專(zhuān)利名稱(chēng)：人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及人參二醇(Panaxdiol, PD)制備具有顯 著抗腫瘤活性化合物的方法，具體涉及人參二醇通過(guò)側(cè)鏈開(kāi)環(huán)產(chǎn)生抗腫瘤化 合物的方法。
背景技術(shù)：
研究證明20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3卩，12卩,20,25-四醇、20(S)和20(R)-25-甲 (或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3(3，12|3,20-三醇、20(S)和20(R)-20-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-鄧，l鄰,25-三醇和20(S)和20(R)-22, 25-二甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷 -3卩，12^二醇具有顯著的抗癌活性，可以抑制人的腫瘤細(xì)胞，包括人乳腺 癌、人小細(xì)胞肺癌、人胃癌、人結(jié)腸癌、人神經(jīng)膠質(zhì)癌、人黑色素瘤、人 宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宮頸癌-14 及艾氏腹水癌等的生長(zhǎng)與增殖，還能抑制前列腺移植瘤的生長(zhǎng)，并增加腫 瘤對(duì)放化療的敏感性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，抑制腫瘤新生血管生成、 抑制腫瘤的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和降低化療藥物毒副作用等抗腫 瘤活性。
現(xiàn)已證明，無(wú)論是體內(nèi)還是體外20(S)和20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷 -3|3,12(3，20-三醇均具有許多顯著的抗癌作用。尤其對(duì)人前列腺癌細(xì)胞1^0^ (雄激素依賴(lài))和PC3 (雄激素獨(dú)立)有作用，比人參皂苷Rh2,人參皂苷 Rg3和原人參二醇更有效。20(S)和20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12(3,20-三醇 可以縮短癌細(xì)胞存活，抑制增值，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還可以阻止第一代細(xì)胞 停止分裂，此外還可以抑制前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。相對(duì)于化學(xué)方法或輻射 相比，20(S)和20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩,20-三醇副作用很小，而且也 不像紫杉醇和2，2-二氟脫氧胞嘧啶核苷毒性那么強(qiáng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明沒(méi)有明顯 的毒性。
20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3卩，12(3,20，25-四醇、20(S)和20(R)國(guó)25陽(yáng)甲(或乙) 氧基-達(dá)瑪烷-鄧，l鄧,20-三醇、20(S)和20(R)國(guó)20-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷 -3卩,12卩,25-三醇和20(S)和20(R)-22， 25-二甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3P,12p-二醇均是PPD型人參皂苷元，區(qū)別僅僅在于側(cè)鏈的不同。比目前在國(guó)內(nèi)廣 泛用于抗癌藥物的人參皂苷Rg3對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)抑制活性髙IO-IOO倍。目前 還沒(méi)有如上化合物的相關(guān)制備方法，而且未發(fā)現(xiàn)通過(guò)人參二醇來(lái)制備如上 化合物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種通過(guò)人參二醇水解轉(zhuǎn)化制備抗腫瘤活性化
合物的方法
口 本發(fā)明k供了人參二醇的開(kāi)環(huán)方法，以及具有顯著抗腫瘤活性的20(S) 和20(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20，25-四醇、20(S)和20(R)-25誦甲(或乙)氧基-達(dá)瑪 烷畫(huà)3卩，12卩，20-三醇、20(S)和20(R)誦20-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3(3，12p,25-三 醇和20(S)和20(R)-22, 25-二甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12|3-二醇的制備方法。
本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
人參二醇加有機(jī)溶劑于密閉容器中，溶解，加酸或堿，超聲或微波反
應(yīng)；反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠(200-300目)柱 進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1),得到20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12卩，20,25-四醇、20(S)和20(R)-25-甲(或 乙)氧基-達(dá)瑪烷-3P，12p，20-三醇、20(S)和20(R)-20-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪 烷-3卩，12(3，25-三醇和20(S)和20(R)-22， 25-二甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩-二醇。
本發(fā)明提供的方法中，所用的原料為人參二醇和可通過(guò)酸堿水解或微 生物及酶轉(zhuǎn)化產(chǎn)生人參二醇的植物總皂苷和單體皂苷。
本發(fā)明提供的方法中，原料的開(kāi)環(huán)反應(yīng)包括酸解和堿解。 本發(fā)明提供的方法中，酸解所用的酸為質(zhì)子酸或路易斯酸(如鹽酸、 硫酸、硝酸、BF3、 A1C13、 SnCl4、 FeCl3、 ZnCb等);酸解在有機(jī)溶劑(如 甲醇、乙醇(無(wú)水)、丙酮、丁醇、乙酸乙酯等)中進(jìn)行；原料量為有機(jī)溶 劑的1%~50°/。；酸濃度為1%~98%,酸解溫度為20~100°C;酸解在無(wú)氧、 超聲、回流、攪拌的密閉容器中進(jìn)行。
本發(fā)明提供的方法中，堿解所用的堿為路易斯堿或堿金屬氫氧化物(如 氫氧化鈉、氫氧化鉀、路易斯堿)；堿解在有機(jī)溶劑(如甲醇、無(wú)水乙醇、 丙酮、乙酸乙酯等)中進(jìn)行；原料量為有機(jī)溶劑的1%~50%;堿濃度為1~ 50%左右，堿解溫度為20~100°C;堿解在無(wú)氧、超聲、回流、微波、閃式 和攪拌的密閉容器中進(jìn)行。
本發(fā)明提供的方法中，人參二醇側(cè)鏈開(kāi)環(huán)產(chǎn)物中，甲醇為溶劑酸解產(chǎn)物 中具有顯著的抗腫瘤活性的化合物為20(R)-達(dá)瑪烷-3p,12f3,20,25-四醇、 20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩，20-三醇、20(R)-20-甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩，25-三醇和20(R)-22, 25-二甲哉基-達(dá)瑪烷-3p，12卩-二醇。
本發(fā)明提供的方法中，人參二醇側(cè)鏈開(kāi)環(huán)產(chǎn)物中，甲醇為溶劑堿解產(chǎn)物 中具有顯著的抗腫瘤活性的化合物為20(S)-達(dá)瑪烷-3@，12&,20，25-四醇、20(8) -25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12卩，20-三醇、20(S)-20-甲氧基-達(dá)瑪烷-3p,12p,25-三醇 和20(S)-22， 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩-二醇。
本發(fā)明簡(jiǎn)便易行，條件溫和，產(chǎn)物易于分離純化且收率較好。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
人參二醇(5g)加250ml甲醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入250ml (1°/。-37%) HCL, 20-60。C超聲反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分析， PD轉(zhuǎn)化率^85%。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠 (200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1)，得到20(R)畫(huà)達(dá)瑪烷-3卩，12卩，20，25-四醇(1.3g)、 20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪垸國(guó)3P,12p，20-三醇(1.6g)、 20(尺)-20-甲氧基畫(huà)達(dá)瑪烷陽(yáng)3卩,12卩,25-三醇(0.5g)和20(R)畫(huà)22， 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩-二醇(0.3g )。實(shí)施例2:
人參二醇(5g)加250ml甲醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入250ml (1%-37%) HCL, 20-50。C微波反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分析， PD轉(zhuǎn)化率285%。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠 (200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1),得到20(11)-達(dá)瑪烷-3|3，12|3,20,25-四醇(l.Og )、 20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3，l鄰，20-三醇(l.lg)、 20(R)-20-曱氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩，25-三醇(0.7g)和20(R)-22, 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3|3，12卩-二醇(0.2g )。 實(shí)施例3:
人參二醇(5g)加250ml甲醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入250ml (l-30%)NaOH, 20-6(TC超聲反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分析，PD 轉(zhuǎn)化率280%。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠(200-300 目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1),得到20(S)-達(dá)瑪烷-3卩，12卩，20,25-四醇(0.8g)、 20(S)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3p，12(3，20-三醇(1.0g)、20(S)-20-甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3，12(3，25-三醇(0.1g) 和20(S)-22， 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12(3-二醇(O.lg)。 實(shí)施例4:
人參二醇(5g)加250ml甲醇于可密閉容器中，加熱溶解，加入250ml (1-30%)NaOH, 20-5(TC微波反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分析，PD 轉(zhuǎn)化率278%。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠(200-300 目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1),得到20(S)-達(dá)瑪烷-3卩,12(3，20，25-四醇(0.6g)、 20(S)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩,20-三醇(0.8g )、 20(S)-20-甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12(3，25-三醇(O.lg ) 和20(S)-22, 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩-二醇(0.2g )。 實(shí)施例5:
人參二醇(5g)加200ml無(wú)水乙醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入 250ml ( 1%陽(yáng)37%) HCL， 20-60。C超聲反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分 析，PD轉(zhuǎn)化率^75。/。。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠
(200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1)，得到20(R)-達(dá)瑪烷陽(yáng)3(3，12J3，20，25-四醇(0.6g )、 20(R)陽(yáng)25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3p,12卩，20-三醇(0.7g)、 20(R)-20-乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩，25-三醇(0.2g)和20(R)-22, 25-二乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩-二醇(0.2g )。
實(shí)施例6:
人參二醇(5g)加200ml無(wú)水乙醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入 250ml ( 1°/。-37°/。) HCL, 20-50。C微波反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分 析，PD轉(zhuǎn)化率^80。/。。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠 (200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1)，得到20(R)國(guó)達(dá)瑪烷-3p，12卩,20，25-四醇(0.6g )、 20(R)曙25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3p，12p，20-三醇(0.7g)、 20(R)-20-乙實(shí)施例7:
人參二醇(5g)加200ml無(wú)水乙醇于可密閉容器中，超聲溶解，加入 250ml (1-30%) NaOH, 20-60。C超聲反應(yīng)0.5-2小時(shí)。。水解產(chǎn)物于HPLC 分析，PD轉(zhuǎn)化率^80。/。。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅 膠(200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1),得到20(S)畫(huà)達(dá)瑪烷-3p，12卩，20,25-四醇(0.6g )、 20(S)-25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩，l鄰，20-三醇(0.5g)、 20(8)-20-乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩，25-三醇(O.lg)和20(S)國(guó)22， 25-二乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12f3-二醇(O.lg)。 實(shí)施例8:
人參二醇(5g)加200ml無(wú)水乙醇于可密閉容器中，加熱溶解，加入 250ml ( 1-30%) NaOH， 20-50。C微波反應(yīng)0.5-2小時(shí)。水解產(chǎn)物于HPLC分 析，PD轉(zhuǎn)化率275。/。。反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)硅膠 (200-300目)柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮梯度洗脫(10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: 1)，得到20(S)-達(dá)瑪烷畫(huà)3卩，12卩,20,25-四醇(0.3g )、 20(S)-25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3p，l鄰，20-三醇(0.4g)、 20(8)-20-乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩,12卩，25-三醇(O.lg)和20(S)-22， 25-二乙氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12)3-二醇(O.lg)。
權(quán)利要求
1、人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方法，其特征在于以人參二醇為原料，通過(guò)酸解或堿解發(fā)生側(cè)鏈開(kāi)環(huán)反應(yīng)獲得。
2、 按照權(quán)利要求1所述的人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方 法，其特征在于所述的人參二醇包括人參二醇、植物總皂苷和單體皂苷 通過(guò)酸堿水解或微生物及酶轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的人參二醇；所述的抗腫瘤活性化合 物包括20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20,25-四醇、20(S)和20(R)-25-甲氧基 -達(dá)瑪烷-3(3，12(3,20-三醇、20(8)和20(R)-25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20-三醇、 20(S)和20(R)-20-甲斌基-^瑪烷-3(3，12(3,25-三醇、20(S)和20(R)-20-乙氧 基-達(dá)瑪烷-3|3,12(3,25-三醇、20(S)和20(R)-22, 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷 -3|3，12(3-二醇、20(S)和20(R)-22, 25-二乙氧基-達(dá)瑪烷-3(3，12f3-二醇。
3、 按照權(quán)利要求1所述的人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方 法，其特征在于將人參二醇加有機(jī)溶劑于密閉容器中，溶解，加酸或 堿，超聲或微波反應(yīng)；反應(yīng)液中和后，乙酸乙酯萃取，得總反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng) 200-300目硅膠柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相選擇為石油醚丙酮10: 1、 5: 1、 3: 1、 1: l梯度洗脫，得到抗腫瘤活性化合物。
4、 按照權(quán)利要求3所述的人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方 法，其特征在于所述的酸為質(zhì)子酸或路易斯酸；酸濃度為1%~98%， 酸解溫度為20~100°C;所述的堿為路易斯堿或堿金屬氫氧化物；堿濃度 為1%~50%,堿解溫度為20~300°C。
5、 按照權(quán)利要求3所述人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方法， 其特征在于所用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮、丁醇、乙酸 乙酯，人參二醇為有機(jī)溶劑的1%~50%;反應(yīng)在無(wú)氧、超聲、回流、微 波、閃式和攪拌的密閉容器中進(jìn)行。
6、 按照權(quán)利要求1所述人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方 法，其特征在于在甲醇為溶劑的情況下，酸解所獲得的抗腫瘤活性的 化合物為20(R)-達(dá)瑪烷-3(3,12(3,20,25-四醇、20(R)-25-甲氧基-達(dá)瑪烷 -3卩,l2(3,20-三*、 20(R)-20-甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12(3,25-三醇和20(R)-22, 25-二甲氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12(3-二醇。
7、 按照權(quán)利要求1所述人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方 法，其特征在于在甲醇為溶劑的情況下，堿解所獲得的抗腫瘤活性的 化合物為20(S)-達(dá)瑪烷-3P,12p，20，25-四醇、20(S) -25-甲氧基-達(dá)瑪烷 鄰，12卩，20-三醇、20(S) -20-甲敘基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩，25-三醇和20(S) -22, 25-二甲氧基-達(dá)瑪垸-3(3,12|3-二醇。
8、 按照權(quán)利要求1所述人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方法， 其特征在于在乙醇為溶劑的情況下，生成如下開(kāi)環(huán)產(chǎn)物20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3卩,12p，20，25-四醇、20 (S)和20(R)-25-乙氧基-達(dá)瑪烷-3卩，12卩,20-三醇、 20 (S)和20(R)-20-乙氧基-達(dá)瑪烷-3(3,12(3，25-三醇和20 ( S )和 20(R)-22, 25-二乙氧基-達(dá)瑪烷-3|3,12(3-二醇。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種人參二醇制備具有抗腫瘤活性化合物的方法，可制備多種具有達(dá)瑪烷母核的化合物，其中涉及到兩組具有顯著抗腫瘤活性的原人參二醇衍生物。并公開(kāi)了這些化合物的制備方法。它們的名稱(chēng)分別為20(S)和20(R)-達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇、20(S)和20(R)-25-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3β，12β，20-三醇、20(S)和20(R)-20-甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3β，12β，25-三醇和20(S)和20(R)-22，25-二甲(或乙)氧基-達(dá)瑪烷-3β，12β-二醇。本發(fā)明簡(jiǎn)便易行，條件溫和，產(chǎn)物易于分離純化且收率較好。
文檔編號(hào)A61K31/575GK101538305SQ20091001132
公開(kāi)日2009年9月23日 申請(qǐng)日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者劉振洋, 曹家慶, 趙余慶 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)