專利名稱：Lh液體制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及促黃體生成素(LH)的液體藥物制劑領域，也涉及這種制劑的生產(chǎn)方法。
背景技術：
促黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和絨毛膜促性腺激素(CG)是可以注射的蛋 白質，屬于促性腺激素類。LH、FSH和CG單獨或聯(lián)合使用可以治療不孕癥和女性和男性患 者的生殖系統(tǒng)疾病。在自然界中，F(xiàn)SH和LH由垂體產(chǎn)生。作為藥物使用的FSH和LH及其變體可以重 組制得(rFSH和rLH)，也可以從絕經(jīng)后婦女的尿液中制得(uFSH和uLH)。FSH在女性患者中用于促排卵(OI)和控制卵巢過度刺激(COH)，作為一種輔助生 殖技術(ART)。經(jīng)典的促排卵治療方案是，每天給患者注射FSH或FSH變體(大約75至 300IU FSH/天)，持續(xù)大約6至12天的時間。經(jīng)典的控制性卵巢過度刺激的治療方案是， 每天給患者注射FSH或FSH變體(大約150-600IU FSH/天)，持續(xù)大約6至12天的時間。FSH也用于男性少精癥患者，可以誘導精子生成。150IU FSH每周三次給藥合并 2500IU hCG每周二次使用的給藥方案已經(jīng)成功地使男性低促性腺激素型性腺功能減退癥 患者的精子數(shù)量得到提高(Burgues等，1997年)。LH與FSH聯(lián)合用于治療女性OI和COH患者，特別是那些內(nèi)源性LH水平非常低或 對LH具有抗性的患者，比如患有低促性腺激素型性腺功能減退癥(HH，WH0第1組)的病人 或者年紀稍大的患者(即35歲或以上者)，以及存在胚胎著床或早期流產(chǎn)問題的患者。LH 與FSH的聯(lián)合傳統(tǒng)上有一種稱為人絕經(jīng)期促性腺激素(hMG)的制劑，從絕經(jīng)后婦女的尿液 中分離得到。hMG與比例為1 IWFSH LH的活性相當。CG作用在與LH相同的受體上，引起同樣的效應。CG的循環(huán)半衰期比LH長，因此， 通常作為LH活性的長效來源使用。CG在OI和COH的治療方案中用來模擬天然LH的峰值 水平，誘發(fā)排卵。在用FSH或FSH與LH的混合物進行刺激的末期，注射人絨毛膜促性腺激 素(hCG)用以誘發(fā)排卵。在治療OI和COH的刺激周期，CG也可以與FSH—起使用，目的是 在刺激周期為需要LH的患者提供LH活性，如上所述。FSH、LH和CG是雜二聚體、糖蛋白激素家族的成員，該家族還包括促甲狀腺激素 (TSH)。這個家族的成員是包括一個α亞基和一個β亞基的雜二聚體。亞基之間通過非 共價作用相互連接。人FSH(hFSH)雜二聚體的組成如下(1)成熟肽92個氨基酸組成的糖 蛋白α亞基，這個亞基為另一個人家族成員(即絨毛膜促性腺激素(“CG”)、促黃體生成 素(“LH”)和促甲狀腺激素(“TSH”))所共有；(2)成熟肽111個氨基酸組成的β亞基， 這是FSH所獨有的(Shome等，1974和1988年)。人LH雜二聚體組成如下⑴成熟肽92 個氨基酸組成的糖蛋白α亞基；(2)成熟肽112個氨基酸組成的β亞基，這是LH所獨有 的(Keutmann 等，1979 年；Talmadge 等，1984 年；Fiddes 和 Talmadge，1984 年)。由于與防 腐劑、表面活性劑和其他輔料的相互作用，糖蛋白的α和β亞基在制劑中可能容易發(fā)生游 離。這些亞基的游離會導致生物活性的喪失(Reichert和Ramsey，1975年)。
FSH制成肌肉注射(IM)或皮下注射(SC)制劑。FSH以凍干(固體)形式供應，裝 在小瓶或安瓿瓶中，75IU/瓶和150IU/瓶，貯存在2-25°C下的保質期約為兩年。用注射用 水(WFI)將凍干產(chǎn)品重建形成注射溶液。對于誘發(fā)排卵和控制卵巢過度刺激，建議每日注 射，初始劑量為75IU至600IU，注射至約10天。根據(jù)患者的反應，可以使用長達三個治療周 期，F(xiàn)SH劑量遞增。使用凍干制劑，患者需要每天向一瓶新的凍干材料中加稀釋劑使其復原 為溶液，并在復原后迅速給藥。[包裝說明書m700101A，1996年2月出版，F(xiàn)ertinex (注 射用尿促卵泡素，純化品)皮下注射劑，SeronoLaboratories, Inc.，Randolph, MA].
FSH也制成單劑量和多劑量液體形式，裝于小瓶或安瓿瓶中。單劑量形式在使用前 的貯存過程中必須保持穩(wěn)定并維持活性。在安瓿密封完成后，多劑量形式不僅必須在使用前的貯存過程中保持穩(wěn)定并維持 活性，而且必須在給藥期的幾天內(nèi)保持穩(wěn)定、維持活性并保持相對無菌。為此，多劑量形式 通常包含抑菌劑。LH制成肌肉注射(IM)或皮下注射(SC)制劑。LH以凍干(固體)形式供應，裝在 小瓶或安瓿瓶中，75IU/瓶，貯存在2-25°C下的保質期約為兩年。用注射用水(WFI)將凍干 產(chǎn)品重建形成注射溶液。對于誘發(fā)排卵和控制卵巢過度刺激，建議與FSH聯(lián)合應用，每日注 射LH，初始劑量為75IU至600IU，注射至約10天。EP O 618 808 (Applied Research Systems ARS Holding N. V.)公開了一種包含 促性腺激素和穩(wěn)定量蔗糖(單獨或與甘氨酸組合)的固體均質混合物的藥物組合物。EP O 814 841 (Applied Research Systems ARS Holding N. V.)公開了一種穩(wěn)定 的液體藥物組合物，包含重組人絨毛膜促性腺激素(hCG)和穩(wěn)定量的甘露醇。WO 2004/087213 (Ares Trading S. Α.)公開了一種液體和凍干藥物組合物，包含 卵泡刺激素(FSH)或其變體，和/或促黃體生成素(LH)或其變體，以及選自Pluronic@F77、 Pluronic F87、Pluronic F88 和 Pluronic F68 的表面活性劑。WO 2004/112826 (Ares Trading S. Α.)公開了一種凍干制劑，包含卵泡刺激素 (FSH)或其變體，和促黃體生成素(LH)或其變體，以及選自吐溫20、吐溫40和吐溫80等聚 山梨醇酯的表面活性劑。WO 00/04913 (Eli Lilly and Co.)公開了一種包含F(xiàn)SH或FSH變體和防腐劑的制 齊U，其中FSH包含一個α和β亞基，防腐劑選自苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苯 甲醇、羥苯甲酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫醋酸鈉和硫 柳汞，或其混合物的水溶性稀釋液。WO 2004/105788 (Ferring B. V.)公開了一種由負載在至少一種藥學上可接受的 載體上的FSH和hCG組成的藥物組合物。EP O 448 146 (ΑΚΖ0 N. V.)公開了一種穩(wěn)定化的、含促性腺激素的凍干粉針，包含
促性腺激素和穩(wěn)定量的二羧酸鹽組成。EP O 853 945 (Akzo Nobel N. V.)公開了一種含促性腺激素的液體制劑，其特征 在于，該制劑包含促性腺激素和穩(wěn)定量的多聚羧酸或其鹽類和硫醚化合物。對單劑量或多劑量給藥用LH或LH變體的穩(wěn)定液體制劑仍有需求。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供LH或LH變體的液體制劑， 它們的制備方法，以及它們在治療生育疾病上作為藥物或獸藥應用的方法。第一個方面，本發(fā)明提供一種LH或LH變體的液體制劑，包含純化的LH或LH變體 制劑，和穩(wěn)定量的精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽。第二個方面，本發(fā)明提供了一種LH或LH變體液體制劑的制備方法，包括的步驟是 1)制成LH或LH變體的溶液，和2)在上述溶液中加入穩(wěn)定量的精氨酸或其鹽類和/或賴氨 酸或其鹽類。 第三個方面，本發(fā)明提供一種LH或LH變體液體制劑的成品形式，包含在消毒條件 下密封在適合使用前貯存的容器中的本發(fā)明所述的液體制劑。容器可以是安瓿瓶、小瓶、注 射器或儲藥器。第四個方面，本發(fā)明提供一種人藥用制品，包含包裝材料和裝有本發(fā)明所述LH或 LH變體液體制劑的容器以及抗菌劑，其中所述的包裝材料包含一個標簽，指明這個制劑在 第一次使用后可以保存28天或以上的時間。本發(fā)明的另一目的是提供本發(fā)明所述的LH或LH變體液體制劑與FSH或FSH變體 液體制劑聯(lián)合使用的用途。附圖簡要說明

圖1顯示了 r-hLH制劑在不同濃度(6、12和24μ g/ml r_hLH)，不同容器(注 射器和儲藥器)和不同灌裝量(0. 25,0. 5和Iml)情況下的色譜學性質比較(SE-HPLC)。 除r-hLH以外，這些制劑還包含磷酸鹽緩沖液、蔗糖、吐溫20、甲硫氨酸、苯甲醇、苯扎氯 銨和注射用水。點線對應于0. 25ml的灌裝量；短劃線對應于0. 5ml的灌裝量；黑線對應 于Iml的灌裝量。(A) 6 μ g/ml r_hLH制劑裝于注射器中；(B) 6 μ g/ml r_hLH制劑裝于儲 藥器中；(C) 12 μ g/ml r-hLH制劑裝于注射器中；(D) 12 μ g/ml r-hLH制劑裝于儲藥器中； (E) 24 μ g/ml r-hLH制劑裝于注射器中；(F) 24 μ g/ml r_hLH制劑裝于儲藥器中。保留時間 在8. 5分鐘的峰對應于完整的雜二聚體(通過非共價鍵連接的α+β亞基)，而較高保留時 間(大約9. 5分鐘)的峰對應于游離亞基。AU:吸光單位。圖2比較了合用與不合用抑菌劑的制劑用SE-HPLC法測得的雜二聚體百分比，分 別是 SAC/500/24 μ gBACL_cart 和 SAC/500/24 μ g_cart。(A) +40 "C 貯存三天(3d)后測定 SE-HPLC ； (B)+33°C貯存八天(8d)、四周(4w)、六周(6w)、八周(8w)和十三周(13w)后測定 SE-HPLC。發(fā)明詳述本發(fā)明的LH液體制劑具有改善的或更合適的性質或穩(wěn)定性，對女性和/或男性不 育癥的治療有用。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的液體制劑是皮下注射和/或肌肉注射制劑。本發(fā)明的LH或LH變體液體制劑的合適性質和穩(wěn)定性，通過防止或減少活性或穩(wěn) 定性的降低，或通過改善任何方面的給藥有效性或滿意度來獲得，例如，通過給藥方式、頻 率、劑量、舒適性、易用性等中的至少一種。促黃體生成素(LH)，如本文中所使用的，是指作為全長成熟蛋白產(chǎn)生的LH，其中 包括但不僅限于人LH或“hLH”，不管是重組產(chǎn)生的還是從人類來源，如絕經(jīng)后婦女的尿液 中分離得到的?！癓H變體”這一表述方式是為了涵蓋氨基酸序列、糖基化模式或亞基間的連接與人LH不同，但卻表現(xiàn)出LH活性的分子。術語與LH相關的“活性”，是指LH制劑或混合制劑引發(fā)與LH相關的生物反應的能 力，例如精囊增重法(Van Hell等，1964年)。LH的生物活性依據(jù)認可的LH標準來評價。活性的測量用每毫升溶液的國際單位數(shù)(IU/ml)來表示，或者用每毫升溶液的 百萬國際單位數(shù)(MIU/ml)來表示。(lMIU/ml = 1，000, 000IU/ml)。一個國際單位按照國立 健康研究院(貝塞斯達，馬里蘭州)(National Instituteof Health,Bethesda,Maryland) 出版的《研究參考試劑說明第35卷》中的描述進行計算。LH或LH變體可用合適的方法生產(chǎn)，例如重組方法，若可能的話從天然來源中分離 或純化，或化學合成，或它們的任何組合。術語“重組”用來指通過運用重組DNA技術制得的LH或LH變體的制備(例如見 WO 85/01958)。用重組技術表達LH的方法的一個實例是通過用編碼LH的α和β亞基的 DNA序列(無論提供在一個載體還是兩個載體上，每個亞基具有一個單獨的啟動子)轉染真 核細胞，如歐洲專利EP 0 211 894和EP 0 487 512所述。另一個運用重組技術產(chǎn)生LH的例子是運用同源重組技術插入異源的調(diào)節(jié)片段， 可操作性地連接編碼LH亞基的內(nèi)源性序列，如歐洲專利EP 0 505500 (Applied Research Systems ARS Holding NV)所述。卵泡刺激素(FSH)，如本文中所使用的，是指作為全長成熟蛋白產(chǎn)生的FSH，其中 包括但不僅限于人FSH或“hFSH”，不管是重組產(chǎn)生的還是從人類來源，如絕經(jīng)后婦女的尿 液中分離得到的。“FSH變體”這一表述是為了涵蓋氨基酸序列、糖基化模式或亞基間的連接與人FSH 不同，但卻表現(xiàn)出FSH活性的分子。術語與FSH相關的“活性”，是指FSH制劑或混合制劑引發(fā)與FSH相關生物反應的 能力，例如Steelman-Pohley測定法中的精囊增重法(Steelman等，1953年)或女性患者的 卵泡發(fā)育。女性患者的卵泡發(fā)育可以用超聲來評估，例如，根據(jù)在刺激第8天平均直徑達到 或約為16mm的卵泡數(shù)量。FSH的生物活性依據(jù)認可的FSH標準來評價。FSH變體的例子包括CTP-FSH，一種長效修飾的重組FSH，由野生型α -亞基和雜交 β -亞基組成，其hCG的羧基末端肽已融合在FSH β -亞基的C-末端，如LaPolt等(1992 年)或Klein等(2003年)所述。還包括單鏈CTP-FSH，它是一個由以下序列(從N-末端 到C-末端)組成的單鏈分子 其中β FSH表示FSH的β -亞基，β hCG-CTP (113-145)表示hCG的羧基末端肽， α FSH表示FSH的α -亞基，如Klein等(2002年)所述。FSH變體的其他例子包括具有摻入α -和/或β -亞基的額外糖基化位點的FSH 分子，如WO 01/58493 (Maxygen)中所公開的，尤其是WO 01/58493中的權利要求10和11 所公開的；以及具有亞基間S-S鍵的FSH分子，如W098/58957所公開的。FSH或FSH變體可用任何合適的方法產(chǎn)生，例如重組法，若可能的話從天然來源中 分離或純化，或化學合成，或它們的任一組合。
本發(fā)明所使用的FSH或FSH變體不僅可以用包括從哺乳動物細胞重組的方法制 備，還可以從其他生物來源純化得到，例如來自尿液來源。可接受的方法包括以下文獻中所 述，Hakola 等(1997 年)，Keene 等(1989 年)，Cerpa-Poljak 等(1993 年)，Dias 等(1994 年)；Flack等(1994年)，Valove 等(1994年)，美國專利 3，119，740 和美國專利 5，767，067。 術語“給與”或“給藥”指的是將本發(fā)明的制劑引入到需要用其治療某一疾病或身 體狀況的患者的體內(nèi)。術語“患者”指的是接受對某一疾病或身體狀況治療的一種哺乳動物。患者來自 于，但不僅限于以下起源人類、羊、豬、馬、牛、兔等。術語“水稀釋液”是指含水的液體溶劑。水溶劑系統(tǒng)可以僅僅由水組成，也可以由 水和另一種或多種易混溶的溶劑組成，還可以包含溶解質如糖、緩沖劑、鹽或其它賦形劑。 應用更普遍的非水溶劑是指短鏈有機醇(例如甲醇、乙醇、丙醇)，短鏈酮類(例如丙酮)， 和多元醇(例如甘油)?！暗葷B劑”是指一種在生理學上能耐受的化合物，它賦予制劑適當?shù)膹埩?，以防?跨細胞膜的水凈流，所述細胞膜與制劑接觸。化合物如甘油，在已知濃度下被普遍用于上述目的。其他合適的等滲劑包括(但 不限于)氨基酸或蛋白質(如甘氨酸或白蛋白)，鹽(如氯化鈉)，和糖(如葡萄糖，蔗糖和 乳糖)。術語“抑菌”或“抑菌劑”是指添加到制劑中作為一個抗菌劑的化合物或組合物。 含有本發(fā)明所述制劑的可保存的LH或LH變體能很好地符合防腐劑效能的法定或監(jiān)管指導 方針，使其成為商業(yè)上可行的多用產(chǎn)品，尤其在人用方面。抑菌劑的例子包括苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苯甲醇、羥苯甲酸烷基 酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫醋酸鈉和硫柳汞。術語“緩沖液”或“生理學上可接受的緩沖液”是指制劑中已知對藥用或獸藥用安 全的化合物的溶液，它們具有使制劑的PH值維持或控制在該制劑所需的pH范圍內(nèi)的作用。 控制PH值在適度酸性pH至適度堿性pH范圍的可接受的緩沖液包括(但不限于)諸如磷 酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、精氨酸、TRIS和組氨酸之類化合物。“TRIS”是指2-氨基-2-羥甲 基-1，3-丙二醇，及其任何藥理上可接受的鹽。較佳的緩沖液為含鹽水或一種可接受的鹽 的磷酸鹽緩沖液。術語“磷酸鹽緩沖液”是指調(diào)節(jié)到所需pH值的含磷酸或其鹽的溶液。一般來說， 磷酸鹽緩沖液由磷酸或磷酸鹽(包括但不僅限于鈉鹽和鉀鹽)制得。本技術領域的專業(yè)人 員所熟知的有幾種磷酸鹽，例如酸的一元、二元和三元鈉鹽和鉀鹽。磷酸鹽也被認為可以作 為鹽的水合物形式出現(xiàn)。磷酸鹽緩沖液可以覆蓋一個PH值的范圍，例如從pH 4左右至pH 10左右，優(yōu)選的范圍是從PH 5左右至pH 9左右，更優(yōu)選的范圍是在7. 5左右至8. 5左右， 最優(yōu)選的是在PH 8. O左右。術語“小瓶”或“容器”泛指適合將LH和稀釋劑在無菌狀態(tài)下保存的貯液器。此 處所使用的小瓶的例子包括安瓿瓶、儲藥器、泡罩包裝，或適合將LH通過注射器、泵(包括 滲透泵)、導管、透皮貼劑、肺或透粘膜噴霧遞送給病人的其他貯液器。適合包裝非腸道、肺、 透粘膜或透皮給藥產(chǎn)品的小瓶是本技術領域的專業(yè)人員所熟知的。術語“穩(wěn)定性”是指本發(fā)明制劑中LH的物理、化學和構象穩(wěn)定性(包括維持生物活性)。蛋白制劑的不穩(wěn)定性可能是由于蛋白質分子的化學降解或聚集，形成更高層次的聚 集物，通過將雜二聚體解離為單體、去糖基化、糖基化修飾、氧化(特別是α-亞基)或任何 其他結構修飾，它們使本發(fā)明中所包含的LH多肽降低至少一種生物活性?！胺€(wěn)定的”溶液或制劑，其蛋白質的降解、修飾、聚集、生物活性降低等的程度被控 制在可接受的范圍，不隨時間增加到難以接受的程度。該制劑最好能在6個月的時間里，在 約1-10°C的溫度范圍內(nèi)，更優(yōu)選的是在約2-8°C，更優(yōu)選的是在約4-5° C溫度范圍內(nèi)，保持 至少或大約80%標簽所示的LH活性。LH活性可以用精囊增重測試法進行測定。術語“治療”是指為了達到卵泡或睪丸刺激或任何其他由LH調(diào)節(jié)的生理反應的目 的，而對需要給予LH的患者進行給藥、隨訪、管理和/或照顧。因此，治療可以包括(但不 限于)給予LH用以誘導或提高精子質量，刺激男性睪酮釋放，或刺激女性卵泡發(fā)育或誘導 女性排卵?！岸鄤┝渴褂茫?，這一表述旨在包括用單個安瓿、小瓶或儲藥器容納超過一次注射劑 量的LH制劑的情況，例如2、3、4、5、6次或更多次的注射劑量。注射劑較佳為在至少或大約 12小時、24小時、48小時等的時間內(nèi)配制，最好為少于等于或約28天的時間。注射劑可以按時間段分隔，例如，按6、12、24、48或72小時的時間。蛋白質的“鹽”是指酸加成鹽或堿加成鹽。這種鹽最好是由蛋白質中的一個或多個 帶電荷基團與一個或多個生理上可接受的無毒陽離子或陰離子之間形成的。有機鹽和無機 鹽包括，例如，由酸制備的鹽，如鹽酸、硫酸、磺酸、酒石酸、富馬酸、氫溴酸、乙醇酸、檸檬酸、 馬來酸、磷酸、琥珀酸、醋酸、硝酸、苯甲酸、抗壞血酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、丙酸、碳 酸等的鹽，或例如，銨、鈉、鉀、鈣或鎂鹽。研究發(fā)現(xiàn)，選自精氨酸、賴氨酸、或其混合物或鹽的氨基酸是制備LH穩(wěn)定液體制 劑的一個合適穩(wěn)定劑。因此，本發(fā)明第一個方面涉及含有促黃體生成素(LH)或其變體的液 體促性腺激素制劑，其特征在于，所述的制劑包括穩(wěn)定量的精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或 其鹽。該液體制劑中包含的精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽的穩(wěn)定劑量是在或大約 在10至150mg/ml總配方的濃度范圍，更優(yōu)選的是在或大約在20至60mg/ml。優(yōu)選的精氨酸或其鹽的濃度是在或大約在10mg/ml至50mg/ml，更優(yōu)選的是在或 大約在20mg/ml至40mg/ml，尤其優(yōu)選的是在或大約在25mg/ml至35mg/ml，最優(yōu)選的是在 或大約在31. 5mg/ml。優(yōu)選的賴氨酸或其鹽的濃度是在或大約在10mg/ml至50mg/ml，更優(yōu)選的是在或 大約在20mg/ml至40mg/ml，尤其優(yōu)選的是在或大約在25mg/ml至35mg/ml，最優(yōu)選的是在 或大約在28. 5mg/ml。該液體制劑中的促黃體生成素(LH)優(yōu)選的存在濃度是達到或大約在1至50 μ g/ ml總配方的范圍。在一個實施方案中，促黃體生成素(LH)的存在濃度達到或大約在1至15μ g/ml 總配方的范圍，尤其是當一次性使用時。在另一個實施方案中，促黃體生成素(LH)的存在濃度達到或大約在15至30μ g/ ml總配方的范圍，尤其是當多次使用時(多劑量)。制劑中LH的濃度優(yōu)選是達到或約為20IU/ml至2，000IU/ml，更優(yōu)選的是達到或大約為50至1，000IU/ml，尤其優(yōu)選的是達到或大約為100至600IU/ml。LH優(yōu)選用重組方法產(chǎn)生，尤其優(yōu)選在用包含編碼人糖蛋白α-亞基和LH β-亞基 的DNA表達載體或載體轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中產(chǎn)生。編碼α-和β-亞基的 DNA可存在于相同或不同的載體上。重組LH與從尿中獲得的LH相比有幾大優(yōu)點。重組細胞培養(yǎng)與分離技術實現(xiàn)了批 次之間的一致性。相比之下，從尿中獲得LH批次之間在以下特征方面的差異很大，如純度、 糖基化模式、唾液酸糖苷化及亞基氧化。由于批次之間的高度一致性和重組LH的高純度， 這些激素可以很容易地使用諸如等電聚焦電泳(IEF)技術被識別和定量。重組LH的輕松 識別和定量使得藥瓶的填充可以依據(jù)激素的質量(按質量填充)，而不需要依賴生物活性 的測定。本發(fā)明的液體制劑中最好含有緩沖液，優(yōu)選是磷酸鹽緩沖液，首選的反離子是鈉 或鉀離子。磷酸鹽生理鹽水緩沖液是本研究領域的專業(yè)人員所熟知的，例如Dulbecco’ s磷 酸鹽緩沖生理鹽水。全部溶液中緩沖液的濃度可以在或大約在lmM、5mM、9. 5mM、10mM、50mM、 100mM、150mM、200mM、250mM和500mM之間變化。優(yōu)選的緩沖液濃度為或大約為10mM。尤其 優(yōu)選的是IOmM磷酸鹽離子pH值8. 0左右的緩沖液。緩沖液最好以這樣一種方式調(diào)整，使本發(fā)明的液體制劑的PH值在約7. 0至9. 0左 右，更優(yōu)選的是在約7. 5至8. 5左右，其中包括約pH 7. 8、pH 8. 0和8.2。本發(fā)明是針對LH或LH變體的液體制劑，可以是單劑量或多劑量制劑。本發(fā)明的擬多劑量使用的液體LH制劑包含一種抑菌劑，如苯酚、間甲酚、對甲酚、 鄰甲酚、氯甲酚、苯甲醇、羥苯甲酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、芐索氯 銨、脫氫醋酸鈉和硫柳汞。優(yōu)選的是苯甲醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨的組合。抑菌劑的使 用量以在多劑量注射期間(可能是在約12或24小時至約12或14天，較佳為在約6至約 28天內(nèi))產(chǎn)生有效維持制劑基本無菌(適合注射)的濃度為準。抑菌劑的存在濃度優(yōu)選是在或大約在0. 005至15mg/ml，更優(yōu)選是在或大約在 0. 01 至 12mg/ml。抑菌劑的存在濃度優(yōu)選是在或大約在0. 1% (抑菌劑質量/溶劑質量)至2.0%， 更優(yōu)選是在或大約在0.2%至1.0%。在使用苯甲醇的情況下，特別優(yōu)選的濃度是0.9%或1.2%。在使用苯酚的情況 下，特別優(yōu)選的濃度在或約0. 5%。對于苯甲醇和苯扎氯銨組合的情況，特別優(yōu)選的濃度分 別是 0. 3%和 0. 001%。本發(fā)明的制劑最好含有一種抗氧化劑，如甲硫氨酸、亞硫酸氫鈉、乙二胺四乙酸 (EDTA)鹽、二丁基羥基甲苯(BHT)、丁基羥基苯甲醚(BHA)。最優(yōu)選的是甲硫氨酸?？寡趸?劑可以防止LH(特別是α-亞基)的氧化?？寡趸瘎缂琢虬彼岬拇嬖跐舛茸詈迷诨虼蠹s在0. 01至5. 0mg/ml，更優(yōu)選的 是在或大約在0. 05至0. 5mg/ml。本發(fā)明的制劑最好含有一種表面活性劑。該表面活性劑優(yōu)選自聚山梨醇酯， 特別 是吐溫20(聚氧乙烯(20)山梨醇單月桂酸酯)、吐溫40(聚氧乙烯(20)山梨醇單棕櫚酸 酯)和吐溫80 (聚氧乙烯(20)山梨醇單油酸酯)。最優(yōu)選的是吐溫20，優(yōu)選濃度是在或大 約在0. 01至10mg/ml的范圍內(nèi)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的制劑包括至少25 μ g/ml r_hLH、1. 65mg/ ml Na2HPO4 2Η20、0· 104mg/ml NaH2PO4 Η20、31· 5mg/ml 精氨酸鹽酸鹽、0. 05mg/ml 吐溫 20、 0. 5mg/ml甲硫氨酸和5mg/ml苯酚。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的制劑包括至少25μβ/πι1 r_hLH、1.65mg/ ml Na2HPO4 2Η20、0· 104mg/ml NaH2PO4 Η20、28· 5mg/ml 賴氨酸鹽酸鹽、0· 05mg/ml 吐溫 20、 0. 5mg/ml甲硫氨酸和12mg/ml苯甲醇。 在另一個優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的制劑包括至少25μβ/πι1 r_hLH、1.65mg/ ml Na2HPO4 2Η20、0· 104mg/ml NaH2PO4 Η20、28· 5mg/ml 賴氨酸鹽酸鹽、0· 05mg/ml 吐溫 20、 0. 5mg/ml甲硫氨酸、3mg/ml苯甲醇和0. 01mg/ml苯扎氯胺。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一種供多劑量使用的液體組合物，其中 包含LH或LH變體，選自精氨酸、賴氨酸或其混合物或鹽的穩(wěn)定劑，及選自苯甲醇、苯酚和苯 甲醇與苯扎氯銨的混合物的抑菌劑。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一種制備供多劑量使用的液體藥物組 合物的方法，包括將LH或LH變體，選自精氨酸、賴氨酸或其混合物或鹽的穩(wěn)定劑，選自苯甲 醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑，以及WFI (注射用水)，制成水溶液。在另外一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一個生產(chǎn)包裝藥物組合物的方法， 包括配制含LH或LH變體，選自精氨酸、賴氨酸或其混合物或鹽的穩(wěn)定劑，及選自苯甲醇、苯 酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑的溶液。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了 一個人用藥物產(chǎn)品，包含一個藥瓶，其中 含有由LH或LH變體，選自精氨酸、賴氨酸、或其混合物或鹽的穩(wěn)定劑，及選自苯甲醇、苯酚 和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑組成的溶液，以及一個標明這種溶液在第一次使用后 可以維持大約24小時或以上時間的標簽。更好的是標簽上標明這個溶液在第一次使用后 可以維持至大約12或14天。第一次使用之前，也就是在小瓶、安瓿或儲藥器的密封損壞之前，本發(fā)明的制劑可 以保持至少在大約6個月，12個月或24個月。在優(yōu)選的儲存條件下，在第一次使用之前，將這些制劑保存在遠離亮光的地方 (最好保存在黑暗處)，儲存溫度在約2_8°C，最好在約4_5°C。如上所述，本發(fā)明提供了供單劑量和多劑量使用的、含抑菌劑的LH或LH變體的液 體制劑。本發(fā)明的制劑適合于制藥學或獸醫(yī)學用途。如上所述，在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了一個產(chǎn)品，包括包裝材料和藥 瓶，瓶內(nèi)包含由LH或LH變體，選自精氨酸、賴氨酸、或其混合物或鹽的穩(wěn)定劑，選自苯甲醇、 苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑組成的溶液，可任選地包含水稀釋的緩沖液和/ 或其他輔料，其中所述的包裝材料包含一個標簽，標明這種溶液在第一次使用后可以維持 24小時或以上的時間。本發(fā)明的制劑在超過24個月的包裝時間里(第一次使用之前)最好保持至少或 大約80%的LH活性。LH活性可以用大鼠精囊增重測試法5測定。本發(fā)明的制劑可由以下方法制備，該方法包括將LH或其變體，穩(wěn)定量的精氨酸或 其鹽和/或賴氨酸或其鹽，以及可任選地選自苯甲醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的 抑菌劑以固體形式混合，或將LH或其變體，穩(wěn)定量的精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽，以及可任選地選自苯甲醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑溶解在水稀釋劑中。組 分的混合和在水稀釋劑中的溶解按照常規(guī)的溶解和混合程序進行。為了制備一個合適的制 齊U，例如，將標準量的LH或LH變體的緩沖液溶液，與精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽和 可任選地選自苯甲醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯銨混合物的抑菌劑的緩沖液溶液混合，用量 足以提供所需濃度的蛋白質、精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽和可任選的抑菌劑。然后 將所得溶液分配入藥瓶、安瓿或儲藥器。該制備工藝的改變是本研究領域具備普通技能的 人員可以認識到的。
例如，組分的添加順序、是否使用其他添加劑、制劑制備時的溫度和pH，都是可以 根據(jù)給藥濃度和給藥方式來進行優(yōu)化的因素。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明制劑的制造通過制備所有制劑組分各自的已知 濃度儲備液(例如磷酸鈉緩沖液、精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽、吐溫20、甲硫氨酸、 LH)并按體積等分試液形成同一組合物的“母液”作為最終制劑。這個“母液”最好是通過 一個Duropore (Millipore)O. 22微米PDF濾膜過濾，以去除微生物，然后將等分試液分配 入各容器，如藥瓶、安瓿或儲藥器中。本發(fā)明的制劑可與包含F(xiàn)SH或FSH變體(如Gonal-F )的制劑聯(lián)合使用。本發(fā)明的制劑可用經(jīng)驗證的設備給藥。包含單瓶系統(tǒng)的例子，包括筆式注射設 備，用來遞送溶液劑如Easyject 、Gonal-F Pen、Humaject 、NovoPen 、B-D Pen、 AutoPen 禾口OptiPen 。本發(fā)明要求保護的產(chǎn)品包括包裝材料。除了監(jiān)管機構所要求的資料外，包裝材料 還提供該產(chǎn)品可使用的條件。對于單瓶溶液產(chǎn)品，標簽應標明該溶液在第一次使用后可以 儲存24小時或以上的時間，最好是可以儲存至12或14天。本發(fā)明要求保護的產(chǎn)品可用于 人類醫(yī)藥產(chǎn)品的使用。下面的實施例僅對本發(fā)明的制劑和組合物的制備提供進一步的說明。本發(fā)明的范 圍不應解釋為僅限于由以下實施例構成。
實施例材料 下面的研究評估了大量制劑的以下參數(shù)·穩(wěn)定劑和/或抑菌劑的研究 與FSH制劑的相容性 與基本包裝的相容性 貯存后的穩(wěn)定性特征制劑是液體單劑量和多劑量制劑。對下列六種穩(wěn)定劑進行了評價· L-精氨酸鹽酸鹽(實施例中的ARG或精氨酸)· L-賴氨酸鹽酸鹽(實施例中的LYS或賴氨酸) 海藻糖(TRE)· L-甘氨酸(實施例中的GLY或甘氨酸)·蔗糖(SAC)
·山梨醇(SOR)對以下四種抑菌劑進行了多劑量制劑的評價 苯甲醇(BA) 間甲酚(mCr)·苯酚(Phe)·苯甲醇和苯扎氯銨的組合(BACL)實施例1-單劑量制劑的穩(wěn)定劑研究對六種穩(wěn)定劑(蔗糖、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸、山梨醇和海藻糖)進行測試，以提 供穩(wěn)定的單劑量制劑。接受測試的制劑總結于表1。表1.含有不同穩(wěn)定劑的若干r-hLH單劑量制劑的組成 q. s.=足量每種溶液大約制備40ml，通過0. 22 μ m濾膜過濾到22ml的不銹鋼容器中，并在 2-8°C，+25°C和+40°C條件下，儲存于15ml塑料管中。連續(xù)1個月測試該溶液的蛋白質含量 (SE-HPLC法)、氧化形式(RP-HPLC法)、聚集物(SE-HPLC法)和亞基形成(定性，SE-HPLC 法)。用于本制劑的整套測試的結果在表2至5中報告。表2. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+40 V ) 丁=時間；(1=天表3. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+25°C ) M=月表4. RP-HPLC法測得的氧化形式％ n. a.=未測定表5. SE-HPLC法測得的r_hLH含量 基于這些結果，蔗糖、賴氨酸和精氨酸被選定為最佳輔料，以進一步研究其與遞增 劑量(250yg/ml* 500yg/ml)的抗氧化劑甲硫氨酸的相容性。該測試溶液的組成見表6。 應當注意的是，這些溶液是從頭配制的。表6.包含選定的穩(wěn)定劑和不同量甲硫氨酸的r-hLH單劑量制劑的組成 每種溶液配制大約100ml，通過0. 22 μ m濾膜過濾到22ml的不銹鋼容器中，并充填 入Iml玻璃注射器，以測定藥品與最終容器(Iml玻璃注射器+柱塞)的相容性。注射器在 2-81，+251，+331和+401條件下儲存。+33°C儲存溫度的引入是為了在太快(+40°C )與 太慢(+25°C)的降解動力學性質中進行一個折衷。連續(xù)2-3個月測試該溶液的r-hLH含量 (SE-HPLC法)，氧化形式(RP-HPLC法)，聚集物(SE-HPLC法)和亞基形成(定性，SE-HPLC 法)。用于表6所述制劑的整套測試的結果在表7至11中報告。表7. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+40°C ) w=周表8. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+33°C ) 表9. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+25°C ) 表10. RP-HPLC法測得的氧化形式0Z0 表11· SE-HPLC法測得的r_hLH含量 根據(jù)這些結果，蔗糖與250μ g/ml甲硫氨酸，賴氨酸與500 μ g/ml甲硫氨酸，精氨 酸與兩種濃度的甲硫氨酸都具有較高的相容性。實施例2-r-hLH單劑量液體制劑與FSH多劑量液體制劑的相容性鑒于實施例1所披露的結果，表6所描述的制劑與FSH制劑(例如Gonal-f多劑 量液體制劑)混合，并在25°C接觸24小時后，根據(jù)以下方法進行測定-RP-HPLC法測定r_hFSH和r_hLH的α -亞基氧化形式(表12中報道了在％純度 的非氧化形式)-SE-HPLC法測定聚集物定量-RP-HPLC 法測定 r-hFSH 和 r_hLH 滴度-r-hFSH和r_hLH體內(nèi)生物測定-SDS-PAGE法測定r_hFSH和r_hLH的游離亞基和聚集物定量(數(shù)據(jù)未報道)-視覺外觀這些結果報道于表12至14.表12. RP-HPLC法測得的純度和SE-HPLC法測得的％聚集物 h=小時 *FSH 理論含量200IU = 15，48 μ g/ml ;#LH 理論含量100IU = 4 μ g/ml表14.生物測定 所有測定的單劑量制劑與Gonal-F 多劑量制劑互相兼容，因為-沒有FSH和LH含量損失-不被氧化-沒有聚集和游離亞基解離(SDS-PAGE法)-沒有FSH和LH生物活性損失實施例3-單劑量液體制劑的穩(wěn)定性研究基于上述實施例的結果，表6所描述的制劑，除含精氨酸的制劑以外，是在兩種不 同的r-hLH濃度(6 μ g/ml和12 μ g/ml)下制備的，儲存于2_8°C和+25°C，根據(jù)嚴格的穩(wěn)定 性計劃測定，測試依據(jù)以下分析方法-RP-HPLC 法測定 LH 含量-RP-HPLC法測定α -亞基氧化形式-SDS-PAGE法測定游離亞基和聚集物-生物測試_溶液的ρΗ值-視覺外觀對所有借助于Stabileo 1. 1軟件被認定為穩(wěn)定性參數(shù)的結果進行統(tǒng)計分析。在2-8 °C 和 25 士 2 °C 貯存下的 r_hLH 濃度(RP-HPLC 法)本制劑在2_8°C貯存6個月后，沒有發(fā)現(xiàn)蛋白質含量有統(tǒng)計學意義上的顯著降低， 不論r-hLH的濃度如何(6 μ g/ml和12 μ g/ml)。在25±2°C貯存6個月后觀察到一般降低 0. 4 μ g/ 月。
在2-8 °C和25 士 2 °C貯存下的r_hLH牛物活件(牛物測試)本制劑在2_8°C和25士2°C貯存6個月后，沒有發(fā)現(xiàn)生物活性的顯著降低，不論 r-hLH 的濃度如何(6 μ g/ml 和 12 μ g/ml)。SDS-PAGE法測得的亞基和聚集物百分率
在2-8 °C和25°C貯存6個月后，SDS-PAGE法測得兩種濃度下聚集物的百分率仍保 持在2%以下。在2-8°C貯存6個月后，SDS-PAGE法測得兩種濃度下亞基的百分率仍保持 在2%以下。在25士2°C貯存6個月后一般降低大約5% /月。RP-HPLC法測得的氧化形式百分率在2-8°C貯存6個月后，測得大約0.4% /月的增加，在25°C 士2°C貯存，則增加的 范圍為0. 6-1.4% /月。pH倌和外觀在生產(chǎn)和貯存期間，沒有任何外觀(顏色、澄清度、可見顆粒)的改變，也沒有PH 值的變化。實施例4-多劑量制劑的穩(wěn)定劑和抑菌劑的相容性測試六種穩(wěn)定劑(蔗糖、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸、山梨醇和海藻糖)與抑菌劑的相 容性，以提供穩(wěn)定的多劑量制劑。接受測試的制劑總結于表15。表15.包含不同組合的穩(wěn)定劑和抑菌劑的多種r-hLH多劑量制劑的組成 每種溶液大約制備40ml，通過0. 22 μ m濾膜過濾，在2_8°C，+25°C和+40°C條件下 貯存于15ml塑料管中。連續(xù)1個月測試該溶液的蛋白質含量(體積排斥-HPLC法，SE-HPLC 法，數(shù)據(jù)未顯示)，氧化形式(反相-HPLC法，RP-HPLC法)，聚集物(SE-HPLC法)和亞基形 成(定性，SE-HPLC法)。用于本制劑的整套測試的結果報道于表16至18。由于抑菌劑和表面活性劑(吐溫20)不相容，所有含間甲酚(mCr)的溶液在生產(chǎn) 出來以后就立即變?yōu)槿榘咨１?6. SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+40°C ) 表17.SE-HPLC法測得的純度(貯存溫度+25°C ) 表18. RP-HPLC測得的氧化形式0Z0 基于上述結果，蔗糖、賴氨酸和精氨酸被選定為最佳穩(wěn)定劑，用以進一步研究其與 增量甲硫氨酸(500yg/ml)的相容性。苯甲醇、苯酚和苯甲醇與苯扎氯胺的組合物被選定 為抑菌劑。接受測試的制劑總結于表19。表19.包含選定穩(wěn)定劑和不同抑菌劑的多種r-hLH多劑量制劑的組成 每種溶液大約制備100ml，通過0. 22 μ m濾膜過濾，充填入3ml儲藥器中。使用下
述基本包裝-經(jīng)硅化處理的3ml玻璃儲藥器(NuovaOmpi)-卷曲瓶蓋代碼CAP J 3ML L1H075-1-H1B FM 257/2 (HelvoetPharma)
-涂藥柱塞HelvoetV9282FM257/2 Omniflex 涂層.儲藥器貯存在2-8°C，+25°C和+40°C，測試其在2個月內(nèi)的蛋白質含量(SE-HPLC 法)，氧化形式(RP-HPLC法)，聚集物(SE-HPLC法)和亞基形成(定性，SE-HPLC法)。用于第二組制劑的整套測試的結果報道在表20至26中。表20. SE-HPLC測得的純度(貯存溫度+40°C ) 表22. SE-HPLC測得的純度(貯存溫度+25°C ) 表23. RP-HPLC測得的氧化形式的百分比％ (貯存溫度+33°C ) 表24. RP-HPLC測得的氧化形式的百分比％(貯存溫度+25°C ) 表25. RP-HPLC測得的氧化形式百分比％ 上述結果證實了穩(wěn)定劑與增量甲硫氨酸之間的相容性(參見實施例1)。此外，該 結果還顯示抑菌劑與500μ g/ml甲硫氨酸是可以配伍的。實施例5-r-hLH多劑量液體制劑與FSH多劑量液體制劑的相容性
根據(jù)實施例4的結果，將貯存于3ml儲藥器中的r_hLH制劑與FSH制劑(即
Gonal-廣多劑量液體制劑)混合，在25°C接觸24小時后按照下述方法進行測定-SE-HPLC法測定純度-RP-HPLC 法測定 r-hFSH 和 r_hLH 滴度-RP-HPLC法測定r-hFSH和r_hLH的α -亞基氧化形式-r-hFSH和r_hLH體內(nèi)生物活性測試-SDS-PAGE法測定r_hFSH和r_hLH的游離亞基以及聚集物定量(數(shù)據(jù)未報道)-溶液的pH值-可視外觀結果列于表27至29。表27. SE-HPLC測得的純度 *FSH 理論含量:200iu = 30，96 μ g/ml ;#LH 理論含量100IU = 8 μ g/ml表29.生物測定 所有接受測試的多劑量制劑與Gonal-F 多劑量制劑都是可以配伍的，因為-未出現(xiàn)FSH和LH含量的損失-未被氧化-沒有沉淀(SE-HPLC法)-沒有聚集物和亞基的生成(SDS-PAGE法)
-未出現(xiàn)LH和FSH生物活性的損失實施例6-與基本包裝的相容性為了測試r-hLH制劑與最終容器(注射器和儲藥器)之間的相容性，設置矩陣試 驗來測試以下參數(shù)-r-hLH 濃度的影響6 μ g/ml, 12 μ g/ml，24 μ g/ml,-充填體積的影響0.25ml,0. 5ml，1ml，-容器類型Iml玻璃注射器和3ml玻璃儲藥器，-抑菌劑的影響包含和不含抑菌劑的制劑，貯存在3ml儲藥器中。一種制劑(SAC/500/BACL)被制備成不同的r_hLH濃度，充填在不同灌裝量的容器 中。采用SE-HPLC法定性地比較33°C放置一周批次之間的變化。研究結果發(fā)布在圖1 (A-F) 中。圖2(A-B)比較了制劑中含有與不含抑菌劑組合時，SE-HPLC法測得的雜二聚體百分比。
根據(jù)圖1和2給出的結果，可以得出以下結論-在12μ g/ml與24 μ g/ml的濃度下容器對制劑沒有影響-在12μ g/ml與24 μ g/ml的濃度下灌裝量對制劑沒有影響-濃度增加對亞基解離有正向作用-有或沒有抑菌劑，批次之間無差異-較高的穩(wěn)定性與較高的r-hLH濃度相關。實施例7-多劑量液體制劑的穩(wěn)定性研究基于上述實施例的結果，表19中描述的四種制劑(SAC/500/BACL，LYS/500/BA, LYS/500/BACL和ARG/500/Phe)在2_8°C和+25°C的條件下貯存，按照嚴格的穩(wěn)定性計劃根 據(jù)以下分析方法進行測試-RP-HPLC法測定LH的含量-RP-HPLC法測定α -亞基氧化形式-RP-HPLC法測定苯酚的含量-RP-HPLC法測定苯扎氯胺的含量-RP-HPLC法測定苯甲醇的含量-SDS-PAGE法測定游離亞基和聚集物-生物活性測試_溶液的ρΗ值-可視外觀對上述制劑中賴氨酸和精氨酸的量進行調(diào)整(即L-賴氨酸鹽酸鹽為28. 5mg和 L-精氨酸鹽酸鹽為31. 5mg)，以優(yōu)化制劑的等滲性。對所有借助于Stabileo 1. 1軟件被認定為穩(wěn)定性參數(shù)的結果進行統(tǒng)計分析。在2-8 °C和25 士 2 °C下貯存的r_hLH濃度(RP-HPLC法測定)本制劑在2_8°C貯存12個月后，沒有發(fā)現(xiàn)蛋白質含量有統(tǒng)計意義上的顯著降低。 在25士2°C貯存6個月后一般降低0. 4 μ g/月。在2-8 °C和25 士 2 °C下貯存的r_hLH生物活性(生物活性測試)本制劑在2_8°C和25士2°C貯存12個月后，沒有發(fā)現(xiàn)生物活性的顯著降低。SDS-PAGE法測得的亞基和聚集物百分率％所有制劑在2_8°C和25°C貯存12個月后，SDS-PAGE法測得的聚集物百分率仍保 持在2%以下。所有制劑在25°C貯存6個月后，SDS-PAGE法測得的亞基百分率增加到32%以上。RP-HPLC法測得的氧化形式百分率％SAC/500/BACL和ARG/500/Phe呈現(xiàn)出氧化形式的較低增長。ρΗ倌和外觀在生產(chǎn)和貯存期間，未觀察到任何外觀(顏色、澄清度、可見顆粒)的改變，也未觀 察到PH值的變化。抑菌劑的含量苯酚和苯甲醇的含量檢測達到目標，在6個月至12個月的穩(wěn)定性檢驗點沒有檢測到含量降低。制劑SAC/500/BACL在6個月的穩(wěn)定性檢驗點被檢出苯扎氯胺的含量低于標準(測得的是6 μ g/ml，而不是10 μ g/ml)。抑菌劑的效果制劑在T = 0的時間點和9個月后的重復試驗中，抑菌效果測試的結果發(fā)布于表 30 至 33。表30.多劑量制劑SAC/500/BACL的抑菌效果測試結果 表31.多劑量制劑LYS/500/BACL的抑菌效果測試結果 表32.多劑量制劑LYS/500/BA的抑菌效果測試結果 表33.多劑量制劑ARG/500/Phe的抑菌效果測試結果 包含0. 3 %苯甲醇+0. 001 %苯扎氯胺和蔗糖或賴氨酸(SAC/500/BACL和LYS/500/ BACL)的組合的制劑符合《歐洲藥典》的標準A，即使苯扎氯胺的量低于目標(6 u g/ml，而不 是 10 y g/ml)。包含0. 5%苯酚的制劑(ARG/500/Phe)和包含1. 2%苯甲醇的制劑(LYS/500/BA) 符合《歐洲藥典》的標準B。結論所有多劑量制劑在2_8°C貯存12個月后，都顯示出很好的穩(wěn)定性。
權利要求
含促黃體生成素(LH)或其變體的液體制劑，其特征在于，所述制劑中包含穩(wěn)定數(shù)量的精氨酸或其鹽和/或賴氨酸或其鹽。
2.如權利要求1所述的制劑，其中，促黃體生成素(LH)是人促黃體生成素(hLH)。
3.如權利要求1或2所述的制劑，其中，促黃體生成素(LH)是重組人促黃體生成素 (r-hLH)。
4.如權利要求1或2所述的制劑，其中，促黃體生成素(LH)是人尿促黃體生成素 (u-hLH)。
5.如上述任一權利要求所述的制劑，其中，促黃體生成素(LH)以1或約1μ g/ml至50 或約50 μ g/ml的濃度存在。
6.如權利要求1所述的制劑，其中，精氨酸或其鹽以10或約10mg/ml至50或約50mg/ ml的濃度存在。
7.如權利要求1所述的制劑，其中，賴氨酸或其鹽以10或約10mg/ml至50或約50mg/ ml的濃度存在。
8.如上述任一權利要求所述的制劑，還包含一種磷酸鹽緩沖液。
9.如權利要求8所述的制劑，其中，磷酸鹽緩沖液以1或約ImM至100或約IOOmM的濃度存在。
10.如權利要求8或9所述的制劑，其中，磷酸鹽緩沖液優(yōu)選磷酸鈉緩沖液。
11.如上述任一權利要求所述的制劑，還包含一種表面活性劑。
12.如權利要求11所述的制劑，其中，表面活性劑是吐溫20。
13.如權利要求12所述的制劑，其中，吐溫20以0.01或約0. 01mg/ml至10或約IOmg/ ml的濃度存在。
14.如上述任一權利要求所述的制劑，還包含甲硫氨酸。
15.如權利要求14所述的制劑，其中，甲硫氨酸以0.01或約在0. 01mg/ml至5. 0或約 5. Omg/ml的濃度存在。
16.如上述任一權利要求所述的制劑，還包含一種抑菌劑。
17.如權利要求16所述的制劑，其中，抑菌劑選自苯甲醇、苯酚以及苯甲醇與苯扎氯胺 的組合。
18.如權利要求16或17所述的制劑，其中，抑菌劑以0.005或約0. 005mg/ml至15或 約15mg/ml的濃度存在。
19.如上述任一權利要求所述的制劑，還包含注射用水。
20.如上述任一權利要求所述的制劑，其pH范圍為7.5或約7. 5至8. 5或約8. 5之間。
21.如上述任一權利要求所述的制劑，至少包含25g/mlr-hLH、1. 65mg/ml Na2HP042H20、0. 104mg/ml NaH2P04H20、31. 5mg/ml L-精氨酸鹽酸鹽、0. 05mg/ml 吐溫 20、 0. 5mg/ml甲硫氨酸和5mg/ml苯酚。
22.如權利要求1至20之一所述的制劑，至少包含25g/mlr-hLH, 1. 65mg/ml Na2HP042H20、0. 104mg/ml NaH2P04H20、28. 5mg/ml 賴氨酸鹽酸鹽、0. 05mg/ml 吐溫 20、0· 5mg/ ml甲硫氨酸和12mg/ml苯甲醇。
23.如權利要求1至20之一所述的制劑，至少包含25g/mlr-hLH, 1. 65mg/ml Na2HP042H20、0. 104mg/ml NaH2PO4H20,28. 5mg/ml 賴氨酸鹽酸鹽、0. 05mg/ml 吐溫 20、0· 5mg/ml甲硫氨酸、3mg/ml苯甲醇和0. 01mg/ml苯扎氯胺。
24.藥物組合物，包含權利要求1至23之一所述的制劑。
25.權利要求1至2之一所述制劑的成品形式，在消毒條件下密封在適合使用前貯存的 容器中。
26.權利要求1至23之一所述制劑的制備方法，包括用賦形劑溶液稀釋促黃體生成素 (LH) ο
27.權利要求1至23之一制劑在制備藥物上的用途。
28.權利要求1至23之一所述制劑在制備女性和/或男性不育癥治療藥物上的用途。
29.權利要求1至23之一所述制劑與含卵泡刺激素(FSH)或其變體的液體制劑聯(lián)合應 用的用途。
30.權利要求1至23之一所述制劑，所述制劑是治療女性和/或男性不育癥的制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及單劑量或多劑量給藥用的促黃體生成素(LH)的液體藥物制劑。
文檔編號A61P5/06GK101842083SQ200880114525
公開日2010年9月22日 申請日期2008年10月29日 優(yōu)先權日2007年11月1日
發(fā)明者A·德爾里奧, F·薩馬利塔尼, J·里查德, R·阿戈斯蒂內(nèi)托 申請人:默克雪蘭諾有限公司