專利名稱：：4-嘧啶磺酰胺衍生物的制作方法4-嘧啶磺酰胺衍生物本發(fā)明關(guān)于{5-(4-溴-苯基)-6-[2-(5-溴-嘧啶-2-基氧基)-乙氧基]-嘧啶_4-基卜磺酰胺及其鹽，一種制備該化合物的方法及其在醫(yī)藥中的用途。{5-(4-溴_苯基)-6-[2-(5-溴-嘧啶_2_基氧基)-乙氧基]-嘧啶_4_基}-磺酰胺具有式II式I化合物為一種內(nèi)皮素受體抑制劑且適用為內(nèi)皮素受體拮抗劑。式I化合物為先前在W002/053557中揭示的結(jié)構(gòu)族中新成員。申請(qǐng)者現(xiàn)在吃驚的發(fā)現(xiàn)式I化合物當(dāng)與W002/053557中具體公開的結(jié)構(gòu)相近的化合物相比時(shí)，具有改良的性質(zhì)。具體而言，式I化合物雖然表現(xiàn)內(nèi)皮素受體拮抗劑活性，但相對(duì)于相應(yīng)的烷基化衍生物，在體內(nèi)表現(xiàn)更長(zhǎng)半衰期及較低清除率。此使得式I化合物特別適于長(zhǎng)效性醫(yī)藥組合物。因其有能力抑制內(nèi)皮素結(jié)合，因此式I化合物可用于治療與因內(nèi)皮素提高血管收縮、增生或發(fā)炎相關(guān)的疾病。此等疾病的實(shí)例為高血壓、肺高血壓、冠心病、心功能不全、腎及心肌缺血、腎衰竭、大腦缺血、癡呆、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥(Raynaud'ssyndrome)、指頭潰瘍及門靜脈高血壓。其亦可用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、氣囊或支架血管成形術(shù)后再狹窄、發(fā)炎、胃及十二指腸潰瘍、癌、黑素瘤、前列腺癌、前列腺肥大、勃起障礙、聽力損失、黑內(nèi)障(amaurosis)、慢性支氣管炎、哮喘、肺纖維化、革蘭氏陰性敗血病、休克、鐮刀形紅細(xì)胞貧血病、腎小球腎炎、腎絞痛、青光眼、結(jié)締組織疾病，治療及預(yù)防糖尿病并發(fā)癥、脈管或心臟手術(shù)或器官移植后的并發(fā)癥、環(huán)孢菌素治療并發(fā)癥、疼痛、高血脂及目前已知與內(nèi)皮素相關(guān)的其它疾病。式I化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽因此可作為藥物，例如用于腸內(nèi)或胃腸外給藥的醫(yī)藥組合物形式。術(shù)語(yǔ)〃醫(yī)藥上可接受的鹽〃指無(wú)毒性、無(wú)機(jī)或有機(jī)酸及/或堿加成鹽。參考〃Saltselectionforbasicdrugs"，Int.J.Pharm.(1986)，33，201-217。本發(fā)明因此首先關(guān)于式I化合物或其鹽(具體而言，醫(yī)藥上可接受的鹽)。本發(fā)明還關(guān)于式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽作為藥物。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于一種醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含作為活性成分的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽，及至少一種治療上無(wú)活性的賦形劑。此外，式I化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽可用于制備藥物，及適于治療高血壓、肺動(dòng)脈高血壓(尤其肺高動(dòng)脈壓)、冠心病、心功能不全、腎及心肌缺血、腎衰竭、大腦缺血、癡呆、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥、指頭潰瘍或門靜脈高血壓及用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、氣囊或支架血管成形術(shù)后再狹窄、發(fā)炎、胃及十二指腸潰瘍、癌、黑素瘤、前列腺癌、前列腺肥大、勃起障礙、聽力損失、黑內(nèi)障、慢性支氣管炎、哮喘、肺纖維化、革蘭氏陰性敗血病、休克、鐮刀形紅細(xì)胞貧血病、腎小球腎炎、腎絞痛、青光眼、結(jié)締組織疾病、糖尿病并發(fā)癥、脈管或心臟手術(shù)或器官移植后的并發(fā)癥、環(huán)孢菌素治療并發(fā)癥、疼痛、高血脂。更具體而言，式I化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽可用于制備藥物，且適于治療選自由高血壓、肺高血壓(包括肺動(dòng)脈高血壓)、糖尿病性動(dòng)脈病變、心力衰竭、勃起障礙及心絞痛組成的組中的疾病。根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的變體，式I化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽可用于制備藥物，且適于治療高血壓(尤其高動(dòng)脈壓)。根據(jù)本發(fā)明另一項(xiàng)特別優(yōu)選的變體，式I化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽可用于制備藥物，且適于治療肺高血壓(尤其肺高動(dòng)脈壓)。式I化合物可如W002/053557中描述或申請(qǐng)書中以下部分描述(尤其實(shí)施例)制造。醫(yī)藥組合物制法可按照本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟悉的方式進(jìn)行(參考例如Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy，21stEdition(2005)，Part5，〃PharmaceuticalMa皿facturing〃[publishedbyLippincottWilliams&Wilkins])，將所述式i化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽(任選地與其它具治療價(jià)值的物質(zhì)組合)與適宜的無(wú)毒性、無(wú)活性且治療上可兼容的固體或液態(tài)載體(如需要，可使用常用的醫(yī)藥佐藥)一起形成蓋倫劑型。式I化合物可根據(jù)本發(fā)明利用以下所述步驟制造。式I化合物制法縮寫本申請(qǐng)書及實(shí)施例全文均采用以下縮寫Ac乙?；兴詁r.寬Boc叔丁氧基羰基t-Bu叔丁基DAD二極管陣列監(jiān)測(cè)器DBU1，8-重氮雙環(huán)(5.4.0)i^—碳-7-烯DCM二氯甲烷DMAP4-二甲胺基吡啶DME1，2-二甲氧基乙烷DMFN，N-二甲基甲酰胺DMS0二甲亞砜EA乙酸乙酯ET內(nèi)皮素ether乙醚Hex己烷HV高真空條件LC液相層析法MeOH甲醇MS質(zhì)譜分析NMR核磁共振org.有機(jī)rt室溫TEA三乙胺THF四氫呋喃TLC薄層層析tK滯留時(shí)間—般制備方法式I化合物可根據(jù)下文所示一般反應(yīng)順序，采用實(shí)施例所示方法或類似方法制造。最佳反應(yīng)條件隨使用的特定反應(yīng)物或溶劑而變，但此反應(yīng)條件可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員按照常規(guī)最佳步驟確定。僅敘述一些產(chǎn)生式I化合物的合成可能性。因此得到的式I化合物(如需要)可經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方法轉(zhuǎn)化為其鹽，且尤指其醫(yī)藥上可接受的鹽。式I化合物可由式1-1化合物裂解保護(hù)基團(tuán)PG后得到其中PG代表適宜的保護(hù)基團(tuán)。適宜的保護(hù)基團(tuán)PG為例如苯甲基，其可經(jīng)例如BC13或BBr3裂解(例如在如氯仿的溶劑中)，或4-甲氧基-或2，4-二甲氧基苯甲基，其可經(jīng)例如硝酸鈰銨(例如在如乙腈與水的混合物的溶劑中)或2，3-二氯-5，6-二氰-苯醌(例如在如DCM、l，2-二氯乙烷、丙酮或甲苯的溶劑中，在水存在或不存在下)氧化裂解。由式1-2化合物與式1-3化合物反應(yīng)可制備式1-1化合物7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中^代表活性基團(tuán)，如氯或溴原子，或甲磺?；蛞一酋；?，其是在強(qiáng)堿存在下(例如LiH、NaH、CaH2等)，于溶劑中(例如THF、DMF、二噁烷等或其混合物)中進(jìn)行。有幾種式1-3化合物可通過商購(gòu)獲得，其它可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法制備。式1-2化合物制法可由式1-4化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(其中G2代表活性基團(tuán)，例如鹵原子，優(yōu)選氯)與乙二醇在堿存在下(例如叔丁醇鉀、NaH、LiH等)，在另一種溶劑(例如1，2-乙二醇二甲醚、THF、二噁烷等)存在或不存在下，尤其在1，2-乙二醇二甲醚存在下，優(yōu)選在高溫下(例如50-10(TC之間，尤其在80-10(TC之間)進(jìn)行反應(yīng)。由式1-5化合物與式1-6化合物反應(yīng)可制備式1-4化合物，其是在堿存在下進(jìn)行，例如叔丁醇鉀、TEA、乙基-二異丙基胺等，或優(yōu)選是與式1-6化合物的鹽(優(yōu)選鉀鹽)反應(yīng)，其是在溶劑中(例如匿S0、DMF、THF等或其混合物)，在另一種堿存在或不存在下，于溫度20-8(TC之間，優(yōu)選在20-4(TC之間進(jìn)行。可例如以P0C13、PC13、PC15或其混合物、或POBr3處理式I_7化合物，制備式I_5化合物其是在氯化四乙銨、三乙胺、或二甲基-或二乙基苯胺存在或不存在下，及在另一種溶劑存在或不存在下，例如氯仿、l，2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、或乙腈，在高溫下(例如60-120。C之的間)進(jìn)行?？捎墒?-8化合物與甲脒或其鹽反應(yīng)，制備式1-7化合物其中R代表烷基，優(yōu)選是甲基或乙基，其是類似文獻(xiàn)中步驟進(jìn)行(例如A.Gomtsyan等人，J.Med.Chem.(2002)，45，3639-3648;W.Neidhart等人，Chimia(1996)，50，519-524)。類似文獻(xiàn)的步驟(例如J.Lee，J.Lee，S.Y.Kim，N.A.Perry，N.E.Lewin，J.A.Ayres，P.M.Bl咖berg，Bioorg.Med.Chem.14(2006)，2022-2031)，由自商購(gòu)得到的4-溴苯基乙酸制備式1-8的2-(4-溴-苯基)-丙二酸酯?？深愃莆墨I(xiàn)方法(e.g.G.Dewynteretal.，Tetrahedron(1993)，49，65-76;S.Ghassemi，K.Fuchs，MolecularDiversity(2005)，9，295-299;J._Y.Wi畫etal.，OrganicLetters(2001)，3，2241-2243)以三步驟法由氯磺酰異氰酸酯制備式I_6磺酰胺。在第一步中，由氯磺酰異氰酸酯與叔丁醇反應(yīng)；在第二步中，與適當(dāng)胺PG_NH2反應(yīng)生成式I-6化合物的經(jīng)Boc保護(hù)的中間物。在第三步中，在酸性條件下裂解Boc-基團(tuán)，得到式I-6化合物。或者，式1-6化合物可以類似文獻(xiàn)中所示步驟(例如R.E.Olson，etal.，J.Med.Chem.(1999)，42，1178-1192，andliteraturecitedtherein)，通過將適當(dāng)?shù)氖?-9胺磺?；戎虚g物與氨反應(yīng)而得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>本發(fā)明制法本發(fā)明因此關(guān)于一種制備上述式I化合物的方法，該方法包含以下步驟a)由式I_2B化合物與式1-3化合物反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中^代表氯或溴原子或甲磺?；蛞一酋；?尤其氯原子)，其是在強(qiáng)堿存在下進(jìn)行，及b)利用BC13或BBr3去除步驟a)中得到的式I_1B化合物的苯甲基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>上述方法中步驟a)優(yōu)選是在選自由THF、DMF及二噁烷的溶劑組成的組中或選自由THF、DMF及二噁烷組成的溶劑混合物(例如THF與DMF混合物)中進(jìn)行。上述方法步驟a)中強(qiáng)堿優(yōu)選為由LiH、NaH及CaH2組成的組。對(duì)于步驟a)，該反應(yīng)優(yōu)選在溫度2(TC至溶劑沸點(diǎn)間進(jìn)行，尤其在溫度20°C-70°〇之間。上述方法步驟b)優(yōu)選自由氯仿及DCM組成的組中的溶劑中、或氯仿及DCM混合物中(例如氯仿)，優(yōu)選在溫度20°C_401:之間，尤其在溫度2(TC至3(TC之間進(jìn)行。根據(jù)上述方法的優(yōu)選變體，式I-2e化合物將由〃一般制備方法〃部分中，基于該同一部分中所述的另一步驟所定義的式I-4化合物(PG為苯甲基)制備。根據(jù)該變體，式I-4化合物本身可優(yōu)選由式I-5化合物及式I-6化合物(其中PG為苯甲基)制備，此二者均如〃一般制備方法〃部分中基于同一部分中所述的另一步驟所定義(PG為苯甲基)(該式1-5化合物及式1-6化合物可由〃一般制備方法〃部分中所述的另一步驟制備)。上述方法也用于制備式I化合物的鹽(具體而言，醫(yī)藥上可接受的鹽)。在此情況下，該方法包括轉(zhuǎn)化步驟b中得到的式I化合物為其鹽(具體而言，其醫(yī)藥上可接受的鹽)的額外步驟。本發(fā)明的特定實(shí)施方式在以下實(shí)施例中描述，其更詳細(xì)闡述本發(fā)明且未限制其范圍。實(shí)施例以下實(shí)施例根據(jù)下述步驟制備。所有化合物通過以下方式表征,H-NMR(300MHz)及偶爾采用13C-NMR(75MHz)(VarianOxford,300MHz;化學(xué)位移是相對(duì)于所用溶劑，以卯m表示；多峰性s二單峰，d二雙峰，t二三峰，m二多峰)，LC-MS(FinniganNavigatorwithHP1100二元泵與DAD，管柱4.6X50mm，DevelosilRPAqueous,5iim，120A，梯度5-95%乙腈的水溶液，lmin，含O.04%三氟乙酸，流量4.5ml/min)，tK為分鐘；TLC(TLC-板來自Merck，硅膠60F254)及偶爾采用熔點(diǎn)定性。制備A:苯甲基磺酰胺鉀鹽A.i.苯甲基磺酰胺氯磺酰異氰酸酯(14.14g)溶于DCM(50mL)中及冷卻至0°C。在30分鐘內(nèi)添加叔丁醇(9.6mL)的DCM(50mL)溶液。在室溫下再攪拌30分鐘。然后，因此將得到的溶液在一小時(shí)內(nèi)加入苯甲基胺(10.7g)及TEA(15.32mL)的DCM(200mL)溶液中。繼續(xù)在室溫下攪拌10小時(shí)。混合物在真空下濃縮，溶于EA(500mL)及經(jīng)水(2X40mL)與鹽水(30mL)沖洗，用MgS04干燥，過濾。濾液真空濃縮及粗產(chǎn)物從EA中結(jié)晶及在HV下干燥得到N-苯甲基-N'-叔-丁氧羰基磺酰胺(13.68g)HNMR(CDCl3):Sl.46(s，9H);4.25(s，2H);5.42(sbr.，1H);7.30-7.40(m，5H)。LC-MS:tK=0.90min，[M+H]+=287.09。該物質(zhì)溶于二噁烷(20ml)及在室溫下于1小時(shí)內(nèi)加入4腿C1的二噁烷溶液(120mL)。先攪拌混合物8小時(shí)后才蒸發(fā)溶劑，殘留物在HV下干燥，得到灰白色粉末的苯甲基磺酰胺(9.47g)。力NMR(D6-DMS0):S4.05(d，J=6.4Hz，2H);6.60(s，2H);7.04(s，J=6.4Hz，1H);7.20-7.36(m，5H)。LC-MS:tK=0.60min，[M+H+CH3CN]+=228.17。A.ii.苯甲基磺酰胺鉀鹽將叔丁醇鉀(10.8g)小心加入苯甲基磺酰胺(17.98g)的MeOH(300mL)溶液中。蒸發(fā)溶劑前，混合物在室溫下攪拌15分鐘。在HV下干燥殘留的殘質(zhì)，得到灰白色粉末的苯甲基磺酰胺鉀鹽(21.73g)。制備B:5-(4-溴_苯基)_4，6_二氯_嘧啶:B.i.4-溴苯基乙酸甲酯滴加亞硫酰氯(34.2mL)于4_溴苯基乙酸(50g)的甲醇(250ml)溶液中，其中反應(yīng)混合物溫度保持在o-5t:。完全加入后，停止冷卻，及使混合物回至室溫。真空去除溶劑前，先繼續(xù)攪拌75分鐘。黃色油溶于苯中及再濃縮。殘質(zhì)溶于EA，經(jīng)水、鹽水、2N化20)3、及再一次經(jīng)鹽水沖洗。有機(jī)提取物用MgS04干燥、過濾、濃縮及在HV、于85t:下干燥30分鐘，得到所需產(chǎn)物，為黃色油狀物(52.4g)。^-NMR(D6-DMS0):S3.60(s，3H);3.67(s，2H);7.22(d，8.5，2H);7.50(d，J=8.5Hz，2H)。B.ii.2-(4-溴苯基)-丙二酸二甲酯:40。C下，將中間物B.i(52g)的THF(100mL)溶液在40分鐘內(nèi)小心加入NaH(15.6g)的無(wú)水THF(450mL)懸浮液中。在無(wú)加熱下連續(xù)攪拌70分鐘及溫度降至27°C。待氣體停止釋出后，滴加碳酸二甲酯(76.42mL)，同時(shí)混合物溫度保持在29-3rC之間。在室溫下持續(xù)攪拌22小時(shí)?；旌衔锢鋮s至-l(TC，然后經(jīng)HC1水溶液調(diào)節(jié)至pH6-7后，在真空下去除大量THF。殘質(zhì)溶于EA(700mL)，用INHC1水溶液沖洗3次及經(jīng)鹽水沖洗一次，用MgS04干燥。蒸發(fā)大部分EA后，加入己烷。使產(chǎn)物在4t:下過夜而析出結(jié)晶。收集晶體、經(jīng)己烷沖洗及干燥得到所需產(chǎn)物，為淺黃色晶體(45.9g)。力-NMR(De-DMSO):S3.66(s，6H);5.07(s，lH);7.30-7.34(m，2H);7.55—7.59(m，2H)。B.iii.5-(4-溴苯基)-嘧啶-4，6-二醇(TC下，將中間物B.ii(ll.73g)的MeOH(100mL)溶液中加入到鈉(2.83g)的甲醇(100mL)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時(shí)后，加入甲脒鹽酸鹽(4.10g)。懸浮液在室溫下攪拌4小時(shí)。去除溶劑及殘質(zhì)懸浮于10%檸檬酸水溶液(100mL)中及攪拌10分鐘。收集白色沉淀，用10X檸檬酸水溶液、水沖洗，從環(huán)己烷中蒸發(fā)三次及在HV、于4(TC下干燥得到5-(4-溴苯基)-嘧啶-4，6-二醇，為淺米色粉末(9.90g)。^-NMR(D6-DMS0):S7.43—7.48(m，2H)，7.50-7.55(m，2H)，8.13(s，1H)，12.1(sbr.，2H)。LC-MS:tK=0.62min，[M+H]+=266.89/268.89(溴-同位素)。B.iv.5-(4-溴-苯基)-4，6-二氯-嘧啶將N，N-二甲基苯胺(13.5mL)小心加入到5_(4-溴苯基)-嘧啶_4，6_二醇(9.90g)的P0Cl3(130mL)懸浮液中。加熱混合物至130°C2小時(shí)。真空濃縮深褐色溶液，殘質(zhì)注入冰/水中。懸浮液經(jīng)2NHC1及水稀釋，攪拌20分鐘。收集形成的沉淀及用水沖洗。固體物質(zhì)溶于EA，經(jīng)1NHCL水溶液及鹽水沖洗。有機(jī)相用MgS04干燥及蒸發(fā)。物質(zhì)進(jìn)一步經(jīng)硅膠管柱層析法純化，用Hex:EA為95:5至1:1洗脫，然后在-20。C下，從Hex/EA中結(jié)晶，得到4，6-二氯-5-(4-溴苯基)_嘧啶，為淺黃色晶體(8.3g)。丄H-NMR(D6-DMS0):57.39-7.44(m，2H)，7.72—7.76(m，2H)，8.94(s，1H)。LC-MS:tK=1.02min。實(shí)施例1:{5-(4-溴-苯基)-6-[2-(5-溴-嘧啶-2-基氧基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}_磺酰胺1.i.苯甲基-胺磺酸[6-氯-5-(4-溴苯基)-嘧啶-4-基]-酰胺將5-(4-溴苯基)-4，6-二氯-嘧啶(4.OOg，13.2mmo1)與苯甲基磺酰胺鉀鹽(7.38g，32.9mmo1)的匿S0(30mL)溶液在室溫下攪拌24小時(shí)后，用10%檸檬酸水溶液(200mL)稀釋。形成的懸浮液過濾。收集的固體用水沖洗及在HV、于4(TC下干燥48小時(shí)，得到所需產(chǎn)物，為白色粉末(6.15g)。力NMR(CDC13):S4.23(d，J=5.9Hz，2H);5.94(tbr.，J=6Hz，1H);7.05(d，J=8.2Hz，2H);7.20-7.35(m，5H);7.68(d，J=8.2Hz，2H);8.61(s，1H)。LC-MS:tK=1.02min，[M+H]+=452.95。1.ii.苯甲基-胺磺酸[5-(4-溴苯基)-6-(2-羥乙氧基)嘧啶-4-基]-酰胺將叔丁醇鉀(18.5g，164.5,1)分批加入中間物1.i(7.46g，16.4,1)的乙二醇(50mL)懸浮液中?；旌衔镒儫峒皾獬?，并用DME(75mL)稀釋。在95。C下攪拌混合物24小時(shí)后，用水(50mL)及10%檸檬酸水溶液(250mL)稀釋前將混合物冷卻至室溫。乳狀懸浮液用EA(2X300mL)提取。合并的有機(jī)提取物用MgS04干燥、經(jīng)過濾及濃縮濾液。殘留的結(jié)晶固體懸浮于MeOH中，經(jīng)收集，經(jīng)MeOH沖洗及于HV下干燥得到所需產(chǎn)物，為白色結(jié)晶粉末(6.49g)。力NMR(CDC13):S2.50(tbr.，J=6Hz，1H);3.80—3.88(m，2H);4.20(d，J=5.9Hz，2H);4.46-4.50(m，2H);5.99(tbr.，J=6.4Hz，1H);6.85(sbr.，1H);7.12(d，J=8.2Hz，2H);7.23-7.34(m，5H);7.64(d，J=8.2Hz，2H);8.44(s，lH)。LC-MS:tK=0.93min，[M+H]+=479.08。l.iii.苯甲基-胺磺酸[5-(4-溴苯基)-6-{2-(5-溴-嘧啶-2-基氧基)_乙氧基}-嘧啶-4-基]-酰胺將NaH(1.77g，40.6,1，55%礦物油分散液)小心加入中間物1.ii(6.49g，13.5,1)的THF(120mL)溶液中。將混合物攪拌10分鐘后，加入2-氯-5-溴-嘧啶(3.93g，20.3mmo1)?；旌衔镉肈MF(15mL)稀釋，然后在室溫下攪拌20分鐘。加熱混合物至6(TC且攪拌3小時(shí)后，再一次冷卻至室溫。反應(yīng)用水及10%檸檬酸水溶液(250mL)中止，混合物用EA提取(2X300mL)。有機(jī)提取物用水沖洗。合并，用MgS04干燥，過濾及蒸發(fā)濾液溶劑。粗產(chǎn)物從MeOH/醚中結(jié)晶。收集結(jié)晶物，用另一份MeOH/醚沖洗及于HV下干燥得到所需產(chǎn)物，為白色粉末(6.47g)。力NMR(CDC13):S4.20(d，J=6.4Hz，2H);4.59—4.64(m，2H);4.69—4.74(m，2H);5.98(tbr.，J=6.4Hz，1H);6.83(sbr.，1H);7.06-7.10(m，2H);7.24-7.34(m，5H);7.54-7.58(m，2H);8.44(s，1H);8.50(s，2H)。LC-MS:tK=1.06min，[M+H]+=634.98。1.iv.{5-(4_溴_苯基)-6-[2-(5_溴-嘧啶_2_基氧基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}_磺酰胺將三溴化硼(25.5mL，1MDCM)溶液緩慢加入中間物1.iii(6.50g，10.2,1)的氯仿(250mL)溶液中?；旌衔镒儨啙峒胺蛛x油狀殘留物。在室溫下攪拌混合物。在6、24及33小時(shí)后，加入另一部分BBr3溶液(5mL)。在最后一次加入BBr3后，再激烈攪拌該米色懸浮液2小時(shí)，然后小心添加MeOH中止反應(yīng)?；旌衔镒兊脺?zé)峒俺吻?。溶液以冷?(TC，2X150mL)沖洗。沖洗液用DCM再提取。合并的有機(jī)提取液再經(jīng)水沖洗、用MgS04干燥、過濾及濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)CC在硅膠上，通過庚烷EA為1:1的乳劑洗脫純化，然后從DCM中結(jié)晶。經(jīng)純化的結(jié)晶物在HV下，于45t:干燥48小時(shí)，得到所需產(chǎn)物，為白色結(jié)晶粉末(1.62g)。力NMR(CDC13):S4.60-4.65(m，2H)，4.71-4.74(m，2H)，5.50(sbr，2H)，7.10(sbr，1H)，7.13-7.17(m，2H)，7.55-7.59(m，2H)，8.49(s，2H)，8.50(s，1H)。LC-MS:tK=0.93min，[M+H]+=544.70。本發(fā)明化合物的藥理學(xué)性質(zhì)1)對(duì)內(nèi)皮素與攜載人類ET受體的CHO細(xì)胞的膜的結(jié)合的抑制作用實(shí)驗(yàn)方法對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)，使用表達(dá)人類重組體ETA或ETB受體的CHO細(xì)胞的膜。以重組體CHO細(xì)胞制備微粒體膜，如以前的描述進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)(BreuV.，etal，F(xiàn)EBSLett.(1993)，334,210)。實(shí)驗(yàn)在200iiL50mMpH7.4包含25mMMnCl2、lmMEDTA及O.5%(w/v)BSA的Tris/HC1緩沖液中，于聚丙烯微量滴定板中進(jìn)行。在2(TC下，使用8pM[125I]ET-l(4000cpm)及濃度逐漸增加的無(wú)標(biāo)記的拮抗劑孵育包含0.5g蛋白質(zhì)的膜2小時(shí)。分別估計(jì)未經(jīng)及經(jīng)lOOnMET-1處理的樣品的最大及最小結(jié)合性。2小時(shí)后，膜在包含GF/C濾器的濾板上過濾(Unifilterplates來自瑞士蘇黎士CanberraPackardS.A.公司)。在每孔中加入50iiL閃爍液(MicroScint20，瑞士蘇黎士CanberraPackardS.A.公司)，濾板于微板計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)(TopCount，瑞士蘇黎士CanberraPackardS.A.公司)。溶解所有測(cè)試化合物，稀釋及加入匿SO中。實(shí)驗(yàn)在已發(fā)現(xiàn)不會(huì)明顯干擾結(jié)合性的2.5%匿SO存在下進(jìn)行。IC5。為抑制50%ET-1特定結(jié)合的拮抗劑濃度。已發(fā)現(xiàn)參考化合物的ICs。值如下ETa細(xì)胞對(duì)于ET-1為0.075nM(n=8)及對(duì)于ET-3為118nM(n=8);ETB細(xì)胞對(duì)于ET-1為0.067nM(n=8)及對(duì)于ET-3為0.092nM(n=3)。結(jié)果式I化合物得到的IC5。值示于下表1中。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表l2)對(duì)內(nèi)皮素所誘發(fā)已分離的大鼠主動(dòng)脈環(huán)(ETA受體)及大鼠氣管環(huán)(ETB受體)收縮的抑制性實(shí)驗(yàn)方法由內(nèi)皮素拮抗劑對(duì)內(nèi)皮素-l所引起大鼠主動(dòng)脈環(huán)(ETa受體)收縮及對(duì)由角蝰毒素S6c所引起大鼠氣管環(huán)(ETe受體)收縮的抑制作用分析內(nèi)皮素拮抗劑的功能性抑制力。成年Wistar大鼠經(jīng)麻醉及放血。胸主動(dòng)脈或氣管被切除、解剖且切成3-5mm環(huán)節(jié)。溫和擦破內(nèi)膜表面去除內(nèi)皮/上皮。每個(gè)環(huán)懸浮于保持在37t:、10mL填充有Krebs-Henseleit溶液(以mM計(jì)NaCl115，KC14.7，MgS041.2，KH2P041.5，NaHC0325，CaCl22.5，葡萄糖10)及經(jīng)95%02及5%C02充氣的離體器官浴槽中。環(huán)與測(cè)力傳感器連接及記錄等長(zhǎng)張力(法國(guó)巴黎EMKATechnologiesSA公司)。拉伸環(huán)至3g(主動(dòng)脈)或2g(氣管)的靜止張力。與測(cè)試化合物或其媒劑孵育10分鐘后，加入累積劑量的ET-1(主動(dòng)脈)或角蝰毒素S6c(氣管)。計(jì)算濃度比，評(píng)估測(cè)試化合物的功能性抑制力，即不同濃度測(cè)試化合物所引起ECs。的右移。EC5。為達(dá)到最大收縮力的一半值時(shí)所需要的內(nèi)皮質(zhì)濃度，pA2為引起EC5。數(shù)值移動(dòng)兩倍時(shí)的拮抗劑濃度的負(fù)對(duì)數(shù)值。結(jié)果式I化合物得到的pA2數(shù)值(n=3)示于下表2中。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表2大鼠口服單一劑量后的藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物體重為200-250g的Wistar雄性大鼠在適應(yīng)至少7天后，進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。所有動(dòng)物培養(yǎng)在根據(jù)NIH方針的條件下。在實(shí)驗(yàn)前兩天，大鼠用氯胺酮(90mg/kg)及甲苯噻嗪2%(10mg/kg)混合物腹腔注射麻醉。在無(wú)菌條件下，將導(dǎo)管植入頸靜脈中以允許多次采血。全身麻醉恢復(fù)后，在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下，將動(dòng)物單獨(dú)地收容于具有鋼絲網(wǎng)頂端及標(biāo)準(zhǔn)化軟木材墊的Makrolon型_3籠中。在恢復(fù)期及整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物可自由獲取水及食物。實(shí)驗(yàn)步驟藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)在Wistar大鼠(m=2_3)頸靜脈插管供連續(xù)采血后進(jìn)行。測(cè)試化合物通過強(qiáng)飼法以10mg/kg的劑量口服。然后在24小時(shí)期間，于預(yù)定時(shí)間點(diǎn)處采血及離心制備血漿。血漿中藥物濃度利用連接質(zhì)譜分析的液相層析法進(jìn)行定量分析(定量限值4.6ng/mL)。利用非分區(qū)分析評(píng)價(jià)藥物動(dòng)力學(xué)。結(jié)果在大鼠中測(cè)量式I化合物及WO02/053557的參考化合物的半衰期t1/2及清除率CL，見下表3。16<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>三環(huán)抗抑郁藥、美沙酮、及安非他命)；可使用當(dāng)?shù)卣Z(yǔ)言與調(diào)查員交流的能力，并理解及遵守研究要求。合格者必需不具以下任一淘汰標(biāo)準(zhǔn)在篩選前3年內(nèi)，酒精中毒或藥物濫用的病歷或臨床現(xiàn)象；*篩選前3年內(nèi)，任何病史或臨床現(xiàn)象及/或存在會(huì)干擾研究藥物的吸收、分配、新陳代謝或排泄的任何手術(shù)或醫(yī)學(xué)癥狀(即，受損的肝臟或腎功能、糖尿病、心血管異常、胰腺疾病、嚴(yán)重便秘或腹瀉慢性癥狀、或其它與胃腸道相關(guān)的急性癥狀，僅允許闌尾切除術(shù)或疝切開術(shù))；B或C型肝炎病史及/或出現(xiàn)急性或慢性B或C型肝炎的肝炎血清呈陽(yáng)性結(jié)果(接種疫苗者除外)；.HIV血清呈陽(yáng)性結(jié)果；*吸煙；對(duì)任何藥物有臨床相關(guān)過敏或嚴(yán)重有害反應(yīng)的病歷；篩選檢查前3個(gè)月內(nèi)曾參與另一臨床研究；第一次攝取藥物前兩周曾經(jīng)或并行接受任何醫(yī)藥療法(處方或0TC);研究前3個(gè)月內(nèi)曾流失250ml或更多血液；篩選前4星期內(nèi)曾出現(xiàn)臨床相關(guān)病癥(例如，急性細(xì)菌、病毒、或真菌感染)。并行療法、飲食方面、酒精、吸煙、身體活動(dòng)除非該處理法出現(xiàn)不良反應(yīng)，否則不允許進(jìn)行并行療法。受試者在研究第1及10天時(shí)，于攝取藥物前10小時(shí)至攝取藥物后4小時(shí)期間禁食。研究期間，受試者接受以下標(biāo)準(zhǔn)食物在第-1天及第2至第11天進(jìn)食早餐(第1及第10天無(wú)早餐)；在第-1天、第1及第10天約中午或攝取藥物后約4小時(shí)進(jìn)食中餐；在第-1天、第1及第10天給藥約8小時(shí)后吃點(diǎn)心；及在第-1天、第1及第10天約19:00點(diǎn)或給藥后約11小時(shí)進(jìn)食晚餐。不同劑量組的受試者在分別研究期間均接受相同食物。第1天與第10天的食物相同?？呻S意攝取水。從篩選至研究結(jié)束，受試者避免強(qiáng)烈體能活動(dòng)及劇烈體育運(yùn)動(dòng)(耐力運(yùn)動(dòng))及不飲用任何含酒精的飲料、葡萄柚或葡萄柚汁。在診所中亦不允許飲用包含黃嘌呤的飲料。實(shí)驗(yàn)步驟在臨床實(shí)驗(yàn)中使用游離堿形式的丙基氨基磺酸[5-(4_溴_苯基)-6-[2-(5-溴-嘧啶-2-基氧基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-酰胺(見WO02/053557或WO2007/031933;以下命為〃參考化合物〃)，為硬凝膠膠囊用于口服，調(diào)配濃度1及10mg。對(duì)應(yīng)的安慰劑膠囊包含相同賦形劑，但無(wú)參考化合物。參考化合物以1、3、10及30mg上升多劑量給藥(分別以1個(gè)lmg膠囊、3個(gè)lmg膠囊、l個(gè)10mg膠囊及3個(gè)10mg膠囊)。處理受試者10天?；谀涿牧x務(wù)，以識(shí)別號(hào)碼及密碼分配用于受試者。僅以受試者號(hào)碼及出生日期識(shí)別受試者。以雙盲形式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每劑量組包含的6位受試者隨機(jī)分配，接受參考化合物處理及分配2位受試者接受安慰劑處理。早上給予站立姿勢(shì)受試者服用藥物與150ml水，在第1天及第10天時(shí)，均在至少禁食10小時(shí)后服用。其它研究日期的試驗(yàn)藥物是在攝取早餐前30分鐘給藥。對(duì)于每個(gè)受試者，每次藥物攝取間隔24±0.5小時(shí)，但通常在7:00至9:00之間攝取藥物。所有藥物均在直接醫(yī)藥監(jiān)督下給予。每次藥物給予后，立刻檢查口腔。在分析期間，測(cè)量參考化合物及/或其代謝物(即式I化合物)的血漿含量，進(jìn)一步核查其一致性。利用LC-MS測(cè)定參考化合物及其代謝物(即式I化合物)在血漿及尿中的含量。兩者分析定量極限估計(jì)為lng/ml。結(jié)果研究第10天時(shí)，在人體中式I化合物及參考化合物在每次不同日給藥劑量(分別為1、3、10及30mg)下測(cè)量的表觀消除半衰期(t1/2)可見下表4(數(shù)據(jù)為幾何平均值)。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表4本發(fā)明化合物藥理學(xué)性質(zhì)總結(jié)可以看出，式I化合物為一種內(nèi)皮素受體拮抗劑(參見〃對(duì)內(nèi)皮素與攜載人類ET受體的CHO細(xì)胞的膜的結(jié)合的抑制作用〃，表1及〃對(duì)內(nèi)皮素所誘發(fā)已分離的大鼠主動(dòng)脈環(huán)(ETa受體)及大鼠氣管環(huán)(ETe受體)收縮的抑制性〃，表2)，具有比W002/053557參考化合物更長(zhǎng)半衰期(大鼠及人)及更低清除率(大鼠)(參見〃大鼠口服單一劑量后的藥物動(dòng)力學(xué)〃，表3及〃人體口服多劑量后的藥物動(dòng)力學(xué)〃表4)。權(quán)利要求一種式I的化合物或其鹽FPA00001011149300011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽作為藥物。3.—種醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽，及至少一種無(wú)治療活性的賦形劑。4.一種根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽在制備藥物中的用途，該藥物用于治療高血壓、肺高血壓、冠心病、心功能不全、腎及心肌缺血、腎衰竭、大腦缺血、癡呆、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥、指頭潰瘍或門靜脈高血壓，及用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、氣囊或支架血管成形術(shù)后再狹窄、發(fā)炎、胃及十二指腸潰瘍、癌、黑素瘤、前列腺癌、前列腺肥大、勃起障礙、聽力損失、黑內(nèi)障、慢性支氣管炎、哮喘、肺纖維化、革蘭氏陰性敗血病、休克、鐮刀形紅細(xì)胞貧血病、腎小球腎炎、腎絞痛、青光眼、結(jié)締組織疾病、糖尿病并發(fā)癥、脈管或心臟手術(shù)或器官移植后的并發(fā)癥、環(huán)孢菌素治療并發(fā)癥、疼痛或高血脂。5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中制備的藥物用于治療選自由高血壓、肺高血壓、糖尿病性動(dòng)脈病、心力衰竭、勃起障礙及心絞痛所組成的組中的疾病。6.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中制備的藥物用于治療高血壓。7.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中制備的藥物用于治療肺高血壓。8.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中制備的藥物用于治療肺動(dòng)脈高血壓。9.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽用于治療高血壓、肺高血壓、冠心病、心功能不全、腎及心肌缺血、腎衰竭、大腦缺血、癡呆、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥、指頭潰瘍或門靜脈高血壓，及用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、氣囊或支架血管成形術(shù)后再狹窄、發(fā)炎、胃及十二指腸潰瘍、癌、黑素瘤、前列腺癌、前列腺肥大、勃起障礙、聽力損失、黑內(nèi)障、慢性支氣管炎、哮喘、肺纖維化、革蘭氏陰性敗血病、休克、鐮刀形紅細(xì)胞貧血病、腎小球腎炎、腎絞痛、青光眼、結(jié)締組織疾病、糖尿病并發(fā)癥、脈管或心臟手術(shù)或器官移植后的并發(fā)癥、環(huán)孢菌素治療并發(fā)癥、疼痛或高血脂。10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物或醫(yī)藥上可接受的鹽，其用于治療選自由高血壓、肺高血壓、糖尿病性動(dòng)脈病、心力衰竭、勃起障礙及心絞痛所組成的群的疾病。11.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽用于治療高血壓。12.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽用于治療肺高血壓。13.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽用于治療肺動(dòng)脈高血壓。14.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物的方法，該方法包括以下步驟a)在強(qiáng)堿存在下，使式I-2B化合物與式1-3化合物反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中式I_2B化合物中的PG為苯甲基、4-甲氧基-苯甲基或2，4-二甲氧基苯甲基，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中式1-3化合物中代表氯或溴原子或甲磺?；蛞一酋；?；及b)脫除步驟a)中的得到的式I-Ib化合物的笨甲基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中當(dāng)PG為苯甲基時(shí)，使用BC13或BBr3脫除，或當(dāng)PG為4-甲氧基-苯甲基或2，4-二甲氧基苯甲基時(shí)，使用硝酸鈰銨或2，3-二氯-5，6-二氰-苯醌脫除。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，該方法包括另一個(gè)在堿存在下，使式I-4化合物與乙二醇反應(yīng)以得到式I化合物的步驟，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中式1-4化合物中的PG代表苯甲基及G2代表鹵原子'全文摘要本發(fā)明關(guān)于一種結(jié)構(gòu)式I的化合物及其鹽該化合物作為內(nèi)皮素受體拮抗劑。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于一種制備該化合物的方法。文檔編號(hào)A61P9/00GK101772494SQ200880101679公開日2010年7月7日申請(qǐng)日期2008年8月15日優(yōu)先權(quán)日2007年8月17日發(fā)明者亞歷山大·崔柏,克里斯多夫·博斯,馬汀·波利申請(qǐng)人:?？铺厝R茵藥品有限公司