專(zhuān)利名稱(chēng)：芳香酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有芳香酶抑制作用的藥劑。更具體而言，本發(fā)明涉及這樣的藥劑，其 通過(guò)抑制生物體內(nèi)將男性激素(雄激素)轉(zhuǎn)化為女性激素(雌激素)的酶芳香酶的活性， 進(jìn)而抑制男性激素的減少或者女性激素的增加，從而不僅在閉經(jīng)后女性的乳腺癌、還在男 性更年期障礙以及內(nèi)臟脂肪累積所致代謝綜合征等性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防 方面有效的。
背景技術(shù)：
近年來(lái)開(kāi)始獲知，在子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜癌、閉經(jīng)后乳腺癌等雌 激素依賴(lài)性疾病中，在病灶局部區(qū)域中雌激素合成亢進(jìn)(in situ estrogen)，而由此生成 的局部雌激素與病灶的生長(zhǎng)和進(jìn)展密切相關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、2)。一直以來(lái)，在閉經(jīng)后女性的乳腺癌等雌激素依賴(lài)性疾病的治療中，均采用通過(guò)與 雌激素受體結(jié)合從而展現(xiàn)出抗雌激素作用的藥劑它莫西芬(tamoxifen)。但是，該藥劑存在 出現(xiàn)抗性的問(wèn)題，因此，現(xiàn)在，參與雌激素合成的控速酶芳香酶的抑制劑作為治療藥受人矚 目(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、2)。芳香酶是一種控速酶，其通過(guò)將男性激素即雄激素(雄烯二酮、睪酮)的類(lèi)固醇骨 格的A環(huán)芳香化，藉此將其轉(zhuǎn)化為女性激素即雌激素(雌酮、雌二醇)，從而參與到性激素生 物合成體系的最終步驟(圖1)。在閉經(jīng)前女性中，主要雌激素供給源是卵巢，而在閉經(jīng)后女性中，雌激素主要是通 過(guò)肌肉、脂肪等末梢組織的芳香酶將由腎上腺分泌的雄激素轉(zhuǎn)化而來(lái)。因此，特別是在閉經(jīng) 后乳腺癌的激素療法中，芳香酶作為其靶酶受人矚目。對(duì)于在前述閉經(jīng)后乳腺癌等的治療中所使用的芳香酶抑制劑，以主要以合成化合 物為中心的研究為多見(jiàn)，現(xiàn)市售或者臨床試驗(yàn)中的抑制劑根據(jù)其結(jié)構(gòu)可大致分為1型(類(lèi) 固醇系)和2型(非類(lèi)固醇系)(圖2)。但是，這些合成化合物在臨床中會(huì)有肝臟損傷、給 藥部位疼痛等副作用，并且可能會(huì)引發(fā)Stevens-Johnson綜合征，因此存在服用期間必須 要接受定期檢查的問(wèn)題(非專(zhuān)利文獻(xiàn)3)。因此，希望用安全的、沒(méi)有副作用的天然材料開(kāi)發(fā)出有望具有治療或預(yù)防效果的 醫(yī)藥品或健康食品。還希望在此材料的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)用于新藥開(kāi)發(fā)的新先導(dǎo)化合物。但是，幾乎還沒(méi)有探討來(lái)自具有多種多樣成分的天然材料例如生藥或植物的芳香 酶抑制劑的研究(非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)。另一方面，近年來(lái)，男性在步入中老年后出現(xiàn)了所謂“男性更年期障礙”的問(wèn)題?！案昶谡系K”以前認(rèn)為是女性特有的疾病，然而近年來(lái)認(rèn)識(shí)到男性也存在更年期 障礙。男性更年期障礙的癥狀有易疲勞、抑郁、精力減退等，其原因被認(rèn)為是年齡增加所引 起的男性激素減少(非專(zhuān)利文獻(xiàn)5)。在臨床中，針對(duì)因男性激素減少所引起的男性更年期，進(jìn)行睪酮等男性激素的補(bǔ) 充療法，但是這可能會(huì)引起肝損傷、前列腺癌、脫毛等副作用(非專(zhuān)利文獻(xiàn)6)。
因此，本發(fā)明人著眼于將前述男性激素轉(zhuǎn)化為女性激素的酶芳香酶，探討通過(guò)抑 制該酶是否可以防止男性激素的減少。已有報(bào)道稱(chēng)，在男性中，男性激素向女性激素的轉(zhuǎn)化率隨著年齡的增加而增加 (非專(zhuān)利文獻(xiàn)7)。此外，還有報(bào)道稱(chēng)，通過(guò)向性腺機(jī)能低下或者男性激素缺乏癥的男性給予 芳香酶抑制劑，血液中的睪酮值得到回復(fù)或升高(非專(zhuān)利文獻(xiàn)8、專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。再者，近年來(lái)，在男性步入對(duì)應(yīng)更年期年齡的中老年后，除了如上所述的易疲勞、 抑郁、精力減退等諸癥狀之外，還頻繁出現(xiàn)上半身型的脂肪蓄積模式，即內(nèi)臟脂肪累積，因 此與出現(xiàn)代謝綜合征的關(guān)系受到人們的矚目。也就說(shuō)，這表明代謝綜合征的原因之一與睪 酮等男性激素隨年齡增加而減少有關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)9)。
此外，已知在男性中，芳香酶在內(nèi)臟脂肪中的分布比在其它部位的分布更多，并且 該酶的活性會(huì)隨年齡的增長(zhǎng)而增加(非專(zhuān)利文獻(xiàn)10)。還已知內(nèi)臟脂肪累積的程度與血液 中的睪酮值表現(xiàn)出逆相關(guān)。由此認(rèn)為，內(nèi)臟脂肪中的芳香酶是作為在睪酮減少所致的內(nèi)臟 脂肪累積中的重要因子來(lái)起作用的(非專(zhuān)利文獻(xiàn)11)。另外，給高齡男性補(bǔ)充睪酮會(huì)減少體脂肪量、血液中的瘦蛋白(Ieptin)值、食物 攝取量，并使基礎(chǔ)代謝亢進(jìn)。還有報(bào)道稱(chēng)，在性腺機(jī)能低下癥的男性中，發(fā)現(xiàn)體脂肪量隨年 齡增長(zhǎng)而顯著增加，并通過(guò)給予睪酮來(lái)減少體脂肪量(非專(zhuān)利文獻(xiàn)12)。因此，本發(fā)明人以前述芳香酶為目標(biāo)，對(duì)不僅對(duì)閉經(jīng)后女性的乳腺癌、同時(shí)還對(duì)男 性更年期障礙和內(nèi)臟脂肪累積所致的代謝綜合征等性激素依賴(lài)性疾病展現(xiàn)出治療和/或 預(yù)防效果、并且沒(méi)有副作用的藥劑進(jìn)行了探尋，從而對(duì)具有芳香酶抑制活性的新材料進(jìn)行 了探索。非專(zhuān) 利文獻(xiàn) 1 :Chen S，Aromatase and breast cancer，F(xiàn)rontiersin Bioscience，3 ；d922_933，1998.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 2 :Simpson ER and Dowsett Μ.，Aromatase and itsinhibitors significance for breast cancer therapy, Recent Prog HormRes. ,57 ；317-38,2002.非專(zhuān)利文獻(xiàn)3 磯村八州男、岡田稔、了 口 7夕一七阻害薬O研究開(kāi)発動(dòng)向，” r ；u -T V r , 30 卷，754-758，1994.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 4 :Dietmar G，Gerhard S.，Aromatase inhibitorsfrom Urtica dioca Roots，Planta Med.，61 ；138-140,1995. KimDS, Jeong，HJ, et al.，Aromatase and sulfatase inhibitos from Lepiotaamericana, Planta Med. ,66 ；78-79,2000.Elizabeth TE, Dudley W, UshaM， et al. ， Suppression of aromatase(estrogen synthetase)by red winephytochemicals, Breast Cancer Research and Treatment，67 ; 133—146，2001. Filleur F，Le bail JC, et al.，Antiproliferative, anti—aromatase，anti-17 β -HSD and antioxidant activities of lignansisolated from Myritica argentea， Planta Med.，67 ；700-704，2001. Minami T，Iwamoto M，Ohtus H，et al.，Aromatase inhibitiory activitiesof standishinal and the diterpenoid from the bark of Thuj a standishii，Planta Med.，68 ；742—745，2002.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 5 ；Lamberts SWJ, et al.，The endocrinology ofaging，Science， 278 ；419-424,1997.伊藤直樹(shù)、塚本泰司、男性更年期^概念、醫(yī)學(xué)^ h ^辦、205卷； 380-383,2003.巖本晃明等、日本人成人男性 総f 7卜7 f 口 >、遊離f 7卜7 f 口 >乃基準(zhǔn)値設(shè)定，日泌尿會(huì)誌、95卷；751-760，2004.非專(zhuān)利文獻(xiàn)6 碓井亜、松原昭郎、男性* ^ ^ >補(bǔ)充療法、醫(yī)學(xué)O A吵 、205卷；407-410,2003.佐藤嘉一、丹田均、男性七 >補(bǔ)充療法^適応^問(wèn)題點(diǎn)、総合臨床、53 卷；451-457，2004.非專(zhuān)禾Ij 文獻(xiàn) 7 :Braunstein GD, Aromatase and gynecomastia, Endocrione-Related Cancer，6 ；315—324，1999.非專(zhuān) 利文獻(xiàn) 8 Leder BZ, et al.，Effects of aromatase inhibitior inelderly men with low or borderline-low serum testosterone levels, JClin Endocrinol Metab.，89 ；1174—1180，2004. de Boer H，et al.，Letrozole normalizes serum testosterone in severely abese men withhypogonadotropic hypogonadism, Diabetes ObesMetab，7 ;211—215，2005. Raman JD,et al. ,Aromatase inhibitors formaIe infertility, The Journal of Urology,167 ；624-629,2002.非專(zhuān)利文獻(xiàn)9 河源、松田公志、乂夕水丨J義夕〉> 卜、口一 A i亍只卜只亍口 > ^ J t/男性更年期障害、最新醫(yī)學(xué)、61 卷；227-233，2006. Lunenfeld B.，Testosterone deficiency and the metabolicsyndrome, The Aging Male,10 ；53-56,2007.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 10 :Seidell JiBjorntorp P, et al. ,Visceral fataccumulation is positively associated with insulin， glucose andC—peptide levels but negatively with testosterone levels, Metabolism，39 ；897—901，1990. Kyle UG, Genton L，et al.， Age-related differences infat-free mass， skeletal muscle， body cell mass and fat mass between 18and 94years，Eur J Clin Nutr. ,55 ；663-672,2001. Bjorntorp P， Adiposetissue distribution and function, International Journal ofObesity,15 ； 67—81，1991. Grooren L，Visceral obesity, the metabolie syndrome, androgens and estrogens，The Aging Male,9 ；75-79,2006. Grooren L，Toorians AW, Significance of estrogens in male (patho)physiology, Ann Endocrinol. ,64 ；126-135,2003.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 11 ；Cohen PG, The hypogonadal-obesity cycle :roleof aromatase in modulating the testosterone—estradiolshunt—a majorfactor in the genesis of morbid obesity, Med Hypotheses, 52 ；49-51,1999. Cohen PG, Holbrook JM, Other pathways to themanifestations of the Metabolic Syndrome in males， Obesity Research,12 ；1536，2004.非專(zhuān)利文獻(xiàn) 12 :Rebuffe-Scrive M，Marin P，Bjorntorp P，Effectof testosterone on abdominal adipose tissue in men，Int JObes. , 15 ；791-795,1991. Allan CA, Strauss BJ, et al. ， Testosteronetherapy prevents gain in visceral adipose tissue and loss of skeletalmuscle in non-obese aging men， J Clin Endocrinol Metab. ,20070ctl6,[Epub ahead of print]. Schroeder ET,Zheng L,et al., Effects ofandrogen therapy on adipose tissue and metabolism in older men，JClin Endocrinol Metab. ,89 ；4863-4872,2004. Syder PJ，et al.，Effects oftestosterone replacement in hypogonadal men，J Clin EndocrinolMetab. ,65 ；2670-2677,2000.專(zhuān)利文獻(xiàn)1 特表平10-505848號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題在對(duì)閉經(jīng)后女性的乳腺癌的治療中，一直以來(lái)都使用通過(guò)與乳腺癌細(xì)胞的雌激素 受體相結(jié)合從而表現(xiàn)出抗雌激素作用的藥劑它莫西芬，但是在這種情況下存在因出現(xiàn)耐性 而致使乳腺癌復(fù)發(fā)的問(wèn)題。另一方面，近年來(lái)，抑制由男性激素合成雌激素的芳香酶抑制劑 作為對(duì)上述乳腺癌等雌激素依賴(lài)性疾病有效的治療藥物而受人矚目。但是，在日本，臨床使 用上得到承認(rèn)的芳香酶抑制劑很有限，并且有各種副作用，因此其使用受到了限制。另一方面，最近，人們對(duì)因睪酮低下所致的男性更年期障礙格外關(guān)注。另外，因內(nèi) 臟脂肪累積所致的代謝綜合征在社會(huì)上也得到了極大的關(guān)注。還表明，在步入對(duì)應(yīng)男性更 年期的中老年的男性中，睪酮等男性激素低下與內(nèi)臟脂肪累積有關(guān)。但是，幾乎還沒(méi)有對(duì)上 述男性更年期障礙或因內(nèi)臟脂肪累積所致的代謝綜合征有效的治療或者預(yù)防方法。本發(fā)明的課題是以調(diào)節(jié)男性激素和女性激素生物合成的最終階段的酶芳香酶為 目標(biāo)，從而提供不僅對(duì)閉經(jīng)后女性的乳腺癌、而且對(duì)男性更年期障礙和因內(nèi)臟脂肪累積所 致的代謝綜合征等性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防有效且安全的藥劑。解決問(wèn)題的手段鑒于以上情況，本發(fā)明人為了解決上述問(wèn)題而進(jìn)行了深入探討研究。結(jié)果在37 種生藥即紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊(milk thistle)、茉莉花茶、橡木皮、甜茶、旱蓮草、 楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶(rooibos tea)、大黃、普洱茶、 綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、櫻皮、艾 葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余甘子(amla)的提取物中發(fā)現(xiàn)芳香酶抑制活性， 藉此完成了本發(fā)明。還發(fā)現(xiàn)淫羊藿的成分淫羊藿苷(icariin)和水飛薊的成分水飛薊賓 (silybin)、水飛薊素(silymarin)同樣具有芳香酶抑制活性。即，本發(fā)明為1. 一種芳香酶抑制劑，其特征在于含有選自紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊、茉莉花 茶、橡木皮、甜茶、旱蓮草、楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶、大黃、 普洱茶、綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、 櫻皮、艾葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余甘子或其提取物的1種或2種以上的草 藥提取物；2. 一種性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防劑，其特征在于含有1中記載的芳香 酶抑制劑。發(fā)明效果本發(fā)明的芳香酶抑制劑通過(guò)抑制調(diào)節(jié)男性激素和女性激素的生物合成的最終階 段的酶芳香酶，從而抑制男性激素的減少或女性激素的增加，進(jìn)而不僅可以對(duì)閉經(jīng)后女性 的乳腺癌、還可 以對(duì)男性更年期障礙和因內(nèi)臟脂肪累積所導(dǎo)致的代謝綜合征等性激素依賴(lài) 性疾病進(jìn)行有效的治療和/或預(yù)防。此外，本發(fā)明的芳香酶抑制劑為源于來(lái)自天然材料的 生藥的成分，因此沒(méi)有副作用，可以安全使用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人對(duì)來(lái)自各種天然材料中的抑制芳香酶活性的物質(zhì)進(jìn)行了探索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊、茉莉花茶、橡木皮、甜茶、旱蓮草、楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳 榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶、大黃、普洱茶、綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、 訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、櫻皮、艾葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余 甘子的提取物會(huì)抑制芳香酶活性。下面將對(duì)這些生藥進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。(1)紅景天(Kokeiten)是將景天科(Crassulaceae)的全瓣紅景天(Rhodiola sacra Fu)或其他同屬植物的地下部分干燥得到的物質(zhì)。(2)夏枯草(Kagoso)是將唇形科(Labiaceae)的夏枯草(Prunellavulgaris L. var. Iilacina Nak.)的果穗干燥得到的物質(zhì)。(3)甘茶(Sweet hydrangea leaf)是將虎耳草科(Saxifragaceae)的落葉矮樹(shù) 紫陽(yáng)花(Hydrangea macrophylla Ser. F. normal is)的變禾中甘茶(Hydrangea macrophylla var. thunbergii)的嫩葉熏蒸并揉搓、干燥得到的物質(zhì)。(4)水飛薊是將菊科(Asteraceae)的水飛薊(Silybu m marianum L.，別名 Carduus marianus L.)的瘦果干燥得到的物質(zhì)。(5)茉莉花茶是將綠茶與茉莉花(Jasminum Sambac(L)Ait.)的花瓣混合并干燥 得到的物質(zhì)。(6)橡木皮是將殼斗科(Fagaceae)的麻櫟(Querus acutissima)或其他近親植物 的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。(7)甜茶(Tencha)是將虎耳草科(Saxifragaceae)的臘蓮繡球(Hydrangea strigosa Rehd.)或傘形繡球(Hydrangea umbellate Rehd.)的嫩葉干燥得到的物質(zhì)。(8)旱蓮草(Karensou)是將菊科(Compositae)的醴腸(Ecliptaprostrata)的全 草干燥得到的物質(zhì)。(9)(Youbaihi) 1>|#*_禾4· (Myricaceae)白勺·_ (Myricarubra Sieb. et Zucc.)的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。(10)法國(guó)海岸松是將松科(Pinaceae)的海岸松(Pinus pinaster 或P. maritima) 的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。(11)檳榔(Binro)是將棕櫚科(Arecaceae)的植物檳榔(Arecacatechu L.)的種 子干燥得到的物質(zhì)。(12)蘆筍是將百合科(Liliaceae)的石刁柏(Asparagus offcinalis L.)的根莖 或根干燥得到的物質(zhì)。(13)漏蘆(Rouro)是將菊科(Compositae)的祈州漏蘆(Rhaponticum unifIorum DC.)藍(lán)刺頭(Echinops latifolius Tausch)的根干燥得到的物質(zhì)。(14) (Ryoukyou)(Zingiberaceae)白勺(Alpiniaofficinarum Hance)的根莖干燥得到的物質(zhì)。(15)南非有機(jī)茶是將豆科(Leguminosae)的紅灌木(Aspalathuslinearis)的針 葉樹(shù)狀的葉干燥得到的物質(zhì)。(16)大黃(Daiou)是將蓼科(Polygonaceae)的掌葉大黃(Rheumpalmatum L.)、 雞爪大黃(R. tanguticum Maxim, ex Rgl.)、藥用大黃(R. officinale Bailion)或朝鮮大黃 (R. coreanum Nakai)或其種間雜種的根莖干燥得到的物質(zhì)。(17)普洱茶是將通過(guò)加熱使氧化發(fā)酵停止的綠茶用曲霉(Aspergillus)發(fā)酵、干燥得到的物質(zhì)。(18)綠茶(Green tea)是將山茶科(Theaceae)的茶樹(shù)(Camelliasinensis Kunt) 的葉干燥得到的物質(zhì)。(19)黃芩是將唇形科(Labiatae)的黃芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)的 根干燥得到的物質(zhì)。(20)貫葉連翹是將金絲桃科(Hypericaceae)的貫葉連翹(Hypericum perforatum L.)的地上部分干燥得到的物質(zhì)。(21)甘草(glycyrrhiza)是將豆科(Leguminosae)的甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)或洋甘草(G.glabra L.)的根和匍匐莖干燥得到的物質(zhì)。(22)千里光(Senrikou)是將菊科(Compositae)的千里光(Senecioscandens Buch. -Ham.)的全草干燥得到的物質(zhì)。(23)冬青是將杜鵑花科(Ericaceae)的平鋪白珠(Gaultheriaprocumbens)的葉 干燥得到的物質(zhì)。(24)訶子(Kashi)是將使君子科(Combretaceae)的訶子(Terminalia chebula Retz.)的成熟果實(shí)干燥得到的物質(zhì)。(25)野梧桐(Yagotou)是將大戟科(Euphorbiaceae)的野梧桐(Mallotus japonicus)的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。(26)何首烏(Kashuu)是將蓼科(Polygonaceae)的何首烏(Polygonum multiflorum Thunberg)的塊莖干燥得到的物質(zhì)。(27)淫羊藿是將小檗科(Berberidaceae)的柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maximowicz)、淫羊藿(E. brevicornumMaximowicz)、巫山淫羊藿(Ε· wushanense Τ. S. Ying)、三枝九葉草(Ε· sagittatum Maximowicz)、朝鮮淫羊藿(Ε. koreanum Nakai)、大 花(E. gradiflorum Morr.)或常綠淫羊藿(E. sempervirens Nakai)的莖和葉干燥得到的 物質(zhì)。(28)瓜拉那是將無(wú)患子科(Sapindaceae)的瓜拉那(Paullinacupana H. B. K)的 種子干燥得到的物質(zhì)。(29)櫻皮(Ouhi)是將薔薇科(Rosaceae)的植物櫻花(Prunusjamasakura Sieb. ex Koidz.)或同屬近親植物的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。(30)艾葉(Gaiyou)是將菊科(Compositae)的魁蒿(Artemisiaprinc^ps Pamp.) 或山地蒿(A.montana Pamp.)的全草或葉干燥得到的物質(zhì)。(31) jft n (Jiou) M ^ 0 ^ (Scrophulariaceae)白勺 Rehmanniaglutinosa Liboschitz var. purpurea Makino 或 R. glutinosa Liboschitz 的根干燥得至丨J的物質(zhì)。(32)山茱萸(dogwood tree)是將山茱萸科(Cornaceae)的山茱萸(Cornus officinalis Siebold et Zuccarini)的附果的果肉干燥得到的物質(zhì)。(33)細(xì)辛(Saishin)是將馬兜鈴科(Aristolochiaceae)的華細(xì)辛(Asiasarum sieboldii Miq.)或遼細(xì)辛(A. heterotropoidesF. Schm. var. mandshuricum F. Maekawa)的 根和根莖干燥得到的物質(zhì)。(34)桂皮(Cinnamon)是將樟禾斗(Lauraceae)的桂樹(shù)(Cinnamomumcassia Blume) 的樹(shù)皮干燥得到的物質(zhì)。
(35)芍藥(Shakuyaku)是將芍藥科(Paeoniaceae)的芍藥(Paeonialactiflora Pall.)的根干燥得到的物質(zhì)。(36)松葉(Matsuba)是將松科(Pinaceae)赤松(Pinus densifIoraSieb. et Zucc.)或黑松(P. thunbergii Pari.)的葉干燥得到的物質(zhì)。(37)余甘子是將大戟科(Euphorbiaceae)的余甘子(Emblicaofficinalis Gaertn)的果實(shí)干燥得到的物質(zhì)。另外，所述生藥中的淫羊藿所含有的公知成分淫羊藿苷以及水飛薊所含有的 公知成分水飛薊賓、水飛薊素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示。水飛薊素是水飛薊賓、水飛薊亭 (silychristin)、水飛薊寧(silydiani)等的黃烷酮衍生物的混合物。[化1]
淫羊藿苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 (其中，Rham和Glc各代表鼠李糖和葡萄糖的殘基)[化 2]水飛薊賓的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 作為本發(fā)明所使用生藥的材料的各植物的使用部位優(yōu)選前述部位，但是除此之外 也可使用選自花、花穗、果皮、果實(shí)、莖、葉、枝、枝葉、干、樹(shù)皮、根莖、根皮、根、種子或全草等 的1種或2種以上的部位。此外，作為提取物，除了通過(guò)使用溶劑對(duì)所述各種生藥進(jìn)行直接 提取獲得的物質(zhì)，通過(guò)向?qū)嵤赫ヌ幚砗螳@得的壓榨液和/或向殘?jiān)屑尤肴軇┻M(jìn)行提取 獲得的物質(zhì)也包含在本發(fā)明的提取物的定義范圍內(nèi)。本發(fā)明中的生藥提取物可以通過(guò)公知方法制造，例如，可以使用水、甲醇、乙醇等 醇類(lèi)或其混合溶劑等提取溶劑，通過(guò)常溫提取或加熱提取來(lái)制備，也可根據(jù)需要進(jìn)行減壓 或者加壓提取。所得到的提取物可以直接使用，但是通常使用經(jīng)濃縮或者冷凍干燥從而被 干燥的物質(zhì)。
實(shí)施例下文通過(guò)給出提取例進(jìn)行說(shuō)明，但是本發(fā)明不限于此。實(shí)施例1〔生藥提取方法(1)〕向夏枯草(果穗)、甘茶(葉)、茉莉花茶(葉、花)、橡木皮(樹(shù)皮)、甜茶(葉)、 旱蓮草(全草)、楊梅皮(樹(shù)皮)、法國(guó)海岸松(樹(shù)皮)、檳榔(種子)、漏蘆(根)、良姜 (根莖)、南非有機(jī)茶(葉)、大黃(根)、普洱茶(葉)、綠茶(葉)、黃芩(根莖)、甘草 (根)、千里光(全草)、冬青(葉)、訶子(果實(shí))、野梧桐(皮)、何首烏(塊莖)、淫羊藿 (葉)、櫻皮(皮)、艾葉(全草)、地黃(根)、山茱萸(果肉)、細(xì)辛(根)、桂皮(皮)、芍 藥(根)、松葉(葉)的各干燥物IOOg中各加入300L純化水，并在80°C加熱回流1小時(shí) 進(jìn)行2次提取，并將濾過(guò)的提取液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行冷凍干燥。結(jié)果獲得了干燥固體成 分各 18. 5g、31. 0g、27. 3g、31. 2g、13. 8g、17. 6g、20. 4g、23. 6g、17. 8g、21. 5g、22. 0g、19. 8g、 35. 5g、14. 9g、12. 7g、32. lg、33. 7g、14. 3g、15. lg、21. 4g、24. 3g、35. 3g、15. 2g、21. lg、 12. 3g、33. 6g、30. 8g、29. 3g、25. lg、22. lg、15. 0g。實(shí)施例2〔生藥提取方法(2)〕 向IOOg蘆筍(根莖、根)干燥物中加入300L的30%乙醇/純化水，向IOOg瓜拉 那(種子)干燥物中加入300L的35%乙醇/純化水，向IOOg紅景天(地下部分)干燥物 中加入300L的50%乙醇/純化水，向各IOOg貫葉連翹(地上部分)干燥物和余甘子(果 實(shí))干燥物中各加入300L的60%乙醇/純化水，向IOOg水飛薊(果皮)干燥物中加入 300L的80%乙醇/純化水，并在80°C加熱回流1小時(shí)進(jìn)行2次提取，將濾過(guò)的提取液通過(guò) 常規(guī)方法冷凍干燥。結(jié)果獲得了干燥固體成分各16. 4g、17. 9g、30. 3g、27. 5g、26. 3g、3. 5g。實(shí)施例3〔被檢化合物〕關(guān)于淫羊藿中所含公知成分淫羊藿苷和水飛薊中所含公知成分水飛薊賓、水飛薊 素，使用市售的標(biāo)準(zhǔn)品。即，使用淫羊藿苷(LKT，Laboratories,Inc, USA，批次 No. 2591307)、水飛薊賓 (Extrasynthese,France,批次 No. 02112642)和水飛薊素(LKT，Laboratories, Inc，USA,批 次 No. 2397805)。實(shí)施例4〔芳香酶抑制活性的測(cè)定〕芳香酶抑制活性的測(cè)定通過(guò)已知論文(Sresser DM, Tuner SD, etal.，A High-throughput screen to identify inhibitors ofaromatase(CYP19), Analytical Biochemistry, 284 ；427-430, 2000.)中公開(kāi)的方法，使用 BD Biosciences 公司(美國(guó))制 造的試劑進(jìn)行。另外，作為比較例(陽(yáng)性對(duì)照)，使用白楊素(chrysin) (Extrasynthese, France，批次 No. 06042506)(圖 2)。S卩，使用96孔微量板，將預(yù)先準(zhǔn)備的144 μ L NADPH產(chǎn)生體系溶液 (NADPH-Cofactor Mix)和6 μ L被檢提取物溶液混合，然后在37°C孵育10分鐘，再加入酶 和底物的溶液(Enzyme Substrate Mix) 100 μ L并進(jìn)行混合，之后使其在37°C反應(yīng)30分鐘。 之后，加入75 μ L反應(yīng)停止液，所生成的底物代謝物HFC (7-羥基-4-三氟甲基香豆素)的 量用讀板器(SPECTRAFluor，TECAN)，通過(guò)在激發(fā)波長(zhǎng)409nm、熒光波長(zhǎng)538nm測(cè)定熒光強(qiáng)度 來(lái)獲得。此外，對(duì)于空白，在孵育10分鐘之后，加入75 μ L反應(yīng)停止液來(lái)替代酶和底物的溶 液。芳香酶抑制率通過(guò)式1來(lái)計(jì)算。
[數(shù)1]芳香酶抑制率(%) = (I-(A-B)/A} XlOOA =(沒(méi)有添加被檢試樣的酶反應(yīng)后的吸光度_其空白吸光度)B =(各濃度的被檢試樣的酶反應(yīng)后的吸光度_其各空白吸光度)此外，為了避免非特異性抑制作用(例如鞣質(zhì)所引起的蛋白凝固作用)，將試劑中 附帶的對(duì)照蛋白質(zhì)添加到NADPH產(chǎn)生體系溶液中。對(duì)于被檢試樣溶液，將其濃度進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)@得各濃度下的抑制率，并通過(guò)內(nèi)插 法，由此結(jié)果獲得50%抑制芳香酶活性的試料濃度IC50值。[試驗(yàn)結(jié)果]對(duì)約400種提取物的芳香酶抑制活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以下37種生藥提取 物具有濃度依賴(lài)的抑制活性，并且在最高濃度為100 μ g/mL時(shí)具有50%以上的抑制活性。 表1-4按照抑制作用的強(qiáng)弱順序給出所述生藥提取物的IC50值。S卩，被確認(rèn)具有抑制作用的物質(zhì)為紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊、茉莉花茶、橡木 皮、甜茶、旱蓮草、楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶、大黃、普洱茶、 綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、櫻皮、 艾葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余甘子的提取物共計(jì)37種類(lèi)，其各自的IC50 值為 6. 1 μ g/mL、7. 4 μ g/mL、7. 4 μ g/mL、7. 7 μ g/mL、7. 8 μ g/mL、8. 9 μ g/mL、9. 0 μ g/mL、 10. 1 μ g/mL、10. 3 μ g/mL、10. 7 μ g/mL、1L 3 μ g/mL、13. 2 μ g/mL、13. 4 μ g/mL、15. 2 μ g/mL、 16. 0 μ g/mL、17. 2 μ g/mL、17. 8 μ g/mL、17. 8 μ g/mL>20. 1 μ g/mL>21. 2 μ g/mL>22. 7 μ g/mL> 23. 5 μ g/mL、26. 9 μ g/mL、27. 7 μ g/mL、30. 1 μ g/mL、31. 9 μ g/mL、35. 0 μ g/mL、37. 6 μ g/mL、 37. 8 μ g/mL>40. 4 μ g/mL>44. 7 μ g/mL、52. 0 μ g/mL>58. 0 μ g/mL>59. 3 μ g/mL、72. 5 μ g/mL、 78. 9 μ g/mL、98. 4 μ g/mL (參照表 1-4)。所述37種生藥自古以來(lái)就在中國(guó)和中國(guó)以外的國(guó)家使用，但是人們至今卻完全 不知其具有芳香酶抑制作用，這是本發(fā)明首次獲得的新發(fā)現(xiàn)。另外，對(duì)于葛根、枳實(shí)、大棗、南天實(shí)、桔梗、厚樸、柴胡、陳皮、菟絲子、麥門(mén)冬、防 已、荊芥、茯苓、附子、冬蟲(chóng)夏草、澤瀉、山藥、馬錢(qián)子、香附子、辛夷、刺五加、紅參、竹節(jié)參、杜 仲、白術(shù)、蒼術(shù)、纈草、反鼻、生姜、遠(yuǎn)志、蛇麻、紅葡萄葉、羊荊(Agni)、西洋南瓜種子、西洋柳 (西洋Y t < )、洋甘菊、蕁麻、歐薄荷、橄欖葉、粟米種子、牛蒡、刺五加了人參)、 西洋蒲公英(西洋々朝鮮薊、大蒜、蜂花葉、蔥種子、石榴種子、西洋山楂、西洋柳、 旱芹種子、百里香、薰衣草、木槿、野玫瑰果、迷迭香、南瓜子、燕麥、小米草、苦瓜、芫花、玉米 須、徐長(zhǎng)卿、當(dāng)歸葉、白僵蠶、刺五加、白頭翁、王菜( π ^ ~，molokheiya)、地榆、浮萍、 藏木瓜、桑根、青皮、功勞葉、白薇、竹茹、括樓根、金絲草、柚子、野菊花、卷柏、秦皮、龍膽、南 沙參、麻子仁、防風(fēng)、獨(dú)活、槐角、蒲公英、縮砂、黃柏、延胡索、牛膝、土貝母、蕺菜、射干、升 麻、桑白皮、茜草、川棟子、山豆根、合歡皮、白芷、辣椒、大腹皮、黃芪、黃連、薏苡仁、山桅子、 柴胡、菊花、高麗參等，發(fā)現(xiàn)100 μ g/mL時(shí)的芳香酶抑制活性不足50%，或者100 μ g/mL時(shí)的 抑制活性雖然在50%以上，但是抑制活性沒(méi)有濃度依賴(lài)性。[表1]
37種植物提取物對(duì)芳香酶的抑制活性-1
注抑制率為3次實(shí)驗(yàn)求得的平均值。[表2]37種植物提取物對(duì)芳香酶的抑制活性_2 注抑制率為3次實(shí)驗(yàn)求得的平均值。[表3]37種植物提取物對(duì)芳香酶的抑制活性_3
注抑制率為3次實(shí)驗(yàn)求得的平均值。[表4]37種植物提取物對(duì)芳香酶的抑制活性_4 注抑制率為3次實(shí)驗(yàn)求得的平均值。此外，對(duì)淫羊藿所含公知成分淫羊藿苷和水飛薊所含公知成分水飛薊賓、水飛薊 素的芳香酶抑制活性進(jìn)行了探討，結(jié)果每一個(gè)都展示出濃度依賴(lài)的抑制活性，其IC50值分 別為 0. 754μΜ、4· 86μΜ、3· 79μ M(表5)。另外，這其中的淫羊藿苷與比較例中的白楊素相比展示出更強(qiáng)的芳香 酶抑制活性。所述化合物每一個(gè)均為公知成分，但是人們至今完全不知道其具有芳香酶抑制活 性，這是本發(fā)明首次獲得的新發(fā)現(xiàn)。[表 5]3種成分對(duì)芳香酶的抑制活性 * 1 抑制率是通過(guò)3次試驗(yàn)求得的平均值。* 2 水飛薊素的分子量使用的是水飛薊賓、水飛薊亭和水飛薊寧的分子量的平均值。[結(jié)論]對(duì)于本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)具有芳香酶抑制活性的37種生藥提取物，認(rèn)為含有所述提 取物的醫(yī)藥品或者健康食品，不僅可以幫助治療和/或預(yù)防閉經(jīng)后女性的乳腺癌，而且還 可以幫助治療和/或預(yù)防男性更年期障礙和因內(nèi)臟脂肪累積所致代謝綜合征等性激素依 賴(lài)性疾病。另外，對(duì)于所述生藥中的淫羊藿所含成分淫羊藿苷和水飛薊所含成分水飛薊賓、 水飛薊素，期待可以通過(guò)對(duì)其進(jìn)行化學(xué)修飾從而提供用于開(kāi)發(fā)新芳香酶抑制劑的先導(dǎo)化合 物。


圖1為芳香酶和男性激素(雄激素)和女性激素(雌激素)的關(guān)系示意圖。圖2為用于治療閉經(jīng)后女性的乳腺癌的芳香酶抑制劑的結(jié)構(gòu)式的示意圖。圖3為本發(fā)明中的比較例(陽(yáng)性對(duì)照)白楊素的結(jié)構(gòu)式的示意圖。
權(quán)利要求
一種芳香酶抑制劑，其特征在于含有選自紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊、茉莉花茶、橡木皮、甜茶、旱蓮草、楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶、大黃、普洱茶、綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、櫻皮、艾葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余甘子的1種或2種以上的生藥提取物。
2.一種性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防劑，其特征在于含有權(quán)利要求1中記載的 芳香酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明的目的是通過(guò)抑制將男性激素(雄激素)轉(zhuǎn)化為女性激素(雌激素)的酶芳香酶，從而提供不僅對(duì)閉經(jīng)后女性的乳腺癌，而且對(duì)男性更年期障礙和因內(nèi)臟脂肪累積所致的代謝綜合征等性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防有效且安全的藥劑。本發(fā)明利用性激素依賴(lài)性疾病的治療和/或預(yù)防劑來(lái)解決，所述治療和/或預(yù)防劑的特征在于含有選自紅景天、夏枯草、甘茶、水飛薊、茉莉花茶、橡木皮、甜茶、旱蓮草、楊梅皮、法國(guó)海岸松、檳榔、蘆筍、漏蘆、良姜、南非有機(jī)茶、大黃、普洱茶、綠茶、黃芩、貫葉連翹、甘草、千里光、冬青、訶子、野梧桐、何首烏、淫羊藿、瓜拉那、櫻皮、艾葉、地黃、山茱萸、細(xì)辛、桂皮、芍藥、松葉、余甘子的1種或2種以上的生藥提取物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101868243SQ20088011708
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2008年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月21日
發(fā)明者森元康夫, 范本文哲 申請(qǐng)人:客樂(lè)諧制藥株式會(huì)社