專利名稱：炎癥靶向顆粒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及遞送如治療劑或顯像劑等活性劑的運(yùn)載體，特別是，涉及能夠靶向攻擊炎癥的微顆?；蚣{米顆粒。發(fā)明簡述根據(jù)一個(gè)實(shí)施方式，一種治療或監(jiān)測炎癥相關(guān)病癥的方法，包含給予有需要的對(duì)象一種包含可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒的組合物，其包含至少一種活性劑，其中微顆粒或納米顆粒的表面a)帶有正電荷，且b)不含靶向配體。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方式，一種包含可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒的組合物，其包含至少一種活性劑，其中微顆?；蚣{米顆粒的表面a)帶有正電荷，且b)不含靶向配體。根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方式，一種靶向攻擊對(duì)象中發(fā)炎細(xì)胞的方法，包含給予所述對(duì)象包含可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒的組合物，其含有至少一種活性劑，其中微顆?；蚣{米顆粒的表面a)帶有正電荷，且b)不含靶向配體。


圖IA-D是關(guān)于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和J774巨噬細(xì)胞攝取氧化的、APTES 或聚乙二醇化(PEG化)的硅顆粒。圖1顯示了 HUVEC細(xì)胞無血清內(nèi)化3. 2 μ m硅顆粒的掃描電鏡顯微圖像。左圖的分辨率標(biāo)尺為5 μ m，右圖的分辨率標(biāo)尺為2 μ m。圖IB為比較在 37°C孵育1小時(shí)后HUVEC細(xì)胞內(nèi)化無血清和調(diào)理的顆粒的圖表。圖IC為表示血清調(diào)理作用前后(100%血清4°C處理60分鐘)3. 2μπι微顆粒的靜電勢(ζ)的表格。圖ID顯示了在37°C孵育1小時(shí)后，血清對(duì)于J774巨噬細(xì)胞攝取1. 6 μ m微顆粒的影響Γρ < 0. 03)。圖 IB和ID中的Y-軸為帶有顆粒的細(xì)胞(高側(cè)向分散細(xì)胞)的百分比。圖2A-C是關(guān)于HUVEC細(xì)胞和J774巨噬細(xì)胞攝取IgG調(diào)理的硅顆粒。圖2Α和2Β 顯示了在37°C孵育1小時(shí)后，HUVEC(A)和J774(B)細(xì)胞對(duì)于無血清及IgG調(diào)理的3. 2 μ m 氧化微顆粒的攝取的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果。圖2C顯示了用流式細(xì)胞分析確定的FC γ R的表面表達(dá)定量。圖3A-D是關(guān)于細(xì)胞因子刺激的HUVEC細(xì)胞和J774細(xì)胞攝取硅顆粒。圖3A是比較對(duì)照HUVEC細(xì)胞和細(xì)胞因子刺激的HUVEC細(xì)胞之間對(duì)于氧化的、APTES或聚乙二醇化(PEG 化)的3. 2μπι硅顆粒的攝取的圖表。圖:3Β是比較對(duì)照J(rèn)774細(xì)胞和細(xì)胞因子刺激的J774 細(xì)胞之間對(duì)于氧化的、APTES或聚乙二醇化(PEG化)的3. 2 μ m硅顆粒的攝取的圖表。圖 3C和3D是HUVEC(C)和J774⑶細(xì)胞攝取3. 2 μ m硅顆粒的掃描電鏡顯微圖像(37°C孵育 30分鐘)。圖4A-C是關(guān)于HUVEC細(xì)胞內(nèi)化氧化硅顆粒(無血清)。圖4A是在37°C與1. 6 μ m、3. 2 μ m或兩種尺寸的氧化硅顆粒孵育15分鐘、30分鐘或60分鐘后，硅芯片上生長的HUVEC 的掃描電鏡顯微圖像。圖4B顯示了 HUVEC與3. 2 μ m氧化硅微顆粒在37°C孵育15和120 分鐘后，用Alexa Fluor 555鬼筆環(huán)肽進(jìn)行肌蛋白染色的共聚焦顯微圖像。圖4C顯示了在 60或120分鐘時(shí)，從中心剪裁出的共聚焦投影圖像，用來說明顆粒的位置。
圖5A-C是關(guān)于HUVEC細(xì)胞早期攝取氧化硅顆粒和FITC右旋糖苷(無血清)。圖 5A和5B是在37°C孵育15分鐘后，HUVEC攝取1. 6 μ m(A)或3. 2 μ m(B)硅顆粒的透射電鏡顯微圖像。圖5C顯示了在沒有顆粒(綠色實(shí)心峰，從左數(shù)第二個(gè))，1.6 μ m(紅色空心峰， 右峰)或3.2 μ m(紫色空心峰，從右數(shù)第二個(gè))硅顆粒情況下，孵育1小時(shí)，HUVEC對(duì)FITC 右旋糖苷的內(nèi)化。實(shí)心藍(lán)色峰(左側(cè)峰)代表了在不含F(xiàn)ITC右旋糖苷的培養(yǎng)基中孵育的 HUVEC0在圖5C中，X-軸為由內(nèi)化的FITC右旋糖苷產(chǎn)生的熒光，Y-軸為計(jì)數(shù)(高度取決于細(xì)胞的數(shù)量)。圖6A-B顯示了在2小時(shí)內(nèi)化顆粒的細(xì)胞定位。圖6A顯示了較小的1.6μπι顆粒位于細(xì)胞的核周區(qū)?？梢钥吹揭恍╊w粒周圍有膜。圖6Β顯示了較大的3.2μπι顆粒更為分散，并且缺乏明顯的膜，其可以指示內(nèi)化體逃逸。在圖6Α和6Β的主圖中分辨率標(biāo)尺為10 微米，在插圖中為500納米。發(fā)明詳述相關(guān)應(yīng)用下列研究文獻(xiàn)和專利文件可以幫助理解本發(fā)明，其整體引入本文作為參考1) 2007 年 10 月 25 日發(fā)表的 PCT 公報(bào)第 W 2007/120248 號(hào)；2) 2008 年 4 月 10 日發(fā)表的 PCT 公報(bào)第 WO 2008/041970 號(hào)；3) 2008 年 2 月 21 曰發(fā)表的 PCT 公報(bào)第 WO 2008/021908 號(hào);4)2008年5月1日發(fā)表的美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2008/0102030號(hào)；5)2003年6月19日發(fā)表的美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2003/0114366號(hào)；6)2008年8月觀日發(fā)表的美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2008/0206344號(hào)；7)2008年11月13日發(fā)表的美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2008/(^80140號(hào)；6) Tasciotti Ε.等，2008 自然納米科學(xué)(Nature Nanotechnology) 3，151-157定義除非特別指明，“一種”表示一種或多種?！拔㈩w粒”表示最大特征尺寸為1微米到1000微米、或1微米到100微米的顆粒。 “納米顆?！北硎咀畲筇卣鞒叽缧∮?微米的顆粒?！闭{(diào)理素“是一種當(dāng)結(jié)合到顆粒上時(shí)能夠增加顆粒噬菌作用的蛋白?！爱愓{(diào)理素”(Dysopsonin)是一種當(dāng)結(jié)合到顆粒上時(shí)能夠降低顆粒噬菌作用的蛋白?！翱烧{(diào)理的”是指顆粒當(dāng)接觸血液或例如血清等血液組分時(shí)能夠進(jìn)行調(diào)理作用，即顆粒能夠結(jié)合來自血液或其組分的一種或多種蛋白。優(yōu)選地，當(dāng)接觸血液或血液組分時(shí)，可調(diào)理顆粒結(jié)合一種或多種調(diào)理素且不結(jié)合異調(diào)理素?！凹{米多孔的”或“納米孔”指平均尺寸小于1微米的孔?！吧锟山到狻敝改軌蛟谏斫橘|(zhì)中溶解或降解的材料，或是能在生理?xiàng)l件下被生理酶降解和/或在化學(xué)條件下降解的生物相容性聚合材料?！吧锵嗳荨敝府?dāng)接觸活細(xì)胞時(shí)，材料能夠支持細(xì)胞的適當(dāng)細(xì)胞活力而不引起細(xì)胞中的不良影響，所述不良影響例如細(xì)胞的生存周期的變化、細(xì)胞增殖速率的變化和細(xì)胞毒性作用。公開本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了可調(diào)理微顆粒或納米顆粒，其帶有表面正電荷，能在血液或如血清等血液組分中進(jìn)行調(diào)理作用，以這樣的方式，顆粒可優(yōu)先結(jié)合蛋白，能在進(jìn)行調(diào)理作用后，讓顆粒能特異性攻擊對(duì)象體內(nèi)的發(fā)炎細(xì)胞。優(yōu)選地，在調(diào)理作用前，帶正電荷的可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒在其表面上不含有靶向配體，例如抗體，肽和/或核酸適體。與在調(diào)理作用前帶有表面負(fù)電荷或不帶電荷的其它相同的微顆粒或納米顆粒相比，進(jìn)行調(diào)理作用后，帶正電的可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒被如巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞攝取較少。在本說明書中，攝取較少可以表示調(diào)理的帶正電荷的顆粒被免疫細(xì)胞內(nèi)化要比調(diào)理的帶負(fù)電荷的顆?；蛑行灶w粒要花更長的時(shí)間。作為結(jié)果，當(dāng)攻擊發(fā)炎的細(xì)胞時(shí)，調(diào)理的帶正電的顆?？梢员苊庠趯?duì)象體內(nèi)被免疫細(xì)胞攝取。優(yōu)選地，在調(diào)理作用前，可調(diào)理顆粒的表面不含有抗調(diào)理作用的包被，例如由聚乙二醇(PEG)或其他親水鏈形成的包被。盡管用親水鏈包被顆粒，稱為聚乙二醇化，能夠減少或防止顆粒被巨噬細(xì)胞快速內(nèi)化，同時(shí)聚乙二醇化通常能防止顆粒結(jié)合到靶細(xì)胞上。在很多實(shí)施方式中，在調(diào)理作用前，可調(diào)理顆粒的表面不帶有白蛋白。在很多實(shí)施方式中，在調(diào)理作用前，可調(diào)理顆粒表面不帶有任何調(diào)理素。在很多實(shí)施方式中，在調(diào)理作用前，可調(diào)理顆粒的表面不帶有任何蛋白。通過特異性攻擊對(duì)象體內(nèi)發(fā)炎的細(xì)胞，帶正電的可調(diào)理顆粒可用于治療、預(yù)防和/ 或檢測對(duì)象中與炎癥相關(guān)的病癥，例如細(xì)胞因子刺激的炎癥，所述對(duì)象例如帶有血液系統(tǒng)的動(dòng)物。在很多實(shí)施方式中，對(duì)象可為哺乳動(dòng)物，例如人。帶正電荷的可調(diào)理顆?？捎糜谔禺愋怨舭l(fā)炎的脈管系統(tǒng)，從而用于治療、預(yù)防和/或檢測與炎癥相關(guān)的病癥或疾病。這些病癥的例子包括但不限于，過敏，哮喘，阿爾茲海默氏癥，糖尿病，內(nèi)分泌失調(diào)，自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，牛皮癬，骨關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松，動(dòng)脈粥樣硬化，包括冠心病，脈管炎，慢性炎癥，如肥胖，潰瘍，例如馬喬林氏潰瘍，由石棉或香煙煙霧引起的呼吸道炎癥，包皮炎癥，由病毒引起的炎癥，如人類乳頭狀瘤病毒，乙肝病毒或丙肝病毒或EB病毒，血吸蟲病，盆腔炎，卵巢上皮炎癥，巴雷特食管癌變，幽門螺旋桿菌胃炎，慢性胰腺炎，中華肝吸蟲感染，慢性膽囊炎和炎性腸道疾病，以及炎癥相關(guān)的癌癥，包括前列腺癌，結(jié)腸癌， 乳腺癌，胃腸道癌癥，如胃癌，肝細(xì)胞癌，大腸癌，胰腺癌，胃癌，鼻咽癌，食道癌，膽管癌，膽囊癌和肛門癌；外皮癌癥，如皮膚癌；呼吸道癌癥，如支氣管癌和間皮瘤；泌尿生殖道癌癥， 如包皮過長，陰莖癌和膀胱癌；生殖系統(tǒng)腫瘤，如卵巢癌。特別是，通過特異性攻擊與可導(dǎo)致癌癥的炎癥病癥相關(guān)的發(fā)炎細(xì)胞，帶正電的可調(diào)理顆?？捎糜趤眍A(yù)防某些類型的癌癥。例如，通過攻擊馬喬林氏潰瘍引起的炎癥，帶正電的可調(diào)理顆粒預(yù)防皮膚癌；通過攻擊石棉、硅土或吸煙引起的炎癥，顆?？深A(yù)防支氣管癌； 通過攻擊包皮炎癥，顆?？梢灶A(yù)防包皮過長；通過攻擊人乳頭狀瘤病毒引起的炎癥，顆粒可以預(yù)防陰莖癌和/或肛門癌；通過攻擊血吸蟲病引起的炎癥，顆粒可預(yù)防膀胱癌；通過攻擊盆腔炎或卵巢上皮炎癥引起的炎癥；顆?？梢灶A(yù)防卵巢癌；通過攻擊EB病毒引起的炎癥， 顆?？梢灶A(yù)防鼻咽癌；通過攻擊巴雷特食管癌變引發(fā)的炎癥，顆?？深A(yù)防食道癌；通過攻擊幽門螺桿菌胃炎引起的炎癥，顆?？深A(yù)防胃癌；通過攻擊慢性胰腺炎引起的炎癥，顆?？梢灶A(yù)防胰腺癌；通過攻擊中華肝吸蟲感染引起的炎癥，顆?？梢灶A(yù)防膽管癌；通過攻擊慢性膽囊炎引起的炎癥，顆?？梢灶A(yù)防膽囊癌；通過攻擊乙肝或丙肝引起的炎癥，顆粒可以預(yù)防肝細(xì)胞癌；通過攻擊炎性腸道疾病引起的炎癥，顆?？梢灶A(yù)防結(jié)腸癌。
與炎癥相關(guān)的病癥和疾病在下列文獻(xiàn)中公開1)M. Macarthur等.美國生理學(xué)雜志，胃腸道肝臟生理學(xué)(Am. J. Physiol Gastrointest Livel Physiol.) 286 〃 G515-520， 2004 ；2)Calogero 等·乳癌研究(Breast Cancer Research)，v. 9(4), 2007；Wienberg 等·臨床調(diào)查雜志(J.Clin· Invest)，112 :1796-1808,2003 ;Xu 等·臨床調(diào)查雜志(J.Clin Invest)，112 1821-1830，2003。 帶正電的可調(diào)理顆?？捎米髅绹鴮＠暾?qǐng)第US200^80140號(hào)和PCT公報(bào)第 W02008021908號(hào)公開的多級(jí)藥物遞送系統(tǒng)的一部分。例如，在一些實(shí)施方式中，帶正電的顆粒可包含至少一種第二階段顆粒，其可帶有活性劑。顆?？烧{(diào)理顆?？蔀楦鞣N形狀和尺寸。可調(diào)理顆粒的尺寸沒有具體的限制，并且取決于應(yīng)用。例如，對(duì)于血管內(nèi)給藥，顆粒的最大特征尺寸可為小于對(duì)象的最小毛細(xì)管的半徑，人的最小毛細(xì)管半徑為約4到5微米。在一些實(shí)施方式中，顆粒的最大特征尺寸可為小于約100微米，或小于約50微米， 或小于約20微米，或小于約10微米，或小于約5微米，或小于約4微米，或小于約3微米，或小于約2微米，或小于約1微米左右。在又一些實(shí)施方式中，顆粒的最大特征尺寸可為100 納米到3微米，或200納米到3微米，或500納米到3微米，或700納米到2微米。在又一些實(shí)施方案，顆粒的最大特征尺寸可能大于約2微米，或大于約5微米，或大于約10微米。 顆粒的形狀沒有特別的限制。在一些實(shí)施方式中，顆?？蔀榍蛐晤w粒。在又一些實(shí)施方式中，顆?？蔀榉乔蛐晤w粒。在一些實(shí)施方式中，顆?？梢跃哂袑?duì)稱的形狀。在又一些實(shí)施方式中，顆粒可以具有不對(duì)稱的形狀。在一些實(shí)施方式中，顆?？梢杂兴x的非球形形狀，設(shè)計(jì)成便于顆粒與靶位點(diǎn)表面接觸，所述靶位點(diǎn)例如發(fā)炎血管的內(nèi)皮表面。合適的形狀的例子包括但不限于，扁球體， 盤狀或圓柱體。在一些實(shí)施方式中，顆?？梢允侵挥兴獗砻娴囊徊糠直辉O(shè)計(jì)成一種便于顆粒與靶位點(diǎn)表面接觸的形狀，所述靶位點(diǎn)例如內(nèi)皮表面，而外表面的其他部分沒有設(shè)計(jì)成這樣的形狀。例如，顆?？梢詾榻囟痰谋馇蛐晤w粒。能夠便于顆粒與靶位點(diǎn)表面接觸的顆粒的尺寸和形狀，可以用美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2008/0206344號(hào)和2008年7月四日遞交的美國專利申請(qǐng)第12/181，759號(hào)中公開的方法來進(jìn)行評(píng)估。在許多實(shí)施方式中，可調(diào)理顆?？蔀槎嗫最w粒，即由多孔材料構(gòu)成的顆粒。 多孔材料可為多孔氧化物材料或多孔蝕刻材料。多孔氧化物材料的例子包括但不限于，多孔氧化硅，多孔氧化鋁，多孔氧化鈦和多孔氧化鐵。術(shù)語“多孔蝕刻材料”指通過濕蝕刻技術(shù)引入孔的材料，例如電化學(xué)蝕刻。多孔蝕刻材料的例子包括但不限于，半導(dǎo)體材料，例如多孔硅，多孔鍺，多孔GaAs，多孔hP，多孔SiC，多孔SixGe1Y多孔feiP，多孔feiN。制造多孔蝕刻顆粒的方法在例如美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2008/(^80140號(hào)等中有公開。在許多實(shí)施方式中，多孔顆粒可為納米多孔顆粒。
在一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的平均孔徑可為約1納米到1微米，或約1納米到 800納米，或約1納米到500納米，或約1納米到300納米，或從約1納米到200納米，或從約2納米到100納米。在一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的平均孔徑可為不超過1微米，或不超過800納米， 或不超過500納米，或不超過300納米，或不超過200納米，或不超過100納米，或不超過80 納米，或不超過50納米。 在一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的平均孔徑可為約5到100納米，或約10到60納米， 或約20到40納米，或約30到30納米。在一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的平均孔徑可為約1納米到10納米，或約3納米到 10納米，或約3納米到7納米。一般而言，可以用多種技術(shù)來確定孔的大小，包括N2吸附/脫附和顯微鏡檢，例如掃描電鏡。在一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的孔可為線性孔。在又一些實(shí)施方式中，多孔顆粒的孔可為海綿樣孔。在一些實(shí)施方式中，至少一種多孔顆?？砂锟山到鈪^(qū)。在許多實(shí)施方式中， 整個(gè)顆粒都是可降解的。一般而言，根據(jù)它們的孔隙率和孔徑，多孔硅可為生物惰性的、生物活性的或生物可降解的。多孔硅的生物降解速率或速度也可取決于它的孔隙率和孔徑。參見例如Canham LT編的《多孔硅的性質(zhì)》中Canham的“硅的生物醫(yī)藥應(yīng)用”，EMIS數(shù)據(jù)綜述系列第18冊(cè)， 倫敦，INSPEC,第 371-376 頁(Canham Biomedical Applications of Silicon, in Canham LT, editor. Properties of porous silicon. EMIS datareview series No. 18. London INSPEC. p. 371-376)。生物可降解速率也可取決于表面修飾。多孔硅顆粒和其制造方法公開于，例如 Cohen. H.等 Biomedical Microdevices 5 :3，253-259，2003 ；美國專利申請(qǐng)公報(bào)第2003/0114366號(hào)；美國專利第6，107，102號(hào)和第6，355，270號(hào)；美國專利申請(qǐng)公報(bào)第 2008/(^80140 號(hào)；PCT 公報(bào)第 WO 2008/021908 號(hào)；Foraker，A. B.等.藥物學(xué)研究(Pharma. Res. )20(1)，110-116(2003) ；Salonen, J.等·(控制釋放雜志)Jour. Contr. Rel. 108， 362-374 (2005)。多孔氧化硅顆粒及其制造方法在如2002年8月的I^aik J. A.等.材料研究雜志CJ. Mater. Res.)，第17卷，第2121頁中有公開?？烧{(diào)理顆?？捎枚喾N技術(shù)制備。在一些實(shí)施方式中，可調(diào)理顆?？蔀樽陨隙轮苽涞念w粒，即采用自上而下的微加工或納米加工技術(shù)生產(chǎn)的顆粒，例如光蝕刻法，電子束蝕刻法，X射線蝕刻法，深紫外蝕刻法，納米壓印蝕刻法或蘸筆納米蝕刻法。這樣的制造方法可以允許擴(kuò)大規(guī)模生產(chǎn)顆粒，所述顆粒在尺寸上是均一的或基本相同的?；钚詣┗钚詣┛蔀橹委焺@像劑或其組合?；钚詣┛蔀槟軓陌摶钚詣┑念w粒上釋放出來的制劑?；钚詣┑倪x擇取決于應(yīng)用。治療劑治療及可為任何生理或藥理活性物質(zhì)，其能在動(dòng)物中的靶位點(diǎn)產(chǎn)生所需的生物效應(yīng)，所述動(dòng)物例如哺乳動(dòng)物或人。治療劑可為任何無機(jī)或有機(jī)化合物，包括但不限于，肽，蛋白，核酸和小分子，其可為定性的或未定性的。治療劑可為各種不同的形式，例如未改變的分子，分子復(fù)合物，藥理上可接受的鹽，例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，月桂酸鹽，棕櫚酸鹽，磷酸鹽，亞硝酸鹽，硝酸鹽，硼酸鹽，醋酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，油酸鹽，水楊酸鹽等等。對(duì)于酸性治療劑，可以使用金屬鹽，胺或有機(jī)陽離子，例如季銨鹽。藥物的衍生物，例如堿、酯和酰胺，也可用作治療劑。不溶于水的治療劑在使用時(shí)，在任一例子中，可以用其水溶性衍生物的形式，或作為其堿衍生物的形式，或是通過它的遞送，經(jīng)過初始治療活性形式的被酶轉(zhuǎn)化、被體內(nèi)PH水解、或其他代謝加工的形式。治療劑可為化療劑，免疫抑制劑，細(xì)胞因子，細(xì)胞毒性劑，核水解化合物，放射性同位素，受體或前藥活化酶，其可為天然存在的或是通過合成或重組方法生產(chǎn)的，或是其任意組合。受到經(jīng)典多藥物抗性影響的藥物作為治療劑特別有效，例如長春花生物堿(如長春堿和長春新堿)，蒽環(huán)類藥物(如阿霉素和柔紅霉素)，RNA轉(zhuǎn)錄抑制劑(如放線菌素-D) 和微管穩(wěn)定藥物(如紫杉醇)。癌癥化療劑可為優(yōu)選治療劑。有用的癌癥化療藥物包括氮芥，亞硝基脲，環(huán)乙亞胺，烷烴磺酸鹽，四嗪，鉬化合物，嘧啶類似物，嘌呤類似物，抗代謝藥物，葉酸類似物，蒽環(huán)類，紫杉烷類，長春花生物堿，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑和激素制劑。示例性的化療藥物為放線菌素-D，苯丙氨酸氮芥，阿糖胞苷(Ara-C)，阿那曲唑，天冬酰胺酶，BiCNU,比卡魯胺，博萊霉素，白消安，卡培他濱，卡波鉬(Carboplatin)，卡鉬(Carboplatinum)，卡莫司汀，CCNU，苯丁酸氮芥，順鉬，克拉屈濱，CPT-11，環(huán)磷酰胺，阿糖胞苷，阿糖胞苷，環(huán)磷酰胺，達(dá)卡巴嗪，更生霉素，柔紅霉素，右雷佐生，多西紫杉醇，阿霉素，DTIC,表阿霉素，環(huán)乙亞胺，依托泊苷，氟尿苷，氟達(dá)拉濱，氟脲嘧啶，氟他胺，福莫司汀，吉西他濱，赫賽汀，六甲銨，羥基脲，去甲氧柔紅霉素，異環(huán)磷酰胺，伊立替康，洛莫司汀，二氯甲基二乙胺，美法侖，巰基嘌呤，甲氨蝶呤， 絲裂霉素，米托坦，米托蒽醌，草酸鉬，紫杉醇，帕米膦酸，噴司他丁，光輝霉素，甲基芐胼，美羅華，類固醇，鏈脲霉素，STI-571，鏈脲霉素，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊苷，四嗪，硫鳥嘌呤，塞替派，雷替曲塞，拓?fù)涮婵?，曲奧舒凡，曲美沙特，長春堿，長春新堿，長春地辛，長春瑞濱，VP-16和希羅達(dá)。有用的癌癥化療劑還包括烷化劑，例如塞替派和環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽，例如如白消安，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯多巴，卡波醌，美妥多巴和優(yōu)樂多巴；乙烯亞胺和甲基三聚氰胺包括六甲蜜胺，三乙烯胺三嗪，三亞乙基磷酰胺，三亞乙基硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺；氮芥例如苯丁酸氮芥，萘氮芥，萘磷酰胺，雌氮芥，異環(huán)磷酰胺，二氯甲基二乙胺，二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽，美法侖，諾夫比因(Novembiehin)，苯芥膽留醇，松龍苯芥，曲洛磷胺，尿嘧啶芥；硝基脲例如卡莫司汀，氯脲菌素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素例如阿克拉霉素，放線菌素，蒽霉素，重氮絲氨酸，博來霉素，放線菌素 C，加里剎霉素，卡柔比星，洋紅霉素，嗜癌素，色霉素，更生霉素，柔紅霉素，地托比星，6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸，阿霉素，表阿霉素，依索比星，依達(dá)比星，麻西羅霉素，絲裂霉素， 霉酚酸，諾加霉素，橄欖霉素，培洛霉素，甲基絲裂霉素，嘌呤霉素，三鐵阿霉素，羅多比星， 鏈黑菌素，鏈脲霉素，殺結(jié)核菌素，烏苯美司，凈司他丁和佐柔比星；抗代謝藥例如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物例如二甲葉酸，甲氨蝶呤，蝶羅呤和三甲曲沙；嘌呤類似物例如氟達(dá)拉濱，6-巰基嘌呤，硫咪嘌呤和硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如安西他濱，氮雜胞苷，6-氮雜尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，二脫氧尿苷，去氧氟尿苷，依諾他濱，氟尿苷和5-FU ； 雄激素例如卡普睪酮，丙酸屈他雄酮，硫雄留醇，美雄烷和睪內(nèi)酯；抗腎上腺藥例如氨魯米特，米托坦和曲洛司坦；葉酸補(bǔ)充劑例如甲酰四氫葉酸；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺苷；氨基酮戊酸；安吖啶；阿莫司丁 (Bestrabucil)；比生群；依達(dá)曲沙；德福法明(defofamine)；地美可辛；地吖醌；依氟鳥氨酸；依利醋銨；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達(dá)明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達(dá)醇；硝氨吖啶；噴司他丁 ；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼白酸；2-乙基酰胼；甲基芐胼；PSK ;丙亞胺；西佐喃；鍺螺胺；細(xì)格孢氮雜酸；三亞胺醌；2，2’，2”_三氯三乙胺；烏拉坦；長春地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷； gacytosine ；阿拉伯糖苷(“Ara-C")；環(huán)磷酰胺；硫替哌(thiotEPa)；紫杉類藥物例如紫杉醇(TAX0L ，施貴寶腫瘤治療公司，普林斯頓市，新澤西州)和紫杉萜(TAX0TERE ，羅納普朗克制藥公司，安東尼市，法國)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；氨甲喋呤；鉬類似物例如順鉬和卡鉬；長春堿；鉬；依托泊苷(VP-16)；異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C ； 米托蒽醌；長春新堿；長春瑞賓；諾維本；諾安托；替尼泊甙；柔紅霉素；氨基蝶呤；希羅達(dá)； 伊拜膦酸鹽；CPT-Il ；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000 ；二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；視黃酸；埃斯波霉素；卡培他濱以及上述任一物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。能起到調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的作用的抗激素藥物還包括，例如抗雌激素藥物包括如他莫昔芬，雷洛昔芬， 芳香酶抑制4( -咪唑，4-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬，雷洛昔芬鹽酸鹽(keoxifene)，奧那司酮，以及托瑞米芬(法樂通Fareston)；以及抗雄激素藥物例如氟他胺，尼魯米特，比卡魯胺，亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一物質(zhì)的藥學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。細(xì)胞因子也可用作治療劑。這樣的細(xì)胞因子的例子為淋巴因子，單核因子和傳統(tǒng)多肽激素。細(xì)胞因子中包括生長因子例如人生長激素，N-甲硫人生長激素和牛生長激素；甲狀旁腺激素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；松弛肽；松弛肽原；糖蛋白激素例如如促濾泡激素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH)；肝生長因子；成纖維細(xì)胞生長因子；催乳素；胎盤生乳素；腫瘤壞死因子-α和；繆勒管抑制物質(zhì)；鼠促性腺激素相關(guān)肽；抑制素；激活素；血管內(nèi)皮生長因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神經(jīng)生長因子例如NGF-β ；血小板生長因子；轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)，例如TGF-α和TGF-β ；胰島素樣生長因子I和-II ；促紅細(xì)胞生成素(EPO)；骨誘導(dǎo)因子；干擾素例如干擾素-a，-β和-Y ； 集落刺激因子(CSF)例如巨噬細(xì)胞-CSF(M-CSF)；粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-CSF(GM-CSF)；和粒細(xì)胞-CSF(GCSF)；白細(xì)胞介素(IL)如 IL-U IL-I α，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-T, IL-8，IL-9，IL-11，IL-12，IL-15 ；腫瘤壞死因子例如TNF-α或TNF-β ；以及其他多肽因子包括LIF和Kit配體(KL)等。如本發(fā)明所用，術(shù)語“細(xì)胞因子”包括從天然來源或從重組細(xì)胞培養(yǎng)的蛋白，以及天然序列細(xì)胞因子的生物活性等價(jià)物。在一些實(shí)施方式中，治療劑可為基于抗體的治療劑，例如赫賽汀。在一些實(shí)施方式中，治療劑可以是納米顆粒。例如，在一些實(shí)施方式中，納米顆?？梢允强捎糜跓嵯诨驘岑煼ǖ募{米顆粒。這種納米顆粒的例子包括鐵和金納米顆粒。顯像劑顯像劑可為能夠提供關(guān)于動(dòng)物體內(nèi)靶位點(diǎn)的影像信息的任何物質(zhì)，所述動(dòng)物例如哺乳動(dòng)物或人。顯像劑可包含磁性材料，如鐵氧化物或含釓化合物，用于磁共振成像(MRI)。 對(duì)于光學(xué)成像，活性劑可為例如半導(dǎo)體納米晶體或量子點(diǎn)。對(duì)于光學(xué)相干斷層掃描成像，顯像劑可以是金屬納米籠顆粒，如金或銀。顯像劑也可為超聲造影劑，如微氣泡或納米氣泡或氧化鐵微顆?；蚣{米顆粒。給藥可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒可以作為組合物的一部分給予如人等對(duì)象，從而治療、 預(yù)防和/或監(jiān)測如疾病等生理?xiàng)l件，所述組合物包含大量這種顆粒?？烧{(diào)理微顆?；蚣{米顆粒是通過這種方式給予的，一經(jīng)給藥，顆粒能在對(duì)象的血液中進(jìn)行調(diào)理作用。對(duì)于特定應(yīng)用所采用的具體方法可以由主治醫(yī)生來確定。通常，組合物可通過下列途徑之一來給予外用，腸胃外，吸入/肺部，口服，陰道內(nèi)和肛門內(nèi)。這些顆粒對(duì)于腫瘤的應(yīng)用特別有效，即用于治療和/或監(jiān)測癌癥或病癥，例如與癌癥相關(guān)的腫瘤。大多數(shù)的治療應(yīng)用可以涉及到一些類型的腸胃外給藥，其中包括靜脈注射(i.v.)，肌肉注射(i.m.)和皮下注射(s. c.)。顆粒的給予可為全身性的或局部的。上文敘述的非腸胃外給藥的例子為局部給藥的例子。血管內(nèi)給藥可以是局部的或全身的。局部血管內(nèi)遞送，可用于通過使用導(dǎo)管系統(tǒng)將治療物質(zhì)帶到已知病灶的附近，所述導(dǎo)管如CAT 掃描引導(dǎo)導(dǎo)管。常規(guī)注射，例如快速靜脈注射或連續(xù)/涓流靜脈輸液，通常是全身性的。優(yōu)選地，包含可調(diào)理顆粒的組合物是通過靜脈輸液給藥，通過管內(nèi)給藥或通過腫瘤內(nèi)途徑給予?？烧{(diào)理顆粒能配成包含大量顆粒的懸浮液。優(yōu)選地，顆粒的尺寸和含量是均一的。 為了形成懸浮液，上述顆粒可以懸浮在任何合適的水相運(yùn)載體中。合適的藥學(xué)運(yùn)載體是在所用的劑量和濃度對(duì)接受者是無毒的，且其是能與配方中的其他成分是相容的。制備微加工顆粒的懸浮液公開于如美國專利申請(qǐng)公報(bào)第20030114366號(hào)。本發(fā)明所述的實(shí)施方式將通過下列實(shí)施例進(jìn)一步說明，但是不限于此。
實(shí)施例納米多孔半球狀硅微顆粒由奧斯丁市的得克薩斯大學(xué)微電子研究中心設(shè)計(jì)、加工和制造的。產(chǎn)生了兩種大小的微顆粒，平均直徑為1. 6士0. 2和3. 2士0. 2微米，孔徑為5-10 或30-40納米(孔隙率可隨著不同的應(yīng)用而改變)。加工細(xì)節(jié)披露在Tasciotti E.等，2008 自然納米技術(shù)(Nature Nanotechnology) 3，151-157 中。簡要地說，電阻系數(shù)為0. 005歐姆-厘米的重?fù)诫sP++型(100)硅晶片(Silicon Quest公司，圣克拉拉市，加利福尼亞州)用作硅源。采用低壓化學(xué)氣相沉積(LPCVD)系統(tǒng)來沉積IOOnm的低應(yīng)力氮化硅層。用標(biāo)準(zhǔn)光蝕刻法采用接觸對(duì)準(zhǔn)器(EVG620對(duì)準(zhǔn)器)和 AZ5209光阻材料來在晶片上形成微顆粒圖案。顆粒圖案上的氮化物可以用基于CF4的反應(yīng)離子蝕刻(RIE)選擇性的去除。在食人魚洗液(piranha solution)中剝除光阻材料后，晶片放在自制的特氟隆容器中用于兩步電化學(xué)蝕刻。首先，將晶片在氫氟酸(HF)和乙醇(體積比1 1)的混合液中進(jìn)行蝕刻，分別對(duì)于3.2μπι顆粒施加6mA/cm2電流密度105秒或?qū)?.6 μ m顆粒施加40秒。然后通過在體積比2 5的氫氟酸和乙醇混合液中改變電流密度為320mA/cm26秒，形成孔隙率高的剝離層。最后，蝕刻后在氫氟酸中去除氮化物層，并且用超聲在異丙醇(IPA)中處理1分鐘釋放微顆粒。收集含有多孔硅微顆粒的IPA溶液并且 4°C保存。用SEM檢測微顆粒的形態(tài)。硅微顆粒的氧化
異丙醇(IPA)中的硅微顆粒在加熱盤(110°C )上保溫的玻璃燒杯中干燥。然后用食人魚洗液(1份體積的H2O2和2份體積的吐504)處理干燥的微顆粒。懸浮液在110-120°c 加熱2小時(shí)，間歇進(jìn)行超聲處理使得微顆粒分散。然后用去離子(DI)水洗滌懸浮液，直到懸浮液的PH為約5. 5-6。用APTES進(jìn)行硅微顆粒的表面修飾用IPA洗滌氧化的微顆粒3-4次。然后用含有0. 5 % (體積比v/v) APTES (西格瑪公司)的IPA懸浮這些顆粒，室溫下2小時(shí)。洗滌APTES修飾的微顆粒并且保存在IPA中。 通過檢測ζ電勢和胺密度比色分析來評(píng)估APTES修飾。發(fā)現(xiàn)后者是與ζ電勢測量值相關(guān)的。PEG 偶聯(lián)APTES修飾的微顆粒與IOmM mPEG-SCM-5000 (甲氧基聚乙二醇琥珀酰羧甲基；從 Laysan生物公司購買)在乙腈中反應(yīng)1. 5小時(shí)。隨后微顆粒在蒸餾水中沖洗4_6次，以去除任何未反應(yīng)的mPEG。采用ζ電勢測定來指示足夠的表面包被。1. 6 μ m和3. 2 μ m硅微顆粒用食人魚洗液氧化[30 70 (體積比ν/ν)； H2O2 &S0J，以產(chǎn)生帶負(fù)電的羥基化的微顆粒。接著，氧化微顆粒分別用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTEQ進(jìn)行表面修飾，其產(chǎn)生了帶正電荷的、胺修飾的微顆粒。APTES修飾微顆粒進(jìn)一步與PEG偶聯(lián)，進(jìn)行比較?？傮w而言，比較了下列三種類型的硅微顆粒1)帶負(fù)電荷的羥基化微顆粒；2)帶正電荷的氨基修飾的微顆粒；幻聚乙二醇化微顆粒。使用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，其被認(rèn)為是血管內(nèi)皮的模型，參見Klein等， I^th0bi0l0gy，1994，62，199-208，在與微顆粒一起孵育后用掃描電子顯微鏡(SEM)拍攝細(xì)胞圖像。HUVEC購自龍沙沃克斯維爾公司(沃克斯維爾市，馬里蘭州MLonza ffalkersville, Inc (ffalkersville, Maryland)),并在 EBM -2 培養(yǎng)基(Clonetics ⑥， CC-3156)。細(xì)胞維持在37°C加濕的5% CO2的氣氛下。HUVEC樣品用等離子科技CrC-150 Si 鍍系統(tǒng)(特洛國際公司)(Plasma Sciences CrC-150 Sputtering System(Torr International, Inc.))濺射包被上一層IOnm的金。在高真空和20. 00千伏下，光點(diǎn)直徑 3. 0-5. 0，使用配有 ETD(SE)檢測器的 FEI Quanta 400FEG ESEM 獲得 SEM 圖像。在37°C處理1小時(shí)后，帶正電和帶負(fù)電的微顆粒都在無血清培養(yǎng)基中被HUVEC內(nèi)化(圖1A)。當(dāng)帶正電和帶負(fù)電的微顆粒都在無血清培養(yǎng)基中被HUVEC內(nèi)化時(shí)，驚奇地發(fā)現(xiàn)血清調(diào)理作用抑制了帶負(fù)電(氧化的)微顆粒的攝取，對(duì)帶正電的氨基修飾顆粒沒有顯著影響。為了調(diào)理作用，顆粒懸浮在100%血清中在冰上孵育1小時(shí)。實(shí)驗(yàn)中的血清為來自Clonetics 的胎牛血清。用PEG對(duì)硅微顆粒的表面修飾抑制了微顆粒被HUVEC的內(nèi)化 (圖1B)。在圖IB中，y_軸為被內(nèi)化的顆粒百分比。圖IB中的內(nèi)化實(shí)驗(yàn)在37°C進(jìn)行1小時(shí)。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞和顆粒的比例為每20個(gè)顆粒一個(gè)細(xì)胞。由促炎癥細(xì)胞因子活化的內(nèi)皮細(xì)胞可以改變細(xì)胞表面受體的表達(dá)，從而可以改變與顆粒的結(jié)合，參見Klein等，Pathobiology，1994，62，199-208。內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)用細(xì)胞因子[TNF- α (10ng/ml)和IFN-y (100U/ml)，兩者都購自英杰(Invitrogen)公司]進(jìn)行朿Ij 激48小時(shí)。隨后，在用血清對(duì)顆粒進(jìn)行調(diào)理后，刺激的內(nèi)皮細(xì)胞與硅顆粒一起孵育，帶負(fù)電的(氧化的)或帶正電的[胺(APTES)修飾]顆粒。在接觸TNF-α和IFN-γ后，對(duì)于所有類型的微顆粒，HUVEC細(xì)胞對(duì)血清調(diào)理的硅微顆粒的內(nèi)化都增加了 ；然而對(duì)于調(diào)理的帶正電的微顆粒的明顯偏好依然存在，見圖3Α。與內(nèi)皮細(xì)胞不同，巨噬細(xì)胞(J774細(xì)胞)優(yōu)選與血清調(diào)理的帶負(fù)電的微顆粒相互作用。在存在細(xì)胞因子時(shí)，巨噬細(xì)胞對(duì)于調(diào)理的帶負(fù)電的氧化微顆粒的偏好顯著增強(qiáng)(11% ) (P = 0. 045)，參見圖3Β。在另一方面，巨噬細(xì)胞對(duì)于 APTES和PEG修飾的微顆粒的攝取并沒有受到接觸TNF-α和IFN-γ的影響。HUVEC和J774細(xì)胞上接觸TNF- α和IFN- γ的實(shí)驗(yàn)如下進(jìn)行HUVEC(1.切105細(xì)胞/孔)接種到6孔板中，M小時(shí)后細(xì)胞與血清調(diào)理的硅微顆粒 (20個(gè)微顆粒/細(xì)胞)在37°C —起孵育1小時(shí)。然后用PBS洗滌細(xì)胞，用胰酶消化(HUVEC) 或刮下(J774)收集細(xì)胞，并且重懸在含有1. 0% BSA和0. 1 %疊氮化鈉的PBS (FACS洗滌緩沖液)中。采用配有488nm氬激光和CellQuest軟件的BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀 (BD公司，圣何塞市，加利福尼亞州)測定側(cè)向散射，來確定與細(xì)胞結(jié)合的微顆粒。數(shù)據(jù)用于微顆粒結(jié)合的細(xì)胞的百分比(具有高側(cè)向散射的細(xì)胞的百分比)來表示。在沒有顆粒時(shí)的細(xì)胞的側(cè)向散射已經(jīng)從所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)中扣除。J774A. 1巨噬細(xì)胞購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(馬納薩斯市，弗吉尼亞州)。生長培養(yǎng)基為含有10% FBSUO μ g/ml鏈霉素和100U/ml青霉素的DMEM培養(yǎng)基(英杰公司， 卡爾斯巴德市，加利福尼亞州anvitr0gen;CarlSl3ad，CA))。通過刮取收集細(xì)胞。圖3C-D為在血清存在下HUVEC (C)和J774 (D)細(xì)胞(30分鐘，37°C )攝取硅微顆粒的SEM圖像。細(xì)胞以切104細(xì)胞/孔鋪在含有h7mm硅芯片樣品支持物(特德培拉公司，雷丁市，加利福尼亞州)(Silicon Chip Specimen Supports (Ted Pella，Inc.，Redding，CA)) 的對(duì)孔板中。當(dāng)細(xì)胞匯合時(shí)，加入含有微顆粒(1 10，細(xì)胞微顆粒，0.5ml/孔)的培養(yǎng)基，細(xì)胞在37°C孵育30分鐘。用PBS洗滌樣品，并且用2. 5%戊二醛固定30分鐘(西格瑪奧德里奇公司，圣路易斯市，密蘇里州)。用PBS洗滌后，在濃度上升的乙醇(30 %，50 %，70 %， 90 %，95 %和100 % )中脫水，每個(gè)濃度10分鐘。然后HUVEC在50 %酒精-六甲基二硅氮烷 (西格瑪公司)溶液中孵育10分鐘，接著在純HMDS中孵育5分鐘，以備在干燥器中過夜孵育。采用導(dǎo)電粘合膠帶(12mm OD PELCO膠帶，特德佩拉公司)樣本裝載到SEM支架(特德佩拉公司)上。樣品用等離子科技CrC-150濺鍍系統(tǒng)(特洛國際公司)(Plasma Sciences CrC-150 Sputtering System (Torr Interri￡itiori￡il，Inc.)) 身寸M IOnm 的t。$ 高真空下，20. 00千伏，光點(diǎn)直徑3.0-5. 0，使用配有ETD(SE)檢測器的FEI Quanta 400 FEG ESEM獲得SEM圖像。這一研究能提示血清調(diào)理素能增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的血管靶向，所述調(diào)理素優(yōu)選結(jié)合帶正電微顆粒的微顆粒。相反，血清調(diào)理素結(jié)合到帶負(fù)電的微顆粒強(qiáng)烈地抑制了其被內(nèi)皮細(xì)胞攝取。幸運(yùn)的是，專門的噬菌細(xì)胞如巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)于帶負(fù)電的調(diào)理的微顆粒的偏好。盡管本發(fā)明不受理論的限制，其可以提示結(jié)合到帶負(fù)電的微顆粒上的調(diào)理素可反映血清成分，其能夠修飾細(xì)菌或凋亡細(xì)胞，兩者都帶有純的負(fù)表面電荷并且能作為被中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞攝取的靶標(biāo)，參見如Fadok，V. Α.等·免疫學(xué)雜志(J. Immunol. )148, 2207-2216(1992)和 Dickson，J. S. & Koohmaraie，Μ.應(yīng)用環(huán)境微生物學(xué)(Appl. Environ. Microbiol. )55,832-836(1989)。通過引導(dǎo)性的血清調(diào)理作用來引導(dǎo)微顆粒攝取能夠抵消對(duì)聚乙二醇化的需求，并且同時(shí)發(fā)生折衷的攻擊和降解速率改變。
促炎癥細(xì)胞因子刺激能夠提高內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)微顆粒的內(nèi)化，支持在慢性炎癥位點(diǎn)對(duì)帶正電的微顆粒的攝取提高。因此，帶有表面正電荷的調(diào)理的微工程改造顆粒能夠優(yōu)選攻擊發(fā)炎病理相關(guān)的內(nèi)皮，例如冠心病，脈管炎和癌癥。附加參考文獻(xiàn)1. Campos S.腫瘤學(xué)家(The oncologist) 2003 ；8 增刊 2 :10-6.2. LyassO, UzielyB, Ben-YosefR，等·癌癥(Cancer) 2000 ；89 :1037-47.3. Valero V.癌癥學(xué)(Oncology) (ffilliston Park) 2002 ；16 :35-43.4. Blum JL, Savin MA, Edelman G，等·臨床乳癌(Clinical breast cancer) 2007 ； 7 :850-6.5. Gradishar WJ.(Expert Opin Pharmacother) 2006 ；7 1041-53.6. Iyer AK, Khaled G，F(xiàn)ang J,Maeda H.今日藥物研發(fā)(Drug Discov Today) 2006 ； 11 :812-8.7.美國專利申請(qǐng)公報(bào)第20070237827號(hào).盡管前文引用了具體的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)該理解本發(fā)明不限于此。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以對(duì)所公開的實(shí)施方式進(jìn)行各種修改，并且這樣的修改也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本說明書引用的所有出版物、專利申請(qǐng)和專利在此整體引入作為參考。
權(quán)利要求
1.一種治療或監(jiān)測炎癥相關(guān)病癥的方法，其特征在于，包含給予有需要的對(duì)象一種包含可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒的組合物，其包含至少一種活性劑，其中微顆粒或納米顆粒的表面a)帶有正電荷；且b)不含靶向配體。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述炎癥為細(xì)胞因子刺激的炎癥。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述病癥為冠心病。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述病癥為脈管炎。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述病癥為癌癥。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述給藥是血管內(nèi)給予的。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象為人。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述組合物為包含可調(diào)理微顆粒或納米顆粒的懸浮液。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒的表面不帶有親水聚合物鏈。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為微加工或納米加工的顆粒。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為多孔顆粒。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為納米多孔顆粒。
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒為硅多孔顆粒。
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為氧化物多孔顆粒。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為氧化硅多孔顆粒。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒的表面為氨基修飾的表面。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒的表面是由氨基硅烷進(jìn)行氨基修飾的。
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性劑為治療劑。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性劑為顯像劑。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述給藥導(dǎo)致所述微顆?；蚣{米顆粒的調(diào)理作用，并且導(dǎo)致炎癥相關(guān)的細(xì)胞受到被調(diào)理的微顆粒或納米顆粒的攻擊。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述炎癥相關(guān)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。
22.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述被調(diào)理的微顆粒或納米顆粒避免被對(duì)象的巨噬細(xì)胞所攝取。
23.一種包含可調(diào)理微顆粒或納米顆粒的組合物，其包含至少一種活性劑，其中微顆?；蚣{米顆粒的表面a)帶有正電荷，并且b)不含靶向配體。
24.如權(quán)利要求23所述的組合物，還包含一種溶液，且其中微顆?；蚣{米顆粒懸浮在溶液中。
25.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒的表面不帶有親水聚合物鏈。
26.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒為微加工或納米加工顆粒。
27.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為多孔顆粒。
28.如權(quán)利要求27所述的組合物，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為納米多孔顆粒。
29.如權(quán)利要求27所述的組合物，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒為硅多孔顆粒。
30.如權(quán)利要求27所述的組合物，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒為氧化物多孔顆粒。
31.如權(quán)利要求30所述的組合物，其特征在于，所述微顆?；蚣{米顆粒為氧化硅多孔顆粒。
32.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述微顆粒或納米顆粒的表面為氨基修飾的表面。
33.如權(quán)利要求32所述的組合物，其特征在于，微顆?；蚣{米顆粒的表面為氨基硅烷修飾的。
34.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述活性劑為治療劑。
35.如權(quán)利要求23所述的組合物，其特征在于，所述活性劑為顯像劑。
36.一種包含權(quán)利要求23所述組合物的試劑盒。
37.一種用于攻擊對(duì)象中發(fā)炎細(xì)胞的方法，包含給予對(duì)象包含可調(diào)理微顆?；蚣{米顆粒的組合物，其包含至少一種活性劑，其中微顆?；蚣{米顆粒的表面a)帶有正電荷，并且 b)不含靶向配體。
全文摘要
可調(diào)理的微顆?；蚣{米顆粒，其包含至少一種活性劑，例如顯像劑或治療劑；其表面帶有正電荷，并且其表面不帶有靶向配體，例如抗體，多肽或核酸適體，所述微顆?；蚣{米顆粒可用于治療和/或監(jiān)測與炎癥相關(guān)的病癥，例如細(xì)胞因子刺激的炎癥。
文檔編號(hào)A61K9/16GK102264353SQ200880132534
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2008年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月23日
發(fā)明者M·費(fèi)拉里, R·謝列達(dá) 申請(qǐng)人:德克薩斯州大學(xué)系統(tǒng)董事會(huì)