照和制劑B及制劑C治療組相比的肉芽組織形成的顯著增加。S5制劑條件影響假底物PKCα肽抑制PKCα活性的能力。用編碼PKCα的重組腺病毒感染5天齡的、匯合的角質(zhì)化細(xì)胞的培養(yǎng)物。在感染后24小時，用在如圖5中所指示的制劑(制劑A和B)中的PKCa抑制劑(Myr-假底物PKCa肽，ΙμΜ)處理細(xì)胞15分鐘。處理后，如上所述那樣裂解細(xì)胞并進(jìn)行PKCα活性分析。僅有在制劑A中提供的PKCa抑制劑能相對于對照顯著地抑制過表達(dá)細(xì)胞中的PKCα活性。一式兩份地進(jìn)行試驗。以相對于過表達(dá)PKCα的對照細(xì)胞的PKCα活性的減少的百分?jǐn)?shù)形式顯示結(jié)果。圖6應(yīng)用胰島素的體外創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖效力依賴于制劑成分。對5天齡的、匯合的角質(zhì)化細(xì)胞的培養(yǎng)物進(jìn)行體外劃傷測試并檢查創(chuàng)傷愈合。創(chuàng)傷形成后，將在上述各種制劑(制劑C和D)中的胰島素(1(Γ6Μ，0.1單位/ml)加入到細(xì)胞培養(yǎng)物中。跟蹤創(chuàng)傷閉合48小時。一式三份地進(jìn)行這一試驗。(A)顯示了代表性的細(xì)胞培養(yǎng)皿的照片。(B)以處理48小時后閉合的百分?jǐn)?shù)形式表示創(chuàng)傷閉合。(C)應(yīng)用上述的胸苷摻入增殖測試法在培養(yǎng)的創(chuàng)傷細(xì)胞中進(jìn)行增殖測試。當(dāng)被提供在含有KCl的制劑D中時，胰島素本身誘導(dǎo)了部分的創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖。正如圖6A-C中所見，制劑C抑制了胰島素誘導(dǎo)的創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖。圖7在培養(yǎng)基B中預(yù)溫育增強(qiáng)了胰島素和胰島素+PKCα抑制劑對細(xì)胞體外增殖的效力。應(yīng)用可商購的快速細(xì)胞增殖試劑盒(目錄號QIA127；Calbiochem)，對從成年小鼠(7-10個約至2年)的尾制備的5天齡的、匯合的角質(zhì)化細(xì)胞的培養(yǎng)物進(jìn)行體外增殖測試。在ΜΕΜ(培養(yǎng)基Α)中5天后，如上所述那樣將生長培養(yǎng)基更換為培養(yǎng)基B。與培養(yǎng)基更換平行或在更換后24小時，用胰島素或胰島素+PKCα抑制劑處理細(xì)胞。一式六份地進(jìn)行該試驗。以占未處理細(xì)胞(對照)的百分?jǐn)?shù)形式展示結(jié)果。如可從圖7中所看到的那樣，在培養(yǎng)基B中預(yù)溫育細(xì)胞24小時增強(qiáng)了胰島素和胰島素+PKCα抑制劑對細(xì)胞增殖的效力。圖8在制劑A而非在制劑C中制備的胰島素+PKCα抑制劑誘導(dǎo)慢性、非愈合創(chuàng)傷的創(chuàng)傷愈合。通過局部應(yīng)用在制劑A(圖8Α，下圖)或制劑C(圖8Α，上圖)中應(yīng)用的胰島素+PKCa抑制劑來治療患有慢性糖尿病相關(guān)的潰瘍(例如糖尿病相關(guān)的足或手潰瘍)患者，歷時12周。在制劑A中應(yīng)用的胰島素+PKCα抑制劑顯示出在12周完全的閉合，在用制劑C中的胰島素+PKCa抑制劑治療的患者的潰瘍中沒有觀察到顯著的愈合。每周跟蹤患者創(chuàng)傷并應(yīng)用Visitrak(Smith&N印hew)測量。對于兩個患者每周一次的12次測量，顯示了創(chuàng)傷寬度和創(chuàng)傷長度的隨訪圖(圖8A中的右圖)。通過每天局部應(yīng)用在制劑A(圖8B，右圖)或制劑C(8B，左圖)中應(yīng)用的胰島素+PKCa抑制劑來治療患有糖尿病創(chuàng)傷的人類患者，歷時60天。在制劑A中應(yīng)用的胰島素+PKCa抑制劑顯示出到第60天止完全的愈合及創(chuàng)傷閉合。在用制劑C中的胰島素+PKCa抑制劑治療的創(chuàng)傷中沒有觀察到顯著的愈合。圖8B顯示了在第0天和第60天時的創(chuàng)傷隨訪照片記錄。圖9在制劑A中制備的胰島素+PKCα抑制劑誘導(dǎo)馬的贅肉慢性創(chuàng)傷愈合?！挲g的雌性夸特馬患有冗長肉芽組織(贅肉)創(chuàng)傷，數(shù)月未治愈。用在制劑A中的胰島素+PKCa抑制劑每天治療該創(chuàng)傷，歷時3個月。這一階段后，該創(chuàng)傷完全閉合并治愈。6個月的隨訪觀察到完全的組織再生。圖10在制劑A中制備的胰島素+PKCα治愈慢性日光性膿腫和骨髓炎。兩年齡的馬具有蹄創(chuàng)傷，被診斷為伴有骨髓炎的慢性日光性膿腫，數(shù)月未愈合。通過將該組合物直接應(yīng)用于該創(chuàng)傷30分鐘來進(jìn)行用在制劑A中的胰島素+PKCα抑制劑進(jìn)行的每日治療。如圖10中所示，在治療一個月內(nèi)，該創(chuàng)傷大小顯著減小，并且在兩個月內(nèi)該創(chuàng)傷完全閉合并治愈。圖11在制劑A中制備的胰島素+PKCα治愈由自創(chuàng)傷(肢端舔)弓丨起的慢性創(chuàng)傷。使用常規(guī)方法來治療由于不停的舔(肢端舔)而在其爪子上患有創(chuàng)傷的狗，歷時數(shù)月而未愈合。每日采用局部應(yīng)用的在制劑A中的胰島素+PKCa抑制劑對該創(chuàng)傷進(jìn)行治療。該創(chuàng)傷在2個月內(nèi)完全閉合并治愈。在3.5個月內(nèi)，觀察到完全的毛皮再生。圖12以商標(biāo)HUMALOG為人所知的賴脯胰島素(rDNA起源)的示意圖。顯示了賴脯胰島素的α鏈(SEQIDNO57)和β鏈(SEQIDNO58)各自的氨基酸序列。圖13以商標(biāo)NOVOLOG為人所知的人胰島素類似物天冬胰島素(rDNA起源)的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。顯示了天冬胰島素的α鏈(SEQIDNO57)和β鏈(SEQIDNO59)各自的氨基酸序列。圖14以商標(biāo)LANTUS為人所知的人類胰島素類似物甘精胰島素(rDNA起源)的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。顯示了LANTUS的α鏈(SEQIDNO60)和β鏈(SEQIDNO61)各自的氨基酸序列。圖15以商標(biāo)優(yōu)泌林R和NOVOLINR為人所知的常規(guī)重組人胰島素的一級結(jié)構(gòu)的示意圖。顯示了優(yōu)泌林R的α鏈(SEQIDNO57)和β鏈(SEQIDNO62)各自的氨基酸序列。圖16在制劑A中提供的各種胰島素類似物以類似方式影響創(chuàng)傷愈合。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接置于傷口上的在制劑A(上述)中的0.1單位/ml圖6中所指示的各種胰島素類似物治療創(chuàng)傷。所研究的胰島素類似物是賴脯胰島素(“HumL”)、天冬胰島素(“Novo”)、甘精胰島素(“LANTUS”)和重組人胰島素(“HumR”)。7天后，切下創(chuàng)傷，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。通過測量表皮基底層形成和肉芽組織形成來評估創(chuàng)傷愈合的百分?jǐn)?shù)。通過應(yīng)用角蛋白14染色以檢測表皮基底層形成，從而評估表皮閉合。展示出完全的表皮重建的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并根據(jù)所形成的肉芽組織相對于創(chuàng)傷床處的總創(chuàng)傷面積的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行打分。展示出>70%肉芽組織形成的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。通過商標(biāo)名的縮寫來鑒別胰島素類似物“HumL”是賴脯胰島素、“Novo”是天冬胰島素、“Lantus”是甘精胰島素，以及“HumR”是優(yōu)泌林R。圖17與PKCa抑制肽組合的USP胰島素以與優(yōu)泌林R+PKCa抑制肽類似的方式促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。在麻醉的C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)的上背上進(jìn)行全厚(20mm長)皮膚切口。切開后，每天用直接置于創(chuàng)傷上的在制劑A(上述)中的PKCa假底物抑制肽(lyg/ml)或0.1單位/ml的優(yōu)泌林R、或USP胰島素治療創(chuàng)傷。7天后，切下創(chuàng)傷，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。應(yīng)用H&E染色評估肉芽組織形成，并根據(jù)所形成的肉芽組織相對于創(chuàng)傷床處的總創(chuàng)傷面積的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行打分。展示出>70%肉芽組織形成的創(chuàng)傷被認(rèn)為是愈合的。分別通過縮寫“HumR”和“InsUSP"來鑒別常規(guī)的重組人胰島素和USP胰島素。PKCa假底物抑制肽被稱為“ρ印”。圖18與PKCa抑制肽組合的胰島素類似物協(xié)同地促進(jìn)嚴(yán)重發(fā)炎皮膚中炎癥反應(yīng)的減少。測量在C57BL/6J小鼠(每組6只小鼠)上的皮膚創(chuàng)傷部位的嚴(yán)重炎癥水平。如上所述那樣，通過切開制備創(chuàng)傷。如圖19中所示那樣，每天用在制劑A(上述)中的PKCa假底物抑制肽(1μg/ml)、0.1單位/ml的優(yōu)泌林R或賴脯胰島素進(jìn)行治療。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法制備乳液，并通過從紗布繃帶(其作為藥物流出支架起作用)遞送而置于皮膚上。7天后，切下皮膚組織，固定并在H&E染色后進(jìn)行組織學(xué)評估。應(yīng)用以下參數(shù)評估嚴(yán)重的炎癥(1)膿腫形成；(2)過度的白細(xì)胞增多(在200倍的固定視野中>100個細(xì)胞)；(3)在血管中高的WBC/RBC比，其中在固定視野(x200)中顯示在血管內(nèi)>20%的WBC含量。當(dāng)上述3個參數(shù)中的至少2個存在于創(chuàng)傷缺口處時，則認(rèn)為炎癥負(fù)擔(dān)是嚴(yán)重的。通過合并根據(jù)對每一標(biāo)本觀察到的上述參數(shù)的每一個所記錄的數(shù)據(jù)來確定嚴(yán)重炎癥的總百分?jǐn)?shù)。分別通過縮寫“HumR”和“HumL”來鑒別優(yōu)泌林R和賴脯胰島素。PKCa假底物抑制肽被稱為“pep”。圖19在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中用內(nèi)臟脂肪素和L-α處理的老角質(zhì)化細(xì)胞中角蛋白1的表達(dá)。在培養(yǎng)基A(MEM)中3維持從成年小鼠(7_10月至2年)的尾制備的原代皮膚角質(zhì)化細(xì)胞。在培養(yǎng)基A中5天后，將一半培養(yǎng)板中的生長培養(yǎng)基更換為培養(yǎng)基B(如上述)。隨后將內(nèi)臟脂肪素或L-a加入到在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中培養(yǎng)的細(xì)胞中。然后通過將培養(yǎng)基中鈣的水平從0.05mM升高至0.12mM來誘導(dǎo)細(xì)胞分化。在誘導(dǎo)分化二十四(24)小時后，收集細(xì)胞并進(jìn)行蛋白質(zhì)印記分析。使用商業(yè)上可獲得的角蛋白1特異性抗體來評估細(xì)胞裂解物中角蛋白1的表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印記和密度測量技術(shù)評估角蛋白1的表達(dá)。本文中引用的所有參考文獻(xiàn)(例如，雜志文章、專利文件以及登錄號)均通過引用此全文并入本文。參考t獻(xiàn)AdamsJC禾口WattFM(1990)Changesinkeratinocyteadhesionduringterminaldifferentiation:reductioninfibronectinbindingprecedesalpha5beta1integrinlossfromthecellsurface.Cell63:425—435·AltA，GartsbeinM，OhbaM，KurokiT，禾口TennenbaumT(2004)Differentialregulationofalpha6beta4integrinbyPKCisoformsinmurineskinkeratinocytes.BiochemBiophysResCommun314:17—23.AltA，OhbaM，LiL,GartsbeinM，BelangerA，DenningMF,KurokiT，YuspaSH,禾口TennenbaumT(2001)ProteinkinaseCdelta-mediatedphosphorylationofalpha6beta4isassociatedwithreducedintegrinlocalizationtothehemidesmosomeanddecreasedkeratinocyteattachment.CancerRes61:4591_4598.AusubelFM^A(1989)CurrentProtocolsinMolecularBiology,WileyInterscience.AzziA，BoscoboinikDJfIHenseyC(1992)TheproteinkinaseCfamily.EurJBiochem208:547_557.BellE，SherS,HullBiMerrillC，RosenS，ChamsonA，AsselineauDiDubertretL，CoulombB，LapiereC，NusgensB，禾口NeveuxY(1983)Thereconstitutionoflivingskin.JInvestDermatol81:2s_10s·BlumbergPM(1991)ComplexitiesoftheproteinkinaseCpathway.MolCarcinog4:339_344.BoyceST禾口HamRG(1983)Calcium-regulateddifferentiationofnormalhumanepidermalkeratinocytesinchemicallydefinedclonalcultureandserum-freeserialcultute.JInvestDermatol81:33s_40s·BradshawD，HillCH，NixonJS禾口WilkinsonSE(1993)TherapeuticpotentialofPKCinhibitors.AgentsActions38:135—147.BreitkreutzD，BohnertA，HerzmannE，BowdenPE,BoukampP禾口FusenigNE(1984)Differentiationspecificfunctionsinculturedandtransplantedmousekeratinocytes!environmentalinfluencesonultrastructureandkeratinexpression.Differentiation26154-169.BreitkreutzD，StarkHJ，PleinP，BaurM禾口FusenigNE(1993)Differentialmodulationofepidermalkeratinizationinimmortalized(HaCaT)andtumorigeniehumanskinkeratinocytes(HaCaT-ras)byretinoicacidandextracellularCa2+·Differentiation54:201_217.Cadena，Gill(1993)ProteinExpressionandPurification4:177·CastagnaM，TakaiY，KabuchiK，KikkawaU禾口NishizukaY(1982)Directactivationofcalcium-activatedphospholipiddependentproteinkinasebytumor-promotingphorbolesters.JBiolChem257:7847_785LChakravarthyBR,IsaacsRJ，MorleyP，DurkinJP禾口WhitfieldJF(1995)StimulationofproteinkinaseCduringCa2+-inducedkeratinocytedifferentiation.SelectiveblockadeofMARCKSphosphorylationbycalmodulin.JBiolChem270:1362-1368.ChauhanVPS，ChauhaA，DeshmukhDs禾口BrockerhoffH(1990)LipidactivatorsofproteinkinaseC.LifeSci47:981_986.Coligan等人，CurrentProtocolsinImmunology,WileyInterscience，1991，Unit9.DeM，I禾口TheoretCL(2004)SpatialandtemporalexpressionoftypesIandIIreceptorsfortransforminggrowthfactorbetainnormalequineskinanddermalwounds.VetSurg33:70_76.DenningMF,DlugoszAA,ChengC，DempseyPJ,CoffeyRJJ,ThreadgillDW,MagnusonT禾口YuspaSH(2000)Cross-talkbetweenepidermalgrowthfactorreceptorandproteinkinaseCduringcalcium-induceddifferentiationofkeratinocytes.ExpDermatol9:192-199·DenningMF，DlugoszAA，WilliamsEK，SzallasiZ，BlumbergPM，禾口YuspaSH(1995)SpecificproteinkinaseCisozymesmediatetheinductionofkeratinocytedifferentiationmarkersbycalcium.CellGrowthDiffer6:149—157.DeucherA，EfimovaT，禾口EckertRL(2002)Calcium-dependentinvoIucrinexpressionisinverselyregulatedbyproteinkinaseC(PKC)alphaandPKCdeIta.JBiolChem277:17032-17040.DiegelmannRF禾口EvansMC(2004)Woundhealing:anoverviewofacute，fibroticanddelayedhealing.FrontBiosci9:283_9·:283_289·EckertRL(1989)Structure,function，anddifferentiationofthekeratinocyte.PhysiolRev69:1316-1346.EichholtzT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lantProc12:114-122.權(quán)利要求組合物，其包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。3.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。6.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。7.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。8.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO:25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基，并且在其羧基末端處被酰胺化。9.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基。10.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。11.組合物，其包含胰島素、由SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列組成的并且在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢碾囊约鞍?.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的不含Ca2+和Mg2+陽離子的水性藥學(xué)上可接受的載體。12.權(quán)利要求11的組合物，其包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約liiM至約lOOiiM的所述肽。13.權(quán)利要求12的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。14.組合物，其包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑、不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體以及藥物流出支架。15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述的藥物流出支架包含多孔固體。16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。17.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。18.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。19.權(quán)利要求18的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。20.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。21.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDN0:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDN0:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。22.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN025中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢⑶以谄漪然┒颂幈货０坊?23.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN01中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?。24.權(quán)利要求23的組合物，其包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約liiM至約100iiM的所述肽。25.權(quán)利要求23的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。26.權(quán)利要求14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25的組合物，其中所述的藥物流出支架是海綿。27.權(quán)利要求26的組合物，其包含不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體，該藥學(xué)上可接受的載體包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04。28.由包括以下步驟的方法制得的藥物組合物a)提供8-PKC活化劑、a-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；以及b)混合所述5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體；由此制得藥物組合物。29.權(quán)利要求28的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。30.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。31.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。32.權(quán)利要求31的藥物組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。33.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)-6，7，12，13_四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。34.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5、SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDN0:17、SEQIDN0:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDN0:21、SEQIDNO:22、SEQIDN0:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO47,SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO54和SEQIDNO:55。35.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基，并且在其羧基末端處被酰胺化。36.權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?。37.權(quán)利要求36的藥物組合物，其包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約1yM至約100uM的所述肽。38.權(quán)利要求36的藥物組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。39.權(quán)利要求28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38的藥物組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。40.用于增加動物上的皮膚創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟a)提供包含8-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。43.權(quán)利要求41的方法，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。44.權(quán)利要求43的方法，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。45.權(quán)利要求41的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。46.權(quán)利要求41的方法，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種:SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。47.權(quán)利要求41的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO:25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢⑶以谄漪然┒颂幈货０坊?。48.權(quán)利要求41的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述的藥物組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約1PM至約100uM的所述肽。50.權(quán)利要求48的方法，其中所述的藥物組合物包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。51.權(quán)利要求40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50的方法，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。52.減少動物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟a)提供包含8-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。53.權(quán)利要求52的方法，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。54.權(quán)利要求53的方法，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。55.權(quán)利要求53的方法，其中所述的胰島素是由選自人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。56.權(quán)利要求55的方法，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。57.權(quán)利要求53的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲酰星形孢菌素；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2_[1_(3-二甲基氨基丙基)-1H-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。58.權(quán)利要求53的方法，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。59.權(quán)利要求52的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO:25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化。60.權(quán)利要求52的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?1.權(quán)利要求60的方法，其中所述的藥物組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約1PM至約100uM的所述肽。62.權(quán)利要求60的方法，其中所述的藥物組合物包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。63.權(quán)利要求52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62的方法，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。64.組合物，其包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。65.權(quán)利要求64的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽組成的組中的至少一種。66.權(quán)利要求64的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。67.權(quán)利要求66的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。68.權(quán)利要求64的組合物，其包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素或胰島素類似物。69.權(quán)利要求64的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素或胰島素類似物。70.權(quán)利要求64、65、66、67、68或69的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。71.組合物，其包含0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。72.權(quán)利要求71的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。73.權(quán)利要求72的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。74.權(quán)利要求71、72或73的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。75.用于增加動物上的創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟a)提供包含8-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物，其中所述的創(chuàng)傷是選自由糖尿病潰瘍創(chuàng)傷、肢端舔的創(chuàng)傷、贅肉創(chuàng)傷、外科手術(shù)創(chuàng)傷、慢性日光性膿腫創(chuàng)傷和骨髓炎創(chuàng)傷組成的組中的至少一種；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。76.權(quán)利要求75的方法，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。77.權(quán)利要求76的方法，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。78.權(quán)利要求76的方法，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。79.權(quán)利要求78的方法，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。80.權(quán)利要求76的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。81.權(quán)利要求76的方法，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。82.權(quán)利要求76的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO:25中所示氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基，并且在其羧基末端處被酰胺化.83.權(quán)利要求76的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN0:1中所示氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻酰化的氨基酸殘基。84.權(quán)利要求83的方法，其中所述的藥物組合物包含約0.0001單位/L至約0.1單位/L的胰島素和約1PM至約100uM的所述肽。85.權(quán)利要求83的方法，其中所述的藥物組合物包含0.0001單位/L的胰島素和1yM的所述肽。86.權(quán)利要求75、76、77、78、79、80、81、82、83、84或85的方法，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。87.組合物，其包含5-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。88.權(quán)利要求87的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。89.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。90.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。91.權(quán)利要求90的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。92.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1-(3-二甲基氨基丙基)-lH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。93.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。94.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN025中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化95.權(quán)利要求88的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN01中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?。96.組合物，其包含S-PKC活化劑和含有K+陽離子而不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。97.權(quán)利要求96的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。98.權(quán)利要求97的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L-a-磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽組成的組中的至少一種。99.權(quán)利要求97的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。100.權(quán)利要求99的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。101.組合物，其包含a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體。102.權(quán)利要求101的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲酰星形孢菌素；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2-[1_(3-二甲基氨基丙基)-1H-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。103.權(quán)利要求101的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDN0:5、SEQIDN0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDN0:41、SEQIDN0:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO54和SEQIDNO:55。104.權(quán)利要求101的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN025中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化.105.權(quán)利要求101的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN01中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?。106.權(quán)利要求105的組合物，其中所述的藥物組合物包含約1PM至約100uM的所述肽。107.權(quán)利要求106的組合物，其中所述的藥物組合物包含1PM的所述肽。108.權(quán)利要求101、102、103、104、105、105、106或107的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。109.減少動物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟a)提供包含a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及b)向動物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。110.權(quán)利要求109的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2_哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲酰星形孢菌素；雙吲哚基馬來酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑；2_[1_(3-二甲基氨基丙基)-1H-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。111.權(quán)利要求109的方法，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO23,SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO36,SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO53、SEQIDN0:54禾口SEQIDNO:55。112.權(quán)利要求109的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN0:25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化.113.權(quán)利要求109的方法，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDN01中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蔻?；陌被釟埢?。114.權(quán)利要求109的方法，其中所述的藥物組合物包含約1PM至約100uM的所述肽。115.權(quán)利要求114的方法，其中所述的藥物組合物包含1PM的所述肽。116.權(quán)利要求107、108、109、110、112、113、114或115的方法，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0.2g/LKC1、0.2g/L無水KH2P04、8g/LNaCl和1.15g/L無水Na2HP04的水性載體。全文摘要本公開涉及用于加速創(chuàng)傷愈合、增加皮膚創(chuàng)傷閉合以及減少皮膚創(chuàng)傷部位感染的組合物和方法。具體而言，本發(fā)明涉及包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明還涉及包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。文檔編號A61P17/02GK101835486SQ200880101239公開日2010年9月15日申請日期2008年7月30日優(yōu)先權(quán)日2007年7月30日發(fā)明者E·布雷納,I·索羅莫尼克,L·布賴曼-維克斯曼,O·萊維-哈查姆,T·滕寧鮑姆申請人:希爾洛有限公司