專利名稱：與內(nèi)化肽連接的藥物與抗炎劑的共同施用的制作方法
與內(nèi)化肽連接的藥物與抗炎劑的共同施用本申請(qǐng)要求通過(guò)引用方式完整并入的2007年12月5日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?60/992, 678的優(yōu)先權(quán)?！靶蛄斜怼钡囊迷?008年11月18日創(chuàng)建的大小16，385比特的文件SEQLIST026373000910US. txt中提供的序列表因而通過(guò)引用的方式完整并入。
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許多藥物需要被細(xì)胞攝取或穿過(guò)細(xì)胞和/或被細(xì)胞器攝取以抵達(dá)它們的預(yù)期治 療靶。許多較大的分子和某些小分子本身穿過(guò)細(xì)胞膜的能力有限?？梢酝ㄟ^(guò)將藥理物質(zhì)連 接至內(nèi)化肽(也稱作蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域或膜易位結(jié)構(gòu)域)提高穿過(guò)細(xì)胞膜的能力。這些肽 包括tat、觸角足肽和精氨酸豐富肽。這些肽是在許多細(xì)胞蛋白和病毒蛋白中存在的短堿 性肽并起到介導(dǎo)跨膜易位的作用。這些肽的共同特征是它們的高度陽(yáng)離子性質(zhì)。已經(jīng)報(bào)道 此類肽促進(jìn)攝取許多不同的肽和蛋白質(zhì)以及寡核苷酸、肽核酸和小分子及納米粒子至細(xì)胞 內(nèi)。已經(jīng)報(bào)道了攝取到細(xì)胞和細(xì)胞器內(nèi)和穿越血腦屏障。作為內(nèi)化肽的一種應(yīng)用，tat肽已經(jīng)連接于突觸后密度-95蛋白(PSD-95)與 NMDAR之間相互作用的肽抑制劑(Aarts等人，Science 298，846-850 (2002))。所得嵌合肽 在中風(fēng)的細(xì)胞模型和動(dòng)物模型中測(cè)試。該嵌合肽被攝入神經(jīng)元細(xì)胞并且發(fā)現(xiàn)它減少動(dòng)物模 型中的缺血性腦損傷。該結(jié)果產(chǎn)生如下建議使用與內(nèi)化肽連接的PSD-95/NMDAR的肽拮抗 劑以治療由興奮性毒性介導(dǎo)的中風(fēng)和其他疾病。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法。該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的藥理 物質(zhì)至受試者；并且施用抗炎劑至該受試者，其中抗炎劑抑制由該內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。 任選地，該抗炎劑是抗組胺或皮質(zhì)類固醇。任選地，內(nèi)化肽是tat肽。任選地，tat肽具有 包含 GRKKRRQRRR(SEQ ID NO 1), YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO 2), FGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 3)，或GRKKRRQRRRPQ(SEQ ID NO 4)的氨基酸序列。任選地，藥理物質(zhì)是肽。任選地，該藥 理物質(zhì)是 KLSSIESDV(SEQ ID NO :5)。本發(fā)明也提供抗炎劑在制造抑制由連接于藥理物質(zhì)的內(nèi)化肽所誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的 藥物中的用途。本發(fā)明也提供藥盒，其包含與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)和抑制由該內(nèi)化肽所誘導(dǎo)炎 癥反應(yīng)的抗炎劑。本發(fā)明也提供與生物素連接的內(nèi)化肽，其具有與無(wú)生物素的內(nèi)化肽相比降低的誘 導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。本發(fā)明也提供遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法，該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的藥 理物質(zhì)至該受試者；其中內(nèi)化肽被生物素化，并且與無(wú)生物素的內(nèi)化肽相比，生物素化降低 該內(nèi)化肽誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。本發(fā)明也提供治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)疾病的方法，包括以有效治療或 實(shí)現(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié)合的藥理物質(zhì)至患有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者，并且施用抗炎劑至該受試者，因而該抗炎劑抑制由 該內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。任選地，該藥理物質(zhì)是NMDAR受體的PL肽。任選地，內(nèi)化肽是 tat 肽。任選地，該內(nèi)化肽具有包含 GRKKRRQRRR(SEQ ID NO 1), YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO: 2)，F(xiàn)GRKKRRQRRR(SEQ ID NO 3)或 GRKKRRQRRRPQ (SEQ ID NO 4)的氨基酸序列。任選地， 受試者是女性。任選地，疾病是中風(fēng)。在一些方法中，受試者具有因接受心臟手術(shù)所致短暫 性腦缺血發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明還提供治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)疾病的方法，包括以有效治療或 實(shí)現(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié)合的藥理物質(zhì)至患 有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者；其中該內(nèi)化肽被生物素化，并且生物素化降低該內(nèi) 化肽誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。本發(fā)明還提供治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)疾病的方法，包括以有效治療或 實(shí)現(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié)合的藥理物質(zhì)至患 有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的雌性受試者。任選地，內(nèi)化肽是tat肽。本發(fā)明還提供在遞送與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)至受試者的方法方面的改進(jìn)，其中 內(nèi)化肽被生物素化或隨同抑制由該內(nèi)化肽所誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的免疫抑制藥施用。任選地，內(nèi) 化肽是tat肽。本發(fā)明還提供抑制炎癥反應(yīng)的方法，該方法包括施用抗炎劑至已經(jīng)或?qū)?huì)施用與 內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)的受試者；因而該抗炎劑抑制由該內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。本發(fā)明還提供遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法，該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的 藥理物質(zhì)至受試者，其中該受試者已經(jīng)或?qū)?huì)施用抗炎劑，因而該抗炎劑抑制由該內(nèi)化肽 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。附圖簡(jiǎn)述

圖1 大鼠的P3V0中風(fēng)模型中梗死尺寸的性別差異。鹽水雄性用鹽水(對(duì)照) 處理的雄性中風(fēng)大鼠。NAl雄性用Tat-NR2B9c (即，含有Tat序列和NR2B亞基的9個(gè)羧 基端氨基酸的肽YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO 6))處理的雄性中風(fēng)大鼠。鹽水雌性 用鹽水(對(duì)照)處理的雌性中風(fēng)大鼠。NAl雌性用Tat-NR2B9c( S卩，含有Tat序列和NR2B 亞基的9個(gè)羧基端氨基酸的肽YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO :6))處理的雌性中風(fēng)大 鼠。Y軸相對(duì)于單用鹽水處理的雄性大鼠中的梗死尺寸所測(cè)量的梗死尺寸(就百分?jǐn)?shù)而
曰)°圖2 含有Tat序列的肽引起肥大細(xì)胞脫顆粒。CI 鈣離子載體(陽(yáng)性對(duì) 照)。NAl :Tat-NR2B9c, S卩，含有Tat序列和NR2B亞基的9個(gè)羧基端氨基酸的肽 YGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO :6)。NR2B9c 肽 KLSSIESDV (SEQ ID NO 5), NMDA NR2B 亞基的 PSD-95 結(jié)合序列，無(wú) Tat 序列。AA 肽 YGRKKRRQRRRKLSSIEADA(SEQ ID NO :7)，與 Tat-NR2B9c相同，但是在PSD-95結(jié)合結(jié)構(gòu)域中具有2個(gè)點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合PSD-95。 脫粒通過(guò)相對(duì)類胰蛋白酶活性(％相對(duì)于對(duì)照)測(cè)量。條形表示3-6個(gè)獨(dú)立重復(fù)的均值 士 S. D.。圖3 由含有Tat序列的肽所致的肥大細(xì)胞脫粒是劑量依賴的。CI 鈣離子載體 (陽(yáng)性對(duì)照)。NAl :Tat-NR2B9c,即，含有Tat序列和NR2B亞基的9個(gè)羧基端氨基酸的肽 YGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO :6)。AA 肽 YGRKKRRQRRRKLSSIEAM(SEQ ID N0:7)，與
5TAT-NR2B9c相同，但是在PSD-95結(jié)合結(jié)構(gòu)域中具有2個(gè)點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合PSD-95。圖4:由含有Tat序列變體的肽所致的肥大細(xì)胞脫粒。CI 鈣離子載體 (陽(yáng)性對(duì)照)。Tat-NR2B9c 含有Tat序列和NR2B亞基的9個(gè)羧基端氨基酸的肽 YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO :6)。TAT :Tat 肽序列 YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO :2)。 2B9c 肽 KLSSIESDV(SEQ ID NO 5) ,NMDA NR2B 亞基的 PSD-95 結(jié)合序列，無(wú) Tat 序列。AA 肽 YGRKKRRQRRRKLSSIEADA(SEQ ID NO 7)，與 Tat_NR2B9c 相同，但是在 PSD-95 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 中具有 2 個(gè)點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合 PSD-95。F-Tat-NR2B9c 肽 FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO :8)。Tat-NR2B9c K > A:YGRKKRRQRRRALSSIESDV(SEQ ID NO :9)。F_Tat_NR2B9c K > A:FGRKKRRQRRRALSSIESDV(SEQ ID NO: 10)。圖5 含有Tat序列的肽的綴合物不能激發(fā)肥大細(xì)胞脫粒。圖6 在施用50mg/kg Tat-NR2B9c至小獵犬后觀察到的血壓下降。發(fā)明詳述“嵌合肽”意指具有兩種組分肽的肽，其中所述的并不彼此天然連接的兩種組分肽 彼此連接作為融合蛋白或通過(guò)化學(xué)鍵連接。“融合”蛋白或多肽指由來(lái)自通常在單一多肽序列中并不融合在一起的2種(或多 種)不同、異源多肽組成的復(fù)合多肽，即，單一連續(xù)氨基酸序列。術(shù)語(yǔ)“PDZ結(jié)構(gòu)域”指約90個(gè)氨基酸的模塊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，其特征在于與腦突觸 蛋白PSD-95、果蠅分隔連接蛋白Discs-Large(DLG)和表皮緊密連接蛋白ZOl(ZOl)的顯著 (例如，至少60%)序列同一性。PDZ結(jié)構(gòu)域也稱作Discs-Large同源性重復(fù)序列(“DHR”) 和GLGF重復(fù)序列。PDZ結(jié)構(gòu)域通常出現(xiàn)以維持核心共有序列(Doyle,D. Α. ,1996, Cell 85: 1067-76)。示例性含PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)和PDZ結(jié)構(gòu)域序列在通過(guò)引用方式完整并入本文 的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?0/714，537中公開。術(shù)語(yǔ)“PL蛋白”或“PDZ配體蛋白”指與PDZ-結(jié)構(gòu)域形成分子復(fù)合體的天然存在 蛋白質(zhì)或指這樣的蛋白質(zhì)，其從全長(zhǎng)蛋白質(zhì)被單獨(dú)表達(dá)(例如作為3-25個(gè)殘基(例如3、4、 5、8、9、10、12、14或16個(gè)殘基)的肽片段)時(shí)，其羧基端形成這種分子復(fù)合體?？梢允褂美?如美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?0/714，537中所述的“A測(cè)定法”或“G測(cè)定法”體外觀察或體內(nèi)觀察該分子
復(fù)合體。術(shù)語(yǔ)“NMDA受體”或“NMDAR”指已知與NMDA相互作用的膜結(jié)合蛋白。該術(shù)語(yǔ)因而 包括本文中所述的多種亞基形式。此類受體可以是人或非人(例如小鼠、大鼠、兔、猴)受 體?！癙L基序”指PL蛋白羧基末端的氨基酸序列(例如C端3、4、5、6、7、8、9、10、12、 14、16、20或25個(gè)連續(xù)殘基)(“(端？1^序列”)或指已知結(jié)合PDZ結(jié)構(gòu)域的內(nèi)部序列(“內(nèi) 部PL序列”)?！癙L肽”是包含與PDZ結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合的PL基序或由其組成或基于該基序的肽。術(shù)語(yǔ)“分離”或“純化”意指目的種類(例如肽)已經(jīng)從樣品(如從含有該目的種 類的天然來(lái)源獲得的樣品)中存在的污染物純化出來(lái)。如果目的種類是分離或純化的，它 是樣品中存在的優(yōu)勢(shì)大分子(例如多肽)種類(即基于摩爾，它比任何其他單個(gè)種類在組 成上更豐富)并且優(yōu)選地該目的種類包含至少約50% (基于摩爾)存在的全部大分子種類。通常，分離純化的或基本上純的組合物包含超過(guò)80至90%在組合物中存在的全部大分 子種類。最優(yōu)選地，將目的種類純化到基本上均一(即不能通過(guò)常規(guī)檢測(cè)方法在該組合物 中檢測(cè)到雜質(zhì)種類)，其中該組合物基本上由單種大分子種類組成。術(shù)語(yǔ)“分離”或“純化” 實(shí)際上并不排除意圖與分離的種類聯(lián)合發(fā)揮作用的其他組分存在。例如，可以將內(nèi)化肽描 述為分離的，即便它與活性肽連接?！半哪M物”指基本上具有由天然氨基酸組成的肽的相同結(jié)構(gòu)性和/或功能性特征 的合成性化學(xué)化合物。肽模擬物可以含有氨基酸的完全合成性非天然類似物或可以是部分 天然肽氨基酸和部分氨基酸非天然類似物的嵌合分子。肽模擬物也可以摻入任意量的天然 氨基酸保守性替換，只要此類替換也基本上不改變模擬物的結(jié)構(gòu)和/或抑制或結(jié)合活性。 多肽模擬物組合物可以含有非天然結(jié)構(gòu)性組分的任意組合，所述的非天然結(jié)構(gòu)性組分一般 來(lái)自三個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)a)除天然酰胺鍵(“肽鍵”)連接之外的殘基連接基團(tuán)；b)替代天然存 在氨基酸殘基的非天然殘基；或c)誘導(dǎo)二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬，即誘導(dǎo)或使二級(jí)結(jié)構(gòu)例如β轉(zhuǎn)角、 Y轉(zhuǎn)角、β折疊、α螺旋構(gòu)象等穩(wěn)定的殘基。在包含活性肽和內(nèi)化肽的嵌合肽的肽模擬物 中，活性部分或內(nèi)化部分或兩者可以是肽模擬物。術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”指兩個(gè)分子例如配體和受體之間的結(jié)合，其特征在于一個(gè)分子 (配體)即便在許多其他不同分子存在下與另一個(gè)特定分子(受體)結(jié)合，即顯示偏好性結(jié) 合不同分子混合物中一種分子而非另一種分子的能力。配體對(duì)受體的特異性結(jié)合也通過(guò)在 過(guò)量非標(biāo)記配體存在下以可檢測(cè)方式標(biāo)記的配體與受體的結(jié)合作用降低(即結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)測(cè) 定法)來(lái)證明。興奮毒性是其中神經(jīng)元因興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸受體如NMDA受體(例如NMDAR 2Β)的過(guò)度激活受損并被殺死的病理學(xué)過(guò)程。術(shù)語(yǔ)“受試者”包括人和獸醫(yī)動(dòng)物，如哺乳動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“物質(zhì)”包括任何元素、化合物或?qū)嶓w，包括但不限于例如藥用化合物、治療性 化合物、藥理學(xué)化合物、藥妝品、藥物、毒素、天然產(chǎn)物、合成化合物或化學(xué)化合物。術(shù)語(yǔ)“藥理物質(zhì)”意指具有藥理學(xué)活性的物質(zhì)。所述物質(zhì)包括作為已知藥物的化 合物、其藥理學(xué)活性已經(jīng)被鑒定但正在接受進(jìn)一步治療評(píng)價(jià)的化合物。嵌合物質(zhì)包含與內(nèi) 化肽連接的藥理物質(zhì)。如果一種物質(zhì)在顯示該活性物質(zhì)用于或可用于預(yù)防或治療疾病的篩 選系統(tǒng)中展示出活性，則可以將該物質(zhì)描述為具有藥理學(xué)活性。該篩選系統(tǒng)可以是體外的、 細(xì)胞的、動(dòng)物或人的。可以將物質(zhì)描述為具有藥理學(xué)活性，即便可能需要進(jìn)一步測(cè)試以確立 在治療疾病中的實(shí)際預(yù)防或治療用途。tat肽意指包含或由其中序列內(nèi)部缺失、替換或插入不多于5個(gè)殘基的 GRKKRRQRRR(SEQ ID NO :1)組成的肽，所述肽仍保留促進(jìn)所連接肽或其他物質(zhì)被攝取到細(xì) 胞的能力。優(yōu)選地，任意氨基酸改變是保守性替換。優(yōu)選地，聚集體中的任何替換、缺失或內(nèi) 部插入賦予該肽凈陽(yáng)離子電荷，該凈陽(yáng)離子電荷優(yōu)選地與上述序列的凈陽(yáng)離子電荷相似。 tat肽的氨基酸可以用生物素或相似分子衍生化以減輕炎癥反應(yīng)，如下文進(jìn)一步描述。共同施用與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)和抗炎劑意指在時(shí)間上足夠接近地施用這兩 種物質(zhì)，從而抗炎劑可以抑制由內(nèi)化肽可誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。統(tǒng)計(jì)顯著指小于0. 05、優(yōu)選小于0. 01并且最優(yōu)選小于0. 001的ρ-值。I.概述
7
本發(fā)明提供遞送與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)的方法，其中由該內(nèi)化肽可誘導(dǎo)的炎癥 反應(yīng)因共同施用抗炎劑或因連接內(nèi)化肽至生物素或相似分子而抑制。此類方法部分地以 實(shí)施例中所述的結(jié)果為前提，其中以高劑量施用與tat連接的藥理物質(zhì)后旋即出現(xiàn)炎癥反 應(yīng)，所述炎癥反應(yīng)包括肥大細(xì)胞脫粒、組胺釋放和組胺釋放的典型后果，如潮紅、發(fā)熱、腫脹 和低血壓。盡管本發(fā)明方法的實(shí)施不取決于機(jī)制的理解，然而據(jù)認(rèn)為肥大細(xì)胞脫粒由陽(yáng)離 子tat肽與肥大細(xì)胞之間的直接相互作用觸發(fā)，而不由IgE抗體應(yīng)答觸發(fā)?？梢酝ㄟ^(guò)共同 施用抗炎劑連同與tat或其他內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)抑制炎癥反應(yīng)。包括抗組胺藥和皮質(zhì) 類固醇的多種廣泛使用的抗炎劑是合適的。備選地，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)將內(nèi)化肽 與生物素或相似分子連接降低它們誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。本發(fā)明還提供治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防以興奮毒性為特征的疾病(如中風(fēng))的方法。此類 疾病可以使用抑制NMDAR與連接于內(nèi)化肽的突觸后密度95蛋白之間相互作用的藥理物質(zhì) 治療。優(yōu)選地，在此類方法中，藥理物質(zhì)與抗炎劑共同施用以抑制內(nèi)化肽可誘導(dǎo)的免疫應(yīng) 答，或出于上文所討論的原因，該內(nèi)化肽與生物素或相似分子連接。無(wú)論在此方法中是否使 用抗炎劑或生物素化的內(nèi)化肽，可以將該治療或預(yù)防施用至雄性和雌性受試者。向雌性受 試者的施用部分地以實(shí)施例中所述結(jié)果為前提，在所述實(shí)施例中發(fā)現(xiàn)在大鼠中風(fēng)模型中的 治療在雌性受試者中至少如雄性受試者中那樣有效。施用抑制SD95與NMDAR之間相互作用 的藥理物質(zhì)至雌性受試者的可行性與先前結(jié)果形成對(duì)比，在所述結(jié)果中發(fā)現(xiàn)nNOS抑制劑 不能治療雌性受試者中的興奮性疾病。據(jù)報(bào)道施用nNOS抑制劑在雄性大鼠中保護(hù)免遭中 風(fēng)的損傷作用，但是在MCAO模型中增加雌性大鼠中的細(xì)胞損傷。McCul lough等人，Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism,25 :502_512 (2005)。II.藥理物質(zhì)內(nèi)化肽可以與任意藥理物質(zhì)連接以促進(jìn)該物質(zhì)攝取穿過(guò)細(xì)胞膜、胞內(nèi)膜如核膜和 /或血腦屏障。相對(duì)于單獨(dú)使用藥理物質(zhì)，內(nèi)化肽與藥理物質(zhì)的連接改善了預(yù)定位點(diǎn)處的生 物利用率。因連接的內(nèi)化肽而增加的遞送可以引起藥理物質(zhì)的劑量降低、有效靶向藥理物 質(zhì)至特定細(xì)胞區(qū)室如細(xì)胞核和/或因使用更低劑量所致的毒性減少。內(nèi)化肽對(duì)于需要進(jìn)入細(xì)胞和/或細(xì)胞核的藥理物質(zhì)是特別有用的。具有不良生物 利用率、高劑量和短半壽期的藥理物質(zhì)或需要穿過(guò)血腦屏障以發(fā)揮活性的神經(jīng)活性藥物尤 其適合連接內(nèi)化肽。肽是一種類型的藥理物質(zhì)，其適合連接用于內(nèi)化，例如通過(guò)利用肽鍵， 導(dǎo)致產(chǎn)生包含從該藥理物質(zhì)衍生的氨基酸序列和內(nèi)化肽的氨基酸序列的嵌合肽。核酸和小 有機(jī)分子(小于500Da)是可以與內(nèi)化肽連接的化合物的其他例子。一些用于選擇藥理物質(zhì)的指南、用于連接及使用藥理物質(zhì)的方法由與內(nèi)化肽如 tat相關(guān)的科學(xué)和及專利文獻(xiàn)(見，例如US 6，316，003和US5，804，604)提供。下表列出 藥理物質(zhì)的名稱(其中某些是批準(zhǔn)的藥物)、它們用于治療的病癥、該疾病是否為急性或慢 性，施用藥物的途徑(至建立的程度)和關(guān)于伴隨現(xiàn)存藥物的問題的評(píng)論，其中可以通過(guò)內(nèi) 化肽所賦予的跨膜運(yùn)輸改善而部分地克服所述問題。表 1
8藥理物質(zhì)疾病急性/ 慢性施用途徑評(píng)論參考文獻(xiàn)苯巴比妥(魯 米那鈉)癲癇靜脈內(nèi)/ 口服依賴性，耐受 事項(xiàng)，相互作 用，副作用， 出生缺陷Motamedi 和 Meador (2006) Curr Neurol Neurosci Rep, 6(4):341-6. Druss.com撲米酮 (myidone, mysoline)癲癇口服副作用，相互 作用Koristkova 等 人(2006)Int JClin Pharmacol Ther, 44(9): 438-42. Dru2s.e0m地西泮(安定)腹膜內(nèi)/ 口服依賴性，副作 用，相互作用Beard等人 (2003) Health Technol Assess, 7(40): iii, ix-x, 1-111.Drugs.com多巴胺帕金森 病不能穿過(guò)血 腦屏障，副作 用Ahlskog (2001) Neurol Clin, 19(3): 579-605. Drues.com左旋多巴帕金森 病在血腦屏障 之前降解，副 作用，半壽期 =1.5小時(shí)Nyholm (2006) Clin Pharmacokin et, 45(2): 109-36. USPTO.sov (專利# 7160913)阿撲嗎啡腹膜內(nèi)短半壽期Nyholm (2006) Clin Pharmacokin et, 45(2): 109-36. Dru2s.c0m曱磺酸替拉扎 特(Freedox)中風(fēng)腹膜內(nèi)低效力，III 期終止Hickenbottom 和 Grotta(1998) Semin Neurol 18(4): 485-92. Strokecenter. org環(huán)孢菌素免疫艦內(nèi)狀，5-18小Kees等人(Gengraf)抑制時(shí)半壽期(2006) Ther Drug Monit, 28(3): 312-20. Drugs.com萬(wàn)古霉素抗生素腹膜內(nèi)肽，低攝取’ 4-6小時(shí)半壽 期de Hoog等人 (2004) Clin Pharmacokin et, 43(7): 417-40. Drugs.com賴諾普利(賴 諾普利片劑)高血壓腹膜內(nèi)/ 口 服肽，不良血腦 屏障穿越,12 小時(shí)半壽期Tan等人 (2005) Am J Hypertens, 18(2): 158-64. Drugs.com疊氮胸苷 (AZT,齊多夫 定，可比韋)抗病毒口服不良血腦屏 障穿越， 0.5-3小時(shí)半 壽期’血液毒 性Spitzenberger 人(2006) J Cereb Blood Flow Metab, Oct 25,電子 版發(fā)表先于印 刷版本. Druss.com吡拉西坦疼痛/ 癲癇不能穿過(guò)血 腦屏障Loscher 和 Potschka (2002) J Pharmacol Exp Ther,
權(quán)利要求
遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法，該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)至受試者；并施用抗炎劑至受試者，從而該抗炎劑抑制由內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗炎劑是抗組胺藥。
3.權(quán)利要求1的方法，其中抗炎劑是皮質(zhì)類固醇。
4.權(quán)利要求1的方法，其中內(nèi)化肽是tat肽。
5.權(quán)利要求4的方法，其中tat肽具有包含RKKRRQRRR(SEQID NO 51)或 GRKKRRQRRR(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述tat肽具有包含YGRKKRRQRRR(SEQID NO 2)的氨基酸序列。
7.權(quán)利要求4的方法，其中所述tat肽具有包含reRKKRRQRRR(SEQID NO 3)的氨基酸序列。
8.權(quán)利要求4的方法，其中所述tat肽具有包含GRKKRRQRRRP(SEQID NO 4)的氨基酸序列。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥理物質(zhì)是肽。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥理物質(zhì)是KLSSIESDV(SEQID NO :5)。
11.抗炎劑在制造藥物中的用途，所述藥物抑制連接于藥理物質(zhì)的內(nèi)化肽所誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
12.藥盒，其包含與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)和抑制由該內(nèi)化肽所誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的抗炎劑。
13.與生物素連接的內(nèi)化肽，其與無(wú)生物素的內(nèi)化肽相比誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力降低。
14.遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法，該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)至該受 試者；其中所述內(nèi)化肽被生物素化，并且與無(wú)生物素的內(nèi)化肽相比，生物素化降低該內(nèi)化肽 誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。
15.治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)的疾病的方法，包括以有效治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié) 合的藥理物質(zhì)至患有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者；和施用抗炎劑至受試者，從而該抗炎劑抑制由所述內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述藥理物質(zhì)是NMDAR受體的PL肽。
17.權(quán)利要求15的方法，其中所述內(nèi)化肽是tat肽。
18.權(quán)利要求15的方法，其中所述內(nèi)化肽具有包含RKKRRQRRR(SEQID NO 51), GRKKRRQRRR(SEQ ID NO 1), YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO 2), FGRKKRRQRRR(SEQ ID NO 3)或 GRKKRRQRRRPQ (SEQ ID NO 4)的氨基酸序列。
19.權(quán)利要求15的方法，其中所述受試者是雌性。
20.權(quán)利要求15的方法，其中所述疾病是中風(fēng)。
21.權(quán)利要求15的方法，其中所述受試者具有因接受心臟手術(shù)所致短暫性腦缺血發(fā)作 的風(fēng)險(xiǎn)。
22.治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)疾病的方法，包括以有效治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié)合的藥理物質(zhì)至患有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者；其中內(nèi)化肽被生物素化，并且生物素化降低該內(nèi)化肽誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力。
23.治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防由興奮毒性所介導(dǎo)疾病的方法，包括以有效治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防該疾病的方案施用抑制PSD95與連接至內(nèi)化肽的NDMAR 2B結(jié) 合的藥理物質(zhì)至患有該疾病或具有該疾病風(fēng)險(xiǎn)的雌性受試者。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述內(nèi)化肽是tat肽。
25.遞送與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)至受試者的方法，其中內(nèi)化肽被生物素化或隨同抑 制由該內(nèi)化肽所誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的免疫抑制劑施用。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述內(nèi)化肽是tat肽。
27.抑制炎癥反應(yīng)的方法，該方法包括施用抗炎劑至已經(jīng)或?qū)?huì)施用與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)的受試者，從而該抗炎劑抑制 由該內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
28.遞送藥理物質(zhì)至受試者的方法，該方法包括施用與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)至受試者，其中該受試者已經(jīng)或?qū)?huì)施用抗炎劑，從而 該抗炎劑抑制由該內(nèi)化肽誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。全文摘要
本發(fā)明提供遞送與內(nèi)化肽連接的藥理物質(zhì)的方法，其中由該內(nèi)化肽可誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)因共同施用抗炎劑或因連接內(nèi)化肽至生物素或相似分子而抑制。此類方法部分地以實(shí)施例中所述的結(jié)果為前提，其中以高劑量施用與tat連接的藥理物質(zhì)后很快出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，包括肥大細(xì)胞脫粒、組胺釋放和組胺釋放的典型后果，如潮紅、發(fā)熱、腫脹和低血壓。
文檔編號(hào)A61K47/42GK101970011SQ200880126119
公開日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2008年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月5日
發(fā)明者J·D·加曼, M·蒂米安斯基 申請(qǐng)人:諾諾公司;阿爾伯維塔公司