專利名稱：：柚皮苷在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：:本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，確切地說它是柚皮苷在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：:柚皮苷(Naringin)為二氫黃酮苷類化合物，為蕓香科柑橘屬植物次生代謝產(chǎn)物，廣泛分布于很多植物中。研究表明，柚皮苷在降血脂、鎮(zhèn)靜、抗氧化、抗腫瘤、抗真菌、抗動脈粥樣硬化等方面具有較強的生物活性。中國專利號03113605.2公丌了名稱為"柚皮苷用于制備治療急、慢性支氣管炎的藥物"的發(fā)明專利，專利號03126908.7公開了名稱為"柚皮苷在制備支持性治療非典型性肺炎藥物中的應(yīng)用"的發(fā)明專利，專利號200510101404.0公開了名稱為"柚皮苷在制備防治流感藥物中的應(yīng)用"的發(fā)明專利，專利號200810300599.5公開了名稱為"柚皮苷在制備口腔護理保健品中的應(yīng)用"的發(fā)明專利，公開了柚皮苷在制備治療急、慢性支氣管炎、支持性治療非典型性肺炎、防治流感藥物和口腔護理保健品中的應(yīng)用。未見柚皮苷在制備抗抑郁方面藥物中的新用途。柚皮苷結(jié)構(gòu)式本發(fā)明提供了柚皮苷抗抑郁的新用途。柚皮苷及其藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元和次生苷等用于預(yù)防或治療焦慮狀態(tài)或抑郁狀態(tài)。含柚皮苷及其藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元和次生苷等或以其作為活性成分組成的藥用組合物，包括與藥用載體組合，用于預(yù)防或治療抑郁狀態(tài)。其中所述病體為哺乳動物。柚皮苷及其藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元和次生苷等，或以其作為活性成分組成的藥用組合物可通過口服、非腸道或局部途徑給藥，給藥劑型可以是片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液、凍干粉等藥學(xué)上可接受的劑型。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明揭示了柚皮苷具有抗抑郁的作用，為其應(yīng)用提供了新的途徑。且毒性小，無常規(guī)抗抑郁藥的興奮不安、便秘、尿閉、眩暈、嗜睡、震顫等缺點
發(fā)明內(nèi)容:具體實施例方式下面的動物實驗是對本發(fā)明的進一歩詳細說明，但并不意味著對本發(fā)明的任何限制。實例l.自主活動興奮性實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標(biāo)準(zhǔn)，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共30只。按體重大小排序，用隨機分組法分成3組，每組10只。設(shè)空白對照組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9M。(2)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容于容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml。給藥劑量為7.2mg/kg。G)柚皮苷樣品組:取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(開場實驗)采用底面為正方形的敞箱,長IOOcm，寬IOOcm，高50cm,底面用黑線分為100個面積相近的扇形。實驗時將大鼠放在敞箱正中心,以大鼠5min內(nèi)水平運動越格數(shù)(至少3爪跨過邊界)評價其運動性;以垂直運動直立次數(shù)(兩前爪離開地面)評價其探究性。通過比較柚皮苷給藥組給藥前后自主運動變化情況來考察柚皮苷是否有自主興奮作用，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組來進行隨行對照。3.實驗過程給藥前通過觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動，記錄5min內(nèi)水平運動越格數(shù)以及垂直運動直立的次數(shù)；在給藥7天后，觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動，記錄5min內(nèi)水平運動越格數(shù)以及垂直運動直立的次數(shù)。將各組實驗數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理，水平運動變化率和垂直運動變化率計算方法如下水平運動變化率=(給藥7天后水平運動越格數(shù)-給藥前水平運動越格數(shù))/給藥前水平運動越格數(shù)><100%垂直運動變化率=(給藥7天后垂直運動越格數(shù)-給藥前垂直運動越格數(shù))/給藥前垂直運動越格數(shù)x1000/。將各組實驗數(shù)據(jù)進行t檢驗，考察其是否存在顯著性差異。4.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組自主運動情況見表l。表l.給藥前與給藥7天后各樣品組開場實驗自主運動變化情況<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>運用SPSS軟件，進行t檢驗，分別比較空白組、柚皮苷組和鹽酸氟西汀組給藥前后自主運動情況，與空白組和陽性對照藥鹽酸氟西汀組一樣，柚皮苷組水平運動和垂直運動在給藥前后均無顯著性差異(P>0.05)，表明在給予柚皮苷后對中樞神經(jīng)系統(tǒng)無自主興奮作用。實例2.慢性應(yīng)激大鼠開場實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標(biāo)準(zhǔn)，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40只。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10只。設(shè)空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9M。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。Z。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容于容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應(yīng)激模型的制備慢性應(yīng)激作為一種非損傷性刺激，與人類心身性疾病的過程有相似性，慢性應(yīng)激模型現(xiàn)實驗的模擬了人們?nèi)粘Ｉ钪杏龅降?應(yīng)激狀態(tài)"，對于篩選特異性的臨床抗抑郁藥有很好的適用性，本實驗正是以慢性應(yīng)激模型為基礎(chǔ)，給予柚皮苷以及陽性對照藥，考察柚皮苷的抗抑郁作用。在大鼠慢性應(yīng)激模型的制備中，盡量使應(yīng)激刺激符合不可預(yù)測性的特點，連續(xù)28d按每天l或2種刺激的強度，交替給予大鼠以下刺激:禁食24h、禁水24h、限制攝食2h、配對飼養(yǎng)12h、傾籠45。2h、通宵照明12h、潮濕飼養(yǎng)(200ml水加到100g墊料)12h、頻閃(100min/s)lh、白噪聲(110dB)lh、強迫游泳(水溫4。C)5min、制動lh,制備慢性應(yīng)激模型。各樣品組應(yīng)激及給藥情況如卜'A.空白對照組不給予刺激，給予生理鹽水。B.病理模型組給予刺激冋時給予生理鹽水。C.陽性對照組給予刺激同時給予鹽酸氟西汀用生理鹽水溶解配制而成的藥液。D.柚皮苷樣品組給予刺激同時給予柚皮苷用生理鹽水溶解配制而成的藥液。(2)開場實驗采用底面為正方形的敞箱，長100cm，寬100cm,高50cm，底面用黑線分為100個面積相近的扇形。實驗時將大鼠放在敞箱正中心，以大鼠5min內(nèi)水平運動越格數(shù)(至少3爪跨過邊界)評價其運動性；以垂直運動直立次數(shù)(兩前爪離開地面)評價其探究性。通過比較給藥前后柚皮苷給藥組與病理模型組自主運動變化率(包括水平運動變化率和垂直運動變化率)來考察柚皮苷是否具有抗抑郁作用，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程給藥前通過觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動，記錄5min內(nèi)水平運動越格數(shù)以及垂直運動直立的次數(shù)；在慢性應(yīng)激28天后，觀察大鼠在敞箱內(nèi)的活動，記錄5min內(nèi)水平運動越格數(shù)以及垂直運動直立的次數(shù)。水平運動變化率和乖直運動變化率計算方法如下水T運動變化率=(應(yīng)激28天后水平運動越格數(shù)-應(yīng)激前水平運動越格數(shù))/應(yīng)激前水平運動越格數(shù)x100。/。垂直運動變化率=(應(yīng)激28天后垂直運動越格數(shù)-應(yīng)激前垂直運動越格數(shù))/應(yīng)激前垂直運動越格數(shù)x100。/。結(jié)果得到正數(shù)為增加，負數(shù)為下降，將各組實驗數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組自主運動情況是否存在顯著性差異。5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組自主運動情況見表2。表2慢性應(yīng)激模型大鼠各樣品組開場實驗自主運動變化情況水平運動變化率垂直運動變化率樣品組(％)(%)空白組3.3-25.2病理模型組-36.2-77.7鹽酸氟西汀組-4.4-44.4柚皮苷組-5.2-16.4運用SPSS軟件，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前后自主運動情況(水平運動變化率和垂直運動變化率)比較存在極其顯著的差異(尸O.Ol)，表明在慢性應(yīng)激的狀態(tài)下，大鼠在沒有藥物干預(yù)下其自主運動動情況受到了影響，水平運動變化率和垂直運動變化率均明顯下降，提示慢性應(yīng)激模型制備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前后自主運動情況比較(水平運動變化率和垂直運動變化率)均存在極其顯著的差異，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由于慢性應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠水平運動變化率和垂直運動變化率下降有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗屮于抑郁引起的自主活動減少的藥理活性。實例3.慢性應(yīng)激大鼠體重增加率測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標(biāo)準(zhǔn)，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40只。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10只。設(shè)空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。/0。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容于容量瓶屮，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應(yīng)激模型的制備大鼠慢性應(yīng)激模型的制備和各樣品組應(yīng)激及給藥情況均同實例2。(2)體重增加率實驗大鼠在遭受慢性應(yīng)激刺激后，將出現(xiàn)食欲減退的表現(xiàn)，進食的減少將導(dǎo)致體重增加速率的下降，因此，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前后體重增加率的變化情況，可以考察柚皮苷對抗由于大鼠慢性應(yīng)激剌激導(dǎo)致的消化系統(tǒng)功能受損而引起的體重增加速率下降；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前后各組大鼠體重增加率的差異是否具有顯著性，同時給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前分別稱量各組大鼠體重，慢性應(yīng)激刺激28天后，再次稱量各組大鼠體重，考察7柚皮苷組與病理模型組給藥前后各組大鼠體重增加率。大鼠體重增加率的計算方法如下體重增加率=(應(yīng)激28天后大鼠體重-應(yīng)激甜大鼠體重)/應(yīng)激^大鼠體重400%將各組實驗數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠體重增加率是否存在顯著性差異。5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組大鼠體重增加率情況見表3。表3慢性應(yīng)激^莫型大鼠各樣品組大鼠體重增加率變化情況樣品組體重增加率(％)空白組63.2病理模型組27.8鹽酸氟西汀組42.9柚皮苷組43.2運用SPSS軟件，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前后休重增加率比較存在極其顯著的差異(尸O.Ol)，表明在慢性應(yīng)激的狀態(tài)下，大鼠在沒有藥物干預(yù)下其消化系統(tǒng)功能受到了影響，體重增加速率明顯低于空白組，同時提示慢性應(yīng)激模型制備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前后體重增加率比較均存在極其顯著的差異(戶O.Ol)，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由于慢性應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠體重增加速率下降有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗由于抑郁引起的消化系統(tǒng)功能失常的藥理活性。實例4.慢性應(yīng)激大鼠蔗糖偏嗜度測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，SPF級標(biāo)準(zhǔn)，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40只。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10只。設(shè)空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容于容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。83.實驗方法(1)大鼠慢性應(yīng)激模型的制備大鼠慢性應(yīng)激模型的制備和各樣品組應(yīng)激及給藥情況均同實例2。(2)蔗糖水偏嗜度實驗大鼠在遭受慢性應(yīng)激刺激后，將出現(xiàn)興趣減退的表現(xiàn)，本實驗在進行慢性應(yīng)激前首先給大鼠進行蔗糖水偏嗜訓(xùn)練，建立其對糖水的偏好，在進行慢性應(yīng)激刺激后，未給抗抑郁藥物的大鼠會因興趣的缺失導(dǎo)致對庶糖水偏嗜度的下降，因此，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前后蔗糖水偏嗜度變化情況，可以考察柚皮苷對抗由于大鼠慢性應(yīng)激刺激導(dǎo)致的興趣缺失；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前后各組大鼠蔗糖水偏嗜度變化率之間是否具有顯著性，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前先對大鼠進行學(xué)習(xí)訓(xùn)練:禁食禁水，只給予P/。蔗糖水48h;蔗糖偏嗜度測量訓(xùn)練結(jié)束后正常食水飼養(yǎng)3d,再禁食禁水23h，然后讓大鼠自由飲用2瓶不同的水，其中一瓶為1%蔗糖水，一瓶為自來水。進行l(wèi)h的飲水量(g)測量，按公式計算蔗糖偏嗜度。大鼠適應(yīng)環(huán)境l周后按蔗糖偏嗜度把40只大鼠均衡分為4組:慢性應(yīng)激刺激28大后，再次測量大鼠蔗糖水偏嗜度。同時計算蔗糖偏嗜度變化率蔗糖偏嗜度=蔗糖水飲用量/(蔗糖水飲用量+自來水飲用量)xlOO%蔗糖偏嗜度變化率=(應(yīng)激28天后蔗糖偏嗜度-應(yīng)激前蔗糖偏嗜度)/應(yīng)激前蔗糖偏嗜度xlOO%將各組實驗數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠蔗糖偏嗜度變化率是否存在顯著性差異。5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組大鼠蔗糖偏嗜度變化率情況見表4。運用SPSS軟件，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前后蔗糖偏嗜度變化率比較存在極其顯著的差異(尸O.Ol)，表明在慢性應(yīng)激的狀態(tài)下，大鼠在沒有藥物干預(yù)下導(dǎo)致了其對原有建立的興趣的缺失，蔗糖偏嗜度變化率明顯低于空白組，同時提示慢性應(yīng)激模型制備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前后蔗糖偏嗜度變化率比較均存在極其顯著的差異(PO.Ol)，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由于慢性應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠體重興趣缺失癥狀有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗由丁抑郁引起與興趣缺失相關(guān)的腦部功能失常的藥理活性。表4.慢性應(yīng)激模型大鼠各樣品組大鼠蔗糖偏嗜度變化率蔗糖偏嗜度變化率樣品組(％)^空白組iT病理模型組—12.3鹽酸氟西汀組4.9柚皮苷組4.6實例5.慢性應(yīng)激大鼠排尿量變化測定實驗1.實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重200-220g，SPF級標(biāo)準(zhǔn)，將動物稱重，編號，選擇健康的大鼠共40只。按體重大小排序，用隨機分組法分成5組，每組10只。設(shè)空白對照組、病理模型組、陽性對照組和柚皮苷藥物樣品組。2.樣品來源和處理(1)空白對照組生理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(2)病理模型組牛理鹽水，NaCl含量0.9。/。。(3)陽性對照組取鹽酸氟西汀用生理鹽水定容于容量瓶中，鹽酸氟西汀濃度為1.8mg/ml，給藥劑量為7.2mg/kg。(4)柚皮苷樣品組取柚皮苷適量，用生理鹽水定容于容量瓶中，柚皮苷濃度為1.6mg/ml。所用柚皮苷樣品純度為95%以上，給藥劑量為8mg/kg。3.實驗方法(1)大鼠慢性應(yīng)激模型的制備大鼠慢性應(yīng)激模型的制備和各樣品組應(yīng)激及給藥情況均同實例2。(2)排尿量變化測定實驗研究表明，下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸)參與抑郁癥的發(fā)病機制，下丘腦是調(diào)節(jié)內(nèi)分泌激素的高級中樞。下丘腦有分泌激素的功能，室上核的MgC細胞主要分泌抗利尿激素，它作用于腎臟，增加水分的重吸收，減少水分的排出，因此，本實驗通過觀察應(yīng)激前后大鼠排尿量的變化可以在一定程度上反映HPA軸的亢進程度，通過比較柚皮苷組與病理模型組在給藥前后排尿量變化率，可以考察柚皮苷對抗由于大鼠慢性應(yīng)激刺激導(dǎo)致的HPA軸亢進所導(dǎo)致的排尿量減少的作用；考察柚皮苷組與病理模型組給藥前后各組大鼠排尿量變化率之間是否具有顯著性，同時以給予生理鹽水的空白組和給予陽性對照藥鹽酸氟西汀的陽性對照組進行隨行對照。4.實驗過程在給藥前分別收集各組大鼠12h所產(chǎn)生的尿液，慢性應(yīng)激刺激28天后，再次收集各組大鼠12h所產(chǎn)生的尿液，考察柚皮苷組與病理模型組給藥前后各組大鼠排尿量變化率。計算時以每100g大鼠體重計，計算方法如下排尿量變化率=(應(yīng)激28天后每1OOg大鼠體重12h排尿量-應(yīng)激前每1OOg大鼠體重12h排尿量)/應(yīng)激前每100g大鼠體重12h排尿量x100%結(jié)果得到正數(shù)為增加，負數(shù)為下降，將各組實驗數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，進行t檢驗，考察柚皮苷組與病理模型組大鼠排尿量變化率是否存在顯著性差異。5.實驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計，各樣品組大鼠排尿量變化率情況見表5。表5慢性應(yīng)激模型大鼠各樣品組大鼠排尿量變化率樣品組排尿量變化率(％)空白組^病理模型組-30.2鹽酸氟西汀組-2.9柚皮苷組-17.7運用SPSS軟件，進行t檢驗，病理模型組與空白組在給藥前后排尿量變化率比較存在極其顯著的差異(P<0.01)，表明在慢性應(yīng)激的狀態(tài)下，大鼠在沒有藥物干預(yù)下導(dǎo)致了其由于HPA軸功能亢進而產(chǎn)生排尿量減少的癥狀，排尿量變化率明顯低于空白組，同時提示慢性應(yīng)激模型制備成功；柚皮苷組、陽性對照藥組與病理模型組在給藥前后排尿量變化率比較均存在顯著的差異(尸<0.05)，表明柚皮苷和陽性對照藥鹽酸氟西汀均能對由于HPA軸功能亢進而產(chǎn)生排尿量減少的癥狀有顯著的抵抗作用，提示柚皮苷具有抵抗由于抑郁引起HPA軸功能亢進的藥理活性。實例6.單胺氧化酶A抑制活性測試l.樣品與試劑柚皮苷購于中國生物制品檢定所，含量98%帕吉林sigma公司產(chǎn)品，規(guī)格lg/瓶磷酸鈉，蔗糖均購于北京化學(xué)試劑公司MAO活性測試試劑盒購于南京建成生物工程研究所，試劑盒組成試劑一苯胺溶液(0.016mol/L)試劑二pH7.6Tris緩沖液試劑三10%過氯酸溶液(反應(yīng)終止液)試劑四環(huán)己烷試劑2.實驗方法單胺遞質(zhì)是神經(jīng)系統(tǒng)傳導(dǎo)信號的介質(zhì)，它的正常存在是神經(jīng)系統(tǒng)正常發(fā)揮作用的前提，在抑郁癥的發(fā)病機制研究中，研究者發(fā)現(xiàn)單胺遞質(zhì)的減少與抑郁癥的發(fā)病具有相關(guān)性，而單胺氧化酶A(MAO-A)的活性異常增高直接導(dǎo)致突觸間隙的單胺遞質(zhì)減少，臨床應(yīng)用的一些抗抑郁藥就足基于單胺假說而設(shè)計的(如丙咪嗪、苯乙肼等)，因此，尋找單胺氧化酶抑制劑是發(fā)現(xiàn)具有抗抑郁活性藥物的途徑之一。本實驗根據(jù)芐胺在MAO作用下氧化生成節(jié)醛的原理，以環(huán)己烷抽提產(chǎn)物在242rmi波長處吸收度測定氧化產(chǎn)物的量，指示MAO-A的活性。3.實驗過程(1)大鼠肝線粒體單胺氧化酶粗酶(MAO)的制備將Sprague-Dawley大鼠斷頭處死，取肝，用4'C緩沖液(pH=7.6,0.2M磷酸鈉緩沖液)反復(fù)沖洗干凈,稱取10g,剪碎后研磨,用高速分散器打成勻漿,以l:20(w/v)加入預(yù)冷的0.3M蔗糖溶液3000rpm離心10min，取上清液,10000rpm離心30min,取沉淀溶十40ml緩沖液中,高速分散器打勻,分裝至40管(1ml/管)，并測定蛋白含量(雙縮脲法)，-80'C貯存?zhèn)溆谩?2)測試樣品溶液的制備精密稱取56mg柚皮苷對照品，于10ml容量瓶中超聲溶解，定容，從該標(biāo)準(zhǔn)液中分別吸取不同體積的溶液，配制成一系列不同濃度的供試溶液，使其加入酶液和試劑一以及試劑二后柚皮苷的濃度分別為400、200、100、50、25、6.25、3.125pg/ml。(3)MAO-A抑制活性的測定方法加入MAO-B型抑制劑300pl帕吉林pargyline(500nmol/L)至30ml大鼠肝線粒體酶中，37'C溫浴半小時,以抑制MAO-B的活性。在測定管中依次加入一系列待測樣品溶液各0.3ml，試劑一(芐胺基質(zhì)液)0.3ml，試劑二(pH7.6Tris緩沖液)3ml，以及0.6ml酶液,空O管以生理鹽水代替酶液，其余相同。放置37°C水浴中3h,取出后各加10%過氯酸0.3ml，各加環(huán)己烷3.0ml,在旋渦混合器上旋轉(zhuǎn)混勻2min,離心沉淀(2000r/min)10min，取上清液于石英比色皿內(nèi)，以空白調(diào)零,于242nm波長測定吸光度,測定MAO-A活性。以只加底物不加抑制劑的對照組的酶活性為100%，計算待測物對MAO-A活性的抑制率。MAO-A活性抑制率=(對照組吸光度-測試組吸光度)/對照組吸光度><100%4.實驗結(jié)果柚皮苷對MAO-A活性的抑制作用見表6。表6不同濃度柚皮苷對MAO-A活性的抑制作用C(嗎/ml)3.125^^^Inhibitionrate(0/o)34.2052.5067.2077.0078.2089.7095.90結(jié)果表明，對MAO-A活性抑制率達到50%時柚皮苷的濃度為5.82叫/ml，顯示了其具有顯著的抑制MAO-A活性的作用，提示柚皮苷具有抗抑郁藥理活性。將柚皮苷和藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元和次生苷組成的藥用組合物，還可以包括與藥學(xué)上常用的藥用載體組合制備成常用的制劑，如片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液等藥學(xué)上可接受的劑型?？刹捎每诜⒎悄c道或局部途徑給藥。1權(quán)利要求1.柚皮苷或其藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元或次生苷在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于藥物劑型為片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液或凍干粉針等。全文摘要本發(fā)明公開了柚皮苷在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。所述的藥物劑型為片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液、滴注液等藥學(xué)上可接受的劑型。該組合物是由柚皮苷和藥學(xué)上可接受的經(jīng)水解或酶解生成的苷元和次生苷組成的，包括與藥用載體組合制備成各種藥物劑型。該藥物毒性小，無常規(guī)抗抑郁藥的興奮不安、便秘、尿閉、眩暈、嗜睡、震顫等缺點。文檔編號A61K31/7042GK101485674SQ200910009139公開日2009年7月22日申請日期2009年2月20日優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日發(fā)明者張宏武,李書啟,蘇志恒,鄒忠梅申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所