專利名稱：Ctl誘導劑組合物的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及CTL誘導劑組合物，所述組合物包含用于在多個具有不同HLA型的患 者群中治療或預防癌癥或丙型肝炎病毒相關疾病的肽。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是日本人死亡的主要原因，一年造成大約31萬人死亡。全球每年約600 萬人死于癌癥。癌癥治療采用外科切除術(shù)、抗癌藥物、放射療法等。然而，這些治療方案涉及 復發(fā)、Q0L問題等問題，此外，在無法給予這些治療的晚期癌癥的情況下，缺乏治療選擇。對 作為第四種治療方案的癌癥免疫療法(疫苗療法)的熱切企盼由來已久。全球?qū)﹄囊呙绲?臨床研究始于1990年，當時已可鑒定出人類癌抗原肽。然而，根據(jù)單獨或在聯(lián)合療法中給 予肽的臨床研究統(tǒng)計結(jié)果，在超過1，000例的病例中有效率為2. 7% (Nature Immunology, 2004)，原因是要將肽配制成藥物制劑十分困難。另一方面，本發(fā)明的發(fā)明人進行了特制的肽疫苗療法，并且證實了肽疫苗的安全 有效性，在所述療法中預先檢查了患者的HLA型和特異性免疫應答以選擇待給予的肽疫 苗。準確地講，觀察到通過僅給予特制的肽疫苗對于腦腫瘤和宮頸癌的臨床效果(非專利 文獻1-3)。此外，以允許將其配制成藥物制劑的水平與抗癌藥物合用，在前列腺癌和胰腺癌 中產(chǎn)生了良好的臨床效果，并且安全性也達到了(非專利文獻4和5)。通過特異性T細胞這種被視為癌癥肽疫苗療法中的主要效應物進行的細胞免疫， 是人白細胞抗原(HLA)限制性的，在此基礎上，全世界的研究人員，包括本發(fā)明的發(fā)明人， 都開發(fā)出了僅給予具有特異性HLA類型(HLA-A2和HLA-A24)的患者的疫苗。然而，具有這 兩種HLA類型的患者百分比大約為40-75%，因此其余的25-60%具有較不常見HLA類型的 患者無法受益于肽疫苗的作用。因此，需要對開發(fā)可在全世界用于癌癥患者的肽疫苗進行 研究。已經(jīng)鑒定出結(jié)合 HLA-A24、HLA-A2、HLA-A26 和 HLA-A3 超型(supertype) (HLA-A3、 HLA-A11、HLA-A31、HLA-A33和HLA-A68. 1)中的任一種并且能夠誘導相應HLA的HLA限制性 CTL的肽。據(jù)報告，這些肽可用作針對癌癥的肽疫苗(專利文獻1-13和非專利文獻1-17)。在由本發(fā)明的發(fā)明人根據(jù)這些結(jié)果進行的癌癥疫苗臨床試驗中，使用特制的肽， 預先檢查患者的HLA類型，根據(jù)患者的HLA類型，從候選肽中選出最大4種肽，并給予患者。 因此，如果患者的HLA類型為HLA-A2-A24，則分別從HLA-A2和HLA-A24的一組8種肽(合 計16種肽)中選出肽。然而，在其中患者的HLA-A24是純合的情況下，則應在A24的8種 肽中選出肽。要引入可以作為癌癥疫苗的其它類型的肽十分困難。因此，通過測定肽是否 可以誘導跨不同族群的HLA限制性CTL，對于具有特定HLA類型的患者便可擴大肽的選擇。一方面，尚未充分了解丙型肝炎病毒(HCV)感染后肝細胞疾病的病理機制，但是 多項證據(jù)表明，病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)可以對HCV感染后的肝臟疾病起關 鍵作用(非專利文獻6)。還有研究指出，在病毒感染期間，CTL可有效限制病毒的擴散并消 除病毒(非專利文獻7)。因此，對于防治HCV感染相關疾病，用疫苗誘導CTL可能是有前景的策略。因此，從低成本且易于保存方面考慮，需要開發(fā)用來誘導CTL的肽疫苗。本發(fā)明的發(fā)明人之前曾觀察到C35-44肽可在HLA-A24或HLA-A3超型陽性的患者 中誘導CTL，該肽是一種衍生自HCV核心蛋白序列的肽，其序列為YLLPRRGPRL (SEQ ID NO 25)(專利文獻14)。在此觀察前，已有研究報導了這一 C35-44肽是能夠強力誘導用于消除 HLA-A2陽性個體外周血中的病毒的CTL (非專利文獻8和專利文獻15)。本發(fā)明所引述的文獻如下。下述文獻通過引用結(jié)合到本專利申請中。專利文獻1 國際公布號W0 2005/071075專利文獻2 國際公布號W0 01/011044專利文獻3 日本未審查的專利公布(特開)號2003_270專利文獻4 國際公布號W0 2003/050140專利文獻5 日本未審查的專利公布(特開)號Hei 11-318455(1999)專利文獻6 國際公布號W0 00/12701專利文獻7 國際公布號W0 02/010369專利文獻8 國際公布號W0 99/67288專利文獻9 日本專利申請?zhí)?007-2127179專利文獻10 日本未審查的專利公布(特開)號2004_216專利文獻11 國際公布號W0 2007/000935專利文獻12 國際公布號W0 2005/075646專利文獻13 國際公布號W0 2008/007711專利文獻14 國際公布號W0 2007/083807專利文獻15 國際公布號W0 2007/049394非專利文獻1 :Yajima N等，Clin Cancer Res. 2005年8月 15 日；11(16) :5900_11非專利文獻2 :Mochizuki K 等，Int J Oncol. 2004 年 7 月；25(1) 121-31非專利文獻3 :Tsuda N 等，J Immunother. 2004 年 1-2 月；27 (1) :60_72非專利文獻4 Jnoue Y 等，J Urol. 2001 年 10 月；166 (4) 1508-13. Erratum in J Urol. 2002 年 5 月；167 (5) 2146非專利文獻5 :Yanagimoto H 等，Cancer Sci. 2007 年 4 月；98 (4) :605_11. Epub 2007年2月19日非專利文獻6 Chang KM 等，Springer Semin Immunopathol. 1997 ；19 :57_68非專利文獻7 :Kurokohchi K 等，J. Virol. 1996 ；70 :232_240非專利文獻8 :Takao Y.等，Microbiol. Immunol.，48 (7)，507-517，2004非專利文獻9 :Yamada A 等，Cancer Res. 2001 年 9 月 1 日；61 (17) :6459_66非專利文獻10 :Kobayashi K 等，Cancer Sci. 2003 年 7 月；94 (7) :622_7非專利文獻11 :Nakao M 等，J Immunol. 2000 Mar 1 ； 164 (5) :2565_74非專利文獻12 :Harashima N 等，Eur J Immunol. 2001 年 2 月；31 (2) :323_32非專利文獻 13 :Minami T 等，Cancer Immunol. Immunother. 2007 年，5 月 56(5)689-98非專利文獻14 :Matsueda S 等，Clin Cancer Res. 2005 年 10 月 1 日；11(19 Pt 1) 6933-43
非專利文獻15 :Takedatsu H 等，Clin Cancer Res. 2004 年 2 月 1 日；10(3) 1112-20非專利文獻16 :Naito M 等，Br J Cancer. 2007 年 12 月 17 日；97 (12) 1648-54. Epub 2007 年 11 月 27 日

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供能夠誘導多種HLA類型的HLA限制性CTL的肽。解決技術(shù)問題采用的技術(shù)手段本發(fā)明的目的是提供包含肽的CTL誘導劑組合物，其中所述肽據(jù)報告是具有誘導 HLA-A24、HLA-A2或HLA-A3超型的HLA限制性CTL的能力的已知肽，并且其中所述肽可以 誘導兩個以上HLA類型(包括已報告以外的HLA類型)的HLA限制性CTL。因此，本發(fā)明提供CTL誘導劑組合物，所述CTL誘導劑組合物包含一種或多種肽并 可用于在兩個以上患者群中治療或預防癌癥和/或由丙型肝炎病毒引起的疾病，其中一種 或多種肽選自 EGFR-800(SEQ ID NO 1)、Lck-208 (SEQ ID NO :2)、Lck-488 (SEQ ID NO :3)、 MRP3-1293(SEQ ID NO :4)、PAP-213(SEQ ID NO :5)、PSA-248(SEQID NO :6)、SART2-93(SEQ ID NO 7), SART3-109 (SEQ ID NO :8)、SART3-302 (SEQ ID NO :9)、Lck-246 (SEQ ID NO: 10)、ppMAPkkk-432(SEQ ID NO : 11)、WHSC2-103 (SEQ ID NO : 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13)、HNRPL-501(SEQ ID NO : 14)、CypB-129 (SEQ ID NO : 15)、Lck-422 (SEQ ID NO: 16)、 Lck-449(SEQ ID NO : 17)、3 -微管蛋白 5-154 ( 3-tubulin5_154)(SEQ ID NO: 18)、 Lck-90 (SEQ ID NO :19)、PSA-16 (SEQ ID NO :20)、PAP-248 (SEQ ID NO :21)、IEX1-47 (SEQ ID NO 22)、SART3-511 (SEQ ID NO 23)、SART3-734 (SEQ ID NO 24)、C35-44 (SEQ ID NO 25)、PAP-155(SEQ ID NO 26)和 0-tubuline-309 (SEQ ID NO :27)，其中兩個以上患者群 選自HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、HLA-A26陽性患者群和HLA-A3超型陽性患 者群o本發(fā)明還提供藥物組合物，所述藥物組合物是包含一種或多種肽并可用于在 兩個以上患者群中治療或預防癌癥的組合物，其中一種或多種肽選自EGFR-800(SEQ ID NO :1)、Lck-208 (SEQ ID NO 2), Lck-488 (SEQ ID NO :3)、MRP3-1293 (SEQ ID NO :4)、 PAP-213(SEQID NO :5)、PSA-248(SEQ ID NO 6)、SART2-93(SEQ ID NO :7)、SART3-109(SEQ ID NO 8), SART3-302 (SEQ ID NO 9), Lck-246 (SEQ ID NO : 10)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO 11), WHSC2-103 (SEQID NO : 12)、UBE-43 (SEQ ID NO : 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)、 CypB-129 (SEQ ID NO :15)、Lck-422 (SEQ ID NO 16), Lck-449 (SEQID NO: 17)、3 -微管蛋 fi 5-154 (SEQ ID NO : 18)、Lck-90 (SEQ ID NO :19)、PSA-16 (SEQ ID NO :20)、PAP—248 (SEQ ID NO :21)、IEX1-47(SEQ ID NO 22)、SART3-511 (SEQ ID NO 23)、SART3-734 (SEQ IDN0 24)、PAP-155(SEQ ID NO 26)和 0-tubuline-309 (SEQ ID NO :27)，其中兩個以上患者群 選自HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、HLA-A26陽性患者群和HLA-A3超型陽性患 者群o包含一種或多種選自以下肽的本發(fā)明組合物可以誘導HLA-A24和HLA-A2兩者的 HLA限制性CTL，并可用于治療或預防HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A2陽性癌癥患者群EGFR-800(SEQ ID NO 1)、Lck_488(SEQ ID NO :3)、SART2_93(SEQ ID NO :7)、SART3_109(SEQ ID NO 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO 12)、UBE-43 (SEQ ID NO 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)、CypB-129(SEQ ID NO 15)和 PAP_155(SEQ ID NO :26)。包含一種或多種選自以下肽的本發(fā)明組合物可以誘導HLA-A24和HLA-A3超型 兩者的HLA限制性CTL，并可用于治療或預防HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽 性癌癥患者群EGFR-800(SEQ ID NO 1)、SART2-93 (SEQ ID NO :7)、SART3-109 (SEQ ID NO 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO 12)、UBE-43 (SEQ ID NO 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)、 3 -微管蛋白 5-154 (SEQ ID NO :18)、Lck-90(SEQ ID NO: 19)和 IEX1_47(SEQ ID NO :22)、 PAP-155(SEQID NO 26)和 3-tubuline-309(SEQ ID NO :27)。包含一種或多種選自以下肽的本發(fā)明組合物可以誘導HLA-A2和HLA-A3超型兩 者的HLA限制性CTL，并可用于治療或預防HLA-A2陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性 癌癥患者群SART2-93(SEQ ID NO :7)、SART3-109 (SEQ ID NO :8)、Lck-246 (SEQ ID NO: 10)、ppMAPkkk-432(SEQ ID NO : 11)、WHSC2-103 (SEQ ID NO 12), UBE-43 (SEQ ID NO: 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO : 14)、Lck-422 (SEQID NO : 16)、Lck-90 (SEQ ID NO 19)和 SART3-511(SEQ ID NO 23)。包含一種或多種選自以下肽的本發(fā)明組合物可以誘導HLA-A2、HLA-A24和HLA-A3 超型的HLA限制性CTL，并可用于治療或預防HLA-A2陽性癌癥患者群、HLA-A24陽性癌癥患 者群和 HLA-A3 超型陽性癌癥患者群SART2-93(SEQ ID NO :7)、SART3_109 (SEQ ID NO :8)、 WHSC2-103 (SEQ ID NO 12), UBE-43 (SEQ ID NO: 13)和 HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)。包含一種或多種選自以下肽的本發(fā)明組合物可以誘導HLA-A26的HLA限制性CTL， 并且除上述患者群以外，還可用于治療或預防HLA-A26陽性癌癥患者群EGFR-800(SEQ ID NO 1)、ppMAPkkk-432(SEQ ID NO 11),HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)和 SART3-109 (SEQ IDN0 8)。包含肽C35-44(SEQ ID NO 25)的本發(fā)明組合物可用于治療或預防HLA-A24陽性 患者、HLA-A2陽性患者、HLA-A3超型陽性患者和HLA-A26陽性患者的丙型肝炎病毒相關疾 病，即治療或預防患者群的與HCV感染有關的肝炎、肝硬化和肝癌。發(fā)明的效果本發(fā)明CTL誘導劑組合物中包含的肽具有誘導多個HLA類型的HLA限制性CTL的 能力，因此可用于治療或預防患者的癌癥和丙型肝炎感染相關疾病，所述患者的HLA類型 不是之前已知的所述肽誘導HLA限制性CTL的HLA類型。本發(fā)明為具有相應HLA類型的患 者提供較大選擇范圍的肽，可供在特制的癌癥疫苗療法中進行更有效的治療。另外，包含由C35-44 (SEQ ID NO 25)表示的肽的CTL誘導劑組合物能夠在 HLA-A24陽性患者、HLA-A2陽性患者、HLA-A3超型陽性患者和HLA-A26陽性患者中的任一 患者體內(nèi)誘導CTL，并可用于治療或預防丙型肝炎病毒相關疾病。附圖簡述

圖1表示通過刺激得自具有HLA-A24-結(jié)合SART3-109的HLA-A11陽性癌患者的 PBMC所得到的CTL的細胞毒活性。圖2表示具有結(jié)合HLA-A26陽性細胞的不同結(jié)合特性的不同肽的結(jié)合活性。圖3表示得自HLA-A3超型等位基因陽性前列腺癌患者的肽刺激的PBMC的細胞毒活性。用肽刺激得自HLA-A3超型等位基因陽性前列腺癌患者的PBMC，通過6小時51Cr 釋放測定法(6_hour51Cr releaseassay)測定PBMC針對多種靶細胞的細胞毒活性。得自 HLA-A3超型等位基因陽性健康志愿者的PHA刺激的幼稚T細胞母細胞(blast-forming T cell blast)用作對照。*p < 0. 05。實現(xiàn)發(fā)明的最佳方式所謂“與兩種以上選自HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26的HLA分子結(jié)合” 是指肽可與兩種以上選自HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26分子的HLA分子形成復 合物并可呈現(xiàn)在細胞表面。本發(fā)明中，通過用肽刺激外周血單核細胞(PBMC)，并通過ELISA法等測定肽刺激 的PBMC是否對經(jīng)相應肽進行脈沖處理的抗原呈遞細胞產(chǎn)生應答并產(chǎn)生細胞因子(例如 IFN- y )，可檢測誘導肽特異性CTL的能力。另外，經(jīng)誘導的CTL的細胞毒活性可通過51Cr 釋放測定法等予以證實。本發(fā)明的肽可通過常規(guī)肽合成法制備。用于此目的的方法包括例如以下文獻披 露的方法:Peptide Synthesis, Interscience，New York，1966 ；The Proteins，第 2 卷， Academic Press Inc. ，New York, 1976 ；Peptide Synthesis[日 t]，MARUZEN Co. ， Ltd.， 1975 ；Basics AndExperiments In Peptide Synthesis[ 0 i ], MARUZEN Co. ，Ltd. ,1985 ； 以及 Development Of Pharmaceuticals，第二系列，第 14 卷，PeptideSynthesis[日文]， Hirokawa Shoten Co. ，1991。本發(fā)明CTL誘導劑組合物中包含的肽通過使包含本發(fā)明肽的氨基酸序列的多肽 經(jīng)胞內(nèi)斷裂而產(chǎn)生。本發(fā)明還包括在這類實施方案中使用本發(fā)明的肽?？砂葱枰鵁o任何 限制地選擇這類多肽的氨基酸殘基數(shù)和氨基酸序列，只要所述多肽可以提供本發(fā)明的肽。本發(fā)明CTL誘導劑組合物中包含的肽可有效地誘導特異性殺死兩種以上選自以 下患者群體內(nèi)的癌細胞的CTL并使之擴增HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26陽性 患者群，因此可用于治療各種癌癥患者。本發(fā)明提供用于治療或預防癌癥的藥物組合物，所述組合物包含如上具體說明的 肽。本發(fā)明用于治療或預防癌癥的藥物組合物可包含一種肽、或兩種以上肽和/或其衍生 物的組合。由于得自癌癥患者的CTL是識別不同癌-抗原肽的細胞亞型，因此還可有效地 使用多種癌_抗原肽和/或其衍生物的組合。本發(fā)明的肽還可與本發(fā)明以外的癌抗原肽合用。本發(fā)明用于治療或預防癌癥的藥物組合物可包含各含有多種肽(例如包括各本 發(fā)明的肽在內(nèi)的8種肽)的藥物制劑，使得該組合物可用于特定療法。本發(fā)明的藥物組合物除肽以外還可包含藥學上可接受的載體等。所用載體可為纖 維素、聚合氨基酸、白蛋白等。本發(fā)明的藥物組合物可包括脂質(zhì)體制劑、與直徑為幾微米的 微珠粒子結(jié)合的制劑、與脂質(zhì)結(jié)合的制劑等。還可與之前已知用于疫苗接種的佐劑聯(lián)合給 予本發(fā)明的藥物組合物，以使得有效地產(chǎn)生免疫應答。給藥方法包括例如真皮內(nèi)或皮下給 藥等。本發(fā)明用于治療或預防癌癥的藥物組合物可以用作癌癥疫苗?？筛鶕?jù)疾病狀況、 個體患者的年齡和體重等，適當調(diào)整劑量。一般地講，藥物組合物中肽含量的范圍通常為 0. 0001-1000mg,優(yōu)選 0. 001-100mg,更優(yōu)選 0. 01-10mg，甚至更優(yōu)選 0. l_5mg 或 0. 5_3mg，優(yōu)選重復給藥，每幾天、幾周或幾個月一次。本發(fā)明還提供誘導癌反應性CTL的方法，該方法包括使采自HLA-A24、HLA-A2、 HLA-A26或HLA-A3超型呈陽性的癌癥患者群的外周血單核細胞(PBMC)與本發(fā)明的肽接觸。 本發(fā)明的肽可以從得自兩種以上上述癌癥患者群的PBMC中誘導CTL。有關CTL的“癌反應 性”是指CTL識別靶標癌細胞的癌抗原肽和HLA分子的復合物，并且能夠殺死癌細胞。例 如，在本發(fā)明的肽存在下，將采自HLA-A24呈陽性的惡性腦腫瘤患者的PBMC在體外進行培 養(yǎng)，以進行CTL的誘導。本發(fā)明誘導CTL的方法可用于過繼免疫療法，其中將誘導后的CTL 輸回到從中采集PBMC的患者體內(nèi)以殺死癌細胞。本發(fā)明還提供用于誘導CTL的試劑盒，所述試劑盒用于實施所述誘導CTL的方法。 本發(fā)明的試劑盒包括一種或多種本發(fā)明的肽，并且還可包括合適的緩沖液、培養(yǎng)基等。本發(fā)明還提供用于制備抗原呈遞細胞的方法，其中所述抗原呈遞細胞可以誘導 針對選自以下的癌細胞具有細胞毒性的CTL :HLA-A24陽性癌細胞、HLA-A2陽性癌細胞、 HLA-A26陽性癌細胞和HLA-A3超型陽性癌細胞。例如，通過將衍生自HLA-A24陽性癌癥患 者的具有抗原呈遞能力的細胞與本發(fā)明的肽一起培養(yǎng)，使得該肽與HLA-A24分子結(jié)合并呈 遞，以實施本發(fā)明用于制備抗原呈遞細胞的方法。或者在替代方法中，可將能夠表達這類肽 的載體導入衍生自HLA-A24陽性癌癥患者的具有抗原呈遞能力的細胞中以表達該肽。具有 抗原呈遞能力的細胞包括例如樹突細胞。可以獲得衍生自患者的樹突細胞，例如，從采自患 者的PBMC中分離出培養(yǎng)平板貼壁細胞后，將貼壁細胞在IL-4和GM-CSF存在下培養(yǎng)大約1 周。通過本發(fā)明方法制備的抗原呈遞細胞可以誘導特異性識別呈遞在兩種以上選自以下細 胞的細胞表面上的肽與HLA分子的復合物的CTL :HLA-A24陽性癌細胞、HLA-A2陽性癌細胞 和HLA-A3超型陽性癌細胞，并且當給予癌癥患者時，可在癌癥患者體內(nèi)促進癌反應性CTL 的誘導。即通過本發(fā)明方法制備的抗原呈遞細胞可以作為藥物用于治療或預防癌癥。本發(fā)明還提供用于制備抗原呈遞細胞的試劑盒，該試劑盒用于實施所述用于制備 抗原呈遞細胞的方法。本發(fā)明的試劑盒包括一種或多種本發(fā)明的肽和/或其衍生物，并且 還可包括合適的緩沖液、培養(yǎng)基等。本發(fā)明還提供包含肽C35_44(SEQ ID NO 25)的CTL誘導劑組合物，并用于治療或 預防HLA-A24陽性患者、HLA-A2陽性患者和HLA-A3超型陽性患者的丙型肝炎病毒相關疾 病。本發(fā)明中，“丙型肝炎病毒相關疾病”往往不僅包括丙型肝炎，而且還包括由于HCV感染 引起的所有疾病，例如肝硬化和肝癌。下面參照下列實施例對本發(fā)明進行更詳細說明，這并不意味著以任何方式將本發(fā) 明局限于此。本發(fā)明的發(fā)明人檢測了已知能夠誘導HLA-A24、HLA-A2、HLA-A26和HLA-A3超型任 一種的HLA限制性CTL的共34種肽結(jié)合其它HLA類型的能力(分別為13種、9種和12種 肽)。表1表示本發(fā)明的發(fā)明人檢測的肽及其已知的HLA結(jié)合特性。表 1 肽
制備表1中列舉的肽。所有這些肽的純度均> 90 % 并購自 Biologica Co. (Nagoya, Japan)。 Gag77-85 (SLYNTVATL) (SEQ ID NO 35)用作結(jié)合 HLA-A2 型的對照肽，env-GP (RYLRDQQLL) (SEQ ID NO :36)用作結(jié)合 HLA-A24 型的對照肽，HIV-Gagl67-175(EVIPMFSAL) (SEQ ID NO: 37)用作結(jié)合HLA-A26型的對照肽，HIV衍生的肽(RLRDLLLIVTR) (SEQ ID NO 38)用作結(jié)合 HLA-A3超型等位基因分子的對照肽。使用二甲亞砜使劑量為lOyg/ml的肽完全溶解。HLA-A3超型中所包括的5個HLA-A等位基因有共同的結(jié)合基序，但是HLA-A3 或HLA-A68. 1陽性的日本人個體十分罕見。因此，在本研究中，檢測了肽結(jié)合HLA-A11、 HLA-A31和HLA-A33分子的能力。
患者(PT)本研究包括其HLA-A2、HLA-A24、HLA-A26、HLA-A11、HLA-A31 和 HLA-A33 中的任一 種HLA呈陽性的癌癥患者。健康供體(HD)健康供體包括了 HLA-A2陽性患者、HLA-A24陽性患者、HLA-A26陽性患者、HLA-A11 陽性患者、HLA-A31陽性患者和HLA-A33陽性患者。由其采集PBMC的全部患者和健康供體都未感染HIV。從患者/健康供體中采集20 毫升外周血，通過菲可(Ficoll)-康銳(Conray)梯度離心制備PBMC。將全部樣品在低溫 下保存，直到用于實驗。使用下列抗體通過流式細胞術(shù)證實了 HLA-A2、HLA-A24、HLA-A11、 HLA-A31和HLA-A33分子在PBMC中的表達抗HLA-A24單克隆抗體(mAb)、抗HLA_A2mAb、抗 HLA-A26mAb、抗 HLA-AllmAb、抗 HLA_A31mAb、抗 HLA_A33mAb (所有均獲自 One Lambda, CA, USA)；以及FITC綴合的抗小鼠免疫球蛋白G(IgG)mAb。細胞系表達HLA-A2的 T2 細胞獲自 ATCC(CRL-1992)。C1R-A24、C1R-A26、C1R-A11、C1R_A31 和 C1R-A33 是 C1R 親本細胞系分別用 HLA-A24、HLA-A26、HLA-A11、HLA-A31 和 HLA-A33 基因 轉(zhuǎn)染以表達相應 HLA 分子的細胞(Takedatsu 等，Clin Cancer Res 2004 ;10 :111220)。C1R 親本細胞是人B淋巴母細胞(HMy2.CIR:人B淋巴母細胞；ATCC CRL-1993)，并屬于用、射 線照射HMy. 2B類淋巴母細胞細胞系，通過抗體和補體選擇表達MHC I類-Cw4并缺乏HLA I-A 類禾PHLA I-B 類的細胞所得到的細胞系(Storkus WJ，Alexander J, Payne JA, Dawson JR 禾口 Cresswell P, Procnatl acad sci USA，86 :2361_2364，1989)。 RMA-S-A2601是通過將HLA-A2601基因?qū)隦MA-S細胞后所產(chǎn)生的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 細胞(RMA-S細胞是一種作為變異體RMA細胞分離出來、顯示MHC I類分子在細胞膜上 低表達的細胞Karre K, Ljunggren H_G，Piontek G 和 Kiessling R. 1986，Selective rejection ofH-2-deficient lymphoma variants suggest alternative immune defencestrategy (H_2_缺陷型淋巴瘤變異體的選擇性排斥表明替代免疫防御策略)， Nature(Lond)319 675)。PC-93是前列腺肉瘤細胞系，為HLA-A11陰性。TSU-PR是前列腺癌細胞系，為 HLA-A11陽性。SQ-1是肺癌細胞系，為HLA-A11陰性。C0L0-201是結(jié)腸癌細胞系，為HLA-A11 陽性。LC-1是肺癌細胞系，為HLA-A31/HLA-A33陽性。將所有這些腫瘤細胞系在含有10% FCS 的 RPMI 1640(Invitrogen)中進行培養(yǎng)。PBMC中肽反應性CTL的誘導對以前報告的方法略作修改以檢出肽反應性CTL(Hida N, MaedaY, Katagiri K， Takasu H, Harada M, Itoh K.，Cancer ImmunolImmunother 2002 ；51 :219_28)。將按常規(guī) 方法由各個患者(PT)和健康供體(HD)中獲得的PBMC在體外用相應的肽或?qū)φ针拇碳ぁ?將所得的肽刺激的PBMC與經(jīng)肽(與用于刺激PBMC的肽相同)脈沖處理過的T2、C1R-A24、 C1R-A26、C1R-A11、C1R-A31或C1R-A33細胞共培養(yǎng)后，測定所產(chǎn)生的用作CTL誘導標志的 IFN-y的量。具體地講，在U型底96孔微量培養(yǎng)板(Nunc，Roskilde，Denmark)中的200 u 1培 養(yǎng)基中，按一組4孔將PBMC (lxlO5個細胞/孔)與肽的每一種(lOyl/ml) —起孵育。培養(yǎng)基由 45% RPMI 1640,45% AIM-V 培養(yǎng)基(Gibco-BRL，Gaithersburg, MD) ,10% FCSU00U/ ml白介素-2(IL-2)和0. ImM MEM非必需氨基酸溶液(Gibco-BRL)組成。每3天取出一半 培養(yǎng)基后，用含有相應肽(lOyg/ml)的新鮮培養(yǎng)基替換。培養(yǎng)后第15天，將一半培養(yǎng)細胞 與經(jīng)相應肽脈沖處理過的T2、C1R-A24、C1R-A26、C1R-A11、C1R-A31或C1R-A33細胞相混合， 另一半與經(jīng)相應對照肽脈沖處理過的T2、C1R-A24、C1R-A26、C1R-A11、C1R-A31或C1R-A33 細胞相混合。將各種混合的培養(yǎng)物再孵育18小時。然后，收集上清液，通過酶聯(lián)免疫吸附測 定法(ELISA)測定上清液中干擾素(IFN)-y的水平。與經(jīng)相應對照肽脈沖處理過的細胞 相比，當在響應經(jīng)相應肽脈沖處理過的細胞時P值小于0. 05且產(chǎn)生超過50pg/ml的IFN-Y 時，肽反應性CTL的誘導被認定為陽性。細胞毒活件的測定通過標準6小時51Cr釋放測定法測定了肽刺激的PBMC針對HLA-A11陽性細胞系 TSU-ra和HLA-A11陰性細胞系PC93的細胞毒活性。使用衍生自HLA-A11陽性健康供體的 植物凝集素(PHA)激活的T細胞作為陰性對照細胞。在圓底96孔板中，按效應細胞與靶細 胞的規(guī)定比率，將2，000個細胞/孔的51Cr標記的靶細胞與效應細胞一起培養(yǎng)。在臨測定 細胞毒活性實驗之前，使用⑶8陽性分離試劑盒(Dynal，Oslo, Norway)，從肽刺激的PBMC 中分離出CD8陽性T細胞，所獲得的細胞用作效應細胞。將從實驗中得到的c. p.m.減去自 發(fā)釋放的c. p. m.，計算得到特異性51Cr釋放。從不存在效應細胞培養(yǎng)的樣品上清液中測定 自發(fā)釋放，隨后樣品用 曲通 X(Wako PureChemical Industries, Osaka, Japan)培養(yǎng)以 測定總釋放。肽與HLA-A26分子的結(jié)合試驗將用HLA-A2601基因轉(zhuǎn)染的RMA-S細胞(RMA-S-A2601)在26°C下培養(yǎng)20小時， 接著與濃度為0. 1-100 u M的各種肽及人0 2-微球蛋白一起在26°C下培養(yǎng)2小時，然后在 37°C下再培養(yǎng)3小時。細胞用PBS洗滌后，向細胞中加入最適濃度的抗人MHC I類抗體或 HLA類型特異性抗體后，放置在冰中30分鐘。細胞用PBS洗滌2次，然后加入Alexa Fluor 488標記的山羊抗小鼠IgG，使之在冰中靜置30分鐘。使用流式細胞儀進行了測量，并對熒 光強度進行了比較。肽是否能夠誘導多種HLA類型的HLA限制性CTL的檢測從過去已鑒定的癌癥肽疫苗的候選肽中，在總共34種肽中選出與HLA-A2、 HLA-A24和HLA-A3超型結(jié)合的肽(分別為9種、13種和10種肽)，并檢測這些肽誘導其類 型不同于被最初證實每種肽與之結(jié)合的HLA的HLA限制性CTL的能力。得自具有不同HLA 類型的患者的外周血用相應的肽刺激，通過使用經(jīng)肽脈沖處理過的細胞(相當于通過轉(zhuǎn)染 每個類型的HLA基因所產(chǎn)生的C1R轉(zhuǎn)染細胞)作為靶標，來測定誘導CTL的能力。在HLA-A24結(jié)合肽中，首先用如SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 8所示的肽檢查了交 叉反應性。EGFR-800(SEQ ID NO 1)誘導 HLA-A11 的 HLA 限制性 CTL，Lck-488 (SEQ ID NO: 3)誘導 HLA-A2 的 HLA 限制性 CTL，SART2-93 (SEQ ID NO 7)誘導 HLA-A2 和 HLA-A11 的 HLA 限制性 CTL，以及 SART3-109 (SEQ ID NO 8)誘導 HLA-A2、HLA-A11 和 HLA-A31 的 HLA 限制 性CTL (表2)。該表中，數(shù)字表示IFN-y水平(ng/ml)，其中水平等于或大于50ng/ml視為 顯著?？瞻醉棻硎疚催M行實驗，減號(_)表示IFN-y的水平在檢出限以下。表2
表2 :HLA-A24 結(jié)合肽誘導 HLA-A2、HLA_A11、HLA_A31 或 HLA-A33 的 HLA 限制性 CTL
的能力 同樣，在HLA-A2結(jié)合肽中，用如SEQ ID NO :9 SEQ ID N0:16所示的肽檢查 了交叉反應性。發(fā)現(xiàn)CypB-128(SEQ ID NO 15)能夠誘導HLA-A24的HLA限制性CTL， Lck-246 (SEQ ID NO 10)能夠誘導 HLA-A11 和 HLA-31 的 HLA 限制性 CTL，Lck-422 (SEQ ID NO 16)能夠誘導 HLA-A31 的 HLA 限制性 CTL, ppMAPkkk(SEQ ID NO 11)能夠誘導 HLA-11 和 HLA-A31 的 HLA 限制性 CTL，WHSC2-103 (SEQID NO 12)能夠誘導 HLA-A24 和 HLA-A31 的 HLA 限制性 CTL，UBE-43 (SEQ ID NO 13)能夠誘導 HLA-A24 和 HLA-A31 的 HLA 限制性 CTL， 以及 HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)能夠誘導 HLA-A24 和 HLA-A11 的 HLA 限制性 CTL (表 3)。 該表中，數(shù)字表示IFN-y水平(ng/ml)，其中水平等于或大于50ng/ml視為顯著。表3表3 :HLA-A2結(jié)合肽誘導HLA-A24、HLA-A11或HLA-A31的HLA限制性CTL的能力 另外，在HLA-A3超型結(jié)合肽中，用如SEQ ID N0:17 SEQ IDN0 :27所示的肽檢查 了交叉反應性。發(fā)現(xiàn)3 -微管蛋白5-154 (SEQ IDN0 18)能夠誘導A24的HLA限制性CTL， Lck-90 (SEQ ID NO 19)能夠誘導 A2 的 HLA 限制性 CTL，IEX1-47 (SEQ ID NO 22)能夠誘導 A24的HLA限制性CTL,以及SART3-511 (SEQ ID NO 23)能夠誘導A2的HLA限制性CTL (表 4)。該表中，數(shù)字表示IFN-y水平(ng/ml)，其中水平等于或大于50ng/ml視為顯著。表4表4 :HLA-A3結(jié)合肽誘導HLA-A2或HLA-A24的HLA限制性CTL的能力 不同的HLA-A3-超型限制件細胞毒活件SART3-109 (SEQ ID NO :8)，一種已知結(jié)合HLA-24的肽，用來刺激得自HLA-A11陽 性前列腺癌患者的PBMC以誘導CTL。所得CTL的細胞毒活性在鉻釋放反應中得到證實。至 于針對HLA-A11陽性細胞系TSU-PR的細胞毒活性，與HLA-A11陰性細胞系PC93以及得自 HLA-A11陽性健康供體的PHA刺激的淋巴母細胞相比，針對TSU-PR細胞系的鉻釋放速率顯 著較高(圖1)。肽與HLA-A26的結(jié)合試騎對結(jié)合RMA-S-A2601的各種肽的能力進行了檢測。將肽溶于DMS0后使用。僅 DMS0用作陰性對照。從這些實驗結(jié)果來看，顯示出能夠誘導HLA-A24限制性的CTL的 SART3-109 (SEQ ID NO 8)也與屬于完全不同HLA超型的HLA-A26結(jié)合。同樣，研究表明同樣是HLA-A24限制性的EGFR-800(SEQ ID NO 1)也與HLA-A26分子結(jié)合，雖然水平較低(圖 2)。Lck-90和Lck-449肽與HLA-A3超型等位基因的結(jié)合能力數(shù)據(jù)表明Lck-90 (SEQ ID NO 19)和 Lck-449 (SEQ ID NO 17)月太結(jié)合 HLA-A3 超型 等位基因的能力如下，正如專利文獻9中所公開的一樣。對于Lck-90和Lck-449肽已經(jīng)證實的是，在HLA-A3陽性前列腺癌患者血漿中 非常頻繁地觀察到肽反應性IgG。同樣，由得自HLA-A3超型等位基因陽性前列腺癌患者 的PBMC誘導Lck-90和Lck-449肽特異性CTL的能力通過上述方法得到證實。Lck-90和 Lck-449肽分別誘導與以下相應肽的反應性CTL 得自7名HLA-A11陽性癌患者中的5名和 2名患者、5名HLA-A31陽性癌患者中的3名和3名患者、以及5名HLA-A33陽性癌患者的 2名和3名患者的PBMC的相應肽。得自HLA-A3超型等位基因陽性前列腺癌患者的PBMC在體外用Lck-90 (SEQ ID NO 19)或Lck-449 (SEQ ID NO 17)肽刺激以檢測肽反應性CTL是否因此誘導針對癌細胞的 細胞毒活性。比起針對HLA-A11陰性C0L0 201細胞和陰性對照即得自HLA-A11陽性健康供 體的PHA刺激的幼稚T細胞母細胞，得自HLA-A11陽性患者分別用Lck-90和Lck-449肽刺 激的PBMC具有較高水平的針對HLA-A11陽性SQ-1細胞的細胞毒活性。同樣，觀察到這些肽 能夠從得自HLA-A31陽性患者和HLA-A33陽性患者的PBMC中誘導LC_1 (HLA-A31+/-A33+)反 應性CTL。比起C0L0 201細胞或幼稚T-細胞，每種肽的特異性CTL都具有針對LC-1細胞較 強的細胞毒活性。因此，研究表明在體外用Lck-90和Lck-449肽刺激的PBMC以HLA-A11、 HLA-A31和HLA-A33限制性方式對癌細胞發(fā)揮細胞毒活性。細胞毒活性的測定得自具有各種HLA類型的癌癥患者的PBMC用肽刺激以檢測肽誘導針對各HLA類 型的CTL的活性。使用各具有與每名患者HLA類型相應的HLA類型的癌細胞系作為靶細胞， 通過標準6小時51Cr釋放測定法測定針對靶細胞的細胞毒活性。用于該測定法的靶細胞是下列癌細胞系PC93 (A68)、KE4 (A24/A26)、 KE5 (A1101/)、PC93-A24(A24/A68)、PC93-A33(A33/A68)、PC93-A31(A31/A68)、 C0L0 201 (A0101/0201)、11_18 (A0201/A2402)、TSU-PR(All)、LC-1 (A3101/A3303)、 Panc-1 (A0201/A1101)、LC-1(A3101/A3303)、LC65A(1101/2402)、LNCap-Al1(A11/ A0101/0201)、KNS42(A2402/2601)、LNCap-A24 (A24/A0101/0201)禾口 LNCap-A31 (A31/ A0101/0201)。使用 QG56 (A2601)、PC93 (A68)、LNCap (A0101/0201)、LC-1 (A3101/A3303)、 COLO 201 (A0101/0201)、COLO 320 (A2402/)和K562作為陰性對照。括號內(nèi)表示各個細胞 系的HLA類型。有關上述方面，意思是指PC93(WT)表達HLA-A68，且例如當靶細胞表示為 PC93-A24時，是指導入HLA-A24編碼基因所產(chǎn)生的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞。所有腫瘤細胞系都在含 有10% FCS的RPMI 1640(Invitrogen)中培養(yǎng)。在表示結(jié)果的表5中，HLA僅表示轉(zhuǎn)染細 胞，“ (WT)”則表示非轉(zhuǎn)染細胞。在表示結(jié)果的表5中，按照同樣方法，使用HLA類型不同于從中得到PBMC的癌癥 患者的HLA類型的腫瘤細胞系作為陰性對照靶細胞，檢測由肽激活的PBMC介導的細胞毒活 性，當觀察到比起針對陰性對照靶細胞的細胞毒活性，針對HLA配型靶細胞的細胞毒活性 有統(tǒng)計顯著性時，則認為發(fā)生了所述HLA類型的HLA限制性細胞毒活性的誘導，用“ + ”標注。表5表示用于試驗的HLA配型靶細胞和對照靶細胞。當各類細胞未記錄在該表中，并標注 為“ + ”，它是指用于誘導指定HLA類型的HLA限制性CTL的肽活性是已知的。對于作為HCV衍生肽的C35-44 (SEQ ID NO 25)的肽特異性CTL活性，按照常規(guī)方 法，使用用C35-55肽刺激得自HCV感染患者的PBMC所得到的細胞，并使用用各相應HLA基 因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并用C35-44經(jīng)脈沖處理過的C1R細胞作為HLA配型靶細胞，CIR(WT)作為陰性 對照靶細胞，在鉻釋放反應中測定該肽的活性。在圓底96孔板中，將2，000個細胞/孔的51Cr標記的靶細胞與效應細胞(效應細 胞與靶細胞之比為40) —起培養(yǎng)。在臨測定細胞毒活性實驗之前，使用CD8陽性分離試劑 盒(Dynal，Oslo, Norway)，從肽激活的PBMC中分離出⑶8陽性T細胞，所獲得的細胞用作 效應細胞。將從實驗中得到的c. P.m.減去自發(fā)釋放的c. p.m.，計算得到特異性51Cr釋放。 從不存在效應細胞培養(yǎng)的樣品上清液中測定自發(fā)釋放，隨后樣品用曲通X(Wako Pure Chemical Industries，Osaka，Japan)培養(yǎng)以測定總釋放。分別在使用針對HLA I類和CD8的單克隆抗體的特異性抑制實驗以及在使用未 標記靶細胞的未標記靶標抑制實驗(cold-targetsuppression experiment)中，鑒定出經(jīng) 誘導的HLA限制性CTL的HLA類型和肽特異性。這些實驗按一式三份進行，當與陰性對照 相比時，觀察到用抗體或未標記靶標(未用同位素標記的靶細胞)的抑制為顯著水平(P <0.05)時，視為陽性，用“ + ”表示。結(jié)果HLA-A2 結(jié)合肽實驗表明，C35-44(SEQ ID NO 25)具有誘導 HLA-A2402、HLA-A2601、HLA-A3101、 HLA-A3303 和 HLA-A1101 的 HLA 限制性 CTL 的能力。實驗表明，CypB-129(SEQID NO 15)、Lck_422 (SEQ ID NO :16)、SART3_302 (SEQ ID NO 9)、UBE-43 (SEQ ID NO 13)和 WHSC2-103 (SEQ ID NO 13)具有誘導 HLA-A3101 的 HLA 限制性CTL的能力。實驗表明，HNRPL-501(SEQ ID NO 14)和 ppMAPkkk-432 (SEQID NO 11)具有誘導 HLA-2601的HLA限制性CTL的能力。HLA-A24 結(jié)合肽實驗證實，SART3-109(SEQID NO )具有誘導 HLA-A3101、HLA_A3303 和 HLA-A1101 的HLA限制性CTL的能力，Lck208具有誘導HLA-A1101的HLA限制性CTL的能力，EGRF-800 具有誘導HLA-A0201的HLA限制性CTL的能力，SART2-93具有誘導HLA-A0201和A0207的 HLA限制性CTL的能力。HLA-A 結(jié)合肽實驗表明，PAP-155具有誘導HLA-A0201和HLA-A2402的HLA限制性CTL的能力、 3 -tubline-309和Lck_90具有誘導HLA-A2402的HLA限制性CTL的能力。這些結(jié)果概括 于表5中。
性患者群、HLA-A26陽性患者群和HLA-A3超型陽性患者群，因此適用于對這類患者進行治 療或預防。本發(fā)明如SEQ ID N0:l-24和SEQ ID NO :26_27所示的肽特別適合用作癌癥肽 疫苗的活性成分，本發(fā)明如SEQ ID NO :25所示的肽適用于治療或預防丙型肝炎病毒相關疾病。
權(quán)利要求
一種CTL誘導劑組合物，所述組合物包含一種或多種肽并可用于在兩個以上患者群中治療或預防癌癥或丙型肝炎病毒相關疾病，其中所述一種或多種肽選自EGFR-800(SEQ ID NO1)、Lck-208(SEQID NO2)、Lck-488(SEQ ID NO3)、MRP3-1293(SEQ ID NO4)、PAP-213(SEQ ID NO5)、PSA-248(SEQ ID NO6)、SART2-93(SEQID NO7)、SART3-109(SEQ ID NO8)、SART3-302(SEQ ID NO9)、Lck-246(SEQ ID NO10)、ppMAPkkk-432(SEQ ID NO11)、WHSC2-103(SEQ ID NO12)、UBE-43(SEQ ID NO13)、HNRPL-501(SEQ ID NO14)、CypB-129(SEQ ID NO15)、Lck-422(SEQ ID NO16)、Lck-449(SEQ ID NO17)、β-微管蛋白5-154(SEQ ID NO18)、Lck-90(SEQ ID NO19)、PSA-16(SEQ ID NO20)、PAP-248(SEQ IDNO21)、IEX1-47(SEQ ID NO22)、SART3-511(SEQ ID NO23)、SART3-734(SEQ ID NO24)、C35-44(SEQ ID NO25)、PAP-155(SEQID NO26)和β-tubuline-309(SEQ ID NO27)，并且其中所述兩個以上患者群選自HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、HLA-A26陽性患者群和HLA-A3超型陽性患者群。
2.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽EGFR-800(SEQ ID NO :1)、Lck-208 (SEQ ID NO 2)、Lck-488 (SEQID NO 3)、MRP3-1293 (SEQ ID NO 4)、 PAP-213(SEQ ID NO 5),PSA-248(SEQ ID NO :6)、SART2_93(SEQ ID NO :7)、SART3_109(SEQ ID NO 8), SART3-302 (SEQ ID NO 9), Lck-246 (SEQ ID NO : 10)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO :11)、WHSC2-103(SEQ ID NO 12),UBE-43(SEQ ID NO 13),HNRPL-501(SEQ ID NO: 14)、 CypB-129(SEQ ID NO :15)、Lck_422 (SEQ ID NO : 16)、Lck_449 (SEQ ID NO: 17)、β-微管蛋 S 5-154(SEQ ID NO 18),Lck-90(SEQ ID NO : 19)、PSA_16(SEQ ID NO :20)、PAP_248(SEQ ID NO :21)、IEX1-47(SEQ IDNO :22)、SART3-511(SEQ ID NO :23)、SART3-734(SEQ ID NO :24)、 PAP-155(SEQ ID NO :26)和 β-tubuline-309 (SEQ ID NO :27)，并且可用于兩個以上選自以 下的患者群的治療或預防HLA-A2陽性癌癥患者群、HLA-A24陽性癌癥患者群、HLA-A26陽 性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群。
3.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽EGFR-800(SEQ ID NO :1)、Lck-488 (SEQ ID NO :3)、SART2-93 (SEQ ID NO :7)、SART3-109 (SEQ ID NO: 8)、WHSC2-103(SEQ IDNO : 12)、UBE-43 (SEQ ID NO 13), HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)禾口 CypB-129(SEQ ID NO 15)和 PAP_155(SEQ ID NO :26)，并且可用于 HLA-A24 陽性患者群和 HLA-A2陽性患者群的治療或預防。
4.權(quán)利要求3的組合物，所述組合物包含肽EGFR-800(SEQ IDNO 1)和/或肽 PAP-155 (SEQ ID NO 26)，并且可用于HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A2陽性癌癥患者群 的治療或預防。
5.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽EGFR-800(SEQ ID NO :1)、SART2-93 (SEQ ID NO 7)、SART3-109 (SEQ ID NO 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO 12)、UBE-43(SEQ ID NO 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)、β _ 微管蛋白 5-154 (SEQ ID NO 18)、Lck-90 (SEQ ID NO 19)禾口 IEX1_47(SEQ ID NO 22)、PAP-155 (SEQID NO 26)禾口 β -tubuline-309 (SEQ ID NO 27)，并且可用于HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽 性癌癥患者群的治療或預防。
6.權(quán)利要求5的組合物，所述組合物包含肽Lck-90(SEQ ID NO 19)、PAP-155 (SEQ ID NO 26)和/或β -tubuline-309 (SEQ ID NO 27)，并且可用于HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群的治療或預防。
7.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽SART2-93(SEQ ID NO 7), SART3-109 (SEQ ID NO :8)、SART3-302 (SEQ ID NO :9)、Lck-246 (SEQ ID NO: 10)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO : 11)、WHSC2-103 (SEQ ID NO : 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13)、HNRPL-501(SEQ ID NO : 14)、CypB-129 (SEQ ID NO : 15)、Lck-422 (SEQ ID NO: 16)、 Lck-90 (SEQ ID NO 19)和 SART3-511 (SEQID NO 23)和 PAP_155(SEQ ID N0:26)，并且可 用于HLA-A2陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群的治療或預防。
8.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽SART3-302(SEQ ID NO 9),CypB-129 (SEQ ID NO 15)和 PAP_155(SEQ ID NO :26)，并且可用于 HLA-A2 陽性 癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群的治療或預防。
9.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽SART2-93(SEQID NO 7), SART3-109 (SEQ ID NO :8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO 12), UBE-43 (SEQ ID NO: 13)和 HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)和 PAP_155(SEQ ID NO :26)，并且可用于 HLA-A2 陽性癌癥患者 群、HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群的治療或預防。
10.權(quán)利要求8的組合物，所述組合物包含肽PAP-155(SEQIDN0 :26)，并且可用于 HLA-A2陽性癌癥患者群、HLA-A24陽性癌癥患者群和HLA-A3超型陽性癌癥患者群的治療或 預防。
11.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含一種或多種選自以下的肽EGFR-800(SEQ ID NO :1)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO :11)、HNRPL-501 (SEQ ID NO 14)和 SART3-109 (SEQ ID NO 8)，并且可用于至少HLA-A26陽性癌癥患者群的治療或預防。
12.權(quán)利要求1-11中任一項的組合物，所述組合物是癌癥肽疫苗。
13.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物包含肽C35-44(SEQID NO :25)，并且可用于治療 或預防選自以下患者的丙型肝炎病毒相關疾病HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、 HLA-A3超型陽性患者群和HLA-A26陽性患者群。
全文摘要
本發(fā)明提供了CTL誘導劑組合物，所述組合物包含選自序列表中如SEQ ID NO1至SEQ ID NO27所示的肽中的至少一種肽，并且可用于在兩個以上選自以下的患者群中治療或預防癌癥或丙型肝炎病毒相關疾病HLA-A2陽性患者群、HLA-A24陽性患者群、HLA-A26陽性患者群和HLA-A3超型陽性患者群。
文檔編號A61P35/00GK101854945SQ20088010835
公開日2010年10月6日 申請日期2008年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月18日
發(fā)明者七條茂樹, 伊東恭悟, 山田亮 申請人:株式會社綠多肽