專利名稱：抗-vegf抗體的制作方法
抗-VEGF抗體背景抗體是結(jié)合特異性抗原的蛋白質(zhì)。通常，抗體對于其靶是特異性的，具有介導免疫 效應物機制的能力，并且在血清中具有長半衰期。這樣的特性使得抗體成為有力的治療劑。 在治療上使用單克隆抗體，用于治療各種病癥，包括癌癥、炎癥和心血管疾病。目前在市場 上存在十種以上的治療性抗體產(chǎn)品，并且有上百種在研發(fā)中。對新的抗體存在持續(xù)的需求。發(fā)明_既述提供了一種抗體。在某些情況下，該抗體包含a)包括與

圖1中所示的選定抗體的 重鏈⑶R區(qū)基本上相同的⑶R區(qū)的重量可變結(jié)構(gòu)域和b)包括與選定抗體的輕鏈⑶R區(qū)基 本上相同的CDR區(qū)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中該抗體結(jié)合選定的靶。在某些實施方案中，抗體 的⑶R區(qū)相對于選定抗體的⑶R區(qū)，總地可以含有，例如，一個、兩個、三個、四個、五個或至 多10個氨基酸差異(例如，氨基酸置換、缺失或插入)。在某些情況下，本發(fā)明抗體的⑶R 區(qū)可以具有由源自幾個相關抗體分析的共有序列限定的氨基酸序列。在一些實施方案中， 抗體的CDR區(qū)可以與選定抗體的CDR區(qū)相同。在特定的實施方案中，所述抗體可以包含可變結(jié)構(gòu)域，其包括a)重鏈可變結(jié)構(gòu) 域，其包括i.氨基酸序列與圖1選定抗體的重鏈⑶Rl區(qū)相同的⑶Rl區(qū)；ii.氨基酸序列 與選定抗體的重鏈⑶R2區(qū)相同的⑶R2區(qū)；和iii.氨基酸序列與選定抗體的重鏈⑶R3區(qū) 相同的CDR3區(qū)；和b)輕鏈可變區(qū)，其包括i.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈CDRl區(qū)相同 的CDRl區(qū)；ii.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈CDR2區(qū)相同的CDR2區(qū)；和iii.氨基酸序列 與選定抗體的輕鏈CDR3區(qū)相同的CDR3區(qū)；其中抗體特異性地結(jié)合選定的靶。在某些實施方案中，抗體包含a)可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.氨基酸序列與圖1選定 抗體的重鏈⑶Rl區(qū)相同的⑶Rl區(qū)；ii.氨基酸序列與選定抗體的重鏈⑶R2區(qū)相同的⑶R2 區(qū)，和iii.氨基酸序列與選定抗體的重鏈CDR3區(qū)相同的CDR3區(qū)；和b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域， 其包括i.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈CDRl區(qū)域相同的CDRl區(qū)；ii.氨基酸序列與選定 抗體的輕鏈CDR2區(qū)相同的CDR2區(qū)；和iii.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈CDR3區(qū)相同的 CDR3區(qū)；或b)部分a)的可變結(jié)構(gòu)域的變體，該變體除了在CDR區(qū)中有一定數(shù)量(例如，1、 2、3、4、5、6、7或8個)的氨基酸置換，其他與部分a)的可變區(qū)相同，其中該抗體結(jié)合選定的 靶，并且在某些實施方案中，結(jié)合選定靶的活性。在某些實施方案中，抗體可以包含選自表1的⑶R共有組的⑶R。在某些實施方案 中，抗體可以包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.包括選自表1的CDR共有組的CDRl氨基 酸序列的⑶Rl區(qū)；ii.包括選定⑶R共有序列的⑶R2氨基酸序列的⑶R2區(qū)；和iii.包括 選定CDR共有序列的CDR3氨基酸序列的CDR3區(qū)；和b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.包括 選定⑶R共有序列的⑶Rl氨基酸序列的⑶Rl區(qū)；ii.包括選定⑶R共有序列的⑶R2氨基 酸序列的⑶R2區(qū)；和iii.包括選定⑶R共有序列的⑶R3氨基酸序列的⑶R3區(qū)；其中所述 抗體特異性地結(jié)合選定的靶，在某些實施方案中，結(jié)合選定靶的活性。還提供了包括本發(fā)明抗體和藥物學上可接受載體的藥物組合物。
還提供了一種方法。在某些實施方案中，該方法可以包括在適于抗體與靶結(jié)合以 產(chǎn)生復合物的條件下，使本發(fā)明抗體與抗體的靶接觸。還提供了阻斷配體結(jié)合其受體的方法。在特定的實施方案中，該方法可以包括將 本發(fā)明抗體給予受治療者，其中所述抗體結(jié)合所述患者體內(nèi)的受體或配體并且阻斷所述配 體及其受體的結(jié)合。選定的靶可以是VEGF。附圖簡述圖1顯示了選定的VEGF-阻斷抗體的氨基酸序列。圖1的第1頁顯示了重鏈的氨 基酸序列。圖1的第2頁顯示了相應輕鏈的氨基酸序列。每個抗體的CDR的氨基酸序列是 框起來的。圖1中顯示的氨基酸序列是特異性結(jié)合VEGF并中和VEGF活性的抗體。從上至 下，圖 1(第 1/2 頁)SEQ ID NO :1-38 和圖 1 (第 2/2 頁)SEQ ID NO :39-76。定義在進一步描述本發(fā)明之前，應當理解本發(fā)明不限于所述的特定實施方案，因為這 些當然可以改變。還應當理解在此所用的術語只是為了描述特定實施方案的目的，而不是 限制性的，因為本發(fā)明的范圍將只由所附權利要求來限制。除非另外限定，在此所用的所有技術和科學術語都具有本發(fā)明所屬領域的普通技 術人員通常理解的相同意思。盡管與在此所述那些相似或相等的任何方法和材料可以用于 本發(fā)明的實踐或測試中，但現(xiàn)在將描述優(yōu)選的方法和材料。在此提及的所有出版物引入文 中作為參考，以公開和描述與所引用的出版物相關的方法和/或材料。必須注意到如在此和所附權利要求中所用的，單數(shù)形式“a”、“an”和“the”包括復 數(shù)指代物，除非文中另外清楚地指出。因此，例如，對“抗體”的提及包括多個這樣的抗體， 對“構(gòu)架區(qū)”的提及包括一個或多個構(gòu)架區(qū)及其本領域技術人員已知的等價物，諸如此類。在此所討論的出版物僅僅是為了在本申請?zhí)峤蝗罩暗墓_內(nèi)容而提供的。在此 沒有構(gòu)成承認由于現(xiàn)有技術的發(fā)明而本發(fā)明有權先于這些出版物。此外，所提供出版物的 日期可以不同于實際出版日期，這可能需要單獨證實。術語“抗體”和“免疫球蛋白，，在此可互換使用。這些術語是本領域技術人員充分 理解的，并且指的是由一個或多個特異性結(jié)合抗原的多肽組成的蛋白質(zhì)。一種形式的抗體 組成抗體的基礎結(jié)構(gòu)單位。這種形式是四聚物，由兩個相同對的抗體鏈組成，每對具有一個 輕鏈和一個重鏈。在每對中，輕鏈和重鏈可變區(qū)一起負責與抗原的結(jié)合，并且恒定區(qū)負責抗 體效應物功能。所識別的免疫球蛋白多肽包括κ和λ輕鏈以及α、y (IgG1, IgG2, IgG3、IgG4)、 δ、ε和μ重鏈，或其他物種中的等價物。全長免疫球蛋白“輕鏈”(約25kDa或約214個 氨基酸)包括NH2-末端的約110個氨基酸的可變區(qū)和COOH-末端的κ和λ恒定區(qū)。全 長免疫球蛋白“重鏈”(約50kDa或約446個氨基酸)，相似地包括可變區(qū)(約116個氨基 酸)和上述之一的重鏈可變區(qū)，例如Y (約330個氨基酸)。術語“抗體”和“免疫球蛋白”包括任何同種型的抗體或免疫球蛋白，保持特異性結(jié) 合抗原的抗體片段，包括，但不限于，F(xiàn)ab、Fv, scFv和Fd片段，嵌合抗體，人源化抗體，單鏈 抗體以及包含抗體的抗原結(jié)合部分和非抗體蛋白的融合蛋白?？贵w可以是可檢測標記的， 例如，使用放射性同位素、產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的酶、熒光蛋白等?？梢赃M一步將抗體綴合其他部分，如特異性結(jié)合對的成員，例如，生物素(生物素-抗生物素蛋白特異性結(jié)合對的成員) 等。還可以將抗體結(jié)合固體支持物，支持物包括但不限于聚苯乙烯平板或珠粒等。術語還 包括Fab’、Fv、F(ab’)2和或保持特異性結(jié)合抗原的其他抗體片段，以及單克隆抗體?？贵w 可以是單價的或雙價的?？贵w可以以各種其他形式存在，包括，例如，F(xiàn)v, Fab和(Fab’)2，以及雙功能 (即，雙特異性)雜交抗體(例如，Lanzavecchia 等，Eur. J. Immunol. 17，105 (1987))和 單鏈形式(例如，Huston 等，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α.，85，5879-5883，(1988)和 Bird等，Science，242，423-似6 (1988)，在此將其引入作為參考)。(參見，總地，Hood等， "Immunology", Benjamin, N. Y.，第 2 版，(1984)，和 Hunkapiller 和 Hood, Nature, 323, 15-16(1986)。免疫球蛋白輕鏈或重鏈可變區(qū)由被三個超變量區(qū)隔斷的“構(gòu)架”區(qū)(FR)組成，這 三個超變量區(qū)也稱為“互補決定區(qū)”或“⑶R”。之前已經(jīng)限定了構(gòu)架區(qū)和⑶R的范圍(參 見,“Sequences of Proteins of Immunological Interest，，,Ε· Kabat 等，U. S. Department ofHealth and Human Services, (1991))。在此討論了所有抗體氨基酸序列的編號遵照 Kabat系統(tǒng)進行。不同輕鏈或重鏈的構(gòu)架區(qū)的序列在物種內(nèi)相對保守?？贵w的構(gòu)架區(qū)，是組 成的輕鏈和重鏈的組合構(gòu)架區(qū)，用于定位和比對CDR。CDR主要負責結(jié)合抗原的表位。嵌合抗體是其輕鏈和重鏈基因通常是通過遺傳工程從屬于不同物種的抗體可變 區(qū)和恒定區(qū)構(gòu)建的抗體。例如，可以將來自非人單克隆抗體的基因的可變片段結(jié)合人的恒 定片段，如Yl和Y3。治療性嵌合抗體的一個實例是由來自兔抗體的可變區(qū)或抗原結(jié)合 結(jié)構(gòu)域和來自人抗體的恒定區(qū)或效應物結(jié)構(gòu)域組成的雜交蛋白(例如，由A.T.C.C.保藏號 CRL 9688的細胞制得的抗-Tac嵌合抗體)，盡管可以使用其他哺乳動物物種。如在此所用的，術語“人源化抗體”或“人源化免疫球蛋白”指的是含有一個或多個 氨基酸已經(jīng)由來自人抗體的相應位置的氨基酸置換的非人(例如，小鼠或大鼠)抗體。在一 些情況中，與相同抗體的非人源化形式相比，人源化抗體在人宿主中產(chǎn)生降低的免疫響應。將理解通過本發(fā)明方法設計和產(chǎn)生的人源化抗體具有對抗原結(jié)合或其他抗體功 能基本上沒有影響的氨基酸置換?！跋嗨频陌被幔?，如下定義:gly,ala ；val, ile, Ieu ；asp, glu ；asn, gin ；ser, thr ； lys, arg ；和phe，tyr。換句話說，gly和ala是相似的氨基酸；val，ile和Ieu是相似的氨 基酸；asp和glu是相似的氨基酸；asn和gin是相似的氨基酸；ser和thr是相似的氨基 酸；Iys和arg是相似的氨基酸；phe和tyr是相似的氨基酸。用相似氨基酸的氨基酸取代 在此稱為“保守性氨基酸置換”。不存在上述相同組中的氨基酸是“不相似”的氨基酸。術語“特異性結(jié)合”指的是抗體優(yōu)先結(jié)合不同分析物的均質(zhì)混合物中存在的特定 分析物的能力。在某些實施方案中，特異性結(jié)合的相互作用將區(qū)分出樣品中所需的和不需 要的分析物，在一些實施方案中，相互作用超過約10至100倍，或更高(例如，超過約1000 或 10，000 倍)。在某些實施方案中，當抗體及其靶在捕獲劑/分析物復合物中特異性結(jié)合時，它 們之間的親和性特征在于低于10_6M的Kd (解離常數(shù))，低于10_7M，低于10_8M，低于10_9M，低 于10_9M，低于10_"M，或低于約IO-12M或更低。重鏈或輕鏈抗體鏈的“可變區(qū)”是鏈的N-末端成熟區(qū)?；谛蛄斜葘徒Y(jié)構(gòu)知識來指定所有結(jié)構(gòu)域、CDR和殘基編號。按照Kabat，Chothia(Chothia, Structural determinants in the sequences of immunoglobulin variable domain. J Mol Biol 1998 ；278 :457-79)等所述的來進行構(gòu)架區(qū)和⑶R殘基的鑒定和編碼。VH是抗體重鏈的可變結(jié)構(gòu)域。VL是抗體輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域，其可能是κ (K)或λ 同種型。K-I抗體具有K-I同種型，而Κ-2抗體具有K-2同種型，并且V λ是可變λ輕 鏈。如在此所用的，術語“測定”、“測量”和“測試”和“試驗”可以互換使用，并包括定
量和定性測定。術語“多肽”和“蛋白質(zhì)”，在此可互換使用，指的是任何長度的氨基酸的聚合形式， 其可以包括編碼的和非編碼的氨基酸，化學或生化上修飾或衍生的氨基酸和具有修飾的肽 主鏈的多肽。術語包括融合蛋白，包括，但不限于，具有異源氨基酸序列的融合蛋白，具有異 源和同源前導序列的融合體，具有或不具有N-末端甲硫氨酸殘基；免疫學標記的蛋白質(zhì)； 具有可檢測融合伴侶的融合蛋白，例如，包括作為融合伴侶的熒光蛋白、β-半乳糖苷酶、熒 光素酶等；等等。多肽可以是任何大小的，并且術語“肽”指的是8-50個殘基(例如，8-20 個殘基)長的多肽。如在此所用的，術語“分離的”，在分離的抗體內(nèi)容中使用時，指的是至少60%，至 少75 %，至少90 %，至少95 %，至少98 %，甚至至少99 %的本發(fā)明抗體從純化之前與其相連 的其他成分中游離出來。在此所用的術語“治療”、“治療中”等指的是哺乳動物(例如，特別是人或小鼠) 中任何疾病或病癥的任何治療，并包括a)防止疾病、病癥，或疾病或病癥的癥狀在易患病 但尚未診斷出患病的患者中的發(fā)生；b)抑制疾病、病癥，或疾病或病癥的癥狀，例如，阻止 其在患者中的發(fā)展和/或延遲其發(fā)作或呈現(xiàn)；和/或c)緩解疾病、病癥，或疾病或病癥的癥 狀，例如，引起病癥或疾病和/或其癥狀的消退。術語“受治療者”、“宿主”、“患者”和“個體”在此可互換使用，指的是需要診斷或 治療的任何哺乳動物患者，特別是人。其他患者可以包括牛、狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬寸。“相應的氨基酸”是兩個或多個氨基酸序列比對時，相同位置(即，它們彼此相對排 列的位置)的氨基酸殘基。將抗體序列比對和編碼的方法更詳細地列于上文的Kabat中以 及其他的文獻中。如本領域所知的(參見，例如，Kabat 1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest, DHHS, Washington, DC)，有時候，為了完成比對，可以形成一個、 兩個或三個缺口和/或至多一個、兩個、三個或四個殘基，或至多約15個殘基的插入(特別 是在L 3和H 3CDR中)?！疤烊弧笨贵w是其中抗體的重鏈和輕鏈免疫球蛋白是通過多細胞生物體的免疫系 統(tǒng)自然選擇的抗體，與通過例如噬菌體展示制得的非天然配對抗體或人源化抗體相對。因 此，特定的抗體不含有任何病毒(例如，噬菌體MU)-衍生的序列。脾臟、淋巴結(jié)和骨髓是 產(chǎn)生天然抗體的組織的實例?！坝H本”抗體是氨基酸置換目標的抗體。在某些實施方案中，氨基酸可以由“供體” 抗體“捐贈”給親本抗體，以產(chǎn)生改變了的抗體?！跋嚓P抗體”是具有相似序列并由具有通用B細胞祖先的細胞產(chǎn)生的抗體。這樣的B細胞祖先含有具有重排輕鏈VJC區(qū)和重排重鏈VDJC區(qū)的基因組，并產(chǎn)生尚未經(jīng)受親和性 成熟的抗體。脾臟組織中存在的“天然”或“原始”B細胞是示例性的B細胞通用祖先。相 關抗體結(jié)合抗原的相同表位，并且序列通常是非常小的，特別是在其L3和H3 CDR中。相關 抗體的H3和L3 CDR具有相同的長度和接近相同的序列(例如，有0-4個殘基不同)。相 關抗體通過通用抗體祖先來互相關聯(lián)，通用抗體祖先是天然B細胞祖先中產(chǎn)生的抗體。術 語“相關抗體”不是用于描述一組不具有由B-細胞產(chǎn)生的通用抗體祖先的抗體。在某些情 況下，相關抗體i.結(jié)合相同的抗原；ii.各自包括相對彼此具有至少90%整體氨基酸序列 同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；iii.各自包括相對彼此具有至少90%整體氨基酸序列同一性 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；iv.具有相對彼此長度相同和序列相同(除了 0、1或2個氨基酸置換) 的H3 CDR ；和v.具有相對彼此長度相同和序列相同(除了 0、1或2個氨基酸置換)的L3 CDR。“阻斷抗體”、“中和抗體”或“中和......的抗體”或其任何語法等價物指的是其與
靶的結(jié)合導致將與靶的結(jié)合或靶的生物活性抑制例如至少約20 %、30 %、40 %、50 %、80 %、 95%或99%的抗體。通過測量靶生物活性的一個或多個指標來測定這種靶生物活性的抑 制，這些指標如受到靶影響的信號轉(zhuǎn)導途徑的激活、結(jié)合或細胞改變?？梢酝ㄟ^本領域已知 的幾個標準體外或體內(nèi)試驗中的一個或多個來測定在此所述的靶的生物活性。如在此所用的術語“VEGF”或其非縮寫形式“血管內(nèi)皮生長因子”指的是由VEGF 基因編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。VEGF涉及血管發(fā)生(胚胎循環(huán)系統(tǒng)的重新形成)和血管生成(血 管從預先存在的脈管系統(tǒng)開始的生長)。VEGF家族的所有成員通過結(jié)合細胞表面上的酪氨 酸激酶受體(VEGFR)來刺激細胞響應，使它們二聚化并通過轉(zhuǎn)磷酸作用得到激活。VEGF受 體具有包含7個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的胞外部分、單個跨膜橫跨區(qū)和包含分裂酪氨酸-激 酶結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)部分。VEGF-A 結(jié)合 VEGFR-I (Flt-I)和 VEGFR-2 (KDR/Flk-1)。VEGFR-2 看 來似乎介導幾乎全部已知的對VEGF的細胞響應。VEGF，其生物活性及其受體都得到了充分 的研究并在 Matsumoto 等(VEGF receptor signal transduction (VEGF 受體信號轉(zhuǎn)導)， Sci STKE. 2001 :RE21)和Marti 等(Angiogenesis in ischemic disease (缺血性疾病中的 血管生成)Thromb Haemost. 1999增補1 :44-5 的論文中有描述。術語VEGF用于包括重 組的VEGF分子，其可以通過標準重組表達方法來制備或商業(yè)購買(R&D Systems, Catalog No. 210-TA,Minneapolis,Minn.)，以及含有VEGF分子的融合蛋白。在此可以使用的示例性 VEGF的氨基酸序列可以在NCBI的Genbank數(shù)據(jù)庫中找到，并且人VEGF的全部描述基于在 各種疾病和病癥中的作用可以在Man數(shù)據(jù)庫的NCBI’ sOnline Mendelian hheritance中 找到。發(fā)明詳述提供了一種抗體。在某些情況下，該抗體包含a)包括與圖1中所示的選定抗體 的重鏈⑶R區(qū)基本上相同的⑶R區(qū)的重量可變結(jié)構(gòu)域和b)包括與選定抗體的輕鏈⑶R區(qū) 基本上相同的CDR區(qū)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中該抗體結(jié)合選定的靶。在某些實施方案中，抗 體的⑶R區(qū)相對于選定抗體的⑶R區(qū)，總地可以含有，例如，一個、兩個、三個、四個、五個至 至多10個氨基酸差異(例如，氨基酸置換、缺失或插入)。在一些實施方案中，抗體的⑶R 區(qū)可以與選定抗體的CDR區(qū)相同。如顯而易見的，這樣的抗體進一步含有決定CDR的位置 的構(gòu)架序列。
在特定的實施方案中，本發(fā)明抗體可以具有a)具有與圖1中所示的選定抗體的 重鏈可變結(jié)構(gòu)域為至少80%同一性(例如，至少90%，至少95%或至少98%或99%同一 性)的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和b)具有與選定抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域為至少80% 同一性(例如，至少90%，至少95%或至少98%或99%同一性)的氨基酸序列的輕鏈可變 結(jié)構(gòu)域。在特定的實施方案中，抗體可以包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.氨基酸序列 與圖1的選定抗體的重鏈CDRl區(qū)相同的CDRl區(qū)；ii.氨基酸序列與選定抗體的重鏈CDR2 區(qū)相同的CDR2區(qū)；和iii.氨基酸序列與選定抗體的重鏈CDR3區(qū)相同的CDR3區(qū)；和b)輕 鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈CDRl區(qū)相同的CDRl區(qū)；ii.氨基 酸序列與選定抗體的輕鏈CDR2區(qū)相同的CDR2區(qū)；和iii.氨基酸序列與選定抗體的輕鏈 CDR3區(qū)相同的CDR3區(qū)；其中該抗體特異性地結(jié)合選定的靶。用單個抗原使兔免疫產(chǎn)生多重抗體，這些抗體可以通過它們序列的關聯(lián)性來分 組。每組內(nèi)的抗體彼此相關，因為它們是由具有共同天然B細胞祖先的細胞產(chǎn)生的。由祖 先B細胞產(chǎn)生的抗體尚未經(jīng)受親和性成熟，而相關抗體已經(jīng)經(jīng)受親和性成熟和B-細胞發(fā)育 的最后階段，并從通用B-細胞祖先抗體的“發(fā)展”而來，因為它們含有由親和性成熟過程中 發(fā)生的體細胞超突變、基因轉(zhuǎn)變和其他細胞突變事件引起的氨基酸置換?？梢詫⑾嚓P抗體的氨基酸序列進行比較(例如，通過比對那些序列)，并且根據(jù)它 們彼此的相似性將抗體歸類，以鑒定相關組的抗體。相關抗體組的抗體通常含有接近相同 的序列，具有長度相同的CDR區(qū)，并在構(gòu)架和/或CDR區(qū)中具有氨基酸序列的差異。這些差 異表示可以在任一相關抗體中被置換的氨基酸。在某些情況下，一個位置上的氨基酸可以 是不相似的氨基酸，例如，在該情況下，在該位置的氨基酸可以由任何其他氨基酸置換。在 其他情況下，一個位置上的氨基酸可以是相似的氨基酸，在該情況下，該位置上的氨基酸可 以由相似的氨基酸置換，其中相似氨基酸如上所定義。在某些情況下，如果氨基酸不同，可 以將來自一個相關抗體的氨基酸替換成另一個的。因為最初通過免疫過的動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生并有效測試了特定共有組的每個 CDR，用一個氨基酸替換成另一個共有氨基酸應當是抗體充分耐受的。將圖1的抗體進行 比對，鑒定相關的抗體組，并鑒定出共有序列。在某些情況下，抗體可以包括CDR共有組 的⑶R，其中⑶R共有組源自相關抗體的序列比對。圖1抗體的共有序列顯示于表1中。 表1表示本發(fā)明抗體中的可置換位置，其中例如，置換可以是任何其他氨基酸、相似氨基酸 (即，保守性氨基酸置換)或來自一個抗體的置換另一個的。這樣的方法在美國專利申請 10/984，473(作為US-2006-0099204公開)中有進一步的描述，為了那些方法的公開內(nèi)容， 將其引入作為參考。 在某些實施方案中，所述抗體可以包含選自表1的⑶R共有組的⑶R。在特定的實 施方案中，所述抗體可以包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括i.包括選自表1的CDR共有組 的⑶Rl氨基酸序列的⑶Rl區(qū)；ii.包括選定⑶R共有序列的⑶R2氨基酸序列的⑶R2區(qū)； 和iii.包括選定⑶R共有序列的⑶R3氨基酸序列的⑶R3區(qū)；和b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包 括i.包括選定⑶R共有序列的⑶Rl氨基酸序列的⑶Rl區(qū)；ii.包括選定⑶R共有序列 的⑶R2氨基酸序列的⑶R2區(qū)；和iii.包括選定⑶R共有序列的⑶R3氨基酸序列的⑶R3 區(qū)；其中所述抗體特異性地結(jié)合選定的靶。
例如，這樣的抗體可以包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其具有i.通式NNA/DVMC(SEQ ID NO 77)的 CDRl，通式 CIMTTDVVTE/AYANWAKS (SEQ ID NO 78)的 CDR2 和通式 DSVGSPLMSFDL (SEQ ID NO :79)的 CDR3，和；b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其具有通式 QASQN/SL/ VYN/GNNELS (SEQ ID NO 80)的 CDR1，通式 W/RASTLAS (SEQ ID NO 81)的 CDR2 和通式 A/S/ GGYKSYS/YND/GGN/SG (SEQ ID NO 82)的 CDR3，其中抗體阻斷 VEGF。
權利要求
1.一種抗體，其包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括與圖1中所示的選定抗體的重鏈CDR區(qū)基本上相同的CDR區(qū)和b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括與選定抗體的輕鏈CDR區(qū)基本上相同的CDR區(qū)， 其中該抗體結(jié)合選定的靶。
2.權利要求1的抗體，其中所述抗體是單價抗體。
3.權利要求1的抗體，其中所述抗體是二價抗體。
4.權利要求1的抗體，其中所述抗體是單鏈抗體。
5.權利要求1的抗體，其中所述抗體是人源化的。
6.權利要求1的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
7.一種方法，其包括在適于所述抗體與所述靶結(jié)合以產(chǎn)生復合物的條件下，使權利要求1的抗體與所述抗 體的靶接觸。
8.—種阻斷配體與其受體結(jié)合的方法，其包括將權利要求1的抗體給予受治療者，其中所述抗體與所述受治療者體內(nèi)的受體或配體 結(jié)合并阻斷所述受體與所述配體的結(jié)合。
9.一種藥物組合物，其包含權利要求1的抗體和藥物學上可接受的載體。
全文摘要
提供了一種抗體。在某些情況下，該抗體包含a)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括與選定抗體的重鏈CDR區(qū)基本上相同的CDR區(qū)和b)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包括與選定抗體的輕鏈CDR區(qū)基本上相同的CDR區(qū)，其中該抗體結(jié)合選定的靶。
文檔編號A61K39/395GK102065888SQ200880128968
公開日2011年5月18日 申請日期2008年10月8日 優(yōu)先權日2008年3月26日
發(fā)明者余國良, 朱偉民, 柯耀煌 申請人:宜康公司