專利名稱：減少牙侵蝕癥的組合物的制作方法
減少牙侵蝕癥的組合物本發(fā)明涉及選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質(zhì) 在減少由暴露于PH范圍2. 0至5. 0的酸性組合物而引起的牙侵蝕癥中的應(yīng)用。牙侵蝕癥描述為“由酸和/或螯合作用而不涉及細(xì)菌的從牙表面經(jīng)化學(xué)侵蝕掉 的牙硬組織的病理性、慢性、局部的、無疼痛損失”(Imfeld，1996，Eur J. Oral Sci. 104, 151-155.)。引起侵蝕的酸源于飲食、職業(yè)或內(nèi)在來源(intrinsic sources)，并且不是口腔 內(nèi)菌群的產(chǎn)物。因此，牙侵蝕癥是與具有疾病類似的病原學(xué)(dis-similar etiology)的齲 齒明顯區(qū)別和不同的病癥。據(jù)認(rèn)為，牙齒的侵蝕是尤其由酸性食物引起，所述酸性食物比正 常再礦化(remineralisation)過程可置換的鈣能更快地浸出鈣。當(dāng)依據(jù)本發(fā)明制備并導(dǎo) 入口腔用于消費(fèi)或保健目的的酸性產(chǎn)物，諸如飲料時(shí)，顯著減少通過化學(xué)過程從牙齒溶出 或去除鈣和磷。Lussi等(1995，Caries Res 29，349-354)已經(jīng)將飲料的pH和可滴定的酸度與其 侵蝕潛力相關(guān)聯(lián)；飲料中的酸的濃度越大，其對牙齒的損傷變得越大。在兒童中的類似研究 (Millward等，(1994) Int. J Paed. Dent. 4，151-157.)將牙侵蝕癥的存在與消耗酸性飲料和 果汁相關(guān)聯(lián)。當(dāng)依據(jù)本發(fā)明制備諸如飲料的產(chǎn)品，并導(dǎo)入口腔用于消費(fèi)或保健目的時(shí)，顯著減 少通過化學(xué)過程從牙齒溶出或去除鈣和磷。已經(jīng)要求增加膳食酸的攝入，并且偏離(move away from)正式的就餐時(shí)間，已經(jīng) 伴隨有牙侵蝕癥發(fā)病率的升高?？紤]到這一點(diǎn)，幫助預(yù)防牙侵蝕癥和牙齒磨損的方法應(yīng)該 具有優(yōu)勢。EP 1625877A, (Friesland Brands BV)，描述了 無蛋白質(zhì)的乳清部分(milk whey)，其可被用于減少與口服攝入酸性食物和飲料相關(guān)的負(fù)效應(yīng)。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即某些蛋白質(zhì)具有減少或減輕由攝入膳食酸所引起的牙 侵蝕癥的能力。在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種 或多種蛋白質(zhì)在制備用于減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的、包含酸化劑且PH范 圍為2. 0至5. 0的、可口服給藥的組合物中的應(yīng)用。在另一個(gè)方面，提供了包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白 中的一種或多種蛋白質(zhì)且PH范圍為2. 0至5. 0的、可口服給藥的組合物，其用于減少由暴 露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥。用于依據(jù)本發(fā)明的酸性組合物的蛋白質(zhì)所存在的量從0. 01% w/v至50. 0% w/v, 適宜地從 0. 01% w/v 至 1. Ow/ν,從 0. 05% w/v 至 0. 5% w/v，從 0. w/v 至 25. 0% w/v 和 從 2. 0% w/v M 10.0% w/v ο典型地，在用于本發(fā)明的組合物中，存在的蛋白質(zhì)的量的變化將從0. 10g/L至 500g/L，適宜地從 0. lg/L 至 10g/L,從 0. 5g/L 至 5g/L，從 1. 0g/L 至 250g/L 和從 20g/L 至 100g/L。適宜地，用于本發(fā)明的蛋白質(zhì)源于天然資源。
典型地，酪蛋白和乳清蛋白從全脂奶中提取。乳清蛋白是干酪制備的副產(chǎn)物。典 型地，卵白蛋白從鳥類的蛋，例如雞蛋中提取。典型地，大豆蛋白從大豆中提取。通過使用依據(jù)本發(fā)明的含蛋白質(zhì)的酸性組合物而呈現(xiàn)的優(yōu)點(diǎn)在于，組合物由于其 酸性內(nèi)容物產(chǎn)生牙侵蝕癥的可能性減少。適宜地，依據(jù)本發(fā)明使用的酸性組合物的pH范圍為從2. 0至4. 5，更適宜地從2. 8 至4. 0。最適宜地，依據(jù)本發(fā)明使用的酸性組合物的pH范圍為從3. 0至4. 0。依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物還可包含從0. Olmmol/L至50mmol/ L，適宜地從2. Ommol/L至20mmol/L的量的鈣。通過使用依據(jù)本發(fā)明的含蛋白質(zhì)和鈣的酸性組合物而呈現(xiàn)的優(yōu)點(diǎn)在于，使酸性組 合物的侵蝕癥的可能性更加減少。鈣可呈現(xiàn)為鹽的形式，諸如碳酸鈣、氫氧化鈣、檸檬酸鈣、蘋果酸鈣、馬來酸檸檬酸 鈣、乳酸鈣、氯化鈣、甘油磷酸鈣或甲酸鈣或任何其它的鹽。典型地，依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物含有為膳食酸的酸化劑，所 述膳食酸可為有機(jī)酸和/或無機(jī)酸。典型的膳食酸包括，例如果酸如檸檬酸和蘋果酸；可飲 用的酸如乳酸、磷酸、乙酸和酒石酸及其一種或多種的混合物。典型地，在依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質(zhì)的組合物中的酸化劑的濃度，例如基于 水果的產(chǎn)品中的檸檬酸或蘋果酸濃度，范圍將從0. 01% w/v至4. 0% w/v，適宜地范圍為 0. w/v 至 1. 0% w/vO依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物可為打算以液體、固體或半固體形式 經(jīng)口服消費(fèi)的組合物，所述形式有例如酸性飲料、果汁、蘋果酒、葡萄酒、醋和腌漬品高溫熬 制的甜品(sweets)、糖果、片劑、止咳糖、棒棒糖、咀嚼劑(chews)、凝膠劑、口香糖、滴劑、干 粉混合物，如打算溶解于例如水中的粉末飲品等。半固體產(chǎn)物包括乳制品，諸如酸乳酪和發(fā) 酵(set)或冰凍飲品。當(dāng)依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物是固體時(shí)，術(shù)語pH意為固化前組合物 (其時(shí)組合物經(jīng)由液相中間體制備)的PH，或當(dāng)再生或溶解于液體如水中時(shí)的組合物的pH。 術(shù)語固化包括處理或補(bǔ)充液相中間體以形成固體或半固體。依據(jù)本發(fā)明用于口服消費(fèi)的包含蛋白質(zhì)的酸性液體組合物，可呈現(xiàn)易于飲用的飲 料或用液體，例如用于制備易于飲用的飲料的液體稀釋的濃縮液體的形式。依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物也可呈現(xiàn)固體濃縮物的形式，例如用制備 易于飲用的飲料的液體再配制的干粉劑。依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質(zhì)的酸性組合物也可呈現(xiàn)口腔護(hù)理組合物，例如嗽口水、 凝膠或噴霧劑的形式。依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質(zhì)的酸性口腔護(hù)理組合物，將含有適宜的配制劑 (formulating agents)，例如表面活性劑、增稠劑、濕潤劑、調(diào)味劑、甜味劑、遮光劑或著色 劑、防腐劑和水，選自那些常規(guī)用于口腔護(hù)理組合物領(lǐng)域的用于該目的的試劑。這樣的試劑 的實(shí)例如在EP929287中描述?？谇蛔o(hù)理活性劑也可包括在本發(fā)明組合物中。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供減少pH范圍在2. 0至5. 0的酸性口服組合物的牙侵 蝕特性的方法，所述方法包括添加選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質(zhì)至酸性口服組合物中?？赏ㄟ^將選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質(zhì)與 酸化劑和其它成分混合，并調(diào)節(jié)pH在2. 0至5. 0范圍內(nèi)，制備依據(jù)本發(fā)明使用的酸性口服 組合物。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的方法，所述 方法包括口服給予有需要的患者包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋 白中的一種或多種蛋白質(zhì)且PH范圍為2. 0至5. 0的組合物。通過以下非限制性實(shí)施例闡述本發(fā)明。實(shí)施例1.修飾酸性組合物以減少組合物的侵蝕可能性。材料和方法烴基磷灰石溶出檢測設(shè)置配備50ml水套反應(yīng)容器的自動(dòng)滴定系統(tǒng)(Metrohm，Buckingham, UK)，通過 加入50mmol/L HCl以維持恒定pH。反應(yīng)溫度為36°C。烴基磷灰石被用作牙釉質(zhì)的類似 物(Barbour 和 Rees (2004) J. Dentistry 32 591-602)。使用粘賭將直徑 12. 05mm χ 厚度 1.25mm 的烴基磷灰石(HA)圓片(Hitemco Medical Applications,Old Bethpage,USA)固 定至玻璃棒上，且圓片的下面用指甲油涂覆，以使每一片圓片得到155. 5mm2的恒定暴露面 積。將帶有圓片的玻璃棒固定至試管，試管與反應(yīng)容器蓋入口相配并以與攪拌器相應(yīng)的可 重復(fù)的位置保持樣品。對于每一次溶解檢測，將15mL的試驗(yàn)溶液置于反應(yīng)容器中并用磁力 攪拌器攪拌。當(dāng)溫度和PH達(dá)到平衡時(shí)，通過將HA圓片浸入溶液啟動(dòng)反應(yīng)。隨著時(shí)間變化 酸值呈線形增加，并且酸增加的速率用作HA溶出的量度。通過將它們暴露于攪拌的對照檸檬酸溶液30min，以移除任何松散的附著物或更 多溶解物，調(diào)整新的圓片。對于每一次檢測，實(shí)施對照試驗(yàn)(control run)和測試試驗(yàn)(test run)。首先檢測對照檸檬酸溶液中的HA圓片的溶出率，然后測定試驗(yàn)溶液中的相同HA圓 片的溶出率。因此每一次檢測均有其自身的對照。各試驗(yàn)溶液測試三次。棄去已經(jīng)暴露于 蛋白質(zhì)試驗(yàn)溶液后的圓片。檸檬酸溶液所有用于烴基磷灰石溶出檢測的溶液基于0. 3% w/v的檸檬酸一水合物溶液，并 用KOH或HCl將pH調(diào)節(jié)至適宜的值。通過用KOH提高pH，將酪蛋白酸鈉(BDH，Poole, UK) 溶解于蒸餾水中，直至酪蛋白溶解。然后加入儲(chǔ)備液30%檸檬酸一水合物溶液，調(diào)節(jié)體積和 pH，得到0. 3% w/v檸檬酸一水合物和適宜的pH和酪蛋白濃度的溶液。通過采用于室溫下 溫和攪拌至少60min，將需要量的卵白蛋白(MPBiochemicals，Ohio，USA)溶解于蒸餾水中， 制備卵白蛋白溶液。然后，將濃的檸檬酸溶液加至該蛋白質(zhì)溶液中，得到最終濃度為0. 3% w/v的檸檬酸一水合物，并用KOH將pH調(diào)節(jié)至需要的值。通過緩慢加入稱量的量至約SOmL 體積的攪拌的去離子水中，制備大豆蛋白溶液。攪拌該混懸液直至看來已經(jīng)達(dá)到溶解度平 衡(約30min)。然后加入ImL的30%檸檬酸一水合物并再攪拌該混懸液另外20min。將該 混懸液離心(4000rpm，15min)，輕輕倒出上清液并用蒸餾水制成100mL。pH的作用在pH 2. 80、3. 00、3. 20、3. 40、3. 60 和 4. 00，與無蛋白質(zhì)，和或者 0. 2 % w/v 或
0. 02% w/v的蛋白質(zhì)一起，制備如上描述的檸檬酸溶液。蛋白質(zhì)濃度的作用
于pH 3. 20以及以0.02% w/v和0.2% w/v蛋白質(zhì)濃度，制備如上描述的檸檬酸溶液。鈣的作用pH 3. 20，和或者無蛋白質(zhì)或以0.2% w/v或0.02% w/v蛋白質(zhì)濃度，制備如上描 述的檸檬酸溶液。加入氯化鈣二水合物以達(dá)到鈣濃度為5mmol. L^UOmmol. r\20mmol. Γ1 和 50mmol. Γ1。蛋白質(zhì)作用的持續(xù)時(shí)間為了評(píng)估蛋白質(zhì)對抗酸侵蝕的作用的持續(xù)時(shí)間，實(shí)施序貫檢測。在調(diào)整圓片后，實(shí) 施在對照檸檬酸溶液中的三次對照試驗(yàn)30分鐘，以獲得平均基線檢測。此后，在具有蛋白 質(zhì)的酸性溶液中實(shí)施單次30分鐘試驗(yàn)。此后，在對照酸性溶液中實(shí)施序貫的30分鐘試驗(yàn)， 直至溶解率達(dá)到基線水平。每個(gè)作用實(shí)驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間，用0. 2% w/v或0. 02% w/v蛋白質(zhì) 實(shí)施至少三次，在分開的HA圓片上進(jìn)行每個(gè)序貫試驗(yàn)。數(shù)據(jù)/統(tǒng)計(jì)學(xué)分析從將H+離子加至溶液中的速率，計(jì)算烴基磷灰石的溶出率。平均率表示為每min、 每mm2暴露的表面溶出的nmol烴基磷灰石。用誤差條(error bars)表示標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果1.烴基磷灰石溶出

圖1顯示在0.02% w/v酪蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸， 于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 40,3. 60 時(shí)。表1.在0.02% w/v酪蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸，于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 40,3. 60 時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中) 圖2顯示在0. 02 % w/v和0. 2% w/v卵白蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。 0. 3% w/v 檸檬酸，于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 60,4. 0 時(shí)。表2.在0.02% w/v和0.2% w/v卵白蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸，于pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 60,4. 0時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中) 2.鈣濃度的作用圖3顯示在0.02% w/v酪蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0.3% w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 20時(shí)。表3.在0. 02% w/v酪蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0. 3% w/ ν檸檬酸一水合物，于pH 3. 20時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中)。 圖4顯示在0. 2 % w/v卵白蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0. 3 % w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 2時(shí)。
表4.在0.2% w/v卵白蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0.3% w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 2時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中)。
3.作用的持續(xù)時(shí)間圖5顯示0.02% w/v卵白蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% w/v檸檬酸，經(jīng) 150mins)。圖6顯示0.2% w/v卵白蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0.3% w/v檸檬酸，經(jīng) 240mins)。表5. 0. 02%和0. 2% w/v卵白蛋白(OA)對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% w/v檸 檬酸、pH 3. 2，經(jīng)150mins和240mins)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中)。 圖7顯示0.2% w/v大豆蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0.3% w/v檸檬酸，pH 3. 2，經(jīng) 90min)。表6. 0.2% w/v大豆蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% 八檸檬酸，？!1 3. 2，經(jīng)90min)。(標(biāo)準(zhǔn)差在括號(hào)中)。
概要實(shí)施例1明確地證明，受添加蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)的酸性溶液具有減少侵蝕的潛力，并且 因此使牙齒侵蝕減少。實(shí)施例2a.典型的飲料配方-0.02% w/v蛋白質(zhì) pH 3. 2，酸度 0. 3% w/v CAMH實(shí)施例2b.典型的飲料配方-0.02% w/v蛋白質(zhì) 實(shí)施例3a.典型的飲料配方-2.0% w/v蛋白質(zhì) pH 3. 2，酸度 0. 3% w/v CAMH實(shí)施例3b.典型的飲料配方-2.0% w/v蛋白質(zhì)
權(quán)利要求
選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種的蛋白質(zhì)在制備可口服給藥的組合物中的應(yīng)用，所述組合物包含酸化劑且具有在范圍為2.0至5.0中的pH，所述組合物用于減少因暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥。
2.依據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中的pH在2.0至4.5范圍內(nèi)。
3.依據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其中的蛋白質(zhì)存在的量從0.01%w/v至50% w/Vo
4.依據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中的蛋白質(zhì)存在的量從0.10g/L至500g/L0
5.依據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中的組合物還包含從O.Olmmol/L至 50mmol/L的量的鈣。
6.一種包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種的 蛋白質(zhì)且PH范圍為2. 0至5. 0的可口服給藥的組合物，其用于減少由暴露于酸化劑所引起 的牙侵蝕癥。
7.一種如在權(quán)利要求6中要求的可口服給藥的組合物，其中的pH范圍為2. 0至4. 5。
8.一種依據(jù)權(quán)利要求6或7的可口服給藥的組合物，其中蛋白質(zhì)存在的量為0.01% w/ ν M 50% w/vo
9.一種依據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)的可口服給藥的組合物，其中蛋白質(zhì)存在的量為 0.10g/L 至 500g/L。
10.一種依據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)的可口服給藥的組合物，其還含有從0. Olmmol/ L至50mmol/L的量的鈣。
11.一種減少具有PH范圍為2. 0至5. 0的酸性口服組合物的牙侵蝕特性的方法，所述 方法包括將選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質(zhì)添加至酸 性口服組合物中。
12.—種減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的方法，所述方法包括口服給予有需 要的個(gè)體包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白 質(zhì)、且PH范圍為2. 0至5. 0的組合物。全文摘要
本發(fā)明涉及選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質(zhì)在減少由暴露于pH范圍2.0至5.0的酸性組合物而引起的牙侵蝕癥的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P1/02GK101932334SQ200880126297
公開日2010年12月29日 申請日期2008年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者M·E·巴鮑爾, R·P·舍里斯 申請人:葛蘭素集團(tuán)有限公司