專利名稱：用于治療或預防涉及組胺h4受體的病癥的美喹他嗪的制作方法
用于治療或預防涉及組胺H4受體的病癥的美喹他嗪本發(fā)明主要涉及10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻 嗪，10- [ (3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R)-1-氮雜雙 環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪及其藥學上可接受的鹽在制備通過局部、口服或 肺部途徑預防或治療由組胺H4受體的激活所介導的病癥的藥物中的用途。10-[(3R)-1-氮 雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪和10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪由外消旋體衍生而來。首先，這個外消旋體是有效治療過敏性 病癥的藥物。其為Hl類的抗組胺。其具有不對稱的碳，從而引起兩個不同的空間構(gòu)型左 旋(S構(gòu)型)和右旋(R構(gòu)型)。兩種對映異構(gòu)體和外消旋混合物的藥理學研究顯示這些 化合物出人意料的具有針對組胺H4受體的親和性。這個性質(zhì)是在其針對Hl受體的親和性 之外的性質(zhì)。在現(xiàn)有技術(shù)中沒有證明甚至是簡單考慮過這個特別性質(zhì)。以下例證這個特別 性質(zhì)。由Nakamura等人(2000)描述并由Morse等人(2001)克隆的H4受體是與Gi/o 異二聚體偶聯(lián)的具有390個氨基酸的跨膜蛋白，其激活誘導細胞內(nèi)鈣流動、cAMP的下降和 MAP激酶途徑的激活。雖然該受體在三維結(jié)構(gòu)上與Hl受體相似，但是它們只有35%的同源 性。人們普遍推測不同的生理學或生理病理學效應(yīng)將表達一個或另一個組胺受體亞 型的激活。這種受體選擇性將證明組胺受體亞型的存在。Hl受體的激活誘導蛋白Gq的激 活，H2受體的激活誘導蛋白Gs的激活，H3受體的激活誘導蛋白Gi/o的激活(Lovenberg 等人，1999)。功能上來講，這些受體的激活是由不同的分子效應(yīng)表達的。取決于所考 慮的H3受體的配體，一些對H4受體具有親和性。這些包括噻普酰胺(thioperamide)、 (31(^6即1~0 ^、丨11^{^和1 -0-甲基組胺。此外，受體亞型的分布也是不同的。對于人類 來講，H4受體主要表達于外周組織，例如骨髓細胞和造血細胞(嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細 胞、肥大細胞、T淋巴細胞和樹突狀細胞)。除了它們的解剖學分布之外，組胺受體在生理病理學中的作用的特異性取決于這 些過程中組胺的參與。已經(jīng)很好地確定了組胺作為過敏癥調(diào)節(jié)子的功能。最近的數(shù)據(jù)賦予 了組胺在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中的功能，更確切地說是通過最近描述的H4受體。H4受體拮抗劑抑 制T淋巴細胞的反應(yīng)，根據(jù)細胞凋亡蛋白激酶依賴性過程，H4受體的滅活在體外抑制了針 對抗原刺激的細胞免疫反應(yīng)(Sugata等人，2007)。組胺是速發(fā)型過敏反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)子， 但是其也干預抗原遞呈細胞的調(diào)控(Dy等人，2004)。因此，H4受體的激活誘導免疫活性樹 突狀細胞中的單核細胞分化。當H4受體被激活時，出現(xiàn)IL-12 p70的下降并引起單核細胞 的分化(Gutzner等人，2005)。Takeshita等人(2003)公開H4受體直接干預多核中性粒細 胞的募集，這種募集或趨向性依賴于肥大細胞。因此，已經(jīng)清楚地確定了趨向性的下降以及通過H4受體滅活引起的中性粒細胞 滲透的下降。例如，在注射某些試劑例如角叉菜膠引起的炎癥的模型中，或者在卵白蛋白刺 激導致的炎癥的模型中，H4受體拮抗劑的重要性顯示作為控制外周炎癥現(xiàn)象的假定試劑。 主要部分涉及生理病理性癥狀
·遺傳性過敏皮炎，皮膚瘙癢；·支氣管炎癥(哮喘、阻塞性支氣管肺病)；·腸炎癥(腸應(yīng)激綜合征)；·關(guān)節(jié)炎癥(風濕性關(guān)節(jié)炎)；·引起血管形成的瘤周基質(zhì)的炎癥及其結(jié)果腫瘤的發(fā)生。H4警體參與皮膚炎癥/痦癢通過特異性配體例如JNJ7777120抑制H4受體限制了動物中的自我撓搔行為，其 中在所述動物中預先通過皮下注射組胺誘導瘙癢(Bell等人，2004)。似乎H4受體拮抗劑 的活性高于Hl拮抗劑(例如地氯雷他定或西替利嗪)的活性。但是，在該模型中，這些“經(jīng) 典”抗組胺的活性不為零，因此顯示Hl抗組胺的抗瘙癢效應(yīng)不依賴于其鎮(zhèn)靜特性。此外，對 于一些剝奪了鎮(zhèn)靜效應(yīng)的Hl拮抗劑也顯示出了這種抗瘙癢活性。另外，H4受體的外周定位 確認了一種假設(shè)，根據(jù)該假設(shè)，H4受體的滅活使得能夠局部控制影響，而不是中心控制。受 體H4的表達確認了這些數(shù)據(jù)。確實，根據(jù)Lippert等人(2004)，人類皮膚肥大細胞表達組 胺H4受體，這確認了組胺作為皮膚炎癥的自分泌和副分泌調(diào)節(jié)子的作用。此外已經(jīng)表明 在沒有遺傳性過敏癥的病人的T淋巴細胞中，組胺通過抑制STATl蛋白的激活經(jīng)由H4受體 發(fā)揮作用。這個信使是激活控制免疫反應(yīng)和Thl/Th2平衡的轉(zhuǎn)錄因子的蛋白。在患有遺傳 性過敏癥的病人的淋巴細胞的情形中，信號仍然是由組胺對H4受體的激活所介導，并最終 由干擾素-Y的產(chǎn)生所表達。這個因子引起炎癥現(xiàn)象的擴大。在沒有遺傳性過敏癥的病人 的細胞中，STATl的表達已經(jīng)被降低并且干擾素-γ水平低。因此，在患有遺傳性過敏癥的 病人中H4受體的抑制比健康志愿者中更加有效(Horr等人，2006)。因此可以得出結(jié)論H1拮抗劑與H4拮抗劑偶聯(lián)的組合效應(yīng)將構(gòu)成旨在限制瘙癢 的皮膚病學上的結(jié)果(例如疥瘡)及其并發(fā)癥(損傷、感染)的治療試劑的選擇權(quán)利。H4受體參與氣道炎癥H4受體在支氣管和肺泡上皮中的表達引起研究者探索其在支氣管炎癥現(xiàn)象(例 如哮喘或阻塞性支氣管肺病)中的參與。這些使用卵白蛋白刺激的病癥的動物模型使得可 以確定H4受體在該情況下的作用(Dimford等人，2006)。如前所見，通過特異性拮抗劑將 H4受體滅活后限制了趨向性從而限制了中性粒細胞進入發(fā)炎的肺部上皮細胞。其結(jié)果是打 亂了免疫和炎性級聯(lián)。確實，當H4受體被中和后，CD4 T淋巴細胞不再被激活。此外，化學 因子和細胞因子水平下降，結(jié)果是T淋巴細胞反應(yīng)減少。因此，可以合乎邏輯地推出任何H4 受體拮抗劑都是抵抗肺部上皮細胞中炎癥現(xiàn)象的試劑，不論其來源中毒，過敏反應(yīng)或腫瘤 誘導的慢性呼吸性窘迫。H4受體參與腸道炎癥在Varga等人(2005)的研究中提供了 H4受體拮抗劑抑制炎癥現(xiàn)象的另一個例 子。在動物中通過施用三硝基苯誘導結(jié)腸的炎癥。預先以H4受體拮抗劑進行處理。在最 后，經(jīng)此預處理的動物比對照動物具有更少的組織學炎癥得分。與此并行，觀察到炎性因子 例如TNF-α水平的下降。因此，H4受體抑制劑在病癥例如腸應(yīng)激綜合征中顯示了其重要 性。H4受體參與關(guān)節(jié)炎癥在與風濕性關(guān)節(jié)炎相聯(lián)的炎癥現(xiàn)象中也確定了 H4受體的參與。Ikawa等人(2005)
4通過間接測量來自風濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜細胞的樣品中的轉(zhuǎn)錄本(RT-PCR)分析了 H4受 體的表達。分析顯示在這些樣品中H4受體的表達非常高，這提示組胺H4受體在與風濕性 關(guān)節(jié)炎相聯(lián)的炎性級聯(lián)中發(fā)揮作用。因此，H4受體抑制劑在滑膜細胞的炎性病癥中顯示出
一些重要性。H4警體參與和腫瘤發(fā)牛相關(guān)的血管形成在一些腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)了組胺脫羧酶(一種催化組胺合成的酶)的活性。這并不 一定意味著組胺水平的升高引起腫瘤現(xiàn)象的出現(xiàn)，但是，已經(jīng)清楚地確定與組織癌化同時 出現(xiàn)的炎癥涉及組胺。在結(jié)腸腫瘤、乳腺腫瘤和子宮內(nèi)膜腫瘤、小細胞肺腫瘤和黑色素瘤中 有組胺脫羧酶的表達。Cianchi等人(2005)的研究成果證明該酶在Cac02、HT29和HCT116 細胞中過度表達。在體外，組胺在結(jié)腸腺癌的這些培養(yǎng)物中誘導促炎性因子(即前列腺素 E2)產(chǎn)量的增加和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)產(chǎn)量的增加。有可能細胞分裂的增強通過H4 受體產(chǎn)生組胺的這種激動效應(yīng)。確實，這兩種生物標記物參與瘤周血管網(wǎng)的發(fā)展(血管生 成)。組胺對血管發(fā)生的激動效應(yīng)被H4受體抑制劑以及環(huán)氧合酶1和2抑制劑所拮抗。雖 然由于抗炎能力而知道COX抑制劑的作用，但是最近描述了 H4受體拮抗劑的作用及其對于 瘤周血管網(wǎng)發(fā)生這一現(xiàn)象的有效性。這些數(shù)據(jù)提示H4受體拮抗劑在血管生成中的用處。此 外，這些研究的結(jié)果顯示通過阻斷H4受體而抑制組胺活性降低了培養(yǎng)的結(jié)腸腺癌細胞的 細胞分裂。由于以上原因，似乎候選抑制劑應(yīng)該具有對于Hl受體和H4受體的雙重結(jié)合作用， 從而具有抑制組胺介導的外周炎癥的完全作用。在涉及H4受體的皮膚病學病癥的情況下，以及為了降低抗組胺誘導的副作用的 目的，經(jīng)皮途徑具有優(yōu)勢，因為候選分子具有跨越角膜層并到達其皮下靶標——表達H4受 體的肥大細胞的傾向。類似地，在氣道炎性病癥的情況下，優(yōu)選為提供蓋侖制劑形式，其可 能直接到達支氣管上皮中的靶標而限制目標藥劑的全身滲透。因此，除了特定的施藥途徑之外，對與藥物的活性代謝物的血漿水平的限制還可 以依賴于特定的肝臟代謝，所述肝臟代謝不產(chǎn)生能夠加劇最初施用的藥物的效應(yīng)或提高副 作用的頻率和強度的活性代謝物。此外，較長的產(chǎn)物半衰期意味著較低的施用頻率，這會促進治療依從性。本發(fā)明的目標是證明10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻 嗪(美喹他嗪的右旋對映異構(gòu)體；本文中命名為￥0162)、10-[(3幻-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(美喹他嗪的左旋對映異構(gòu)體；本文中命名為VOl 14)和兩種 對映異構(gòu)體的外消旋混合物10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩 噻嗪(本文中命名為L0013)的特別的、出人預料的特性。本發(fā)明涉及10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪， 10- [ (3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R，3S)-1-氮雜雙 環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪及其藥學上可接受的鹽在制備預防或治療涉及 組胺H4受體的病癥的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，涉及組胺H4受體的病癥選自遺傳性過敏性皮炎、瘙 癢和支氣管炎癥，例如哮喘和阻塞性支氣管肺病。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以適合于口服施用的形式提供，藥物包含足以拮抗靶標組胺H4受體的量的活性成分。 根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以口服劑量單元提供，從而能夠提供1 μ g/kg
至10mg/kg，優(yōu)選0. 01mg/kg至lmg/kg的施用劑量。 根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以藥片的形式提供。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以口服噴霧溶液或吸入式粉末的形式提供， 特別適合于治療哮喘或阻塞性支氣管肺病。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物用于預防或治療同時涉及H4受體和毒蕈堿 (muscarinic)受體的病癥。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，涉及前述受體的病癥選自呼吸道病癥。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，前述病癥選自肺氣腫、哮喘或阻塞性支氣管肺病。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，本發(fā)明延伸至含有10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪的產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以適合于以局部途徑施用的形式提供。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物以凝膠、乳劑或乳膏的形式提供，其中活性成 分的濃度按重量計是0.01%至10%。根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，所述藥物用于治療遺傳性過敏性皮炎和瘙癢。遺傳性過敏性皮炎是皮膚的炎性疾病，有時稱為遺傳性過敏性濕疹，其特征是各 種來源(例如細菌、真菌或過敏原)的發(fā)癢損傷。大體上講，本發(fā)明的目標是治療瘙癢，瘙癢一般被認為是與各種類型的皮膚病損 傷相聯(lián)的發(fā)癢的皮膚癥狀。最后，本發(fā)明還延伸至一種產(chǎn)品，其含有10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10- [ (3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻 嗪，或10-[ (3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪或其藥學上可接 受的鹽，以及Hl抗組胺、腎上腺皮質(zhì)素(corticoid)、長效或速效的抗毒蕈堿和β 2-模擬物 這類的藥物；作為組合產(chǎn)品通過拮抗組胺Η4受體以同時、分別或延長用于抗炎治療。以下實施例顯示——上述三種化合物在微摩爾濃度時對于人類組胺Η4受體的體外親和性是有效 的。——化合物作為針對Η4受體的反向激動劑發(fā)揮作用，這個特性在現(xiàn)有技術(shù)中從未 被描述過?！衔颲0114、V0162和L0013的皮膚穿透性和粘膜穿透性是顯著的，對于該 藥效團是特異性的?！@些化合物的半衰期長，這使得可以設(shè)想與這些產(chǎn)品的潛在適應(yīng)癥相容的劑
量安排。所有這些特性組合(作為本專利的例子聚集在一起)以出人預料的方式證明 10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(右旋對映異構(gòu)體；本文 中命名為V0162)、10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪(左旋 對映異構(gòu)體；本文中命名為VOl 14)和外消旋混合物10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛 烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪(本文中命名為L0013)是在涉及H4受體的病癥(例如以上所列的那些)中有活性的化合物。實施例1 :10-「(3R)-l-ii雜雙環(huán)「2. 2. 21辛烷_3_某甲某1-10H-吩PJlff泰(右 旋對映異構(gòu)體本文中侖名為V0162)、10-「(3S)-1-氮雜雙環(huán)「2. 2. 21辛烷-3-基甲 某1-10H-卩泰(左旋對日央異構(gòu)體本f中命名為V0114)禾Π兩種對日央異構(gòu)體的夕卜消!^混 合物10-「(3尺，35)-1-氮,雜雙環(huán)「2. 2. 21辛烷-3-某甲某1-10Η-吩PJlff泰(本命名為 L0013)對人類組胺Η4警體的體外親和件本研究的目標是確定化合物針對人類組胺Η4受體的體外親和常數(shù)。選擇的模型 是ΗΕΚ-293細胞，其以穩(wěn)定方式經(jīng)過編碼人類Η4受體的cDNA轉(zhuǎn)染(Liu等人，2001)。首先 確定表達每種受體的類型對于配體的親和性，同時確定其與受體100%結(jié)合。對于重組受體 的最佳配體是IOnM氚化組胺。受體結(jié)合定義如下在過量的冷配體(coldligand)存在的 情況下確定的總結(jié)合和非特異性結(jié)合之間的差異。結(jié)果按照以配體模型獲得的最佳結(jié)合的 百分率表示(100% )0表1:體外受體結(jié)合 結(jié)果顯示V0162、V0114和L0013是以出人預料的方式與人類組胺H4受體強烈結(jié) 合的化合物。在第二個系列的實驗中，通過來自CHO細胞的膜制備物上的氚化組胺放射性配體 的競爭精確測定了這三個化合物的親和常數(shù)，該CHO細胞以穩(wěn)定方式表達組胺H4受體。表2 針對H4受體的體外親和常數(shù)的測定 這些結(jié)果顯示三個化合物顯示出與組胺H4受體的親和性。這些親和性是微摩爾 水平的。這些化合物針對H4受體的活性由以下事實得到加強三個化合物V0162、V0114和 L0013具有跨越皮膚屏障的強烈能力。此外，它們在生物中的長半衰期提示在受體靶標水平 上的殘余效應(yīng)。實施例2 化合物V0162、V0114和L0013作為H4警體的反向激動劑的鑒定為了確定化合物10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪 (右旋對映異構(gòu)體；本文中命名為V0162)、10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲 基]-10H-吩噻嗪(左旋對映異構(gòu)體；本文中命名為VOl 14)和兩種對映異構(gòu)體的外消旋混 合物10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪(本文中命名為 L0013)對H4受體的功能影響(激動劑、拮抗劑、反向激動劑)，進行了這些研究。G蛋白屬于在多種必需的細胞功能中作為分子開關(guān)的蛋白家族。其調(diào)控活性是基 于它們在與GDP相關(guān)的非活性形式和與GTP相關(guān)的活性形式之間循環(huán)的能力，后者將作用 信號傳遞至所謂的效應(yīng)蛋白(位于信號級聯(lián)的下游)。為了鑒定三個化合物V0162、V0114 和L0013對H4受體的功能影響，使用G蛋白激活測試進行了研究。簡而言之，測試依賴于 各種化合物與受體結(jié)合過程中所誘導的與G蛋白結(jié)合的[35S]放射標記的GTP的量化。在附

圖1和2中以圖的形式報告了這些結(jié)果。圖Ia中顯示的G蛋白激活測試的結(jié)果表明三個化合物V0114、V0162和L0013 拮抗H4受體上的0. 1 μ M組胺誘導的激活作用，如使用噻普酰胺和選擇性的Η4拮抗劑 JNJ7777120所觀察到的那樣。已知Η4受體具有組成型活性(constitutive activity)，圖 Ib顯示化合物V0114、V0162和L0013像噻普酰胺一樣作為H4受體的反向激動劑發(fā)揮作用 (在不存在激動劑時基礎(chǔ)活性的下降)，而化合物JNJ7777120是中性拮抗劑?；衔颲0162、V0114、LOO13和噻普酰胺的反向激動劑活性肯定是由于對H4受體 的作用，因為圖2a至2d顯示中性拮抗劑JNJ7777120阻斷該活性。這些結(jié)果綜合起來第一 次顯示化合物V0162、V0114和L0013是H4受體的反向激動劑。這種對于受體滅活的功能 將V0162、V0114和L0013與中性拮抗劑家族(例如JNJ7777120)區(qū)別開來。實施例3 在小鼠中組胺誘導的足跖水腫模型中V0114和L0013的體內(nèi)抗炎活性本實驗的目標是檢測V0114、V0162和L0013對于小鼠中組胺誘導的足跖水腫的可能的抗炎活性。測試的原理受Kreutner等人(2000)出版物的啟示。所有的組均由10只 動物組成。在炎癥生成試劑之前的不同時間120、90、60和30分鐘，在預處理中通過口服 途徑施用產(chǎn)品(25ml/kg)。60分鐘之后，經(jīng)異氟烷麻醉后在爪子中進行注射(10 μ 1)。右爪 接受13 μ g組胺二鹽酸鹽，左爪接受生理鹽水溶液(組胺載體)。注射30分鐘之后，通過 斷頸法使動物安樂死。對爪子進行取樣并稱重。通過爪子重量的差異(右爪重量減左爪重 量)對水腫進行定量。表3 口服施用之后，體內(nèi)抗炎活性的確定 與使用載體在相同的時間進行預處理的組相比，V0114和L0013誘導強烈的和統(tǒng) 計學上顯著的抗炎效應(yīng)。當在爪子中注射炎癥生成試劑之前90和120分鐘進行預處理時， 這個活性(對于V0114為-58%至-72% ；對于L0013為-54%至-82% )更高。在這些實 驗條件下，事先120、90、60和30分鐘通過口服途徑施用VOl 14和LOO13顯示出強烈的針對 小鼠爪子上的組胺水腫的抗炎效應(yīng)。V0162不減少這種水腫，這證明其在該模型中沒有抗組 胺效應(yīng)。但是，產(chǎn)品是通過口服途徑施用的。然而在以下測試中，當直接通過靜脈內(nèi)途徑施 用時，產(chǎn)品V0162似乎是有活性的。結(jié)論是該研究顯示在體外證明的H4抗組胺活性在體 內(nèi)的動物中得到確認。
^WM 4 目胺i秀導的小鼠氣ι管IHr縮1草型中，誦i寸靜fe內(nèi)涂徑施用V0114禾口 L0013后的體內(nèi)抗組胺活件這些實驗的目標是評價三個化合物￥0162、￥0114和1^0013在1(0皿6 (1940)天竺 鼠模型中針對組胺誘導的支氣管收縮的活性。以前我們發(fā)現(xiàn)三個化合物在體外顯示出針對 H4受體的抗組胺活性，而另一方面在體內(nèi)時，當通過組胺產(chǎn)生炎癥時，只有VOl 14和L0013 顯示出抗炎活性。似乎當通過口服途徑施用時，V0162喪失了其活性。為了分析靜脈內(nèi)途 徑施用的三種產(chǎn)品的活性，進行了以下測試。使用恒壓呼吸泵向動物通氣，空氣體積為過量 的?？諝獠淮┩高M入肺，而是到達感應(yīng)器并測定每次吸氣。觀測到的差異代表支氣管緊張 (tonus)的變化。組胺誘導的支氣管收縮引起感應(yīng)器所測的過量體積的升高。通過頸靜脈 (預先插管)途徑施用各種化合物。然后通過靜脈內(nèi)途徑以7 μ g/kg的劑量進行組胺刺激。表4 靜脈內(nèi)施用化合物之后，體內(nèi)抗組胺活性的確定 在該模型中，組胺誘導支氣管收縮。當通過靜脈內(nèi)途徑施用時，三個化合物誘導對 組胺效應(yīng)的抑制。因此，施用途徑似乎對于達到靶標是重要的。但是，當考慮到30分鐘之 后的測量時，這個結(jié)果被修改。V0162似乎喪失了其拮抗活性，而V0114的這種活性是最大 的。這些實驗顯示出，在體內(nèi)經(jīng)過靜脈內(nèi)施用時候，化合物抵抗在肺水平上產(chǎn)生這種 調(diào)節(jié)子的現(xiàn)象中的組胺的作用。實施例5:10-「(3135)-1-氮雜雙環(huán)「2. 2. 21辛烷基甲基1-10H-吩噻嗪的皮 膚穿誘件最近確定了 H4受體在瘙癢中的重要性。因此，參與皮膚病瘙癢的靶向組胺H4受 體的拮抗劑能夠構(gòu)成破壞與瘙癢有關(guān)的行為的選擇的手段，從而避免瘙癢引起的皮膚損傷 產(chǎn)生的重復感染。類似地，這樣的H4抗組胺將證明可用于預防或減少如前所示的遺傳性過敏癥中觀察到的癥狀。為此，這對H4抗組胺能跨越皮膚屏障從而到達其靶標皮下肥大 細胞是有用的。這些實驗的目的是評價10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪的跨越皮膚屏障的能力。將人類皮膚外植體置于動態(tài)擴散室(擴散面積 為 0. 636cm2)中，真皮與受體介質(zhì)(水；0. 9% NaCl 0. 9% NaN3 0. 1% / 乙醇；75/25 ；ν/ν) 接觸。流速為1. 5ml/h。在32°C進行本研究。在T = 0時加入含有化合物的溶液(500 μ 1 至2.5mg/ml，或1(^以/細胞)。在阻塞的情況下進行皮膚穿透性研究。在第3、6、9、12、 16、20和24小時對接收液體進行取樣。結(jié)果顯示16小時后，幾乎達到了化合物恒定最大流量，在24小時的時候，積累的 數(shù)量為 5. 4 μ g/cm2/h ；107 μ g/cm2。在24小時的時候表皮和真皮中的化合物數(shù)量(圖3b)顯示出濃度梯度，因此該分 子在皮膚中是均勻分布的——表皮=56士 17 μ g/cm2-真皮=45 士 14 μ g/cm2-合計=101 μ g/cm2-受體區(qū)域=107 士 28 μ g/cm2本研究顯示10-[(3R，3S)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪是 具有良好的皮膚穿透性潛力的分子(大約100μ g/cm2/24h)。24小時之后儲存在皮膚中的 化合物數(shù)量等于甚至高于24小時后接收液體中發(fā)現(xiàn)的積累數(shù)量。實施例6 在大鼠阻塞性慢性支氣管肺病模型中化合物V0114和V0162的抗炎活 性的評價在以下模型中評價了化合物在降低肺部炎癥中的重要性。通過慢性霧化將動物暴 露于鎘劑量中。最終，動物產(chǎn)生炎性反應(yīng)和肺氣腫。在大鼠中驗證了這個模型以證實其鑒 定潛在的有效分子以治療與H4受體激活介導的中性炎性反應(yīng)的持續(xù)性相關(guān)的慢性呼吸疾 病的用途。一旦發(fā)生該病癥，每天以肺部施用劑量為IOyg至50yg的目標化合物(通過 霧化施用)處理動物。結(jié)果顯示所測化合物部分恢復了呼吸能力，最顯著的呼吸速率，增加了吸氣和呼 氣流量。此外，在實驗結(jié)尾，抽取支氣管肺泡液體樣品，免疫活性細胞進行計數(shù)。結(jié)果顯示 當比較處理組和僅接受安慰劑的動物時，滲透的中性粒細胞下降。這些實驗綜合起來確認了所測化合物通過拮抗組胺H4受體的抗炎活性。三個化合物顯示出針對H4受體的受體親和性。我們確定它們是該受體的反向激 動劑。在體外和體內(nèi)顯示了這些抗炎活性并在接受的模型中得到確認。此外，這些化合物 具有藥物動力學和皮膚穿透特性，這使得能夠進行局部施用(皮膚或肺)。以前從未證明過 這三個化合物對H4受體的特殊性質(zhì)和產(chǎn)生的治療用途。以上例證了這些性質(zhì)(合在一起 或單獨考慮)。這些實施例顯示了在組胺H4受體介導的病癥中合理使用10-[(3R)_1-氮雜雙 環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪。 此外，以前確定的左旋衍生物(10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩 噻嗪)和外消旋混合物(10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪)作為Hl受體抑制劑的活性賦予這兩個產(chǎn)品H4和Hl抗組胺的雙重特性。這個雙重能 力使這些化合物相對于迄今為止的現(xiàn)有技術(shù)中描述的抗組胺產(chǎn)品具有優(yōu)越性。類似地，其 它地方清楚確定的右旋衍生物(10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩 噻嗪)的抗毒蕈堿活性由其H4抗組胺活性得到加強?，F(xiàn)有技術(shù)中沒有描述過化合物 10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[ (3S)-1-氮雜雙環(huán) [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，和10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲 基]-10H-吩噻嗪的這種雙重性質(zhì)。另外，本發(fā)明顯示了 V0162和L0013的雙重抗H4和抗M1/M3活性在抑制患有哮喘 或阻塞性支氣管肺病的病人中炎癥現(xiàn)象和呼吸性窘迫中的重要性。受體H4參與涉及免疫活性細胞(主要是嗜酸性粒細胞和巨噬細胞)的募集的病 癥。因此考慮到使用該受體的配體以限制肺氣腫、阻塞性支氣管肺病或哮喘中肺水平上的 嗜酸性粒細胞的滲透和巨噬細胞的募集。該活性可明智地由解痙活性補充。出人意料地，V0162或(10-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩 噻嗪)和L0013或(10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪) 證明具有補充性的抗膽堿活性。對于左旋對映異構(gòu)體V0114或(10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán) [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪)在體內(nèi)沒有觀測到該活性。這兩種性質(zhì)組合在同一個化合物中使得能夠預見V0162和/或L0013治療呼吸病 癥(例如哮喘和阻塞性支氣管肺病)的用途。實施例7 :V0162對毒蕈堿受體的親和性本測試的目標是評價化合物對于乙酰膽堿結(jié)合Ml、M2和M3受體的抑制活性。為 此，將固定數(shù)量的放射標記的乙酰膽堿與不同劑量的待測化合物V0162、LOO13和V0114孵育。 因此，在體外V0162和L0013顯示出非常高的針對參與啟動、調(diào)節(jié)和維持支氣管肌 肉收縮的毒蕈堿受體的親和性。左旋對映異構(gòu)體對乙酰膽堿與三個毒蕈堿受體的結(jié)合的抑 制較弱。該差異在體內(nèi)更加明顯，因為只有V0162和L0013拮抗乙酰膽堿的效應(yīng)。實施例8 乙酰膽堿對于呼吸肌肉收縮的效應(yīng)的抑制
將天竺鼠麻醉并人工通氣。通過感應(yīng)器測定穿透到肺部的空氣。因此每次吸氣被 定量。然后通過靜脈內(nèi)注射乙酰膽堿誘導支氣管收縮。乙酰膽堿的效應(yīng)是直接的和瞬時的 支氣管緊張的修飾。在效應(yīng)的峰值處以mm評價乙酰膽堿的支氣管收縮效應(yīng)。注射乙酰膽 堿20分鐘后，施用待測的各種產(chǎn)品V0162、L0013和V0114。將產(chǎn)品的效應(yīng)與阿托品的效應(yīng) (參考方法)進行比較。 結(jié)果顯示V0162和L0013是兩種能夠誘導抑制乙酰膽堿誘導的支氣管痙攣的產(chǎn) 品。另一方面，V0114活性不高。實施例9 :L0013的支氣管擴張效應(yīng)，VOl 14無支氣管擴張效應(yīng)在雄性Wistar大鼠中(8只大鼠/劑量)口服施用(per os)之后分析V0114(0. 5、 50和100mg/kg)對于呼吸功能的效應(yīng)。在相同條件下施用的L0013(100mg/kg)用作參考 物質(zhì)。在相同實驗條件下施用的茶堿(100mg/kg)用作參考物質(zhì)。蒸餾水中的羧甲基纖維 素(0. 5% )用作對照載體。在測試期的結(jié)尾(即施用劑量之后360分鐘)，評價動物的行 為以及其瞳孔的直徑(瞳孔縮小/瞳孔散大)。從每只大鼠抽取血液樣品(除了那些與茶 堿組有關(guān)的之外)以分析血液中物質(zhì)的濃度。對照載體在吸氣時間、呼氣時間、吸氣峰值流 量、呼氣峰值流量、呼吸體積、呼吸速率、松弛時間或呼吸暫停沒有影響，且在360分鐘的測 試期之后改進了呼吸暫停。施用之后在呼吸暫停中觀察到非常輕微的上升(在對照載體組 中在120分鐘時最大值為+24%, ρ < 0. 01)。V0114(0. 5、50和100mg/kg, p. ο.)對于所評 價的9個呼吸參數(shù)中任何一個都沒有顯著影響，這與360分鐘的測試期之后的對照載體組 相反。L0013(100mg/kg, p. ο.)顯著提高了呼吸速率(最大值為+80%，對比于對照載體 組中的_9%，施用之后60分鐘，ρ < 0. 05)。L0013傾向于降低吸氣時間(_26%，對比于對 照載體組中的+6 %，施用之后60分鐘)、呼氣時間(-24 %，對比于對照載體組中的+3 %，施 用之后60分鐘)、松弛時間(-30 %，對比于對照載體組中的_2 %，施用之后120分鐘，)和呼吸體積(-26%，對比于對照載體組中的_6%，施用之后60分鐘)。它還傾向于增加吸氣峰 值流量(+14%，對比于對照載體組中的-13%，施用之后60分鐘)、呼氣峰值流量(+23%， 對比于對照載體組中的_4%，施用之后120分鐘)。這些效應(yīng)表明刺激和支氣管擴張呼吸 特性。茶堿(100mg/kg，p. ο.)明顯且迅速降低吸氣時間(_60 %，對比于對照載體組中 的+6%，施用之后60分鐘，ρ < 0.001)、呼氣時間(-63%，對比于對照載體組中的+3%， 施用之后60分鐘，ρ < 0. 001)和松弛時間(_61%，對比于對照載體組中的+0%，施用之 后60分鐘，ρ < 0. 001)。茶堿明顯且迅速提高吸氣峰值流量(+116%，對比于對照載體組 中的-13%，施用之后60分鐘，ρ <0. 001)、呼氣峰值流量(+121%，對比于對照載體組中 的-7%，施用之后60分鐘，ρ <0. 001)和呼吸速率(+223%，對比于對照載體組中的-9%， 施用之后60分鐘，ρ<0. 001)。此外，茶堿輕微降低呼吸暫停(_20%，對比于對照載體組中 的+15%，施用之后300分鐘，ρ <0. 01)并改進呼吸暫停(_37%，對比于對照載體組中的 +19%，施用之后300分鐘，ρ < 0. 05)。茶堿還傾向于輕微地、逐漸降低呼吸體積(_17%， 對比于對照載體組中的+2%，施用之后120分鐘，NS)。這些效應(yīng)表明了茶堿的刺激和支氣 管擴張呼吸特性。在實驗結(jié)尾(即，施用之后360分鐘)，沒有觀察到施用VO114(0.5、50和IOOmg/ kg)、L0013(100mg/kg)和茶堿(100mg/kg)之后的行為或病態(tài)跡象的改變。在以V0114處 理的組中，施用之后360分鐘，測定了大鼠瞳孔直徑，注意到相對于施用50mg/kg有所增加。 以同樣的方式，在以L0013(100mg/kg)(作為對照物質(zhì))處理的大鼠中注意到瞳孔直徑可評 估的增加。這些結(jié)果提示在雄性Wistar大鼠中口服施用的V0114(0. 5、50和100mg/kg)在 360分鐘的測試期之后對于呼吸功能沒有任何影響。另一方面，L0013(100mg/kg)顯示出刺激和支氣管擴張呼吸特性的效應(yīng)?？傊?，這些結(jié)果表明V0162和L0013除了其H4受體抑制活性之外，還具有抗毒蕈 堿的潛力。這兩個特性對于制備預防、減少或治療涉及毒蕈堿和組胺能H4受體的呼吸病癥 (例如阻塞性支氣管肺病、哮喘或任何呼吸功能缺陷)的藥物的目的中是重要的。實施例10 對于呼吸困難的動物以溶液或吸入式粉末施用的V0162的有利效應(yīng)乙醇用作通過霧化施用V0162的溶劑。另外，制備了無水粉末制劑。在這 些實驗中評價了兩種蓋侖制劑形式V0162的溶液和含有V0162的吸入粉末。通過 V0162(10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪)溶液的霧化處理 大鼠或以含有V0162的無水粉末的粉化處理大鼠。以各種濃度施用V0162，動物置于暴露 室(exposurechamber)。暴露于V0162 15分鐘之后，進行乙酰甲膽堿刺激測試。以濃度漸 增的乙酰甲膽堿處理動物。顯示的數(shù)值是每個施用乙酰甲膽堿的步驟之后呼吸系統(tǒng)對氣流 產(chǎn)生的抗性的數(shù)值。結(jié)果顯示，V0162減輕了呼吸困難，因此增加了剩余功能量(residual functional capacity)0大鼠中的乙酰甲膽堿刺激測試，兩個V0162的吸入制劑(粉末和溶液)的效應(yīng)。
通過抑制H4受體的雙重抗毒蕈堿和抗炎活性似乎賦予V0162 (以粉末或溶液的形 式吸入)可廣泛開發(fā)用于治療支氣管炎癥(例如阻塞性支氣管病或哮喘)和呼吸性窘迫的 真正特性。
權(quán)利要求
10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其藥學上可接受的鹽在制備預防或治療涉及組胺H4受體的病癥的藥物中的用途，所述病癥選自遺傳性過敏性皮炎、瘙癢或支氣管炎癥，例如哮喘和阻塞性支氣管肺病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物是10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán) [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述藥物是10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán) [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述藥物以適合于口服施用的形式提 供，其包含足以拮抗靶標組胺H4受體的量的活性成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述藥物以口服劑量單元提供，從而能夠 提供1 μ g/kg至10mg/kg，優(yōu)選0. 01mg/kg至lmg/kg的施用劑量。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述藥物以藥片的形式提供。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述藥物以口服噴霧溶液或吸入式粉 末的形式提供，特別適合于治療哮喘或阻塞性支氣管肺病。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項所述的用途，其特征在于，所述藥物旨在預防或治療同 時涉及組胺H4受體和毒蕈堿受體的病癥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，涉及前述受體的病癥選自呼吸道病癥。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，前述病癥選自肺氣腫、哮喘或阻塞性支 氣管肺病。
11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中的一項所述的10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2. 2]辛烷_3_基 甲基]-10H-吩噻嗪的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述藥物以適合于以局部途徑施用 的形式提供。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述藥物以凝膠、乳劑或乳膏的形式提 供，其中活性成分的濃度按重量計是0.01%至10%。
14.根據(jù)權(quán)利要求12和13中的一項所述的用途，其特征在于，所述藥物用于治療遺傳 性過敏性皮炎和瘙癢。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途，其特征在于，所述藥物是10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán) [2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪。
16.一種產(chǎn)品，其含有10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷_3_基甲基]-10H-吩噻嗪， 10- [ (3S)-1-氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10- [ (3R，3S)-1-氮雜雙 環(huán)[2. 2. 2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其藥學上可接受的鹽，以及抗Hl抗組胺、腎上 腺皮質(zhì)素、長效或速效的抗毒蕈堿和β 2-模擬物這類的藥物；作為組合產(chǎn)品通過拮抗組胺 Η4受體以同時、分別或延長用于抗炎治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及10-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，10-[(3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪，或10-[(3R，3S)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-基甲基]-10H-吩噻嗪或其藥學上可接受的鹽在制備預防或治療涉及組胺H4受體的病癥的藥物中的用途。
文檔編號A61K31/5415GK101883566SQ200880118801
公開日2010年11月10日 申請日期2008年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者C·普日貝爾斯基, D·屈薩克, J·蒂內(nèi)-凡爾賽, T·克萊爾 申請人:皮埃爾法布雷醫(yī)藥公司