專利名稱：：氨肽酶n抑制劑烏苯美司迪諾酯及其合成與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及氨肽酶N抑制劑Bestatin(烏苯美司)的前藥，烏苯美司迪諾酯的設計，合成及可能的醫(yī)藥用途。屬于藥物
技術領域：
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背景技術：
：1.氨肽酶N(APN)氨肽酶N(APN/CD13)是一種依賴于鋅離子的二型金屬外肽酶，隸屬于M1氨肽酶大家族。其生理學功能是參與底物N端氨基酸的降解。正常條件下，APN在哺乳動物的腎臟、小腸以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織中廣泛低水平表達，參與機體的生理調(diào)節(jié)。研究證明，氨肽酶N是一種多功能酶，底物廣泛，它在腫瘤發(fā)生、免疫功能調(diào)節(jié)，病毒感染以及鎮(zhèn)痛方面都發(fā)揮重要的作用。(1)APN在腫瘤細胞表面高水平表達。該酶可使細胞外基質(zhì)(ECM)的主要成分降解，破壞了機體的天然屏障，促進腫瘤細胞的侵襲、生長和轉(zhuǎn)移，并參與腫瘤新血管生成，從而為腫瘤的生長提供所需養(yǎng)分。(參見Saiki,I.;etal.Int.J.Cancer"1993,54,137;Sato,Y.Biol.Pharm.Bull.，2004,772，776)。(2)APN在粒細胞及淋巴細胞表面大量表達，同時也參與了T淋巴細胞依賴的炎癥反應；還能夠表達于抗原遞呈細胞表面，降解免疫活性物質(zhì)(如白介素-8);參與抗原處理和細胞表面的主要組織相容性復合體II型(MHC-n)粘附抗原決定簇依賴的T細胞對抗原的識別，降低了T細胞的識別能力，同時削弱了巨噬細胞和NK細胞對腫瘤細胞的識別和殺傷能力，使機體免疫力下降。(3)APN作為人冠狀病毒HCoV-229E和傳染性胃腸炎病毒(TGEV)表面的受體，在上呼吸道感染(如SARS)和急性腸炎中扮演重要角色，且其發(fā)揮作用與酶的活性相關(參見Delmas，B.,etal.Nature,1992，357,417;Yeager,C丄.；etal.Nature,1992,357，420)。(4)APN參與HIV病毒顆粒進入宿主細胞的過程。研究表明，在感染HIV的患者體內(nèi)APN活性遠遠高于健康志愿者。在HIV-1入侵宿主細胞時，高表達的APN通過降解能夠使HIV-1輔助受體CCR5脫敏的趨化因子fMLP，從而降低細胞的天然免疫功能，并使CCR5增敏，促進病毒進入宿主細胞。(參見ShenW，LiB,etal.Blood,2000，96(8),2887;ShippMA,etal.Blood,1993，82(4),1052)(5)APN參與內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)內(nèi)啡肽和腦啡肽的降解，從而引起P物質(zhì)的過度釋放，導致疼痛。(6)APN降解血管緊張素，參與機體血壓的調(diào)節(jié)(參見Mitsui，T.;Wa/.歷o/.P/2am.Bw〃.，2004,27,768.)2.烏苯美司烏苯美司又名百士欣，英文名為Bestatin、Ubenimex，化學名為氮-[(2S,3R)-3-胺基-2-羥基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸。(參見H.Suda"a/.,A/d100.Syntheses:600;R.Nishizawa"a/"1983，36,695)CAS注冊號為58970-76-6。烏苯美司是一種氨肽酶N抑制劑，本品可用于增強免疫功能，用于抗癌化療、放療的輔助治療、老年性免疫功能缺陷等，也可直接用于腫瘤如白血病的治療。其化學結(jié)構(gòu)如下COOH烏苯美司烏苯美司結(jié)構(gòu)中包含一個伯胺基和一個羧基，兩者可形成內(nèi)鹽，因此難溶于各種有機溶劑，水溶性也較差，從而造成生物利用度低、代謝穩(wěn)定性差，限制了它的使用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對己有的抗癌輔助藥物烏苯美司在藥代動力學性質(zhì)方面的不足，提供一種水溶性好、藥效好、藥物穩(wěn)定性好的烏苯美司迪諾酯。本發(fā)明還提供上述烏苯美司迪諾酯的合成方法與應用。為了改善烏苯美司藥代動力學性質(zhì)，提高水溶性，本發(fā)明對烏苯美司進行改造，提供一種烏苯美司迪諾酯，其結(jié)構(gòu)式如下-2HCI該前藥結(jié)構(gòu)中含有一個伯胺基和一個叔胺基，兩者各能結(jié)合一分子的氯化氫，從而形成兩分子的鹽酸鹽，水溶性大大提高，從而可適用于多種用藥劑型。同時使分子結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。所用的術語和定義含義如下環(huán)烷基團是取代或未取代的，飽和或不飽和的環(huán)狀基團，其含有碳原子和一個或多個雜原子。該環(huán)可以是單環(huán)或稠環(huán)，橋環(huán)或螺環(huán)的環(huán)系。THF:四氫呋喃；(Boc)20:二碳酸二叔丁酯，結(jié)構(gòu)為:HOBt:N-羥基苯并四氮唑，結(jié)構(gòu)為DCC:二環(huán)己基碳二亞胺，結(jié)構(gòu)為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>DMAP:對二甲胺基吡啶，結(jié)構(gòu)為本發(fā)明的烏苯美司迪諾酯的合成方法，步驟如下-(1)以光學純度的烏苯美司為起始原料，在pH-9-10的堿性條件下，使烏苯美司與二碳酸二叔丁酯反應，對烏苯美司的伯胺基進行Boc保護，然后，(2)以無水四氫呋喃做溶劑，在0'C溫度及DCC的催化作用下，將步驟(1)的產(chǎn)物Boc保護的烏苯美司與N-羥基苯并四氮唑縮合成活性酯，然后，(3)上步反應產(chǎn)物活性酯再在室溫下及DMAP的催化作用下，與N，N二甲基乙醇胺反應成酯，生成Boc保護的前藥，所述活性酯與N'N二甲基乙醇胺的摩爾比為1:3。(4)將步驟(3)得到的Boc保護的前藥在氯化氫的飽和乙酸乙酯溶液中脫掉Boc保護基團，得目標化合物。其中，步驟(3)成酯反應式如下HOBt/DCC/DMAP人+R2-OH~~-""n乂^R2Rf^OH2無水THFR,ORl，R2都是各種類型的取代基，如脂肪基團或芳香基團，可以是鏈狀也可以是環(huán)狀取代基。優(yōu)選的用量如下步驟(1)中，烏苯美司與二碳酸二叔丁酯的摩爾量比為1:1.1,步驟(2)中，N-羥基苯并四氮唑與烏苯美司的摩爾量比為1:1.08，二環(huán)己基碳二亞胺與烏苯美司的摩爾量比為1:1.1。步驟(3)中，對二甲胺基吡啶催化用量為烏苯美司摩爾量的0.2倍。以下是優(yōu)選的，以光學純度的烏苯美司為起始原料合成其前藥的一個具體路線OH<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>烏苯美司結(jié)構(gòu)中含有胺基、羥基兩個活潑集團，在此基礎上進行胺基Boc保護、羧基的活化、酯化、脫胺基Boc保護這四個基本步驟，將N，N二甲基乙醇胺與羧基相連成酯。既保護了羧基，增強藥物的代謝穩(wěn)定性。與此同時又引入一個叔胺基，從而可與兩分子氯化氫成鹽，增加了藥物的水溶性，改善了其藥代動力學性質(zhì)。本發(fā)明的成酯方法具有不影響分子內(nèi)活潑基團的優(yōu)點。本發(fā)明設計合成了一個具有全新結(jié)構(gòu)的烏苯美司迪諾酯。體外實驗表明其顯著的抑酶活性，可成為一個以烏苯美司為骨架的新型前藥。該方法也適用于任何含有游離羧基藥物的前藥的設計。同時，合成該前藥所用的成酯方法也具有新穎性，適用于絕大多數(shù)羧基與醇的成酯反應，并且反應條件溫和，尤其適用于對熱不穩(wěn)定酸的成酯反應。從反應結(jié)果看，該烏苯美司迪諾酯最終是以兩分子鹽酸鹽的形式存在，具有極強的水溶性，有利于活性測試的過程中溶液的配制以及藥物劑型的設計。得到的烏苯美司迪諾酯下一步將進行體外的抗腫瘤細胞實驗和體外穩(wěn)定性實驗。綜上所述，該發(fā)明主要技術特點包含以下三個部分(1)以N'N二甲基乙醇胺這個含叔胺結(jié)構(gòu)的天然活性小分子與烏苯美司形成酯類前藥，從而改善其穩(wěn)定性和藥代學性質(zhì)。(2)同時，N'N二甲基乙醇胺也可用于連接其他包含游離羧基的化合物，提高其水溶性。(3)本合成過程中使用了一種新穎的成酯方法，該成酯手段的優(yōu)點在于不會影響到藥物分子中的其它活潑基團，反應條件溫和，適用面廣。本發(fā)明是將烏苯美司與N'N二甲基乙醇胺成酯，在增加藥物穩(wěn)定性的同時，大大提高了其水溶性，很好的改善了其腰帶動力學性質(zhì)，提高了生物利用度，代謝產(chǎn)物也無毒副作用。舉一反三，任何具有羧基的、水溶性較差的藥物，皆可與N'N二甲基乙醇胺形成一種酯的結(jié)構(gòu)，再與各種有機或無機酸成鹽，來增加其水溶性。N，N二甲基乙醇胺，英文名為N,N-dimethylethanolamine或Deanol，是一種在自然界存在的天然活性物質(zhì)，它能夠增加人體內(nèi)的膽堿量，從而與記憶，學習，思考有密切的關系，(參見AlfredoGragnan，etc.ih汰尸7asL5"〃rg.2007,31，711-718;AlfredoGragnani，etc./Jest力.Wast.2008，32，406.)它在歐美國家已經(jīng)作為一種藥品服用，用于抗級及腦功能的改善，毒副作用小。同時，腫瘤病人在治療期間，多會伴隨各種各樣的痛苦，從而令腫瘤患者煩躁不安，作為膽堿的前體，N'N二甲基乙醇胺可有效改善這種煩躁不安的不良狀況。因此本發(fā)明選擇N'N二甲基乙醇胺與烏苯美司成酯，該方法不會使藥物分子中的各種敏感基團的如胺基、羥基、巰基等受到影響，且反應條件溫和，具有普遍的適用性。本發(fā)明的烏苯美司迪諾酯的體外及體內(nèi)抑酶活性實驗1.體外對氨肽酶N的抑制活性實驗實驗原理APN抑制活性的測試描述于Lejczak,B等.歷oc/^w^o;，1989,2&3549中。底物為L-亮氨酰-p-硝基苯胺，它可被APN降解，生成在405nm有吸收的p-硝基苯胺，并且p-硝基苯胺的濃度與酶活性的大小呈正相關。通過檢測405nm處的吸收度確定p-硝基苯胺的含量，可以確定氨肽酶N的活性，從而間接反映出抑制劑對酶活性抑制程度的大小材料與方法氨肽酶N與底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺均購自Sigma公司溶液的配制緩沖液，配制pH7.2，50mM磷酸鹽緩沖液，室溫放置備用。氨肽酶N溶解在緩沖液中配成0.2mg/mL的溶液；底物溶解在DMSO中配成0.5mg/mL溶液，各溶液冰箱放置備用。氨肽酶活性分析96孔板中加入上述氨肽酶N溶液10"L，底物溶液，用緩沖液補足200lxL。，35'C下，于搖床中搖晃30分鐘，利用酶標儀于405nm波長處測定吸收值。抑酶檢測96孔板中分別加入上述氨肽酶N溶液10iU，底物5iU，不同梯度濃度的化合物40ul，化合物總共有6個濃度梯度，分別是130ng/ml，32pg/ml，8pg/ml，2pg/ml，0.5嗎/ml和0.125嗎/ml。最后以175ml磷酸鹽緩沖液(pH7.2)補足200uL。100%組不含抑制劑?？瞻捉M用失活的酶代替活性酶，均用緩沖液補足200uL。35'C下，于搖床中搖晃30分鐘，再利用酶標儀，于405nm波長處測定各孔吸收值。最后按照如下公式計算抑制率抑制率=(100%吸收度一化合物吸收度)/(100%吸收度一空白吸收度)根據(jù)化合物的濃度與相應的抑制率，利用Origin7.5軟件擬合藥效曲線，計算前藥的ICso值。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注表中數(shù)值為三次實驗的平均值。酶活性實驗表明，前藥抑制酶活性小于母體藥物，烏苯美司。2.體外抑制癌細胞活性。實驗原理與步驟噻唑蘭，簡稱MTT，可透過細胞膜進入細胞內(nèi)，活細胞線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT還原為難溶于水的藍紫色的Formazan結(jié)晶并沉積在細胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜(DMSO)溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映細胞數(shù)量。MTT結(jié)晶物形成的量與活細胞數(shù)成正比，也與細胞活力呈正比。試驗細胞為人肺癌細胞(A549),卵巢透明細胞癌細胞(ES-2)，人白血病細胞(HL-60)，用RPMI1640培養(yǎng)基加10%胎牛血清培養(yǎng)。步驟(1)鋪96孔板，每孔50ul，5000個細胞(A549，ES-2是5000個，HL-60是50000個);(2)鋪板4h后，孔中加入50ul含不同濃度化合物的培養(yǎng)基，使孔中化合物終濃度分別為prodrug是200、100、50、25、12.5ug/ml;Bestatin是800，600，400，200,100ug/ml，每個濃度設三個復孔，不加細胞的孔讀數(shù)時作Blank,溶劑孔作化合物空白對照；(3)加入化合物48h后,向孔中加入0.5X的MTT,每孔10ul;(4)加入MTT4h后，2500rpm，30min離心，拋板棄孔中培養(yǎng)基，加入DMSO,馳l/孔;(5)酶標儀測570nm處吸光度值，630nm作參考波長抑制率=(化合物空白組一試驗組)/化合物空白組*100%實驗結(jié)果-表2:前藥對A549細胞的抑制結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3:前藥對ES-2細胞的抑制結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5:前藥、烏苯美司對三種腫瘤細胞的半數(shù)有效量<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從以上結(jié)果可以看出，烏苯美司迪諾酯在抑制這三種腫瘤細胞方面，有著更好的效果。半數(shù)有效量要遠小于母體藥物…烏苯美司。該結(jié)果的可靠性要更高于酶活性實驗。3.小鼠體內(nèi)實驗本實驗選用了小鼠進行實驗，對小鼠進行接種H22(人肝癌細胞)實體瘤，用烏苯美司迪諾酯和烏苯美司分別進行活性實驗，最后以抑瘤率為標準判斷化合物的活性。烏苯美司迪諾酯選擇了三個給藥劑量分別為100mg/kg，50mg/kg和25mg/kg，烏苯美司濃度為100mg/kg，實驗結(jié)果圖l所示，從此柱狀圖中可以看出，前藥在00rag/kg,50mg/kg和25mg/kg三個劑量下的抑瘤率分別為35%,16%和13%。烏苯美司迪諾酯與烏苯美司活性比較見圖2，在100mg/kg劑量下，烏苯美司迪諾酯和烏苯美司的抑制率分別為35%和3%，烏苯美司迪諾酯的活性要明顯高于烏苯美司。4.小鼠體內(nèi)藥物動力學試驗取昆明種健康小鼠，隨機分為2組，第l組為烏苯美司組，第2組為前藥組，每個時間點平行設定3只。尾靜脈注射烏苯美司及前藥，烏苯美司給藥劑量100mg/kg，前藥給藥劑量則按等摩爾烏苯美司給藥劑量給藥。給藥前小鼠禁食12h，自由飲水，分別于給藥前(Oh)、給藥后5min、15min、30min、45min、1、2、4、6、8、12、24h于眼底靜脈叢取血，加入經(jīng)肝素鈉潤洗過的離心管中。精密吸取血漿200ti置于1.5ml離心管中，精密加入含25%高氯酸的乙腈溶液50W，渦旋振蕩，離心(15000rpm)20min,取上清分別進樣25plHPLC測定血藥濃度。烏苯美司及前藥的平均藥一時曲線見圖3，4，5，6。計算其主要統(tǒng)計矩參數(shù)，結(jié)果見表6，表7。由曲線下面積AUCO-t(Ug/m"h)值可計算得，小鼠尾靜脈前藥于烏苯美司的相對生物利用度為112.1%，小鼠口服前藥于烏苯美司的相對生物利用度為96.68%，經(jīng)統(tǒng)計學分析尾靜脈注射和口服給藥組中，前藥和烏苯美司的AUC0-t均無顯著性差異(PX).05)，說明前藥與烏苯美司生物等效；比較藥物的體內(nèi)滯留時間(MRT0-t)以及半衰期(T1/2)，前藥和烏苯美司T1/2和MRT0-t有統(tǒng)計學意義(P0.05)，即前藥組T1/2和MRTO-t較烏苯美司組均有增加，這說明制成前藥后，由于提高了水溶性，使藥物具有適宜的油水分配系數(shù)，維持有效的血漿濃度時間長，能夠延長烏苯美司的半衰期。表6.小鼠尾靜脈注射給藥烏苯美司及前藥主要統(tǒng)計矩參數(shù)參數(shù)烏苯美司前藥C隨(|xg/ml)214.03±4.34134.84±3.56MRT(M(h)1.94±0.122.43±0.10T,。(h)1.34±0.191.68±0.11AUCo-tOig/ml*h)228.04±4.54255.65±3.56AUMC0-t(ng/ml*h)441.83±4.02620.23±5.07表7.小鼠口服給藥烏苯美司及前藥后的主要統(tǒng)計矩參數(shù)參數(shù)烏苯美司前藥C隨Og/ml)137.71±3.79103.45±4.98T匪(h)0.50.5MRT0-t(h)1.47土0.122.32±0.15T,/z(h)1.02±0.151.61士0.21AUC0.taig/ml*h)231.39±6.76223.71±5.48AUMC(MOg/ml*h)341.07±5.33520.20±5.695.體內(nèi)外穩(wěn)定性實驗烏苯美司迪諾酯在水、0.lmol/L的HC1溶液中穩(wěn)定；在pH7.4的PBS溶液中降解，主要有兩個降解產(chǎn)物，一個根據(jù)保留時間可確定為烏苯美司，另一個為N'N二甲基乙醇胺。表8體外穩(wěn)定性實驗(pH=7.4PBS)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從表各種數(shù)據(jù)可以看出，由于人體pH值在7.2-7.3左右，所以可以預測烏苯美司前藥在體內(nèi)也會慢慢被降解，從而釋放出母體藥物烏苯美司，起到抗腫瘤作用。即使未被降解，由于上述活性實驗證明，烏苯美司前藥活性優(yōu)于母體藥物烏苯美司，所以烏苯美司前藥本身也同樣會有良好的抗腫瘤活性。如上所述的烏苯美司迪諾酯在制備治療腫瘤藥物中的應用。制劑用途優(yōu)選的，烏苯美司迪諾酯用于制備注射劑。也可以制備成適于口服的片劑或滴丸。烏苯美司抑制一直以來都用于口服給藥，對于癌癥患者，特別是癌癥晚期患者，不利于口服給藥，且口服給藥的生物利用度低，文獻表明，烏苯美司85%以上是以原藥的形式從體內(nèi)排出。而烏苯美司迪諾酯屬于兩分子鹽酸鹽，水溶性高，從而可以制成注射劑，如氯化鈉注射劑、葡萄糖注射劑等等，這樣可大大提高母體藥物的生物利用度，而且由于前藥具有緩釋功能，從而可以延長母體藥物在體內(nèi)的滯留時間，提高藥效，減少給藥次數(shù)。圖1是本發(fā)明烏苯美司迪諾酯活性圖，橫坐標是烏苯美司迪諾酯濃度(mg/ml)，縱坐標是抑瘤率(％)。圖2是本發(fā)明烏苯美司迪諾酯與烏苯美司活性比較圖，橫坐標是抑制率《)，前藥與烏苯美司在50mg/ml濃度下的抑制率分別為35%和31圖3是小鼠尾靜脈注射烏苯美司平均藥一時曲線圖4是小鼠前藥尾靜脈注射烏苯美司平均藥一時曲線圖5是小鼠口服給藥烏苯美司后的平均藥一時曲線圖6是小鼠口服給藥前藥組烏苯美司的平均藥一時曲線具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明，但不限于此。實施例1:具有下列結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物，烏苯美司迪諾酯烏苯美司迪諾酯合成方法，步驟如下:合成烏苯美司迪諾酯的路線9HH^^^/^NyCOOH(Boc)20NaOH氯化氫/乙酸乙酯COOH(1)以光學純度的烏苯美司為起始原料，在pH-9-10的堿性條件下，使烏苯美司與二碳酸二叔丁酯反應(二碳酸二叔丁酯摩爾量為烏苯美司的1.1倍)，對烏苯美司的伯胺基進行Boc保護，(2)以無水四氫呋喃做溶劑，在O'C溫度及二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(DCC摩爾量為烏苯美司的l.l倍)的催化作用下，將步驟(1)的產(chǎn)物Boc保護的烏苯美司與HOBt(摩爾量為烏苯美司的1.08倍)縮合成活性酯，(3)上步反映產(chǎn)物活性酯再在室溫下及對二甲胺基吡啶(DMAP)(DMAP摩爾量為烏苯美司的0.2倍)的催化作用下，與N，N二甲基乙醇胺反應成酯，生成Boc保護的前藥，所述活性酯與N'N二甲基乙醇胺的摩爾比為1:3。(4)將步驟(3)得到的Boc保護的前藥在氯化氫的飽和乙酸乙酯溶液中脫掉Boc保護基團，得目標化合物。實施例2:按處方量精密稱取氯化鈉，加處方量70%的注射用水溶解，按體積加入1%活性炭，攪拌，濾過，HCl調(diào)節(jié)pH5,加入處方量實施例1的烏苯美司迪諾酯，攪拌溶解，注射用水至1000ml，濾過，灌封于2ml安瓿中，滅菌30分鐘即得。實施例3:按處方量精密稱取葡萄糖，加處方量70%的注射用水溶解，按體積加入1%活性炭，攪拌，濾過，HCl調(diào)節(jié)pH5,加入處方量實施例1的烏苯美司迪諾酯，攪拌溶解，注射用水至1000ml，濾過，灌封于2ral安瓿中，滅菌30分鐘即得。實施例4:按處方量精密稱取實施例i的烏苯美司迪諾酯，按藥物PEG6000:水甘油按i:i.8:0.4:0.4比例混勻，保溫于(90±2)'C的滴制裝置內(nèi)，用滴口內(nèi)徑/外徑為2.5/3.5(mm)的滴管以(10±2)D/min的滴速滴入溫度為室溫的冷卻液中。實施例4:按處方量精密稱取實施例1的烏苯美司迪諾酯，按20%比例加入微晶纖維素充分混合，然后外加5%交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和0.3%微粉硅膠，混勻后進行粉末直接壓片，控制片劑的硬度為34kgcm-2。所制分散片可在3min內(nèi)完全崩解并且全部通過2號篩，符合《中國藥典》對分片的要求。實施例5:按處方量精密稱取實施例1的烏苯美司迪諾酯，以HPMC，IV號丙烯酸樹脂作為主要粘合劑制備片心，片心硬度達到0.5MPa以上，崩解10min左右，脆碎度〈1%,片面平滑。薄膜包衣的最優(yōu)工藝參數(shù):包衣的歐巴代用量為5%,噴量400g/min,轉(zhuǎn)速15r/min。權(quán)利要求1.具有下列結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物，烏苯美司迪諾酯2.如權(quán)利要求1所述的烏苯美司迪諾酯的制備方法，其特征在于該方法為羧基上引入N'1S'二甲基乙醇胺這個天然活性小分子，其結(jié)構(gòu)式如下本發(fā)明的烏苯美司迪諾酯的合成方法，步驟如下(1)以光學純度的烏苯美司為起始原料，在pl^9-10的堿性條件下，使烏苯美司與二碳酸二叔丁酯反應，對烏苯美司的伯胺基進行Boc保護，(2)以無水四氫呋喃做溶劑，在O'C溫度及DCC的催化作用下，將步驟(1)的產(chǎn)物Boc保護的烏苯美司與N-羥基苯并四氮唑縮合成活性酯，(3)上步反應產(chǎn)物活性酯再在室溫下及DMAP的催化作用下，與N'N二甲基乙醉胺反應成酯，生成Boc保護的前藥，所述活性酯與N'N二甲基乙醇胺的摩爾比為1:3;(4)將步驟(3)得到的Boc保護的前藥在氯化氫的飽和乙酸乙酯溶液中脫掉Boc保護基團，得目標化合物。3.如權(quán)利要求2所述的烏苯美司迪諾酯的制備方法，其特征在于步驟(1)中，烏苯美司與二碳酸二叔丁酯的摩爾量比為1:1.1。4.如權(quán)利要求2所述的烏苯美司迪諾酯的制備方法，其特征在于步驟(2)中，N-羥基苯并四氮唑與烏苯美司的摩爾量比為1:1.08，二環(huán)己基碳二亞胺與烏苯美司的摩爾量比氯化氫/乙酸乙酯為1:1.1。5.如權(quán)利要求2所述的烏苯美司迪諾酯的制備方法，其特征在于步驟(3)中，對二甲胺基吡啶催化用量為烏苯美司摩爾量的0.2倍。6.如權(quán)利要求2所述的烏苯美司迪諾酯的制備方法，其特征在于該方法適用于其它含羧基藥物的酯類前藥的制備。7.—種具有廣泛適用性的，不影響分子內(nèi)活性基團且反應條件溫和的成酯方法，該成酯方法反應通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>Rl，R2都是各種類型的取代基，脂肪基團或芳香基團，是鏈狀或環(huán)狀取代基。8.如權(quán)利要求1所述的烏苯美司迪諾酯在制備治療腫瘤藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明提供了一個強效的抗腫瘤藥物，烏苯美司迪諾酯及制備方法和用途，該烏苯美司迪諾酯不僅可有效抑制氨肽酶N活性的異常表達，且大大提高了其母體藥物烏苯美司的水溶性，并具有緩釋作用，無論從療效或是從制劑方面，都要比母體藥物烏苯美司更加優(yōu)良，適應面廣。具體而言，本發(fā)明主要涉及三個方面(1)烏苯美司迪諾酯的設計與合成；(2)N’N二甲基乙醇胺，該小分子片段可連接于其它含羧基藥物，改善藥物的藥代動力學性質(zhì)，提高水溶性；(3)本發(fā)明還涉及一個合成酯類物質(zhì)的方法，該方法適用面廣，且條件溫和。文檔編號A61P35/00GK101531613SQ20091002065公開日2009年9月16日申請日期2009年4月16日優(yōu)先權(quán)日2009年4月16日發(fā)明者尚魯慶,娜張,徐文方,曲顯俊,欒業(yè)鵬,馬鴻飛申請人:山東大學;浙江普洛康裕制藥有限公司