專利名稱：：芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
,涉及芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物及其制備方法，本發(fā)明還涉及該類新化合物在抗腫瘤生物活性方面的用途。
背景技術(shù)：
：瑞香科植物芫花(Da//wege"ybwsieb.etZucc)為傳統(tǒng)的瀉下逐水藥。目前對其抗腫瘤、引產(chǎn)、鎮(zhèn)咳祛痰、殺蟲、抗炎、免疫功能調(diào)節(jié)等方面研究較多。國內(nèi)外學(xué)者從瑞香科植物芫花的花及花蕾、根、中分離得到了一系列具有特殊結(jié)構(gòu)的瑞香烷型二萜原酸酯類化合物。瑞香垸型二萜又名瑞香毒素類化合物(Daphnetoxin)具有很強(qiáng)的生物活性，20世紀(jì)70年代初，人們從瑞香屬植物中分離出具有抗腫瘤活性的歐亞瑞香素(Mezerein)和瑞香毒素(Daphnotoxin)后，該類化合物便成為一個(gè)研究熱點(diǎn)，由于瑞香烷型二萜具有獨(dú)特的抗腫瘤生理活性而受到重視?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明癌癥是一種特別嚴(yán)重的癌毒擴(kuò)散癥，癌毒的形成是目前的生活方式的產(chǎn)物，并有越來越嚴(yán)重的的趨勢。因此尋找更加有效的抗癌、抗腫瘤藥物刻不容緩。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的旨在從中藥芫花中尋找新的抗腫瘤前體藥物，提供該類瑞香烷型二萜類化合物的提取、制備方法，并且研究它們的抗腫瘤生物活性和醫(yī)藥用途。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供該類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定方法。(一)本發(fā)明所述一系列6個(gè)新的瑞香烷型二萜類化合物〔GenkwanineII,GenkwaninIII,GenkwaninIV，GenkwaninV，GenkwaninVI，GenkwaninVE)的結(jié)構(gòu)式如下GenkwanineIIGenkwaninIIIGenkwaninVIGenkwaninVD(二)本發(fā)明所述新的瑞香烷型二萜類化合物(GenkwanineII,GenkwaninIII,GenkwaninIV,GenkwaninV,GenkwaninVI,GenkwaninW)的提取、制備方法如下選用瑞香科植物芫花(Da//wegew^w".etzucc)的干燥花蕾40006000g為原料，58倍量的體積比為60%95%工業(yè)乙醇室溫下冷浸提取15~20天，每24~48h小時(shí)減壓濃縮一次，累計(jì)總浸膏500~600g，總浸膏用35L水混懸后，分別用氯仿，正丁醇以1:1的體積比進(jìn)行萃取，萃取3~5次，得到的氯仿層千浸膏200~300g,正丁醇層干浸膏200~300g,及濃縮后水液1015L;氯仿層浸膏進(jìn)行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，沸程為30~60°C,或609(TC的石油醚-丙酮50:12:1(F/F)混合溶劑梯度洗脫,每300~500ml體積為一餾分，共收集到40~50個(gè)餾分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并得到F1F6的6個(gè)餾分，餾分F4經(jīng)氯仿-甲醇100:02:1混合溶劑梯度洗脫,得到F4-lF4-6的6個(gè)餾分，F(xiàn)4-4分別經(jīng)MCIgel柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲垸-甲醇系統(tǒng)洗脫分離，Cw反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninVI和GenkwaninVII;餾分F6經(jīng)氯仿-甲醇80:02:1或二氯甲垸-甲醇80:02:1混合溶劑梯度洗脫，得到F6-lF6-4的4個(gè)餾分，F(xiàn)6-2分別經(jīng)MCIgel柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)洗脫分離，Cl8反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninII,GenkwaninIII,GenkwaninIV,GenkwaninV。根據(jù)如上所述的提取及萃取方法得到的氯仿層干浸膏經(jīng)石油醚-丙酮系統(tǒng)50:12:1(F/F)混合溶劑梯度洗脫硅膠柱層析后得到餾分F卜F6。餾分F3經(jīng)石油醚-丙酮80:02:1或二氯甲烷-甲醇100:02:1混合溶劑梯度洗脫，得到F3-lF3-7的7個(gè)餾分，餾分F3-3經(jīng)MCIgd柱色譜以甲醇-水或乙醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集2050%洗脫的餾分，經(jīng)ds反相硅膠柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集5080%洗脫的餾分，經(jīng)反相制備高效液相色譜分離，釆用甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，回收溶劑后，共得到化合物GenkwaninII,GenkwaninIV,GenkwaninV。洗脫后的餾分中含有瑞香烷型二萜的部分用氯仿-甲醇系統(tǒng)30:120:1展開，其Rf值在0.10.8;254nm紫外燈鑒別或顯色劑鑒別，顯色劑可以是10%硫酸顯色劑，或10%硫酸偏礬酸銨-顯色劑，或10%硫酸-香草醛顯色劑。(三)本發(fā)明所述新的瑞香烷型二萜類化合物(GenkwanineII，GenkwaninIII,GenkwaninIV，GenkwaninV,GenkwaninVI,GenkwaninVll)具有較好的抗腫瘤活性。1.實(shí)驗(yàn)材料1.1受試品化合物GenkwanineII，GenkwaninIII,GenkwaninIV,GenkwaninV，GenkwaninVI,GenkwaninW。1.2實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株及來源HL-60:人急性髓性白血病細(xì)胞2.實(shí)驗(yàn)方法2.1藥物處理藥物的溶解化合物GenkwanineII，GenkwaninIII,GenkwaninIV,GenkwaninV,GenkwaninVI，GenkwaninVH均為粉末狀，使用DMSO溶解。配成濃度為100mmol/L的母液，儲(chǔ)存于-2(TC。臨用時(shí)用相應(yīng)的培養(yǎng)液將其稀釋為lOOpmol/L,10(imol/L,ljimol/L進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。DMSO配置的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，DMSO的終濃度為1%。。文獻(xiàn)報(bào)道yuanhuacine具有抗腫瘤活性且結(jié)構(gòu)與待測化合物類似，因此選取yuanhuacine作為陽性對照藥，濃度為lO^imol/L。給藥處理取對數(shù)生長期的細(xì)胞，調(diào)整適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度，接種于96孔板內(nèi)，100pL/well,培養(yǎng)于37。C,5%0)2的培養(yǎng)箱內(nèi)。培養(yǎng)24h后，將藥物稀釋為100pmol/L,lOpmol/L,lpmol/L三個(gè)濃度，10pL/wel1,作用48h。分設(shè)空白組、給藥組，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。2.2MTT法的測定方法藥物作用48h后，將細(xì)胞與0.25mg/mlMTT于37。C下共同孵育4h,吸除培養(yǎng)液后每孔加入IOOW二甲基亞砜(DMSO)，完全溶解后使用酶標(biāo)儀于490nm測定其光密度OD值。最后以空白組OD值為100%,計(jì)算各組細(xì)胞抑制率。細(xì)胞抑制率％1加藥組OD值的平均值對照組OD值的平均值xlOO%2.3.統(tǒng)計(jì)方法全部資料采用SPSS(13.0)統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行檢驗(yàn)分析。各組數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean士S.E.)表示，采用One-WayANOVA評價(jià)整體性差異，并進(jìn)行Dunnett或Dunnett，sT3檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1化合物對腫瘤細(xì)胞HL-60成活的抑制率(°")(M±SE)control100(iinol/Lyuanhuadne1Onmol/LIC50nmiil/LGenkwaninIV0.00±0.288.60±0.19***15.19±0.36***38.96±0.22***38.39±1.05***>100GenkwaninV0綠0.2811.45±0.14***11.88±0.14***15.60±0.30**38.39±1.05"*>100GenkwanineII0綠0J423.36±0.12***24.07±0.10***41.24±0.14***44.87±0.17***>100.GenkwaninIII0.00±0,3415.16±0.26***23.43±0,19***25.31±0/27"*44.87±0.17***>100GenkwaninVI0.00±0.2224.62±0.37***35.94±0.19***84.95±0.15***34.05±0.10***11.86GenkwaninVII0.00±0.2223.9U0.46***41.48±0.22***76.68±0.25***35.05±0.10***12.26***P<0.001VsControl;**P<0.01VsControl;*P<0.05VsControl表2化合物YH-21對腫瘤細(xì)胞HL-60成活的抑制率(％)(M±SE)control6.25lunol/L25fimol/L50}imol/LIC50pmoi/LYH-210.00±0.1824.041±0.24*"41.20±0.08*"82.96±0.07***12.90由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看本發(fā)明所涉藥物作用48h之后，6種化合物對HL-60細(xì)胞株均具有一定殺傷作用。其中化合物GenkwaninVI的作用最為明顯，其次是GenkwaninVL化合物GenkwanineII，Genkwaninlll,GenkwaninIV,GenkwaninV雖對HL-60細(xì)胞株有一定的殺傷作用，但效果不明顯。本發(fā)明所涉瑞香烷型二萜類新化合物，部分對HL-60人急性髓性白血病細(xì)胞具有顯著抑制作用，并且可能對其他腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制作用，如A-549人非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞，HeLa子宮頸癌細(xì)胞系等，可用于開發(fā)抗腫瘤、抗癌類藥物，尤其針對臨床化療階段藥物。本發(fā)明制備方法簡單，重現(xiàn)性好，提取純度高。獲得的化合物具有較好的抗腫瘤活性作用。圖1為GenkwanineTT的'H-NMR圖2為GenkwanineII的13C-NMR圖3為GenkwanineII的HSQC圖4為GenkwanineII的HMBC圖5為GenkwanineIII的'H-NMR圖6為GenkwanineIII的13C-NMR圖7為GenkwanineIII的HSQC圖8為GenkwanineIII的HMBC圖9為GenkwaninIV的'H-NMR圖10為GenkwaninIV的13C-NMR圖11為GenkwaninIV的HMBC圖12GenkwaninV^'H-NMR圖13為GenkwaninV的13C-NMR圖14為GenkwaninV的HSQC圖15為GenkwaninV的HMBC圖16為GenkwaninVI的'H-NMR圖17為GenkwaninVI的13C-NMR圖18為GenkwaninVI的HMBC圖19為GenkwaninVII^7'H-NMR圖20為GenkwaninVII的13C-NMR圖21為GenkwaninVII的HMBC具體實(shí)施方式制備實(shí)施例1選用瑞香科植物芫花(Dop/2"ege^wa.etzucc)的干燥花蕾6000g為原料，6倍量的體積比為95%工業(yè)乙醇室溫下冷浸提取20天，每48h小時(shí)減壓濃縮一次，累計(jì)總浸膏525g，總浸膏用4L水混懸后，分別用氯仿，正丁醇以1:1的體積比進(jìn)行萃取，萃取4次，得到的氯仿層干浸膏245g,正丁醇層干浸膏250g，及濃縮后水液15L;氯仿層浸膏進(jìn)行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，沸程為306(TC的石油醚-丙酮30:1,10:1,5:1，2:1(r/F)混合溶劑梯度洗脫,每500ml體積為一餾分，共收集到46個(gè)餾分,經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并得到F1F6的6個(gè)餾分，餾分F4經(jīng)氯仿-甲醇100:0，30:1，8:1,3:1，2:1(F/F)混合溶劑梯度洗脫,得到F4-lF4-6的6個(gè)餾分，F(xiàn)4-4分別經(jīng)MCIgel柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)30:1,8:1,2:1(F/F)洗脫分離，C,8反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)70%,80%，90%梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninVI和GenkwaninW;餾分F6經(jīng)氯仿-甲醇80:1，30:1，8:1,2:1(F/F)混合溶劑梯度洗脫，得到F6-lF6-4的4個(gè)餾分，F(xiàn)6-2分別經(jīng)MCIgel柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)30:1，10:1,2:1(F/F)洗脫分離，(:18反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)60%，80%梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninII,GenkwaninIII，GenkwaninIV，GenkwaninV。制備實(shí)施例2選用瑞香科植物芫花(Z^p/z"ege"Aw仏etzucc)的干燥花蕾6000g為原料，6倍量的體積比為95%工業(yè)乙醇室溫下冷浸提取20天，每48h小時(shí)減壓濃縮一次，累計(jì)總浸膏525g，總浸膏用4L水混懸后，用氯仿以l:l的體積比進(jìn)行萃取，萃取4次，得到的氯仿層干浸膏245g。氯仿層浸膏進(jìn)行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，沸程為3060°C的石油醚-丙酮30:1，10:1，5:1,2:1(K/^)混合溶劑梯度洗脫，每500ml體積為一餾分，共收集到46個(gè)餾分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并得到F1F6的6個(gè)餾分，餾分F3經(jīng)石油醚-丙酮80:0,50:1,10:1,5:1，2:1(P7F)或二氯甲烷-甲醇100:0，30:1，10:1,3:1，2:1(F/^)混合溶劑梯度洗脫，得到F3-lF3-7的7個(gè)餾分，餾分F3-3經(jīng)MCIgd柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集30%洗脫的餾分，經(jīng)ds反相硅膠柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集70%洗脫的餾分，經(jīng)反相制備高效液相色譜分離，釆用甲醇-水系統(tǒng)55%，65%,80%梯度洗脫，回收溶劑后，共得到化合物GenkwaninII,GenkwaninIV,GenkwaninV。本發(fā)明所述新的瑞香烷型二萜類化合物(GenkwanineII,GenkwaninIII,GenkwaninIV,GenkwaninV，GenkwaninVI，GenkwaninVII)的結(jié)構(gòu)解析實(shí)驗(yàn)例1:GenkwanineII，白色無定形粉末(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。[a]D22-57.3(c0.012，CHCl3)高分辨質(zhì)譜給出準(zhǔn)分子離子峰w/z527.2258[M+Na]+(計(jì)算值為527.2252),結(jié)合13CNMR譜，確定分子式為C27H3609，顯示有IO個(gè)不飽和度。'HNMR(600MHz,CDC13)信息給出瑞香烷型二薛的基本母核特征，'HNMR譜中SH8.12(2H,m),7.56(1H,m)和7.45(2H，m)的存在，提示分子中有一單取代苯基；三個(gè)甲基特征質(zhì)子信號5H1.87(3H，s)，1.00(3H，d，《/=6.6)，0.96(3H，d，《/=7.2);—個(gè)連在季碳上的羥甲基氫信號，5H3.70(1H,d,/=12)和3.93(1H，d，J=12);四個(gè)連氧碳上的氫信號5H4.13(1H，d，7=10.2)，4.52(IH，s),3.24(1H，bs)，5.95(1H，s);以及2個(gè)連在末端雙鍵上的特征氫信號SH5.17(1H,s，H-16)和5.14(1H，s，H-16)。"CNMR譜中可以看到27個(gè)碳信號，三個(gè)甲基碳信號5C12.8，19.3，21.4;—對末端雙鍵碳信號SC144.9(C-15)和114.0(C-16),—組苯環(huán)上的碳信號，其中瑞香烷型二萜原酸酯的特征季碳信號消失，取而代之的是Sc167.1的酯羰基碳信號，說明原酸酯的氧環(huán)開裂，形成一苯甲酰氧基；Sc67.3和64.5的特征連氧碳信號，提示6，7位成氧環(huán)。通過HSQC譜對除季碳以外的所有碳?xì)湫盘栠M(jìn)行了直接相關(guān)，在HMBC譜中甲基氫信號5H1.87(Scl8.9)與3C144.9(C-15)，114.0(C-16)，73.7有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示存在結(jié)構(gòu)片段l，說明SH1.87與末端雙鍵相連，為17位甲基信號。Sh1.00(5cl5.4)的甲基氫信號與Sc33.9,36.1,73.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段2，5H0.96(5C15.7)的甲基氫信號與5C35.1，31.4,75.5有遠(yuǎn)程相關(guān)，其化學(xué)環(huán)境與結(jié)構(gòu)片段2極其相似，暫不能歸屬SH1.00與0.96的甲基信號是18位還是19位甲基。H-14(Sh5.95)與Sc167.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示苯甲酰氧基與C-14(Sc77.2)相連接，H-14(5^.95)還與Sc33.9，73.5,39.5,67.3的碳信號有遠(yuǎn)程相關(guān),推出結(jié)構(gòu)片段3，說明與Sc33.9，73.5有相關(guān)的3H1.00為18位甲基氫信號，5H0.96為19位甲基信號。SH4.13(H-3)與Sc15.7(C-19),35.1(C國l)，31.4(C-2)，79.8(C-4)，76.7(C-5)有遠(yuǎn)程相關(guān),Sh4.52(H-5)與5c54.4(C誦IO)，64.5(C-6)有遠(yuǎn)程相關(guān);SH3.24(H-7)與Sc68,0(C-20),64.5(C-6)，39.5(C誦8)，77.2(C-14)有遠(yuǎn)程相關(guān)；由以上推導(dǎo)可確定化合物的結(jié)構(gòu)，分子式為C27H3609^HR-ESIMS所給出的分子式一致。經(jīng)scifmder文獻(xiàn)檢索，未見報(bào)道，為一新化合物，命名為genkwaninell其&NMR譜，"CNMR譜信號歸屬及HMBC見表l,相關(guān)圖譜見附圖1-圖4。GenkwanineII表Igcnkwaninll的'HNMR譜(600MHz，CDCb)和13CNMR譜(150MHz，CDCl3)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>73.24(IH,bs)67.3H-5,14，2083.05(1H,d,月)39.5H-7,10,14973.5H-7,12/U4，1810.18(1H,m)54.4H-l々，5111.38(1H,m)36.1H-12/9,1812/^2.11(1H,t，/=13.2)33.9H-14,18(X1.59(1H,m)1373.7H-16,17145.95(1H，s)77.2H-715114.0H-12/，14，16，17165.17(m，s)144.9H層75.14(1H,s)171.87(3H,s)18.9H-16181.00(3H,d,J:6.6)15.4H-12々190.96(3H,d,7=7.2)15.7H-3204.01(1H,d，J=12)68.0H-73.28(1H,d,12)r167.1H-14,3',7'2'130.0H-4'，6,3'8.11(1H，m)129.9H-5',7',4'4'7.45(1H,m)128.5H-6'5'7.56(1H,m;)133.2H-3',7'6'7.45(1H，m)128.5H-4'7'8.11(1H,m)129.9H-3',5'，6'實(shí)驗(yàn)例2GenkwanineIII,白色結(jié)晶(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。[a]D22-39.3(c0.019，CHCl3)高分辨質(zhì)譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z:527.2251[M+Na]十(ij"算值為527.2252)，結(jié)合'H，13CNMR譜，確定分子式為C27H3609,顯示有IO個(gè)不飽和度，為化合物genkwaninll的同分異構(gòu)體。'HNMR(600MHz，CDCl3)信息給出瑞香烷型二薛的基本母核4，征，'HNMR譜中Sh8.00(2H，m),7.55(1H，m)和7.42(2H，m)的存在，提示分子中有一單取代苯基；三個(gè)甲基特征氬信號SH1.82(3H,s),0.82(3H，d，J=7.2)，0.95(3H,d，</=6.6);—個(gè)連在季碳上的羥甲基特征氫信號SH4.41(1H，d,戶12)和4.82(1H，d，J=12)，較化合物genkwaninll移向低場；四個(gè)連氧碳上的氫信號Sh4.23(1H，d，JH0.2)，5.02(1H，s)，4.16(lH,s),4.10(1H,s);以及2個(gè)連在末端雙鍵上的特征氫信號SH5.12(lH，s，H-16)和5.11(1H,s，H-16)。"CNMR譜中可以看到27個(gè)碳信號，三個(gè)甲基碳信號5C15.9，13.8，19.1;一對末端雙鍵碳信號SC144.7(C-15)和114.8(C-16)，一組苯環(huán)上的碳信號(Sc129.9，129.6x2，128.5,133.3，128.5);其中瑞香烷型二萜原酸酯的特征季碳信號消失，取而代之的是Scl67.2的酯羰基碳信號，說明原酸酯的氧環(huán)開裂，形成一苯甲酰氧基，Sc81.0和83.0的連氧碳信號較genkwaninll移向較低場，提示6，7位氧環(huán)開裂。HSQC譜對除季碳以外的所有碳?xì)湫盘栠M(jìn)行了直接相關(guān)，在HMBC譜中甲基氫信號5H1.82(5cl9.1)與Sc144.8(C-15)，114.0(C-16),74.8有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示存在結(jié)構(gòu)片段l，說明SHl.82與末端雙鍵相連，為17位甲基信號。SH0.84(Scl3.8)的甲基氫信號與5C35.7,36.4,73.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段2，5H0.95(Scl5.9)的甲基氫信號與5C34.1，31.9,74.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，其化學(xué)環(huán)境與結(jié)構(gòu)片段2相似，暫不能歸屬&0.84與0.95的甲基信號是18位還是19位甲基。H-14(5h4.10)較化合物genkwaninll移向高場，說明14位不連取代基,同時(shí)H-14(5H4.10)與Sc35.7,73.1,44.5,81.0的碳信號有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段3，說明與Sc35.7，73.1有相關(guān)的5H0.84為18位甲基氫信號，SH0.96為19位甲基信號。4.82(1H，d，J=12，HP-20)和Sh4.41(1H,d,J二12,Ha-20)較化合物genkwaninII移向低場，說明羥基上有取代，并且看到與Scl67.2的酯羰基碳信號有相關(guān)，證明了苯甲酰基與C-20相連;SH4.23(H-3)與5C15.9(C-19),34.1(C-l)，31.9(C-2)，90.8(C-4)，83.1(C國5)+遠(yuǎn)程相關(guān)，5H5.02(H-5)與5C47.7(C-IO)，83.0(C-6)有遠(yuǎn)程相關(guān)，SH4.16(H-7)與Sc67.4(C-20),80.3(C-6)，72.0(C-14)有遠(yuǎn)程相關(guān)；另外還看到5H4.16(H-7)與Sc90.8(C-4)有三根健的遠(yuǎn)程相關(guān)，即7位和4位通過氧原子相連接，說明7位和4位的羥基脫水成氧環(huán)，C-4，C-5,C-6，C-7的化學(xué)位移較化合物genkwaninII均移向較低場，也說明其形成五元氧環(huán)；推導(dǎo)結(jié)構(gòu)符合HR-ESIMS給出分子量，與不飽和度IO相吻合，由此確定了化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)scifinder文獻(xiàn)檢索，未見報(bào)道，為一新化合物，命名為genkwanineIII。其"HNMR譜，"CNMR譜信號歸屬及HMBC見表2,相關(guān)圖譜見附圖5-圖8。表2genkwaninII的'HNMR譜(600MHz，CDC13)和l3CNMR譜(150MHz,CDCI;i)數(shù)據(jù)No.'HNMR'3CNMRHMBC(13Cto'H)1/31.88(1H，m)34.1H-3,10,19a1.18(lH,m;)22.21(1H，m)31.9H-la，3，1934.23(1H，d,10.2)74.1H-lyS，10，19490.8H-1/3,3，755.02(1H，s)83.1H-3，7,20683.0H-5,7,8'20，72.15(1H,、)81.0H-8,14，2084.16(1H，d，J=3)44.5H-14973.1H-la，12,8,14，18101.84(1H,d,13.8)47.7H-W,la，5111.50(1H,m)36.4H-12a,8，18，1.78(1H,m)35.7H-14，18,ot1.85(1H'm)1374.8H-8,12,14,17'144.1(1H，bs)72.0H-715144.7H-14，17，165.12(1H，s)114.8H-175.11(lH,s)J71.82(3H，s)19.1H-16180.84(3H，d,".2)13.8H-ll190.95(3H,d,/=6.6)6.0H陽la,320/4.82(1H,d，_/=12)67.4H-5,7a4.41(1H，d,12)r167.2H-20,3'，7'2,129.9H-4',6'3,8.00(1H,m)129.6H-5',7'4,7.42(1H,m)128.5H-6'5,7.55(1H，ir0133.3H-3',7'6,7.42(1H，m)128.5H-4'7,8,00(1H,m)129.6H-3',5'實(shí)驗(yàn)例3GenkwaninIV，白色結(jié)晶(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。[a]D22-14.9(c0.022，CHC13)。'HNMR(600MHz，CDC13)信息給出瑞香烷型二萜的基本母核特征，'HNMR譜中5H8.00(2H,m)，7.55(1H,m)和7.45(2H，m)的存在，提示分子中有一單取代苯基；三個(gè)甲基特征氫信號SH1.92(3H，s),0.96(3H,d，7=6.6),0.98(3H，d，7=7.2);—個(gè)連在季碳上的羥甲基特征氫信號SH3.47(lH,d，盧11.4)和3.95(1H，d，J二11.4);四個(gè)連氧碳上的氫信號5H4.23(lH,d,戶10.2),4.59(1H,s)，3.90(lH，s)，5.79(1H,s);以及2個(gè)連在末端雙鍵上的特征氫信號5H5.20(lH,s，H-16)和5.19(1H，s，H-16)。"CNMR譜中可以看到27個(gè)碳信號，三個(gè)甲基碳信號Sc15.9，13.6,19.2;—對末端雙鍵碳信號Sc144.8(C-15)和114.9(C-16),—組苯環(huán)上的碳信號(Scl29.6x2,128.6x2,130.0,133.0);其中瑞香烷型二萜原酸酯的特征季碳信號消失，取而代之的是Scl66.6的酯羰基碳信號，說明原酸酯的氧環(huán)開13裂，形成一苯甲酰氧基，Sc80.5和83.8的連氧碳信號較genkwaninII移向低場，提示6，7位氧環(huán)開裂，其化學(xué)位移值與genkwaninIII相似。HMBC譜中，甲基氫信號SH1.92與Sc144.8(C-15)，114.9(C-16),74.2有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示存在結(jié)構(gòu)片段l，說明5Hl.92與末端雙鍵相連，為17位甲基信號。SH0.96(5cl3.6)的甲基氫信號與3C35.9，35.8,71.8有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段2，5H0.98(Scl5.9)的甲基氫信號與Sc34.9,31.9,74.3有遠(yuǎn)程相關(guān)，其化學(xué)環(huán)境與結(jié)構(gòu)片段2相似，暫不能歸屬SH0.84與0.95的甲基信號是18位還是19位甲基。H-14(Sh5.79)與Sc166.6有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示苯甲酰氧基與C-14(SC72.2)相連接，同時(shí)H-14(5H5.79)還與Sc35.9，71.8,45.8，80.5，74.2的碳信號有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段3，說明與5C35.9,71.8有相關(guān)的SH0.96為18位甲基氫信號，&0.98為19位甲基信號；以化合物GenkwanineIII化學(xué)位移值做參照，SH4.23(1H，d，/=10.2)確定為H-3;5h4.59(1H,s)確定為H-5;SH1.59(1H，m)確定為H-ll;Sh1.91與5c34.9(C國l),71.8(C畫9),45.8(C-8油關(guān)，確定為H-10;SH1.84與5C71.8(C-9)，74.3(C-3)有相關(guān)，確定其為H曙1^，Sh1.18與31.9(C畫2)49.0(C-10),71.8(C-9)有相關(guān)，確定為H-la;同時(shí)5H1.18與Sc15.9有相關(guān)，確定5c15.9為C-19;由于5H4.16與C-20(5C67.4)，C國6(Sc80.3),C-14(Sc72,2)有遠(yuǎn)程相關(guān)，確定SH4.16為H-7;與化合物genkwanineIII相似，還看到H-7與C-4有三根健的遠(yuǎn)程相關(guān)，7位和4位通過氧原子相連接，說明7位和4位的羥基脫水成氧環(huán)，C-4，C-5,C-6，C-7的化學(xué)位移較化合物genkwaninII均移向較低場,說明其形成五元氧環(huán)；由以上分析確定了化合物的結(jié)構(gòu)，為genkwanineIII的同分異構(gòu)體。經(jīng)scifinder文獻(xiàn)檢索，未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，為一新化合物，命名為genkwaninIV。其'HNMR譜，13CNMR譜信號歸屬及HMBC見表3,相關(guān)圖譜見附圖9-圖11。Genkw加inIV表3genkwaninIV的'HNMR譜(600MHz,CDC13)和l3CNMR譜(150MHz，CDCl3)數(shù)據(jù)No.'H雨R13CNMRHMBC^Ctc/H)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)驗(yàn)例4GenkwaninV:白色結(jié)晶(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。&NMR(600MHz，CDCl3)信息給出瑞香烷型二薛的基本母核特征，'HNMR譜中5H8.02(2H，m)，7.55(1H,m)和7.42(2H，m)的存在，^示分子中有一單取代苯基；三個(gè)甲基特征氫信號SH1.82(3H,s)，0.95(3H,d,J=6.6)，0.91(3H，d，J^7.2);—個(gè)連在季碳上的羥甲基特征氫信號3H3.70(1H，d,J42)和3.90(1H，d，*/=12);四個(gè)i氧碳上的氫信號5H4.22(1H,d,7=10.2),5.50(1H，s)，4.36(1H,s)，5.91(1H，s);以及2個(gè)連在末端雙鍵上的特征氫信號5H5.09(1H，s，H-16)和5.07(1H，s，H-16)。"CNMR譜中可以看到27個(gè)碳信號，三個(gè)甲基碳信號Sc15.7，15.4，19.1;一對末端雙鍵碳信號Sc144.3(C-15)，114.9(C-16),一組苯環(huán)上的碳信號(5c129.9x2,128.4x2,130.2，133.3);其中瑞香烷型二萜原酸酯的特征季碳信號消失，取而代之的是5cl66.8的酯羰基碳信號，說明原酸酯的氧環(huán)開裂，形成一苯甲酰氧基。HSQC譜對除季碳以外的所有碳?xì)湫盘栠M(jìn)行了直接相關(guān)；在HMBC譜中&0.95(&15.4)的甲基氫信號與Sc33.5，36.1，77.0有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段1,SH0.91(5cl5.7)的甲基氫信號與Sc35.1,31.6，73.5有遠(yuǎn)程相關(guān)，其化學(xué)環(huán)境與結(jié)構(gòu)片段l相似，暫不能歸屬5H0.95與0.91的甲基信號是18位還是19位甲基。SH1.82與5C74.9，144.3(C-15)，114.9(C-16)有相關(guān)；5H4.36(Sc75.329)與Sc33.5,74.9，77.0，41.2的碳信號有遠(yuǎn)程相關(guān)；5H5.91(5c75.330)與Sc77.0，73.6，86.1有相矣，另外還與5C166.1的羰基碳信號，及Sc63.2(020)有相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段2;結(jié)構(gòu)片段2說明&5.91為7位氫信號，而苯甲?；贑-7相連；H-7與Sc77.0(C-9)有相關(guān)說明^0.95為18位甲基氫信號，0.91為19位甲基氫信號；由以上分析確定了化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)scifmder檢索，未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，為一新化合物,命名為genkwaninV。其'HNMR譜，13CNMR譜信號歸屬及HMBC見表4，相關(guān)圖譜見附圖12-圖15。6'GenkwaninV表4genkwaninV的NMR譜(600MHz，CDCh)和l3CNMR譜(150MHz，CDCh)數(shù)據(jù)No.13CNMRHMBC(13Cto'H)1.91(1H，m)35.1H-10,19aI.12(1H,m)2.22(1H,m)31.6H-ly，lot,1934.22(IH，d'^10.2)73.5H-lyff,19*495.355.51(1H,d，聲6.6)73.6H-7,20686.1H-7，2075.91(1H,s)75.3H-8,2082.50(lH,d，J=3)41.2H-10,14977.0H-7，8,10，4,18101.99(1H,dd,7=13.8,6.0)48.2H-ly，lan1.52(1H'm)36.1H-12ct，181.85(1H,33.5H-ll,14,19a1.60(1H,m)1374.9H-14,1716144.36(1H,s)75.3H-815144.3H-17165.11(1H，s)114.9H-175.08(1H，s)171.82(3H，s)19.1H-16180.95(3H，d,J=6.6)15.4H-ll,12a90.91(3H,d,片2)15.7H-la20-3.90(1H，d,聲12.6)63.2H-7a3.70(1H,d，聲12.6)r166.1H-7，3'，7'2,130.2H-4'，6'3,8.02(1H,m)129.9H-4',5'，7'4,7.42(1H，m)128.4H-3',6'5,7.55(1H,m)133.2H-3',7'6,7.42(1H,m)128.4H-4',7'7,8.02(1H，m)129.9H-3'，5',6'實(shí)驗(yàn)例5GenkwaninVI無定型粉末(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。'HNMR(600MHz,CDCl3)信息給出瑞香烷型二萜的基本母核特征，'HNMR譜中低場區(qū)可以看到兩組單取代苯基信號，SH8.06(2H,m)，7.56(1H:m)和7.44(2H，m)為一苯甲?；盘?，SH7.74(2H,m),7.34(3H,m)為與瑞香烷型二萜原酸酯季碳相連的苯基信號；三個(gè)甲基特征信號3H1.84(3H,s),1.31(3H，d,/=6.6),1.05(3H,d，《/=6.6),根據(jù)文獻(xiàn)中同類化合物的化學(xué)位移值判斷其分別為17,18,19位甲基信號；一個(gè)連在季碳上的羥甲基特征氫信號SH4.02(lH，d,J=12)和5.09(1H，d,J42)為20位羥甲基信號，較化合物genkwaninIV移向低場，說明20位連有取代基，2個(gè)連在末端雙鍵上的#征氫信號5H5.07(1H，s,H-16)和4.92(1H，s，H-16)。13CNMR譜中，三個(gè)甲基碳信號5C19.2,20.8，13.0;—對末端雙鍵碳信號3C146.5(C-15)和m.2(C-16)，兩組苯環(huán)上的碳信號(Sc129.8x3,129.2x2，128.4x2,127.9x2，126.1x2,133.2,136.0);Sc117.0為瑞香烷型二路原酸酯的特征季碳信號；Sc166.6為苯甲酰氧基的羰基碳信號；Sc60.2和64.2的特征連氧碳信號，提示6,7位成氧環(huán)。在HMBC譜中3H1.84(CH3-17)與Sc146.5(C-15),111.2(C-16),84.3(C-13)有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段1;SH1.31(CH3-18)與Sc35.3(C-ll),35.9(C-12),80.0(C-9)有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)^"段2;5H1.05(CH3-19)與5C34.3(C-1)，36.7(C-2),78.3(C-3)有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段3;20位氫信號5h5.09移向低場，并且與5C166.6有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明苯甲?；c20位相連，5H4.52(H-14)與5C80.0(C-9)，117.0(-OO)有相關(guān)；5H3.43(H-7)與5C36.5(C-8),80.0(C國9),82.5(C-14)有遠(yuǎn)程相關(guān)；5H3.05(1H,d，《/=3.0,H-8)與5C60.2(C陽7)，64.2(C-6)i遠(yuǎn)程相關(guān)；SH2.77(H-IO)與80.1(C-4),71.3(C國5)，35.3(C國ll)有遠(yuǎn)程相關(guān)；SH2.77(H陽ll)與Sc48.6(C畫IO)，35.3(C-11)，20.8(C-18)有遠(yuǎn)程相關(guān)；通過HMBC將'H"C信號進(jìn)行歸屬，并確定了化合物的結(jié)構(gòu)；通過scifinder進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，未見報(bào)道，說明該化合物為一新化合物，命名為genkwaninVI。其'HNMR譜，13CNMR譜信號歸屬及HMBC見表5，相關(guān)圖譜見附圖16-圖18。16genkwaninVI表5genkwaninVI的！HNMR譜(600MHz,CDC13)和13CNMR譜(150MHz，CDCW數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2,136.1H-4',6'3,7.74(1H,m)126.1H-7',4'，5'4,7.34(1H,m)127.9H-5',6'5,7.34(1H，m)129.2H-4',6'6,7.34(1H，m)127.9H-4',5'7,7.74(1H,m)]26.1H-3'，5',6'r'166.6H-3"，7",202"29.8H隱4"，6"3"8.02(1H，irO129.8H-7",4"4"7.42(1H,rrO128.4H-5"，6"5"7.55(1H,m)133.2H-4"，6"6"7.42(1H,m)128.4H-4",5"7"8.02(1H,m)129.8H-3",5"，6"實(shí)驗(yàn)例6GenkwaninVE無定型粉末(甲醇)，易溶于氯仿、甲醇。'HNMR(600MHz,CDCb)信息給出瑞香烷型二萜的基本母核特征，'HNMR譜中低場區(qū)可以看到兩組單取代苯基信號，SH8.06(2H，m),7.63(1H，m)和7.50(2H,m)為一苯甲酰基信號，SH7.75(2H，m),7.36(3H,m)為與瑞香烷型二萜原酸酯季碳相連的苯基信號；三個(gè)甲基特征信號Sh1.84(3H，s),1.35(3H，d,J=6.6)，1.14(3H，d，《/=6)，根據(jù)文獻(xiàn)中同類化合物的化學(xué)位移值判斷其分別為17,18,19位甲基信號；一個(gè)連在季碳上的羥甲基特征氫信號Sh3.81(1H,d，J=12)和3.86(1H，d,hl2)為20位羥甲基信號，較化合物genkwaninVI移向高場，說明20不連取代基；2個(gè)連在末端雙鍵上的特征氫信號5H5.03(lH，s,H-16)和4.90(1H，s，H-16);5H4.84(H-3)較化合物genkwaninVI移向低場，說明3位連有取代基；13CNMR譜中，三個(gè)甲基碳信號Sc19.2，20.8,13.0;—對末端雙鍵碳信號Sc146.5(C-15)和111.2(C-16)，兩組苯環(huán)上的碳信號(Sc129.8x3,129.2x2，128.4x2，127.9x2，126.1x2,133.2,136.0);Sc117.0為瑞香烷型二路原酸酯的特征季碳信號；Sc166.6為苯甲酰氧基的羰基碳信號；Sc60.2和64.2的特征連氧碳信號，提示6,7位成氧環(huán)。HMBC譜中，5H1.81(CH3誦17)與5C146.6(C-15),111.4(C-16)，84.6(C-13)有遠(yuǎn)程相關(guān)，推出結(jié)構(gòu)片段1;SH1.50(CH3-18)與5C35.5(C-l1),36.3(C-12),80,5(C-9)有遠(yuǎn)程相關(guān)，5H1.14(CH3-19)與5C36.1(C-l),36.55(C-2)，82.9(C-3)有遠(yuǎn)程相關(guān)，5h2.88(H畫10)與36.1(C-l),80.5(C-9),81,8(C-5)有遠(yuǎn)程相關(guān)，3位氫信號&4.84移向低場，并且與5C168.8有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明苯甲?；c3位相連。以上分析推出結(jié)構(gòu)片段2;SH4.49(H-14)與Sc80.5(C-9),117.6(畫C-O)有相關(guān)；SH3.43(H-7)與&36.59(C-8),80.5(C-9)，82.7(C-14),66.3(C-20)者相關(guān);5H4.13(H-5)與5C82.9(C-3)，60.7(C-6),64.2(C-8)4r遠(yuǎn)程^l關(guān)；由以上^NMR譜，"CNMR譜，及HMBC譜的分析確定了化合物的結(jié)構(gòu)，并將信號歸屬；經(jīng)scifmder文獻(xiàn)檢索，19頁未見報(bào)道，說明該化合物為一新化合物，命名為genkwaninW。其'HNMR譜，13CNMR譜信號歸屬及HMBC見表6，相關(guān)圖譜見附圖19-圖21。genkwaninVU表6genkwaninVn的'HNMR譜(600MHz，CDC13)和13CNMR譜(150MHz，CDC1"數(shù)據(jù)No.'H麗R3C雨RHMBC(13Cto'H)1.99(IH，m)36.1H-3，101.86(lH,nO21.85(1H，m)36.55H-lyg,la,1934.84(1H,d,4.2)82.9H-l/，5,19,481.8H-3,1054.13(1H,s)74.7H-3，10,20660.7H-1473.44(1H,s)64.2H-10,20ci82.95(IH，d,聲2.4)36.59H-7980.5H-12cc，7，14，18,102.88(1H,dd，力13.2,5.4)48.8H-la，3,5,11112.49(lH,m)35.5H-10,12a，12yff,182.16(1H,m)36.3H-ll，18a1.76(1H,m)1384.6H-U,12a，16,17144.49(1H,d,,2.4)82.7H-12ot，715146.6H-16,17165.03(1H,s)，4.90(lH，s)111.4H-17171.81(3H,s)19.4H-16181.50(3H，d，聲6.6)21.2H-U，12a,12^19U4(3H，d'^6.0)13.6H-lct20-3.86(lH，d，聲l2.0)66.3H-7a3.81(H,d,力12.0)r117.6H-3',7'，142,136.4H-4',6'3,7.75(1H,m)126.3H-7'，4'，5'4,7.37(1H,m)128.2H-5'，6'<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>權(quán)利要求1.芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物，其特征在于該類化合物有如下結(jié)構(gòu)式2.—種如權(quán)利要求1所述的芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物的制備方法，其特征在于該方法為選用瑞香科植物芫花(D"p/z"ege"^^.etzucc)的干燥花蕾40006000g為原料，58倍量的體積比為60%95%工業(yè)乙醇室溫下冷浸提取1S20天，每2448h小時(shí)減壓濃縮一次，累計(jì)總浸膏500~600g，總浸膏用3化水混懸后，分別用氯仿，正丁醇以l:l的體積比進(jìn)行萃取，萃取35次，得到的氯仿層干浸膏200300g，正丁醇層干浸膏200300g,及濃縮后水液10~15L;氯仿層浸膏進(jìn)行快速減壓柱色譜或常壓柱色譜分離，沸程為3060°C,或6090。C的石油醚-丙酮50:12:1(K/l^)混合溶劑梯度洗脫,每300500ml體積為一餾分，共收集到4050個(gè)餾分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并得到F1F6的6個(gè)餾分，餾分F4經(jīng)氯仿-甲醇腦:02:1或二氯甲烷-甲醇100:02:1混合溶劑梯度洗脫，得到F4-lF4-6的6個(gè)餾分，F(xiàn)4-4分別經(jīng)MCIgd柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)洗脫分離，C,8反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninVI和GenkwaninW;餾分F6經(jīng)氯仿-甲醇80:02:1或二氯甲烷-甲醇80:02:1混合溶劑梯度洗脫,得到F6-lF6-4的4個(gè)餾分，F(xiàn)6-2分別經(jīng)MCIgel柱色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫除去葉綠素，硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)洗脫分離，C18反相硅膠柱色譜以及制備高效液相色譜甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑得到白色粉末或透明狀物質(zhì)，化合物GenkwaninII，GenkwaninIII，GenkwaninIV，GenkwaninV。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物的制備方法，其特征在于該方法為所述的提取及萃取方法得到的氯仿層干浸膏經(jīng)石油醚-丙酮系統(tǒng)50:12:1(混合溶劑梯度洗脫硅膠柱層析后得到餾分Fl-F6。餾分F3經(jīng)石油醚-丙酮80:02:1或二氯甲烷-甲醇100:02:1混合溶劑梯度洗脫，得到F3-l~F3-7的7個(gè)餾分，餾分F3-3經(jīng)MCIgel柱色譜以甲醇-水或乙醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集2050%洗脫的餾分，經(jīng)Qs反相硅膠柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，收集5080%洗脫的餾分，經(jīng)反相制備高效液相色譜分離，采用甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，回收溶劑后，共得到化合物GenkwaninII,GenkwaninIV，GenkwaninV。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的芫花中新的瑞香烷型二萜類化合物的制備方法，其特征在于洗脫后的餾分中含有瑞香烷型二萜的部分氯仿-甲醇系統(tǒng)30:120:1展開，Rf值在0.1~0.8，254nm紫外燈鑒別或顯色劑鑒別，顯色劑可以是10%硫酸顯色劑，或10%硫酸偏礬酸銨-顯色劑，或10°/。硫酸-香草醛顯色劑。5，如權(quán)利要求l所述的瑞香烷型二萜類化合物，其特征在于所述的化合物可以與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體組成的藥物組合，制成臨床上可接受的劑型。6.瑞香烷型二萜類化合在制備抗癌藥物中的用途。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，所述的抗癌藥物可以是針對HL-60人急性髓性白血病細(xì)胞癌癥的藥物。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及從瑞香科植物芫花(Daphnegenkwaet.zucc)花蕾中提取分離的一系列新的瑞香烷型二萜類化合物，GenkwanineII，GenkwaninIII，GenkwaninIV，GenkwaninV，GenkwaninVI，GenkwaninVII，它們具有相同的瑞香烷型二萜母核，它們具有式(1)的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式。本發(fā)明還涉及該類新化合物及其制備藥物的抗腫瘤生理活性及其醫(yī)藥用途。該類化合物可以和藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合制成臨床上可接受的劑型，用于各類癌癥的治療。本發(fā)明制備方法簡單，重現(xiàn)性好，提取純度高。獲得的化合物具有較好的抗腫瘤活性作用。文檔編號A61K36/83GK101531644SQ200910010388公開日2009年9月16日申請日期2009年2月18日優(yōu)先權(quán)日2009年2月18日發(fā)明者吳春福,宋少江,纓彭,李玲芝,楊靜玉,王立輝,高品一申請人:沈陽藥科大學(xué)