專利名稱：具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有降低血中尿酸值作用的乳酸菌及其利用方法。另外，本發(fā)明還 涉及含有上述乳酸菌的用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的食品或藥品。
背景技術(shù)：
高尿酸血癥是在環(huán)境因素(生活習(xí)慣)和遺傳因素的影響下，發(fā)生尿酸排泄減少 或尿酸產(chǎn)生過(guò)剩，從而導(dǎo)致的血中的尿酸過(guò)剩的狀態(tài)。雖然高尿酸血癥有時(shí)沒(méi)有自覺癥 狀，但也可引起痛風(fēng)、腎功能障礙、尿路結(jié)石、動(dòng)脈硬化癥等嚴(yán)重的并發(fā)癥。作為高尿 酸血癥的代表性并發(fā)癥痛風(fēng)，其表現(xiàn)的主要癥狀是伴隨劇烈疼痛的急性關(guān)節(jié)炎。過(guò)去， 痛風(fēng)被稱為“帝王之病”，是頻繁且大量攝取肉、魚或酒精等的階層的“奢侈病”，但 近年來(lái)，隨著飲食生活的變化，這種病的發(fā)生呈逐年增加趨勢(shì)。據(jù)說(shuō)現(xiàn)在在日本，痛風(fēng) 患者數(shù)達(dá)30 40萬(wàn)人，高尿酸血癥患者數(shù)估計(jì)在600萬(wàn)人，因此對(duì)高尿酸血癥的預(yù)防和 治療的關(guān)注增加。高尿酸血癥的預(yù)防和治療可以采用飲食療法、運(yùn)動(dòng)療法、藥品以及這幾種方法 的組合通過(guò)控制血中的尿酸值來(lái)進(jìn)行。特別是，限制熱量的攝取是高尿酸血癥預(yù)防及 治療方法中最經(jīng)常被選擇的方法之一，但持續(xù)進(jìn)行嚴(yán)格的熱量限制并不容易。作為改善 這種狀況的方法，提出了下述方法經(jīng)口(例如以藥品、飲食品的形式)攝取分解嘌呤 體的乳酸菌、酵母等微生物，在腸道中分解由食物中攝取來(lái)的嘌呤體，減少其向體內(nèi)的 吸收，從而降低血清尿酸值(專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)1)。乳酸菌自古以來(lái)就被作為 食品和藥品使用，其對(duì)人體的安全性高，因此對(duì)攝取乳酸菌的副作用的擔(dān)憂小，可成為 用于預(yù)防、治療高尿酸血癥的有效方法。另外，如上所述，高尿酸血癥的預(yù)防和治療 方法的第一選擇是飲食療法，如果把能夠控制尿酸值的乳酸菌作成食品攝入，則可成為 非常實(shí)際而且有力的新型的預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的方法。但是，上述文獻(xiàn)中報(bào) 告的具有嘌呤體分解能力的乳酸菌發(fā)酵乳桿菌(lactobacillus fermentum)、戊糖乳桿菌 (Lactobacillus pentosus)具有氣體產(chǎn)生能力，從應(yīng)用于飲食品及藥品的觀點(diǎn)出發(fā)，不能說(shuō) 是合適的菌種。另外，本發(fā)明申請(qǐng)中的相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)情報(bào)如下所示。專利文獻(xiàn)1 W02004/112809非專利文獻(xiàn)1:日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì)*一 A《一 ^日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì)年次大會(huì)講演 発表尹一夕《一 7 (http://isbba.bioweb.ne.jp/jsbba_db/index.html) 「日本農(nóng)蕓化學(xué)會(huì) 2004.03.30 —般講演、池永武、久米村惠他食事性高尿酸血癥 ，”卜O血中尿 酸值^及fft乳酸菌O影響」

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是鑒于上述狀況而完成的，本發(fā)明要解決的課題是提供適于飲食品和藥 品用途的能夠預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的乳酸菌，而且同時(shí)提供使用了上述乳酸菌的用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的組合物。為了解決上述課題，本發(fā)明人等進(jìn)行了堅(jiān)持不懈的努力。首先，在肌苷和鳥苷 存在下培養(yǎng)各種乳酸菌，測(cè)定上述核苷的消耗量和分解產(chǎn)物(次黃嘌呤、鳥嘌呤)的產(chǎn) 生量，挑選核苷分解能力顯著的多種乳酸菌。將通過(guò)上述挑選被判斷為核苷分解能力高 的乳酸菌經(jīng)口給予用含有嘌呤體的飼料喂養(yǎng)的大鼠，測(cè)定該大鼠的一般狀況和血清尿酸 值，觀察給予乳酸菌對(duì)血清尿酸值的影響。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)了能夠顯著抑制血清尿酸值上升 的乳酸菌格氏乳桿菌OLL2922 (Lactobacillus gasseri OLL2922)。此外，本發(fā)明人等還 利用上述乳酸菌制備酸奶，并確認(rèn)了上述乳酸菌適用于含有酸奶的食品的加工。本發(fā)明 的乳酸菌由于能夠抑制血清尿酸值的上升，因此可以有效地用作用于預(yù)防和/或治療高 尿酸血癥或痛風(fēng)的藥品。另外，本發(fā)明的乳酸菌通過(guò)經(jīng)口給予的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了其具有抑制 血清尿酸值上升的效果，而且確認(rèn)了也適于實(shí)際的食品加工，因此在可以用作食品方面 具有很高的實(shí)用性。即，本發(fā)明涉及可預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的乳酸菌及其應(yīng)用， 具體而言，提供下述發(fā)明。更具體地，本發(fā)明提供下述的(1) (14)。(1) 一種格氏乳桿菌乳酸菌OLL2922菌株，其以保藏號(hào)NITE BP-462進(jìn)行了保藏。(2) 一種用于抑制血中尿酸值上升的飲食品或藥品，其含有上述(1)所述的乳酸 菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(3) 一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的飲食品或藥品，其含有上述(1)所述 的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(4) 一種用于抑制嘌呤體的吸收的飲食品或藥品，其含有上述(1)所述的乳酸 菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(5) 一種抑制對(duì)象對(duì)食品中所含的嘌呤體進(jìn)行攝取的方法，其特征在于，給予上 述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物(6) 一種抑制對(duì)象的血中尿酸值上升的方法，其特征在于，給予上述(1)所述的 乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(7) 一種治療對(duì)象的高尿酸血癥的方法，其特征在于，給予上述(1)所述的乳酸 菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。(8) 一種嘌呤體降低了的飲食品的制造方法，其包括使飲食品的原料或中間產(chǎn)品 與上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物接觸的工序。(9)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于抑制血 中尿酸值上升的飲食品和/或藥品中的用途。(10)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于預(yù)防和 /或治療高尿酸血癥的飲食品或藥品中的用途。(11)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于抑制嘌 呤體的吸收的飲食品和/或藥品中的用途。(12)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于抑制對(duì)象 對(duì)食品中所含的嘌呤體進(jìn)行攝取。(13)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于抑制對(duì)象的血中尿酸值上升。(14)上述(1)所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于治療對(duì)象 的高尿酸血癥。


圖1為表示在嘌呤體(肌苷)存在下培養(yǎng)各種乳酸菌時(shí)各乳酸菌的嘌呤體分解能 力的圖。將確認(rèn)嘌呤體分解率高的菌株(星號(hào))作為動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)對(duì)象。圖2為表示在嘌呤體(鳥苷)存在下培養(yǎng)各種乳酸菌時(shí)各乳酸菌的嘌呤體分解能 力的圖。將確認(rèn)嘌呤體分解率高的菌株(星號(hào))作為動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)對(duì)象。圖3為用(次黃嘌呤量+鳥嘌呤量)/5-溴尿嘧啶量評(píng)價(jià)各種乳酸菌的嘌呤體分 解能力的圖。圖4為表示對(duì)飲食性高尿酸血癥動(dòng)物模型經(jīng)口給予嘌呤體分解能力高的乳酸菌 (L.fermentum, L.brevis)并測(cè)定血清尿酸值而得到的結(jié)果的圖。分別表示第1組陰性 組、第2組對(duì)照組、第3組菌體給予組的結(jié)果。圖5為表示L.gasseri OLL2922菌株和L.gasseri OLL2959菌株的基因擴(kuò)增產(chǎn)物的
比較的照片。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的新型的格氏乳桿菌乳 酸菌、OLL2922菌株。本發(fā)明是基于由本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)的具有嘌呤體分解能力且不 具有氣體產(chǎn)生能力的格氏乳桿菌乳酸菌OLL2922菌株的發(fā)明。乳桿菌(Lactobacillus)屬是乳酸菌中具有代表性的菌屬之一，其包含80種以 上的菌種。作為乳桿菌屬中包含的菌種的例子，可列舉出德氏乳桿菌保加利亞亞種 (Lactobacillus delbrueckii subsp.burgalicus)、德氏乳桿菌乳亞禾中(Lactobacillus delbraeckii subsp.lactis)、畐1J 干酪乳桿菌畐1J 干酪亞禾中(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)、瑞 士 乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、瑞士乳桿菌約古特亞種(Lactobacillus helveticus subsp. jugurti)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、 嗜淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovoras)、雞乳桿菌(Lactobacillus gallinaram)、格氏 乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、口乳桿菌(Lactobacillus oris)、干酪乳桿菌鼠李糖亞種 (Lactobacillus casei subsp.rhamnosus)、約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、發(fā)酵乳桿 菌(Lactobacillus fermentum)、短乳桿菌(Lactobacillus brevis)。本發(fā)明的乳桿菌屬乳 酸菌只要是具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的乳桿菌屬乳酸菌，則可以是 任一菌種，但優(yōu)選是格氏乳桿菌，更具體地為格氏乳桿菌OLL2922菌株(保藏號(hào) NITEBP-462)。本發(fā)明的格氏乳桿菌(以下根據(jù)情況也簡(jiǎn)記為“L.gasseri” )乳酸菌OLL2922菌 株是具有具有嘌呤體分解能力而不具有氣體產(chǎn)生能力這樣的特征的L.gasseri乳酸菌。本 發(fā)明人等對(duì)大量的乳酸菌有無(wú)嘌呤體分解能力和氣體產(chǎn)生能力進(jìn)行了研究，具體地發(fā)現(xiàn) 了命名為L(zhǎng).gasseri OLL2922的L.gasseri乳酸菌具有嘌呤體分解能力而不具有氣體產(chǎn)生能 力。此外，通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)還弄清楚了 L.gasseri OLL2922顯著抑制血中的尿酸值上升。
嘌呤體是構(gòu)成核酸的成分，通過(guò)嘌呤的從頭(de novo)合成途徑、補(bǔ)救合成途 徑、及膳食中的核蛋白等提供給機(jī)體，不需要的嘌呤體則在肝臟中被代謝排出。在人 類、高等靈長(zhǎng)類動(dòng)物、鳥類、爬行動(dòng)物等中，尿酸是嘌呤體的最終代謝產(chǎn)物。本說(shuō)明書中的嘌呤體是指具有嘌呤骨架的化合物。作為嘌呤體的代表例子，可 列舉出嘌呤核苷酸(腺苷酸、脫氧腺苷酸、鳥苷酸、脫氧鳥苷酸)，嘌呤核苷(腺苷、脫 氧腺苷、鳥苷、脫氧鳥苷)，嘌呤堿基(腺嘌呤、鳥嘌呤)，含有嘌呤堿基的寡核苷酸和 多核苷酸。嘌呤堿基除了構(gòu)成核酸以外，還可構(gòu)成ATP、GTP> cAMP、cGMP、輔酶 A、FAD、NAD等多種生物體成分。本說(shuō)明書中，只要具有嘌呤骨架，則這樣的生物體 成分全部包含在嘌呤體中。生物體內(nèi)的嘌呤體代謝為尿酸。從嘌呤體到尿酸的代謝路徑已廣為人知。AMP 在5’ -核苷酸酶的作用下變成腺苷，腺苷經(jīng)過(guò)肌苷轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤。GMP在5’ -核 苷酸酶的作用下變成鳥苷后，轉(zhuǎn)變成鳥嘌呤。次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下、鳥嘌 呤在鳥嘌呤脫氨酶的作用下均代謝為黃嘌呤，黃嘌呤進(jìn)一步在黃嘌呤氧化酶的作用下轉(zhuǎn) 變?yōu)槟蛩帷１景l(fā)明中的嘌呤體分解能力是指分解至少一種嘌呤體的能力，而不管分解產(chǎn)物 是否具有嘌呤骨架。即，將某嘌呤體分解成不具有嘌呤骨架的化合物的能力及將某嘌呤 體分解成其他嘌呤體(具有嘌呤骨架的化合物)的能力都屬于本發(fā)明的嘌呤體分解能力。本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌可采用公知的方法進(jìn)行分離。例如可通過(guò)下述方法進(jìn) 行分離利用人等哺乳類的糞便培養(yǎng)細(xì)菌，根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)菌的形態(tài)、生物學(xué)特征等分離 出L.gasseri乳酸菌，檢測(cè)有無(wú)嘌呤體分解能力，選擇具有嘌呤體分解能力且不具有氣體 產(chǎn)生能力的L.gasseri乳酸菌。嘌呤體分解能力的檢測(cè)和氣體產(chǎn)生能力的檢測(cè)可采用公知 的方法，關(guān)于嘌呤體分解能力，可例舉出后文實(shí)施例1的方法。另外，關(guān)于氣體產(chǎn)生能 力，可例舉出下述方法等將培養(yǎng)基(乳桿菌的情況下通常使用MRS培養(yǎng)基)和德拉姆 管放入試驗(yàn)管中，在121°C下高壓滅菌15分鐘，接種10 μ 1已充分生長(zhǎng)的培養(yǎng)液，在最適 溫度(根據(jù)菌株不同為30 37°C)下培養(yǎng)1 3天，然后肉眼觀察德拉姆管內(nèi)有無(wú)積存 的氣體。為了培養(yǎng)本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌，可以采用通常適用于乳酸桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng) 基，也可以采用含有葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖、纖維二糖 等碳源，肉提取物、蛋白胨、酵母提取物、酪蛋白、乳清蛋白質(zhì)等氮源，硫酸鎂、硫酸 鐵、硫酸錳等無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)素的培養(yǎng)基。作為合適的一個(gè)例子，可列舉出Lactobacilli MRS Broth(Difco)。關(guān)于培養(yǎng)條件，只要是腸內(nèi)乳酸菌能夠生長(zhǎng)的條件，則沒(méi)有特殊限制， 優(yōu)選的條件例如為pH5.0 pH8.0、溫度20°C 45°C;更優(yōu)選的條件為厭氧條件、 pH5.0 pH7.0、溫度 30°C 40°C。本發(fā)明人等將本發(fā)明的“具有嘌呤體分解能力且不具有氣體產(chǎn)生能力的 L.gasseri乳酸菌OLL2922菌株”保藏于日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微 生物保藏中心。以下記載了特定保藏的內(nèi)容。(1)保藏機(jī)構(gòu)名稱日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏 中心(NPMD)(2)聯(lián)系地址日本國(guó)千葉果木更津市如f ^鎌足2-5-8郵便番號(hào)292-0818電話番號(hào) 0438-20-5580(3)保藏號(hào)NITEBP-462(4)用于識(shí)別的標(biāo)識(shí)格氏乳桿菌OLL2922菌株格氏乳桿菌OLL2922菌株(保藏編號(hào)NITE BP-462)為革蘭氏陽(yáng)性桿菌，在 Lactobacilli MRS Agar、Difco上的菌落形態(tài)為圓形、淡黃色、扁平狀。其生理學(xué)特征為
同型乳酸發(fā)酵形式、具有在45°C下的生長(zhǎng)性。在菌體增殖中，優(yōu)選將培養(yǎng)中的培養(yǎng)基的 pH維持在6.0 7.0。本發(fā)明人等如后所述通過(guò)將本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌經(jīng)口給予動(dòng)物模型，確認(rèn) 了該乳酸菌具有抑制血中尿酸值上升的效果。因此，本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌能夠用于 抑制血中尿酸值的上升或者用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥。另外，利用本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌的嘌呤體分解能力，能夠在給予了本發(fā)明 的乳酸菌的對(duì)象體內(nèi)抑制食品中所含的嘌呤體的攝取。在本發(fā)明中，“對(duì)象”可列舉出血中尿酸值上升或具有這種可能的生物體，或 者具有高尿酸血癥或具有這種可能的生物體等?？杀唤o予本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌的生 物體沒(méi)有特殊限定，其包括動(dòng)物(例如人、家畜動(dòng)物種類、野生動(dòng)物)。本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌可用于制造用于抑制血中尿酸值上升的飲食品或藥 品、用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的藥品或飲食品。利用本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌制作的飲食品的種類和類別沒(méi)有限制，可以是功 能性食品、特定保健用食品、健康食品、護(hù)理用食品，也可以是點(diǎn)心、乳酸菌飲料、奶 酪和酸奶等乳制品，調(diào)味料等。對(duì)飲食品的形態(tài)也沒(méi)有限制，可以采用固體、液體、流 態(tài)食品狀、果凍狀、片狀、顆粒狀、膠囊狀等可通常流通的所有的飲食品的形態(tài)。上述 飲食品的制造可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行。在上述飲食品的制造中，只要 不妨礙乳酸菌的生長(zhǎng)，還可以添加糖類、蛋白質(zhì)、脂肪、食物纖維、維生素類、生物體 必需的微量金屬(硫酸錳、硫酸鋅、氯化鎂、碳酸鉀等)、香料或其他配合物。本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物除了可以如上所述加 工成含有乳制品和發(fā)酵乳的一般飲食品外，還可以用作制造酸奶或奶酪等乳制品、發(fā)酵 乳用的引子(starters)。作為本發(fā)明中使用的乳酸菌處理物，可列舉出例如培養(yǎng)物、濃縮 物、糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物、液態(tài)物、稀釋物、 破碎物等。另外，作為乳酸菌，活菌體、濕潤(rùn)菌體、干燥菌體等均適宜使用。作為引 子的時(shí)候，只要不妨礙本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌的生長(zhǎng)、繁殖，并且不妨礙乳制品的制 造，則也可以混合其他微生物。例如，可以與主要作為酸奶用乳酸菌的菌種的德氏乳桿 菌保加利亞亞種、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、嗜酸乳桿菌等混合，另外， 也可以和通常用作酸奶用或奶酪用的菌種混合作為引子使用。利用上述引子的乳制品、 發(fā)酵乳的制造可以按照常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行。例如，在加溫、混合、均質(zhì)化、殺菌處理后冷 卻的乳或乳制品中混入上述引子，經(jīng)過(guò)發(fā)酵、冷卻制成純酸奶。本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物可與生理學(xué)上可容許 的載體、賦形劑或稀釋劑等混合，以醫(yī)藥組合物的形式經(jīng)口或非經(jīng)口給予，但優(yōu)選的給 予方法是經(jīng)口給予。作為經(jīng)口給予制劑，可制成公知的各種劑型，例如顆粒劑、散劑、 片劑、丸劑、膠囊劑、液體劑、糖漿劑、乳劑、懸浮劑、錠片(troche)等劑型。另外，通過(guò)利用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制成的腸溶性制劑，可不受胃酸的影響，從而將本 發(fā)明的L.gasseri乳酸菌更高效地運(yùn)送到腸道。利用本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌制造的藥品以及飲食品，有望憑借飲食品中上述 菌的作用，發(fā)揮抑制血中尿酸值上升的效果及預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的效果。此 外，也期待上述藥品和飲食品在給予對(duì)象的體內(nèi)發(fā)揮抑制食品中所含的嘌呤體的攝取的 效果。另外，利用本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌的嘌呤體分解能力，可以制造嘌呤體量降 低了的飲食品。本發(fā)明的嘌呤體量降低了的飲食品的制造方法包含使本發(fā)明的L.gasseri 乳酸菌與含有嘌呤體的飲食品的原料或中間產(chǎn)品接觸的工序。通過(guò)該工序，可以高效地 降低該原料或中間產(chǎn)品中含有的嘌呤體的量。上述工序優(yōu)選在本發(fā)明的L.gasseri乳酸菌 能夠生存或利用L.gasseri乳酸菌所述原料或中間產(chǎn)品能夠發(fā)酵的條件下進(jìn)行。本發(fā)明的 制造方法除了上述工序外，還可包含粉碎工序、混合工序、干燥工序、殺菌以及填充工 序等目標(biāo)飲食品的通常的制造工序。利用本發(fā)明的方法制造的飲食品的種類和類別沒(méi)有 限制，例如，可以是功能性食品、特定保健用食品、健康食品、護(hù)理用食品，也可以是 一般的食品，例如可以是被分類為嗜好品的食品，但對(duì)于具有需要限制嘌呤體攝入量的 疾病或癥狀的患者或上述疾病或癥狀的準(zhǔn)患者是非常有用的日常性或輔助性飲食品。本 發(fā)明的方法使得需要限制嘌呤體接種的或希望限制的對(duì)象可以安全地接種以往嘌呤體含 量多的食品。需要說(shuō)明的是，本說(shuō)明書中引用的全部的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)作為參考引入本說(shuō)明書中。實(shí)施例以下基于實(shí)施例更具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的限定。另 外，在實(shí)施例中，菌株名中記有JCM的菌株是從日本獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所生物 資源中心的微生物材料開發(fā)室獲得的標(biāo)準(zhǔn)株、菌株名中記有ATCC的菌株是從American Type Culture Collection獲得的標(biāo)準(zhǔn)株、菌株名中記有MEP的菌株是明治乳業(yè)株式會(huì)社擁 有的菌株。[實(shí)施例1]關(guān)于乳酸菌的降低尿酸作用的體外的實(shí)驗(yàn)方法采用以下的方法對(duì)各種乳酸菌有無(wú)嘌呤體分解能力進(jìn)行研究。各種乳酸菌(菌體)采用Difco Lactobacilli MRS Broth (BD制)培養(yǎng)基，與氧吸 附劑(AnaemPack)(三菱氣體株式會(huì)社制)一起裝入密閉容器中，在溫度37°C下厭氧培養(yǎng) 過(guò)夜。培養(yǎng)后的菌體懸浮液在轉(zhuǎn)速為3000rmp、溫度為4°C下離心分離10分鐘，沉淀回 收(集菌)菌體。利用上述菌體，采用0.1M的磷酸鈉緩沖液制備1 X IO9CFUAnL的菌體懸浮液。各種菌體懸浮液制備好后，在各種菌體懸浮液中分別加入肌苷和鳥苷，使其分 別達(dá)到1.25mM。將這些菌體懸浮液放入37°C的恒溫槽內(nèi)，以水平轉(zhuǎn)速140rpm振蕩培養(yǎng) 30分鐘或1小時(shí)。對(duì)振蕩培養(yǎng)后的菌體懸浮液(反應(yīng)液)，采用HPLC以5-溴尿嘧啶為內(nèi)標(biāo)測(cè)定 核苷的消耗量和作為核苷分解物的堿基(次黃嘌呤和鳥嘌呤)的生成量。向流動(dòng)相A的 780 μ L中加入反應(yīng)液200 μ L、作為內(nèi)標(biāo)的5-溴尿嘧啶(1.6mg/mL) 20 μ L后混合。將該混合液用過(guò)濾器(孔徑為0.45 μ m)過(guò)濾后，將濾液50 μ L注入到HPLC中。HPLC的具 體操作條件如下。HPLC Waters alliance 2690色譜柱CAPCELLPAK C18SG120、粒徑為 5 μ m、柱尺寸為 4.6 X 250mm(資生
堂)流動(dòng)相A 25mM KH2PO4 (0.1 % 甲醇)B 25mMKH2P04(0.1%甲醇)/甲醇(75 25)梯度 A/B (min) 100/0 (O)-IO 0/0(10)-20/80(20)-20/80(25)-100/0(26)-100/0(40)檢測(cè)器光電二極管陣列(Waters 996)檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm流速lmL/min柱溫常溫結(jié)果示于圖1 3。各化合物的定量根據(jù)HPLC圖譜中的峰面積值進(jìn)行。另外， 圖1及圖2的分解率根據(jù)下式計(jì)算得出。分解率=100_(肌苷或鳥苷的量/空白中的肌苷或鳥苷的量)X 100另外，圖3的計(jì)算方法如下。(次黃嘌呤量+鳥嘌呤量)/5-溴尿嘧啶量根據(jù)圖1 3的結(jié)果，挑選可判斷為核苷分解能力顯著的乳酸菌。[實(shí)施例2]關(guān)于乳酸菌的降低尿酸作用的體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)方法按照現(xiàn)有文獻(xiàn)(非專利文獻(xiàn)1)中記載的方法，制作飲食性高尿酸血癥動(dòng)物模 型，研究微生物(乳酸菌)對(duì)該動(dòng)物的血清尿酸值的影響。上述方法具體為下述方法 制備含有2.5重量％的氧嗪酸鉀和1.0重量％的RNA的混合飼料，喂養(yǎng)大鼠，比較陰性組 和對(duì)照組攝食后的血中尿酸值。本方法的動(dòng)物模型在經(jīng)口給予尿酸生成的阻滯劑別嘌呤 醇后，可知該動(dòng)物模型的血中尿酸值被顯著抑制(食品機(jī)能研究二 Λ— * (第14號(hào))、 2005年3月9日発行、(株)乂卟* \ >夕〗J、乂 r ”環(huán)境検查七 > 夕一、http://www. m-cleantec.com/gizyutu/news_0503.html)。上述內(nèi)容顯示作為針對(duì)高尿酸血癥的食品的有 效性的評(píng)價(jià)系統(tǒng)，上述方法是有用的。(2-1材料及實(shí)驗(yàn)步驟)(微生物)使用在上述體外實(shí)驗(yàn)中被判斷為核苷分解能力高的L.gaserri OLL2922菌 株。與體外實(shí)驗(yàn)同樣地利用各種乳酸菌制備菌體懸浮液。向大鼠經(jīng)口給予菌體懸浮液 IX IO9CFU/10mL/kg。(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物)使用大鼠(Wister SPF,雄性、7周齡)。飼養(yǎng)(馴化和實(shí)驗(yàn))中使用大鼠用塑 料籠，每個(gè)籠子僅收容一只大鼠。明暗周期中將明期設(shè)定為上午7點(diǎn) 下午7點(diǎn)(12小 時(shí))。(預(yù)備飼養(yǎng)(馴化)和分組)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物搬入后進(jìn)行一周的預(yù)備飼養(yǎng)(馴化)。馴化中，使它們自由攝取作為餌 料(飼料)的AIN-93G(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社)、作為飲水的自來(lái)水。預(yù)備飼養(yǎng)后 的大鼠(入選7天后、8周齡、第0天)在上午非絕食下從尾靜脈采血。該血液在室溫下放置30分鐘以上后，以轉(zhuǎn)速IOOOOrpm離心分離10分鐘，分離血清，血清中的尿酸值采
用磷鎢酸法測(cè)定。分組時(shí)使各組的血清中尿酸值相等。實(shí)驗(yàn)中每組使用5只大鼠，設(shè)定陰性組(第 1組)、對(duì)照組(第2組)、菌體給予組(第3組)共3組。以下給出組名、餌料、給予 物(給予用量)、只數(shù)等?！り幮越M(第1組)給予“AIN-93G”餌料、給予“生理鹽水”(10mL/kg)、 5只·對(duì)照組(第2組)“給予混合了 2.5重量％的氧嗪酸鉀、1.0重量％的RNA 的AIN-93G”餌料、給予“生理鹽水”(10mL/kg)、5只·菌體給予組(第3組)給予“混合了 2.5重量％的氧嗪酸鉀、1.0重量％的 RNA 的 AIN-93G” 餌料、5 只。給予 “L.gaserri OLL2922 菌株的懸浮液(1 X IO8CFU/ mL)”(10mL/kg)。(正式飼養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)))分組后第二天開始為試驗(yàn)期間，分別利用喂食器讓大鼠自由攝取“AIN-93G” 飼料(陰性組)和“AIN-93G+氧嗪酸鉀+RNA”飼料(對(duì)照組、菌體給予組)8天。將 正式飼料的喂食開始日作為第一天，以后按照日期來(lái)計(jì)算天數(shù)?！癆IN-93G+氧嗪酸鉀 +RNA"飼料含有氧嗪酸鉀(100g、ALDRICH)2.5 重量％*RNA(500g、MP Biomedicals. Inc.) 1.0重量％。以1 X 109CFU/10mL/kg向菌體給予組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物強(qiáng)制經(jīng)口給予上述菌 體懸浮液。對(duì)陰性組和對(duì)照組不給予菌體懸浮液，而是以10mL/kg強(qiáng)制經(jīng)口給予生理鹽 水。(測(cè)定和檢查等)· 一般狀態(tài)的觀察和體重的測(cè)量所有例(所有組)從第1天開始到第8天的每一天，在給予時(shí)觀察一般狀態(tài)，第 0天、第1天、第5天、第8天的上午9 10點(diǎn)定時(shí)測(cè)量體重。·攝食量和攝水量的測(cè)定所有例(所有組)的第1天(設(shè)定值)、第5天(剩余值、設(shè)定值)、第8天(剩 余值)的上午9 10點(diǎn)定時(shí)測(cè)定攝食量和攝水量。·采血和生化學(xué)檢查所有例(所有組)在第0天(上午)、第2天(給予1小時(shí)后)、第5天(給予 1小時(shí)后)、第8天(給予前)從尾靜脈采血。采取的血液以IOOOOrpm的轉(zhuǎn)速離心分離 10分鐘，分離血清，血清中的尿酸值采用磷鎢酸法測(cè)定。如前所述，在第0天當(dāng)天測(cè)定 血清中尿酸值以用來(lái)分組?！そ馄屎蜕瘜W(xué)檢查所有例(所有組)在第8天從尾靜脈采血后經(jīng)口給予菌體懸浮液。給予1小時(shí) 后在nembutal麻醉(苯巴比妥40mg/kg)狀態(tài)下，從腹主動(dòng)脈采全部血液處死。采取的血 液以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離15分鐘，分離血清，測(cè)定血清中的肌酐、尿酸、尿素氮?！づK器重量的測(cè)量取大鼠的腎臟，測(cè)量濕重。(統(tǒng)計(jì)處理)
結(jié)果用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較對(duì)照組和菌體給予組各組。對(duì)數(shù)值化的 檢測(cè)值的方差比率進(jìn)行F檢驗(yàn)，方差齊時(shí)進(jìn)行Student' s t_檢驗(yàn)、方差不齊時(shí)進(jìn)行 Aspin-Welch t_檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)處理時(shí)使用Excel統(tǒng)計(jì)2004的統(tǒng)計(jì)分析，最低顯著水平為雙 側(cè)5%。一般狀態(tài)的結(jié)果示于表1，血清尿酸值的變化示于圖4。對(duì)于給予各種乳酸菌引起的血清中的尿酸值的下降，如圖4所示，在L.gasseri OLL2922給予組可見顯著性差異。關(guān)于一般狀態(tài)，所有組的腎功能(肌酐值、血清中尿 素氮、腎臟重量)都沒(méi)有問(wèn)題，體重、攝食量、攝水量在所有組中也均沒(méi)有問(wèn)題。表 權(quán)利要求
1.一種格氏乳桿菌乳酸菌OLL2922菌株，其以保藏號(hào)NITE BP-462進(jìn)行了保藏。
2.一種用于抑制血中尿酸值上升的飲食品或藥品，其含有權(quán)利要求1所述的乳酸菌、 該乳酸菌含有物和/或其處理物。
3.一種用于預(yù)防和/或治療高尿酸血癥的飲食品或藥品，其含有權(quán)利要求1所述的乳 酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。
4.一種用于抑制嘌呤體的吸收的飲食品或藥品，其含有權(quán)利要求1所述的乳酸菌、該 乳酸菌含有物和/或其處理物。
5.—種抑制對(duì)象對(duì)食品中所含的嘌呤體進(jìn)行攝取的方法，其特征在于，給予權(quán)利要 求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物
6.—種抑制對(duì)象的血中尿酸值上升的方法，其特征在于，給予權(quán)利要求1所述的乳酸 菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物。
7.—種治療對(duì)象的高尿酸血癥的方法，其特征在于，給予權(quán)利要求1所述的乳酸菌、 該乳酸菌含有物和/或其處理物。
8.—種嘌呤體降低了的飲食品的制造方法，其包括使飲食品的原料或中間產(chǎn)品與權(quán) 利要求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物接觸的工序。
9.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于抑制血中尿 酸值上升的飲食品和/或藥品中的用途。
10.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于預(yù)防和/ 或治療高尿酸血癥的飲食品或藥品中的用途。
11.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物在制造用于抑制嘌呤 體的吸收的飲食品和/或藥品中的用途。
12.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于抑制對(duì)象對(duì) 食品中所含的嘌呤體進(jìn)行攝取。
13.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、 血中尿酸值上升。
14.權(quán)利要求1所述的乳酸菌、 高尿酸血癥。該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于抑制對(duì)象的該乳酸菌含有物和/或其處理物，其用于治療對(duì)象的
全文摘要
本發(fā)明提供一種適于飲食品或藥品用途且能夠抑制血中尿酸值上升的乳酸菌。在嘌呤體存在下培養(yǎng)各種乳酸菌，測(cè)定該嘌呤體的消耗量以及該嘌呤體分解物的產(chǎn)生量，挑選嘌呤體分解能力顯著的多種乳酸菌。將通過(guò)上述挑選被判斷為嘌呤體分解能力高的乳酸菌經(jīng)口給予用含有嘌呤體的飼料喂養(yǎng)的大鼠，測(cè)定該大鼠的一般狀況和血清尿酸值，研究給予乳酸菌對(duì)血清尿酸值的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了顯著抑制血清尿酸值上升的乳酸菌格氏乳桿菌OLL2922。
文檔編號(hào)A61K35/74GK102016004SQ20088012595
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2008年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者佐藤秋萊, 坪井洋, 木村勝紀(jì), 粂晃智, 金子紀(jì)子 申請(qǐng)人:明治乳業(yè)株式會(huì)社