專利名稱：木酚素系化合物或含有該化合物的肉豆蔻提取物或肉豆蔻假種皮提取物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及木酚素系化合物或含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的新用途。具體而言，本發(fā)明涉及一種美白組合物，其特征在于含有木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。

背景技術(shù)：
雖然人的膚色由產(chǎn)生黑色素的黑色素細(xì)胞的活性、血管分布、皮膚的厚度以及是否含有類胡蘿卜素、膽紅素等人體內(nèi)外的色素等多種因素所決定，但是其中由黑色素細(xì)胞中的酪氨酸酶等多種酶作用生成的被稱為黑色素的黑色色素最為重要。
前述黑色素的形成受到遺傳因素、激素分泌、應(yīng)激等相關(guān)生理因素以及紫外線照射等此類環(huán)境因素的影響。已知黑色素存在于作為皮膚外層的表皮層，其在保護(hù)真皮以下的皮膚器官防止紫外線的同時(shí)，還起到捕捉在生物體的皮膚內(nèi)生成的自由基等的作用，因而具有保護(hù)皮膚內(nèi)蛋白質(zhì)和基因等重要作用，但是由于黑色素過(guò)度產(chǎn)生，不僅會(huì)形成黃褐斑、雀斑等，還會(huì)促進(jìn)皮膚老化，并且在皮膚癌的誘發(fā)中也起著重要的作用。
為了治療或者減輕前述黃褐斑、雀斑、色素沉積等皮膚色素異常沉積癥狀和因暴露于紫外線而產(chǎn)生的過(guò)度黑色素沉積，過(guò)去曾在化妝品或藥物中配合使用抗壞血酸、曲酸、熊果苷、氫醌、谷胱甘肽、或者它們的衍生物、具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，但是由于這些物質(zhì)沒有充分的美白效果，存在對(duì)皮膚的安全性問題，并且在與化妝品配合使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)劑型和穩(wěn)定性問題，因此其使用受到了局限。因此，針對(duì)安全性出色并且美白活性出色的天然物質(zhì)來(lái)源的物質(zhì)進(jìn)行了研究。
另一方面，肉豆蔻(nutmeg)是在熱帶地區(qū)栽培的多年生植物肉豆蔻(Myristica fragrans)的果實(shí)，自古以來(lái)就用作香料。
此外，肉豆蔻假種皮表示前述肉豆蔻植物的果實(shí)的表皮部分，并且已知其具有抑制幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)生長(zhǎng)的活性(InVivo.，17；541-4，2003)、可活化肝臟的解毒機(jī)制(Food Chem.Toxicol.，31；517-21.1993)、皮膚疣的化學(xué)預(yù)防作用(Cancer Lett.，5659-63，1991)、抗癌活性(Jpn.J.Pharmacol.，49；155-63，1999)。但是，對(duì)于肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮是否具有美白活性全然不知。
尤其是有報(bào)道稱，從前述自肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取的肉豆蔻木酚素是代表性木酚素系化合物(Phytochemistry，59169-173，2002)，具有增進(jìn)誘導(dǎo)凋亡(apoptosis)的胱冬蛋白酶(caspase)-3活性的作用(Biol.Pharm.Bull.，271305-1307，2004)，對(duì)口腔微生物的抗菌活性(韓國(guó)專利公開專利公報(bào)10-691792號(hào))、抗炎癥作用(韓國(guó)專利公開專利公報(bào)10-0579752號(hào))、抗痤瘡機(jī)能(韓國(guó)專利公開專利公報(bào)10-0567431號(hào))、抑制腦細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化和活性氧生成的作用(Biochem.Biophys.Res.Commu.，3311264-1269)等。但是，卻并不知曉包括肉豆蔻木酚素在內(nèi)的從前述肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取的奧斯貝木酚素7或者里卡靈E是否具有美白活性。


發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題 因此，本發(fā)明人針對(duì)天然物質(zhì)來(lái)源的具有美白活性的物質(zhì)進(jìn)行了反復(fù)的研究，從中發(fā)現(xiàn)木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物具有出色的美白活性，藉此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種美白用化妝品組合物，其特征在于含有選自下述化學(xué)式1至3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2><化學(xué)式3>
本發(fā)明的另一目的是提供一種美白用食品組合物，其特征在于含有選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。
本發(fā)明的又一目的是提供一種美白用藥物組合物，其特征在于含有選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。
本發(fā)明的又一目的是提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備化妝品組合物中的用途。
本發(fā)明的又一目的是提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備食品組合物中的用途。
本發(fā)明的又一目的是提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備藥物組合物中的用途。
本發(fā)明的又一目的是提供一種選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制黑色素生成的方法。
本發(fā)明的又一目的是提供一種選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制酪氨酸酶活性的方法。
技術(shù)方案 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種美白用化妝品組合物，其特征在于含有選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物 <化學(xué)式1><化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
本發(fā)明提供一種美白用食品組合物，其特征在于含有選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。
本發(fā)明提供一種美白用藥物組合物，其特征在于含有選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。
本發(fā)明提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備化妝品組合物中的用途。
本發(fā)明提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備食品組合物中的用途。
本發(fā)明提供選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備藥物組合物中的用途。
本發(fā)明提供一種選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制黑色素生成的方法。
本發(fā)明提供一種選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制酪氨酸酶活性的方法。
下面將更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容。
本發(fā)明中的“肉豆蔻”是指熱帶地區(qū)栽培的多年生植物肉豆蔻(Myristica fragrans)的果實(shí)，“肉豆蔻假種皮”是指前述肉豆蔻植物的果實(shí)的表皮部分。
本文中的“肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物”是指來(lái)自于肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮的含有下述木酚素系化合物的提取物。只要可以含有前述木酚素系化合物，就對(duì)前述肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的制備方法沒有限制，但是優(yōu)選地，利用選自水、C1-C6有機(jī)溶劑以及亞臨界或超臨界流體中的一種以上溶劑從肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取來(lái)制備。此外，必要時(shí)，可額外包括利用本領(lǐng)域公知方法的過(guò)濾和濃縮步驟來(lái)制備。
前述C1-C6有機(jī)溶劑優(yōu)選地選自C1-C6醇、丙酮、醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、己烷、環(huán)己烷、石油醚，但不限于此。
另外，前述“超臨界流體”是指在一般條件下為氣態(tài)、而在臨界溫度和臨界壓力以上時(shí)為流體的物質(zhì)。前述亞臨界流體包括亞臨界液體和氣體，具體而言，亞臨界液體是指溫度比超臨界溫度和飽和溫度更低的狀態(tài)的流體，亞臨界氣體是指溫度比飽和溫度更高、壓力比超臨界壓力更低的狀態(tài)的流體。前述超臨界流體和亞臨界流體在藥品產(chǎn)業(yè)、食品產(chǎn)業(yè)、化妝品/香料產(chǎn)業(yè)、化學(xué)產(chǎn)業(yè)、能源產(chǎn)業(yè)以及其他諸多領(lǐng)域中應(yīng)用?？稍诒景l(fā)明中使用的超臨界流體和亞臨界流體沒有特別的限制，可以利用例如二氧化碳、氮?dú)?、氧化亞氮、甲烷、乙烯、丙烷、丙烯、石油醚、乙醚和環(huán)己烷等。具體而言，由于二氧化碳可以大量購(gòu)買，比較便宜，沒有爆炸性，并且具有在用于加工時(shí)十分穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，因此特別優(yōu)選。前述二氧化碳的臨界溫度為31.1℃，臨界壓力為73.8個(gè)大氣壓。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將干燥的肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮粉碎，然后利用乙醇、己烷或氯仿溶劑對(duì)其進(jìn)行提取，并進(jìn)行過(guò)濾和濃縮步驟，從而制備肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮的乙醇、己烷或者氯仿提取物。此外，向?qū)⒍趸?CO2)用作超臨界流體的超臨界流體提取機(jī)中加入肉豆蔻，從而制備肉豆蔻的超臨界提取物(參照<實(shí)施例1>)。
本發(fā)明中的“木酚素系化合物”是指選自下述化學(xué)式1至3的化合物。具體而言，化學(xué)式1表示的化合物為肉豆蔻木酚素(macelignan，4-((2S，3R)-4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-2，3-二甲基-丁基)-2-甲氧基苯酚)，化學(xué)式2表示的化合物為奧斯貝木酚素7(austobailignan 7，4-(1-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-2-甲基-丁氧基甲基)-2-甲氧基苯酚)，化學(xué)式3表示的化合物為里卡靈E(licarin E，5-(7-甲氧基-3-甲基-5-丙烯基-2，3-二氫-苯并呋喃-2-基)-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯)。
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2><化學(xué)式3>
前述木酚素系化合物可利用公知的合成方法制備，可通過(guò)從前述肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取并分離純化來(lái)獲得。對(duì)于從前述肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物分離和純化木酚素系化合物，優(yōu)選地，可以單獨(dú)或者結(jié)合使用填充有硅膠(silica gel)或者活性氧化鋁(alumina)等各種合成樹脂的柱色譜法(column chromatography)和高效液相色譜法(HPLC)等，但不限于此。但是，木酚素系化合物的提取、分離和純化方法不必拘泥于前述方法。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，利用公知的硅膠柱色譜法從干燥的肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物分離前述肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7或者里卡靈E(參照<實(shí)施例2>)。
選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物、或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物具有出色的美白活性。
具體而言，將前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物加入黑色素細(xì)胞Melan-a細(xì)胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑色素生成被顯著抑制(參照<實(shí)驗(yàn)例1>)，與黑色素生成有關(guān)的酶酪氨酸酶(tyrosinase)的活性受到抑制(參照<實(shí)驗(yàn)例2>)，并且前述酪氨酸酶和酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)(TRP-1、TRP-2)的表達(dá)均受到抑制(參照<實(shí)驗(yàn)例3>)。
因此，由于前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物具有出色的美白活性，因此可用作化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物的有效成分。
前述本發(fā)明的化妝品組合物含有作為有效成分的選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物，并可與皮膚學(xué)許可的賦形劑一起制備成基礎(chǔ)化妝品組合物(化妝水、潤(rùn)膚霜、精華、潔面泡沫和潔面水等潔面劑、面膜、身體護(hù)理油)、彩色化妝品組合物(粉底、唇膏、睫毛膏、妝底)、頭發(fā)護(hù)理組合物(洗發(fā)水、潤(rùn)絲、護(hù)發(fā)素、發(fā)膏)和肥皂等形式。
前述賦形劑包括例如皮膚軟化劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、著色劑、芳香劑、乳化劑、稠化劑和溶劑，但不限于此。還可另外包括香料、色素、殺菌劑、防氧化劑、防腐劑和保濕劑等，并且可包括以改善物理性質(zhì)為目的的增稠劑、無(wú)機(jī)鹽、合成聚合物等。例如，在將本發(fā)明的化妝品組合物制備成潔面劑和肥皂時(shí)，通過(guò)向普通的洗面劑和肥皂基質(zhì)中添加前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物可以很容易制得。制備乳液時(shí)，可通過(guò)向普通的水包油型(O/W)乳液基質(zhì)中加入前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物，或者向其中加入鹽制得。另外，可以另外向其中添加香料、螯合劑、色素、防氧化劑、防腐劑等和以改善物理性質(zhì)為目的的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素等合成或天然材料。
本發(fā)明的化妝品組合物中所含有的前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的含量?jī)?yōu)選為全部組合物總重量的0.001至10重量％，更優(yōu)選0.01至5重量％，但不限于此。前述含量不足0.001重量％，則無(wú)法具有所需的美白效果，超過(guò)10重量％，則可能在安全性或者劑型的制備方面存在困難。
另一方面，本發(fā)明的食品組合物包括功能性食品(functional food)、營(yíng)養(yǎng)輔助劑(nutritional supplement)、健康食品(health food)和食品添加劑(food additives)等全部形式。
前述類型的食品組合物可通過(guò)本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法制備成多種形式。例如，對(duì)于健康食品，可將前述木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物自身制備成茶、果汁和飲料形式以供飲用，也可將其進(jìn)行液化、顆粒化、膠囊化和粉化以供攝食。還可以將前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物與已知具有美白效果的公知活性成分混合在一起制備成組合物的形式。此外，對(duì)于功能性食品，可以通過(guò)向飲料(包括酒精性飲料)、水果及其加工食品(例如罐裝水果、瓶裝水果、果醬、橘子果醬等)、魚類、肉類及其加工食品(例如火腿腸、香腸、腌牛肉等)、面包類和面條類(例如烏冬面、蕎麥面條、拉面、意大利面條、通心面等)、果汁、各種飲料、餅干、糖果、乳制品(例如黃油、奶酪等)、食用食物油、人造奶油、植物蛋白、殺菌袋裝食品、冷凍食品、各種調(diào)味料(例如味精、醬油、沙司等)等(但不限于此)中添加前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物制得。為了將前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物以食品添加劑的形式使用，還可以將其制備成粉末或者濃縮液形式。
對(duì)于本發(fā)明食品組合物內(nèi)的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的優(yōu)選含量?jī)?yōu)選為在最終制成的食品中占0.01至50重量％，但是不限于此。更優(yōu)選地，對(duì)于本發(fā)明食品組合物，可通過(guò)專門與已知具有美白效果的活性成分混合在一起制成健康食品的形式。
另一方面，前述本發(fā)明藥物組合物可以僅含有前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物，或者可以另外含有一種以上可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
可藥用載體可包括例如口服用載體或者非口服用載體?？诜幂d體可包括乳糖、淀粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等。另外，非口服用載體可包括水、適合的油、鹽水、葡萄糖水溶液和乙二醇等?？闪硗獍ǚ€(wěn)定劑和防腐劑。合適的穩(wěn)定劑有亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸等抗氧化劑。合適的防腐劑有氯化苯甲烴銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和氯丁醇。其他可藥用載體可參考以下文獻(xiàn)中的記載內(nèi)容(Remington′s Pharmaceutical Sciences，19th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995)。
本發(fā)明的藥物組合物可以任何方法給予諸如人的哺乳動(dòng)物。例如，可口服或者非口服給藥。非口服給藥方法可有但不限于靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、骨髓內(nèi)給藥、隔膜內(nèi)給藥、心內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥、皮下給藥、腹腔內(nèi)給藥、鼻孔內(nèi)給藥、腸道給藥、局部給藥、舌下給藥或者直腸內(nèi)給藥?？梢罁?jù)如上所述的給藥途徑，將本發(fā)明的藥物組合物制備成口服或者非口服制劑。對(duì)于口服制劑，可利用本領(lǐng)域公知的方法將本發(fā)明的組合物制備成粉末、顆粒、片劑、丸劑、糖衣片劑、膠囊劑、液劑、凝膠劑、糖漿劑、漿體劑、懸液等。例如，對(duì)于口服制劑，可將活性成分與固體賦形劑混合，再將其粉碎，加入合適的輔助劑，然后通過(guò)加工成顆粒混合物，可獲得片劑或者糖衣片劑。合適的賦形劑的實(shí)例可包括包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚醇和麥芽糖醇等的糖類，包括玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉和馬鈴薯淀粉等的淀粉類，包括纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和羥丙基甲基纖維素等的纖維素類，明膠、聚乙烯基吡咯烷酮等此類填充劑。還可根據(jù)情況加入交聯(lián)的聚乙烯基吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或者海藻酸鈉等作為崩解劑。另外，本發(fā)明的藥物組合物還可含有抗凝劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、香料、乳化劑和防腐劑等。對(duì)于非經(jīng)口服制劑，可通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法制備成注射劑、膏劑、洗劑、外用軟膏劑、油膏劑、保濕劑、凝膠劑、氣霧劑和鼻孔吸入劑的形式。這些劑型記載于在整個(gè)制藥化學(xué)中普遍公知的處方書文獻(xiàn)中(Remington′s Pharmaceutical Sciences，15th Edition，1975.MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania 18042，Chapter87Blaug，Seymour)。
本發(fā)明藥物組合物的總有效量可以以單次劑量(single dose)給予患者，也可以通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間給藥的分割治療方法(fractionated treatmentprotocol)以多個(gè)劑量給藥。本發(fā)明藥物組合物的有效成分的含量可隨疾病程度而異。在非口服給藥時(shí)，以前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物為基準(zhǔn)，優(yōu)選每1日1kg體重給予0.01至50mg、更優(yōu)選0.1至30mg的量，而在口服給藥時(shí)，以前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物為基準(zhǔn)，優(yōu)選以每1日1kg體重給予0.01至100mg、更優(yōu)選0.1至50mg的量分一次至多次給藥。但是，前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的用量不僅要考慮到藥物組合物的給藥途徑和治療次數(shù)，還要考慮到患者的年齡、體重、健康狀態(tài)、性別、疾病嚴(yán)重程度、飲食和排泄率等多種因素，從而決定給予患者的有效量，因此在考慮到這些方面時(shí)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以決定與美白的特定用途相適的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的合適有效給藥量。只要本發(fā)明的藥物組合物表現(xiàn)出本發(fā)明的效果，就對(duì)其劑型、給藥途徑和給藥方法沒有特別的限制。
此外，選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物由于美白效果出色，因此可用于制備美白用化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物。
利用前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物來(lái)制備化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物的方法，以及前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物相對(duì)于前述組合物的含量如前所述。
另外，選自化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物可在抑制黑色素生成和抑制酪氨酸酶活性的方法中使用。
為了用于抑制黑色素生成和抑制酪氨酸酶活性的方法中(但不限于此)，可將有效量的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物給予對(duì)其有需要的個(gè)體。
前述“有需要的個(gè)體”是指需要通過(guò)抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性進(jìn)行美白的哺乳動(dòng)物，優(yōu)選指人。另外，前述“有效量”是指使前述個(gè)體內(nèi)的黑色素生成和酪氨酸酶活性被抑制從而表現(xiàn)出美白效果的量。以前述有效量給藥的給藥方法和給藥量具體如前所述。
有益效果 由上文可知，選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物由于會(huì)抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性，因而具有卓越的美白效果，因此可用作美白用化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物的有效成分。



圖1為確認(rèn)肉豆蔻乙醇提取物是否具有黑色素生成抑制活性的結(jié)果。
圖2為確認(rèn)肉豆蔻木酚素化合物是否具有黑色素生成抑制活性的結(jié)果。
圖3為確認(rèn)肉豆蔻乙醇提取物是否具有抑制黑色素生成相關(guān)酶酪氨酸酶的活性的結(jié)果。
圖4為確認(rèn)肉豆蔻木酚素化合物是否具有抑制黑色素生成相關(guān)酶酪氨酸酶的活性的結(jié)果。
圖5為確認(rèn)肉豆蔻乙醇提取物是否具有抑制酪氨酸酶和酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)(TRP-1、TRP-2)表達(dá)的活性的結(jié)果。
圖6為確認(rèn)肉豆蔻木酚素化合物是否具有抑制酪氨酸酶和酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)(TRP-1、TRP-2)表達(dá)的活性的結(jié)果。

具體實(shí)施例方式 下面通過(guò)列出實(shí)施例來(lái)更具體地說(shuō)明本發(fā)明的構(gòu)成和效果。但是，這些實(shí)施例僅僅是為了促進(jìn)對(duì)本發(fā)明的理解之例示目的而提出，本發(fā)明的范圍不受下述實(shí)施例的限制。
<實(shí)施例1> 具有美白活性的肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物的制備 <1-1>肉豆蔻提取物的制備 首先，為制備肉豆蔻乙醇提取物，將干燥的肉豆蔻用混合機(jī)粉碎，再將100g粉碎的肉豆蔻樣本加入1L乙醇中，并在常溫下冷浸48小時(shí)進(jìn)行提取。將提取的樣本用Whatman No.2濾紙過(guò)濾，再將濾過(guò)的提取液通過(guò)真空回轉(zhuǎn)濃縮機(jī)濃縮來(lái)除去溶劑成分，從而獲得肉豆蔻乙醇提取物。
再使用甲醇、己烷或者氯仿替代前述乙醇作為提取溶劑并采用與前述相同的方法，獲得了肉豆蔻的甲醇、己烷或者氯仿提取物。
還使用超臨界流體提取機(jī)制備了肉豆蔻超臨界提取物。具體而言，將二氧化碳用作超臨界流體并將在提取溫度為50℃、提取壓力為200bar時(shí)提取得到的提取物除去溶劑來(lái)制得。
<1-2>肉豆蔻假種皮提取物的制備 將干燥的肉豆蔻假種皮用混合機(jī)粉碎，再將100g粉碎的肉豆蔻假種皮樣本加入1L乙醇中，并在常溫下冷浸48小時(shí)，并通過(guò)利用與前述<實(shí)施例1-1>相同的方法提取從而獲得肉豆蔻假種皮乙醇提取物。
<實(shí)施例2> 從肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物分離具有美白活性的化合物 <2-1>肉豆蔻木酚素的分離 將前述<實(shí)施例1-1>中乙醇被濃縮的肉豆蔻乙醇提取物與乙酸乙酯混合，提取乙酸乙酯溶解性成分，再除去乙酸乙酯從而濃縮乙酸乙酯溶解性成分。在填充有硅膠的6x15cm柱中，用己烷和乙酸乙酯以比率10∶1(v/v)混合得到的溶劑體系除去非活性物質(zhì)等，隨后，用己烷和乙酸乙酯以比率20∶1(v/v)混合的溶劑得到各級(jí)分之后，利用Rp-18柱色譜法用80％甲醇洗脫，再進(jìn)行濃縮液干燥，最后分離出純的單一美白活性物質(zhì)即下述化學(xué)式1的肉豆蔻木酚素(4-((2S，3R)-4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-2，3-二甲基-丁基)-2-甲氧基苯酚)。
<化學(xué)式1>
<2-2>奧斯貝木酚素7的分離 將前述實(shí)施例<1-2>得到的經(jīng)濃縮的肉豆蔻假種皮乙醇提取物用乙酸乙酯、丁醇、水進(jìn)行分級(jí)。利用硅膠柱色譜法、用氯仿和乙酸乙酯以比率9∶1(v/v)混合的溶劑洗脫乙酸乙酯級(jí)分(10.29g)，從而得到級(jí)分V(0.52g)和級(jí)分VI(0.19g)。用氯仿、乙酸乙酯和丙酮以比率30∶1∶2(v/v/v)混合的溶劑對(duì)分級(jí)分離物VI進(jìn)行柱色譜法處理，從而得到分級(jí)分離物VI-B(0.52g)。之后，通過(guò)利用循環(huán)高效液相色譜法用100％乙醇洗脫級(jí)分VI-B，最終分離出0.011g純的單一美白活性物質(zhì)即下述化學(xué)式2的奧斯貝木酚素7(4-(1-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-2-甲基-丁氧基甲基)-2-甲氧基苯酚)。
<化學(xué)式2>
<2-3>里卡靈E的分離 將從前述實(shí)施例<1-2>得到的經(jīng)濃縮的肉豆蔻假種皮乙醇提取物用乙酸乙酯、丁醇、水進(jìn)行分級(jí)。利用硅膠柱色譜法、用氯仿和乙酸乙酯以比率9∶1(v/v)混合的溶劑洗脫乙酸乙酯級(jí)分(18.44g)，從而得到級(jí)分II(3.04g)。用氯仿、己烷、乙酸乙酯和丙酮以比率15∶10∶0.1∶0.1(v/v/v/v)混合的溶劑對(duì)級(jí)分II進(jìn)行柱色譜法處理，從而得到級(jí)分II-B(0.4g)。之后，通過(guò)利用循環(huán)高效液相色譜法用100％甲醇洗脫級(jí)分II-B，最終分離出0.016g純的單一美白活性物質(zhì)即下述化學(xué)式3的里卡靈E(5-(7-甲氧基-3-甲基-5-丙烯基-2，3-二氫-苯并呋喃-2-基)-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯)。
<化學(xué)式3>
<實(shí)驗(yàn)例1> 黑色素生成抑制活性 <1-1>肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物的黑色素生成抑制 首先，確認(rèn)前述<實(shí)施例1-1>制備的肉豆蔻乙醇提取物是否具有黑色素生成抑制活性。
具體而言，以2×105細(xì)胞/ml將Melan-a細(xì)胞加入6孔板中(黑色素定量)(最終體積為3ml)，用含有10％FBS和2μM TPA(12-豆蔻酸-13-乙酸-佛波醇酯(phorbol 12-myristate 13-acetate))的RPMI1640在10％CO2培養(yǎng)箱(MCO-20AIC，Sanyo)中于37℃培養(yǎng)24小時(shí)。除去前述培養(yǎng)后的培養(yǎng)基，并將前述<實(shí)施例1-1>制備的肉豆蔻乙醇提取物加入RPMI 1640培養(yǎng)基，每天處理，為期三天。除去5日后6孔板中培養(yǎng)的培養(yǎng)基，并用0.25％胰蛋白酶-EDTA(SigmaChemical Co.)溶液處理從而回收細(xì)胞沉淀(pellet)，并轉(zhuǎn)移至1.5ml試管中，以10,000rpm離心10分鐘，除去上清液。將所獲得的沉淀在60℃干燥，并加入100μl1N NaOH來(lái)溶解細(xì)胞內(nèi)的黑色素。將該溶液用PBS稀釋，然后用ELISA讀板器在475nm測(cè)定吸光度，并通過(guò)下述數(shù)學(xué)式1計(jì)算出黑色素的含量，該結(jié)果記載于圖1。此時(shí)，將沒有添加肉豆蔻乙醇提取物的組作為對(duì)照組。
數(shù)學(xué)式1

由圖1記載可知，肉豆蔻乙醇提取物具有出色的黑色素生成抑制活性，因此具有卓越的美白效果(＊＊P＜0.01)。
此外，分別用40μg/ml前述實(shí)施例<1-1>制備的肉豆蔻己烷提取物、氯仿提取物、超臨界提取物和前述實(shí)施例<1-2>制備的肉豆蔻假種皮乙醇提取物處理Melan-a細(xì)胞，并用同前述相同的方法測(cè)定黑色素生成程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肉豆蔻己烷提取物的黑色素生成抑制程度為約53.74％，肉豆蔻氯仿提取物的為約66.93％，肉豆蔻超臨界提取物的為約73.80％，肉豆蔻假種皮乙醇提取物的為約70.50％(結(jié)果未圖示)。
因此，由于肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物的黑色素生成抑制活性出色，因此可考慮用作美白用組合物的有效成分。
<1-2>肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E的黑色素生成抑制 用前述<實(shí)施例2-1>中分離的肉豆蔻木酚素處理Melan-a細(xì)胞，并以同前述<實(shí)驗(yàn)例1-1>相同的方法測(cè)定黑色素生成，其結(jié)果示于圖2。
由圖2所示可知，肉豆蔻木酚素的黑色素生成抑制活性出色，因此美白效果卓越(＊＊P＜0.01)。
再用前述<實(shí)施例2>中分離的奧斯貝木酚素7(750μM)和里卡靈E(50μM)分別處理Melan-a細(xì)胞，并以同前述<實(shí)驗(yàn)例1-1>相同的方法測(cè)定黑色素生成程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，奧斯貝木酚素7的黑色素生成抑制程度為約53.89％，里卡靈E的為約58.44％(結(jié)果未圖示)。
因此，由于肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E的黑色素生成抑制活性出色，因此可考慮用作美白用組合物的有效成分。
<實(shí)驗(yàn)例2> 酪氨酸酶活性抑制 <2-1>肉豆蔻或者肉豆蔻假種皮提取物的酪氨酸酶活性抑制 首先，確認(rèn)前述實(shí)施例<1-1>中制備的肉豆蔻乙醇提取物是否會(huì)抑制黑色素生成相關(guān)酶酪氨酸酶的活性。
如前述<實(shí)驗(yàn)例1-1>那樣，將經(jīng)培養(yǎng)的Melan-a細(xì)胞用前述<實(shí)施例1-1>中制備的肉豆蔻乙醇提取物處理3天，并在5天后除去在6孔板內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)基，用0.25％胰蛋白酶-EDTA(Sigma ChemicalCo.)溶液處理并回收細(xì)胞沉淀。將回收得到的沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml試管內(nèi)，加入200μl磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)，以10,000rpm離心10分鐘后收集分離得到的上清液，并將其中的150μl加入96孔微量板內(nèi)，再加入50μl兒茶酚(catechol)。在添加完上述物質(zhì)后，于37℃培養(yǎng)30分鐘，然后利用微量板讀板器測(cè)定490nm的吸光度從而確定多巴色素(dopa chrome)的量，其結(jié)果示于圖3。
由圖3所記載可知，在用前述<實(shí)施例1-1>中制備的肉豆蔻乙醇提取物進(jìn)行處理時(shí)，所生成的多巴色素的量顯著減少。因此，考慮到酪氨酸酶是多巴色素生成相關(guān)酶，則可知前述<實(shí)施例1-1>中制備的肉豆蔻乙醇提取物可以通過(guò)抑制酪氨酸酶活性來(lái)抑制黑色素生成(＊＊P＜0.01)。
還分別用40μg/ml的前述<實(shí)施例1-1>中制備的肉豆蔻己烷提取物、氯仿提取物、超臨界提取物和前述<實(shí)施例1-2>中制備的肉豆蔻假種皮乙醇提取物處理Melan-a細(xì)胞，并采用與前述相同的方法來(lái)測(cè)定多巴色素生成程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肉豆蔻己烷提取物的多巴色素生成抑制程度為約54.92％，肉豆蔻氯仿提取物的為約62.89％，肉豆蔻超臨界提取物的為約68.34％，肉豆蔻假種皮乙醇提取物的為約72.75％(結(jié)果未圖示)。
<2-2>肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E對(duì)酪氨酸酶活性的抑制 用前述<實(shí)施例2-1>中分離的肉豆蔻木酚素處理Melan-a細(xì)胞，并用與前述<實(shí)驗(yàn)例2-1>相同的方法測(cè)定多巴色素生成程度，其結(jié)果示于圖4。
從圖4可知，肉豆蔻木酚素的多巴色素生成抑制活性出色，因此可以抑制酪氨酸酶的活性(＊＊P＜0.01)。
還分別用前述<實(shí)施例2>中分離的奧斯貝木酚素7和里卡靈E處理Melan-a細(xì)胞，并用與前述<實(shí)驗(yàn)例1-1>相同的方法測(cè)定多巴色素生成程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)奧斯貝木酚素7的多巴色素生成抑制程度為約54.87％，里卡靈E的為約60.04％(結(jié)果未圖示)。
因此，考慮到酪氨酸酶是多巴色素生成相關(guān)酶，則可知肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E可以通過(guò)抑制酪氨酸酶的活性來(lái)抑制黑色素生成。
<實(shí)驗(yàn)例3> 酪氨酸酶和酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)(TRP-1、TRP-2)表達(dá)的抑制 <3-1>肉豆蔻提取物對(duì)酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2表達(dá)的抑制 為了確認(rèn)前述<實(shí)施例1-1>中制備的肉豆蔻乙醇提取物是否會(huì)抑制酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)1(tyrosinase related protein-1，TRP-1)和酪氨酸酶相關(guān)蛋白質(zhì)2(tyrosinase related protein-2，TRP-2)的表達(dá)，利用蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行分析并利用Bradford法對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。
具體而言，將從用前述<實(shí)驗(yàn)例1-1>中的肉豆蔻乙醇提取物處理過(guò)的細(xì)胞提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行10％SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，并將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrance)。用5％脫脂奶粉在常溫下處理1小時(shí)，加入用5％脫脂奶粉以1∶1000的比率稀釋的酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的一次抗體，并使之在常溫下反應(yīng)2小時(shí)。與一次抗體反應(yīng)后，在振蕩的同時(shí)，用TBST(Tris-buffer Saline Tween 20)洗滌兩次，每次10分鐘。加入用5％脫脂奶粉以1∶1000稀釋的識(shí)別各自的一次抗體的二次抗體并使之在常溫下反應(yīng)1小時(shí)，并同一次抗體時(shí)一樣，在振蕩的同時(shí)，用TBST洗滌3次，每次10分鐘。用下述化學(xué)發(fā)光法(chemiluminescence)顯像，其結(jié)果示于圖5。
從圖5記載可知，前述肉豆蔻乙醇提取物可以通過(guò)抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表達(dá)來(lái)抑制黑色素生成(＊＊P＜0.01)。
<3-2>肉豆蔻木酚素對(duì)酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2表達(dá)的抑制 用前述<實(shí)施例2-1>中分離的肉豆蔻木酚素處理Melan-a細(xì)胞，并通過(guò)與前述<實(shí)驗(yàn)例3-1>相同的方法確定是否會(huì)抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表達(dá)，其結(jié)果示于圖6。
從圖6記載可知，前述肉豆蔻木酚素可通過(guò)抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表達(dá)來(lái)抑制黑色素生成(＊＊P＜01)。
<劑型例1-化妝品> <1-1至1-3>營(yíng)養(yǎng)化妝水(乳液) 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表1的營(yíng)養(yǎng)化妝水劑型比率，將前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備成營(yíng)養(yǎng)化妝水。
表1
營(yíng)養(yǎng)化妝水 <1-4至1-6>軟化化妝水(潤(rùn)膚液) 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表2的軟化化妝水劑型比例，將前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備成軟化化妝水。
表2
軟化化妝水 <1-7至1-9>營(yíng)養(yǎng)潤(rùn)膚霜 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表3的營(yíng)養(yǎng)潤(rùn)膚霜?jiǎng)┬捅壤瑢⑶笆?lt;實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備成營(yíng)養(yǎng)潤(rùn)膚霜。
表3
營(yíng)養(yǎng)潤(rùn)膚霜 <1-10至1-12>按摩膏 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表4的按摩膏劑型比例，將前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備為按摩膏。
表4
按摩膏 <1-13至1-15>面膜 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表5的面膜劑型比例，將前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備成面膜。
表5
面膜 <1-16至1-18>凝露 通過(guò)常規(guī)方法，按照下表6的凝露劑型比例，將前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)制備成凝露。
表6
凝露 <劑型例2-食品> <2-1>健康食品的制備 可將以下物質(zhì)混合在一起進(jìn)行制備1000mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、70μg維生素A醋酸酯、1.0mg維生素E、0.13mg維生素B1、0.15mg維生素B2、0.5mg維生素B6、0.2mg維生素B12、10mg維生素C、10μg生物素、1.7mg煙酰胺、50μg葉酸、0.5mg泛酸鈣、1.75mg硫酸亞鐵、0.82mg氧化鋅、25.3mg碳酸鎂、15mg磷酸二氫鉀、55mg磷酸氫鉀、90mg檸檬酸鉀、100mg碳酸鈣、24.8mg氯化鎂，也可以任意地改變其混合比進(jìn)行實(shí)施，通過(guò)常規(guī)健康食品制備方法，在將前述成分混合之后，將其制備成顆粒，并通過(guò)常規(guī)方法用于健康食品組合物的制備中。
<2-2>健康飲料的制備 通過(guò)常規(guī)健康飲料制備方法，將1000mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、1000mg檸檬酸、100g寡糖、2g梅果實(shí)濃縮液、1g?；撬峒尤爰兓校偣矠?00ml，再將所述成分進(jìn)行混合，然后將在85℃攪拌加熱大約1小時(shí)得到的溶液過(guò)濾，并收集到經(jīng)滅菌的2L容器中，密封、滅菌、冷藏保管，從而可用于健康飲料組合物制備中。
<2-3>口香糖 將20重量％膠基、76.9重量％砂糖、1重量％香料和2重量％水與0.1重量％前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)混合，并通過(guò)常規(guī)方法制備口香糖。
<2-4>糖果 將60重量％砂糖、39.8重量％淀粉糖漿和0.1重量％香料與0.1重量％前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)混合，并通過(guò)常規(guī)方法制備糖果。
<2-5>餅干 將25.59重量％硬麥面粉、22.22重量％中力小麥粉、4.80重量％精白糖、0.73重量％食鹽、0.78重量％葡萄糖、11.78重量％棕櫚油(palm shortening)、1.54重量％銨、0.17重量％小蘇打、0.16重量％亞硫酸氫鈉、1.45重量％米粉、0.0001重量％維生素B1、0.0001重量％維生素B2、0.04重量％牛奶香精、20.6998重量％水、1.16重量％全脂奶粉、0.29重量％代用奶粉、0.03重量％磷酸二氫鈣、0.29重量％散布鹽和7.27重量％噴霧乳與1重量％前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)混合，并利用常規(guī)方法制備餅干。
<劑型例3-醫(yī)藥品> <3-1>粉劑 將50mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、2g結(jié)晶纖維素混合之后，通過(guò)常規(guī)粉劑制備方法填充至密封包中來(lái)制備粉劑。
<3-2>片劑 將50mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、400mg結(jié)晶纖維素、5mg硬脂酸鎂混合在一起之后，通過(guò)常規(guī)片劑制備方法壓片從而制得片劑。
<3-3>膠囊劑 將30mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、100mg乳清蛋白、400mg結(jié)晶纖維素、6mg硬脂酸鎂混合之后，通過(guò)常規(guī)膠囊劑制備方法填充明膠膠囊從而制得膠囊劑。
<3-4>注射劑 通過(guò)常規(guī)注射劑制備方法，將活性成分溶解于注射用蒸餾水中，并將pH調(diào)整為約7.5，之后，將100mg前述<實(shí)施例1>中制備的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假種皮提取物或者前述<實(shí)施例2>中分離的化合物(肉豆蔻木酚素、奧斯貝木酚素7和里卡靈E)、注射用蒸餾水、pH調(diào)節(jié)劑混合在一起，裝入2ml容量的安瓿中并滅菌從而制備成注射劑。
<適用例> 按照以下方式檢測(cè)通過(guò)前述<劑型例1-1>至<劑型例1-18>制備的營(yíng)養(yǎng)化妝水、軟化化妝水、營(yíng)養(yǎng)潤(rùn)膚霜、按摩膏、面膜和凝露對(duì)色素沉積的抑制效果。
首先，選擇20名健康的男性和女性，在其兩臂的下臂部貼上在其上有排成兩排、每排有六個(gè)直徑為7mm的孔的鋁箔，在距離手臂10cm的距離處用1000W ORIEL太陽(yáng)模擬器照射60J/cm2的光量。在照射前用70％乙醇水溶液仔細(xì)洗滌照射部位。在照射后的照射部位涂抹含有美白成分的<劑型例1-1>至<劑型例1-18>，每日三次。涂抹三周后用肉眼判斷色素沉積度，將前述劑型例與對(duì)照組相比，抑制色素沉積的程度以顯著的效果、有效、無(wú)效三個(gè)等級(jí)評(píng)判，還對(duì)是否出現(xiàn)皮膚副作用進(jìn)行了觀察，在此之后將這些結(jié)果示于表7。
表7
本發(fā)明組合物的使用結(jié)果 數(shù)字為人數(shù)。
正如由前述表7所記載的那樣，含有本發(fā)明美白成分的皮膚美白用組合物在此20名試驗(yàn)者中對(duì)最少12名以上的試驗(yàn)者顯示出美白效果。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性 選自前述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物、或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物通過(guò)抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性從而具有卓越的美白效果，因而可用作美白用化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物的有效成分。
權(quán)利要求
1.一種美白用化妝品組合物，其特征在于含有選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
2.一種美白用食品組合物，其特征在于含有選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
3.一種美白用藥物組合物，其特征在于含有下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)記載的組合物，其特征在于所述肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物為用選自水、C1-C6有機(jī)溶劑和亞臨界或者超臨界流體中的一種以上溶劑提取的提取物。
5.權(quán)利要求4記載的組合物，其特征在于所述C1-C6有機(jī)溶劑選自C1-C6醇、丙酮、醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、己烷、環(huán)己烷、石油醚。
6.選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備化妝品組合物中的用途
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
7.選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備食品組合物中的用途
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2><化學(xué)式3>
8.選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物在制備藥物組合物中的用途
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2><化學(xué)式3>
9.選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制黑色素生成的方法
<化學(xué)式1> <化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
10.選自下述化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物抑制酪氨酸酶活性的方法
<化學(xué)式1><化學(xué)式2> <化學(xué)式3>
全文摘要
本發(fā)明涉及木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物的新用途。具體而言，本發(fā)明涉及一種美白用組合物，其特征在于含有木酚素系化合物或者含該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物。選自化學(xué)式1至化學(xué)式3的木酚素系化合物或者含有該化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假種皮提取物通過(guò)抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性從而具有卓越的美白效果，因此可用作美白用化妝品組合物、食品組合物或者藥物組合物的有效成分。
文檔編號(hào)A61K8/49GK101827579SQ200880112199
公開日2010年9月8日 申請(qǐng)日期2008年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月17日
發(fā)明者J-K·黃, Y-M·曹, G·H·金, J·H·金, H·J·李, H·I·吳, H·C·鄭, J·Y·鄭, D·U·金 申請(qǐng)人:生物關(guān)懷有限公司, 新樹有限公司