專利名稱：：G-csf的液體制劑的制作方法G-CSF的液體制劑本發(fā)明的目的是穩(wěn)定的G-CSF水性液體制劑，主要由G-CSF和糖醇、表面活性劑、pH值為大約4.1到4.4的緩沖物質(zhì)，以及任選的氨基酸和/或甘油和/或糖類和/或防腐劑組成。許多目前已知的用于蛋白藥劑的劑型具有缺點(diǎn)。例如，某些制劑含有從醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)來(lái)看不能被毫不猶豫地歸類為無(wú)害的藥物添加劑或賦形劑。由于它們的來(lái)源和物理化學(xué)性質(zhì)，聚合物和蛋白在作為藥物添加劑的適合性方面具有一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)。人類或動(dòng)物來(lái)源的蛋白以及從細(xì)胞培養(yǎng)獲得的蛋白，具有潛在的病毒污染殘留風(fēng)險(xiǎn)。由于它們的抗原性質(zhì)，其他難以通過(guò)分析檢測(cè)的蛋白類污染物，也可能在人類中引發(fā)免疫反應(yīng)。此外，動(dòng)物來(lái)源的蛋白，由于它們通常的物種特異性性質(zhì)，可能在人類中引發(fā)免疫反應(yīng)。一旦在之后的時(shí)間點(diǎn)再次使用這些蛋白，也可能發(fā)生長(zhǎng)期反應(yīng)。具有高分子量的化合物的混合物也可能有問(wèn)題。由于其高分子量，聚合物可以在體內(nèi)積累，因此，在沒(méi)有生物降解的情況下可能在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間存留。這在皮下給藥的情況下尤其令人害怕，因?yàn)榕c靜脈內(nèi)給藥相比，經(jīng)過(guò)血流移除和分布要延遲許多。取決于摩爾質(zhì)量，聚合物也可能具有抗原性。此外，由于用于生產(chǎn)的催化劑或由于單體或其他聚合物片段的存在，難以保證聚合物的純度。因此，應(yīng)該盡可能避免在液體藥物劑型中使用聚合物，特別是對(duì)于可皮下使用的劑型來(lái)說(shuō)。此外，從文獻(xiàn)得知，特別是非糖基化形式的G-CSF，與從CHO細(xì)胞獲得的糖基化的G-CSF相比，由于氧化和/或聚集，是極其不穩(wěn)定的。因此，使非糖基化形式的G-CSF穩(wěn)定是極其困難的，為了將所述分子配制成穩(wěn)定的劑型，需要特別選擇的措施。從醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)，使用表面活性劑穩(wěn)定G-CSF在原則上應(yīng)該避免，因?yàn)樗霰砻婊钚詣┛赡芤l(fā)局部剌激。具有非常低pH值的劑型，特別是在皮下給藥的情況下，也可能在患者中引起局部不相容性，例如疼痛和局部組織剌激，因?yàn)樗鯬H值位于組織中存在的從pH7.0到7.5的生理范圍之下。最近出版的國(guó)際專利申請(qǐng)WO2005/042024，與EP373679的教導(dǎo)相似，教導(dǎo)了獲得G-CSF的穩(wěn)定的藥物組合物的方法，這是通過(guò)保持所述組合物尤其是不含表面活性劑，并且根據(jù)實(shí)施例中描述的組合物，通過(guò)提供非常低濃度的緩沖液來(lái)獲得的。關(guān)于其中描述的藥物的可接受性，沒(méi)有給出說(shuō)明。在歐洲專利申請(qǐng)EP1129720中，描述了pH值在5到8范圍內(nèi)的G-CSF制劑，其中提出硫酸鹽以穩(wěn)定制劑中包含的G-CSF。關(guān)于其中描述的G-CSF制劑的可接受性，仍然沒(méi)有給出說(shuō)明。本發(fā)明面對(duì)的問(wèn)題是提供不顯示上述當(dāng)前已知?jiǎng)┬偷娜秉c(diǎn)的G-CSF液體劑型。具體來(lái)說(shuō)，藥物制劑應(yīng)該在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定，并且是生理可接受的。特別是，它應(yīng)該適合于患者自己使用，其特點(diǎn)應(yīng)該是能夠避免在通過(guò)注射或注入自己使用藥物時(shí)通常發(fā)生的不希望的皮膚剌激和注射位點(diǎn)的疼痛。該問(wèn)題通過(guò)在權(quán)利要求中定性的實(shí)施方案得到了解決，并在下面的實(shí)施方案中進(jìn)行了說(shuō)明。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及G-CSF的穩(wěn)定水性液體制劑，主要由G-CSF和糖醇組成，濃度為大約0.04到0.06mg/ml的表面活性劑，濃度為大約5到20mM的乙酸鹽作為緩沖物質(zhì)，PH值為大約4.1到4.4。任選地，可以使用氨基酸和/或甘油和/或糖類和/或防腐劑。此外，本發(fā)明的液體制劑可以含有其他的常用藥物賦形劑。但是，優(yōu)選不含所述和/或其他賦形劑。在國(guó)際專利申請(qǐng)WO94/14466中，總的來(lái)說(shuō)，要求保護(hù)儲(chǔ)存穩(wěn)定的G-CSF水性藥物制劑，并指出該制劑在使用不同緩沖系統(tǒng)時(shí)，在3.5到5和7到8的pH值范圍內(nèi)是穩(wěn)定的。但是，只對(duì)使用磷酸鹽緩沖液的液體G-CSF制劑的儲(chǔ)存穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗(yàn)，而對(duì)使用其他緩沖液的每個(gè)實(shí)驗(yàn)制劑，只在短時(shí)間機(jī)械應(yīng)力后進(jìn)行了測(cè)試，即樣品中出現(xiàn)渾濁時(shí)的濁度。在本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，必須評(píng)估在WO94/14466的實(shí)施例中指出的，具有乙酸鹽緩沖液的G-CSF溶液，特別是含有10mM乙酸鹽、pH值為4.5的劑型4，不具有所需的穩(wěn)定性，因?yàn)橐呀?jīng)確定了G-CSF的聚集和氧化形式存在的關(guān)鍵值。因此，正如已經(jīng)在EP0373679中說(shuō)明的，首先假定超過(guò)4.0的pH值將導(dǎo)致聚集物的形成，并且除非使用優(yōu)選的乙酸鹽緩沖系統(tǒng)，否則不能獲得具有改進(jìn)的生理可接受性的pH值的G-CSF液體制劑。在國(guó)際專利申請(qǐng)WO2005/039620中，使用了組成為0.6mg/mlG-CSF、10mM乙酸鹽緩沖液、0.004%(w/v)Tween80和5%(w/v)D-山梨糖醇，pH值為4.0和4.2的G-CSF液體制劑作為比較制劑，研究了含有pH值為5.0的琥珀酸緩沖液和O.02%(w/v)Tween20的G-CSF制劑，在機(jī)械應(yīng)力的影響下和冷凍與融化后的G-CSF制劑穩(wěn)定性。根據(jù)這些研究，具有乙酸鹽緩沖液的G-CSF制劑的穩(wěn)定性較低，以至于進(jìn)一步研究這種乙酸鹽緩沖的組合物似乎沒(méi)有意義，更不用說(shuō)考慮將它們用作候選藥物。與此相反，在本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，令人吃驚地發(fā)現(xiàn)了pH>4.0的乙酸鹽緩沖的G-CSF制劑，在冰箱中和4(TC、即體溫范圍內(nèi)的儲(chǔ)存溫度下的穩(wěn)定性方面的有利性質(zhì)，以及在患者中好得驚人的可接受性，因?yàn)榕c可商購(gòu)藥物相比發(fā)生較少的皮膚剌激。具體來(lái)說(shuō)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明的意義上，通過(guò)分別以各自特定的濃度將作為緩沖物質(zhì)的乙酸和乙酸鹽與表面活性劑例如聚山梨酸酯80，在存在糖醇例如山梨糖醇的情況下混合，并通過(guò)將pH值調(diào)整到大約4.2±0.15，獲得了穩(wěn)定的G-CSF液體制劑，它賦予G-CSF分子以適合作為藥物的穩(wěn)定性，具有良好的可耐受性，此外，還允許幾乎完全防止了當(dāng)給予藥物時(shí)通?？梢栽谧⑸湮稽c(diǎn)處觀察到的癥狀。這使得本發(fā)明的G-CSF液體制劑適合并有利地用于即用型注射器和與其一起提供的試劑盒中，特別適合于家庭使用。本發(fā)明的液體制劑還具有優(yōu)選不含其使用從醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)來(lái)看可能有問(wèn)題的蛋白類或聚合物賦形劑的優(yōu)點(diǎn)。正如實(shí)施例中描述的臨床研究所顯示的，它們還具有良好的可接受性和可以以基本上無(wú)痛的方式使用的優(yōu)點(diǎn)。此外，本發(fā)明的G-CSF液體制劑優(yōu)選不含氨基酸和/或其他蛋白，例如血清白蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的液體制劑不含甲硫氨酸。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床研究中表明，由于選擇了特定濃度范圍內(nèi)的緩沖物質(zhì)并存在糖醇，因此大約0.04到0.06mg/ml的少量表面活性劑，一方面足以穩(wěn)定G-CSF，另一方面不在患者中引發(fā)顯著的皮膚剌激或其他不相容性。在打算用于皮下給藥的這種液體制劑中，這是特別有利的。此外，利用本發(fā)明的手段，特別是不穩(wěn)定的、非糖基化的G-CSF分子可以被足夠穩(wěn)定化，以用于藥物組合物。定向選擇的賦形劑共同提供了具有非常好的可接受性的含有G-CSF的液體劑型，它在蛋白質(zhì)穩(wěn)定性方面是高質(zhì)量的制劑，特別適合作為即用型注射或灌注溶液。在本發(fā)明的液體制劑中，使用的表面活性劑的量為0.05到0.06mg/ml，特別優(yōu)選為大約0.06mg/ml。使用的表面活性劑優(yōu)選為聚山梨酸酯，特別優(yōu)選為聚山梨酸酯80，也稱為T(mén)ween80。本發(fā)明的含有G-CSF的劑型包含的藥劑的量足以獲得治療效果。一般來(lái)說(shuō)，使用的藥劑濃度為0.01到5mg/ml，優(yōu)選為0.1到lmg/ml，0.3到0.8mg/ml，使用的特別優(yōu)選的濃度為大約0.6mg/ml。具體來(lái)說(shuō)，在皮下給藥的情況下，特別優(yōu)選的劑量變?yōu)?.3mg/0.5ml和0.48mg/0.8ml。根據(jù)本發(fā)明，使用了乙酸作為緩沖物質(zhì)。在本發(fā)明的液體制劑的制備中，緩沖物質(zhì)以其游離酸的形式提供。溶液的所需PH值通過(guò)加入堿來(lái)調(diào)整，例如堿金屬氫氧化物、堿土金屬氫氧化物或氫氧化銨。為此，優(yōu)選使用氫氧化鈉。在即用型液體制劑中，緩沖物質(zhì)乙酸的濃度為大約5到20mMol/l。為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，在下文中它被稱為所述酸的陰離子濃度，即乙酸鹽。術(shù)語(yǔ)乙酸鹽打算也包含未解離的乙酸。優(yōu)選情況下，使用下面的緩沖液濃度和pH值7.5到15mMol、特別優(yōu)選為lOmMol乙酸鹽，pH4.1到4.4，優(yōu)選pH4.15到4.3，特別是pH4.2。在本發(fā)明的液體制劑中使用的G-CSF，基本上涉及所有通過(guò)重組方法生產(chǎn)的G-CSF分子及其變體。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)G-CSF或G-CSF變體包括所有天然存在的G-CSF變體，以及從其衍生和通過(guò)重組DNA技術(shù)修飾的G-CSF蛋白，特別是除了G-CSF部分之外還含有其他蛋白序列的融合蛋白。就此而言，特別優(yōu)選的是在1位上具有N-末端Met殘基的G-CSF突變蛋白，它由在原核細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生。可以按照W091/11520產(chǎn)生的重組的不含甲硫氨酸的G-CSF變體，也是適合的。術(shù)語(yǔ)"G-CSF變體"被理解為是指其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸可以被缺失或被其他氨基酸取代的G-CSF分子，其中G-CSF的基本性質(zhì)在很大程度上得以維持。適合的G-CSF突變蛋白描述在例如EP0456200中。特別優(yōu)選情況下，本發(fā)明的液體制劑中存在的G-CSF是沒(méi)有糖基化的。為了制備可接受性良好的腸胃外劑型，等滲化賦形劑的混合物是適合的，除非利用藥劑和用于穩(wěn)定化的賦形劑的滲透性質(zhì)已經(jīng)可以獲得等滲性。就此而言，使用尤其是非離子化的、可接受性良好的賦形劑，例如甘露糖醇、甘油或其他糖醇。在G-CSF的情況下，優(yōu)選使用山梨糖醇，它對(duì)于本發(fā)明的液體制劑的可接受性是特別有利的。優(yōu)選情況下，液體制劑中存在的糖醇的濃度為大約2.5到7.5%(w/v)，特別優(yōu)選的濃度為大約5%(w/v)。用于調(diào)節(jié)等滲性的鹽的混合物是不利的，因?yàn)楦邼舛鹊柠}或離子增加了G-CSF聚集物的形成。因此，有利情況下，鹽以較少的量混合。計(jì)算緩沖液的濃度，使得在將離子強(qiáng)度保持在最低可能水平的同時(shí)實(shí)現(xiàn)pH穩(wěn)定效應(yīng)。優(yōu)選情況下，緩沖液濃度在最高達(dá)20mMol的范圍內(nèi)，尤其是低于15mMol。此外，即用型注射溶液可以進(jìn)一步含有常規(guī)的賦形劑或添加劑。可以混合抗氧化劑例如谷胱甘肽、抗壞血酸或類似物質(zhì)，離液序列高的賦形劑例如尿素，或氨基酸例如甲硫氨酸、精氨酸、賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸等。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的G-CSF水性液體制劑被制備成注射或灌注溶液的形式，并主要由濃度為大約0.6mg/ml的人類未糖基化甲硫氨酰-G-CSF和濃度為大約55%(w/v)的山梨糖醇，濃度為大約0.06mg/ml的聚山梨酸酯80，以及作為緩沖物質(zhì)的濃度為大約10mM的乙酸鹽組成，pH值為大約4.2。在其他方面，在同樣的劑量強(qiáng)度下，本發(fā)明的G-CSF液體制劑可以按照Neupogen②的產(chǎn)品信息進(jìn)行使用，特別是在劑量、給藥和醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥方面，因?yàn)樵诒景l(fā)明的液體制劑中，使用在實(shí)驗(yàn)室E.coliK12菌株中生產(chǎn)的高度純化的未糖基化G-CSF蛋白，如非格司亭，也是優(yōu)選的。有利情況下，本發(fā)明的液體制劑被用作藥物，用于治療已知可以通過(guò)給藥G-CSF治療的疾病，例如癌癥，由細(xì)胞毒性化學(xué)療法導(dǎo)致的不利副作用，其中需要?jiǎng)訂T外周血前體細(xì)胞的疾病的伴隨療法，嚴(yán)重慢性中性粒細(xì)胞減少(SCN)，HIV感染等。因此，具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及含有上面描述的G-CSF液體制劑之一的藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的G-CSF組合物打算被用于制備藥物，用來(lái)治療神經(jīng)適應(yīng)癥，例如在急性腦血管事故后中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，其中通過(guò)例如以丸劑的形式早期給藥，可以緩解或預(yù)防嚴(yán)重的二次損傷。在其他方面，本發(fā)明的液體制劑打算用作藥物，優(yōu)選用于皮下或靜脈內(nèi)給藥，例如在需要長(zhǎng)期連續(xù)給藥G-CSF的情況下，通過(guò)預(yù)先裝填的注射器進(jìn)行注射或通過(guò)灌注。正如上面已經(jīng)舉例說(shuō)明的，本發(fā)明的G-CSF液體制劑在長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)是穩(wěn)定的，基本上可以儲(chǔ)存在任何適合的容器中。因此，本發(fā)明還涉及了含有上面或?qū)嵤├忻枋龅腉-CSF液體制劑之一的容器。優(yōu)選情況下，容器的至少一個(gè)與液體制劑接觸的表面涂有由聚四氟乙烯或乙烯-四氟乙烯(ETFE)構(gòu)成的材料。典型情況下，容器是常規(guī)情況下用于儲(chǔ)存和/或給藥液體藥物的容器，例如玻璃小瓶、注射器、安瓿、卡氏瓶或灌注容器，其中特別有利情況下，本發(fā)明的G-CSF液體制劑在即用型注射器和安瓿中使用。在優(yōu)選實(shí)施方案中，注射器或安瓿中存在的液體制劑的濃度，以G-CSF的濃度計(jì)，為O.5ml中O.3mg或0.8ml中0.48mg。因?yàn)樵诒景l(fā)明的G-CSF液體制劑給藥前，與其他賦形劑混合或采取進(jìn)一步制備措施例如過(guò)濾、混合等可以被有利地省略，因此本發(fā)明的G-CSF液體制劑可以制備在例如試劑盒中用于立即給藥。因此，在對(duì)于醫(yī)生、藥劑師和特別是對(duì)于患者特別有利的實(shí)施方察中，本發(fā)明還涉及了用于G-CSF的腸胃外給藥的試劑盒，包含一個(gè)或多個(gè)上面描述的容器，優(yōu)選還帶有關(guān)于儲(chǔ)存和/或給藥的說(shuō)明書(shū)。通常情況下，將提供以5到30iig/kg體重的劑量進(jìn)行的G-CSF給藥，但是，取決于醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥和疾病的階段，可以標(biāo)出更高或更低的劑量。優(yōu)選情況下，在本發(fā)明的試劑盒中提供5個(gè)注射器或安瓿，任選地，在例如打算每日給藥并持續(xù)一周的情況下，提供更多、例如7個(gè)注射器或安瓿。出于安全操作的原因，有利情況下，本發(fā)明的試劑盒具有分別用于注射器和用于注射和/或灌注針頭的安全隔艙。在這里，也考慮到了用于針頭和準(zhǔn)備好的或預(yù)先安裝的密封蓋的拆卸輔助工具。正如在實(shí)施例中描述的，本發(fā)明的G-CSF液體制劑在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定，特別是在大約5t:下，優(yōu)選在至少4周的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定。因此，本發(fā)明的液體制劑、容器和試劑盒可以有利地儲(chǔ)存在常規(guī)冰箱中。由本發(fā)明產(chǎn)生的這些以及其他實(shí)施方案，被權(quán)利要求書(shū)所涵蓋。在上面和下文中提到的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容，在此引入本申請(qǐng)作為參考，特6別是在G-CSF的重組生產(chǎn)、緩沖液、注射器和試劑盒方面。公開(kāi)了這些和其他實(shí)施方案，它們對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的專業(yè)人員是明顯的，由本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例所涵蓋。其他關(guān)于上面提到的可用于本發(fā)明的賦形劑之一以及電子手段的文獻(xiàn)，可以從現(xiàn)有技術(shù)獲得，例如使用電子手段從例如公共圖書(shū)館獲得。此外，其他的公共數(shù)據(jù)庫(kù)可以通過(guò)英特網(wǎng)容易地獲得，例如"PubMed，，(http://www.pubmed.gov)。用于執(zhí)行本發(fā)明的技術(shù)對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的專業(yè)人員來(lái)說(shuō)是公知的，可以從相關(guān)的文獻(xiàn)獲得，參見(jiàn)例如《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第二版)(MolecularCloningALaboratoryMa皿al，2ndEd.，Sambrook，F(xiàn)ritsch禾口Maniatis主編(ColdSpringHarborLaboratoryPress:1989));《細(xì)胞和分子生物學(xué)中的免疫化學(xué)方法》(ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology)(Mayer禾口Walker主編，AcademicPress,London,1987);《實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)手冊(cè)》(I-IV巻)(HandbookOfExperimentalImmunology,VolumesI-IV)(D.M.Weir和C.C.Blackwell主編，1986)。實(shí)施例下面，將通過(guò)優(yōu)選實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，但是，這些實(shí)施方案不打算以任何方式限制本發(fā)明的目的。實(shí)施例1:液體G-CSF劑型的制備通過(guò)以下方式制備在實(shí)施例中使用的G-CSF溶液，將上述賦形劑溶解在用于注射目的的水中，添加指示量的G-CSF，以及如果需要，使用少量緩沖成分將pH值精確調(diào)整到所需值。在制備本發(fā)明的G-CSF制劑時(shí)，應(yīng)該指出，為了調(diào)整乙酸鹽緩沖液，需要首先提供乙酸，然后使用Na0H溶液調(diào)整pH值，而在以前進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中則是使用乙酸鈉，然后使用HC1調(diào)整pH值，這可能導(dǎo)致蛋白聚集物的形成，這可能是由于增加的離子濃度所致。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>。鄉(xiāng)Hds務(wù)蹈婦s^t餘^as+緊ao寸+坩；一歉泰搶紫s歸諷/一ss.o二s/ss9.0*nG\o￡K鵬^酬「l歉"l琳實(shí)施例2:本發(fā)明的G-CSF制劑的生物化學(xué)穩(wěn)定性將實(shí)驗(yàn)級(jí)G-CSF制劑在密封和巻邊的小瓶中、在特定儲(chǔ)存溫度下避光保存，然后使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)試蛋白純度和氧化形式、聚集物和二聚體的存在，這些技術(shù)例如UV光譜術(shù)、使用C4和C18固定相的反相HPLC，或尺寸排阻色譜(SECHPLC)，等點(diǎn)聚焦，在巰基還原和未還原條件下的SDS-PAGE，然后進(jìn)行銀染和Western免疫印跡分析；關(guān)于上面提到的技術(shù)的信息，參見(jiàn)例如WO94/14466的實(shí)施例，其公開(kāi)內(nèi)容在此引為參考。對(duì)于在實(shí)施例1的表l中指出的G-CSF液體制劑，按照指示測(cè)試了它們的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。對(duì)于表面活性劑含量>0.006%的制劑來(lái)說(shuō)，只示例性標(biāo)出了具有0.008%的制劑，作為具有較高表面活性劑含量的制劑表現(xiàn)出明顯更差的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。在關(guān)于實(shí)驗(yàn)組合物中G-CSF的生物化學(xué)穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果是使用低至以及包括O.008%的含量的較高表面活性劑濃度時(shí)，可以觀察到大量的氧化形式的G-CSF的聚集。因此，在本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)與國(guó)際專利WO94/14466中的教導(dǎo)相反，不但較低的表面活性劑濃度，而且在任何情況下高濃度的表面活性劑，對(duì)G-CSF在溶液中的氧化曲線有負(fù)面影響。此外，已經(jīng)確定，表1列出的本發(fā)明的G-CSF制劑的特征在于氧化物質(zhì)的相對(duì)含量低于1%，而在表面活性劑含量為0.008%及以上的對(duì)照樣品中超過(guò)了該閾值，這導(dǎo)致了結(jié)論，即這樣的溶液不能考慮用作候選藥物。實(shí)驗(yàn)組合物中G-CSF的生物化學(xué)穩(wěn)定性的其他實(shí)驗(yàn)，顯示出本發(fā)明的制劑能夠顯著防止G-CSF的聚集和氧化，而不需要另外混入賦形劑例如氨基酸和/或抗氧化劑。實(shí)施例3:G-CSF劑型的可接受性在癌癥患者的三相(threephase)III期臨床研究中，測(cè)試了一種本發(fā)明的液體制劑，其中，尤其檢查了在注射位點(diǎn)附近的患者反應(yīng)。在這里，對(duì)注射位點(diǎn)處發(fā)生的腫脹、發(fā)紅、皮膚流血、對(duì)壓力敏感和其他癥狀，進(jìn)行了檢查。對(duì)于臨床研究來(lái)說(shuō)，根據(jù)表l中實(shí)驗(yàn)制劑1Ia(XM02)的指示選擇了本發(fā)明的G-CSF制劑，并以每天5yg/kg體重的劑量進(jìn)行處理。幸運(yùn)的是，在這些實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，結(jié)果是在總共356位患者中，只有一位患者報(bào)告了不希望的反應(yīng)，即僅僅為0.3%的情況。在使用可商購(gòu)的G-CSF制劑Neupogen^進(jìn)行的對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，可以證實(shí)，本發(fā)明的G-CSF制劑在患者注射位點(diǎn)處的副作用方面，顯示出提高了4倍的可接受性。這些結(jié)果概述在下面的表中。藥物pH總數(shù)陽(yáng)性陽(yáng)性％XM024.235610.3Neupogen4.024931.2安慰劑7.07200.0表2:在三相III期臨床研究中在注射位點(diǎn)處反應(yīng)的頻率。乳腺癌、非Hodgkin's淋巴瘤和肺癌第一個(gè)化療周期的評(píng)估。上述的檢測(cè)得到的結(jié)果表明，通過(guò)分別以各自特定的濃度將作為緩沖物質(zhì)的乙酸和乙酸鹽與表面活性劑例如聚山梨酸酯80，在存在糖醇例如山梨糖醇的情況下混合，并將pH值調(diào)整到大約4.2±0.15，獲得了穩(wěn)定的G-CSF液體制劑，它賦予G-CSF分子以適合作為藥物的穩(wěn)定性，具有良好的可耐受性，此外，還允許幾乎完全防止了當(dāng)使用藥物時(shí)通常可以9在注射位點(diǎn)處觀察到的癥狀。這使得本發(fā)明的G-CSF液體制劑，以及與其一起提供的試劑盒，分別特別適合并有利地用于即用型注射器和與其一起提供的試劑盒中，特別適合于家庭使用。權(quán)利要求包含G-CSF水性液體制劑的藥物，主要含有G-CSF和糖醇，濃度為0.04到0.06mg/ml的表面活性劑，作為緩沖物質(zhì)的濃度為5到20mM、pH值為4.1到4.4的乙酸鹽，以及任選的氨基酸和/或甘油和/或糖類和/或防腐劑。2.權(quán)利要求1的藥物，其中G-CSF是未糖基化的。3.權(quán)利要求1或2的藥物，其中存在的G-CSF的濃度為0.6mg/ml。4.權(quán)利要求1到3任何一項(xiàng)的藥物，其中表面活性劑是聚山梨酸酯。5.權(quán)利要求1到4任何一項(xiàng)的藥物，其中糖醇是山梨糖醇。6.權(quán)利要求1到5任何一項(xiàng)的藥物，其中存在的糖醇的濃度為5%(w/v)。7.權(quán)利要求1到6任何一項(xiàng)的藥物，其中乙酸鹽存在的濃度為大約10mM。8.權(quán)利要求1到7任何一項(xiàng)的藥物，基本上不含氨基酸和/或附加的蛋白。9.權(quán)利要求1到8任何一項(xiàng)的藥物，是注射或灌注溶液。10.含有G-CSF的水性液體制劑作為注射或灌注溶液的藥物，由濃度為0.6mg/ml的人類未糖基化甲硫氨酰-G-CSF和濃度為5%(w/v)的山梨糖醇，濃度為0.06mg/ml的聚山梨酸酯80，以及作為緩沖物質(zhì)的濃度為大約10mM的乙酸鹽組成，pH值為4.2±0.15。11.權(quán)利要求1到io任何一項(xiàng)的藥物，用于治療癌癥，嚴(yán)重慢性中性粒細(xì)胞減少(SCN)，HIV感染，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，由細(xì)胞毒性化學(xué)療法導(dǎo)致的不利副作用，或其中需要?jiǎng)訂T外周血前體細(xì)胞的疾病的伴隨療法。12.用于液體藥物給藥的容器，含有權(quán)利要求1到10任何一項(xiàng)的液體藥物制劑。13.權(quán)利要求12的容器，其中所述容器的至少一個(gè)與液體制劑接觸的表面，涂有由硅酮或聚四氟乙烯或乙烯-四氟乙烯(ETFE)共聚物組成的材料。14.權(quán)利要求12或13的容器，是注射器、安瓿、卡氏瓶或灌注容器。15.權(quán)利要求14的注射器或安瓿，其中存在的液體制劑的濃度，以G-CSF的濃度計(jì)，為0.5ml中0.3mg或0.8ml中0.48mg。16.用于G-CSF的腸胃外給藥的試劑盒，包含權(quán)利要求12到15任何一項(xiàng)的容器，以及用于儲(chǔ)存和/或給藥的說(shuō)明書(shū)。17.權(quán)利要求16的試劑盒，其中G-CSF的給藥以5到30yg/kg體重的劑量提供。18.權(quán)利要求16或17的試劑盒，其中在所述試劑盒中提供5個(gè)注射器或安瓿。19.權(quán)利要求16到18任何一項(xiàng)的試劑盒，其中分別提供了用于注射器和注射和/或灌注針頭的安全隔艙。20.權(quán)利要求16到19任何一項(xiàng)的試劑盒，其中打算儲(chǔ)存在5°C。全文摘要提供了長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定并基本上不含賦形劑的G-CSF液體藥物制劑，以及含有這種制劑的即用型注射器和相應(yīng)的試劑盒。文檔編號(hào)A61K38/19GK101795670SQ200880105177公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2008年8月27日優(yōu)先權(quán)日2007年8月27日發(fā)明者沃爾特·因德雷爾,海因茨·盧貝瑙申請(qǐng)人:百奧杰諾瑞克斯股份有限公司