專利名稱：復(fù)蘇液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域是醫(yī)療，特別是用于治療與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的方法和 組合物。
背景技術(shù)：
當(dāng)大量失血時(shí)，至關(guān)重要的是立即用容量擴(kuò)充劑替代損失的容量以維持循環(huán)容 量，從而使剩余的紅細(xì)胞仍然能夠?qū)ι眢w組織供氧。在一些極端的情況中，可能需要輸注真 正的血液或血液代用品以維持受影響個(gè)體的足夠的組織氧合。血液代用品與簡(jiǎn)單的容量擴(kuò) 充劑的區(qū)別在于血液代用品能夠像真正的血液那樣攜氧。目前所用的血液代用品使用全氟化碳(PFC)或血紅蛋白作為氧載體。PFC是通過 以氟原子替換烴中的氫原子而由烴衍生的化合物。PFC能夠溶解相對(duì)高濃度的氧。然而，醫(yī) 學(xué)應(yīng)用需要高純度的全氟化碳。帶有氮鍵的雜質(zhì)可能有劇毒。含有氫的化合物(其可能釋 放氟化氫)和不飽和化合物也必須除去。純化工藝復(fù)雜且昂貴。血紅蛋白是紅細(xì)胞中含鐵的運(yùn)送氧的金屬蛋白。不過，由紅細(xì)胞分離出的純的血 紅蛋白由于會(huì)導(dǎo)致腎毒性而不能使用。需要如交聯(lián)、聚合、ad包封等各種修飾以將血紅蛋 白轉(zhuǎn)化為有用且安全的人工氧載體。所得到的產(chǎn)品通常稱為HBOC(血紅蛋白類氧載體)，其 價(jià)格昂貴并且儲(chǔ)藏壽命相對(duì)較短。因此，仍然存在對(duì)可發(fā)揮容量擴(kuò)充劑的作用而且還能夠攜載大量氧的更低成本的 復(fù)蘇液的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本文公開了用于治療與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的方法。所述方法包括對(duì)需要該 治療的受試體施用有效量的脂質(zhì)類復(fù)蘇液，所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液包含脂質(zhì)成分和水性載體。 所述脂質(zhì)成分與所述水性載體形成乳液。此外還公開了用于保持哺乳動(dòng)物供體生物體的器官的生物學(xué)完整性的方法。所述 方法包括用有效量的包含脂質(zhì)成分和水性載體的脂質(zhì)類復(fù)蘇液灌注所述器官，其中所述脂 質(zhì)成分與所述水性載體形成乳液。此外還公開了一種脂質(zhì)類復(fù)蘇液。所述復(fù)蘇液包含有經(jīng)氧合的脂質(zhì)乳液和緩沖 劑。此外還公開了一種復(fù)蘇用試劑盒。所述復(fù)蘇用試劑盒包括具有脂質(zhì)成分和水性載 體的脂質(zhì)類復(fù)蘇液和氧合裝置。


詳細(xì)說明將參考下列附圖，其中相同的標(biāo)記指代相同的元件，圖中圖1是顯示嚴(yán)重的失血性休克之后用不同復(fù)蘇液處理的小鼠的收縮壓的圖。圖2是顯示嚴(yán)重的失血性休克之后用不同復(fù)蘇液處理的小鼠的舒張壓的圖。如3是顯示嚴(yán)重的失血性休克之后用不同量的復(fù)蘇液處理的小鼠的收縮壓的圖。圖4是顯示嚴(yán)重的失血性休克之后用不同量的復(fù)蘇液處理的小鼠的舒張壓的圖。圖5是顯示嚴(yán)重的失血性休克之后用含有白蛋白的復(fù)蘇液處理的小鼠和用引流 血處理的小鼠的收縮壓的百分比。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的一個(gè)方案涉及用于以脂質(zhì)類復(fù)蘇液治療與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的 復(fù)蘇液組合物。所述復(fù)蘇液包含脂質(zhì)成分和極性液體載體。脂質(zhì)成分分散在極性液體載體 中以形成乳液，所述乳液通常包含具有極性外表面和內(nèi)部疏水空間的脂質(zhì)膠束。所述復(fù)蘇 液可用于升高血壓并向組織運(yùn)載氧。脂質(zhì)成分所述脂質(zhì)成分可以是任何能夠與水形成乳液的脂質(zhì)。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“脂 質(zhì)”指的是任何適宜的材料，該材料能夠在水性環(huán)境中形成單層或脂質(zhì)膠束，以使脂質(zhì)材 料的疏水部分指向脂質(zhì)膠束的內(nèi)部，而親水部分指向水相。親水特性源于存在磷酸基團(tuán) (phosphato)、羧基、硫酸根、氨基、巰基、硝基和其他類似的基團(tuán)。因包含了下述基團(tuán)而賦予 了疏水性，所述基團(tuán)包括但不限于長(zhǎng)鏈的飽和的和不飽和的脂肪族烴基，這種基團(tuán)可選地 取代有一個(gè)或多個(gè)芳香基、脂環(huán)基和雜環(huán)基。脂質(zhì)的實(shí)例包括但不限于脂肪酰基、甘油脂類、諸如磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇 胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)等磷脂、鞘脂、固醇脂如膽固醇、異戊烯醇脂、糖脂、 聚酮、非天然脂質(zhì)、陽(yáng)離子脂質(zhì)及其混合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)是豆油和蛋黃磷 脂的混合物，例如以Intralipid (由 Baxter International Inc.，Deerfield, IL 營(yíng)銷出 售)使用的那些脂類。極性液體載體所述極性液體載體可以是任何能夠與脂質(zhì)形成乳液的藥學(xué)上可接受的極性液體。 術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指具有足夠以用于配制本發(fā)明的組合物或藥物的純度和質(zhì)量， 并且在適當(dāng)?shù)厥┯媒o動(dòng)物或人時(shí)不會(huì)產(chǎn)生有害的、過敏的或其他不利反應(yīng)的分子實(shí)體和組 分。由于人類應(yīng)用(臨床和非處方)和獸醫(yī)應(yīng)用均同等地包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，因此藥 學(xué)上可接受的制劑將包括用于人類應(yīng)用或獸醫(yī)應(yīng)用的組合物或藥物。在一個(gè)實(shí)施方式中， 所述極性液體載體是水或水基溶液。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述極性液體載體是非水性極 性液體，如二甲亞砜、聚乙二醇和極性有機(jī)硅液體。水基溶液通常包括與全血等滲的生理相容性電解質(zhì)載質(zhì)。所述載體例如可以是生 理鹽水、鹽水_葡萄糖混合物、林格氏液、乳酸林格氏液、洛克_林格氏液、克雷布斯_林格 氏液、哈特曼平衡鹽水、肝素化檸檬酸鈉-檸檬酸-右旋葡萄糖溶液和聚合血漿代用品，如 聚環(huán)氧乙烷、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇和氧化乙烯-丙二醇縮合物。復(fù)蘇液可額外包含
5其他的成分如藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、填充劑和鹽，這些成分的選擇取決于所用的劑 型、待處理的狀況、根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的判斷所要達(dá)到的具體目的和這些添加劑的性質(zhì)。血漿成分復(fù)蘇液還可包含血漿成分。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述血漿是動(dòng)物血漿。在另一個(gè) 實(shí)施方式中，所述血漿是人血漿。雖然不愿受到任何具體科學(xué)理論的束縛，據(jù)認(rèn)為施用血 液代用品可能將凝血因子的濃度稀釋至不利的水平。因此，使用血漿作為用于攜氧成分的 稀釋劑避免了該問題。血漿可通過本領(lǐng)域已知的任何方式收集，只要是紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血 小板都基本上被除去。優(yōu)選的是，使用自動(dòng)化血漿取出裝置(automated plasmaphoresis apparatus)獲得血漿。血漿取出裝置可商購(gòu)獲得，例如包括通過超濾或通過離心使血漿從 血液分離的裝置。例如 Auto C, A200 (Baxter International Inc.，Deerfield, IL)制造 的超濾類血漿取出裝置是適合的，因?yàn)槠淇捎行У爻ゼt細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板，而同時(shí)保 留了凝血因子。血漿可以用抗凝血?jiǎng)┦占?，其中的許多是本領(lǐng)域中公知的。優(yōu)選的抗凝血?jiǎng)┦球?合鈣的那些抗凝血?jiǎng)?，例如檸檬酸鹽。在一個(gè)實(shí)施方式中，檸檬酸鈉用作抗凝血?jiǎng)?，其終濃 度為0.2%至0.5%，優(yōu)選為0.3%至0.4%，最優(yōu)選為0. 38%。它還可以在范圍內(nèi)使用。所 述血漿可以是新鮮的、冷凍的、儲(chǔ)集的和/或滅菌的?？蓛?yōu)選外源性血漿，不過使用自體血 漿也在本發(fā)明范圍內(nèi)，該自體血漿在配制并施用復(fù)蘇液之前從受試體采集。除了天然來源的血漿之外，還可以使用合成血漿。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“合成血漿，， 是指任何至少為等滲并且可進(jìn)一步包含至少一種血漿蛋白的水性溶液。滲透壓劑在一個(gè)實(shí)施方式中，所述復(fù)蘇液還包含滲透壓劑(oncotic agent)。所述滲透壓劑 由這樣的分子構(gòu)成其大小足以防止這些分子在通過橫穿毛細(xì)管床的窗孔進(jìn)入身體組織的 間隙空間的循環(huán)時(shí)損失。滲透壓劑的實(shí)例包括但不限于白蛋白如人血清白蛋白、多糖如葡 聚糖、多糖衍生物如羥甲基α (1,4)或(1，6)聚合物、Herastarch (McGaw，inc.)和環(huán)糊
精。在一個(gè)實(shí)施方式中，滲透壓劑是約5% (重量/體積)的白蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方式 中，滲透壓劑是多糖，例如分子量是30，000道爾頓(D)至50，000道爾頓(D)的葡聚糖。在 又一個(gè)實(shí)施方式中，滲透壓劑是多糖，如分子量是50，000D至70，000D的葡聚糖。高分子量 的葡聚糖溶液由于從毛細(xì)管的滲漏率更低而更有效地防止組織腫脹。在一個(gè)實(shí)施方式中， 多糖的濃度(連同下列物質(zhì)時(shí)鈉、鈣和鎂的氯鹽，來自上述的有機(jī)鈉鹽的有機(jī)離子和六碳 糖)足以實(shí)現(xiàn)近似正常人血清的膠體滲透壓，約為28mmHg。類晶體劑所述復(fù)蘇液還可包含類晶體劑。類晶體劑可以是任何類晶體，其作為復(fù)蘇液組分 時(shí)優(yōu)選能夠獲得大于800m0sm/l的摩爾滲透壓濃度，也就是，其使得復(fù)蘇液為“高滲性”。適 宜的類晶體及其在復(fù)蘇液中的濃度的實(shí)例包括但不限于3% (重量/體積)的NaCl、7% 妝(1、7.5%妝(1和7.5%妝(1在6% (重量/體積)的葡聚糖中。在一個(gè)實(shí)施方式中，復(fù) 蘇液具有的摩爾滲透壓濃度為800m0sm/l至2400m0sm/l。當(dāng)復(fù)蘇液還包含類晶體且為高滲性時(shí)，該復(fù)蘇液可提供超過其他血液代用品組 合物(包括膠體成分)的改善的功能以快速恢復(fù)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)。小體積高滲性類晶體 輸注(例如lml/kg至10ml/kg)在可控出血中快速持續(xù)恢復(fù)可接受的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)時(shí)提供了明顯的益處(例如見 Przybelski, R. J.，E. K. Daily,和 M. L. Birnbaum, “ The pressor effect of hemoglobin—good or bad ？ " In Winslow, R. Μ. , K. D. Vandegriff, 禾口M. Intaglietta，eds. Advances in Blood Substitutes. Industrial Opportunities and Medical Challenges. Boston, Birkhauser (1997), 71-85)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所用的脂 質(zhì)乳液是Intralipid 。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所用的脂質(zhì)乳液是20%Intralipid 。在一個(gè) 實(shí)施方式中，脂質(zhì)包括抗炎脂質(zhì)，如Ω-3-脂肪酸。離子濃度在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的復(fù)蘇液包含的鈣、鈉、鎂和鉀離子的濃度處于所述離 子在血漿中的正常生理濃度的范圍內(nèi)。通常，這些離子的所需濃度由溶解的鈣、鈉和鎂的氯 鹽獲得。鈉離子還可來自溶解的有機(jī)鈉鹽，其也在溶液中。在一個(gè)實(shí)施方式中，鈉離子的濃度為70mM至約160mM。在另一個(gè)實(shí)施方式中，鈉離 子的濃度為約130mM至150mM。在一個(gè)實(shí)施方式中，鈣離子的濃度為約0. 5mM至4.0mM。在另一個(gè)實(shí)施方式中，鈣 離子的濃度為約2. OmM至2. 5mM。在一個(gè)實(shí)施方式中，鎂離子的濃度為OmM至10mM。在另一個(gè)實(shí)施方式中，鎂離子的 濃度為約0. 3mM至0. 45mM。本發(fā)明的復(fù)蘇液中最好不要包含過量的鎂離子，這是因?yàn)檩^高 的鎂離子濃度會(huì)對(duì)心臟收縮活性的強(qiáng)度產(chǎn)生不利的影響。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，溶 液包含低于生理量的鎂離子。在一個(gè)實(shí)施方式中，鉀離子的濃度在0至5mEq/l K+(OmM至5mM)的次生理范圍內(nèi)， 優(yōu)選為2至3mEq/l K+(2mM至3mM)。因此，復(fù)蘇液允許稀釋在存儲(chǔ)的輸注用血中的鉀離子 濃度。結(jié)果，能夠更容易地控制高濃度的鉀離子和由其導(dǎo)致的可能的心律失常和心功能不 全。含有低于生理量的鉀的復(fù)蘇液還可用于血液置換和受試體的低溫維護(hù)。在一個(gè)實(shí)施方式中，氯離子的濃度為70mM至160mM。在另一個(gè)實(shí)施方式中，氯離子 的濃度為IlOmM至125mM。糖類復(fù)蘇液還可包含糖類或糖類的混合物。適宜的糖類包括但不限于簡(jiǎn)單的己糖(例 如葡萄糖、果糖和半乳糖)、甘露醇、山梨糖醇或本領(lǐng)域中已知的其他糖類。在一個(gè)實(shí)施方式 中，復(fù)蘇液包含生理水平的己糖?！吧硭降募禾恰卑舛葹?mM至50mM的己糖。在一 個(gè)實(shí)施方式中，復(fù)蘇液包含5mM的葡萄糖。有時(shí)理想的是增大己糖的濃度以降低受試體組 織中的液體滯留。因此己糖的范圍必要時(shí)可增大至約50mM以防止或限制治療時(shí)受試體的 水腫。緩沖劑本發(fā)明的復(fù)蘇液還可包含生物緩沖劑以將液體的pH維持在pH7至8的生理范 圍內(nèi)。生物緩沖劑的實(shí)例包括但不限于N-2-羥乙基哌嗪-N' -2-羥基丙磺酸(HEPES)、 3- (N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)、2- ([2-羥基-1，1-雙(羥甲基)乙基]氨基)乙磺酸(TES)、 3-[N-三(羥甲基)甲基氨基]-2-羥乙基]-1-哌嗪丙磺酸(EPPS)、三[羥甲基]-氨基乙 烷(THAM)和三[羥甲基]甲基氨基甲烷(TRIS)。在一個(gè)實(shí)施方式中，緩沖劑是組氨酸、咪唑、保留咪唑環(huán)的兩性位點(diǎn)的具有取代基 的組氨酸或咪唑化合物、包含組氨酸的寡肽、或其混合物。組氨酸還能夠還原活性氧物種(例如見Simpkins等，J Trauma. 2007,63 :565_572)。組氨酸或咪唑通常以約0. OlM至0. 5M
的濃度使用。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的復(fù)蘇液使用通常的生物成分以維持體內(nèi)的生物 PH。簡(jiǎn)而言之，一些生物化合物，如乳酸鹽，能夠在體內(nèi)代謝并與其他的生物成分發(fā)揮作用 以維持動(dòng)物的生物適宜的PH。即使在低溫和基本上無(wú)血的條件下生物成分也能夠有效地維 持生物適宜的PH。通常的生物成分的實(shí)例包括但不限于羧酸、羧酸鹽及羧酸酯。羧酸具有 結(jié)構(gòu)通式RC00X，其中R是支鏈或直鏈的包含1至30個(gè)碳的烷基、烯基或芳基，且所述碳可 以被取代，X是氫或鈉或其他可連接于氧位的生物相容性離子取代基，或是包含1至4個(gè)碳 的短直鏈或支鏈的烷基，如一CH3、--CH2CH3。羧酸和羧酸鹽的實(shí)例包括但不限于乳酸和乳酸 鈉、檸檬酸和檸檬酸鈉、葡糖酸和葡糖酸鈉、丙酮酸和丙酮酸鈉、琥珀酸和琥珀酸鈉以及乙 酸和乙酸鈉。其他成分除了上述成分之外，復(fù)蘇液還可包含其他添加劑，如抗生素、維生素、氨基酸、血管 擴(kuò)充劑如醇和多元醇、表面活性劑、和針對(duì)如腫瘤壞死因子(TNF)或白細(xì)胞介素等有害細(xì) 胞因子的抗體。另外，可以加入其他氣體，例如作為血壓調(diào)節(jié)劑的硫化氫，或具有細(xì)胞保護(hù) 性質(zhì)的一氧化碳，其可用于防止缺血再灌注損傷等病理狀況的發(fā)展。復(fù)蘇液的制備通過混合脂質(zhì)成分、水性載體和任何其他成分以形成乳液，可以制備復(fù)蘇液。常用 的混合方法包括但不限于攪拌、振蕩、振動(dòng)和超聲。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過使Intralipid : 等預(yù)制的脂質(zhì)乳液與水性載體和其他成分混合來形成復(fù)蘇液。為增大復(fù)蘇液中的氧含量，通過使純氧或氧含量為21%至100% (體積/體積)， 優(yōu)選40 %至100 % (體積/體積)，更優(yōu)選60 %至100 % (體積/體積)，最優(yōu)選80 %至 100% (體積/體積)的氣體通過復(fù)蘇液鼓泡30秒鐘以上，優(yōu)選1分鐘至15分鐘，更優(yōu)選 1分鐘至5分鐘，可以對(duì)復(fù)蘇液進(jìn)行氧合。特定組成的復(fù)蘇液的氧合時(shí)間可通過實(shí)驗(yàn)確定。 在一個(gè)實(shí)施方式中，復(fù)蘇液在氧合處理后即刻施用。在一個(gè)實(shí)施方式中，復(fù)蘇液包含經(jīng)氧合的脂質(zhì)乳液。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“經(jīng)氧合的 脂質(zhì)乳液”或“經(jīng)氧合的復(fù)蘇液”指的是特定類型的經(jīng)氣體處理的脂質(zhì)乳液或經(jīng)氣體處理的 復(fù)蘇液，其已經(jīng)進(jìn)行了強(qiáng)制吸氧以使其中包含的氧的總濃度大于在大氣平衡條件下相同液 體中所存在的氧的總濃度。試劑盒本發(fā)明的另一方案涉及復(fù)蘇用試劑盒。在一個(gè)實(shí)施方式中，復(fù)蘇用試劑盒包括經(jīng) 氧合的復(fù)蘇液和至少一種添加劑。添加劑的實(shí)例包括但不限于滲透壓劑、類晶體劑、血管擴(kuò) 充劑、心臟麻痹劑或強(qiáng)心劑、自由基或介導(dǎo)劑的清除劑、細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)劑和受體激動(dòng)劑或拮 抗劑。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，試劑盒還包括靜脈輸注(IV)裝置。在另一個(gè)實(shí)施方式中，經(jīng)氧合 的復(fù)蘇液容納于一個(gè)或多個(gè)預(yù)裝注射器中以備緊急應(yīng)用。在另一個(gè)實(shí)施方式中，試劑盒還 包括可在即將施用前用于對(duì)復(fù)蘇液再氧合的盛氧容器。盛氧容器可容納純氧，或氧與硫化 氫和/或一氧化碳的混合氣體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，試劑盒包括復(fù)蘇液，以及在即用前用 周圍空氣使復(fù)蘇液氧合的氣泵。治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的另一方案涉及用脂質(zhì)類復(fù)蘇液治療與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的方法。 與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況包括但不限于血容量不足、缺血、血液稀釋、創(chuàng)傷、感染性休克、 癌癥、貧血、心麻痹、缺氧和器官灌注。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“血容量不足”是指體內(nèi)的循環(huán)液 (血液或血漿)的量異常下降。該狀況可能源自“出血”，或血液自血管漏出。本文中使用 的術(shù)語(yǔ)“缺血”是指身體的一部分的血液不足，通常是由血管的功能性收縮或?qū)嶋H阻塞導(dǎo)致 的。復(fù)蘇液可經(jīng)靜脈內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)施用給需要該治療的受試體。取決于復(fù)蘇液的應(yīng)用目 的，復(fù)蘇液的施用可進(jìn)行幾秒鐘至幾個(gè)小時(shí)的時(shí)間。例如，當(dāng)用作血容量擴(kuò)充劑和氧載體以 用于治療嚴(yán)重失血性休克時(shí)，通常的施用時(shí)間應(yīng)盡可能的快，其可以為約lml/kg/小時(shí)至 15ml/kg/分鐘。當(dāng)用于器官移植時(shí)的器官灌注時(shí)，復(fù)蘇液可緩慢施用幾個(gè)小時(shí)的時(shí)間。當(dāng)本發(fā)明的復(fù)蘇液施用給受試體并通過所述受試體而循環(huán)時(shí)，可以將各種試劑如 心臟麻痹劑或強(qiáng)心劑直接施用至受試體的循環(huán)系統(tǒng)，直接施用至受試體的心肌，或者添加 至本發(fā)明的復(fù)蘇液中。加入這些成分可以獲得所需的生理效應(yīng)，如維持規(guī)律的心臟收縮活 性、停止心肌纖維振顫或完全抑制心肌或心臟肌肉的收縮活性。心臟麻痹劑是導(dǎo)致心肌收縮停止的物質(zhì)，包括麻醉劑如利多卡因、普魯卡因和奴 佛卡因，以及一價(jià)陽(yáng)離子如鉀離子，其濃度足以實(shí)現(xiàn)心肌收縮的抑制。足以獲得該效果的鉀 離子的濃度通常超過15mM。在受試體復(fù)蘇的過程中，該受試體可再灌注上述的復(fù)蘇液與由受試體保留的或得 自供血者的血液的混合物。灌注全血直至該受試體獲得可接受的血細(xì)胞比容，通常超過約 30%的血細(xì)胞比容。當(dāng)獲得可接受的血細(xì)胞比容時(shí)，停止灌注，使用常規(guī)程序封閉外科傷口 后受試體復(fù)蘇。本發(fā)明的另一個(gè)方案涉及使用所述復(fù)蘇液保持哺乳動(dòng)物供體生物體器官的生物 學(xué)完整性的方法。在一個(gè)實(shí)施方式中，使受試體的器官冷卻，使用泵式循環(huán)裝置如離心泵、 滾子泵、蠕動(dòng)泵或其他已知的可得到的循環(huán)泵將復(fù)蘇液灌注至受試體的器官中。循環(huán)裝置 經(jīng)由通過外科方法插入合適的靜脈和動(dòng)脈中的插管與受試體的器官連接。當(dāng)將復(fù)蘇液施用 至冷卻的受試體的器官時(shí)，通常經(jīng)動(dòng)脈插管進(jìn)行施用，并經(jīng)靜脈插管由受試體排出，然后丟 棄或存貯。實(shí)施例提出下面的實(shí)施例是為了給本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供關(guān)于如何實(shí)施本發(fā)明的 方法的完整的公開和描述，并非意圖限制本發(fā)明的范圍。已經(jīng)努力確保所用數(shù)字(例如量、 溫度等)的準(zhǔn)確性，不過仍應(yīng)計(jì)入一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另作說明，份是重量份，分子 量是重均分子量，溫度是攝氏度，壓力是大氣壓或接近大氣壓。實(shí)施例1 方法和材料月旨質(zhì)乳液20% IntralipicK 由 Baxter International Inc.，Deerfield, IL 營(yíng) 銷出售)用作模型脂質(zhì)乳液。其由20%豆油、1.2%蛋黃磷脂、2. 25%甘油、水和將pH調(diào)節(jié) 至8的氫氧化鈉構(gòu)成。Intralipid的氧含量的確定在溶解氣分析前，將蒸餾水、林格氏乳酸鹽(RL)和 Intralipid(20% )(各為Iml)的樣品放在2. Oml的管中與空氣接觸30分鐘。將從這些液
9體中的每一種取出的50 μ L體積注入37 V的Sievers凈化容器中，所述容器容納有36ml的 適度酸性溶液，所述溶液由32ml IM HCL和4ml 0. 5M抗壞血酸構(gòu)成。該溶液用高純度氦連 續(xù)凈化以將樣品釋放的任何氧輸送至質(zhì)譜儀(HP 5975)進(jìn)行直接氣體分析。注入RL和脂 質(zhì)乳液樣品時(shí)在m/z = 32產(chǎn)生的信號(hào)使用Peakfit進(jìn)行積分，并與由蒸餾水獲得的信號(hào)進(jìn) 行對(duì)比。動(dòng)物和動(dòng)物程序使用稱重為27克至42克的雄性及雌性小鼠。品系為⑶_1或 NFR2。所有的對(duì)比利用相同的品系。用皮下施用的氯胺酮/賽拉嗪麻醉藥對(duì)小鼠進(jìn)行麻 醉。為防止由于麻醉劑的心臟抑制效果導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏移，在所需麻醉劑多于計(jì)算劑量的罕 見情況中中斷實(shí)驗(yàn)，對(duì)小鼠實(shí)施安樂死。一旦確認(rèn)小鼠進(jìn)行了良好麻醉，在頸動(dòng)脈插入導(dǎo) 管。在一分鐘內(nèi)移出盡可能多的血液。在這導(dǎo)致?lián)p失了 55%的血量和沒有任何灌注的情況 下100%的致死率。移出血液之后即刻用一分鐘實(shí)施灌注。以與已經(jīng)移出的血液量等同的體積施用RL或Intralipid。使用Columbus Instruments (Columbus, OH)制造的BP_2監(jiān)測(cè)器測(cè)定頸動(dòng)脈處的血壓。該監(jiān)測(cè)器以電壓的 方式測(cè)定血壓。制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用下式將測(cè)定的電壓轉(zhuǎn)化為血壓(BP)BP =[電壓-0. 1006]/0. 0107不對(duì)小鼠施用升溫措施。不采取任何措施支持呼吸。統(tǒng)計(jì)分析使用學(xué)生非配對(duì)t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。實(shí)施例2 復(fù)蘇液的氧含量Intralipid 20 % I. V. Fat Emulsion (由 Baxter International Inc., DeerfielcUL營(yíng)銷出售)用作樣品復(fù)蘇液(RF)。Intralipid 的組成為20%的豆油、1. 2% 的蛋黃磷脂、2. 25%的甘油、水和調(diào)節(jié)至pH為8的氫氧化鈉。用質(zhì)譜法測(cè)定RF中的氧含量。 如表I中所示，RF的氧含量是林格氏乳酸鹽(RL)的幾乎兩倍，后者是大量失血時(shí)灌注的標(biāo) 準(zhǔn)復(fù)蘇液。RL的氧含量與水的氧含量相當(dāng)。如表II中所示，通過使氧氣經(jīng)復(fù)蘇液鼓泡約1 分鐘，RF的氧含量增大五倍。載氧后，與具有最小可接受血紅蛋白水平(即7.0g/dl)的血 液的氧含量比較，RF的氧含量是有利的。表III顯示出具有更高脂質(zhì)含量的RF的理論氧含
Mo表I .林格氏乳酸鹽和Intralipid 20%的氧含量 *氧含量以相對(duì)于水中氧含量的量表示。表II . Iatm時(shí)各種液體中的氧溶解度 表III .具有更高脂質(zhì)濃度的RF的理論氧含量
實(shí)施例3 復(fù)蘇液對(duì)恢復(fù)嚴(yán)重失血性休克的小鼠的動(dòng)脈壓的作用在小鼠中確定實(shí)施例2中的RF對(duì)血壓的作用。麻醉小鼠，并將插管放入頸動(dòng)脈。 全部可被除去的血液經(jīng)由頸動(dòng)脈除去。除去血液后，提供與所除去血液的量相等的體積的 RL或RF。6只小鼠分在RF組，6只小鼠分在RL組。觀察期為1小時(shí)。給予RL的小鼠中的 兩只在10分鐘內(nèi)死亡。所有給予RF的小鼠在整個(gè)一小時(shí)的觀察期內(nèi)均存活，直到在1至4 小時(shí)實(shí)施安樂死。當(dāng)動(dòng)物由麻醉中開始蘇醒或者在觀察期的結(jié)束時(shí)，均對(duì)其實(shí)施安樂死以 避免痛苦。圖1和2顯示了出血后和灌注RL或RF后在時(shí)間=0、30和60分鐘時(shí)的收縮壓之 間(圖1)和舒張壓之間(圖2)的差異。Y軸表示灌注后獲得的血壓減去出血后的血壓，以 mm Hg表示。X軸表示灌注后的具體時(shí)間。利用未配對(duì)的雙尾t檢驗(yàn)分析所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì) 顯著性。這些圖顯示RF提升的血壓高于RL。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，給予移出血量的兩倍體積的RF。這導(dǎo)致血壓更大的增加，如圖 3和4中所示。圖上的點(diǎn)表示6只小鼠的平均值+/-SE。Y軸表示灌注Ix血量(菱形)或 2x血量(方形)RF之后的收縮壓(圖3)和舒張壓(圖4)減去出血前的基線壓力的差異， 以mm Hg表示。因而，在該圖中，0表示出血前實(shí)驗(yàn)開始時(shí)的血壓。X軸顯示灌注后的具體 時(shí)間。2x血量使血壓升高并高于Ix血量灌注后達(dá)到的血壓(p<0.01)。此外，灌注2x移 出血量后獲得的血壓超過出血前存在的血壓。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，通過將白蛋白(Sigma Aldrich，99%純度，無(wú)脂肪酸，基本上無(wú) 球蛋白，目錄號(hào)A3782-5G)溶解在Intralipid 20%中至終濃度為50mg/ml，制備了包含 Intralipid 20%和5% (重量/體積)白蛋白的復(fù)蘇液。使用上述的實(shí)驗(yàn)規(guī)程測(cè)試該含 有白蛋白的新型復(fù)蘇液(RFA)。以50mg/ml溶解有白蛋白的生理鹽水(NSA)和林格氏乳酸 鹽(RLA)以及引流血(即，已經(jīng)由小鼠取出的血液)用作對(duì)照。圖5中，Y軸顯示通過灌注 各種液體達(dá)到的出血前的收縮壓的百分比。X軸表示灌注后的具體時(shí)間。數(shù)據(jù)表明RFA在 維持血壓方面甚至優(yōu)于引流血。舒張壓(未顯示)也得到了類似的結(jié)果。對(duì)各時(shí)間點(diǎn)，以 6至7只小鼠的平均值繪圖。在5、15和30分鐘時(shí)引流血和RFA之間的差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著 的(P < 0. 05)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與下述事實(shí)相一致，S卩，復(fù)蘇液中的脂質(zhì)膠束能夠施加滲透力，并吸 收有血管效力的介導(dǎo)劑如前列腺素、一氧化氮、白細(xì)胞三烯和血小板活化因子。本文中所用的術(shù)語(yǔ)和說明僅為示例而陳述，并非意在限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將 認(rèn)識(shí)到，在本發(fā)明的權(quán)利要求及其等同方式中所限定的精神和范圍內(nèi)可以有許多變化，其 中，除非另作說明，所有的術(shù)語(yǔ)均以其最寬泛的意義來理解。
1權(quán)利要求
一種用于治療人或動(dòng)物受試體的與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的方法，所述方法包括對(duì)需要該治療的所述受試體施用有效量的包含脂質(zhì)成分和水性載體的脂質(zhì)類復(fù)蘇液，其中所述脂質(zhì)成分與所述水性載體形成乳液。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況包括血容量不足和缺血。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述復(fù)蘇液還包含血漿成分。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述血漿成分是白蛋白。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述白蛋白具有約5%(重量/體積)的終濃度。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述復(fù)蘇液還包含選自由滲透壓劑、類晶體劑、緩沖 劑、糖類、鹽、維生素、抗體和表面活性劑組成的組的至少一種添加劑。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述復(fù)蘇液還包含緩沖劑。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述緩沖劑包含濃度為0.OlM至0. 2M的組氨酸。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括 在對(duì)所述受試體施用之前使所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液氧合。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中通過使含氧的氣體通過所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液鼓泡1分 鐘至5分鐘而使所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液氧合。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中通過使包含90%至100%(體積/體積)氧的氣體 通過所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液鼓泡約1分鐘而使所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液氧合。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述復(fù)蘇液經(jīng)靜脈內(nèi)或者動(dòng)脈內(nèi)施用。
13.一種用于保持哺乳動(dòng)物供體生物體的器官的生物學(xué)完整性的方法，所述方法包括用有效量的包含脂質(zhì)成分和水性載體的脂質(zhì)類復(fù)蘇液灌注所述器官，其中所述脂質(zhì)成 分與所述水性載體形成乳液。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，所述方法還包括 在灌注之前使所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液氧合。
15.一種脂質(zhì)類復(fù)蘇液，所述復(fù)蘇液包含 經(jīng)氧合的脂質(zhì)乳液；和緩沖劑。
16.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，所述復(fù)蘇液還包含血漿成分。
17.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，其中所述脂質(zhì)乳液包含20%(重量/體積)的純化 的豆油、1.2% (重量/體積)的純化的卵磷脂和22% (重量/體積)的無(wú)水甘油，并且其 中所述血漿成分為約5%(重量/體積)的白蛋白。
18.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，其中所述緩沖劑包含組氨酸。
19.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，所述復(fù)蘇液還包含選自由滲透壓劑、類晶體劑、緩沖 劑、糖類、鹽、維生素、抗體和表面活性劑組成的組的至少一種添加劑。
20.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，所述復(fù)蘇液還包含濃度為0.OlM至0. 2M的組氨酸。
21.如權(quán)利要求15所述的復(fù)蘇液，所述復(fù)蘇液還包含硫化氫或一氧化碳。
22.一種復(fù)蘇用試劑盒，所述試劑盒包括包含脂質(zhì)成分和水性載體的脂質(zhì)類復(fù)蘇液；和執(zhí)合裝直ο
23.如權(quán)利要求22所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述氧合裝置是容納氧合用氣體的容器。
24.如權(quán)利要求23所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述氧合用氣體包含90%至100%(體 積/體積)的氧氣。
25.如權(quán)利要求23所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述氧合用氣體包含氧氣、硫化氫和一 氧化碳的混合物。
26.如權(quán)利要求22所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液包含脂質(zhì)乳液，所述 脂質(zhì)乳液包含20% (重量/體積)的純化的豆油、1.2% (重量/體積)的純化的卵磷脂和 22% (重量/體積)的無(wú)水甘油。
27.如權(quán)利要求26所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述脂質(zhì)類復(fù)蘇液還包含約5%(重量 /體積)的白蛋白。
28.如權(quán)利要求22所述的復(fù)蘇用試劑盒，其中所述氧合裝置包括氣泵。
29.如權(quán)利要求22所述的復(fù)蘇用試劑盒，所述試劑盒還包括靜脈輸注(IV)裝置。
全文摘要
本發(fā)明公開了用脂質(zhì)類復(fù)蘇液治療與缺乏血液供應(yīng)有關(guān)的狀況的方法。所述復(fù)蘇液包含脂質(zhì)成分和水性載體。所述脂質(zhì)成分與所述水性載體形成乳液。所述復(fù)蘇液可用于增加血壓并向組織運(yùn)載氧。所述復(fù)蘇液還可用以保持用于移植的供體器官的生物學(xué)完整性。
文檔編號(hào)A61P7/06GK101917970SQ200880122367
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2008年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月22日
發(fā)明者卡斯伯特·O·辛普金斯 申請(qǐng)人:卡斯伯特·O·辛普金斯