專利名稱：疫苗的制作方法
疫苗本發(fā)明涉及猴源性腺病毒載體，尤其是編碼來源于惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)環(huán)子孢子蛋白的新型瘧疾抗原的腺病毒載體。本發(fā)明還涉及到制備所述病毒 載體的方法和所述病毒載體在治療/預(yù)防瘧疾感染中的應(yīng)用。瘧疾是世界性主要健康問題之一，每年有超過200-400萬人死于這種疾病。該病最急性形式之一由原生動(dòng)物寄生蟲-惡性瘧原蟲(P. falciparum)所致，由于 瘧疾而致的死亡率大多數(shù)與其相關(guān)。惡性瘧原蟲的生命周期是復(fù)雜的，需要兩個(gè)宿主即人與蚊子來完成。對(duì)人的感染 通過受感染蚊子叮咬將子孢子接種在血液中而引發(fā)的。所述子孢子遷移到肝臟并由此感染 肝細(xì)胞，在此它們借由紅細(xì)胞外的細(xì)胞內(nèi)階段，分化進(jìn)入裂殖子階段，并感染紅細(xì)胞(RBC) 以啟動(dòng)無性血液階段的循環(huán)復(fù)制。該循環(huán)通過大量裂殖子在RBC中分化為有性階段配子體 而完成，配子體被蚊子攝入，它們?cè)谥心c通過一系列階段進(jìn)行發(fā)育以產(chǎn)生子孢子，后者遷移 到唾液腺。瘧原蟲的子孢子階段已經(jīng)被確定為瘧疾疫苗的潛在靶標(biāo)。已經(jīng)證明，用失活 (經(jīng)輻照的)子孢子接種可以誘導(dǎo)針對(duì)實(shí)驗(yàn)性人類瘧疾的保護(hù)(Am. J，Trap. Med. Hyg 24 297-402,1975)。但是，還不能基于這一方法，使用輻照子孢子實(shí)踐性地和邏輯性地制造用 于普通人群的抗瘧疾疫苗。子孢子的主要表面蛋白被稱為環(huán)子孢子蛋白(CS蛋白)。它被認(rèn)為是在子孢子從 蚊子最初的接種位點(diǎn)進(jìn)入循環(huán)(在循環(huán)中它遷移到肝臟)的過程中參與了子孢子的運(yùn)動(dòng)和入侵。瘧原蟲屬物種的CS蛋白的特點(diǎn)是中央重復(fù)域(重復(fù)區(qū))的兩側(cè)為非重復(fù)氨基 (N-端)片段和羧基(C-端)片段。迄今為止，臨床上最先進(jìn)的瘧疾疫苗基于一種被稱為RTS，S的脂蛋白顆粒(也被 稱為病毒樣顆粒)。該顆粒包含惡性瘧原蟲CS蛋白的一部分，基本上對(duì)應(yīng)于惡性瘧原蟲(菌 株NF54[3D7]) CS蛋白的207-395位氨基酸，該部分融合到源自乙型肝炎Ofepatitis B)的 S抗原的N-端。所述S抗原可包含前S2(preS2)的一部分。所述RTS，S粒子通常與強(qiáng)佐劑一起遞送。然而，已提出使用重組腺病毒載體的瘧疾疫苗，例如W02004/055187介紹一些病 毒載體，包括特定的腺5 (Ad5)和腺35(Ad 35)載體，兩者都衍生于人類腺病毒，編碼CS蛋白。人類腺病毒有超過40種不同血清型，它們的致病性不同，例如Ad5與兒童輕度呼 吸道感染有關(guān)，Ad4和AD7被認(rèn)為與成人呼吸道感染有關(guān)，而Ad40被認(rèn)為可導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉。對(duì)腺病毒感染的免疫力被認(rèn)為是感染后終身性的。據(jù)認(rèn)為，尤其是對(duì)AD5和Ad35 的預(yù)先存在的免疫力可能導(dǎo)致對(duì)基于人類腺病毒的治療性腺病毒載體產(chǎn)生中和。這可能會(huì) 降低載體的療效，因?yàn)檩d體被阻止進(jìn)入細(xì)胞和在體內(nèi)生產(chǎn)相關(guān)抗原。本發(fā)明被認(rèn)為是通過提供用于預(yù)防和/或治療瘧疾的疫苗來減少預(yù)先存在免疫力的問題，，所述疫苗包含復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7(也稱為Pan 7或CV-33)，其編 碼的蛋白質(zhì)包含源自惡性瘧原蟲的CS蛋白或其片段，例如Seq ID No :1或Seq ID No :3中 顯示的CS蛋白。所沭序列的簡(jiǎn)要描述Seq ID No 1源自惡性瘧原蟲(P. falciparum) CS蛋白的蛋白質(zhì)/抗原的氨基酸 序列(此處稱為Ade2蛋白)Seq ID No 2編碼Seq ID No 1蛋白的核苷酸序列(此處稱為Ade2基因)Seq ID No :3源自惡性瘧原蟲(P. falciparum)CS蛋白的蛋白質(zhì)/抗原的可供選 擇的氨基酸序列(此處稱為Adel蛋白)
Seq ID No 4編碼Seq ID No 3蛋白的核苷酸序列(此處稱為Adel基因) Seq ID No :5源自黑猩猩腺病毒7的衣殼蛋白序列(來自TO03/046124的seq ID
No 17)
No 20)
Seq ID No :6源自黑猩猩腺病毒7的氨基酸序列(來自WO 03/046124的seq IDSeqIDNo:7源自惡性瘧原蟲(P. falciparum) CS蛋白的氨基畫？序列
SeqIDNo:8源自惡性瘧原蟲(P. falciparum) CS蛋白的氨基畫？序列
SeqIDNo:9源自惡性瘧原蟲(P. falciparum) CS蛋白的氨基畫？序列
SeqIDNo10源自惡性瘧原蟲(P. falciparum) CS蛋白的氨基丨酸序列
SeqIDNo11 CpG 1826的核苷酸序列
SeqIDNo12 CpG 1758的核苷酸序列
SeqIDNo13 CpG的核苷酸序列
SeqIDNo14 CpG 2006的核苷酸序列
SeqIDNo15 CpG 1668的核苷酸序列
SeqIDNo16 CpG 5456的核苷酸序列
SeqIDNo17顯示Ade2表達(dá)盒的替代表達(dá)盒的核苷酸序列，被克隆入C7腺病
載體
Seq Seq
ID ID
No No
自載體
18顯示Ade2表達(dá)盒的核苷酸序列，被克隆入C7腺??； 19顯示合成的重組載體C7-Ade2的完整核苷酸序列。 附圖的簡(jiǎn)要描沭


圖1顯示pCR2. 1-Ade2的質(zhì)粒圖譜。 圖2顯示pShuttle6-Ade2的質(zhì)粒圖譜。 圖3顯示pC7000-CMV Ade2的質(zhì)粒圖譜。
圖4-7顯示在C57B1/6小鼠中由C7 Adel和C7 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性T細(xì)胞應(yīng) 答之間的比較。圖8-11顯示在C57B1/6小鼠中由C7 Ade2和Ad5 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性T細(xì)胞 應(yīng)答之間的比較。圖12-15顯示在C57B1/6小鼠中由C7 Adel和Ad5 Adel誘導(dǎo)的CS-特異性T細(xì) 胞應(yīng)答之間的比較。圖16顯示用ELISA法測(cè)定的在C57B1/6小鼠中抗-CS抗體應(yīng)答。
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圖17和18顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的
動(dòng)力學(xué)。圖19和20顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性CD4T細(xì)胞應(yīng)答的
動(dòng)力學(xué)。圖21和22顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的 細(xì)胞因子概況(profile)。圖23和24顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性CD4T細(xì)胞應(yīng)答的 細(xì)胞因子概況。圖25和26顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑 中由C7-Ade2所誘導(dǎo)的CS-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖27和28顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑 中由C7-Ade2所誘導(dǎo)的CS-特異性⑶4 T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖29顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑中由 C7-Ade2所誘導(dǎo)的HBs-特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖30顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑中由 C7-Ade2所誘導(dǎo)的HBs-特異性CD4T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖31和32顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑 中由C7-Ade2所誘導(dǎo)的CS-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖33顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑中由 C7-Ade2所誘導(dǎo)的HBs-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖34和35顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑 中由C7-Ade2所誘導(dǎo)的CS-特異性⑶4T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖36顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑中由 C7-Ade2所誘導(dǎo)的HBs-特異性⑶4T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖37和38顯示在CB6F1小鼠中在初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑 中由C7-Ade2所誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答。圖39-41顯示在CB6F1小鼠中由共同制劑C7_Ade2+RTS，S/AS01B誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖42-44顯示在CB6F1小鼠中由共同制劑C7_Ade2+RTS，S/AS01B誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性⑶4T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖45-47顯示在CB6F1小鼠中由共同制劑C7_Ade2+RTS，S/AS01B誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖48-50顯示在CB6F1小鼠中由共同制劑C7_Ade2+RTS，S/AS01B誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性CD4T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖51和52顯示在CB6F1小鼠中由共同制劑C7_Ade2+RTS，S/AS01B誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答。圖53-55顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2、RTS, S和ASOlB應(yīng)答所誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖56-58顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2、RTS, S和ASOlB應(yīng)答所誘導(dǎo)的CS-和HBs-特異性⑶4T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖59-61顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2、RTS, S和ASOlB應(yīng)答所誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖62-64顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2、RTS, S和ASOlB應(yīng)答所誘導(dǎo)的CS-和 HBs-特異性CD4 T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖65和66顯示在CB6F1小鼠中由C7_Ade2、RTS，S和ASOlB應(yīng)答所誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答。圖67和68顯示在CB6F1小鼠中由合成的C7 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性⑶8 T細(xì)胞 應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖69和70顯示在CB6F1小鼠中由合成的C7 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性⑶4 T細(xì)胞 應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)。圖71和72顯示在CB6F1小鼠中由合成的C7 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性⑶8 T細(xì)胞 應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。圖73和74顯示在CB6F1小鼠中由合成的C7 Ade2誘導(dǎo)的CS-特異性⑶4 T細(xì)胞 應(yīng)答的細(xì)胞因子概況。在WO 2003/046124 中介紹了 C7 的序列和制備。W02003/046124 中的 SEQ ID No 6 (五鄰體序列)、9(核苷酸序列)、10和11 (六鄰體序列)及12 (纖維蛋白)在此引作參 考。C7的保藏號(hào)為[ATCC VR-593]。任何給定腺病毒載體的特點(diǎn)和特性往往是各別的，雖然有假說認(rèn)為可將載體分類 為家族并且在給定家族內(nèi)的腺病毒載體可能具有相似的特點(diǎn)。 使用C7被認(rèn)為是有特別優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橐坏┎迦肓说鞍拙幋a基因，它似乎比某些其它 已知的載體(例如C6，在WO 2003/046124也有介紹)更穩(wěn)定。這就是說，C7被認(rèn)為是不易 于被重新組織。當(dāng)然，用于疫苗中的任一腺病毒載體具穩(wěn)定性是非常重要的，因?yàn)樗巹┲破?在其上市前需要經(jīng)過良好地表征并被證明是穩(wěn)定和安全的。對(duì)C7預(yù)先存在的免疫力被認(rèn)為是非常低的，因此，對(duì)患者第一次給藥后病毒載體 被中和的風(fēng)險(xiǎn)也低。此外，C7的一個(gè)或多個(gè)其它性能被認(rèn)為是有可能使它特別適用于給予人類和/或 在體內(nèi)產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答。一方面，本發(fā)明使用了合成的C7病毒載體，其可能特別是適合于獲得監(jiān)管部門批 準(zhǔn)以給予人類。一方面，源自CS蛋白的瘧疾抗原組分的最后12-14個(gè)氨基酸被去除。一方面，由所述腺病毒載體編碼的瘧疾抗原經(jīng)過修飾以消除潛在的糖基化位點(diǎn)， 例如氨基酸丙氨酸可以代替絲氨酸，如顯示于SeqID No 1的約379位點(diǎn)處的絲氨酸。一方面，本發(fā)明的蛋白質(zhì)/抗原包含下列氨基酸；NNGDNGREGKDEDKRDGNN [Seq ID No 7]可選地位于約第81-99位氨基酸。一方面，所編碼的蛋白質(zhì)/抗原包括氨基酸AIGL [Seq IDNo 8],例如在C末端包含上述氨基酸。
一方面，本發(fā)明使用包含下列氨基酸的蛋白質(zhì)PNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNVDPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPNANPN[Seq ID No 9]一方面，本發(fā)明使用包含下列氨基酸的蛋白質(zhì)NANP NVDP NANP NVDP NANP NVDP NANP NANP NANP NANPNANP NANP NANP NANP NANP NANP NANP NVDP NANP NANPNANP NANP NANP NANP NANP NANP NANP NANP NANP NANPNANP NANP NANP NANP NANP NANP[Seq ID No 10]另一方面，使用的蛋白質(zhì)/抗原包含Seq ID No. 7和/或Seq IDNo. 8和/或Seq ID No. 9的序列。另一方面，使用的蛋白質(zhì)/抗原包含Seq ID No. 7和/或Seq IDNo. 8和/或Seq ID No. 10的序列。一方面，編碼的蛋白質(zhì)/抗原是Seq ID No. 1和/或Seq ID No. 3。在Seq ID No. 1中給出的蛋白序列是新的，構(gòu)成本發(fā)明的一方面。編碼Seq ID No. 1蛋白質(zhì)序列的多核苷酸也構(gòu)成了本發(fā)明的一方面，尤其是Seq ID No. 2的多核苷酸序列。所述多核苷酸序列(ID No:2)已經(jīng)經(jīng)過密碼子優(yōu)化以在人類中 表達(dá)?？蛇x地，編碼Seq ID No. 1蛋白質(zhì)的多核苷酸序列可以經(jīng)密碼子優(yōu)化。本發(fā)明還延伸到用于制備Seq ID No. 1新型雜交融合蛋白或用于制備依據(jù)本發(fā)明 的病毒載體的載體/質(zhì)粒/宿主。當(dāng)需要制備和分離蛋白質(zhì)時(shí)，可以用合適的質(zhì)粒來將編碼該蛋白質(zhì)的序列插入 合適的宿主用于合成。合適質(zhì)粒的例子是PRIT15546，一種用于攜帶合適的載體表達(dá)盒的 2micr0n基載體(2micr0n-based vector) 0所述質(zhì)粒一般會(huì)包含內(nèi)置的標(biāo)記以協(xié)助選擇， 例如編碼抗生素抗性或LEU2或HIS營(yíng)養(yǎng)缺陷型的基因。宿主細(xì)胞可以是原核或真核，但優(yōu)選是酵母，例如酵母屬(Saccharomyces)[例 如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，如ATCC數(shù)據(jù)庫中的DC5 (保藏號(hào)20820)，命 名為RIT DC5cir(o)。保藏人Smith Kline-RIT]和非酵母屬酵母。它們包括裂殖酵母 屬(Schizosaccharomyces)(如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe))、克魯維 酵母屬(Kluyveromyces)(如乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis))、畢赤酵母屬 (Pichia)(如巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris))、漢遜酵母屬(Hansenula)(如漢遜酵 母多形體(Hansenula polymorpha))、Yarrowia(如 Yarrowia lipolytica)禾口許旺酵母屬 (Schwanniomyces)(如許旺酵母(Schwanniomyces occidentalis))。一方面，本發(fā)明提供了應(yīng)用依據(jù)本發(fā)明的載體或Seq ID No 1的蛋白質(zhì)以治療或 預(yù)防瘧疾。一方面，本發(fā)明提供了藥物制劑，其包含依據(jù)本發(fā)明的病毒載體和輔料 (excipient)，如適用于注射的等滲載體。合適的輔料在下文有更詳細(xì)的討論。
在具體實(shí)施方案中，制劑包括-依據(jù)本發(fā)明的腺病毒載體，-瘧疾抗原，如脂蛋白粒子，特別是RTS，S，和-可選的，佐劑，例如包含皂苷和/或3D-MPL的佐劑。當(dāng)所述載體編碼Seq ID No 1序列時(shí)，該載體特別適于用在使用已知為RTS，S的 蛋白質(zhì)的治療方案中。這是因?yàn)橛伤鱿俨《据d體編碼的蛋白盡可能密切地對(duì)應(yīng)于RTS，S 中的“RT”組分。在使用RTS，S的方案中使用所述載體，被認(rèn)為是有能力有效地加強(qiáng)RTS，S 的療效。此處所述的病毒載體適用于作為瘧疾疫苗的組分。本發(fā)明的病毒載體可能需要與 其它成分(包括其它抗原)聯(lián)合使用，以提供對(duì)抗感染的足夠保護(hù)。然而，本發(fā)明的載體是 適合于至少作為疫苗或治療方案的組分來使用。RTS, S可以如WO 93/10152中的介紹制備RTS，S(例如源自惡性瘧原蟲NF54/3D7株)。在 WO 93/10152的圖9中提供了 RTS表達(dá)盒的核苷酸序列和預(yù)測(cè)翻譯產(chǎn)物(此處稱作RTS*)。在本說明書的上文下中，輔料是指藥學(xué)制劑的組分，其本身不具備治療效果。稀釋 劑或載體落入輔料的定義中。合適的載體包括PBS、鹽水等。佐劑也在輔料的該定義中，因 為雖然佐劑可能在體內(nèi)有生理效應(yīng)，但是這種效應(yīng)是普通性的，而且在缺乏治療組分時(shí)沒 有具體的治療效果。佐劑具體的佐劑選自金屬鹽類、水包油乳液、Toll樣受體激動(dòng)劑(尤其是Toll樣受 體2激動(dòng)劑、Toll樣受體3激動(dòng)劑、Toll樣受體4激動(dòng)劑、Toll樣受體7激動(dòng)劑、Toll樣 受體8激動(dòng)劑和Toll樣受體9激動(dòng)劑)、皂苷或它們的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，佐劑是Toll樣受體(TLR) 4配體，例如激動(dòng)劑，如脂質(zhì)A衍生 物，尤其是單磷酰脂質(zhì)A或更尤其是3-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A (3D-MPL)。3-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A在美國(guó)專利第4912094號(hào)和英國(guó)專利申請(qǐng)第2220211號(hào) (Ribi)中已知，并可從 Ribi Immunochem(Montana，美國(guó))獲得。3D-MPL是由Corixa corporation在商標(biāo)MPL 下出售，主要是促進(jìn)帶有干擾 素-Y (IFN-γ) (Thl)表型的⑶4+T細(xì)胞應(yīng)答。它可以按GB 2 220 211 A公開的方法生產(chǎn)。 化學(xué)上，它是具3、4、5或6條?；湹?-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A混合物。一般來說，在本發(fā) 明的組合物中使用小顆粒3D-MPL。小顆粒3D-MPL具有的粒徑使得可以用0. 22 μ m濾器進(jìn) 行過濾除菌。在WO 94/21292中介紹了這些制備。脂質(zhì)A的合成衍生物是已知的，并被認(rèn) 為是TLR 4激動(dòng)劑，包括但不限于OMl74 (2-脫氧_6_0-[2-脫氧-2_[(R)_3-十二烷酰氧基四癸酰基氨基]_4-0_磷 酰_[ β ]_D-吡喃葡糖基]-2-[(R)_3-羥基四癸?；被鵠-α -D-吡喃葡糖基磷酸二氫 鹽)，(W0 95/14026)OM 294 DP (3S，9R) _3_[ (R)-十二烷酰氧基四癸?；被鵠_4_氧代-5-氮 雜-9(R)-[(R)_3-羥基四癸?；被鵠癸-1，10-二醇1，10_雙(二氫磷酸酯)， (W099/64301 和 WO 00/0462)OM 197MP-Ac DP (3S_，9R) _3_[ (R)-十二烷酰氧基四癸?；被鵠_4_氧代_5_氮雜-9-[ (R)-3-羥基四癸?；被鵠癸-1，10- 二醇1- 二氫磷酸酯-10-(6-氨基己酸酯) (W0 01/46127)。通常，當(dāng)使用3D-MPL時(shí)，抗原和3D-MPL在水包油乳液或復(fù)合油水包油乳液中遞 送。3D-MPL的摻入是有利的，因?yàn)樗切?yīng)T細(xì)胞應(yīng)答的激活劑?？赡苁褂玫钠渌黅LR4配體有氨基葡糖苷磷酸烷基酯(AGP)，如在W09850399或US 6303347 (還公開了 AGPS的制備方法)中公開的那些配體，或AGP的藥學(xué)上可接受的鹽，如 US 6764840中公開的。有些AGP是TLR4激動(dòng)劑，有些是TLR4的拮抗劑。兩者都被認(rèn)為可 用作佐劑。在本發(fā)明中使用的另一種免疫刺激劑是Quil A及其衍生物。Quil A是從南 美樹Quilaja Saponaria Molina分離的皂苷制劑，Dalsgaard等在1974年首次描述了 其具有佐劑活性[“皂苷佐劑”(“Saponin adjuvants" )，Archi v. fur die gesamte Virusforschung,Vol. 44, Springer Verlag，Berlin，p243_254]。已經(jīng)用 HPLC 分離出 Quil A的純化片段，其保留了佐劑活性而沒有與QuilA相關(guān)聯(lián)的毒性(EP 0362 278)，例如QS7 和QS21(也稱為QA7和QA21)。QS21是來自Quillaja saponaria Molina樹皮的天然皂苷， 能誘導(dǎo)⑶8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)、Thl細(xì)胞和主要IgG2a抗體應(yīng)答。進(jìn)一步包括甾醇的具體QS21制劑已有介紹(W0 96/33739)。QS21 甾醇的比例 通常為大約1 100到1 1(重量比重量)。一般來說，會(huì)存在過量留醇，QS21 留醇的 比例至少為1 2(重量/重量)。通常情況下，對(duì)人類給藥，QS21和留醇在疫苗中的含量 范圍在約1微克至約100微克，如每劑約10微克至約50微克。脂質(zhì)體制劑通常包含中性脂，例如磷脂酰膽堿，其在室溫下通常是非晶體，例如蛋 黃磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿或二月桂酰磷脂酰膽堿。脂質(zhì)體還可包含帶電荷脂質(zhì)，其 增加由飽和脂肪組成的脂質(zhì)體的脂質(zhì)體-QS21結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。在這種情況下，帶電脂質(zhì)的 量通常為1-20% w/w，如5-10%。甾醇與磷脂的比例為1-50% (mol/mol)，如20~25%o這些組合物可包含MPL(3_脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A，也稱為3D-MPL)。由GB2 220 211 (Ribi)已知3D-MPL是帶4、5或6條?；湹?種類型脫酰基單磷酰脂質(zhì)A的混合物， 由 Ribi Immunochem(Montana)制造。該皂苷的形式可以是膠團(tuán)、混合膠團(tuán)(通常但不僅僅含有膽汁鹽)，或可能是 ISCOM矩陣(EP 0 109 942)、脂質(zhì)體或相關(guān)的膠體結(jié)構(gòu)如蠕蟲狀或環(huán)狀多體復(fù)合物、或 脂質(zhì)/層狀結(jié)構(gòu)和片層(在與膽固醇和脂質(zhì)一起配制時(shí))、或是水包油乳液(參見WO 95/17210)。通常，皂苷存在的形式是脂質(zhì)體制劑、ISCOM或水包油乳液。也可使用免疫刺激性寡核苷酸。在本發(fā)明的佐劑或疫苗中使用的寡核苷酸例子包 括含有CpG的寡核苷酸，一般含有由至少3個(gè)、更優(yōu)選至少6個(gè)或更多個(gè)核苷酸分隔開的兩 個(gè)或兩個(gè)以上二核苷酸CpG基序。CpG基序是由鳥嘌呤核苷酸緊接胞嘧啶核苷酸。CpG寡 核苷酸通常是脫氧核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，在所述寡核苷酸中的核苷酸之間是硫代磷 酸二酯鍵，更優(yōu)選是硫代磷酸酯鍵，雖然磷酸二酯鍵和其它核苷酸間鍵合也在本發(fā)明的范 疇內(nèi)。本發(fā)明的范疇還包括帶混合核苷酸間鍵合的寡核苷酸。生產(chǎn)硫代磷酸酯寡核苷酸或 硫代磷酸二酯的方法參見US 5，666，153、US 5，278，302和W095/26204中的介紹。寡核苷酸的實(shí)例如下
TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACGTCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT(CpG 1668) [Seq ID No 12] [Seq ID No 13] [Seq ID No 14] [Seq ID No 15]TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G(CpG 5456)， [Seq ID No 16]所述序列可以含有硫代磷酸酯修飾的核苷酸間鍵合?？商娲腃pG寡核苷酸可以包含上述一個(gè)或多個(gè)序列，在其中它們有無關(guān)緊要的 缺失或添加?？梢杂帽绢I(lǐng)域任何已知的方法合成CpG寡核苷酸(參見EP468520)。便利地，可利 用自動(dòng)合成儀合成這些寡核苷酸。TLR 2激動(dòng)劑的例子包括肽聚糖或脂蛋白。咪唑并喹啉，如咪喹莫特(Imiquimod)和Resiquimod是已知的TLR7激動(dòng)劑。單鏈 RNA也是已知的TLR激動(dòng)劑(人類TLR8和小鼠TLR7)，而雙鏈RNA和多聚IC (聚肌苷酸-聚 胞苷酸，商業(yè)化合成的病毒RNA類似物)是典型的TLR3激動(dòng)劑。3D-MPL是TLR4激動(dòng)劑的 例子，而CpG是TLR9激動(dòng)劑的例子。免疫刺激劑可替換或同時(shí)被包括在內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫刺激劑是 3-脫酰基單磷酰脂A (3D-MPL)。一方面，佐劑包括3D-MPL。一方面，佐劑包括QS21。一方面，佐劑包括CpG。一方面，佐劑被配制成水包油乳液。一方面，佐劑被配制成脂質(zhì)體。佐劑組合包括3D-MPL和QS21(EP 0 671 948 BL)的水包油乳液、或包含3D-MPL 和QS21或與其它載體一起配制的3D-MPL的脂質(zhì)體制劑(EP 0 689 454 BL)。其它優(yōu)選佐 劑系統(tǒng)包括3D-MPL、QS21和CpG寡核苷酸的組合，如US 6558670和US6544518的描述。制劑疫苗的制備在“New Trends and Developments in Vaccines (疫苗的新趨勢(shì)和發(fā) M )，，[VolIerUniversity Park Press, Baltimore, Maryland, U. S. A. ，1978.]中 有全面的描述。例如，脂質(zhì)體內(nèi)的封裝見Fullerton(美國(guó)專利4235877)的描述。本發(fā)明的制劑即可用于預(yù)防目的，又可用于治療目的。因此本發(fā)明提供如此處介 紹的用于藥物的疫苗組合物，例如，用于治療和/或預(yù)防瘧疾。一方面，本發(fā)明提供組合物，其包含依據(jù)本發(fā)明的C7腺病毒載體和瘧疾抗原(如 RTS, S或Seq ID No=I的新抗原)或相同的病毒樣顆粒和輔料，可選地有佐劑存在。在本說明書的上下文中，免疫原性是指引起免疫應(yīng)答的能力，其中所述應(yīng)答特異 性地針對(duì)于相關(guān)制劑中的瘧疾組分。這種應(yīng)答可能需要合適的佐劑和/或加強(qiáng)的存在。可 能被需要加強(qiáng)，例如包括與原來的劑量相似或減少的劑量，以獲得適當(dāng)?shù)拿庖咴詰?yīng)答。依據(jù)本發(fā)明的組合物/藥物制劑還可包含混合一種或多種額外抗原(如源自惡性 瘧原蟲和/或間日瘧原蟲(P.vivax)的抗原)，例如，其中抗原選自DBP、PvTRAP、PvMSP2、PvMSP4、PvMSP5、PvMSP6、PvMSP7、PvMSP8、PvMSP9、PvAMAl 和 RBP 或它們的片段。另一例子，源自惡性瘧原蟲的抗原包括PfEMP-1、Pfs 16抗原、MSP-1、MSP-3、 LSA-l、LSA-3、AMA-I和TRAP。其它的瘧原蟲抗原包括惡性瘧原蟲EBA、GLURP、RAP1、RAP2、 鉗合蛋白(Sequestrin)、Pf332、STARP、SALSA、PfEXPl、Pfs25、Pfs28、PFS27/25、Pfs48/45、 Pfs230和它們?cè)谄渌鼝盒辕懺x屬種中的類似物。本發(fā)明還涉及到使用C7編碼瘧疾抗原，例如，特別是本文所述的用于治療和/或 預(yù)防瘧疾，或用于制備用于治療和/或預(yù)防瘧疾的藥物。本發(fā)明還包括治療方法，其包括給予治療有效量的本發(fā)明一個(gè)或多個(gè)方面?？蛇x 地，依據(jù)本發(fā)明的C7病毒載體可與瘧疾抗原(如RTS，S或Seq ID No. 1抗原)共同給藥或 共同配制，可選地存在佐劑，如包括3D-MPL和/或皂苷如QS21的佐劑。C7載體還可以與不同抗原血清型和/或來源的、編碼相同或不同抗原的另一腺病 毒載體共同給藥或共同配制。本發(fā)明還延伸到在初次免疫加強(qiáng)免疫策略中應(yīng)用此處定義的任一方面，例如其中 在時(shí)間點(diǎn)零給予初次免疫劑量(并且隨后的初次免疫在例如3個(gè)月內(nèi))，加強(qiáng)劑量例如在最 后初次免疫劑量后約4、5、6、7、8、9、10、11或12周給予，可選地在所述第一次加強(qiáng)后給予進(jìn)
一步的加強(qiáng)直至一年。有利地是，本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)方面，包括上文所述聯(lián)合疫苗，能刺激特異性體液 免疫(即抗體應(yīng)答)和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答(如CD8+和/或CD4+)，如抗體應(yīng)答和CD8+和 /或⑶4+應(yīng)答，尤其是⑶8+和抗體應(yīng)答。這就是說特異針對(duì)CS蛋白和/或S抗原(合適 時(shí))的應(yīng)答?？赡苄枰@種類型的平衡免疫應(yīng)答以提供所謂的對(duì)瘧疾感染的無菌防護(hù)。此外，與針對(duì)策略表中只有加佐劑的蛋白質(zhì)的抗體應(yīng)答相比，針對(duì)組合的抗體應(yīng) 答可能得到增強(qiáng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在初次免疫加強(qiáng)免疫策略中按下述使用C7進(jìn)行 初次免疫或加強(qiáng)-編碼相同或不同瘧疾抗原的腺病毒載體C7，-另一病毒載體，如編碼瘧疾抗原(如源自惡性瘧原蟲的CS蛋白)的人類腺病毒 載體(如Ad5或Ad35)，或不同血清型(即不是C7)的猿猴腺病毒載體，和/或-瘧疾抗原(如RTS，S)和佐劑，例如包括皂苷和/或3D-MPL的佐劑，作為該策略 的補(bǔ)償組分。本發(fā)明還提供將用于制造治療和/或預(yù)防瘧疾感染的藥物的此處描述的任一方量3D-MPL的用量一般較小，但依據(jù)疫苗制劑可在每劑1_1000微克的范圍(例如每劑 1-500微克)和如在每劑1-100微克范圍，如每劑50或25微克。在本發(fā)明的佐劑或疫苗中CpG或免疫刺激性寡核苷酸的量一般較小，但依據(jù)疫苗 制劑可在每劑1-1000微克的范圍(例如每劑1-500微克)和如在每劑1-100微克范圍。本發(fā)明的佐劑中皂苷的使用量可在每劑1-1000微克的范圍內(nèi)，例如每劑1-500微 克，如每劑1-250微克，尤其在每劑1-100微克范圍(如每劑50或25微克)。
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當(dāng)給予蛋白質(zhì)時(shí)，其劑量可以是例如每劑1-500微克，如每劑10-100微克，尤其是 每劑 20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75 或 80 微克。當(dāng)給予腺病毒載體時(shí)，其劑量可以是例如103-1016vpu，如106-101QVpu)。當(dāng)使用組合時(shí)，組合中每一組分的用量可對(duì)應(yīng)于該組分單獨(dú)給藥時(shí)的劑量。本發(fā)明還延伸到試劑盒，其包含依據(jù)本發(fā)明的組合中使用的各組分。本發(fā)明進(jìn)一步涉及依據(jù)本發(fā)明的腺病毒載體的制備方法和包括所述腺病毒載體 的制劑。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生Seq ID No 1蛋白質(zhì)的方法。在本說明書的上下文中，包括或包含(comprising)可被解釋為包含或含有 (including)。本發(fā)明將擴(kuò)展到與此處描述為包含某些要素但由所述相關(guān)要素組成或基本組成 的實(shí)施方案所對(duì)應(yīng)的實(shí)施方案。在本說明書的背景部分提供了討論，是為了將本發(fā)明投入背景中。這不能被解釋 為承認(rèn)是本領(lǐng)域已知的，尤其不承認(rèn)構(gòu)成一般常識(shí)。下面的實(shí)施例用來說明可在本發(fā)明中使用的方法。
實(shí)施例實(shí)施例1合成基因由公司Medigenomix制備。將該基因克隆入pCR2. 1-T0P0-TA克隆載體 (Invitrogen，見圖1)。用NotI和BamHI消化該載體并創(chuàng)建了重組穿梭質(zhì)粒載體(_Ade2)。 所述穿梭質(zhì)粒圖譜見圖2。表達(dá)盒的說明和病毒拯救的方法該表達(dá)盒包含巨細(xì)胞病毒(CMV)的早期啟動(dòng)子和第一外顯子、源自質(zhì)粒PCI (從 Promega公司購買)的內(nèi)含子、編碼Ade2的DNA和兔球蛋白聚腺苷酸化信號(hào)。完整表達(dá)盒 的兩側(cè)分別是限制酶I-CeuI和PI-PI-SceI的識(shí)別位點(diǎn)。使用Ι-Ceul和ΡΙ-ΡΙ-SceI從穿 梭質(zhì)粒中切下該表達(dá)盒，將其導(dǎo)入所述的SAdV-24(即C7)-pC7000 pkGFP的缺失El的基因 組的質(zhì)粒分子克隆[Roy等，Hum Gene Ther. (2004)5 :519_530]，獲得圖3所示的質(zhì)粒。通過用限制酶PacI消化使質(zhì)粒分子克隆DNA線性化，并轉(zhuǎn)染入HEK 293細(xì)胞以拯 救重組腺病毒。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)繁殖、擴(kuò)增和純化該腺病毒。來自I-CeuI至PI-Sce識(shí)別位點(diǎn)的(Ade2)表達(dá)盒序列顯示于Seq ID Nos :18。實(shí)施例2C7~Adel和C7_Ade2在C57B1/6小鼠中的免疫原性 用表達(dá)構(gòu)建體Adel或Ade2兩者之一的C7黑猩猩腺病毒肌肉注射免疫C57B1/6 小鼠一次，劑量范圍為10el0、10e9、10e8病毒顆粒(viral particle, vp) 0作為陽性對(duì)照， 一些小鼠用表達(dá)構(gòu)建體Adel或Ade2兩者之一的人類腺病毒5免疫，劑量為10e9和10e8。 作為陰性對(duì)照，一些小鼠用空C7 (empty C7)和空Ad5 (empty Ad5)病毒載體進(jìn)行免疫。
在免疫后的第14、28、34和49天采集并匯總外周血，在體外用涵蓋感興趣序列 [即CS蛋白的N端區(qū)域(N-末端，N-term)或C-端區(qū)域(C-末端，C-term)]的15聚體肽 庫(pool)再次刺激過夜后，用流式細(xì)胞儀測(cè)量產(chǎn)生IL-2和/或IFN-Y的抗原特異性CD4和⑶8T細(xì)胞應(yīng)答。作為陰性對(duì)照，一些細(xì)胞也在體外培養(yǎng)液中過夜培養(yǎng)(未刺激)。從肽 刺激細(xì)胞產(chǎn)生的平均細(xì)胞因子應(yīng)答中減去未刺激細(xì)胞產(chǎn)生的平均細(xì)胞因子應(yīng)答，計(jì)算出該 抗原特異性應(yīng)答。結(jié)果表明，在上述實(shí)驗(yàn)條件下，這兩種構(gòu)建體都誘導(dǎo)CS-特異⑶4和⑶8T細(xì)胞應(yīng) 答(圖4-15)。值得注意的是，C-末端特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答只在用攜帶Ade2插入片段的 腺病毒免疫的小鼠中檢測(cè)到(圖4和8)。特別是，這些C-末端特異性CD8 T細(xì)胞應(yīng)答與用 IOelOvp C7 Ade2或10e9vp Ad5 Ade2免疫的小鼠中的類似(圖8)。此外，用ELISA法檢測(cè)了采集于免疫后48天的血清的抗-CS抗體應(yīng)答。特別是，這 是針對(duì)R32LR多肽的總免疫球蛋白應(yīng)答(即涵蓋了惡性瘧原蟲CSP的中間部分)[Mettens 等，Vaccine 2008]。結(jié)果表明，用C7 Adel或C7 Ade2的單一免疫誘導(dǎo)較低水平的R32LR 特異性抗體應(yīng)答。這種應(yīng)答的強(qiáng)度與免疫接種使用的病毒顆粒的數(shù)量密切相關(guān)(劑量范圍 效應(yīng))。實(shí)施例3C7~Ade2在CB6F1小鼠中的免疫原件用表達(dá)構(gòu)建體Ade2的C7黑猩猩腺病毒經(jīng)肌肉注射免疫CB6F1小鼠一次，劑量范 圍為10θ10、10θ9、10θ8病毒顆粒，5個(gè)小鼠集合(pool)/組。在免疫后的第21、28和35天 采集并匯總外周血，在體外用涵蓋感興趣序列[即CS蛋白的N端區(qū)域(N-末端，N-term)或 C-端區(qū)域(C-末端，C-term)]的15聚體肽庫重新刺激過夜后，用流式細(xì)胞儀測(cè)量產(chǎn)生IL-2 和/或IFN-Y的CS C-末端和CS N-末端特異性⑶4和⑶8T細(xì)胞應(yīng)答。作為陰性對(duì)照， 一些細(xì)胞也在體外培養(yǎng)液中過夜培養(yǎng)(未刺激)。從肽刺激細(xì)胞產(chǎn)生的平均細(xì)胞因子應(yīng)答 中減去未刺激細(xì)胞產(chǎn)生的平均細(xì)胞因子應(yīng)答，計(jì)算出該抗原特異性應(yīng)答。結(jié)果表明，在本小鼠品系，或10e9vp C7 Ade2或IOelOvp C7Ade2的單一免疫均能 誘導(dǎo)C-末端和N-末端特異性CD4和CD8 T細(xì)胞應(yīng)答(圖17-20)。特別是，如果使用不高 于10e9的劑量，則平均觀察應(yīng)答的強(qiáng)度是相等的。CS-特異性CD8 T細(xì)胞應(yīng)答主要是N-末 端特異性的，而CS-特異性CD4 T細(xì)胞應(yīng)答同等靶向CS蛋白的N-末端區(qū)和C-末端區(qū)。還檢測(cè)了 CS-特異性⑶4和⑶8 T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況，其在所有測(cè)試時(shí)間 點(diǎn)都是相似的。圖21-24顯示了在免疫后第28天呈現(xiàn)的概況，是其他測(cè)試時(shí)間點(diǎn)的代表。 簡(jiǎn)言之，CS-特異性⑶8T細(xì)胞應(yīng)答大多由只產(chǎn)生TFNg的⑶8 T細(xì)胞組成(圖21和22)。 CS-特異性⑶4 T細(xì)胞應(yīng)答也由產(chǎn)生TFNg的⑶4 T細(xì)胞組成，而且還有較小程度的只產(chǎn)生 IL2的⑶4 T細(xì)胞，或者同時(shí)產(chǎn)生IL2和TFNg的⑶4 T細(xì)胞(圖23和24)。實(shí)施例4在CB6F1小鼠中用C7_Ade2進(jìn)行初次免疫/加強(qiáng)或與RTS，S/AS01B的共同制劑的 免疫原性我們已經(jīng)測(cè)試了表達(dá)Ade2構(gòu)建體的C7黑猩猩腺病毒在或者初次免疫-加強(qiáng)或與 RTS, S/AS01B共同配制(combo)時(shí)在CB6F1小鼠中產(chǎn)生的免疫原性。ASOlB是包含用脂質(zhì) 體配制的3D-MPL和QS21的佐劑系統(tǒng)。小鼠在第0、14和28天如下進(jìn)行肌注免疫
權(quán)利要求
復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7，其編碼包含源自惡性瘧原蟲(P.falciparum)的CS蛋白或其片段的蛋白質(zhì)。
2.依據(jù)權(quán)利要求1的病毒載體，其中所編碼的蛋白質(zhì)包含SeqID No:7序列。
3.依據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的病毒載體，其中所編碼的蛋白質(zhì)包含SeqID No 8 序列。
4.依據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的病毒載體，其中所編碼的蛋白質(zhì)包含SeqID No:l序列。
5.依據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的病毒載體，其中所編碼的蛋白質(zhì)具有SeqID No 3 序列。
6.組合物，其包含權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體和輔料。
7.用于治療或預(yù)防瘧疾的疫苗組合物，其包含權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體 和佐劑。
8.權(quán)利要求7中定義的疫苗，其進(jìn)一步包括蛋白質(zhì)。
9.權(quán)利要求8中定義的疫苗，其中所述蛋白質(zhì)是RTS，S。
10.疫苗組合物，其包含(1)復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7，其編碼包含源自惡性瘧 原蟲的CS蛋白或其片段的蛋白質(zhì)、(2)瘧疾抗原，以及(3)佐劑。
11.試劑盒，其包含(1)復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7，其編碼包含源自惡性瘧原蟲的 CS蛋白或其片段的蛋白質(zhì)、(2)瘧疾抗原，以及(3)佐劑。
12.權(quán)利要求10或權(quán)利要求11的疫苗或試劑盒，其中由所述腺病毒載體C7編碼的蛋 白質(zhì)具有Seq ID No :1序列。
13.權(quán)利要求7-12中任一項(xiàng)的疫苗或試劑盒，其中所述瘧疾抗原是RTS，S。
14.依據(jù)權(quán)利要求7-13中任一項(xiàng)的疫苗或試劑盒，其中所述佐劑包含3D-MPL。
15.依據(jù)權(quán)利要求7-13中任一項(xiàng)的疫苗或試劑盒，其中所述佐劑包含皂苷。
16.依據(jù)權(quán)利要求15的疫苗或試劑盒，其中所述皂苷是QS21。
17.依據(jù)權(quán)利要求7-13中任一項(xiàng)的疫苗或試劑盒，其中所述佐劑包含3D-MPL和QS21。
18.權(quán)利要求7-17中任一項(xiàng)定義的疫苗或試劑盒，其中所述制劑是以水包油乳液提{共。
19.權(quán)利要求7-10或12-17中任一項(xiàng)定義的疫苗，其中所述疫苗是脂質(zhì)體制劑。
20.權(quán)利要求10的疫苗組合物，其包含(1)復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7，其編碼包 含具有Seq ID No :1序列的源自惡性瘧原蟲的CS蛋白的蛋白質(zhì)、(2)瘧疾抗原RTS，S，和 (3)佐劑，其包含3D-MPL和QS21。
21.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體的制備方法，其包括以下步驟a.在合適的細(xì)胞系上繁殖所述載體，和b.回收所述載體。
22.權(quán)利要求6的組合物或權(quán)利要求7-10或12-20中任一項(xiàng)的疫苗的制備方法，其包 括將權(quán)利要求1-5所述病毒載體與至少一種輔料/載體混合的步驟。
23.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體，其用于治療或預(yù)防瘧疾。
24.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的病毒載體，其用于在治療或預(yù)防瘧疾的初次免疫加強(qiáng)免 疫方案中的初次免疫或加強(qiáng)。
25.將權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體在生產(chǎn)治療或預(yù)防瘧疾的藥物中的應(yīng)用。
26.治療方法，其包括給予治療有效量的下述物質(zhì)a.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)定義的病毒載體，b.權(quán)利要求6中定義的組合物，或c.權(quán)利要求7-10或12-20中任一項(xiàng)定義的疫苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及復(fù)制缺陷型猿猴腺病毒載體C7，其編碼的蛋白質(zhì)包含源自惡性瘧原蟲的CS蛋白或其片段，例如Seq ID No1或Seq IDNo3中顯示的CS蛋白。本發(fā)明還涉及到制備所述病毒載體的方法和將所述病毒載體應(yīng)用于治療/預(yù)防瘧疾感染。還描述了包含所述病毒載體的組合物、疫苗和試劑盒。一方面，本發(fā)明使用了合成的C7病毒載體。依據(jù)本發(fā)明的C7病毒載體可與瘧疾抗原(如RTS，S)共同給藥或共同配制，可選地存在佐劑，例如包含3D-MPL和/或皂苷(如QS21)的佐劑。
文檔編號(hào)A61K39/015GK101939438SQ200880126710
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2008年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月6日
發(fā)明者J·D·科亨, M·馬尚 申請(qǐng)人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司