專利名稱：：用于腫瘤診斷和治療的氯毒素劑的系統(tǒng)性給藥的制作方法用于腫瘤診斷和治療的氯毒素劑的系統(tǒng)性給藥相關(guān)申請(qǐng)信息本發(fā)明要求2007年10月12日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/979，714的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容引入本文以供參考。
背景技術(shù)：
：氯毒素(chlorotoxin)，在巨型以色列黃蝎LeiurusQuinquestriatus的毒液中發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)顯示出呈現(xiàn)作為用于診斷和治療癌癥的試劑的巨大潛力。起初被描述為氯離子通道阻斷劑的36-氨基酸氯毒素肽已經(jīng)臨床前開(kāi)發(fā)作為靶向具有131碘的膠質(zhì)瘤的候選物(J.A.DeBinetal.,Am.J.Physiol.(CellPhysiol.)，1993，264，33:C361_C369；L.Soroceanuetal.,CancerRes.,1998,584871-4879；S.Shenetal.,Neuro-Onco1.,2005,71:113-119)。用于診斷和治療神經(jīng)外胚層腫瘤(例如膠質(zhì)瘤和腦膜瘤)的組合物(見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5，905，027和6，429，187，其各自全文合并于此以供參考)和方法(見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)6，028，174和6，319，891，其各自全文合并于此以供參考)已經(jīng)進(jìn)行了研發(fā)，其基于氯毒素結(jié)合神經(jīng)外胚層起源的腫瘤細(xì)胞的能力(Soroceanuetal.，CancerRes.，1998,584871-4879；Ullrichetal.,Neuroreport,1996,7:1020_1024；Ullrichetal.，Am.J.Physiol.，1996,270:C1511_C1521)。TM-601，天然產(chǎn)生的氯毒素的合成版，已經(jīng)顯示出穿越血腦和組織阻礙物。臨床前研究已經(jīng)證明放射性碘標(biāo)記的TM-601的免疫原性的穩(wěn)定性、安全性、有效性和缺乏?；谶@些數(shù)據(jù)，臨床研究(I/II期)已經(jīng)進(jìn)行以評(píng)價(jià)具有復(fù)發(fā)性高級(jí)膠質(zhì)瘤的成年患者腔內(nèi)遞送131I-TM-601的安全性、耐受性、生物分布以及劑量測(cè)定。2007年2月，在臨床I期試驗(yàn)接受單腔內(nèi)劑量mI-TM-601的18名患者中，從復(fù)發(fā)起5名生存12個(gè)月或更長(zhǎng)；從復(fù)發(fā)起2名生存超過(guò)36個(gè)月；1名患者仍然還生存(從復(fù)發(fā)起超過(guò)4年)(見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朜o.11/731,661和2007年3月30日提交的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US2007/08309，其各自全文合并于此以供參考)。在這些臨床研究獲得的結(jié)果是非常有前景的并證明氯毒素在診斷和治療腫瘤方面的功效性。在上述臨床研究中，氯毒素使用腔內(nèi)途徑進(jìn)行給藥。在腫瘤位于腦部的情況下，腔內(nèi)遞送在手術(shù)期間開(kāi)始。因而，在不需要手術(shù)或不希望手術(shù)的情況下，腔內(nèi)給藥可能并不是最合適的遞送途徑。因此，存在用于診斷和治療腫瘤的氯毒素或氯毒素基試劑給藥的替代策略的需要。尤其希望比腔內(nèi)遞送侵入性小的給藥方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涵蓋這樣的發(fā)現(xiàn)，即經(jīng)由系統(tǒng)性給藥而不是局部給藥(例如腔內(nèi))氯毒素能夠有效遞送至主體。具體而言，本申請(qǐng)已經(jīng)證明氯毒素能夠有效靜脈內(nèi)遞送。根據(jù)本發(fā)明，系統(tǒng)遞送給主體實(shí)現(xiàn)了氯毒素的腫瘤特異性定位并造成生存時(shí)間提高。在閱讀了優(yōu)選實(shí)施方式的以下詳細(xì)描述后，本發(fā)明的這些和其他目的、優(yōu)點(diǎn)以及特征將對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)變得顯而易見(jiàn)。圖1是示出TM-601結(jié)合至各種培養(yǎng)細(xì)胞的總結(jié)的圖示(見(jiàn)實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié))。圖2是示出使用平板結(jié)合分析(platebindingassay)生物素標(biāo)記的TM-601與多種癌細(xì)胞類型的結(jié)合(見(jiàn)實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié))。結(jié)合作圖為鏈霉親和素-HRP對(duì)照相對(duì)于其中沒(méi)有加入TM-602的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。膠質(zhì)瘤細(xì)胞D54，U251，U373，G26；乳腺腫瘤細(xì)胞2LMP,DY3672,LCC6,BT474,SK-BR-3,MCF-7，MDA-MB-231，MDA-MB-468，以及MDA-MB-453；非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A427，WI-62,以及H1466；黑色素瘤細(xì)胞SKM28；結(jié)腸直腸癌細(xì)胞SW948；以及前列腺癌細(xì)胞PC3，LNCaP,以及DU145。圖3是示出TM-601與各種人體組織的結(jié)合的總結(jié)的表格。圖4示出了TM-601與多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤腫瘤的特異性結(jié)合。人類正常腦部和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤腫瘤組織用生物素標(biāo)記的TM-601(左)或緩沖鹽水(右)進(jìn)行組織化學(xué)染色。在用生物素標(biāo)記的TM-601或緩沖鹽水(作為過(guò)氧化物酶試劑染色對(duì)照)初始培育后，組織用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素然后是過(guò)氧化物酶基質(zhì)培育，以在陽(yáng)性樣品中產(chǎn)生棕褐色，其結(jié)合生物素標(biāo)記的TM-601。TM-601染色僅在腫瘤組織中看到(底部左側(cè))。圖5舉例說(shuō)明了TM-601與人腫瘤組織的特異性結(jié)合對(duì)比正常組織。㈧示出了用生物素標(biāo)記的TM-601(A，左)或緩沖鹽水(A，右)進(jìn)行組織化學(xué)染色人腫瘤組織的代表性實(shí)例。(B)示出了人正常組織與在㈧用生物素標(biāo)記的ΤΜ-601Φ，左)或緩沖鹽水(B，右)組織化學(xué)染色的人腫瘤組織相比的代表性實(shí)例。在用生物素標(biāo)記的TM-601或緩沖鹽水(作為過(guò)氧化物酶試劑染色對(duì)照)初始培育后，在(A)和(B)中的組織用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素然后是過(guò)氧化物酶基質(zhì)培育，以在結(jié)合生物素標(biāo)記的TM-601的樣品中產(chǎn)生棕褐色。指示陽(yáng)性染色的強(qiáng)棕褐色僅在暴露給生物素標(biāo)記的TM-601的腫瘤組織中看到(A，右)。圖6㈧示出了在裸鼠模型中U251-MG腦癌異種移植中的131I_TM_601有效性。圖表中的數(shù)據(jù)作圖成卡普蘭-梅爾生存圖表(Kaplan-MeierSurvivalChart)。獲得的結(jié)果顯示，中位生存對(duì)于鹽水組是29天，對(duì)于冷TM-601組為21天。在驚人的對(duì)比中，131I_TM_601組的中位生存是78天。圖6(B)示出了在注射131I-TM-601后具有人類U251-MG膠質(zhì)瘤的顱內(nèi)異種移植瘤的兩只小鼠(第一系小鼠006;第二系小鼠009)的γ相機(jī)圖像。在小鼠植入腫瘤細(xì)胞二十一(21)天后，將131I-TM-601注射至腫瘤部位。在注射后二十四(24)和96小時(shí)后，將小鼠用Y相機(jī)成像。在24和96小時(shí)的圖像顯示在腫瘤部位的放射性保存很好。圖7是總結(jié)在小鼠模型中靜脈注射后通過(guò)mI-TM-601靶向的腦部結(jié)果的表格。圖8示出了用TM-601處理的或未處理的移植有D54MG的小鼠的卡普蘭-梅爾生存曲線。圖9是示出TM-601和放射治療(RT)對(duì)小鼠D54MG側(cè)翼腫瘤(flanktumor)的作用的圖表。圖10是示出在通過(guò)靜脈(IV)、腹膜內(nèi)(IP)、皮下(SC)或口服(OP)給藥單劑量的TM-601之后測(cè)量的小鼠血漿濃度的圖表。圖11是總結(jié)動(dòng)物用TM-601處理GLP毒理學(xué)研究的結(jié)果的表格。圖12是患有復(fù)發(fā)或難治轉(zhuǎn)移性固體腫瘤的患者靜脈131I-TM-601的I期中使用的劑量方案和安全性研究。圖13是總結(jié)患有不同類型的固體腫瘤的患者靜脈給藥后mI-TM-601的腫瘤特異性吸收的表格。圖14示出了在給患有前列腺癌的患者靜脈注射mI-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小時(shí)、24小時(shí)和7天所記錄的Y相機(jī)圖像。圖15示出了在給患有非小細(xì)胞肺癌的患者靜脈注射131I-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)所記錄的Y相機(jī)圖像。圖16示出了在給患有惡性膠質(zhì)瘤的患者靜脈注射131I-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)所記錄的γ相機(jī)圖像。圖17示出了在給黑色素瘤轉(zhuǎn)移到腦、肺、肝、右腿上的皮下結(jié)節(jié)的患者靜脈注射mI-TM-601(30mCi/0.6mg)后24小時(shí)和48小時(shí)所記錄的全身Y相機(jī)圖像。圖18(A)示出了顯示患有轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的患者腦左額葉轉(zhuǎn)移的治療前磁共振圖像(MRI)(左)，給患者靜脈注射131I-TM-BOl(30mCi/0.2mg)后24小時(shí)記錄的SPECT圖像(右)。圖18(B)示出了顯示患有轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的相同患者腦右枕部(rightoccipitalbrain)轉(zhuǎn)移瘤的治療前MRI(左)，給患者靜脈注射mI-TM_601(10mCi/0.2mg)后24小時(shí)記錄的SPECT圖像(右)。圖19示出了患有惡性膠質(zhì)瘤的患者腦左額葉腫瘤的治療前MRI(左)，給患者靜脈注射131I-TM-601后48小時(shí)記錄的SPECT圖像(右)。圖20示出了示出了患有惡性膠質(zhì)瘤的患者的治療前腦部MRI(左)，給患者靜脈注射131I-TM-601(10mCi/0.2mg)后24小時(shí)獲得的SPECT圖像(右)。圖21示出了患有惡性膠質(zhì)瘤的患者(如圖20所示的相同患者)的治療之前(左)和給患者靜脈注射131I-TM-601后3周(右)獲得的SPECT圖像。圖22示出了靜脈注射的非癌癥小鼠PEG化的氯毒素(PEGylatedchlorotoxin)(TM-601-PEG)與未修飾的TM-601相比的半衰期。PEG化提高TM-601的半衰期大約32倍。圖23示出了在小鼠CNV模型中與未修飾的TM-601相比PEG化的氯毒素能夠?qū)崿F(xiàn)增加AUC(在曲線下的區(qū)域)，如用更少劑量頻率增加抗血管生成作用所示那樣。在CNV模型中微血管密度對(duì)未修飾的TM-601或PEG化的氯毒素的各種劑量方案作圖。定義在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中，采用如下文所限定的幾個(gè)術(shù)語(yǔ)。如在本文所使用的術(shù)語(yǔ)“大約”和“約”是指數(shù)值通常包括落在該數(shù)值任意方向(大于或小于該數(shù)值)10%的范圍內(nèi)的數(shù)值，另外指明或另外上下文明顯的除外(這樣的數(shù)值將超過(guò)可能值100%除外)。術(shù)語(yǔ)“生物活性”，當(dāng)在本文用于表征多肽時(shí)，是指與患者多肽具有足夠的氨基酸序列同源性，以與多肽呈現(xiàn)出相似或相同的性能(例如，能夠特異性結(jié)合治癌細(xì)胞和/或內(nèi)化至癌細(xì)胞和/或殺死癌細(xì)胞)的一種分子。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“癌(癥)，，是指或描述典型特征為無(wú)節(jié)制細(xì)胞生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物的生理情況。癌(癥)的實(shí)例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤、白血病。更具體地，這樣的癌的實(shí)例包括肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸部癌癥、皮膚或眼黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門(mén)區(qū)癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、生殖器官的癌癥、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織的肉瘤、膀胱癌、腎癌、腎細(xì)胞癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、神經(jīng)外胚層癌、脊髓腫瘤(spinalaxistumor)、膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、垂體腺瘤。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”是指經(jīng)歷不期望的或無(wú)節(jié)制的細(xì)胞生長(zhǎng)或異常存留或異常組織入侵的哺乳動(dòng)物(例如人類)體內(nèi)的細(xì)胞。在體外，該術(shù)語(yǔ)還指這樣的細(xì)胞系恒久永生的構(gòu)建細(xì)胞培養(yǎng)物，其將無(wú)限增殖并以無(wú)節(jié)制的方式產(chǎn)生合適的新培養(yǎng)物和空間。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“癌患者”是指患有或易患癌癥的個(gè)體。癌患者可以已經(jīng)診斷或沒(méi)有診斷患有癌癥。該術(shù)語(yǔ)還包括先前經(jīng)受過(guò)癌癥治療的個(gè)體。術(shù)語(yǔ)“化學(xué)療法”和“抗癌藥劑或藥物”在本文中可交換使用。它們指用于治療癌或癌瘤癥狀的藥物?？拱┧幬锿ǔ７诸惖较陆M中的一種烷化劑、嘌呤拮抗劑、嘧啶拮抗劑、植物堿、插入抗生素(intercalatingantibiotic)、芳香酶抑制劑、抗代謝藥物、有絲分裂抑制劑、生長(zhǎng)因子抑制劑、細(xì)胞循環(huán)抑制劑、酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗激素藥物以及抗雄激素藥物。這樣的抗癌劑的實(shí)例包括但不限于BCNU、順鉬、吉西他濱、羥基脲、紫杉醇、替莫唑胺、拓?fù)涮婵怠⒎遴奏?、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、甲基芐胼、氮烯咪胺、六甲蜜胺、甲氨蝶呤、锍基嘌呤、硫鳥(niǎo)嘌呤、磷酸氟達(dá)拉濱、克拉屈濱(cladribine)、噴妥司汀(pentostatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊昔(teniposide)、伊立替康(irinotecan)、多西紫杉醇(docetaxel)、阿霉素(doxorubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、放線菌素(dactinomycin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、普卡霉素(plicamycin)、絲裂霉素(mitomycin)、博萊霉素(bleomysin)、三苯氧胺(tamoxifen)、氟他胺(flutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、氨魯米特(aminogluthimide)、阿那曲唑(anastrozole)、安吖啶(amsacrine)、天冬酉先月安(asparaginase)、米托惠酉昆(mitoxantrone)、米托坦(mitotane)以及氨磷汀(amifostine)。術(shù)語(yǔ)“毒性”，當(dāng)在本文用于表征部分(moiety)、化合物、藥物或藥劑時(shí)是指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或?qū)е录?xì)胞破壞的部分、化合物、藥物或藥劑。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“有效量”是指組織或主體中足以實(shí)現(xiàn)其預(yù)期作用(例如，所需的生物或藥物響應(yīng))的化合物或組合物的任何量。例如，在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，該作用可以是特異性結(jié)合至靶組織，以減慢或停止癌癥癥狀的進(jìn)展、加重或惡化，以產(chǎn)生癌癥癥狀的改善，和/或治愈癌癥。術(shù)語(yǔ)“融合蛋白”是指包含經(jīng)由它們各自的肽骨架通過(guò)共價(jià)鍵連接的兩種或更多種蛋白或其片段的分子，最優(yōu)選通過(guò)編碼這些蛋白的多核苷酸分子的基因表達(dá)產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“同源”(或“同源性”)，如本文所使用的，是指兩個(gè)多肽分子之間或兩個(gè)核酸分子之間相同的程度。當(dāng)兩個(gè)比較的序列的位點(diǎn)被相同的堿基或氨基酸單體亞單位占據(jù)時(shí)，那么相應(yīng)的分子在該位點(diǎn)是同源的。兩個(gè)序列之間的同源性的百分比對(duì)應(yīng)于兩個(gè)序列所共有的匹配或同源性位點(diǎn)的數(shù)目除以所比較的位點(diǎn)的數(shù)目，然后乘以100。通常，當(dāng)兩個(gè)序列對(duì)準(zhǔn)時(shí)進(jìn)行比較以獲得最大同源性。同源的氨基酸序列具有(共有)相同或相似的氨基酸殘基。相似的殘基是在參考序列中相應(yīng)氨基酸殘基的保守性取代基(conservativesubstitution)或“允許點(diǎn)突變(allowedpointmutation)，，。在參考序列中殘基的“保守性取代基”是這樣的取代基物理或功能上類似于相應(yīng)的參考?xì)埢?，例如，具有類似的尺寸、形狀、電荷、化學(xué)性能，包括能夠形成共價(jià)鍵或氫鍵，或類似物。尤其優(yōu)選的保守性取代基是滿足DayhofT等的“接收位點(diǎn)突變”限定的標(biāo)準(zhǔn)的那些(“AtlasofProteinSequenceandStructure，，，1978,Nat.Biomed.Res.Foundation,Washington,DC,Supp1.3,22354-352)。術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”或“主體”在本文中可互換使用。它們指人或其他哺乳動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、兔子、狗、貓、牛、豬、羊、馬或靈長(zhǎng)類)，其能患有或易患疾病或病癥(例如癌)但是可以患有或沒(méi)有患有疾病或病癥。在許多實(shí)施方式中，主體是人類。除非另外指明，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”或“主體”并不指特定的年齡，因而包含成年人、兒童或新生兒。術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記的”和“用可檢測(cè)試劑或部分標(biāo)記的”在本文中可以互換使用，表示實(shí)體(例如，氯毒素或氯毒素結(jié)合物)可以是可見(jiàn)的，例如接著結(jié)合至其他實(shí)體(例如，腫瘤組織)。優(yōu)選選擇可檢測(cè)試劑或部分使得其產(chǎn)生能夠測(cè)量的信號(hào)且其強(qiáng)度與所結(jié)合的實(shí)體的量相關(guān)(例如，成比例)。用于標(biāo)記和/或檢測(cè)蛋白和肽的廣泛種類的系統(tǒng)在本領(lǐng)域是已知的。標(biāo)記的蛋白或肽可以通過(guò)光譜、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電學(xué)、光學(xué)、化學(xué)或其他方式可檢測(cè)的標(biāo)記物的結(jié)合或軛合進(jìn)行制備。標(biāo)記物或標(biāo)記部分可以是直接可檢測(cè)的(即，并不需要進(jìn)一步的反應(yīng)或操作成可檢測(cè)的，例如，熒光團(tuán)是可檢測(cè)的)或者是間接可檢測(cè)的(即，通過(guò)反應(yīng)或結(jié)合其他可檢測(cè)的實(shí)體使得可檢測(cè)，例如，半抗原在與包含諸如熒光團(tuán)的報(bào)告物的合適抗體反應(yīng)后通過(guò)免疫染色法是可檢測(cè)的)。適合的可檢測(cè)試劑包括但不限于放射性同位素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光試劑、微粒、酶、比色標(biāo)記物(colorimetriclabel)、磁性標(biāo)記物、半抗原、分子信標(biāo)(MolecularBeacons)、分子信標(biāo)識(shí)體(aptamerbeacon)，以及類似物。術(shù)語(yǔ)“正?！焙汀敖】怠痹诒疚闹锌梢曰Q使用。它們是指沒(méi)有癌癥的個(gè)體或個(gè)體的組。術(shù)語(yǔ)“正常”在本文中還用來(lái)描述從健康個(gè)體分離的組織樣品。術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”在本文中限定為包含有效量的至少一種活性成分(例如，標(biāo)記的或沒(méi)有標(biāo)記的氯毒素或氯毒素結(jié)合物)和至少一種藥用載體的組合物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“藥用載體”是指這樣的載體介質(zhì)其不影響活性成分的生物活性的有效性，并且在所給藥的濃度不會(huì)對(duì)主體有過(guò)量毒性。該術(shù)語(yǔ)包括溶劑、分散介質(zhì)、涂料、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑(isotonicagent)、吸收延遲劑，等。用于藥物活性物質(zhì)的這樣的介質(zhì)和試劑的使用在本領(lǐng)域是眾所周知的(參見(jiàn)例如，“Remington，sPharmaceuticalSciences",Ε.W.Martin,18thEd.，1990，MackPublishingCo.:Easton，PA，其全部?jī)?nèi)容合并在此以供參考)。術(shù)語(yǔ)“蛋白”、“多肽”和“肽”在本文中互換使用，是指各種長(zhǎng)度的氨基酸序列，任意以它們中性(無(wú)電荷)形式或作為鹽，通過(guò)糖基化、側(cè)鏈氧化或磷酸化任意未修飾或修飾的。在某些實(shí)施方式中，氨基酸序列是全長(zhǎng)天然蛋白。在其他實(shí)施方式中，氨基酸序列是全長(zhǎng)蛋白的較小片段。另外在其他實(shí)施方式中，氨基酸序列是由連接至氨基酸側(cè)鏈的附加取代基修飾的，諸如糖基、脂、無(wú)機(jī)離子諸如磷酸根，以及涉及鏈的化學(xué)轉(zhuǎn)化的改性，如巰基基團(tuán)的氧化。因而，術(shù)語(yǔ)“蛋白”(或其等價(jià)術(shù)語(yǔ))旨在包括全長(zhǎng)天然蛋白的氨基酸序列，經(jīng)受這些修飾而不改變其特定性能。尤其，術(shù)語(yǔ)“蛋白”涵蓋蛋白亞型，即，由相同基因編碼的變9異體，但是它們的Pl或MW不同或二者都不同。這樣的亞型可以是它們的氨基酸序列不同(例如，替換剪切或有限的蛋白水解)，或可替換地，可以由不同的翻譯后修飾(例如，糖基化，?；姿峄?來(lái)產(chǎn)生。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“蛋白類似物”是指具有母體多肽相似或相同功能但沒(méi)有必要必需包括與母體多肽的氨基酸序列相似或相同的氨基酸序列的多肽，或者具有與母體多肽相似或相同結(jié)構(gòu)的多肽。優(yōu)選地，在本發(fā)明的上下文中，蛋白類似物具有與母體多肽的氨基酸序列至少30%(更優(yōu)選至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少99%)相同的氨基酸序列。另外，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解，蛋白序列通常容忍一些取代而不破壞活性。因而，保留活性，并與母體多肽共有至少約30-40%的全部序列相同，經(jīng)常大于約50%、60%、70%或80%，并且經(jīng)常在包含至少3-4并經(jīng)常高達(dá)20或更多氨基酸的一個(gè)或多個(gè)高保守性區(qū)域中包括至少一個(gè)更高相同性的區(qū)域，經(jīng)常大于90%、96%、97%、98%、99%的任何多肽，涵蓋在術(shù)語(yǔ)“多肽類似物”中。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“蛋白片段”，是指包括第二多肽的氨基酸序列的至少5個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列的多肽。蛋白的片段可以具有或不具有母體多肽的功能活性。術(shù)語(yǔ)“小分子”包括可以發(fā)生作用以影響生物過(guò)程的任何化學(xué)物或其他部分(moiety)。小分子可以包括迄今已知和使用的任何數(shù)量的治療試劑，或者可以是為了篩選生物功能目的在這樣的分子庫(kù)中合成的小分子。小分子在尺寸上與大分子相區(qū)別。在本發(fā)明中適合使用的的小分子通常具有的分子量小于約5，000道爾頓(Da)，優(yōu)選小于約2，500Da，更優(yōu)選小于1，OOODa，最優(yōu)選小于約500Da。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“系統(tǒng)性給藥”是給予藥劑使得藥劑經(jīng)由脈管系統(tǒng)以顯著的量廣泛分布在體內(nèi)，并具有在血液中具有生物效果，例如其所需效果，和/或達(dá)到其所需的作用位點(diǎn)。典型的系統(tǒng)性給藥途徑包括通過(guò)以下給藥(1)將藥劑直接引入到脈管系統(tǒng)或(2)口服、肺部給藥、或肌肉給藥，其中藥劑被吸收，進(jìn)入脈管系統(tǒng)，經(jīng)由血液運(yùn)載到一個(gè)或多個(gè)所需的作用位點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“治療藥劑”或“藥物”在本文中互換使用。它們是指治療疾病或臨床癥狀有效的物質(zhì)、分子、化合物、藥劑、因子或組合物。術(shù)語(yǔ)“組織”在本文中以其最廣義使用。組織可以是能夠(但不是必需)包括癌細(xì)胞的任何生物實(shí)體。在本發(fā)明的上下文中，包括體外、體內(nèi)、和間接體內(nèi)組織。因而，組織可以是個(gè)體的一部分或從個(gè)體獲得的(例如，通過(guò)活檢)。組織還可以包括為了組織病理目的所獲得的組織切片如冷凍切片或者具有已知診斷、治療和/或療效歷史的檔案樣品。術(shù)語(yǔ)組織還涵蓋通過(guò)處理組織樣品所衍生的任何材料。衍生的材料包括但不限于從組織分離的細(xì)胞(或它們的后代)。組織的處理可以涉及一種或多種過(guò)濾、蒸餾、萃取、濃縮、干擾成分的滅活、加入試劑等。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療(treatment)”是表征目標(biāo)如下的方法或過(guò)程(1)延遲或阻止疾病或病癥的發(fā)生；(2)減慢或停止疾病或病癥的一種或多種癥狀的進(jìn)展、加重或惡化；(3)給疾病或病癥的癥狀帶來(lái)改善；(4)減小疾病或病癥的嚴(yán)重程度或發(fā)生率；或(5)治愈疾病或病癥。為了預(yù)防性或預(yù)防作用，治療可以在發(fā)病前給予。可替換地或另外地，為了治療性作用，治療可以在疾病或病癥開(kāi)始后給予。具體實(shí)施例方式如上所提及的，本發(fā)明涉及用于治療和診斷癌癥的方法。本文所提供的方法通常包括系統(tǒng)性給予可以標(biāo)記或沒(méi)有標(biāo)記可檢測(cè)部分的氯毒素劑。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，氯毒素劑是靜脈給藥的。根據(jù)本發(fā)明，可以采用本領(lǐng)域內(nèi)的傳統(tǒng)分子生物技術(shù)、微生物技術(shù)、重組DNA技術(shù)。這樣的技術(shù)在文獻(xiàn)中有完全的解釋，參見(jiàn)，例如，Maniatis,Fritsch&Sambrook,“MolecularCloning:ALaboratoryManual，，，1982；“DNACloning:APracticalApproach,"VolumesIandII,D.N.Glover(Ed.),1985；“OligonucleotideSynthesis〃，M.J.Gait(Ed.)，1984；“NucleicAcidHybridization",B.D.Hames&S.J.Higgins(Eds.),1985;"TranscriptionandTranslation"B.D.Hames&S.J.Higgins(Eds.),1984;"AnimalCellCulture",R.I.Freshney(Ed.),1986；"ImmobilizedCellsAndEnzymes",IRLPress,1986；B.Perbal,“APracticalGuideToMolecularCloning"，1984。I.氯毒素劑本發(fā)明的治療和診斷方法涉及對(duì)其需要的個(gè)體系統(tǒng)性給予有效量的至少一種氯毒素劑。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“氯毒素劑”是指包括至少一個(gè)氯毒素部分的化合物。在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑包括與至少一個(gè)治療性部分(例如，抗癌藥劑)聯(lián)接的至少一個(gè)氯毒素部分。氯毒素部分(和/或治療性部分)可以與至少一個(gè)標(biāo)記部分相連。A.氯毒素部分(chlorotoxinmoity)本文所使用的術(shù)語(yǔ)“氯毒素部分”是指氯毒素、生物活性氯毒素亞單位(subimit)或氯毒素衍生物。在某些實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“氯毒素”是指天然衍生自以色列金蝎(Leiurusquinquestriatus)蝎毒素的全長(zhǎng)、36個(gè)氨基酸多肽(DeBinetal.，Am.J.Physiol.，1993，264:C361-369)，其包括如在SEQIDN0..1中列出的天然氯毒素的氨基酸序列。術(shù)語(yǔ)“氯毒素”包括含有SEQIDNO.1的多肽，其已經(jīng)合成或重組產(chǎn)生，如在美國(guó)專利No.6，319，891中所披露的那些(其全部?jī)?nèi)容合并于此以供參考)?！吧锘钚月榷舅貋唵挝弧笔前儆诼榷舅氐?6個(gè)氨基酸的多肽，并且其保留氯毒素的至少一種性能或功能。如本文所使用的，氯毒素的“性能或功能”包括但不限于阻止異常細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，相對(duì)于正常細(xì)胞特異性結(jié)合至腫瘤/癌癥細(xì)胞的能力，內(nèi)化至腫瘤/癌細(xì)胞的能力，和/或殺死腫瘤/癌細(xì)胞的能力。腫瘤/癌細(xì)胞可以是來(lái)自主體、培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞系體外的、間接體內(nèi)、體內(nèi)的、原始分離物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“生物活性氯毒素衍生物”是指氯毒素的任何范圍廣泛的衍生物、類似物、變異體、多肽片段或模擬物(mimetic)以及保持氯毒素至少一種性能或功能的相關(guān)多肽(如上所述)。氯毒素衍生物的實(shí)例包括但不限于氯毒素的肽變異體、氯毒素的肽片段，例如，包括或由SEQIDN0.1，2，3，4，5，6或7的鄰接的10-mer肽組成的片段，或者包括SEQIDNO.1的殘基10-18或21-30的片段，核心結(jié)合序列(corebindingsequences),以及肽模擬物(參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朜o.PCT/US03/17410,公開(kāi)號(hào)WO2003/101474,其全部?jī)?nèi)容結(jié)合于此以供參考)。氯毒素衍生物的實(shí)例包括具有在SEQIDNO.1列出的氨基酸序列的片段的肽，具有至少約7、8、9、10、15、20、25、30或35個(gè)鄰接氨基酸殘基，其與氯毒素的活性相關(guān)。這樣的片段可以含有氯毒素肽的功能區(qū)域，識(shí)別為對(duì)應(yīng)于已知肽區(qū)(peptidedomain)的氨基酸序列區(qū)域，以及明顯親水性的區(qū)域。這樣的片段還包括彼此連接的核心序列，以任何順序，具有移除的或被連接子替代的介入氨基酸(interveningaminoacid)。當(dāng)衍生序列和氯毒素序列最大程度對(duì)齊時(shí)，氯毒素的衍生物包括包含至少一種氨基酸殘基的保守性或非保守性取代基的多肽。取代基可以是提高氯毒素的至少一種性能或功能，呈現(xiàn)氯毒素的至少性能或功能，或?qū)β榷舅氐闹辽僖环N性能或功能為中性的取代基。適合在本發(fā)明的實(shí)踐中使用的氯毒素衍生物的實(shí)例描述于國(guó)際申請(qǐng)WO2003/101474中(其全部?jī)?nèi)容結(jié)合于此以供參考)。具體的實(shí)例包括包含或由SEQIDNO.8或SEQIDNO.13組成的多肽，以及其變異體、類似物和衍生物。氯毒素衍生物的其他實(shí)例包括含有通過(guò)例如基因重組、定點(diǎn)突變或PCR突變的預(yù)定突變的那些多肽，以及肽家族的等位基因或其他天然產(chǎn)生的變異體；以及衍生物，其中肽通過(guò)取代、化學(xué)、酶或其他合適的方式用不是天然產(chǎn)生的氨基酸部分(例如可檢測(cè)部分諸如酶或放射性同位素)共價(jià)修飾。氯毒素和其肽衍生物可以使用各種各樣的方法來(lái)制備，包括標(biāo)準(zhǔn)固相(或液相)肽合成方法，其在本領(lǐng)域是已知的。另外，編碼這些肽的核酸可以使用商購(gòu)寡核苷酸合成裝置來(lái)合成，蛋白可以使用標(biāo)準(zhǔn)重組生產(chǎn)系統(tǒng)重組生產(chǎn)。其他合適的氯毒素衍生物包括模擬氯毒素的三維結(jié)構(gòu)的肽模擬物。這樣的肽模擬物具有相對(duì)于天然產(chǎn)生的肽的顯著優(yōu)點(diǎn)，包括，例如生產(chǎn)更經(jīng)濟(jì)、化學(xué)穩(wěn)定性更高、藥理學(xué)性能提高(半衰期、吸收、效能、功效)、特異性可變(例如，寬譜生物活性、抗原性減小以及其他)。在某些實(shí)施方式，模擬物是氯毒素肽二級(jí)結(jié)構(gòu)的模擬元素。蛋白的肽骨架存在主要定位氨基酸側(cè)鏈以這種方式以有利于分子相互作用，諸如那些抗體和抗原。肽模擬物被期望使分子相互作用類似于天然分子。肽類似物通常用于藥物產(chǎn)業(yè)作為具有與那些模板肽類似性能的非肽藥物。這種類型的化合物還指作為肽模擬物(ρ印tidemimetic)或擬月太類(peptidomimetic)(參見(jiàn)，例如，F(xiàn)auchere，Adv.DrugRes.，1986，1529-69；Veber&Freidinger,1985,TrendsNeurosci.,1985,8:392_396；Evansetal.,J.Med.Chem.,1987,30=1229-1239)并通常用計(jì)算機(jī)分子模型輔助進(jìn)行研發(fā)。通常，肽模擬物結(jié)構(gòu)上類似于范型多肽(paradigmpolypeptide)(即，具有生物化學(xué)性能或藥理學(xué)活性的多肽)，但是具有可選地被非肽鍵代替的一個(gè)或多個(gè)肽鍵(peptidelinkage)。通過(guò)使用組合化學(xué)產(chǎn)生藥物庫(kù)可以提高肽模擬物的使用。通過(guò)確定提高或降低肽與例如腫瘤細(xì)胞的結(jié)合的氨基酸突變來(lái)輔助肽模擬物的設(shè)計(jì)。可以使用的途徑包括酵母雙雜交法(參見(jiàn)，例如，Chienetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88:9578_9582)以及使用相位顯示法(phasedisplaymethod)。雙雜交法檢測(cè)酵母中的蛋白-蛋白相互作用(Fieldetal.,Nature，1989，340:245-246)。相位顯示法檢測(cè)固定蛋白與表達(dá)在噬菌體如λ(lambda)和M13的表面上表達(dá)的蛋白之間的相互作用(Ambergetal.，Strategies，1993,62-4；Hogrefeetal.，Gene,1993，128119-126)。這些方法允許肽-蛋白相互作用的陽(yáng)性和陰性選擇以及確定這些相互作用的序列的識(shí)別。在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑包括顯示出與上述氯毒素相似或相關(guān)活性的其他蝎種多肽毒素。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“氯毒素相似或相關(guān)活性”尤其指對(duì)腫瘤/癌細(xì)胞的選擇性/特異性結(jié)合。合適相關(guān)蝎毒素的實(shí)例包括但不限于蝎源的毒素和相關(guān)肽，其顯示出與氯毒素相同的氨基酸和/或核苷酸序列。相關(guān)蝎毒素的實(shí)例包括但不限于Mesobuthusmartenssi的CT神經(jīng)毒素(基因庫(kù)編號(hào)(GenBankAccession)No.AAD473730)，東亞鉗竭(Buthusmartensiikarsch)的神經(jīng)毒素BmK41—2(基因庫(kù)編號(hào)No.A59356)，Buthusmartensii的神經(jīng)毒素Bml2-b(基因庫(kù)編號(hào)No.AAK16444)，Leiurusquinquestriatushebraeu的可能毒素(ProbableToxin)LGH8/6(基因庫(kù)編號(hào)No.P55966)，Mesubutustamulussindicus的小毒素(Smalltoxin)(基因庫(kù)編號(hào)No.P15229)。適合于在本發(fā)明使用的相關(guān)蝎毒素包括與在SEQIDNo.1列出的全部氯毒素序列具有至少約75%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99%序列相同的氨基酸序列的多肽。在某些實(shí)施方式中，相關(guān)蝎毒素包括具有與SEQIDNO.8或SEQIDNO.13同源的序列的那些蝎毒素。在某些實(shí)施方式中，在氯毒素劑中的氯毒素部分是標(biāo)記的。標(biāo)記方法和標(biāo)記部分(labelingmoiety)的實(shí)例描述如下。B.治療性部分(TherapeuticMoiety)如上所述，在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑包括與至少一個(gè)治療性部分相連的至少一個(gè)氯毒素部分。合適的治療性部分包括治療疾病或臨床病癥有效的任何各種各樣的物質(zhì)、分子、化合物、試劑或因子。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，治療性部分是化療劑(即，抗癌藥物)。合適的抗癌藥物包括對(duì)癌細(xì)胞直接或間接毒性或傷害的各種各樣的物質(zhì)、分子、化合物、試劑或因子。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該明了，治療性部分可以是合成或天然化合物單個(gè)分子、不同分子的混合物或不同分子的絡(luò)合物。合適的治療性部分可以屬于化合物各種分類中的任一種，包括但不限于小分子、肽、蛋白、糖類、留族化合物、抗體(包括其片段和變異體)、融合蛋白、反義多核苷酸、核酶、小干擾RNA、擬肽類、放射性同位素，以及類似物。當(dāng)治療性部分包括抗癌藥物時(shí)，抗癌藥物可以在例如以下抗癌藥物分類中找到烷化劑、抗代謝藥物、抗有絲分裂抗生素、生物堿抗腫瘤藥劑、激素和抗激素、干擾素、非甾族抗炎藥物、各種其他抗腫瘤藥劑諸如激酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑以及NF-κB抑制劑?？拱┧幬锏膶?shí)例包括但不限于烷化藥物(氮芥、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、美法侖(Melphalan)、異環(huán)磷酰胺(Ifosfamide))、抗代謝藥物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗劑和嘧啶拮抗劑(6-巰基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他濱)、紡錘體毒劑(長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇)、鬼白毒素(依托泊苷、伊立替康、拓?fù)涮婵?、抗生素(阿霉素、博萊霉素、絲裂霉素)、亞硝基脲(卡氮芥、洛莫司汀)、無(wú)機(jī)離子(順鉬、卡鉬)、酶(天冬酰胺酶)、以及激素(三苯氧胺、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)和甲地孕酮(Megestrol))，來(lái)列舉幾種。對(duì)于更新的癌癥治療的更綜合性的討論，參見(jiàn)http//www,cancer,gov/,FDA批準(zhǔn)月中瘤學(xué)藥物的列表在http://www,fda.rov/cder/cancer/druRlistframe.htm,TheMerckManual,SeventeenthEd.1999，其全部?jī)?nèi)容合并于此，以供參考。在某些實(shí)施方式中，治療性部分包括細(xì)胞毒性劑。細(xì)胞毒性劑的實(shí)例包括毒素、其他生物活性蛋白、傳統(tǒng)化療劑、酶、放射性同位素。合適的細(xì)胞毒性毒素的實(shí)例包括但不限于細(xì)菌和植物毒素諸如多花白樹(shù)毒蛋白、蓖麻毒素、皂苷、綠膿桿菌外毒素(Pseudomonasexotoxin)、美洲商陸抗病毒蛋白、白喉毒ο合適的細(xì)胞毒性生物活性蛋白的實(shí)例包括但不限于補(bǔ)體系統(tǒng)的蛋白(或補(bǔ)體蛋白)。補(bǔ)體系統(tǒng)是幫助器官清除病原體并促進(jìn)健康的復(fù)雜生化連鎖反應(yīng)(B.P.Morgan，Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.，1995，32:265)。補(bǔ)體系統(tǒng)由超過(guò)35個(gè)可溶細(xì)胞結(jié)合蛋白組成，其中12個(gè)直接涉及補(bǔ)體途徑。合適的細(xì)胞毒性化療劑的實(shí)例包括但不限于紫杉烷類(例如，多西紫杉醇，紫杉酉享)、美登素類(maytansines)、duocarmycins、CC_1065、auristatins、calicheamincins以及其他烯二炔抗癌抗生素。其他實(shí)例包括抗葉酸類(anti-folates)(例如，氨蝶呤、甲氨蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞(raltitrexed))、長(zhǎng)春花生物堿(例如，長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、依托泊苷、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱)、以及蒽環(huán)類(例如，柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、伊達(dá)比星、米托I酉昆、&￥比(valrubicin))ο合適的細(xì)胞毒性酶的實(shí)例包括但不限于溶核酶(nucleolyticenzyme)。合適的細(xì)胞毒性放射性同位素的實(shí)例包括任何α-，β-或γ-放射體，當(dāng)位于腫^^^W^itj^iffllfiiW(S.Ε.Order,“Analysis,Results,andFutureProspectiveoftheTherapeuticUseofRadiolabeledAntibodyinCancerTherapy",MonoclonalAntibodiesforCancerDetectionandTherapy,R.W.Baldwinetal.(Eds.),AcademicPress,1985)0這樣的放射性同位素的實(shí)例包括但不限于碘-131(131I)、碘-125(125I)、鉍-212(212Bi)、鉍-213(213Bi)、砹-211(211At)、錸-186(186Re)、錸-186(188Re)、磷-32(32P)、釔-90(90Y)、釤-153(153Sm)以及镥-177(117Lu)?？商鎿Q地或另外地，適合用于本發(fā)明的治療性部分可以是標(biāo)題為“ChlorotoxinsasDrugCarriers”(USSN60/954，409)、提交于2007年8月7日的共同擁有臨時(shí)申請(qǐng)所描述的任何治療性部分，其全部?jī)?nèi)容結(jié)合于此以供參考。這樣的治療性部分的種類的實(shí)例包括但不限于水溶性差的抗癌藥劑、與藥物抗性相關(guān)的抗癌劑、反義核酸、核酶、三聯(lián)劑(triplexagent)、短干擾RNA(siRNA)、光敏劑、放射增敏劑、超抗原、前藥轉(zhuǎn)換酶(prodrugactivatingenzyme)、抗血管生成劑。C.標(biāo)記部分(labelingMoiety)在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑標(biāo)記有至少一個(gè)標(biāo)記部分。例如，在氯毒素中的一個(gè)或多個(gè)氯毒素部分和/或一個(gè)或多個(gè)治療性部分可以標(biāo)記有標(biāo)記部分。標(biāo)記部分的作用是有利于在結(jié)合于組織后檢測(cè)氯毒素劑。優(yōu)選地，標(biāo)記部分選擇成使得其產(chǎn)生能夠被測(cè)量并且其強(qiáng)度與結(jié)合至組織的診斷劑的量相關(guān)(例如成比例)的信號(hào)。優(yōu)選地，標(biāo)記基本不干擾氯毒素的所需生物或藥學(xué)活性。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記涉及一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記部分連接或結(jié)合至氯毒素部分，優(yōu)選連接或結(jié)合至氯毒素部分的肽序列上的非干擾位點(diǎn)。這樣的非干擾位點(diǎn)是不參與氯毒素部分與腫瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合的位點(diǎn)ο標(biāo)記部分可以是在結(jié)合至相關(guān)組織和系統(tǒng)后允許檢測(cè)氯毒素劑的任何實(shí)體?？梢允褂萌魏胃鞣N各樣的可檢測(cè)試劑作為本發(fā)明氯毒素劑中的標(biāo)記部分。標(biāo)記部分可以是直接可檢測(cè)的或間接可檢測(cè)的。標(biāo)記部分的實(shí)例包括但不限于各種配體，放射性同位素(例如，3H，14C，18F，19F，32P，35S，135I，125I，123I，64CU，187Re，mIn，9°Y，99mTC，177LU)，熒光染料(對(duì)于特定的示例性熒光染料，見(jiàn)下文)，化學(xué)發(fā)光劑(諸如，像吖啶酯、穩(wěn)定的二氧環(huán)丁烷等)，生物熒光劑，光譜可解析無(wú)機(jī)熒光半導(dǎo)體納米晶體(即，量子點(diǎn))，金屬納米顆粒(例如，金、銀、銅和鉬)或納米簇，順磁金屬離子，酶(對(duì)于酶的特定實(shí)例，見(jiàn)下文)；比色標(biāo)記物(諸如，像染料、膠態(tài)金等)，生物素，地高辛，可獲得抗血清或單克隆抗體的蛋白。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括熒光標(biāo)記物。具有各種各樣的化學(xué)結(jié)構(gòu)和物理特性的許多已知熒光標(biāo)記部分適合用于本發(fā)明的方法和診斷的實(shí)踐中。合適的熒光染料包括但不限于熒光素和熒光素染料(例如，異硫氰酸熒光素或FITC，萘并熒光素，4'，5'-二氯-2'，7'-二甲氧基熒光素，6-羧基熒光素或FAM)，碳菁，份菁(merocyanine)，苯乙烯型染料，氧醇染料(oxonoldyes)，藻紅素，赤蘚紅，曙紅，羅丹明染料(rhodaminedye)(例如，羧基四甲基-羅丹明或TAMRA，羧基羅丹明6G，羧基-X-羅丹明(ROX)，麗絲胺羅丹明B，羅丹明6G，羅丹明綠(rhodamineGreen)，羅丹明紅(rhodamineRed)，四甲基羅丹明或TMR)，香豆素和香豆素染料類(例如，甲氧基香豆素，二烷基氨基香豆素，羥基香豆素(hydroxycoumarin)和氨基甲基香豆素(aminomethylcoumarin)或AMCA)，俄勒岡綠染料(OregonGreendye)(例如，俄勒R綠488，俄勒R綠500，俄勒R綠514)，德克薩斯紅(TexasRed)，德克薩斯紅-X，SpectrumRed,SpectrumGreen，菁染料(例如，Cy-3,Cy-5,Cy-3.5,Cy-5.5),AlexaFluor染料(例如，AlexaFluor350,AlexaFluor488，AlexaFluor532,AlexaFluor546,AlexaFluor568,AlexaFluor594,AlexaFluor633，AlexaFluor660andAlexaFluor680)，BODIPY染料(例如，BODIPYFL，BODIPYR6G,BODIPYTMR,BODIPYTR,BODIPY530/550，BODIPY558/568，BODIPY564/570，BODIPY576/589，BODIPY581/591,BODIPY630/650,B0DIPY650/665)，IRD染料(例如，IRD40,IRD700,IRD800)等。對(duì)于合適的熒光染料的更多實(shí)例以及用于將熒光染料連接至其他化學(xué)實(shí)體諸如蛋白禾口月太的方法，參見(jiàn)，例如，“TheHandbookofFluorescentProbesandResearchProducts",9thEd.，MolecularProbes,Inc.，Eugene,OR。熒光標(biāo)記劑的有利性能包括高摩爾吸收系數(shù)、高熒光量子產(chǎn)率以及光穩(wěn)定性。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記熒光團(tuán)如愿地在光譜的可見(jiàn)光(即，400至750nm之間)而不是紫外范圍(S卩，低于400nm)呈現(xiàn)吸收和發(fā)射波長(zhǎng)。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括酶。合適酶的實(shí)例包括但不限于在ELISA中使用的那些，例如，辣根過(guò)氧物酶、β-半乳糖苷酶、熒光素酶以及堿性磷酸酶。其他實(shí)例包括β-葡糖苷酸酶、β-D-葡萄糖苷酶、脲酶、葡糖氧化酶合過(guò)氧化物(glucoseoxidaseplusperoxide)以及堿性磷酸酶。酶可以使用連接子基團(tuán)諸如碳化二亞胺、二異氰酸酯、戊二醛等連接至氯毒素部分。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括通過(guò)單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)和正電子發(fā)射斷層顯像(PET)可檢測(cè)的放射性同位素。這樣的放射性同位素的實(shí)例包括但不限于碘-131(131I)、碘-125(125I)、鉍-212(212Bi)、鉍-213(213Bi)、砹-221(211At)、銅-67(67Cu)、銅-64(64Cu)、錸-186(186Re)、錸-188(188Re)、磷-32(32P)、釤-153(153Sm)、镥-177(117Lu)、锝-99m(99mTc)、鎵-67(67Ga)、銦-111(111In)以及鉈-201(201Tl)。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括通過(guò)Y照相機(jī)可檢測(cè)的放射性同位素。這樣的放射性同位素的實(shí)例包括但不限于碘-131(131I)和锝-99m(99mTc)。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括在核磁共振(MRI)中為良好的對(duì)比增強(qiáng)劑的順磁金屬離子。這樣的順磁金屬離子包括但不限于釓III(Gd3+)、鉻III(Cr3+)、鏑III(Dy3+)、鐵III(Fe3+)、錳II(Mn2+)、和鐿III(Yb3+)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括釓III(Gd3+)。釓是用于MRI的FDA批準(zhǔn)的對(duì)比劑，其在異常組織中積累導(dǎo)致這些異常區(qū)域在核磁共振成像中變得非常明亮(增強(qiáng))。釓已知在身體的不同區(qū)域尤其在腦中正常和異常組織之間提供強(qiáng)對(duì)比。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記部分包括通過(guò)核磁共振光譜(MRS)可檢測(cè)的穩(wěn)定順磁同位素。合適的穩(wěn)定順磁同位素的實(shí)例包括但不限于碳-13(13C)和氟-19(19F)。D.氯毒素劑的形式在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑包括與至少一個(gè)治療性部分聯(lián)接(associate)的至少一個(gè)氯毒素部分。因而，由至少兩個(gè)其他分子的聯(lián)接(例如，鍵合、相互作用、融合或連接)產(chǎn)生氯毒素劑。在氯毒素劑中的氯毒素部分與治療性部分之間的聯(lián)接可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。無(wú)論鍵合、相互作用、融合或連接的特性如何，在氯毒素部分與治療性部分之間的聯(lián)接優(yōu)選是選擇性的、特異性的并足夠強(qiáng)使得氯毒素劑在傳送/遞送至腫瘤之前和期間不會(huì)離解。在氯毒素劑中的氯毒素部分與治療性部分之間的聯(lián)接可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學(xué)、生物化學(xué)、酶或基因連接來(lái)實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方式中，氯毒素部分與治療性部分之間的聯(lián)接是非共價(jià)的。非共價(jià)相互作用的實(shí)例包括但不限于疏水相互作用、靜電相互作用、偶極相互作用、范德華相互作用、氫鍵。在某些實(shí)施方式中，氯毒素部分與治療性部分之間的聯(lián)接是共價(jià)的。本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了，這些部分可以彼此直接或間接相連(例如，通過(guò)連接子，如下文所述的)。在某些實(shí)施方式中，氯毒素部分與治療性部分是彼此直接共價(jià)連接的。直接共價(jià)鍵合可以通過(guò)諸如酰胺、酯、碳-碳、二硫、氨基甲酸、醚、硫醚、脲、胺、碳酸鍵的鍵聯(lián)進(jìn)行。共價(jià)鍵合可以通過(guò)利用存在于氯毒素部分上和/或治療性部分上的官能團(tuán)來(lái)實(shí)現(xiàn)?？商鎿Q地，非關(guān)鍵氨基酸可以被會(huì)引入用于連接目的的有用基團(tuán)(氨基，羧基或锍基)的其他氨基酸所替代?？商鎿Q地，附加的氨基酸可以添加至氯毒素部分以引入用于連接目的的有用基團(tuán)(氨基，羧基或锍基)。能夠用于將這些部分連接在一起的合適基團(tuán)包括但不限于胺基、酐、羥基、羧基、硫醇等。活化劑如碳二亞胺可以用來(lái)形成直接鍵聯(lián)。各種各樣的活化劑在本領(lǐng)域是已知的，并且適合于連接治療性試劑和氯毒素部分。在其他實(shí)施方式中，在氯毒素劑中的氯毒素部分和治療性部分通過(guò)連接子基團(tuán)間接彼此共價(jià)連接。這可以通過(guò)使用在本領(lǐng)域已知的任何數(shù)量的穩(wěn)定雙官能團(tuán)試劑來(lái)完成，e括均官能i式齊Ll(homofunctionalagent)或雜官能i式齊[J(heterofunctionalagent)(S樣的試劑的實(shí)例，參見(jiàn)，例如，PierceCatalogandHandbook)。使用雙官能連接子與使用活化劑的不同在于，前者造成在所產(chǎn)生的氯毒素劑中存在的連接(linking)部分，而后者造成在反應(yīng)中所涉及的兩個(gè)部分之間的直接聯(lián)結(jié)(coupling)。雙官能連接子的作用可以使得兩個(gè)不同惰性部分之間的反應(yīng)?？商鎿Q地或附加地，成為反應(yīng)產(chǎn)物的一部分的雙官能連接子可以選擇成使得其賦予氯毒素劑一定程度的構(gòu)象靈活性(例如，雙官能連接子包括含有數(shù)個(gè)原子的直鏈烷基鏈，例如，直鏈烷基鏈含有2至10個(gè)碳原子)。可替換地或附加地，雙官能連接子選擇成使得在氯毒素部分與治療性部分之間形成的鍵聯(lián)是可解離的，例如，可水解的(例如，這樣的連接子，參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)5，773，001；5,739,116和5，877，296，其各自全部?jī)?nèi)容合并于此以供參考)。當(dāng)結(jié)合物(conjugate)水解后觀測(cè)到較高活性的氯毒素部分和/或治療性部分時(shí)例如優(yōu)選使用這樣的連接子。治療性部分可以從氯毒素部分解離的典型機(jī)理包括在溶酶體(腙、縮醛以及類順式烏頭酸酰胺(cis-aconitate-likeamide)的酸性pH下的水解，通過(guò)溶酶體酶的肽解離(組織蛋白酶和其他溶酶體酶)，以及二硫鍵的還原。治療性部分可以從氯毒素部分解離的其他機(jī)理包括在細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)生理PH下的水解。當(dāng)用于連接治療性部分與氯毒素部分的交聯(lián)劑是生物可降解/生物蝕解實(shí)體如葡聚糖凝膠時(shí)應(yīng)用該機(jī)理。例如，含腙氯毒素劑可以用引入的、提供所需釋放性能的羰基來(lái)制得。氯毒素劑還可以用包括在一端具有二硫基團(tuán)在另一端具有胼衍生物的烷基鏈的連接子制得。含有非腙官能團(tuán)的連接子還具有在溶酶體的酸性環(huán)境下解離的潛能。例如，氯毒素劑可以由硫醇反應(yīng)性連接子制得，該連接子含有分子內(nèi)可解離的非腙基團(tuán)，諸如酯、酰胺、縮醛/縮酮。pH敏感性連接子類型的另一實(shí)例是順式烏頭酸(cis-aconitate)，其具有并聯(lián)(juxtapose)至酰胺基的羧酸基團(tuán)。在酸性溶酶體中羧酸加速酰胺水解。用其他數(shù)種類型的結(jié)構(gòu)達(dá)到相似類型水解速率加速度的連接子也可以使用。另一種潛在用于氯毒素劑釋放的方法是通過(guò)酶溶體酶的肽的酶水解。在一種實(shí)施方式中，肽毒素通過(guò)酰胺鍵連接至對(duì)氨基苯甲醇，然后氨基甲酸酯或碳酸酯在苯甲醇與治療性部分之間產(chǎn)生。肽的解離導(dǎo)致氨基甲酸苯甲酯或碳酸苯甲酯的瓦解。在另一個(gè)實(shí)例中，酚可以取代氨基甲酸酯由連接子的瓦解而解離。在另一種變型中，二硫還原用來(lái)引發(fā)對(duì)巰基苯甲醇氨基甲酸酯或碳酸酯的瓦解。在其中氯毒素劑內(nèi)的治療性部分是蛋白的實(shí)施方式中，多肽或肽、氯毒素劑可以是融合蛋白。如上已經(jīng)限定的，融合蛋白是包含經(jīng)由其各自肽骨架通過(guò)共價(jià)鍵連接的兩個(gè)或多個(gè)蛋白或肽的分子。在本發(fā)明的方法中使用的融合蛋白可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的方法生產(chǎn)。例如，他們可以通過(guò)使用多肽合成器的直接蛋白合成法來(lái)生產(chǎn)。可替換地，基因片段的PCR放大可以使用產(chǎn)生在兩個(gè)保守基因片段之間的互補(bǔ)突出部(complementaryoverhang)的錨定引物來(lái)進(jìn)行，其隨后淬滅并再放大以產(chǎn)生嵌合基因。融合蛋白可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)重組方法獲得(參見(jiàn)，例如，Maniatisetal."MolecularCloning=ALaboratoryManual，，,2ndEd.,1989,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpring,N.Y.)。這方法通常包括(1)構(gòu)建編碼所需融合蛋白的核酸分子；(2)將核酸分子插入到重組表達(dá)載體；(3)用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化合適的宿主細(xì)胞；以及(4)在宿主細(xì)胞中表達(dá)融合蛋白。由這樣的方法產(chǎn)生的融合蛋白可以或者直接從培養(yǎng)介質(zhì)，或者通過(guò)細(xì)胞的溶解收集并分離，這在本領(lǐng)域是已知的。通過(guò)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞生產(chǎn)純化蛋白的許多方法在本領(lǐng)域是眾所周知的。這些方法包括但不限于，沉淀、離心、凝膠過(guò)濾以及(離子交換、反相、親和)柱色譜。已經(jīng)描述了其他純化方法(參見(jiàn)，例如，Deutscheretal."GuidetoProteinPurification”inMethodsinEnzymology,1990,Vol.182,AcademicPress)。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，在本發(fā)明方法中的氯毒素劑可以包含許多數(shù)量的氯毒素部分和許多數(shù)量的治療性部分，通過(guò)任何數(shù)量的不同方式彼此聯(lián)接。結(jié)合體的設(shè)計(jì)將受到其所需目的以及其使用的具體上下文所希望的性能的影響。將氯毒素部分聯(lián)接或結(jié)合至治療性部分以形成氯毒素劑的方法的選擇在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)中，并通常取決于在這些部分之間所需的相互作用的特性(即，共價(jià)對(duì)非共價(jià)和/或可解離對(duì)非可解離)，治療性部分的特性，在所涉及的部分上的功能性化學(xué)基團(tuán)的存在和特性等。在標(biāo)記的氯毒素劑中，在氯毒素部分(或治療性部分)與標(biāo)記部分之間的聯(lián)接可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。在共價(jià)聯(lián)接的情況下，氯毒素(或治療性部分)與標(biāo)記部分的可以直接或間接彼此連接，如上所述。在某些實(shí)施方式中，在氯毒素部分(或治療性部分)與標(biāo)記部分之間的聯(lián)接是非共價(jià)的。非共價(jià)聯(lián)接的實(shí)例包括但不限于疏水相互作用、靜電相互作用、偶極相互作用、范德華相互作用、氫鍵。例如，標(biāo)記部分可以通過(guò)螯合(例如，金屬同位素可以螯合到與氯毒素部分相連例如融合的PolyHis區(qū)域上)連接至氯毒素部分(或治療性部分)。在某些實(shí)施方式中，氯毒素部分(或治療性部分)是同位素標(biāo)記的(例如，其含有被具有與通常天然發(fā)現(xiàn)原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子所替代一個(gè)或多個(gè)原子)。可替換地或附加地，同位素可以連接至氯毒素部分和/或治療性部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，在本發(fā)明的某些方法中使用的標(biāo)記的氯毒素劑可以包括任何數(shù)量的氯毒素部分，任何數(shù)量的治療性部分以及任何數(shù)量的標(biāo)記部分，通過(guò)任何不同的方式彼此聯(lián)接。標(biāo)記的氯毒素劑的設(shè)計(jì)將受到其所需目的以及其使用的具體上下文所希望的性能以及檢測(cè)所選擇的方法的影響。II.治療方法本發(fā)明治療方法包括系統(tǒng)性(例如，靜脈內(nèi))給予有效量的氯毒素劑，或其藥物組合物，至其需要的個(gè)體(即，患有腫瘤的個(gè)體)。從而，本發(fā)明的治療方法可以用于減小固體腫瘤的尺寸，抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移，治療淋巴癌，和/或延長(zhǎng)患有癌癥或癌病癥的哺乳動(dòng)物(包括人類)的生存時(shí)間。A.適應(yīng)癥根據(jù)本發(fā)明可以治療的癌癥或癌病癥的實(shí)例包括但不限于腦或中樞神經(jīng)的腫瘤(例如，腦膜、腦、脊髓、顱神經(jīng)、以及CNS其他部分的腫瘤，諸如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤或髓母細(xì)胞瘤)；頭和/或頸癌，乳腺癌，循環(huán)系統(tǒng)的癌癥(例如，心臟、縱隔和胸膜以及其他胸內(nèi)器官、血管腫瘤，腫瘤相關(guān)的血管組織)；血管和淋巴系統(tǒng)的腫瘤(例如，霍奇金病，非霍奇金病淋巴瘤，伯基特淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)，艾滋病相關(guān)淋巴瘤，惡性免疫增生病，多發(fā)性骨髓瘤，惡性漿細(xì)胞瘤，淋巴細(xì)胞白血病，髓系白血病，急性或慢性淋巴細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞白血病，特異性細(xì)胞類型的其他白血病，非特異性細(xì)胞類型的白血病，淋巴、造血和相關(guān)組織的非特異性惡性腫瘤，諸如彌漫性大細(xì)胞性淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤或皮膚T細(xì)胞淋巴瘤)；排泄系統(tǒng)(例如，腎、腎盂、輸尿管、膀胱、其他泌尿器官)的腫瘤；胃腸道(例如，食管、胃、小腸、直腸、大腸、直腸乙狀結(jié)腸交界部、直腸、肛門(mén)、肛管)的癌癥；涉及肝臟和肝內(nèi)膽管、膽囊以及膽道其他部分、胰腺以及其他消化器官的腫瘤，口腔(例如，唇、舌、牙齦、口底、腭、腮腺、涎腺、扁桃體、口咽、鼻咽、膿樣竇(puriformsinus)、下咽以及口腔的其他部位)的腫瘤；生殖系統(tǒng)(例如，外陰、陰道、子宮頸、子宮、卵巢以及雌性生殖器官相關(guān)其他部位、胎盤(pán)、陰莖、前列腺、睪丸以及雌性生殖器官相關(guān)其他部位)的腫瘤；呼吸道(例如，鼻腔、中耳、鼻竇、喉、氣管、支氣管和肺、小細(xì)胞性肺癌以及非小細(xì)胞性肺癌)的腫瘤；骨骼系統(tǒng)(例如，肢體的骨骼和關(guān)節(jié)軟骨、骨關(guān)節(jié)軟骨和其他部位)的腫瘤；皮膚的腫瘤(例如，皮膚的惡性黑色素瘤、非黑素性皮膚癌、皮膚的基底細(xì)胞癌、皮膚的鱗狀細(xì)胞癌、間皮瘤、卡波西肉瘤)；涉及其他組織的腫瘤包括外周性神經(jīng)和自主神經(jīng)系統(tǒng)，結(jié)締和軟組織，腹膜后腔和腹膜，眼和附件，甲狀腺，腎上腺，內(nèi)分泌腺以及相關(guān)結(jié)構(gòu)，淋巴結(jié)的繼發(fā)性和非特異性惡性腫瘤，消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的繼發(fā)性惡性腫瘤，其他部位的繼發(fā)性惡性腫瘤。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法用于肉瘤的治療。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法用于治療膀胱癌、乳腺癌、慢性淋巴瘤白血病、頭和頸部癌癥、子宮內(nèi)膜癌、非霍奇金淋巴瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌以及前列腺癌。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，組合物和方法用于治療神經(jīng)外胚層起源的腫瘤。在人類患者中存在的神經(jīng)外胚層起源的任何腫瘤通常使用本發(fā)明的組合物和方法治療。在某些實(shí)施方式中，影響患者的神經(jīng)外胚層起源的腫瘤為以下構(gòu)成的組的成員膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、室管膜瘤、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神經(jīng)外胚層瘤、肺小細(xì)胞癌、尤文瘤(Ewing'ssarcoma)、腦中神經(jīng)外胚層起源的轉(zhuǎn)移瘤。在某些實(shí)施方式中，神經(jīng)外胚層起源的腫瘤影響患者的腦部。在某些實(shí)施方式中，腦腫瘤是膠質(zhì)瘤。約一半的原發(fā)性腦腫瘤是膠質(zhì)瘤。有4種主要類型的膠質(zhì)瘤星形細(xì)胞瘤(其在成人和兒童中均是最常見(jiàn)類型的膠質(zhì)瘤)，室管膜瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，混合性膠質(zhì)瘤。膠質(zhì)瘤可以根據(jù)他們的位置分類幕下(即，腦的下部，在兒童患者中最常見(jiàn))或幕上(即，位于腦的上部，在成人患者中最常見(jiàn))。膠質(zhì)瘤進(jìn)一步根據(jù)他們等級(jí)分類，其由腫瘤的病理學(xué)評(píng)價(jià)來(lái)確定。世界衛(wèi)生組織(WHO)已經(jīng)開(kāi)發(fā)了分級(jí)系統(tǒng)，由I級(jí)膠質(zhì)瘤(其趨于最小侵襲性)到VI級(jí)膠質(zhì)瘤(其趨于最大侵襲性和惡性)。低等級(jí)(即，I級(jí)或II級(jí))膠質(zhì)瘤的實(shí)例包括但不限于毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤(也稱為青少年毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤)、纖維性星形細(xì)胞瘤、多形性黃色星形細(xì)胞瘤、以及胚胎發(fā)育不良性神經(jīng)上皮瘤。高等級(jí)膠質(zhì)瘤包括III級(jí)膠質(zhì)瘤(例如，間變性星形細(xì)胞瘤，AA)以及IV級(jí)膠質(zhì)瘤(多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，GBM)。間變性星形細(xì)胞瘤在其30s-50s的男性和女性中最頻發(fā)，占所有腦腫瘤的4%。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，最具侵蝕性類型的膠質(zhì)腫瘤，在其50s-70s的男性和女性中最頻發(fā)，占所有原發(fā)性腦腫瘤的23%。預(yù)后型是IV級(jí)最糟的，平均生存時(shí)間為12個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法用于治療高等級(jí)膠質(zhì)瘤。不考慮侵蝕性治療，膠質(zhì)瘤通常復(fù)發(fā)，經(jīng)常具有較高等級(jí)并有時(shí)具有不同的形態(tài)。當(dāng)復(fù)發(fā)改變時(shí)，IV級(jí)膠質(zhì)瘤不變地復(fù)發(fā)。因而，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法用于治療復(fù)發(fā)性膠質(zhì)瘤，尤其復(fù)發(fā)性高等級(jí)膠質(zhì)瘤?？梢杂帽景l(fā)明的組合物和方法治療的腫瘤還包括用其他化療難治的腫瘤。術(shù)語(yǔ)“難治”，當(dāng)用于本文中指腫瘤是，意味著該腫瘤(和/或其轉(zhuǎn)移瘤)，用不是本發(fā)明組合物的至少一種化療治療，在用這樣的化療藥劑治療后沒(méi)有顯示或僅顯示出微弱的抗增殖響應(yīng)(即，沒(méi)有或僅微弱地抑制腫瘤生長(zhǎng))"也就是說(shuō)，腫瘤用其他(優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn))化療根本不能治療或僅具有不滿意的結(jié)果。本發(fā)明，當(dāng)提及治療難治(性)腫瘤或類似物時(shí)，應(yīng)理解為不僅包括⑴其中在治療患者期間一種或多種化療已經(jīng)失敗的腫瘤，而且包括(ii)在化療劑存在的情況下通過(guò)其他方式例如活檢和培養(yǎng)物顯示出難治的腫瘤。根據(jù)本發(fā)明能夠接受治療的患者通常包括任何診斷患有腫瘤的患者。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)明了，可以采用不同的診斷方法，取決于腫瘤的位置和特性，包括成像，活檢等。B.劑量和給藥在根據(jù)本發(fā)明的治療方法中，氯毒素劑或其藥物組合物，通常以這樣的量和這樣時(shí)間給藥必須或足以達(dá)到至少一種所需結(jié)果。例如，氯毒素劑可以以這樣的量和這樣的時(shí)間給藥其殺死癌細(xì)胞，減小腫瘤的大小，抑制或延遲腫瘤生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間，或產(chǎn)生其他臨床優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)本發(fā)明的治療可以由在一段時(shí)間單劑量或多計(jì)量構(gòu)成。給藥可以每天、每周(或以一些其他多天間隔)或以間歇時(shí)間表進(jìn)行一次或多次。待給藥的氯毒素劑或其藥物組合物的準(zhǔn)確量會(huì)隨著主體與主題之間而變化，并且取決于數(shù)種因素(見(jiàn)下文)。氯毒素劑或其藥物組合物可以采用用于達(dá)到所需治療效果有效的任何系統(tǒng)性給藥途徑來(lái)給藥。典型的系統(tǒng)性給藥途徑包括但不限于肌肉、靜脈、肺以及口服途徑。給藥也可以例如通過(guò)灌注注射或推注注射，或通過(guò)上皮或皮膚粘膜層吸(例如，口服、粘膜(mucosa)、直腸和腸粘膜)收來(lái)進(jìn)行。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，氯毒素劑是靜脈給藥的。用于在人患者中氯毒素劑靜脈給藥的示例性步驟描述于實(shí)施例9中。取決于給藥的途徑，有效劑量可以根據(jù)待治療主體的體重、體表面積或器官/腫瘤尺寸來(lái)計(jì)算。合適劑量的優(yōu)化可以有在人臨床試驗(yàn)中所獲得的藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的引導(dǎo)下由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地進(jìn)行。最終計(jì)量方案將由主治醫(yī)師來(lái)決定，要考慮到改變藥物作用的各種因素，例如，藥物的特定活性，患者的傷害嚴(yán)重性和反應(yīng)性，患者的年齡、病癥、體重、性別以及飲食，任何現(xiàn)癥感染的嚴(yán)重性，給藥時(shí)間，其他療法的使用(或沒(méi)有)，以及其他臨床因素。隨著使用氯毒素劑研究的進(jìn)行，將會(huì)出現(xiàn)關(guān)于合適計(jì)量水平和治療持續(xù)時(shí)間的進(jìn)一步信息。典型計(jì)量包括1.Opg/kg體重至100mg/kg體重。例如，對(duì)于系統(tǒng)性給藥，劑量可以是100.Ong/kg體重至10.0mg/kg體重。更具體地，在其中氯毒素劑是靜脈給藥的某些實(shí)施方式中，藥劑的計(jì)量給藥可以包括給予包括以下的一個(gè)或多個(gè)劑量例如約0.OOlmg/kg至約5mg/kg、約0.01mg/kg至約4mg/kg、約0.02mg/kg至約3mg/kg、約0.03mg/kg至約2mg/kgor約0.03mg/kg至約1.5mg/kg的氯毒素。例如，在某些實(shí)施方式中，可以給予一個(gè)或多個(gè)劑量的氯毒素劑，其各自含有約0.03mg/kg、約0.04mg/kg、約0.05mg/kg、約0.06mg/kg、約0.07mg/kg、約0.09mg/kg、約1.0mg/kg或超過(guò)1.0mg/kg的氯毒素。在其他實(shí)施方式中，可以給予一個(gè)或多個(gè)劑量的氯毒素劑，其各自含有約0.05mg/kg、約0.10mg/kg、約0.15mg/kg、約0.20mg/kg、約0.25mg/kg、約0.30mg/kg、約0.35mg/kg、約0.40mg/kg、約0.45mg/kg、約0.50mg/kg、約0.55mg/kg、約0.60mg/kg、約0.65mg/kg、約0.70mg/kg、約0.75mg/kg、約0.80mg/kg、約0.85mg/kg、約0.90mg/kg、約0.95mg/kg、約1.0mg/kg或超過(guò)約lmg/kg的氯毒素。還在其他實(shí)施方式中，可以給予一個(gè)或多個(gè)劑量的氯毒素劑，其各自含有約1.0mg/kg、約1.05mg/kg、約1.IOmg/kg、約1.15mg/kg、約1.20mg/kg、約1.25mg/kg、約1.3mg/kg、約1.35mg/kg、約1.40mg/kg、約1.45mg/kg、約1.50mg/kg或超過(guò)約1.50mg/kg的氯毒素。在這樣的實(shí)施方式中，治療可以包括給予單劑量的氯毒素劑或給予2劑量、3劑量、4劑量、5劑量、6劑量或多于6劑量。兩個(gè)連續(xù)劑量可以以1天間隔、2天間隔、3天間隔、4天間隔、5天間隔、6天間隔、7天間隔、或大于7天間隔(例如，10天、2周或大于2周)給藥。C.聯(lián)合療法應(yīng)當(dāng)明了，本發(fā)明的方法可以與另外的療法聯(lián)合使用(即，根據(jù)本發(fā)明的治療可以與一種或多種所需療法或醫(yī)療程序同時(shí)、之前或之后給予)。以這樣的聯(lián)合方案采用療法(治療或程序)的具體聯(lián)合會(huì)考慮所需治療和/或程序的相容性以及所要達(dá)到的所需治療效果。例如，本發(fā)明的治療方法可以與其他程序一起使用，包括手術(shù)、放射療法(例如，Y_輻射、中子束放射療法、電子束放射療法、質(zhì)子療法、近距離放射療法、系統(tǒng)性放射同位素)、內(nèi)分泌療法、熱療、冷凍療法，取決于待治療的腫瘤。在腦腫瘤的許多情況中，本發(fā)明的治療在手術(shù)后將會(huì)非常頻繁給予。在腦腫瘤的治療中，手術(shù)的主要目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)全切除，即，去除所有可見(jiàn)腫瘤。實(shí)現(xiàn)這樣的目標(biāo)的困難之一是這些腫瘤是浸潤(rùn)性的，即，他們趨于在正常腦結(jié)構(gòu)內(nèi)外穿織(weave)。另外，在從患者腦安全去除的腫瘤的量方面存在很大的可變性。如果所有或一部分腫瘤位于控制關(guān)鍵功能的腦區(qū)域中，去除通常是不可能的。在腦腫瘤的許多情況下，本發(fā)明的治療將經(jīng)常與放射療法聯(lián)合(即，同時(shí)，之前，或之后)給予。在傳統(tǒng)治療中，放射療法通常在手術(shù)后。輻射通常在數(shù)周進(jìn)行一系列的每天治療(稱為分次劑量(fraction))。對(duì)給予輻射的這種“分次”方式是重要的以使對(duì)腫瘤細(xì)胞的破壞最大化對(duì)正常相鄰腦部的副作用最小化。給予輻射的區(qū)域(稱為輻射區(qū)域)仔細(xì)計(jì)算以避免包括可能很多的正常腦。可替換地或附加地，本發(fā)明的治療方法可以與其他治療劑諸如減弱任何不良作用(例如，止吐藥)藥劑和/或與其他批準(zhǔn)的化療藥物聯(lián)合給藥?；熕幍膶?shí)例包括但不限于烷化藥物(氮芥、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、美法侖(Melphalan)、異環(huán)磷酰胺)、抗代謝藥物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗劑和嘧啶拮抗劑(6-巰基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他濱)、紡錘體毒劑(長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇)、鬼白毒素(依托泊苷、伊立替康、拓?fù)涮婵?、抗生素(阿霉素、博萊霉素、絲裂霉素)、亞硝基脲(卡氮芥、洛莫司汀)、無(wú)機(jī)離子(順鉬、卡鉬)、酶(天冬酰胺酶)、以及激素(三苯氧胺、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、和甲地孕酮(Megestrol))，來(lái)命名幾種。對(duì)于更新的癌癥治療的更綜合性的討論，參見(jiàn)http://www.cancer,rov/,FDA批準(zhǔn)腫瘤學(xué)藥物的列表在http//www,fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm,TheMerckManual,SeventeenthEd.1999，其全部?jī)?nèi)容合并于此，以供參考。本發(fā)明的方法還可以與一種或多種進(jìn)一步聯(lián)合的細(xì)胞毒素劑的作為治療方案的一部分一起采用，其中進(jìn)一步聯(lián)合的細(xì)胞毒素劑選自CH0PP(環(huán)磷酰胺，阿霉素，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，以及甲基芐胼)；CHOP(環(huán)磷酰胺，阿霉素，長(zhǎng)春新堿，以及潑尼松)；COP(環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿，以及潑尼松)；CAP-BOP(環(huán)磷酰胺，阿霉素，甲基芐胼，博萊霉素，長(zhǎng)春新堿，以及潑尼松)；m-BAC0D(甲氨蝶呤，博萊霉素，阿霉素，環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿，地塞米松，以及醛氫葉酸(leucovorin))；ProMACE-MOPP(潑尼松，甲氨蝶呤，阿霉素，環(huán)磷酰胺，依托泊苷，醛氫葉酸，氮芥，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，以及甲基芐胼)；ProMACE-CytaBOM(潑尼松，甲氨蝶呤，阿霉素，環(huán)磷酰胺，依托泊苷，醛氫葉酸，阿糖胞苷，博萊霉素，以及長(zhǎng)春新堿)；MACOP-B(甲氨蝶呤，阿霉素，環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，博萊霉素，以及醛氫葉酸)；MOPP(氮芥，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，以及甲基芐胼)；ABVD(多柔比星/阿霉素，博萊霉素，長(zhǎng)春堿，以及氮烯咪胺)；MOPP(氮芥，長(zhǎng)春新堿，潑尼松以及甲基芐胼)交替ABV(多柔比星/阿霉素，博萊霉素，以及長(zhǎng)春堿)；MOPP(氮芥，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，以及甲基芐胼)交替ABVD(多柔比星/阿霉素，博萊霉素，長(zhǎng)春堿，以及氮烯咪胺)；ChlVPP(苯丁酸氮芥，長(zhǎng)春堿，甲基芐胼，以及潑尼松)；IMVP-16(異環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，以及依托泊苷)；MIME(丙咪腙，異環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤，以及依托泊苷)；DHAP(地塞米松，高劑量阿糖胞苷，以及順鉬)；ESHAP(依托泊苷，甲潑尼龍，高劑量阿糖胞苷，以及順鉬)；CEPP(B)(環(huán)磷酰胺，依托泊苷，甲基芐胼，潑尼松，以及博萊霉素)；CAMP(洛莫司汀，米托蒽醌，阿糖胞苷，以及潑尼松)；CVP-I(環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿，以及潑尼松)，ESHOP(依托泊苷，甲潑尼龍，高劑量阿糖胞苷，長(zhǎng)春新堿以及順鉬)；EPOCH(依托泊苷，長(zhǎng)春新堿，以及阿霉素96小時(shí)隨單次劑量的環(huán)磷酰胺以及口服潑尼松)，ICE(異環(huán)磷酰胺，環(huán)磷酰胺，以及依托泊苷)，CEPP(B)(環(huán)磷酰胺，依托泊苷，甲基芐胼，潑尼松，以及博萊霉素)，CHOP-B(環(huán)磷酰胺，阿霉素，長(zhǎng)春新堿，潑尼松，以及博萊霉素)，CEPP-B(環(huán)磷酰胺，依托泊苷，甲基芐胼，以及博萊霉素)，以及P/D0CE(表阿霉素或阿霉素，長(zhǎng)春新堿，環(huán)磷酰胺，以及潑尼松)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)明了，選擇與本發(fā)明的方法聯(lián)合給藥的一種或多種治療劑將取決于待治療的腫瘤。例如，用于腦腫瘤的化療藥物包括但不限于替莫唑胺(Temodar)，甲基芐胼(Matulane)，以及洛莫司汀(CCNU)，其是口服的；長(zhǎng)春新堿(Oncovin或Vincasarpps)，順鉬(Platinol)，卡氮芥(BCNU，BiCNU)，以及卡鉬(Paraplatin)，其是靜脈給藥的；以及甲氨蝶呤(Rheumatrex或ivexaii)，其可以口服、靜脈或銷(xiāo)內(nèi)給藥(即，直接注射到脊液中)。BCNU也可以在手術(shù)期間以聚合物薄片移植物的形式給予(Giadel薄片)。用于腦腫瘤的最常用的前述聯(lián)合療法之一是pcv(甲基芐胼，ccnu,and長(zhǎng)春新堿)，其通常每六周給予。在其中待治療的腫瘤是神經(jīng)外胚層起源的腦腫瘤的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以與用于控制諸如癲癇發(fā)作或腦水腫的癥狀的藥劑聯(lián)合使用。成功地給予控制與腦腫瘤相關(guān)的癲癇發(fā)作的抗驚厥藥包括但不限于苯妥英(Dilantin)、卡馬西平(Tegretol)以及雙丙戊酸鈉(Depakote)。腦的水腫可以用留族化合物治療(例如，地塞米松(Decadron))。D.藥物組合物如上所述，本發(fā)明的治療方法包括給予氯毒素本身或以藥物組合物的形式給予。藥物組合物通常包含有效量的至少一種氯毒素劑和至少一種藥用載體或賦形劑。藥物組合物可以采用本領(lǐng)域熟知的傳統(tǒng)方法配制。最佳藥物制劑可以根據(jù)給藥途徑和所需劑型而改變。這樣的制劑可以影響所給予的化合物的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率、體內(nèi)清除速率。制劑可以產(chǎn)生固體、液體或半液體藥物組合物。藥物組合物可以配置成易于給藥的單位劑量形式或均一劑量。本文所使用的表達(dá)“單位劑量形式”是指用于待治療的患者的氯毒素劑的物理離散單位。每個(gè)單位含有計(jì)算產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性物質(zhì)。然而，應(yīng)當(dāng)理解，組合物的總劑量將由主治醫(yī)生在有力醫(yī)療判斷的范圍內(nèi)確定。如上所述，在某些實(shí)施方式中，氯毒素劑通過(guò)注射或灌注靜脈給藥。適合于通過(guò)注射或灌注給藥的藥物組合物可以根據(jù)已知技術(shù)使用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑以及懸浮劑來(lái)配制。藥物組合物也可以是在無(wú)毒稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如，作為在2，3_丁二醇中的溶液。在可以采用的可接受載體和溶劑中，可以是水、林格氏液、U.S.P.、等滲氯化鈉溶液。另外，無(wú)菌、固定油(fixedoil)常規(guī)地采用作為溶液或懸浮液介質(zhì)。為此，可以使用任何溫和的固定油，包括合成的單甘油酯或雙甘油酯。脂肪酸諸如油酸也可以用于制備可注射制劑?？勺⑸渲苿┛梢詿o(wú)菌化，例如，通過(guò)經(jīng)由除菌過(guò)濾器(bacterial-retainingfilter)過(guò)濾，或者通過(guò)并入在使用前可以溶解或分散在無(wú)菌水或其他無(wú)菌可注射介質(zhì)中的無(wú)菌固體組合物形式的滅菌劑。為了延長(zhǎng)藥物的效果，經(jīng)常希望減慢來(lái)自注射的藥物的吸收。這可以通過(guò)將活性組分溶解或懸浮在油載體中實(shí)現(xiàn)?？勺⑸浯鎯?chǔ)形式(injectabledepotform)可以通過(guò)形成在生物可降解聚合物諸如聚乳酸-聚乙交酯中藥物微膠囊化基質(zhì)來(lái)制備。取決于藥物與聚合物的比率以及所采用的具體聚合物的特性，可以控制藥物釋放的速率。可注射存儲(chǔ)制劑也可以通過(guò)將藥物包裹在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中。III.診斷方法A.給藥在另一方面，本發(fā)明提供腫瘤體內(nèi)診斷的方法。更具體地，提供用于將患者內(nèi)腫瘤組織與非腫瘤組織區(qū)分的方法。這樣的方法包括系統(tǒng)性(例如，靜脈)給予患者有效量的本文所述的標(biāo)記的氯毒素劑，或其藥物組合物，使得如果組織是腫瘤，會(huì)發(fā)生標(biāo)記的氯毒素劑與患者體內(nèi)的組織特異性結(jié)合。通常，標(biāo)記的氯毒素劑的劑量會(huì)取決于考慮因素諸如患者年齡、性別、體重，待檢查的身體區(qū)域，以及給藥途徑而改變。諸如禁忌癥、同步治療以及其他變量的因素也可以考慮以調(diào)節(jié)待給予的標(biāo)記的氯毒素劑的劑量。然而，這可以通過(guò)經(jīng)訓(xùn)練醫(yī)師容易地實(shí)現(xiàn)。通常，標(biāo)記的氯毒素的合適劑量對(duì)應(yīng)足以使得患者體內(nèi)的腫瘤檢測(cè)的最低量。例如，在氯毒素劑用131I標(biāo)記并靜脈給藥的實(shí)施方式中，標(biāo)記的氯毒素的劑量可以包括給予一個(gè)或多個(gè)劑量，各自包含約5mCi至約IOOmCi,例如，約5mCi至約80mCi，約IOmCi至約80mCi,或約IOmCi至約50mCi131I。例如，可以給予一個(gè)或多個(gè)劑量的131I標(biāo)記的氯毒素劑，其各自包含約IOmCi,約20mCi，約30mCi131I，約40mCimI，約50mCi131I，約60mCi131I，約70mCi131I，約80mCi131I，約90mCi131I，or約IOOmCi131I。在這樣的實(shí)施方式中，診斷程序可以包括給予單劑量的131I標(biāo)記的氯毒素劑或給予多劑量，例如，2劑量、3劑量或4劑量。兩個(gè)連續(xù)劑量可以以1天間隔、2天間隔、3天間隔、4天間隔、5天間隔、6天間隔、7天間隔、或大于7天間隔給藥。在其中使用131I標(biāo)記的氯毒素劑的實(shí)施方式中，患者優(yōu)選在給予131I標(biāo)記的氯毒素之前給予超飽和的碘化鉀(例如，根據(jù)本發(fā)明在治療之前的1天、2天或3天)。超飽和碘化鉀的給予阻止甲狀腺對(duì)131I的吸收，從而防止副作用如甲狀腺功能減退癥。隨著給予標(biāo)記的氯毒素劑并在特異性結(jié)合發(fā)生已經(jīng)過(guò)了足夠時(shí)間之后，進(jìn)行結(jié)合的標(biāo)記氯毒素劑的檢測(cè)。B.腫瘤檢測(cè)和定位本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識(shí)到，檢測(cè)標(biāo)記的氯毒素劑與感興趣組織的結(jié)合可以通過(guò)各種各樣的方法進(jìn)行，包括但不限于光譜法、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電子、光學(xué)或化學(xué)方式。檢測(cè)方法的選擇通?；谠噭?biāo)記部分(即，熒光部分、放射性同位素、順磁金屬離子等)的特性。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，患者體內(nèi)腫瘤的檢測(cè)和定位使用成像技術(shù)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)記部分的特性可以使用不同的成像技術(shù)。例如，如果標(biāo)記部分包含順磁金屬離子(例如，Gd3+)可以使用核磁共振成像(MRI)檢測(cè)該結(jié)合。如果標(biāo)記部分包含放射性同位素(例如，mI)單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)和/或正電子發(fā)射斷層顯像(PET)可以用于結(jié)合檢測(cè)。其他成像技術(shù)包括Y照相機(jī)成像。C.診斷根據(jù)本發(fā)明的診斷方法，如果標(biāo)記的氯毒素與感興趣組織的結(jié)合水平與標(biāo)記的氯毒素劑與正常組織的結(jié)合水平相比是提高的，那么該組織就鑒定為腫瘤組織。如上所述，正常組織在本文中定義為非腫瘤組織。例如，當(dāng)體內(nèi)實(shí)施該方法時(shí)，在感興趣器官(例如，腦)區(qū)域中測(cè)量的標(biāo)記的氯毒素劑的結(jié)合水平可以與相同器官正常區(qū)域測(cè)量的標(biāo)記的氯毒素劑的結(jié)合水平相比。在某些實(shí)施方式中，如果所測(cè)量的結(jié)合水平高于正常組織的結(jié)合水平，將該感興趣組織鑒定為腫瘤組織。例如，結(jié)合水平可以比正常組織結(jié)合水平高至少約2倍、高至少約3倍、高至少約4倍、高至少約5倍、高至少約10倍、高至少約25倍、高至少約50倍、高至少約75倍、高至少約100倍、高至少約150倍、高至少約200倍、或超過(guò)200倍。實(shí)施例以下實(shí)施例描述制造和實(shí)踐本發(fā)明的某些優(yōu)選模式。但是，應(yīng)當(dāng)了解這些實(shí)施例僅用于示例目的而非意在限制本發(fā)明的范圍。此外，除非實(shí)施例中的描述以過(guò)去時(shí)態(tài)呈現(xiàn)，正文，如說(shuō)明書(shū)的剩余部分，并不是要暗示實(shí)驗(yàn)已實(shí)際完成或數(shù)據(jù)已實(shí)際獲得。實(shí)施例1:TM-601和生物素化TM-601(TM-602)的體外細(xì)胞結(jié)合已經(jīng)研究了TM-601，原始分離自以色列金蝎(Ieiurusquinquestriatus)蝎毒的36個(gè)氨基酸的肽，結(jié)合至腫瘤細(xì)胞系和正常原代細(xì)胞培養(yǎng)物。獲得的結(jié)果進(jìn)一步確證先前的初步觀察，TM-601選擇性結(jié)合至多種不同的腫瘤類型。對(duì)人、大鼠、以及小鼠膠質(zhì)瘤(glioma，或神經(jīng)膠質(zhì)瘤)細(xì)胞系、原代培養(yǎng)細(xì)胞、以及非膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，包括來(lái)自于人、猴、大鼠、倉(cāng)鼠、及小鼠的那些，針對(duì)TM-601結(jié)合進(jìn)行測(cè)試。此外，也發(fā)現(xiàn)多種非膠質(zhì)瘤腫瘤系，包括例如源自肺、結(jié)腸、前列腺和黑色素瘤腫瘤的腫瘤系，結(jié)合TM-601。相比之下，在應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)條件下，發(fā)現(xiàn)許多原代培養(yǎng)細(xì)胞(大鼠和人星形細(xì)胞)和非膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(人肺成纖維細(xì)胞、人皮膚成纖維細(xì)胞、人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞、人神經(jīng)元細(xì)胞、以及3T3小鼠成纖維細(xì)胞)對(duì)于TM-601結(jié)合是陰性的。獲得的所有數(shù)據(jù)總結(jié)在圖1中。平板結(jié)合中及通過(guò)FACS分析的細(xì)胞上TM-601結(jié)合的證明在平板結(jié)合分析中使用生物素化TM-601(TM-602)以證明表現(xiàn)多種腫瘤類型的多種腫瘤細(xì)胞系的靶向。測(cè)試的人癌細(xì)胞系包括轉(zhuǎn)移的和原發(fā)的乳腺、肺、前列腺、腦、結(jié)腸直腸、以及黑色素瘤。更具體地，測(cè)試的膠質(zhì)瘤細(xì)胞包括D54、U251、U373、以及G26；乳腺腫瘤細(xì)胞2LMP、DY3672、LCC6、BT474、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、以及MDA-MB-453；非小細(xì)胞肺癌A427、WI-62、以及H1466；黑色素瘤SKM28；結(jié)腸直腸癌SW948；以及前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP,24及DU145。通過(guò)向活細(xì)胞中加入TM-602隨后通過(guò)添加鏈霉親和素-HRP以顯影彩色底物，分析96-孔板中的分匯合(Subconfluent)培養(yǎng)物的結(jié)合。將結(jié)合測(cè)定為相對(duì)于其中沒(méi)有加入TM-602的細(xì)胞的百分比鏈霉親和素-HRP對(duì)照。發(fā)現(xiàn)測(cè)試的所有腫瘤細(xì)胞系結(jié)合TM-602，但結(jié)合至三種人乳腺癌細(xì)胞系少于測(cè)試的其他腫瘤細(xì)胞(見(jiàn)圖2)。熒光激活細(xì)胞分類(FACS)用于證明TM-601與血液學(xué)癌癥(或血液腫瘤，hematologicalcancer)的反應(yīng)性。生物素化TM-601(TM-602)用于染色人非霍奇金淋巴瘤、T-細(xì)胞白血病、以及骨髓瘤細(xì)胞系。通過(guò)FACS分析，所有血液學(xué)腫瘤細(xì)胞系結(jié)合至TM-602(兩種淋巴瘤、一種T-細(xì)胞白血病、以及一種髓細(xì)胞白血病)。實(shí)施例2未標(biāo)記的TM-601不降低體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)包含表現(xiàn)白血病、黑色素瘤和肺、結(jié)腸、腦、卵巢、乳腺、前列腺及腎的癌癥的56種不同的人腫瘤細(xì)胞系的體外細(xì)胞系篩選由國(guó)家癌癥研究院完成。提交TM-601至篩選服務(wù)。獲得的結(jié)果表明TM-601對(duì)于測(cè)試的任何細(xì)胞系沒(méi)有細(xì)胞毒性。作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)，以一定范圍的血清濃度(10%、5%、2%、1%)測(cè)試單個(gè)細(xì)胞系，Panc-Ι，以確定在低血清生長(zhǎng)條件下細(xì)胞毒性活性是否明顯。沒(méi)有觀察到氯毒素的顯著細(xì)胞毒性，表明針對(duì)氯毒素作用的主要機(jī)制并非通過(guò)腫瘤細(xì)胞上的直接細(xì)胞毒性作用。實(shí)施例3生物素化TM-601的體外組織結(jié)合進(jìn)行應(yīng)用生物素化TM-601(TM-602)的組織化學(xué)染色研究從而在包埋于石蠟中的固定組織上或人活檢(或活組織檢查)和/或尸檢(或尸體檢查)樣本的冰凍切片上定位TM-601結(jié)合部位。迄今，已經(jīng)評(píng)估了超過(guò)200種腦腫瘤活檢和尸檢樣本的TM-601結(jié)合。研究包括膠質(zhì)瘤、其他惡性腫瘤、以及非_瘤性組織。這一研究以及后續(xù)研究的結(jié)果示于圖3中?？傊瑤缀跛械哪z質(zhì)瘤表現(xiàn)出對(duì)于TM-601的顯著染色活性，而正常的、非腫瘤組織則沒(méi)有。在給定的腫瘤內(nèi)TM-601陽(yáng)性細(xì)胞的百分比在50-98%變動(dòng)并隨著WHO惡性等級(jí)(malignantgrade)升高而增大。用TM-601的膠質(zhì)瘤特異染色的一個(gè)實(shí)例示于圖4中。此外，來(lái)自于階段I(phase)臨床研究的所有患者腦腫瘤組織樣品表現(xiàn)濃厚的生物素化TM-601染色，而非癌癥腦組織表現(xiàn)出僅僅輕微的背景染色。本研究中的其他陽(yáng)性組織包括具有類似于神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤的胚胎起源(embryonicorigin)的外周性神經(jīng)外胚層腫瘤(PNET)。用TM-601的PNET的組織化學(xué)染色的實(shí)例示于圖5中。這些非神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤中的染色的闡述暗示氯毒素劑，如TM-601可用于靶向除膠質(zhì)瘤之外的多種腫瘤。進(jìn)一步的研究擴(kuò)寬了由TM-601靶向的腫瘤類型，包括例如乳腺、乳腺轉(zhuǎn)移瘤(breastmetastases)、前列腺、卵巢、肺、肝臟、胰臟、以及淋巴瘤。實(shí)施例4具有腫瘤的小鼠中131I-TM-601的功效研究mI-TM-601在人膠質(zhì)瘤異種移植小鼠模型中延長(zhǎng)存活的能力。三組至少10只裸小鼠各自顱內(nèi)移植人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251-MG。U251-MG細(xì)胞用鹽水、未標(biāo)記的(“冷的”)TM-601或1.65mCi131I-TM-601離體處理30分鐘。然后用鹽水清洗細(xì)胞并將大約1XIO6個(gè)細(xì)胞引入腦中。接受mI-TM-601的細(xì)胞上結(jié)合的放射活性的量?jī)H為離體施加至細(xì)胞的總劑量的0.2%。這相當(dāng)于0.5mCi的人腦劑量。在21和29天間，分別在未標(biāo)記的TM-601和鹽水處理的動(dòng)物中達(dá)到中位存活(或中位存活期，mediansurvival)0相比之下，在此相同的時(shí)期內(nèi)，131Ι_ΤΜ_601處理的動(dòng)物中沒(méi)有動(dòng)物死亡(見(jiàn)圖6(A))。在21天，各組中的剩余動(dòng)物顱內(nèi)注射它們各自的離體化合物(鹽水、未標(biāo)記的ΤΜ-601、或0.165mCi131I-TM-601)并在22天(處理后24小時(shí))和25天(處理后96小時(shí))對(duì)某些131I-TM-601處理動(dòng)物進(jìn)行伽瑪照相機(jī)成像(gammacameraimaging)。伽瑪照相機(jī)成像證明了腦中mI-TM-601的濃度，表明在注射部位放射活性已維持24小時(shí)。該成像進(jìn)一步證明放射活性當(dāng)連接至TM-601時(shí)特別維持在腫瘤區(qū)域中多于96小時(shí)，超過(guò)這一時(shí)期其他組織吸收少量(見(jiàn)圖6(B))。在腫瘤移植后78天達(dá)到131I-TM-601處理組的中位存活，并且在90天終止研究時(shí)，14只131I-TM-601處理的動(dòng)物中有五只仍然存活。在用131I-TM-601處理的動(dòng)物組中有169%的存活。處理的小鼠良好耐受藥物，沒(méi)有記錄到化合物相關(guān)的行為影響。這些結(jié)果證明標(biāo)記的氯毒素劑如mI-TM-601在裸小鼠模型中的治療功效和診斷潛力。考慮到U251-MG腫瘤細(xì)胞系的放射耐性以及僅兩劑量輻射的給予，這(治療功效和診斷潛力)是顯著的，并進(jìn)一步支持氯毒素劑用于治療和成像高等級(jí)膠質(zhì)瘤的臨床應(yīng)用。實(shí)施例5125I-TM-BOl靜脈內(nèi)給予具有腫瘤的小鼠進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)以評(píng)估125I-TM-601穿越血腦屏障的能力。這些實(shí)驗(yàn)由應(yīng)用E54-MG/SCID小鼠模型的5項(xiàng)研究組成。在這些研究中，經(jīng)由尾靜脈注射125Ι_ΤΜ_601，且隨后ΤΜ-601靶向腦腫瘤的能力在24小時(shí)后測(cè)量。一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)也采用125I-EGF作為對(duì)照，因?yàn)橐阎狤GF受體在這些腫瘤中被上調(diào)。EGF作為對(duì)照使用是重要的，因?yàn)镋GFjBΤΜ-601，已被表明在顱內(nèi)注射時(shí)結(jié)合膠質(zhì)瘤細(xì)胞。如在圖7中所見(jiàn)，125Ι-ΤΜ-601的靜脈內(nèi)注射特定地靶向移植在這些動(dòng)物腦右半球中的D54-MG異種移植人膠質(zhì)瘤腫瘤，證明靜脈內(nèi)給予的125I-TM-BOl穿越血腦屏障。并且，重要的是注意到，125I-EGF的靜脈內(nèi)注射未定位于腦腫瘤至任何明顯的范圍，表明其未穿越完整的血腦屏障。由實(shí)驗(yàn)推導(dǎo)出氯毒素劑如125Ι-ΤΜ-601穿越血腦屏障并以它們的生物活性狀態(tài)到達(dá)定位于腦中的腫瘤。實(shí)施例6靜脈內(nèi)給予具有腫瘤的小鼠的ΤΜ-601的功效已知系統(tǒng)給予的125Ι-ΤΜ-601能夠穿越血腦屏障并結(jié)合至顱內(nèi)腫瘤，應(yīng)用靜脈內(nèi)給予途徑用未標(biāo)記的ΤΜ-601進(jìn)行一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)以測(cè)試腦中的抗腫瘤活性。裸小鼠用D54MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行顱內(nèi)移植。在移植(或灌輸，implant)異種移植物后開(kāi)始的14天給予鹽水或兩種不同劑量TM-601(每只小鼠每次注射0.2μg或2.0μg)一周兩次持續(xù)尾靜脈注射用于研究的持續(xù)期。來(lái)自這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的存活曲線證明，提高的存活發(fā)生在給予較高劑量TM-601的動(dòng)物中(圖8)。測(cè)量中位存活(當(dāng)50%的動(dòng)物存活時(shí)的時(shí)間)高劑量TM-601處理以劑量依賴方式將中位存活時(shí)間由34天(鹽水組)延長(zhǎng)至56天。較低的TM-601劑量不表現(xiàn)相同的生命延長(zhǎng)。再一次地，這暗示未標(biāo)記分子的持續(xù)系統(tǒng)性給藥在小鼠模型中給予是有效的。對(duì)用D54MG腦腫瘤處理的動(dòng)物的進(jìn)一步的組織學(xué)分析，對(duì)于辨別存活延長(zhǎng)是歸因于腫瘤細(xì)胞上的直接作用還是與另一種作用有關(guān)，是必要的。支持未標(biāo)記TM-601作為單一治療(monotherapy)的治療潛力的一項(xiàng)另外的初步研究是應(yīng)用小鼠側(cè)腹腫瘤模型持續(xù)系統(tǒng)性(靜脈內(nèi))遞送TM-601。應(yīng)用這種異種移植腫瘤模型，在裸小鼠(每組7-8只動(dòng)物)的側(cè)腹中移植D54MG人膠質(zhì)瘤細(xì)胞。在開(kāi)始的14天后，經(jīng)由尾靜脈以每次注射每只小鼠0.26μg的劑量?jī)纱谓o予未標(biāo)記的TM-601。一組動(dòng)物接受TM-601處理，一組接受2Gy輻射(RT)每周兩次，第三組接受RT和TM-601。在52天和53天之間，給予TM-601和/或RT的最后劑量，且對(duì)動(dòng)物繼續(xù)實(shí)驗(yàn)直到67天。在治療以及隨后治療中斷過(guò)程中，對(duì)于TM-601組和結(jié)合TM-601與RT組的腫瘤生長(zhǎng)曲線非常緊密的對(duì)準(zhǔn)(圖9)。RT組的曲線暗示在僅應(yīng)用RT的組中腫瘤生長(zhǎng)較慢。然而，表明平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差的誤差棒證明特別在后來(lái)的時(shí)間點(diǎn)的差異水平。由于這一點(diǎn)以及較小的抽樣大小(研究結(jié)束時(shí)對(duì)于僅RT為η=5且對(duì)于其他組為η=8)，腫瘤生長(zhǎng)中的不同看起來(lái)并非是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。這一數(shù)據(jù)暗示在治療的38-39天過(guò)程中ΤΜ-601和RT都避免了疾病進(jìn)展并且在完成治療后腫瘤開(kāi)始生長(zhǎng)。更加確定的，應(yīng)當(dāng)包括對(duì)照組以確立在沒(méi)有治療時(shí)腫瘤進(jìn)展的速率，然而，歷史性地這種D54MG側(cè)腹模型中的腫瘤比在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中觀察到的生長(zhǎng)更快。這項(xiàng)初步研究因而暗示了持續(xù)系統(tǒng)性遞送ΤΜ-601作為單一治療在這種側(cè)腹腫瘤模型中可以是有效的。總之，應(yīng)用氯毒素的體外研究證明特異結(jié)合至多種腫瘤細(xì)胞類型，包括膠質(zhì)瘤、神經(jīng)外胚層組織、以及多種其他腫瘤如乳腺和前列腺(腫瘤)。這種組織學(xué)結(jié)合用腫瘤細(xì)胞系得以確證。這種結(jié)合看起來(lái)對(duì)于腫瘤是選擇性的，因?yàn)榻Y(jié)合至正常組織的結(jié)合顯著較弱。應(yīng)用體內(nèi)模型，已經(jīng)表明顱內(nèi)注射131Ι-ΤΜ-601和重復(fù)系統(tǒng)性注射未標(biāo)記的ΤΜ-601都延長(zhǎng)具有顱內(nèi)膠質(zhì)瘤異種移植的動(dòng)物的生命。這些數(shù)據(jù)暗示放射標(biāo)記的ΤΜ-601能夠通過(guò)局部化遞送放射活性標(biāo)簽影響腫瘤生長(zhǎng)而未標(biāo)記的ΤΜ-601能夠通過(guò)尚未闡釋的機(jī)制影響腫瘤生長(zhǎng)。實(shí)施例7動(dòng)物中ΤΜ-601的藥代動(dòng)力學(xué)和代謝裸小鼠中ΤΜ-601的藥代動(dòng)力學(xué)在靜脈內(nèi)(IV)、腹膜內(nèi)(IP)、皮下(SC)或口腔管飼(P0，oralgavage)遞送單一劑量的2μgTM_601至裸小鼠后測(cè)量TM-601的血漿和尿水平。應(yīng)用使用與TM-601交叉反應(yīng)的兔抗-TM-701抗體的ELISA分析檢測(cè)TM-601。TM-701與TM-601由于一個(gè)氨基酸而不同(在殘基29處酪氨酸取代)。單給藥2μgTM-601后的血漿水平示于圖10中。在靜脈內(nèi)注射后觀察到最高的峰值血清水平(Cmax)，隨后進(jìn)行皮下給予、腹膜內(nèi)給予和口腔管飼。當(dāng)經(jīng)由口腔管飼給予時(shí)，TM-601的血漿水平不可計(jì)量。血漿中TM-601的半衰期計(jì)算為靜脈內(nèi)給予17.7分鐘以及皮下給予27.4分鐘。在單一2μg腹膜內(nèi)或皮下注射后30、60或240分鐘時(shí)的動(dòng)物尸體(sacrifices)的尿中測(cè)量TM-601o在腎清除過(guò)程中TM-601大量集中。由于關(guān)于隨時(shí)間的總的尿生產(chǎn)沒(méi)有更多的信息，經(jīng)尿排泄的TM-601的總量以及排泄動(dòng)力學(xué)不能確定。從藥物給予后4小時(shí)內(nèi)，當(dāng)循環(huán)的TM-601減少低于分析檢測(cè)的水平時(shí)，尿中的濃度也跌落低于檢測(cè)水平。當(dāng)經(jīng)由IV、IP、SC或口腔管飼給予時(shí)TM-601的藥代動(dòng)力學(xué)可大體分類為三種不同的分布。在測(cè)量的最初的時(shí)間點(diǎn)靜脈內(nèi)注射導(dǎo)致血液中藥物的大推注(bolus)峰值。藥物隨后衰退，半衰期為大約18分鐘。相比之下，腹膜內(nèi)或皮下遞送導(dǎo)致較慢的動(dòng)力學(xué)分布，可能因?yàn)門(mén)M-601較慢地由注射部位進(jìn)入血液隔室(bloodcompartment)。此外，半衰期也延長(zhǎng)至大約27分鐘。半衰期的這種延長(zhǎng)可通過(guò)較復(fù)雜的血液藥代動(dòng)力學(xué)分布解釋，其中循環(huán)水平代表藥物從皮下注射部位持續(xù)釋放與排泄/代謝之間的平衡?？谇还茱暫蟊憩F(xiàn)藥代動(dòng)力學(xué)分布的第三種類型。血漿水平僅微微高于分析背景并可以計(jì)算數(shù)量。因此，應(yīng)用當(dāng)前的劑型，口服途徑給予不會(huì)有效地實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)循環(huán)(或體循環(huán)，systemiccirculation)?？傊?，獲得的體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)暗示TM-601以高特異性和敏感性結(jié)合腫瘤，并且TM-601能夠穿越血腦屏障。在動(dòng)物中，放射標(biāo)記的TM-601的給予是良好耐受的并在腫瘤中表現(xiàn)出高選擇性和優(yōu)良的滯留。實(shí)施例8靜脈內(nèi)給予動(dòng)物的TM-601的毒性如在圖11中所總結(jié)的，已經(jīng)在7項(xiàng)GLP毒學(xué)研究中在嚙齒類和靈長(zhǎng)類中評(píng)估了TM-601的毒學(xué)效應(yīng)。在這7項(xiàng)研究中的6項(xiàng)中，靜脈內(nèi)給予TM-601。由于在7項(xiàng)研究的任意一項(xiàng)中沒(méi)有觀察到系統(tǒng)毒性的跡象，在各項(xiàng)研究中的系統(tǒng)NOAEL(即，無(wú)明顯損害作用水平)等同于或大于給予的最大劑量。小鼠中單劑量靜脈內(nèi)毒性研究在CD-I小鼠中在以0(賦形劑，0.9%氯化鈉)、0.64或6.4mg/kg(HED0.05和0.5mg/kg)靜脈內(nèi)(IV)給予后進(jìn)行研究。將TM-601在無(wú)菌鹽水(0.9%氯化鈉)中復(fù)原用于注射并以單一IV劑量(10mL/kg)給予10只小鼠/性別/組。對(duì)于化合物相關(guān)效應(yīng)的評(píng)估是基于臨床觀察、體重、食物消耗、眼科學(xué)、以及血液學(xué)和臨床化學(xué)參數(shù)。在研究的第15天，處死所有存活的動(dòng)物并使其進(jìn)行包括器官重量的大體的(gross)尸體剖檢以及顯微尸體剖檢。在這項(xiàng)研究過(guò)程中沒(méi)有不按時(shí)間表的死亡。沒(méi)有TM-601-相關(guān)效應(yīng)作用于體重、食物消耗或?qū)τ谘簩W(xué)和臨床化學(xué)參數(shù)。在尸體剖檢上沒(méi)有觀察到化合物相關(guān)的改變。在尸檢時(shí)，沒(méi)有觀察到可歸因于TM-601給予的明顯和細(xì)微損傷，在器官重量中也沒(méi)有任何改變。小鼠中急性靜脈內(nèi)毒性研究TM-601的急性毒性在以0(賦形劑，0.9%氯化鈉)，0.5或5.Omg/kg靜脈內(nèi)(IV)給予后在⑶-1小鼠中評(píng)估?；钚曰衔餅榛衔镏亓康?2%。TM-601在無(wú)菌鹽水(0.9%氯化鈉)中復(fù)原用于注射并以單一IV劑量(10mL/kg)給予5只小鼠/性別/組。對(duì)于化合物相關(guān)的效應(yīng)的評(píng)估是基于臨床觀察和體重。在第15天，處死所有存活的動(dòng)物并使其進(jìn)行大體的尸體剖檢。分析劑量溶液(dosesolution)以驗(yàn)證劑量的準(zhǔn)確。來(lái)自于0.5mg/kg組，在第6天發(fā)現(xiàn)一只雌性和一只雄性死亡且另一只雄性觸摸上去是冷的并在這一天活動(dòng)性減弱?？雌饋?lái)這些動(dòng)物不能充分飲水，這導(dǎo)致脫水。以5.Omg/kg劑量沒(méi)有動(dòng)物死亡。對(duì)于體重沒(méi)有TM-601相關(guān)的效應(yīng)并且在研究過(guò)程中或在末期尸檢時(shí)死亡的任何動(dòng)物中沒(méi)有觀察到明顯的損傷?；趤?lái)自小鼠中單劑量靜脈內(nèi)毒性研究的發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為在0.64和6.4mg/kg單一IV劑量后TM-601是非毒性的。IVNOAEL劑量因而在小鼠中為至少6.4mg/kg(HED0.5mg/kg)。重復(fù)劑量毒性通過(guò)靜脈內(nèi)給予狨的氯毒素最大耐受劑量研究在連續(xù)式(pyramiding)研究設(shè)計(jì)中在狨猴(棉耳狨猴，Callithryxjacchus)中評(píng)估TM-601的急性毒性。在這個(gè)范圍尋找研究(rangefinderstudy)中，以0·020,0.20、和2.0mg/kg(HED分別為0.003,0.03和0.3mk/kg)靜脈內(nèi)給予一只雄性和一只雌性狨猴TM-601，每劑量之間有3-天的清洗(washout)期。將TM-601溶解在0.9%的氯化鈉中并針對(duì)3次劑量分別以0.4,0.4和2.0mL/kg體重靜脈內(nèi)給予。對(duì)于化合物相關(guān)效應(yīng)的評(píng)估是基于臨床觀察、體重、食物消耗和血液學(xué)、凝固、以及臨床化學(xué)參數(shù)。在給予最后劑量后一天，使動(dòng)物安樂(lè)死，稱量器官重量，在任何觀察到的組織異常和注射部位進(jìn)行大體的和顯微的病理學(xué)。在這項(xiàng)研究過(guò)程中沒(méi)有不按時(shí)間表的死亡并且在檢查的任何參數(shù)中沒(méi)有任何TM-601相關(guān)的發(fā)現(xiàn)。通過(guò)靜脈內(nèi)給予狨猴3天隨后14-天觀察期的氯毒素毒性研究IV給予連續(xù)3天后在狨猴中評(píng)估TM-601的毒性。狨(3只/性別/劑量)以0(0.9%無(wú)菌鹽水)、0.20或2.Omg/kg/天(HED分別為0.03和0.3mg/kg)給予TM-601。對(duì)于化合物相關(guān)效應(yīng)的評(píng)估是基于臨床觀察、體重、食物消耗和血液學(xué)、凝固、以及臨床化學(xué)參數(shù)。在最后(第三次)給藥之后處安樂(lè)死之前觀察動(dòng)物14天，并稱量器官重量。對(duì)所有組織進(jìn)行大體的和顯微的病理學(xué)。在這項(xiàng)研究中沒(méi)有不按時(shí)間表的死亡。在臨床觀察、體重、食物消耗以及血液學(xué)、凝固、以及臨床化學(xué)參數(shù)上沒(méi)有化合物相關(guān)效應(yīng)。此外，在器官重量上沒(méi)有TM-601相關(guān)效應(yīng)，在尸檢時(shí)沒(méi)有化合物效應(yīng)的跡象，沒(méi)有可歸因于化合物的組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)。連續(xù)3天靜脈內(nèi)給予狨的TM-601的無(wú)效應(yīng)劑量(或無(wú)影響劑量，no-effectdose)為至少2.Omg/kg(HED0.3mg/kg)。通過(guò)靜脈內(nèi)注射每周一次給予小鼠的TM-601的7-周毒學(xué)研究系統(tǒng)性給予的TM-601的慢性毒性，當(dāng)通過(guò)靜脈內(nèi)注射遞送時(shí)，在小鼠中實(shí)現(xiàn)。8個(gè)總劑量，通過(guò)推注注射在尾靜脈中每周一次給予7周，以5mL/kg的劑量體積給予三組Gri:CD-l(ICR)BR小鼠。并行的對(duì)照組以相當(dāng)?shù)?相似的)方案接受賦形劑。在給藥7周后，使10只小鼠/性別/組安樂(lè)死；在14-天非-劑量(恢復(fù))期后將對(duì)照中剩余的3-5只小鼠/性別和高劑量組安樂(lè)死。每天兩次觀察動(dòng)物的死亡率和發(fā)病率、并每天進(jìn)行臨床檢查。在初步(研究第7周)和恢復(fù)(研究第9周)尸檢之前進(jìn)行臨床病理學(xué)評(píng)估(血液學(xué)和血清化學(xué))。對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行完全尸檢，并在按時(shí)間表的尸檢時(shí)稱量所選的器官。這些研究的結(jié)果表明存活、體重、食物消耗、血液學(xué)以及血清化學(xué)參數(shù)和器官重量不受TM-601給予的影響。宏觀和微觀檢查顯示沒(méi)有測(cè)試項(xiàng)目(testarticle)相關(guān)的損傷?？赡艿臏y(cè)試項(xiàng)目相關(guān)的臨床發(fā)現(xiàn)包括在給藥后1小時(shí)在2和5mg/kg/劑量組中低發(fā)生頻率下的(上瞼)下垂和活動(dòng)減退。就一切情況而論，這些臨床發(fā)現(xiàn)在沒(méi)有給藥的日子沒(méi)有觀察到并且不被認(rèn)為是有害的?；谶@項(xiàng)研究的結(jié)果，對(duì)于每周靜脈內(nèi)給予TM-601至小鼠7周(8總劑量)NOAEL為至少5mg/kg/劑量(HED0.4mg/kg)。通過(guò)借助于8次每周一次(Sweekly)注射靜脈內(nèi)(推注)給予狨隨后2周恢復(fù)期的TM-601(氯毒素)毒性研究在7周時(shí)期內(nèi)評(píng)估當(dāng)通過(guò)靜脈內(nèi)注射每周一次給予時(shí)TM-601對(duì)于普通狨(Callithrixjaccus)的系統(tǒng)性慢性毒性潛力。劑量水平為0.06或0.2mg/kg。在給藥7周后，使3動(dòng)物/性別/組安樂(lè)死；在14-天非給藥(恢復(fù))期后使對(duì)照中剩余2動(dòng)物/性別/組和高劑量組安樂(lè)死。對(duì)照組以相同的頻率接受賦形劑(磷酸鹽緩沖鹽水)。沒(méi)有采取臨床條件、體重、食物消耗、毒性動(dòng)力學(xué)、尿分析、器官重量、肉眼病理學(xué)和組織病理學(xué)研究。在給藥部位處所見(jiàn)的跡象主要包括具有偶發(fā)加厚的瘀傷和疤痕，影響范圍包括對(duì)照和以同樣方式處理的動(dòng)物，并認(rèn)為與給予途徑相關(guān)且并非TM-601處理的結(jié)果。體重改變是可變的，并表現(xiàn)狨典型的周期性波動(dòng)。再次地，在對(duì)照和處理組之間沒(méi)有一貫的不同，在處理組內(nèi)沒(méi)有不同，并且在這一參數(shù)中沒(méi)有見(jiàn)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在處理的和對(duì)照組中食物消耗是相似的。臨床病理學(xué)表明在處理和對(duì)照組之間沒(méi)有不同。尿分析類似地表現(xiàn)為沒(méi)有不同。器官重量未表現(xiàn)任何處理相關(guān)的組間不同。微觀檢查表明在任何評(píng)估的器官中沒(méi)有處理效應(yīng)。這項(xiàng)研究的結(jié)論是以0.06和0.20mg/kg的給藥TM-601的8次靜脈內(nèi)注射是非常好的耐受的，沒(méi)有任何關(guān)于處理的負(fù)面效應(yīng)或系統(tǒng)性毒性的證據(jù)。在活著觀察時(shí)以及在宏觀和微觀檢查時(shí)在給予部位見(jiàn)到的跡象與由于給予途徑導(dǎo)致的低水平物理創(chuàng)傷相關(guān)并且不是暴露于氯毒素的結(jié)果。如本研究所確定的NOAEL被認(rèn)為是至少0.2mg/kg(HED0.03mg/kg)。實(shí)施例9具有復(fù)發(fā)性或頑固性軀體和/或大腦轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤的患者中靜脈內(nèi)131I-TM-BOl的階段I成像和安全性研究階段I成像實(shí)驗(yàn)在5個(gè)臨床部位完成，靜脈內(nèi)給予TM-601至總共48位患者。這種多中心、開(kāi)放標(biāo)記、非隨機(jī)化、連續(xù)性“對(duì)象體內(nèi)”逐級(jí)研究包括具有組織學(xué)證實(shí)的原發(fā)實(shí)體惡性腫瘤，復(fù)發(fā)性(recurrent)或頑固性(refractory，難治)的患者，其證明不響應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)治療的可檢測(cè)轉(zhuǎn)移相關(guān)性(involvement)的明確證據(jù)。該階段I研究的目的是a)評(píng)估靜脈內(nèi)131I-TM-601是否在患有復(fù)發(fā)性或頑固性(或難治)轉(zhuǎn)移性(包括腦轉(zhuǎn)移)實(shí)體瘤的患者體內(nèi)提供腫瘤_特異性定位；b)確定靜脈內(nèi)給予的131I-TM-601的分布和計(jì)量學(xué)；以及c)確定靜脈內(nèi)給予的131I-TM-601的安全性和耐受性。患者和治療方案大約50位對(duì)象參與這項(xiàng)研究，經(jīng)受2至3次逐漸增加的靜脈內(nèi)劑量的mI-TM-601，隨后進(jìn)行一系列的全身掃描以確定mI-TM-601是否已定位于目標(biāo)(或靶，target)腫瘤細(xì)胞，并且證明腫瘤特異性吸收131I_TM_601的TM-601的一次靜脈內(nèi)治療劑量。圖12中的圖示出了給藥安排。研究患者通過(guò)靜脈內(nèi)(IV)灌注接受多達(dá)三次逐漸增加劑量的131I-TM-601(從10mCi/0.2mg至30mCi/0.6mg變動(dòng))。只有在給予10或20mCi劑量后通過(guò)進(jìn)行24小時(shí)成像表現(xiàn)為腫瘤特異性吸收131I-TM-601的患者接受應(yīng)用30mCi劑量131I_TM_601的處理。mI-TM~601的制備最終的TM-601藥物產(chǎn)品是無(wú)菌的、凍干的白色至灰白色粉末，裝瓶在閉塞的玻璃小瓶中。在這一實(shí)驗(yàn)中使用的成像和治療劑量是放射標(biāo)記的TM-601的劑量。131I-TM-BOl的制備和使用TM_601最終藥物產(chǎn)品在0.56mL的放射標(biāo)記緩沖液中復(fù)原以產(chǎn)生由mI放射標(biāo)記的lmg/mL溶液，并遞送至臨床部位。注射器含有大約4mL的溶液用于灌注并按照放射活性的含量和用量進(jìn)行近似標(biāo)記。一旦在該部位被接受，輻射安全官員(radiationsafetyofficer)或其他適當(dāng)場(chǎng)所的人員證實(shí)mI-TM_601的輻射計(jì)量在規(guī)定的規(guī)格內(nèi)。遮蔽含有最終放射標(biāo)記的藥物產(chǎn)品的注射器然后轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)尼t(yī)院區(qū)域用于給予患者。在2-8°C下避光保存并遮蔽131I-TM-601溶液直到使用時(shí)。在用131I放射標(biāo)記后，在24小時(shí)內(nèi)使用產(chǎn)品。mI-TM~601的給予和成像研究所有接受放射標(biāo)記的測(cè)試劑量，131I-TM-601的患者以300mg/天的劑量接受過(guò)飽和碘化鉀(SSKI)，在放射標(biāo)記的131I-TM-601灌注當(dāng)天或恰好之前開(kāi)始并持續(xù)最少三天以阻斷吸收131I至甲狀腺和其他器官。在使用提供給患者的，當(dāng)患者不在診所/醫(yī)院期間藥物正確使用的說(shuō)明來(lái)研究藥物給予之前將SSKI配給至患者?！氨绸W(piggy-back)”方式將含有131Ι_ΤΜ_601的注射器插入在6英寸靜脈注射針/管內(nèi)的灌注口中。在以IOOmL/小時(shí)流注0.9%氯化鈉期間，通過(guò)“緩慢IV推注”在大約5-10分鐘給予產(chǎn)品。如果以下情況中的任一種出現(xiàn)則終止131Ι-ΤΜ-601灌注(1)心臟收縮血壓的降低>25mmHg，⑵調(diào)查者記錄的顯著的呼吸窘迫，(3)溫度>102°F，(4)(疾病)發(fā)作，(5)意識(shí)水平的改變或新的神經(jīng)缺陷發(fā)作，或其他原因，如臨床醫(yī)師的判斷或患者的要求。通過(guò)伽瑪照相機(jī)成像并在某些情況下在131I-TM-601給予后24小時(shí)進(jìn)行SPECT以確定定位以及用于接受30mCi劑量131I-TM-601的合適性。安全件結(jié)果到2007年4月17日為止，17位患者接受至少兩劑量的IV給予治療(高達(dá)30mCi/0.6mg)，其中沒(méi)有急性負(fù)面經(jīng)歷。僅7位患者經(jīng)歷總共7種嚴(yán)重負(fù)面效應(yīng)(SeriousAdverseEffects,SAE)。沒(méi)有一種SAE被調(diào)查者評(píng)估為與研究藥物“可能”或“很可能相關(guān)”。一位患者在給藥30天內(nèi)死亡。該患者為60歲男性，具有轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞肺癌病史，其參與本研究并在2006年10月25日和2006年11月1日接受兩次IV劑量的131I_TM_601。該患者對(duì)于治療不具有任何急性反應(yīng)，也沒(méi)有任何腫瘤特異性吸收，且隨后繼續(xù)接受減輕的輻射至脊骨?；颊咴谑杖菟斜徽惺詹⒃?006年11月24日死于家中。調(diào)查者將該患者的死亡評(píng)估為“不可能相關(guān)”于研究藥劑且較為可能相關(guān)于累進(jìn)的疾病。兩位患者各自在給藥前經(jīng)歷一種SAE(分別為兩側(cè)肺栓和UTI，CTCAE4和3級(jí))；一位患者在給藥后一天經(jīng)歷腹部疼痛和腹脹(CTCAE4級(jí))；一位患者在給藥后10天不能走路并發(fā)現(xiàn)其具有推測(cè)繼發(fā)于基本疾病進(jìn)展的脊髓壓縮(CTCAE3級(jí))；以及2位患者在給藥后18-20天經(jīng)歷DVT(都為CTCAE3級(jí))。功效結(jié)果在多種腫瘤類型中發(fā)現(xiàn)靜脈內(nèi)給予后的腫瘤特異性吸收，包括8位具有惡性膠質(zhì)瘤患者中的7位，7位具有轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者中的7位，2位具有前列腺癌癥患者中的2位，4位具有非小細(xì)胞肺癌患者中的3位，以及7位具有轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者中的5位(如圖13所總結(jié)的，也見(jiàn)于圖14-20)。所有患者靜脈內(nèi)接受測(cè)試劑量的10mCi(0.2mg肽)131I-TM-601。在131I-TM_601注射后立即、3小時(shí)、24小時(shí)、48-72小時(shí)、以及168小時(shí)獲取五份連續(xù)的、全身伽瑪照相機(jī)圖像用于腫瘤定位和劑量測(cè)定分析。通過(guò)伽瑪照相機(jī)或SPECT成像表現(xiàn)腫瘤定位的患者在一周后接受第二治療劑量的30mCi(0.6mg肽)131I-TM-BOl0沒(méi)有表現(xiàn)吸收的患者在一周后用20mCi(0.4mg肽)再治療以確定在較高劑量下可能的定位。包括在劑量測(cè)定亞群分析(subsetanalysis)中具有膠質(zhì)瘤的所有7位患者在IV給予131I-TM-601后在后續(xù)的伽瑪照相機(jī)或SPECT成像中證明腫瘤特異性定位。沒(méi)有觀察到劑量限制性毒性。平均輻射劑量為對(duì)于全身0.23cGy/mCi(在0.15-0.31cGy/mCi變動(dòng))且對(duì)于腫瘤0.81cGy/mCi(在0.36-1.51cGy/mCi變動(dòng))，計(jì)算得到大約3.5的治療比例(腫瘤/身體)。在初步成像分析后，具有惡性膠質(zhì)瘤的一位患者在治療后3周表現(xiàn)增大腫瘤體積的顯著減少和水腫(圖21)。在21天評(píng)估時(shí)對(duì)這位患者的MRI成像表現(xiàn)為T(mén)l增大體積和T2體積的減少。具有惡性膠質(zhì)瘤的另一位患者，其也表現(xiàn)腫瘤特異性吸收mI-TM-601并且其隨后接受靜脈內(nèi)治療劑量，在沒(méi)有成像改進(jìn)的情況下呈現(xiàn)明顯的臨床改進(jìn)。這些結(jié)果證明體內(nèi)系統(tǒng)性遞送的氯毒素劑如TM-601的治療效果。這些結(jié)果也證明靜脈內(nèi)給予的131I-TM-601將穿越血腦屏障并能夠?qū)е戮哂惺中g(shù)不能治療的膠質(zhì)瘤的患者M(jìn)R成像改進(jìn)。實(shí)施例10提高和/或改變氯毒素劑的治療效果本實(shí)施例證明對(duì)象暴露于氯毒素劑的總量(即，增大給藥后觀察到的曲線下的面積)的增加能夠提高和/或改變藥劑的治療效果。如在提交于2008年9月17日的國(guó)際專利申請(qǐng)序列號(hào)PCT/US08/76740中所描述的，氯毒素劑的聚乙二醇化能夠延長(zhǎng)其在血液中的半衰期并進(jìn)一步能夠提高其抑制血管形成的能力。不希望被任何特定的理論所束縛，本發(fā)明提出應(yīng)用聚乙二醇化氯毒素劑所獲得的這些觀察結(jié)果可代表曲線效應(yīng)下的面積。例如，眾所周知不同的治療劑以不同的方式激發(fā)生物效應(yīng)。一些要求實(shí)現(xiàn)特定的閾值水平，例如在一定的時(shí)間量?jī)?nèi)；一些要求一定水平的總暴露；一些具有這些要求的結(jié)合。本發(fā)明提出氯毒素劑的某些效應(yīng)(例如，特異結(jié)合，可能是細(xì)胞吸收)可以以低劑量或暴露水平實(shí)現(xiàn)，但可要求較高的總暴露(例如，曲線下的面積)以抑制血管形成和/或獲得其他的治療效果。材料和方法聚乙二醇化TM-601應(yīng)用多分散、線性、40kDaPEG-丙醛(DowPharma)經(jīng)由還原性胺化在肽的N端聚乙二醇化。TM-601的半衰期測(cè)量不具有腫瘤的C57BL/6小鼠用TM-601(以大約2mg/kg的劑量)通過(guò)單尾靜脈注射進(jìn)行靜脈內(nèi)注射。血液樣品以各種時(shí)間點(diǎn)獲得，且TM-601水平通過(guò)ELISA使用抗TM-601抗體進(jìn)行測(cè)定。小鼠基質(zhì)膠塞MatrigelMatrixHighConcentration(基質(zhì)膠基質(zhì)高濃度，來(lái)自BD生物科學(xué))與100ng/mlVEGF、100ng/mlbFGF、以及3ng/ml肝素在4°C下混合。8周大小的雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為每組中6只小鼠的各個(gè)組。每只小鼠接受在皮下組織中兩側(cè)注射的兩個(gè)500μ1基質(zhì)膠塞。為了形成圓形塞，在常規(guī)的皮下插入后通過(guò)左右擺動(dòng)針尖形成大的皮下袋(pockets)。用21-25G針快速進(jìn)行注射以確保將全部含量遞送至塞。在研究的當(dāng)天(0天)植入基質(zhì)膠塞并且治療在第1天開(kāi)始。動(dòng)物通過(guò)靜脈內(nèi)注射賦形劑(鹽水)、TM-601、或聚乙二醇化TM-601進(jìn)行給藥。應(yīng)用三種給藥方案一周一次給予兩周(Dl—次且D8—次；“Q7Dx2”)，一周兩次給予兩周(于DUD4、D8及Dll；“Q3Dx2/2”)，以及一周五次給予兩周(于D1、D2、D3、D4、D5、D8、D9、D10、D11、及D12;“QlDx5/2”)。在14天后收集塞。使小鼠安樂(lè)死并將塞上的皮膚向后拉。切開(kāi)塞，固定并包埋在石蠟中用于組織學(xué)分析。來(lái)自每個(gè)可評(píng)估塞的5μm厚的3個(gè)切片用CD31抗體進(jìn)行免疫染色并用蘇木精&曙紅進(jìn)行對(duì)比染色。在顯微鏡下分析每個(gè)基質(zhì)膠塞橫截面積中血管數(shù)。結(jié)果/討論如在圖22中所示，聚乙二醇化TM-601與未修飾的TM-601相比呈現(xiàn)延長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期。出人意料地，聚乙二醇化將TM-601的半衰期延長(zhǎng)大約32倍，S卩，大約25分鐘(TM-601)延長(zhǎng)至大約16小時(shí)(TM-601-PEG)。延長(zhǎng)的半衰期轉(zhuǎn)化為在血管形成模型中較低頻率地給藥于動(dòng)物的能力。在小鼠基質(zhì)膠塞分析中，用TM-601或聚乙二醇化TM-601(TM-601-PEG)根據(jù)多種時(shí)間表給藥于動(dòng)物。測(cè)量微脈管密度并將這種密度的減小解釋為象征抗血管形成效應(yīng)。TM-601和TM_601_PEG應(yīng)用測(cè)試的兩種最頻繁的給藥時(shí)間表(一周兩次給予兩周，“Q3DX2/2”；以及一周五次給予兩周，“QlDx5/2”)都具有抗血管形成效應(yīng)(圖23)。然而TM-601以所測(cè)試的最小頻率的給藥時(shí)間表(一周一次給予兩周，“Q7DX2”)不呈現(xiàn)任何抗血管形成效應(yīng)，而以這種給藥時(shí)間表用TM-601-PEG治療則導(dǎo)致微脈管密度的顯著減小(圖23)。不希望被任何特定的理論所束縛，較低頻率地給藥動(dòng)物的能力可能是由于TM-601-PEG與TM-601相比更長(zhǎng)時(shí)間的可用性。這種延長(zhǎng)的可用性可導(dǎo)致在新血管形成部位更長(zhǎng)時(shí)間的暴露，允許更加延長(zhǎng)的治療效應(yīng)。進(jìn)一步不希望被任何特定的理論所束縛，這種更長(zhǎng)時(shí)間的暴露(即，曲線下增大的面積)實(shí)際實(shí)現(xiàn)一種治療效應(yīng)，該治療效應(yīng)在其他情況，甚至例如在允許TM-601(或另一種氯毒素劑)結(jié)合和/或吸收的情況下不會(huì)觀察到。與TM-601相比用TM_601_PEG所觀察到的改進(jìn)的治療效應(yīng)尤其令人驚訝，因?yàn)槁榷舅厥窍鄬?duì)小的肽，以至于人們預(yù)期較大的修飾如聚乙二醇化可能會(huì)改變或折衷功能。本文列出的數(shù)據(jù)令人驚訝地證明聚乙二醇化氯毒素劑不僅保持活性(例如，結(jié)合活性)，而且實(shí)際上表現(xiàn)出增強(qiáng)的和/或新的活性(例如，抗血管形成效應(yīng))。其他實(shí)施方式考慮到本文中披露的本發(fā)明的說(shuō)明或?qū)嵺`，本發(fā)明的其他實(shí)施方式對(duì)于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。說(shuō)明和實(shí)施例應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為僅僅作為示例性的，本發(fā)明的實(shí)際范圍由所附權(quán)利要求表示。權(quán)利要求治療患有腫瘤的個(gè)體的方法，所述方法包括以下步驟將有效量的氯毒素劑給藥至所述個(gè)體，其中所述氯毒素劑是系統(tǒng)性給藥的。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氯毒素劑是靜脈給藥的。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氯毒素劑相對(duì)于正常細(xì)胞選擇性靶向癌細(xì)胞。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氯毒素劑包含選自由氯毒素、生物活性氯毒素亞單位，以及氯毒素衍生物構(gòu)成的組的氯毒素部分。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氯毒素劑包含與至少一個(gè)治療性部分聯(lián)接的氯毒素部分。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治療性部分是直接共價(jià)聯(lián)接的。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治療性部分是融合的以形成融合蛋白。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治療性部分是通過(guò)連接子共價(jià)聯(lián)接的。9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述治療性部分包括抗癌劑。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗癌劑選自由以下組成的組烷化劑、嘌呤拮抗劑、嘧啶拮抗劑、植物堿、插入抗生素、芳香酶抑制劑、抗代謝藥物、有絲分裂抑制劑、生長(zhǎng)因子抑制劑、細(xì)胞循環(huán)抑制劑、酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗激素藥物以及抗雄激素藥物。11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述治療性部分包括細(xì)胞毒性劑。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自由毒素、生物活性蛋白、化療抗生素、溶核酶，以及放射性同位素構(gòu)成的組。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑包括選自由多花白樹(shù)毒蛋白、蓖麻毒素、皂苷、綠膿桿菌外毒素、美洲商陸抗病毒蛋白、白喉毒素，以及補(bǔ)體蛋白構(gòu)成的組的成員。14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑包括放射性同位素。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑包括碘-131(131I)。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是固體腫瘤。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是難治腫瘤。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是復(fù)發(fā)腫瘤。19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是轉(zhuǎn)移性腫瘤。20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是以下腫瘤構(gòu)成的組的成員肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸部癌癥、皮膚或眼黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門(mén)區(qū)癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、性器官或生殖器官的癌癥、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織的肉瘤、尿道癌、慢性或急性白血病、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌、腎細(xì)胞癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、神經(jīng)外胚層癌、脊髓腫瘤、膠質(zhì)瘤、腦膜瘤，和垂體腺瘤。21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤是神經(jīng)外胚層起源的腫瘤。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述神經(jīng)外胚層起源的腫瘤是由以下構(gòu)成的組的成員膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、室管膜瘤、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神經(jīng)外胚層瘤、肺小細(xì)胞癌、尤文瘤、腦中神經(jīng)外胚層起源的轉(zhuǎn)移瘤。23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥步驟包括系統(tǒng)性給予至少一個(gè)劑量的氯毒素劑。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述氯毒素劑的劑量包括在大約0.001mg/kg至大約5mg/kg。25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括在將所述氯毒素劑給藥至所述個(gè)體之前檢測(cè)所述腫瘤的步驟。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中檢測(cè)所述腫瘤包括以下步驟將有效量的一種標(biāo)記的氯毒素劑給藥至所述個(gè)體，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑是系統(tǒng)性給藥的；以及測(cè)量所述標(biāo)記的氯毒素劑與組織的結(jié)合，其中相對(duì)于正常組織結(jié)合水平的提高指示該組織是腫瘤組織。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑是靜脈給藥的。28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑標(biāo)記有選自由熒光團(tuán)、放射性同位素、順磁金屬離子構(gòu)成的組的至少一個(gè)標(biāo)記部分。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括碘-131(131I)或碘-125(125I)。30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括锝-99m(99mTc)。31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括銅-64(64Cu)。32.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中測(cè)量所述標(biāo)記的氯毒素劑與組織的結(jié)合的所述步驟使用選自由激光誘導(dǎo)熒光光譜、Y照相機(jī)、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)，和正電子發(fā)射斷層顯像(PET)構(gòu)成的組的技術(shù)進(jìn)行。33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括給予所述個(gè)體化療劑。34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述化療劑選自由以下構(gòu)成的組烷化劑、嘌呤拮抗劑、嘧啶拮抗劑、植物堿、插入抗生素、芳香酶抑制劑、抗代謝藥物、有絲分裂抑制劑、生長(zhǎng)因子抑制劑、細(xì)胞循環(huán)抑制劑、酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗激素藥物以及抗雄激素藥物。35.檢測(cè)個(gè)體中腫瘤組織的方法，所述方法包括以下步驟將有效量的一種標(biāo)記的氯毒素劑給藥至所述個(gè)體，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑是系統(tǒng)性給藥的；以及測(cè)量所述標(biāo)記的氯毒素劑與感興趣組織的結(jié)合，其中相對(duì)于正常組織結(jié)合水平的提高指示該感興趣組織是腫瘤組織。36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑是靜脈給藥的。37.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑相對(duì)于正常細(xì)胞選擇性靶向癌細(xì)胞。38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑包含選自由氯毒素、生物活性氯毒素亞單位，和氯毒素衍生物構(gòu)成的組的氯毒素部分。39.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記的氯毒素劑標(biāo)記有至少一個(gè)標(biāo)記部分，其中所述標(biāo)記部分選自由熒光團(tuán)、放射性同位素、和順磁金屬離子構(gòu)成的組。40.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括碘-131(131I)或碘-125(125I)。41.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括锝-99m(99mTc)。42.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述標(biāo)記部分包括銅-64(64Cu)。43.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中測(cè)量所述標(biāo)記的氯毒素劑與組織的結(jié)合的所述步驟使用選自由激光誘導(dǎo)熒光光譜、Y照相機(jī)、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)，和正電子發(fā)射斷層顯像(PET)構(gòu)成的組的技術(shù)進(jìn)行。44.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自固體腫瘤。45.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自難治腫瘤。46.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自復(fù)發(fā)腫瘤。47.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自轉(zhuǎn)移性腫瘤。48.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自選自由以下構(gòu)成的組的腫瘤肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸部癌癥、皮膚或眼黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門(mén)區(qū)癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、性器官或生殖器官的癌癥、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織的肉瘤、尿道癌、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌、腎細(xì)胞癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、神經(jīng)外胚層癌、脊髓腫瘤、膠質(zhì)瘤、腦膜瘤，和垂體腺瘤。49.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述腫瘤組織來(lái)自神經(jīng)外胚層起源的腫瘤。50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述神經(jīng)外胚層起源的腫瘤是由以下構(gòu)成的組的成員膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、室管膜瘤、髓母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神經(jīng)外胚層瘤、肺小細(xì)胞癌、尤文瘤，和腦中神經(jīng)外胚層起源的轉(zhuǎn)移瘤。51.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述給藥步驟包括系統(tǒng)性給予至少一個(gè)劑量的標(biāo)記的氯毒素劑。52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述給藥步驟包括系統(tǒng)性給予第一和第二劑量的標(biāo)記的氯毒素劑，其中所述第二劑量高于所述第一劑量。53.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述給藥步驟包括系統(tǒng)性給予第一、第二和第三劑量的標(biāo)記的氯毒素劑，其中所述第二劑量高于所述第一劑量，所述第三劑量高于所述第二劑量。全文摘要本發(fā)明涉及用于腫瘤治療和診斷的方法和組合物。本發(fā)明的方法通常包括系統(tǒng)性(例如靜脈內(nèi))給予標(biāo)記或沒(méi)有標(biāo)記的氯毒素劑。文檔編號(hào)A61K51/08GK101918041SQ200880111242公開(kāi)日2010年12月15日申請(qǐng)日期2008年10月10日優(yōu)先權(quán)日2007年10月12日發(fā)明者艾利森·奧尼爾,道格拉斯·B·雅各比申請(qǐng)人:超分子有限公司