專利名稱：：Slit,nephrin,肝配蛋白或腦信號蛋白用于治療軟骨疾病的用途的制作方法SLIT，NEPHRIN，肝配蛋白或腦信號蛋白用于治療軟骨疾病的用途本發(fā)明涉及忌避因子(impellentfactor)和/或多肽，特別是導(dǎo)蛋白l(NETRINl)，SLIT3蛋白或其片段用于制備用于治療或預(yù)防退行性疾病特別是軟骨缺損的藥物組合物的用途。本發(fā)明還涉及SLIT3的多肽片段，包含所述多肽的藥物組合物和其用途。創(chuàng)傷和退行性關(guān)節(jié)疾病的軟骨修復(fù)和再生仍然是骨科(orthopaedics)中的主要挑戰(zhàn)。軟骨損傷和退行性障礙是引起成人關(guān)節(jié)功能逐漸喪失和顯著疼痛(伴隨殘疾和不活動)的的主要原因。由于體內(nèi)的軟骨細(xì)胞的低有絲分裂潛力，軟骨固有的修復(fù)能力是有限的，并且在成人中所得到的產(chǎn)生的組織通常不如正常軟骨。普遍認(rèn)為因?yàn)檐浌?例如關(guān)節(jié)軟骨)缺乏血管，損傷的軟骨接收不到足夠的刺激以引起修復(fù)應(yīng)答。軟骨組織中的軟骨細(xì)胞通常不暴露于足夠量的修復(fù)刺激劑例如生長因子和存在于受損的帶血管的組織(vascularisedtissue)中的血纖蛋白凝塊。關(guān)節(jié)的功能完整性依賴于隔室緣(compartmentborder)的嚴(yán)格分離。在炎性和退行性關(guān)節(jié)疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和骨關(guān)節(jié)炎(OA))中已發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)隔室邊緣的交叉和軟骨隔室的破壞。通常，軟骨障礙(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)通過來自周圍組織隔室的細(xì)胞群的侵襲性和破壞性行為(例如滑膜組織成纖維細(xì)胞(SF)從滑膜組織遷移)來表征或加劇?；こ衫w維細(xì)胞(SF)對關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)(例如軟骨和骨)的破壞是RA和OA中的關(guān)鍵事件(Pap，2003；Pap,2007；Yasuda,2006；Huber等，2006)。已經(jīng)進(jìn)行了很多抑制破壞性結(jié)構(gòu)變化的進(jìn)一步發(fā)展的策略和逆轉(zhuǎn)疾病的新方法，并取得不同程度的成功，所述策略及方法再生治療患病軟骨，包括發(fā)現(xiàn)具有修復(fù)被破壞的軟骨的潛力的新試劑。這些策略包括髓-刺激技術(shù)，自體和同種異體移植，自體軟骨細(xì)胞移植，骨膜移植，pridie鉆孔術(shù)，磨削軟骨成形術(shù)(abrasionchondroplasty)，包括微骨折和軟骨鑲嵌術(shù)。然而，這些方法并不可靠并且限于小的和中等的病灶軟骨和骨軟骨的缺損。由于需要在供體部位產(chǎn)生缺損，由于不充分的修復(fù)效果以及由于關(guān)節(jié)原有曲率的表面再建中的技術(shù)困難，軟骨鑲嵌術(shù)受到限制(Kuroda等，2007)。自體軟骨細(xì)胞移植技術(shù)有幾個缺陷，包括缺少足夠數(shù)目的軟骨細(xì)胞，需要產(chǎn)生供體部位缺損，不良的功效和高治療費(fèi)用。已經(jīng)確定幾種生長因子，如TGF-β1、FGF-2、IGF-UTP-508、OP-I或其他BMP(包括GDF)或其組合誘導(dǎo)祖細(xì)胞增殖和分化成功能性骨和/或軟骨組織。特別地，已經(jīng)表明TGF-β1促進(jìn)祖細(xì)胞的成軟骨分化和增強(qiáng)軟骨細(xì)胞分化。IGF-I主要以合成代謝方式起作用以增加蛋白聚糖和II型膠原的合成。然而，這些生長因子相當(dāng)無特異性，具有產(chǎn)生不期望的副作用的風(fēng)險。其它的例如BMP，具有誘導(dǎo)成骨基因的潛力并且因此誘導(dǎo)不期望的骨形成。應(yīng)用該生長因子技術(shù)的另一個限制是外源生長因子相對短的生物學(xué)半衰期，這使得在其遞送后，其只能夠產(chǎn)生短暫的生物學(xué)作用。促炎細(xì)胞因子，蛋白酶和金屬蛋白酶可能是造成存在于OA和RA患者中的一些體征和癥狀以及結(jié)構(gòu)性變化的原因。將這些酶的合成/活性的抑制作為OA和RA的治療已經(jīng)是集中研究的焦點(diǎn)。至今，最有希望的策略仍然是使用能夠阻斷MMP活性的小的化學(xué)實(shí)體。然而，MMP抑制劑可產(chǎn)生副作用并且還未被證明較大程度上降低疾病的發(fā)展。另外，其他的新策略現(xiàn)正處于下文引述的開發(fā)中。US2003068705公開了編碼PRO多肽的305個核酸，其中一些(例如與IL-17同源或相關(guān)的多肽)聲稱可用于刺激軟骨細(xì)胞的增殖或分化并且因而可以用于治療各種骨和/或軟骨障礙(例如運(yùn)動損傷或者關(guān)節(jié)炎)。W020001090357提供了用于治療發(fā)育缺陷、炎性疾病，或用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的蛋白。US2003044917涉及用于刺激軟骨細(xì)胞的增殖和分化的人PRO多肽以及其在各種骨和/或軟骨疾病(例如關(guān)節(jié)炎和運(yùn)動損傷)的治療中的用途。然而，只有序列6029經(jīng)檢驗(yàn)是陽性的。另一類蛋白，例如軸突導(dǎo)向分子(例如導(dǎo)蛋白(Netrin)，Slit)，已經(jīng)被提出用于調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞運(yùn)動(W00164837，W005074556,W000055321,WOO190357)。WOO164837、W003075860.W006019904和US2006/0153840公開了用于促進(jìn)血管發(fā)生，增殖和/或用于促進(jìn)細(xì)胞遷移(以治療神經(jīng)病變和癌癥)的方法。W02002081745教導(dǎo)了SLIT3用于診斷骨質(zhì)疏松癥/骨疾病，促進(jìn)骨發(fā)生和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥/骨疾病的用途。W099/23219、JPl1164690和JP11075846公開了人SLIT3多Jft序列。W000/55321公開了脊椎動物SLITDNA序列(即爪蟾屬(Xenopus)和人Slit2)，蛋白和其用途。然而，本領(lǐng)域公開的方法和組合物中沒有一個顯示較大程度降低所治療的疾病的發(fā)展而沒有副作用，或?qū)е缕茐倪^程的消除和軟骨組織的實(shí)際修復(fù)和替換。因此，存在對組合物和其用途的需要，其用于改善進(jìn)行性軟骨破壞的治療和/或預(yù)防，特別是在創(chuàng)傷后和慢性疾病例如全層缺損(full-thicknessdefect)和淺表缺損(superficialdefect)和關(guān)節(jié)炎(例如骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，半月板撕裂，前交叉韌帶(ACL)-損傷的情況下，并且其克服與現(xiàn)有可用的方法和組合物有關(guān)的問題。因此，本發(fā)明的目的是提供用于修復(fù)或再生軟骨缺損和/或抑制軟骨疾病或障礙(例如關(guān)節(jié)炎和運(yùn)動損傷)的疾病發(fā)展的方法。本發(fā)明的另一個目的是提供用于抑制滑膜細(xì)胞遷移并因此抑制軟骨破壞的方法。本發(fā)明的另一個目的是提供方法，其適用于治療軟骨疾病，尤其是炎性軟骨疾病和牽涉滑膜成纖維細(xì)胞侵襲或血管翳形成的疾病。本發(fā)明的另一個目的是提供組合物和其用途，其用于來自周圍的間充質(zhì)干細(xì)胞的吸引/趨化作用，以用于軟骨再生。本發(fā)明的另一個目的是提供組合物和其用途，其用于誘導(dǎo)軟骨形成和/或刺激軟骨細(xì)胞的增殖或分化。本發(fā)明背后的問題通過利用忌避因子來解決，所述的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物。特別地，本發(fā)明涉及忌避因子用于制備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于預(yù)防和/或治療退行性疾病，優(yōu)選退行性軟骨疾病，其a)與滑膜成纖維細(xì)胞的浸潤或遷移(優(yōu)選侵潤或遷移入關(guān)節(jié)或非關(guān)節(jié)軟骨)有關(guān)，和/或與血管翳形成有關(guān)，或b)與細(xì)胞優(yōu)選成纖維細(xì)胞或滑膜成纖維細(xì)胞至關(guān)節(jié)或非關(guān)節(jié)軟骨的減少的附著有關(guān)。特別地，忌避因子調(diào)節(jié)或抑制成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞(例如滑膜成纖維細(xì)胞)的遷移，滑膜細(xì)胞增生的抑制，和/或促進(jìn)用于軟骨誘導(dǎo)和/或再生的間充質(zhì)干細(xì)胞和/或軟骨細(xì)胞的遷移、增殖和/或分化，并從而改變、抑制、預(yù)防和/或治療退行性疾病的發(fā)展。特別地，忌避因子抑制、改變或預(yù)防骨贅形成，優(yōu)選在患者中。特別地，本發(fā)明涉及忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，其中忌避因子是SLIT3(SEQIDNO:1)的片段。所述片段優(yōu)選長度≤1523AA，優(yōu)選≤1200AA，更優(yōu)選≤1000AA和最優(yōu)選≤800AA，并且特別地，≥20AA，優(yōu)選≥50AA，更優(yōu)選≥100AA。優(yōu)選地，所述SLIT3的片段包括SEQIDNO=I從位置34至917，位置47至863，位置66至857，位置279至863，位置279至857，位置279至724，位置279至504，位置311至432，位置335至432或位置312至437的序列。根據(jù)本發(fā)明已發(fā)現(xiàn)，忌避因子，特別是SLIT3，在軟骨隔室緣表達(dá)，并在此處保持關(guān)節(jié)軟骨的完整性。進(jìn)一步地，忌避因子抑制成纖維細(xì)胞，神經(jīng)纖維和血管遷移入關(guān)節(jié)軟骨。因?yàn)槁躁P(guān)節(jié)疾病中血管翳組織侵襲入軟骨僅在改變忌避因子表達(dá)后才可能，該侵襲可以通過忌避因子，特別是通過SLIT3來調(diào)節(jié)，并且因此，可以治療與此相關(guān)的退行性疾病。本發(fā)明人已經(jīng)證明忌避因子的成員和它們的受體在患退行性疾病例如骨關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)炎的患者的滑膜成纖維細(xì)胞中差異表達(dá)。這是通過在Lightcycler上進(jìn)行的分離自培養(yǎng)的原代人滑膜成纖維細(xì)胞的cDNA的基因定量RT-PCR分析的。ROBO和SLIT在骨關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞(OASF)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞(RASF)中相似地表達(dá)(除了ROBO3mRNA表達(dá)外，其與在OASF中的非常弱的表達(dá)相比，在RASF中顯著增加)。與SLIT2或SLIT3相比，SLITlmRNA水平明顯地下降，但SLIT在OASF中的表達(dá)顯示通常比在RASF中更高。R0B01和R0B02在分化的和OA軟骨細(xì)胞中都表達(dá)，但是與分化的軟骨細(xì)胞相比，在OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)增加10倍(R0B01)和甚至100倍(R0B02)。在兩種細(xì)胞類型中均沒有測量到R0B03的表達(dá)。所有三種SLIT在分化的和OA軟骨細(xì)胞中都表達(dá)，再次發(fā)現(xiàn)在OA軟骨細(xì)胞中比在分化的軟骨細(xì)胞中更高的水平。UNC5B和UNC5C在OA和RA患者的滑膜成纖維細(xì)胞中顯著上調(diào)。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RASF中較高代次的滑膜成纖維細(xì)胞中的R0B03表達(dá)的顯著喪失可能是放松對SLIT3的排斥活性(r印ulsiveactivity)中的重要步驟。本發(fā)明人呈現(xiàn)的這些發(fā)現(xiàn)表明，RA(和OA)的滑膜成纖維細(xì)胞中R0B03受體的失調(diào)與成纖維細(xì)胞的侵襲性有關(guān)。此外，本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即忌避因子例如導(dǎo)蛋白1、SLIT3以及其片段參與調(diào)節(jié)細(xì)胞例如滑膜成纖維細(xì)胞的侵襲行為和這些細(xì)胞向或進(jìn)入軟骨的遷移，其是退行性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的主要問題。不限于具體的分子，本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即忌避因子例如導(dǎo)蛋白1和SLIT3和其片段，抑制OASF和RASF細(xì)胞的遷移。由于這個驚人的發(fā)現(xiàn)，忌避因子可以用于治療各種疾病，所述疾病經(jīng)受細(xì)胞的遷移和浸潤，包括成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞例如滑膜成纖維細(xì)胞的改變的遷移和/或血管翳形成，其隨后不能引起組織例如關(guān)節(jié)或非關(guān)節(jié)軟骨的破壞或功能改變。由于本文公開的驚人的發(fā)現(xiàn)，忌避因子可以用作用于預(yù)防和/或治療本文描述的各種疾病和疾病病狀的藥物。各個疾病尤其是退行性的，優(yōu)選軟骨疾病，例如退行性關(guān)節(jié)和/或椎間盤疾病，包括上文進(jìn)一步描述的那些。特別地，根據(jù)本發(fā)明，疾病選自退行性椎間盤疾病、半月板撕裂、前交叉韌帶(ACL)損傷、關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、肢根假關(guān)節(jié)炎(rhizomelicpseudoarthritis)、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎(rheumatoidpolyarthritis)、滑膜炎或絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎。根據(jù)本發(fā)明，可以預(yù)防或治療軟骨缺損或軟骨疾病。本發(fā)明人的另一個發(fā)現(xiàn)是忌避因子對人間充質(zhì)干細(xì)胞(其因能夠分化為軟骨細(xì)胞的能力而眾所周知)的遷移行為的影響。在將因子例如導(dǎo)蛋白1加至下層小室后，用BoydenChamber測定觀察到遷移的誘導(dǎo)，表明忌避因子可用作間充質(zhì)干細(xì)胞(例如滑膜或襯細(xì)胞)的化學(xué)引誘物(chemoattractant)。由于這一發(fā)現(xiàn)，不僅可以抑制遷移細(xì)胞的破壞行為，而且可以吸引用于再生被破壞的組織的細(xì)胞。因此，忌避因子進(jìn)一步改善退行性疾病的治療。進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)是人間充質(zhì)干細(xì)胞向成軟骨細(xì)胞系的誘導(dǎo)的分化，表明忌避因子(例如SLIT3)可以誘導(dǎo)軟骨形成，并因此可用于軟骨疾病的再生和治療。因此，本發(fā)明包括忌避因子用于制備藥物組合物的用途，通過施用有效量的調(diào)節(jié)細(xì)胞至軟骨的遷移、增殖和/或附著的忌避因子，所述的藥物組合物用于治療軟骨缺損，特別是患者中由侵襲性成纖維細(xì)胞引起的退行性疾病。優(yōu)選地，施用給患者的忌避因子的有效量為0.OOlmg/kg患者體重至100mg/kg患者體重，優(yōu)選0.01mg/kg患者體重至20mg/kg患者體重，更優(yōu)選0.01至10mg/kg患者體重，最優(yōu)選0.lmg/kg至lmg/kg患者體重。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語"忌避因子"指活性劑，其在某些濃度或濃度范圍下能夠抑制細(xì)胞遷移通過組織邊緣，例如軟骨邊緣。這樣，例如侵襲性滑膜成纖維細(xì)胞遷移入軟骨和/或骨可以被抑制或改變。其還包括血管翳形成或血管翳侵襲入軟骨的抑制或進(jìn)一步發(fā)展。忌避因子可例如通過驅(qū)避(repellent)或吸引活性，作為軸突導(dǎo)向信號改變神經(jīng)纖維的出芽(sprouting)。忌避因子包括許多也稱為軸突導(dǎo)向分子的分子，其調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)中的軸突生長。它們包括導(dǎo)蛋白、SLIT、腦信號蛋白(SEMAPH0RIN)和肝配蛋白(EPHRIN)和其受體神經(jīng)氈蛋白(NEUR0PILIN)，ROUNDABOUT(R0B0)，以及UNC5和DCC家族的成員(Klagsbrun禾口Eichmann,2005)。導(dǎo)蛋白為與層粘連蛋白結(jié)構(gòu)域具有同源性的分泌蛋白質(zhì)的家族。該家族由導(dǎo)蛋白1、2、3和4組成。它們包含層粘連蛋白-VI結(jié)構(gòu)域、EGF樣重復(fù)和肝素-結(jié)合C末端結(jié)構(gòu)域。導(dǎo)蛋白受體是結(jié)直腸癌缺失(deletedincolorectalcancer,DCC)受體家族(其由DCC和neogenin組成)，或uncoordinated-5(UNC5)家族(其包括UNC5A、5B、5C、OT)。導(dǎo)蛋白牽涉血管發(fā)生，和形態(tài)發(fā)生例如肺分支，乳腺發(fā)育和腫瘤發(fā)生。已表明導(dǎo)蛋白與DCC和neogenin的結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞吸引，而其與UNC受體的結(jié)合調(diào)節(jié)排斥。最初SLIT在果蠅中鑒定為軸突導(dǎo)向分子。哺乳動物SLIT1、SLIT2和SLIT3直系同源物是大的分泌蛋白，其具有四個富亮氨酸重復(fù)(LRR)結(jié)構(gòu)域、九個EGF結(jié)構(gòu)域、一個層粘連蛋白G(LamG)結(jié)構(gòu)域和C末端胱氨酸結(jié)。SLITlmRNA在腦、間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和JurkatT細(xì)胞中表達(dá)。SLIT2和SLIT3mRNA在胚胎干細(xì)胞(ES)中共表達(dá)(伴隨擬胚體形成)(Katoh和Katoh，2005；Vargesson等，2001)。Slit3,而非Slit2,定位于線粒體內(nèi)，暗示Slit3可能具有其他Slit蛋白不具有的獨(dú)特的功能(Little等，2001)。Slit通過與Roundabout受體結(jié)合起作用。存在四種人Robo跨膜受體(Robol，Robo2,Robo3和Robo4)，它們都具有纖連蛋白III型和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig)，但是在胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域方面不同(Itoh等，1998；Howitt等，2004；Hohenester等，2006)。已知Slit蛋白主要在胚胎發(fā)育期間和通過介導(dǎo)軸突導(dǎo)向(經(jīng)由生長錐的吸引或排斥)，參與調(diào)節(jié)遷移細(xì)胞的細(xì)胞-細(xì)胞相互作用和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用。在過去十年，也已經(jīng)描述了Robo-/Slit系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)胞粘附并且誘導(dǎo)腫瘤血管發(fā)生。Slit還參與其他發(fā)育過程，例如果蠅中的肌肉前體細(xì)胞遷移，白細(xì)胞運(yùn)輸和腎誘導(dǎo)(Klagsbrun和Eichmann，2005)。腦信號蛋白(Semaphorin)是表面或局部分泌的神經(jīng)忌避因子，其經(jīng)由不同的表面受體(例如神經(jīng)氈蛋白1和神經(jīng)氈蛋白2)對神經(jīng)纖維具有特定的驅(qū)避作用。III類腦信號蛋白包括SEMAA、B、C和F。肝配蛋白(Ephrin)和其受體Eph代表參與各種發(fā)育過程包括神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和血管發(fā)生的配體和酪氨酸激酶受體。肝配蛋白A配體(肝配蛋白Al、A2、A3、A4、A5)是與EphA受體結(jié)合的GPI錨定分子，而肝配蛋白B蛋白(肝配蛋白B1-3)與EphB受體結(jié)合。反之亦然，肝配蛋白也可以用作受體，其被作為配體的Eph結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的忌避因子是ROUNDABOUT受體(例如R0B01，2，3)，結(jié)腸癌缺失(例如DCC)或UNC(例如UNC5A-D)受體的激動劑或拮抗劑。如本文所用的，激動劑或拮抗劑激活或抑制ROUNDABOUT受體，DCC或UNC受體的活性，其優(yōu)選是通過受體和配體之間的相互作用轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號或由不被配體占據(jù)的受體轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號的抑制。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的激動劑、拮抗劑和/或忌避因子選自導(dǎo)蛋白(例如導(dǎo)蛋白1，導(dǎo)蛋白2，導(dǎo)蛋白4，導(dǎo)蛋白Gl)，SLIT(例如SLIT1，SLIT2，SLIT3)，肝配蛋白(例如肝配蛋白A2，A4，A5)和腦信號蛋白(例如腦信號蛋白3A，3B，3C和3F)，其片段和其氨基酸序列。本文所用的術(shù)語"治療或醫(yī)治"指障礙或疾病的減輕或與障礙或疾病相關(guān)的癥狀的減輕，癥狀的進(jìn)一步發(fā)展或惡化的停止。術(shù)語"預(yù)防"包括疾病或障礙的預(yù)防或防止。術(shù)語"軟骨缺損"指任何軟骨異常，包括軟骨疾病，例如由創(chuàng)傷或退行性過程引起的軟骨變化。術(shù)語"退行性疾病"指伴有受損的軟骨結(jié)構(gòu)的疾病或缺損，例如牽涉或不牽涉骨結(jié)構(gòu)的軟骨退化或破壞。優(yōu)選地，退行性疾病是退行性軟骨疾病。其包括顳下頌關(guān)節(jié)障礙(TMD)，髖臼唇障礙，關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀屑病關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，肢根假關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎，退行性椎間盤疾病，骨軟骨缺損，淺表軟骨缺損，剝脫性骨軟骨炎，全層軟骨缺損，局部厚度(partial-thickness)軟骨缺損，半月板撕裂，前交叉韌帶損傷，滑膜骨軟骨瘤病，強(qiáng)直性脊柱炎，滑膜炎，絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎。本文所用的術(shù)語軟骨缺損和退行性疾病，特別地，不包括骨質(zhì)疏松癥。術(shù)語"退行性椎間盤疾病(DDD)“是慢性過程，其特征部分在于一個或多個椎間盤的髓核中蛋白聚糖和水含量的漸進(jìn)性喪失，其可以在多種障礙，例如特發(fā)性下腰痛，椎間盤突出，椎間盤內(nèi)破裂或有裂隙的椎間盤，神經(jīng)根病，椎管狹窄，突出髓核誘導(dǎo)的坐骨神經(jīng)痛，坐骨神經(jīng)痛，特發(fā)性脊柱側(cè)凸和/或脊髓病中變得明顯。椎間盤退化等級可以通過手術(shù)前的MRI分析進(jìn)行分級。術(shù)語"關(guān)節(jié)軟骨"覆蓋關(guān)節(jié)中骨的部分的表面并且在兩塊骨之間起緩沖作用，以允許關(guān)節(jié)中的運(yùn)動。正常健康的軟骨被稱為透明軟骨。關(guān)節(jié)軟骨由包埋入細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)基質(zhì)的特化細(xì)胞(軟骨細(xì)胞)組成，所述物質(zhì)富含蛋白聚糖，主要是聚集蛋白聚糖，膠原II型纖維，其他蛋白和水?；|(zhì)由包埋入其內(nèi)的軟骨細(xì)胞產(chǎn)生和維持。軟骨組織不受神經(jīng)支配且不具有血管，并且由其下的(underlying)組織提供營養(yǎng)。非關(guān)節(jié)軟骨不覆蓋關(guān)節(jié)表面并且包括纖維軟骨(包括關(guān)節(jié)間纖維軟骨，例如半月板和椎間盤的纖維軟骨)和彈性軟骨。本文所用的術(shù)語"滑膜細(xì)胞"、“滑膜"或"滑膜成纖維細(xì)胞"指生理學(xué)上與滑膜相關(guān)或存在于滑膜空間的細(xì)胞；獲自關(guān)節(jié)的滑膜或滑液的細(xì)胞。它還指覆蓋滑膜關(guān)節(jié)的非軟骨表面的細(xì)胞襯?；び苫ひr細(xì)胞和滑膜subling(滑膜下層(subsynovium))組成，其與關(guān)節(jié)囊(jointcapsule)合并。術(shù)語“血管翳組織“指滑膜細(xì)胞的增殖和/或組織的侵蝕，例如細(xì)胞或物質(zhì)沉積至軟骨(例如關(guān)節(jié)軟骨)上，關(guān)節(jié)軟骨(牽涉或不牽涉軟骨下(subchondral)區(qū)域)的侵襲或破壞。還包括細(xì)胞侵襲入軟骨下的骨髓。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明背后的問題通過利用忌避因子來解決，所述忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療退行性疾病的藥物組合物，所述退行性疾病優(yōu)選不是骨質(zhì)疏松癥，其中忌避因子選自具有下述序列的多肽，所述序列a)與SLIT3(SEQIDNO1)或?qū)У鞍?(SEQIDNO:10)的氨基酸序列具有至少85%的同源性，優(yōu)選90%、95%的同源性，更優(yōu)選同一性，b)是SLIT3或?qū)У鞍?的活性片段，或c)與b)的活性片段的氨基酸序列具有至少85%、90%、95%的同源性。優(yōu)選地，術(shù)語"活性片段"指多肽和成熟的全長多肽(例如成熟的SLIT3多肽)一樣與相同的與受體或結(jié)合伴侶(bindingpartner)結(jié)合的活性。例如，結(jié)合可激活或抑制受體和下游級聯(lián)。例如，SLIT3片段的活性可以通過與其ROBO受體結(jié)合，使用本領(lǐng)域已知的方法例如Biacore結(jié)合測定(如(Marlot等，2007)中所述的體外下拉測定)，ELISA蛋白結(jié)合測定或免測沉淀法來確定。片段的活性還可以用本發(fā)明的實(shí)施例2、3、4、6、7或9中描述的測定(例如BoydenChamber遷移測定，增殖測定或體內(nèi)功能測定，例如實(shí)施例6和7中所述的)來確定。為了確定兩個氨基酸序列的百分比同源性，對序列進(jìn)行最佳比較目的的比對(例如可以在一個蛋白或核酸的序列中導(dǎo)入空位，以與另一個蛋白或核酸進(jìn)行最佳比對)。然后比較對應(yīng)氨基酸位置上的氨基酸殘基。當(dāng)一個序列中的位置由與另一個序列中的對應(yīng)位置相同的氨基酸殘基占據(jù)時，所述分子在該位置是同源的。兩個序列之間的百分比同源性是由序列共有的相同位置的數(shù)目的函數(shù)(即，％同源性=相同位置的數(shù)目/位置的總數(shù)X100)。除上述方法外，兩個序列之間的百分比同源性的確定還可以用數(shù)學(xué)算法來完成。用于比較兩個序列的數(shù)學(xué)算法的優(yōu)選的，非限定性實(shí)例是Karlin和Altschul的算法(1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873_5877)。此算法被并入Altschul等的NBLAST禾口XBLAST程序(1990J.Mol.Biol.215403-410)。BLAST蛋白檢索可以用XBLAST程序(score=50，wordlength=3)進(jìn)行，以獲得與本發(fā)明的CCSRP同源的氨基酸序列。為了獲得用于比較目的的帶空位的比對，可以如Altschul等人(1997NucleicAcidsRes.253389-3402)中所述，使用帶空位的BLAST。當(dāng)使用BLAST和帶空位的BLAST程序時，可以使用各個程序(例如XBLAST和NBLAST)的缺省參數(shù)。用于比較序列的數(shù)學(xué)算法的另一個優(yōu)選的非限定性實(shí)例是Myers和Miller的算法(CABIOS1989)。此類算法被并入ALIGN程序(2.O版)(其為GCG序列比對軟件包的一部分)。當(dāng)利用ALIGN程序來比較氨基酸序列時，可使用PAM120權(quán)重殘基表，12的空位長度罰分和4的空位罰分，以獲得與本發(fā)明的CCSRP同源的氨基酸序列。為獲得用于比較目的的帶空位的比對，可如Altschul等人(1997NucleicAcidsRes.253389-3402)中所述，利用帶空位的BLAST。當(dāng)利用BLAST和帶空位的BLAST程序時，可使用各個程序(例如，XBLAST和NBLAST)的缺省參數(shù)。用于比較序列的數(shù)學(xué)算法的另一個優(yōu)選的非限定性實(shí)例是Myers和Miller算法(CABIOS1989)。此類算法被并入ALIGN程序(版本2.0)(其是GCG序列比對軟件包的一部分)。當(dāng)使用ALIGN程序比較氨基酸序列時，可使用PAM120權(quán)重殘基表，12的空位長度罰分和4的空位罰分。優(yōu)選地，片段長度小于1523或1522個氨基酸，優(yōu)選小于1491、900、500、400、300、200個氨基酸，優(yōu)選至少20、50、100個氨基酸并直至100、200、300、400、500個氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的忌避因子包含選自SEQIDN0:2、3、4、5、6、7、8和9的氨基酸序列并且優(yōu)選這樣的多肽，其氨基酸序列比成熟SLIT3蛋白短。優(yōu)選地，氨基酸序列長度短于1523或1522個，優(yōu)選短于1491個或短于900個氨基酸，優(yōu)選長度在200和900個氨基酸之間，或更優(yōu)選長度在220和760個氨基酸之間，在240和520個氨基酸之間，在250和300個氨基酸之間。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的忌避因子至少包含SEQIDNO:6、7、8或9的氨基酸序列并且氨基酸序列比成熟SLIT3蛋白短。術(shù)語〃成熟SLIT3蛋白〃指不具有信號肽序列的人SLIT3蛋白。優(yōu)選地，成熟SLIT3蛋白從SEQIDNO1的位置33或34開始，或從SEQIDNO2的位置1或2開始。在一些實(shí)施方案中，忌避因子包含選自SEQIDNO:1_9的氨基酸序列或與SEQIDNO1-9的氨基酸序列具有至少85%的同源性，其中優(yōu)選所述氨基酸序列比成熟SLIT3蛋白短。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的忌避因子至少包含SEQIDNO1的位置34至917，位置47至863，位置66至857，位置279至863，位置279至857，位置279至724，位置279至504，位置311至432，位置335至432或位置312至437的氨基酸序列。更優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的忌避因子至少包含SEQIDNO:1的位置308至413，位置308至317，位置331至340，位置344至352，位置357至366，位置380至389，位置394至402或位置404至413的氨基酸序列或其組合。進(jìn)一步優(yōu)選的是這樣的忌避因子，其中一個或多個Cys被另一種氨基酸取代，特別地，被Ala取代。優(yōu)選忌避因子包含選自SEQIDNO1至9，特別地SEQIDNO:2至9的序列，其中一個或多個Cys被另一種氨基酸取代，特別地，被Ala取代。這樣的忌避因子的優(yōu)選的實(shí)例為SEQIDNO:21，其通過用Ala取代位置85的Cys，從SEQIDNO9衍生。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，忌避因子至少在第二富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域或同源的富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域中是非糖基化的。本發(fā)明的術(shù)語"第二富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域"指存在于SLIT蛋白中的保守的富亮氨酸的氨基酸序列。SLIT3的富亮氨酸重復(fù)(LRR)結(jié)構(gòu)域由四個LRR(LRRl-4)組成，其側(cè)翼為氨基和羧基末端保守區(qū)域(LRR-NR和LRR-CR)(Itoh等，1998；Howitt等，2004；Hohenester等，2006)。第二富亮氨酸結(jié)構(gòu)域包含SEQID1的位置248和467之間的氨基酸序列。同源的富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域指具有第二富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域的保守氨基酸替換的氨基酸序列，其他的SLIT家族成員例如SLITl和SLIT2的同源區(qū)域和/或與SEQID1的位置248和467之間的氨基酸序列具有80%，85%，90%，95%的同源性的同源區(qū)域。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的忌避因子是非糖基化的，更優(yōu)選地，忌避因子是重組大腸桿菌(E.coli)衍生的蛋白。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，退行性疾病，優(yōu)選退行性軟骨疾病，選自退行性椎間盤疾病、半月板撕裂、前交叉韌帶(ACL)損傷、關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、肢根假關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎、絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎或滑膜炎。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，關(guān)節(jié)軟骨是透明關(guān)節(jié)軟骨。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，非關(guān)節(jié)軟骨選自半月板和椎間盤。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和/或包含本發(fā)明的任何實(shí)施方案的分離的多肽的藥物組合物是可注射的制劑，其優(yōu)選在缺損附近局部地，或非全身地注射，或更優(yōu)選地關(guān)節(jié)內(nèi)施用入滑液和/或滑液液體。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和/或包含本發(fā)明的任何實(shí)施方案的分離的多肽的藥物組合物是全身施用的(例如通過靜脈內(nèi)施用)可注射的制劑。在特定的實(shí)施方案中，藥物組合物局部施用到需要治療的區(qū)域。這可以通過例如手術(shù)期間局部輸注，局部應(yīng)用，通過注射，借助導(dǎo)管或借助植入物來完成，所述的植入物是多孔或無孔的。本發(fā)明包括的用于施用藥物組合物的其他途徑是皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或口服途徑。特別地，采用的劑量范圍將取決于給藥途徑和待治療的患者的年齡、重量和狀況。施用給患者的多肽的適當(dāng)?shù)牧績?yōu)選0.OOlmg/kg患者體重至100mg/kg患者體重，優(yōu)選0.01mg/kg患者體重至20mg/kg患者體重，優(yōu)選0.01至10mg/kg患者體重，最優(yōu)選0.lmg/kg至lmg/kg患者體重。包含本發(fā)明的忌避因子的藥物組合物和/或包含上下文中任何實(shí)施方案的分離的多肽的藥物組合物可以在各種制劑例如藥學(xué)可接受的載體中。適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)載體的實(shí)例在"Remington'sPharmaceuticalSciences，第18版，1990，ISBN#0912734027,MackPubCo)中描述。制劑可以快速遞送忌避因子或可以是緩釋制劑。所述組合物可以包含治療有效量的忌避因子和適當(dāng)量的載體以提供適于施用給患者的形式。制劑應(yīng)當(dāng)適合施用的方式。不考慮給藥途徑，忌避因子配制成可接受的單位劑型，通過藥學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，忌避因子根據(jù)常規(guī)方法配制成用于靜脈內(nèi)施用給人類的藥物組合物。一般地，用于靜脈內(nèi)施用的藥物組合物包含增溶劑例如無菌等滲水緩沖液，其具有或不具有局部麻醉劑例如利多卡因。通常，成分分別地或混合在一起地在單位劑型中提供，例如作為密閉容器(例如安瓿或小袋)中的干燥的凍干粉末或無水的濃縮物。如果待通過輸注施用藥物組合物，其可以分散到包含增溶劑的輸液瓶中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，制劑包括水性液體，鹽溶液，固體，半固體，液體，糊齊U，油灰(putty)劑型，分散劑，懸浮液，凝膠，脂質(zhì)體，基質(zhì)，固形材料(shapestablematerial)，原位安置材料(insitusettingmaterial)，組織粘著生物材料(tissueadhesivebiomaterial)，可注射的和最小侵襲性的以及可植入的應(yīng)用形式。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物選自水性液體，固體，半固體，糊劑，油灰，脂質(zhì)體，固形材料，基質(zhì)，原位安置材料，組織粘著生物材料。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物包含封裝在脂質(zhì)體中的忌避因子和/或忌避因子的分離的多肽。脂質(zhì)體制劑具有優(yōu)于溶液的有利方面除了治療劑的更長的持續(xù)時間和在施用部位的更慢的清除以外，保護(hù)蛋白質(zhì)在生物環(huán)境內(nèi)免于降解。脂質(zhì)體通常包含具有核心的封閉的脂滴，所述的核心通常包含在水性介質(zhì)中的化合物。在某些實(shí)施方案中，化合物與脂質(zhì)成分化學(xué)結(jié)合或簡單地包含在脂質(zhì)體的水性內(nèi)部隔室內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明提供的藥物組合物優(yōu)選作為干燥的脂質(zhì)體組合物提供，所述的脂質(zhì)體組合物可以重構(gòu)以產(chǎn)生封裝忌避因子和/或多肽的脂質(zhì)體，優(yōu)選脂質(zhì)體制劑為干燥的重構(gòu)的囊泡(DRV)，其在重構(gòu)后在水溶液中形成封裝蛋白的脂質(zhì)體。本文所用的脂質(zhì)體組合物為，例如干燥顆粒產(chǎn)品，其在加水后分散以形成包含生物學(xué)活性組分的多層脂質(zhì)體制劑。有利地，通過使用干燥的脂質(zhì)體避免穩(wěn)定性問題，例如聚集或氧化。單獨(dú)地或以混合物形式存在的用于制劑的適當(dāng)?shù)闹|(zhì)包括中性或帶正電的脂質(zhì)，例如膽固醇，磷脂酰膽堿，氫化磷脂酰膽堿，二硬脂酰磷脂酰膽堿，鞘磷脂，二油酰(dioleyl)磷脂酰膽堿，二油酰磷脂酰甘油，磷脂酰甘油，二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰膽堿，神經(jīng)節(jié)苷脂，神經(jīng)酰胺，磷脂酰肌醇，磷酸，雙十六烷基磷酸，dimyrylstoyl磷脂酰膽堿，硬脂胺，二棕櫚酰磷脂酰甘油及其他類似的脂質(zhì)。優(yōu)選脂質(zhì)混合物帶電荷。脂質(zhì)體制劑一般是至少兩種脂質(zhì)(例如膽固醇和磷脂酰膽堿)，更通常三種或更多脂質(zhì)的混合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供分離的多肽，其與SEQIDNO1至9的氨基酸序列具有至少85%的氨基酸序列同源性，優(yōu)選90%，更優(yōu)選95%的同源性，并且其中氨基酸序列短于成熟SLIT3蛋白，優(yōu)選地其中分離的多肽長度短于1523個，優(yōu)選短于1491個或短于900個氨基酸，優(yōu)選長度在200和900個氨基酸之間，更優(yōu)選長度在200和760個氨基酸之間，在200和520個氨基酸之間，在200和300個氨基酸之間。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，分離的多肽包含選自SEQIDNO:1至9的氨基酸序列，更優(yōu)選分離的多肽包含SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8或9的氨基酸，并且其中氨基酸序列比成熟SLIT3蛋白短，優(yōu)選其中分離的多肽長度短于1523個，優(yōu)選短于1491個或短于900個氨基酸，優(yōu)選長度在200和900個氨基酸之間，或更優(yōu)選長度在220和760個氨基酸之間，在240和520個氨基酸之間，在250和300個氨基酸之間。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步提供分離的多肽，其至少包含SEQIDNO:1的位置34至917，位置47至863，位置66至857，位置279至863，位置279至857，位置279至724，位置279至504，位置311至432，位置335至432或位置312至437的氨基酸序列。更優(yōu)選，本發(fā)明提供分離的多肽，其至少包含SEQIDNO1的位置308至413，位置308至317，位置331至340，位置344至352，位置357至366，位置380至389，位置394至402或位置404至413的氨基酸序列或其組合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的分離的多肽和/或忌避因子是PEG化的。這樣修飾的多肽和/或忌避因子具有大于未修飾的試劑的生物半衰期，并且因此改善試劑醫(yī)學(xué)治療退行性障礙的功效。另外，降低了蛋白的聚集傾向。PEG化可以經(jīng)由蛋白上的氨基或巰基與聚乙二醇(PEG)上的化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)(碳酸鹽(酯)，酯，醛或三氟乙基磺酸單甲氧基(tresylate))之間的穩(wěn)定的共價鍵實(shí)現(xiàn)。所得的結(jié)構(gòu)可以是線性的或分支的。PEG試劑例如Roberts等(Roberts等，2002)中所描述的。其他的PEG化試劑是，但不限于，甲氧基聚(乙二醇)(mPEG)，甲基PE012馬來酰亞胺PEG，胺反應(yīng)性，帶甲基帽的含聚氧乙烯(PEO)的修飾試劑(甲基PEOn-NHS酯，η=4，8，12)。還可以采用經(jīng)修飾的和/或穩(wěn)定的肽，例如具有修飾的鍵以防止肽降解的穩(wěn)定的肽。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含任何上述實(shí)施方案的分離的多肽或忌避因子的藥物組合物。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供任何實(shí)施方案的藥物組合物，其中蛋白與載體，植入物或遞送系統(tǒng)組合。用于本發(fā)明的載體，植入物或遞送裝置優(yōu)選是生物相容的，即其是無毒的并且不引起體內(nèi)的炎性反應(yīng)。它們可以包括基質(zhì)或支架結(jié)構(gòu)并且可以是固體，液體，凝膠，糊狀物或其他可注射的形式。優(yōu)選地，載體，植入物或遞送裝置包含水凝膠，例如W02005/113032中所述的，特別是可注射的水凝膠，硫酸化的透明質(zhì)酸，高取代的羧甲基纖維素和其鹽，藻酸鹽，藻酸丙二醇酯，殼聚糖，羥乙基淀粉(hydroxethylstarch)，膠原，明膠，逆熱力學(xué)凝膠(reversethermalgel)(例如PluronicF128)，基于殼聚糖的熱敏共聚物(例如殼聚糖-Pluronic水凝膠)，多孔絲支架，多數(shù)微球體，脂質(zhì)體制劑和羥磷灰石纖維網(wǎng)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的載體包含由富含血小板的血漿組成的血纖蛋白凝膠，具有可生物降解的明膠水凝膠的富含血小板的血漿，血纖蛋白/透明質(zhì)酸復(fù)合材料，封裝因子的明膠水凝膠微球體，包含例如聚合物的可注射的可生物降解的水凝膠復(fù)合材料，所述的聚合物例如寡(聚(乙二醇)延胡索酸酯(鹽)，聚交酯(PLA)/聚乙醇酸(PGA)禾口聚ε-己內(nèi)酉旨(capronolactone)。優(yōu)選地，載體包含殼聚糖-甘油磷酸或用殼聚糖-磷酸甘油溶液穩(wěn)定的原位血塊。在另一個實(shí)施方案中，遞送系統(tǒng)包括可降解的水凝膠支架例如凝膠微顆粒，基于聚合物的可生物降解的和生物相容的水凝膠，聚合物加固的混合凝塊或用于遞送本發(fā)明的忌避因子和/或分離的多肽的其他基于聚合物的可生物降解的和生物相容的植入物或遞送系統(tǒng)。本發(fā)明優(yōu)選的聚合物包括膠原，硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸，透明質(zhì)酸鹽(酯)，hyaluronicesther，透明質(zhì)酸芐酯，寡(聚)(乙二醇)延胡索酸鹽(酯)，殼聚糖，殼聚糖甘油磷酸，包括三元共聚物，例如明膠/軟骨素-6-硫酸/hyaluoran三元共聚物或其任何組合。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，藥物組合物配制成緩釋制劑。在另一個實(shí)施方案中，藥物組合物配制成緩釋制劑，所述緩釋制劑提供間歇性釋放。退行性疾病的治療可以進(jìn)一步通過用聚合物穩(wěn)定在退化組織(degeneratedtissue)的損傷處形成的血塊來改善，所述的聚合物具有血栓形成活性(thrombogenicactivity)并且刺激創(chuàng)傷修復(fù)過程。因此，在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種具有血栓形成活性的物質(zhì)，添加劑或基質(zhì)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚合物形成血栓和/或刺激血小板聚集和脫粒。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚合物是止血的，更優(yōu)選，聚合物是止血的并且刺激創(chuàng)傷組織的血管再形成和/或結(jié)締組織修復(fù)。在另一個實(shí)施方案中，聚合物在生理?xiàng)l件下溶解并且在與全血混合后形成固體植入物。這些植入物與正常凝塊相比更利于與組織缺損粘附，并且因此改善軟骨再生。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的任何實(shí)施方案的藥物組合物進(jìn)一步包含軟骨組織細(xì)胞(cartilagecell)，優(yōu)選地，其中軟骨組織細(xì)胞為軟骨細(xì)胞(chondrocyte)。在任一上述實(shí)施方案或其組合中，來源于不同組織例如人耳、鼻、肋骨、內(nèi)半月板細(xì)胞(IMC)、脂肪墊細(xì)胞(FPC)、滑膜細(xì)胞(SMC)、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞或其他軟骨細(xì)胞組織的人軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)和/或骨髓基質(zhì)細(xì)胞的共封裝，也是本發(fā)明的實(shí)施方案。特別地，這些細(xì)胞在有或沒有生長因子的情況下增殖以增強(qiáng)不同軟骨細(xì)胞類型的軟骨形成，然后在移植后誘導(dǎo)形成軟骨組織。根據(jù)本發(fā)明的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是作為未定型的間充質(zhì)祖細(xì)胞存在于許多成熟骨骼組織的原始或靜息細(xì)胞群體。MSC是可變的并且具有向幾種成熟組織類型(包括軟骨、骨、脂肪及其他組織)分化的能力，取決于環(huán)境和提供給這些靜息細(xì)胞的生物學(xué)信號。MSC可獲自許多自體來源，包括骨髓、血液、肌肉組織和脂肪，其可以收獲以分離不具有顯著的供體部位病態(tài)或免疫原性潛力的此類細(xì)胞。此外，本發(fā)明背后的問題通過利用任何上述實(shí)施方案的多肽來解決，所述的多肽用于制備用于預(yù)防和/或治療疾病(例如退行性疾病)的藥物組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，退行性疾病是任何上述實(shí)施方案中說明的退行性疾病。優(yōu)選地，退行性疾病是關(guān)節(jié)炎，例如骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，包括慢性或急性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)任何上述實(shí)施方案的忌避因子用于影響間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移行為的用途。此外，本發(fā)明包括根據(jù)任何上述實(shí)施方案的忌避因子用于間充質(zhì)干細(xì)胞的吸引或遷移的誘導(dǎo)的用途。優(yōu)選地，本發(fā)明涉及根據(jù)任何上述實(shí)施方案的忌避因子用于誘導(dǎo)軟骨形成和/或用于刺激軟骨細(xì)胞增殖或分化的用途。本發(fā)明進(jìn)一步包含分離的多肽，所述多肽包含共有序列C⑴3CYC⑴6C⑴99C⑴47CYC(Y)2tlC(Y)2tlC(Y)2tlC(Y)13_22c。進(jìn)一步優(yōu)選的是分離的多肽，所述分離的多肽包含共有序列C(Y)3CYC(Y)6C(Y)99c(Y)47CYC(Y)20C(Y)20C(Y)20C(Y)13_22c，其中C表示半胱氨酸并且Y表示任何氨基酸，其中至少一個半胱氨酸由除半胱氨酸外的任何其他氨基酸取代。通過用另一種氨基酸取代至少一個半胱氨酸，可以影響序列的折疊和/或二聚物(dimer)的形成。本發(fā)明進(jìn)一步提供用于基因治療(用于預(yù)防和/或治療退行性疾病)的藥物組合物，其包含忌避因子基因的DNA或其部分，其編碼對退行性疾病(例如本發(fā)明中描述的一種疾病)具有治療效果的忌避因子或其活性片段。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，優(yōu)選地，忌避因子基因的DNA或其部分可以用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，腺病毒載體，腺病毒相關(guān)病毒(AAV)載體，單純皰疹病毒(HSV)載體，鼠白血病病毒(MLV)載體，慢病毒載體或質(zhì)粒提供，其可以在已經(jīng)用重組載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的人細(xì)胞或重組細(xì)胞中表達(dá)，所述的重組載體包含編碼忌避因子或其活性片段的DNA，從而將忌避因子局部(局部施用)、全身或連續(xù)施用給受損的組織。術(shù)語"DNA忌避因子基因"指編碼忌避因子或其活性片段的DNA。其不限于天然分離的DNA，還包括天然核苷酸序列的任何修飾形式，其在翻譯后形成本發(fā)明的任何實(shí)施方案的多肽，或形成保持忌避因子活性的多肽，優(yōu)選地加至適用于本發(fā)明的目的的與核酸可操作地連接的用于表達(dá)調(diào)控的元件(例如誘導(dǎo)型啟動子元件和/或增強(qiáng)子元件)。重組載體還可以包含由基因編碼的多肽分泌到細(xì)胞外所需的信號肽的核苷酸序列。載體可以進(jìn)一步包含一個或多個選擇標(biāo)記基因或報告基因。DNA可以來源于人、小鼠、大鼠或其他脊椎動物忌避因子。編碼這些蛋白的核苷酸序列對于技術(shù)人員來說是易于獲得的。優(yōu)選地，DNA來源于人忌避因子。例如，序列可見于GenBank、SwissProt及其他數(shù)據(jù)庫。它們可以是cDNA或基因組DNA，并且包含核酸序列的克隆可以來源于保藏機(jī)構(gòu)例如ATCC或可以通過PCR方法克隆或可以化學(xué)合成。可以進(jìn)一步就密碼子使用優(yōu)化DNA序列。忌避因子的DNA序列的實(shí)例為GI4507060(Slitl)、GI4759145(Slit2)、GI11321570(Slit3)、GI:148613883(導(dǎo)蛋白1)或其核酸片段。優(yōu)選地，重組細(xì)胞是滑膜、皮膚、骨髓來源的自體成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或樹突細(xì)胞。最優(yōu)選地，重組細(xì)胞是滑膜、皮膚的自體成纖維細(xì)胞或樹突細(xì)胞。本發(fā)明的一個實(shí)施方案提供藥物組合物和其用于局部遞送編碼忌避因子或其活性片段的核酸分子至受影響的組織例如關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)，特別地至類風(fēng)濕性滑膜的用途。特別地，所述藥物組合物和其用途使得能夠以治療有效量將編碼忌避因子的核酸分子有效地轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)入組織細(xì)胞例如滑膜細(xì)胞中，并且在足夠的一段時間內(nèi)，優(yōu)選在靶細(xì)胞中高表達(dá)治療蛋白。優(yōu)選地，載體或質(zhì)粒不整合入經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的基因組中，例如以染色體外的方式表達(dá)蛋白。優(yōu)選地，載體或質(zhì)粒穩(wěn)定地整合入經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的基因組中，并且優(yōu)選地提供治療蛋白的長期和/或持續(xù)釋放。優(yōu)選地，藥物組合物局部施用到受影響的組織例如關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)指體內(nèi)或離體施用到關(guān)節(jié)炎滑膜。核酸的離體遞送包括用病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)自體的或非自體的滑膜細(xì)胞或用包含編碼忌避因子或其部分的核酸的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，選擇經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞并且將轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞施用到受試者的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)，通過例如將細(xì)胞再植入，注射或再輸注入受試者的關(guān)節(jié)中。體內(nèi)施用指將包含編碼忌避因子或其部分的核酸的載體或質(zhì)粒直接施用到受試者的關(guān)節(jié)，例如通過關(guān)節(jié)內(nèi)注射。局部施用的優(yōu)勢在于需要較少的基因產(chǎn)物，從而較少的載體以治療單獨(dú)的關(guān)節(jié)。對于全身遞送，優(yōu)選將載體導(dǎo)入關(guān)節(jié)外的位置，通過例如肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)注射，通過單次或重復(fù)注射或輸注。優(yōu)選地，上述實(shí)施方案的藥物組合物進(jìn)一步包含額外的藥學(xué)可接受的賦形劑，例如但不限于，生理學(xué)液體，7jC,生理鹽水，緩沖劑，乳化劑，穩(wěn)定劑，凍干試劑等。可選地，用于基因治療(用于預(yù)防和/或治療退行性疾病)的藥物組合物包含忌避因子基因的DNA或其部分(其編碼忌避因子或其活性片段)，所述藥物組合物被導(dǎo)入脂質(zhì)體并且直接注射入關(guān)節(jié)區(qū)域，其中所述脂質(zhì)體與滑膜細(xì)胞融合，導(dǎo)致任何上述實(shí)施方案的忌避因子的體內(nèi)表達(dá)。優(yōu)選地，任何上述實(shí)施方案的藥物組合物以裸DNA形式注射。本發(fā)明進(jìn)一步通過附圖和實(shí)施例來說明，其僅為舉例說明性的并且不構(gòu)成對本發(fā)明的范圍的限定。圖1顯示導(dǎo)蛋白1對滑膜成纖維細(xì)胞的遷移的抑制作用。導(dǎo)蛋白1對第3代和第10代的OA㈧和RA⑶滑膜成纖維細(xì)胞的作用在BoydenChamber測定中測量。將導(dǎo)蛋白1分別應(yīng)用至上層或下層小室。圖2顯示添加Slit3后在BoydenChamberMigration測定中分析的OASF和RASF的遷移。與對照相比，Slit3溫育(0.1μg/ml)在早期代次中(P3和P4)減少OASF的遷移至約60%(Slit3在上層小室中，與OASF—起)和約40%(Slit3在下層小室中)。在RASF(P3/P4)中，Slit3分別減少遷移至約45%(Slit3在上層小室中)和50%(Slit3在下層小室中)。圖3顯示Slit3對骨關(guān)節(jié)炎(OASF)患者和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RASF)患者的滑膜成纖維細(xì)胞的增殖的影響。Slit3(0.1μg/ml)與OASF和RASF—起溫育略微減少OASF和RASF的生長。圖4顯示添加Slit3后人間充質(zhì)干細(xì)胞(HMSC)的分化。A處理7天后，Slit3增加了聚集蛋白聚糖的表達(dá)。BS1U3處理進(jìn)一步增強(qiáng)TGFii誘導(dǎo)的HMSC向軟骨細(xì)胞的分化(分析MIA表達(dá))。圖5顯示SDSPAGE上的用RTS500系統(tǒng)(RocheMolecularBiochemicals)表達(dá)的LRR2構(gòu)建體的表達(dá)。泳道1作為對照的RTS500重組蛋白(無His-標(biāo)簽)10μ1泳道2重組SLIT3片段LRR210y1泳道3重組SLIT3片段LRR21y1泳道4重組小鼠Slit3(250ng；R&DSystems)圖6顯示使用Slit3(R&DSystems)，LRR2，LRR2dNC的SLIT3介導(dǎo)的對MeIIm(R&DSystems)和A375細(xì)胞的遷移的抑制。圖7禾口8顯示用Slit3(R&DSystems,圖7，圖8泳道2，LRR2(圖7，圖8泳道3)，LRR2dNC(圖7，圖8泳道4)，LRR2dNCmut(圖8泳道5)和LRR3(圖8泳道6)處理后，在早期代次中，在BoydenChamberMigration測定(根據(jù)實(shí)施例2和5)中減少的OASF和RASF的遷移。泳道1對照。圖9顯示與不同的忌避蛋白共培養(yǎng)后，測量為OA滑膜成纖維細(xì)胞的上清液中的GAG蛋白水平的軟骨破壞的抑制。泳道1軟骨對照(無OA滑膜成纖維細(xì)胞)泳道2=OA滑膜成纖維細(xì)胞泳道3=OA滑膜成纖維細(xì)胞+導(dǎo)蛋白1泳道4=OA滑膜成纖維細(xì)胞+mSlit3泳道5=OA滑膜成纖維細(xì)胞+LRR2dNCmut實(shí)施例1原代人滑膜成纖維細(xì)胞的分離經(jīng)知情同意和當(dāng)?shù)氐赖聵?biāo)準(zhǔn)委員會批準(zhǔn)后，從四個患有RA的患者和四個患有OA的患者(ClinicofOrthopedicSurgery,SchulthessClinics,Zuerich，Switzerland)經(jīng)滑膜切除術(shù)和關(guān)節(jié)成形術(shù)獲得滑膜組織樣品。根據(jù)臨床和放射學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行OA的診斷。所有RA患者滿足關(guān)于RA診斷的AmericanCollegeofRheumatology1987標(biāo)準(zhǔn)。在OA患者中，從表現(xiàn)出終末期關(guān)節(jié)間隙狹窄的髖關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)獲得滑膜組織，而在RA患者中，材料取樣自腕關(guān)節(jié)或近端指節(jié)間關(guān)節(jié)(關(guān)節(jié)表現(xiàn)出充分顯現(xiàn)的(florid)滑膜炎和/或關(guān)節(jié)炎破壞)。機(jī)械切碎滑膜組織，在無菌磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS)中徹底清洗并且在37°C在連續(xù)攪云力下，用150mg/ml分散酶II(BoehringerMannheim,Mannheim,Germany)消化lh。將所得到的細(xì)胞懸浮液接種到組織培養(yǎng)皿中并且在包含10%胎牛血清和IOOU/ml青霉素每100μg/ml鏈霉素的Dulbecco'smodifiedEagle's培養(yǎng)基(DMEM；GibcoLifeTechnologies,Basel,Switzerland)中，在增濕氣氛中在37°C和加入5%CO2下培養(yǎng)。在第3次，第5次和第10次傳代時，對貼壁的成纖維細(xì)胞進(jìn)行清洗、胰蛋白酶處理，然后將其用于RNA分離或用于測定中。作為對照，使用真皮成纖維細(xì)胞。實(shí)施例2來自RA和OA患者的原代人滑膜成纖維細(xì)胞的遷移的抑制在遷移測定中分析忌避因子對來自骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞的遷移的抑制潛力。用BoydenChamber測定分析忌避因子對細(xì)胞遷移的作用，所述測定包含具有8μπι孔徑的聚碳酸酯過濾器(Costar，Bodenheim,Germany)，基本上如之前所描述的(Jacob等，1995)。用明膠包被過濾器。用成纖維細(xì)胞_條件培養(yǎng)基充滿下層隔室，用作化學(xué)引誘物。通過胰蛋白酶處理2分鐘收獲細(xì)胞，將其以2xl05個細(xì)胞/ml的濃度重懸浮于無FCS的DMEM中并且置于小室的上層隔室中。在37°C溫育4小時后，收集過濾器并且對粘著至下表面的細(xì)胞進(jìn)行固定，染色和計數(shù)。忌避因子，例如重組導(dǎo)蛋白1(來源于HEK293細(xì)胞的人重組導(dǎo)蛋白1蛋白，氨基酸28-604，N-末端Flag標(biāo)簽，AlexisBiochemicals)，Slit3(重組小鼠Slit3蛋白，Ser27-His901，R&DSystems)，以0·1μg/ml的濃度加入至系統(tǒng)的上層或下層小室。已知在體外培養(yǎng)期間，滑膜成纖維細(xì)胞發(fā)生表型變化，并且當(dāng)在體外生長時，這些細(xì)胞逐漸喪失它們的侵襲性表型(Zimmermarm等，2001)。因此，本發(fā)明人希望獲得新鮮分離的滑膜成纖維細(xì)胞(其具有盡可能接近體內(nèi)觀察到的構(gòu)型的表型特征)，并且使用早期和晚期代次的細(xì)胞分析忌避因子對遷移的作用。這些實(shí)驗(yàn)清楚地證明了這些因子對新鮮分離的滑膜成纖維細(xì)胞的遷移的抑制，所述成纖維細(xì)胞來自患有RA和OA的患者的人滑膜組織。在圖1和2中描述該結(jié)果。如圖KA)和圖I(B)中所示，在早期代次(第3代)中存在對RA和OA滑膜成纖維細(xì)胞的遷移的強(qiáng)抑制，而來源于健康供體的或高代次的成纖維細(xì)胞不受影響。在將重組導(dǎo)蛋白1添加到上層和下層小室后，分別觀察到所述作用，表明并非趨化作用而是遷移的分子過程受到導(dǎo)蛋白1的影響。本文呈現(xiàn)的這些發(fā)現(xiàn)表明導(dǎo)蛋白可能通過排斥細(xì)胞，降低細(xì)胞的遷移能力。如圖2中所示，分析OASF和RASF的遷移和導(dǎo)向因子Slit3對細(xì)胞的影響。在早期代次中(P3和P4)，確定了Slit3對OASF和RASF(η=2)的強(qiáng)抑制作用(與未經(jīng)處理的細(xì)胞相比)。這些作用不僅在上層小室中存在Slit3(與SF—起)的情況下是明顯的，而且在下層小室中Slit3與成纖維細(xì)胞-條件培養(yǎng)基(作為化學(xué)引誘物)組合的情況下也是明顯的。實(shí)施例3重組Slit3和導(dǎo)蛋白1對OASF和RASF的增殖的影響根據(jù)供應(yīng)商的說明書，利用CellProliferationKitII(Roche)，測量增殖。其基于細(xì)胞增殖的比色(XTT)測量的非放射性定量(進(jìn)行4天)。以0.1μg/ml的濃度添加重組Slit3或?qū)У鞍?。細(xì)胞增殖測定顯示OASF的計算的倍增時間為約4.5天(d)而RASF為3.5天。Slit3處理導(dǎo)致對增殖的弱的抑制，Slit3處理后，OASF和RASF的細(xì)胞生長減速約1天(圖3)。在導(dǎo)蛋白1處理后，也觀察到對細(xì)胞生長的弱的抑制；然而該作用不顯-frh-者O實(shí)施例4人間充質(zhì)干細(xì)胞(HMSC)的分化為了評估Slit3對分化的作用，HMSC在團(tuán)塊培養(yǎng)物(pelletculture)中培養(yǎng)并且分別用Slit3、TGFii或Slit3/TGFi3處理。處理7天后，Slit3增加了聚集蛋白聚糖的表達(dá)，而處理21天后，Slit3增加了MIA的表達(dá)(未通過TGFβ誘導(dǎo))(圖4)。分析MIA的表達(dá)，Slit3處理略微增強(qiáng)了TGFii誘導(dǎo)的HMSC向軟骨細(xì)胞的分化(圖4B)。實(shí)施例5=RTS系統(tǒng)中SLIT3構(gòu)建體的表達(dá)為了分析SLIT3的片段是否也能夠用作藥物有效成分以用于制備用于治療RA的藥物，產(chǎn)生不同的人SLIT3構(gòu)建體并且在根據(jù)實(shí)施例1至4的功能測定中測試，使用MeIIm細(xì)胞，A375細(xì)胞，原代人RASF和OASF細(xì)胞和HMSC和實(shí)施例9。通過PCR擴(kuò)增cDNA制備所有構(gòu)建體，所述cDNA來源于分離自人軟骨細(xì)胞或滑液成纖維細(xì)胞(來自多個供體)的RNA。用引物5'GACCATATGGCCCCTGCCCCACCAAGTGTACC3'禾口5'GACCCCGGGATTGCATTTGGCCACAATG3'擴(kuò)增構(gòu)建體LRR1-4(SEQIDNO:7)，用引物5'GACCATATGATCTCCTGCCCTTCGCCCTGC3'禾P5'GACCCCGGGGAAGCACTCGCTGCTGAACC3'擴(kuò)增LRR2(SEQIDNO:8)，用引物5'GACCATATGATCGTCGAAATACGCCTAGAAC3'和5'GACCCCGGGTGGGTTTTGGGCTAAGTGGAG3'擴(kuò)增LRR2dNC(SEQIDNO9),并且用引物5'GACCATATGGACCTCGTGTGCCCCGAGAAG3'禾口5'GACCCCGGGGCTCAGCTGGCAGCTACTCTC3'擴(kuò)增LRR3。LRR2dNCmut(SEQIDNO:21)，其中剩下的Cys用Ala替換(Cys85Ala),使用QuickChangeSite-DirectedMutagenesisKit(Stratagene,Amsterdam,Netherlands)和引物5'CCAACAAGATCAACGCCCTGCGGGTTAACACGTTTCAGG3'和5'CCTGAAACGTGTTAACCCGCAGGGCGTTGATCTTGTTGG3'通過定點(diǎn)誘變來克隆。將片段克隆入表達(dá)載體PIVEX2.3-MSC的NdeI和SmaI位點(diǎn)中并且通過測序驗(yàn)證該插入序列。在RTS500系統(tǒng)(RocheMolecularBiochemicals)中表達(dá)帶C-末端HIS標(biāo)簽的SLIT3蛋白。按照廠商的說明書進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄和翻譯。通過Western印跡分析(SDSPAGE)分析蛋白表達(dá)，使用不同量(1μ1，10μ1)的用RTS500表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白(圖5)。在遷移測定中分析用RTS500系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白片段的活性，使用a)MeIIm(由Jacob等人，1995描述)，b)A375(CRL1619，ATCC)細(xì)胞和c)實(shí)施例2的OASF和RASF細(xì)胞，使用實(shí)施例2中描述的BoydenChamber測定，除了將RTS500系統(tǒng)產(chǎn)生的1μ1蛋白添加到系統(tǒng)的上層或下層小室以外。如圖6A和B，圖7和圖8所示，使用Slit3,LRR2,LRR2dNC和LRR2dNCmut,存在對所有細(xì)胞系的遷移的抑制。令人驚訝地，缺失SLIT3蛋白序列的N-和C-末端穩(wěn)定部分的LRR2dNC蛋白以及LRR2dNCmut(Cys85Ala變體)也抑制滑膜成纖維細(xì)胞的遷移，表明包含二級結(jié)構(gòu)部分的蛋白的最小結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)σ种谱饔脕碚f是足夠的。實(shí)施例6用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的治療的動物模型可以在不同的動物模型中分析滑膜成纖維細(xì)胞的遷移和破壞行為以及本發(fā)明的忌避因子的影響。用于分析用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的新的生物制劑的良好建立的模型是嚙齒動物，例如大鼠或小鼠中的膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型(Bendele等，2000)。通過皮內(nèi)/皮下注射弗氏不完全佐劑中的牛II型膠原，在雌性大鼠中誘導(dǎo)RA。當(dāng)大鼠發(fā)展疾病時，用例如脂質(zhì)體的持續(xù)遞送系統(tǒng)或生理鹽水(PBS)媒介物皮下或者腹膜內(nèi)施用忌避因子?？梢酝ㄟ^測定踝關(guān)節(jié)腫脹和測量炎癥以及通過脫鈣后關(guān)節(jié)的組織病理學(xué)評分來分析治療。可選擇的模型是嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)共移植模型。人RASF和新鮮的人軟骨與惰性海綿(例如膠原海綿)一起共移植入SCID小鼠的腎包膜(kidneycapsule)下并且維持60天(Huber等，2006)。RASF細(xì)胞侵襲并且破壞人關(guān)節(jié)軟骨。所用的第三個模型是抗體誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型，其中腹膜內(nèi)注射LPS/PBS中的抗II型膠原單克隆抗體的混合物，在小鼠例如Balb/c小鼠中誘導(dǎo)RA(Teratc)等，1992)。第四個模型是兔的慢性O(shè)VA誘導(dǎo)的或抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型(Podolin等，2002)。通過皮下注射2mlCFA中的IOmgOVA來敏化動物并且以3至4周的間隔，通過肩胛骨內(nèi)(intrascapula)施用IFA中的OVA進(jìn)行加強(qiáng)。將PBS中的OVA施用入陽性皮膚測試的動物的膝關(guān)節(jié)。給兔P.ο.施用忌避因子例如SLIT3片段或媒介物。為了測量化合物的作用，對滑液進(jìn)行總細(xì)胞計數(shù)，分化細(xì)胞分析，eisosanoid/細(xì)胞因子測量，并用測徑器確定膝直徑。在施用化合物之前和之后獲取血樣。當(dāng)就化合物參與滑膜成纖維細(xì)胞遷移的變化和關(guān)節(jié)炎的治療選擇測試化合物時，可以將所述化合物添加到系統(tǒng)中，任選地在鹽溶液中或作為藥物制劑例如脂質(zhì)體制劑。實(shí)施例7用于骨關(guān)節(jié)炎(OA)的治療的動物模型用于骨關(guān)節(jié)炎的治療的動物模型是兔前交叉韌帶切斷模型。在全身麻醉和無菌條件下，經(jīng)由內(nèi)側(cè)髕骨旁切開術(shù)(在內(nèi)側(cè)副韌帶和髕韌帶之間)接近兔的膝關(guān)節(jié)。將髕骨側(cè)移并且移動和縮回髕骨下脂肪墊以暴露整個前交叉韌帶。手術(shù)和注射方案如下每組6只動物(假對照(sham)，媒介物和忌避因子)。對動物進(jìn)行1次或多次(例如5次)注射，優(yōu)選每10天。在最后一次注射后10天處死動物并且獲得X光片。然后，制備樣品以在用番紅0-固綠和蘇木精伊紅染色后進(jìn)行組織學(xué)檢查(例如用10%中性緩沖的福爾馬林固定，在EDTA中脫鈣并且石蠟包埋)。實(shí)施例8體內(nèi)基因遞送基因治療載體可以用分子生物學(xué)的常規(guī)方法構(gòu)建。滑膜成纖維細(xì)胞的非病毒和病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)例如在Meinecke等，2007(通過引用并入本文)中描述?？梢栽陬愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的不同動物模型(例如但不限于實(shí)施例6和7中描述的那些)中分析局部的關(guān)節(jié)內(nèi)基因治療。本文中引用的各個專利申請和專利以及本文中引用的各個文件或參考文獻(xiàn)通過引用明確地并入本文并且可以用于本發(fā)明的實(shí)踐(“本文引用的參考文獻(xiàn)")。各個引用的文件或參考文獻(xiàn)以及專利申請和專利和引用的參考文獻(xiàn)中引用的專利通過引用明確地并入本文。雖然已闡明和描述了優(yōu)選實(shí)施方案，但應(yīng)當(dāng)理解，可根據(jù)本領(lǐng)域的普通技術(shù)進(jìn)行改變而不背離權(quán)利要求所定義的更廣方面的本發(fā)明。實(shí)施例9=GAG釋放的抑制在有或沒有OA滑膜成纖維細(xì)胞(50，000個細(xì)胞)的情況下溫育人軟骨的樣品(立方體邊長5mm，4個立方體/處理(50mg))。另外，分別用導(dǎo)蛋白1，mSlit3或LRR2dNCmut處理具有OASF的樣品。共培養(yǎng)6天后獲取上清液并且GAG濃度用商業(yè)可獲得的GAG-ELISA(Euro-Diagnostica,Malmo,Sweden;WieslabsGAGquantitativeKit)測量。結(jié)果示于圖9中。參考文獻(xiàn)BendeleAM,ChlipalaES,ScherrerJ,FrazierJ,SennelIoG,RichWJandEdwardsCK,III(2000)Combinationbenefitoftreatmentwiththecytokineinhibitorsinterleukin—lreceptorantagonistandPEGylatedsolubletumornecrosisfactorreceptortype1inanimalmodelsofrheumatoidarthritis.ArthritisRheum43(12):2648-2659.HohenesterE,HussainSandHowittJA(2006)InteractionoftheguidancemoleculeSlitwithcellularreceptors.BiochemSocTrans34:418_421·HowittJA,CloutNJandHohenesterE(2004)BindingsiteforRoboreceptorsrevealedbydissectionoftheleucine—richrepeatregionofSlit.EmboJ23:4406-4412.HuberLC,Distler0，Tamer1，GayRE,GaySandPapT(2006)Synovialfibroblastskeyplayersinrheumatoidarthritis.Rheumatology(Oxford)45:669_675.ItohA,MlyabayashiT,OhnoMandSakanoS(1998)CloningandexpressionsofthreemammalianhomologuesofDrosophilasiltsuggestpossiblerolesforSlitintheformationandmaintenanceofthenervoussystem.BrainResMolBrainRes62:175-186.JacobK,BosserhoffAK,WachF,KnuchelR,KleinEC,HeinRandBuettnerR(1995)CharacterizationofselectedstronglyandweaklyinvasivesublinesofaprimaryhumanmelanomacelllineandisolationofsubtractivecDNAclones.IntJCancer60(5):668-675.KatohYandKatohM(2005)ComparativegenomicsonSLIT1,SLIT2,andSLIT3orthologs.OncolRep14(5):1351-1355.KlagsbrunMandElchmannA(2005)Aroleforaxonguidancereceptorsandligandsinbloodvesseldevelopmentandtumorangiogenesis.CytokineGrowthFactorRev16:535_548.KurodaR，IshidaK，MatsumotoT，AkisueT，F(xiàn)ujiokaH，MizunoK，OhgushiH，WakitaniSandKurosakaM(2007)Treatmentofafull-thicknessarticularcartilagedefectInthefemoralcondyleofanathletewithautologousbone-marrowstromalcells.OsteoarthritisCartilage15(2):226_23LLittleMH,WilkinsonL,BrownDL,PiperM,YamadaTandStowJL(2001)DualtraffickingofSlit3tomitochondriaandeellsurfacedemonstratesnovellocalizationforSlitprotein.AmJPhysiolCellPhysiol281:C486_C495.Meinecke,1.，Rutkauskaite，Ε.,Cinski,A.,MulIer-Ladner,U.,Gay,S.，andPap，T.(2007).Genetransfertosynovialfibroblast:methodsandevaluationintheSCIDmousemodel.MethodsMol.Med.135:393-412.Morlot，C.，Hemrika，W.，Romijn，R.A.，Gros,P.，Cusack，S.，andMcCarthy,A.A.(2007).ProductionofSlit2LRRdomainsinmammaliancellsforstructuralstudiesandthestructureofhumanSlit2domain3.ActaCrystallogr.D.BiolCrystallogr.63:961_968.PapT(2003)Newinsightsintointegrinsignalling:implicationsforrheumatoidarthritissynovialfibroblasts.ArthritisResTher5:154—155.PapT(2007)[Regulationofapoptosisinaggressivefibroblasts.].ZRheumatol66:239_242.PodolinPLiBologneseBJiFoleyJJiSchmidtDBiBuckleyPT,WiddowsonKL,JinQ,WhiteJR,LeeJM，GoodmanRB，HagenTR，Kajikawa0，MarshallLA,HayDWandSarauHM(2002)ApotentandselectivenonpeptideantagonistofCXCR2inhibitsacuteandchronicmodelsofarthritisintherabbit.JImmunol169:6435_6444·RobertsMJ,BentieyMDandHarrisJM(2002)ChemistryforpeptideandprotelnPEGylation.AdvDrugDelivRev54:459_476.TeratoK，HastyKA，ReifeRA,CremerMA,KangAHandStuartJM(1992)InductionofarthritisWithmonoclonalantibodiestocollagen.JImmunol148(7)2103-2108.VargessonN，LuriaV，Messina1，ErskineLandLauferE(2001)ExpressionpatternsofSlitandRobofamilymembersduringvertebratelimbdevelopment.MechDev106:175—180·YasudaT(2006)Cartilagedestructionbymatrixdegradationproducts.ModRheumatol16:197-205.ZimmermannT，KunischE，PfeifferR，HirthA，StahlHD,SackU，LaubeA，LiesausE，RothA，Palombo-KinneE，EmmrichFandKinneRW(2001)Isolationandcharacterizationofrheumatoidarthritissynovialfibroblastsfromprimaryculture-primaryculturecellsmarkedlydifferfromfourth-passagecells.ArthritisRes3:72-76.權(quán)利要求忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，其中所述忌避因子選自Slit、導(dǎo)蛋白、肝配蛋白和腦信號蛋白。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，其中所述忌避因子a)與SLIT3(SEQIDNO1)或?qū)У鞍?(SEQIDNO10)的氨基酸序列具有至少85%的同源性，b)是SLIT3或?qū)У鞍?的活性片段，或c)與b)的活性片段的氨基酸序列具有至少85%的同源性。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的忌避因子的用途，其中所述忌避因子包含選自SEQIDNO:1至9或21的氨基酸序列，或與SEQIDNO:1至9或21的任一氨基酸序列具有至少85%的同源性，并且其中所述氨基酸序列短于成熟SLIT3蛋白。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，其中所述忌避因子是SLIT3(SEQIDNO=D的片段。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，其中所述忌避因子是ROBO受體，DCC或UNC受體的激動劑或拮抗劑。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，所述軟骨缺損與滑膜成纖維細(xì)胞浸潤或遷移入關(guān)節(jié)或非關(guān)節(jié)軟骨有關(guān)和/或與血管翳形成有關(guān)。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，所述軟骨缺損是與細(xì)胞對關(guān)節(jié)或非關(guān)節(jié)軟骨的減少的附著有關(guān)的退行性疾病。9.根據(jù)權(quán)利要求1或8中任一項(xiàng)的忌避因子用于制備用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物的用途，所述軟骨缺損是退行性疾病，其中所述疾病選自退行性椎間盤疾病、半月板撕裂、前交叉韌帶(ACL)損傷、關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、肢根假關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎、滑膜炎或絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的忌避因子的用途，其中所述忌避因子至少在第二富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域或同源的富亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域中是非糖基化的。11.一種分離的多肽，其與SEQIDNO:1至9或21的任一氨基酸序列具有至少85%的氨基酸序列同源性，并且其中所述氨基酸序列比成熟SLIT3蛋白短，用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損。12.用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損的藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至10的任一項(xiàng)中定義的忌避因子或權(quán)利要求11的多肽。13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中所述多肽與載體，植入物或遞送系統(tǒng)組合。14.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至10的任一項(xiàng)中定義的忌避因子或權(quán)利要求11的多肽，進(jìn)一步包含至少一種具有血栓形成活性的物質(zhì)，添加劑或基質(zhì)。15.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至10的任一項(xiàng)中定義的忌避因子或權(quán)利要求11的多肽，進(jìn)一步包含軟骨組織細(xì)胞。16.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中所述軟骨組織細(xì)胞是軟骨細(xì)胞。17.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的忌避因子的用途或根據(jù)權(quán)利要求12至16中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物是可注射的制劑。18.根據(jù)權(quán)利要求17的忌避因子的用途或根據(jù)權(quán)利要求17的藥物組合物，其中所述藥物組合物是可注射的制劑，其用于關(guān)節(jié)內(nèi)施用和/或施用到滑液中。19.根據(jù)權(quán)利要求1至10，17或18中任一項(xiàng)的忌避因子的用途或根據(jù)權(quán)利要求12至16中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物選自水性液體，固體，半固體，糊劑，油灰，脂質(zhì)體，固形材料，基質(zhì)，原位安置材料或組織粘著生物材料。20.一種分離的多肽，其包含共有序列c⑴3CYC⑴6C⑴99C⑴47CYC⑴2QC⑴2QC⑴2QC(Y)13-22C，其中C表示半胱氨酸并且Y表示氨基酸，其用于預(yù)防和/或治療軟骨缺損。全文摘要本發(fā)明涉及忌避因子和/或多肽用于制備用于治療疾病例如退行性疾病的藥物組合物的用途，特別地，涉及SLIT3或?qū)У鞍?蛋白的用途。本發(fā)明還涉及SLIT3的多肽片段，包含所述多肽的藥物組合物和其用途。文檔編號A61K9/00GK101821283SQ200880111279公開日2010年9月1日申請日期2008年9月12日優(yōu)先權(quán)日2007年9月14日發(fā)明者A·鮑瑟爾霍夫,E·哈斯特爾特,T·舒伯特申請人:Scil技術(shù)股份有限公司