專利名稱：黃櫨有效部位總黃酮的新用途及制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人用藥品技術(shù)領(lǐng)域，特別是黃櫨有效部位即總黃酮的新用途及制劑。

背景技術(shù)：
黃櫨(Cotinus coggygra Scop.)為漆樹科黃櫨屬植物，落葉灌木或小喬木，最高可達8m，秋季經(jīng)霜后葉色變紅，俗稱香山紅葉。雖然該植物還未作為藥材進入我國藥典，但近年來許多藥效學(xué)試驗表明它有抗菌作用、顯著的抗肝炎活性以及明顯的抗疲勞作用等，因此，黃櫨作為藥物已經(jīng)被人們進行了大量的研究。本發(fā)明人在中國專利申請200610042000.3中研究了黃櫨在抗凝血、抗血栓、降血壓作用及其治療藥物方面的功效。
但是，人們對黃櫨的研究，仍然處于初級階段，既沒有對黃櫨的具體有效部位和藥用的有效成分進行深入的研究，也對其更多的藥效沒有開發(fā)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明任務(wù)之一是確定黃櫨藥用的有效部位，并提供該有效部位的藥效學(xué)用途及各種制劑。
黃櫨有效部位的新用途，其是采收黃櫨葉、莖、枝和根提取總黃酮作為提高動物機體耐缺氧作用或溶解血栓等作用的藥物。
黃櫨中有效部位即總黃酮作為預(yù)防和治療冠心病，心絞痛或心肌梗塞的藥物。
黃櫨中有效部位即總黃酮作為預(yù)防和治療腦血栓及血栓栓塞性疾病的藥物。
所述的黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為藥用成分。
提高動物機體耐缺氧作用的藥物制劑，其含有黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分。
具有溶解血栓作用的藥物制劑，其含有黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分。
所述的提高動物機體耐缺氧作用的藥物制劑，其以黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分，添加藥學(xué)上可以接受的載體或輔助性成分制備而成。
所述的具有溶解血栓作用的藥物制劑，其以黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分，添加藥學(xué)上可以接受的載體或輔助性成分制備而成。
本發(fā)明優(yōu)點是確定了黃櫨的有效部位，并分離出有效成分作為藥用，明顯提高了治療效果，通過實驗證明，本發(fā)明制劑可以顯著提高動物耐缺氧能力，效果與西藥抗心絞痛藥普萘洛爾相當(dāng)，避免了西藥的毒副作用，并具有活血化瘀，降低全血粘度的功效，用于預(yù)防和治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞及淤血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或胸痛。同時，本發(fā)明制劑還具有體外抗凝血和溶血栓的功效。

具體實施例方式 實施例1黃櫨中分離的總黃酮加入淀粉或糊精按照現(xiàn)有工藝制成顆粒劑，用于治療冠心病、心絞痛和心肌梗塞。
實施例2將實施例1的總黃酮制成膠囊，作為預(yù)防和治療腦血栓及血栓栓塞性疾病的藥物。
實施例3將黃櫨總黃酮，進一步分離，得到槲皮素和漆黃素，溶解于溶劑后分別制成注射劑，注射液用于治療冠心病、心絞痛和心肌梗塞的急救藥物以及腦血栓及血栓栓塞性疾病的急救藥物。
在注射液制備中需要加入常規(guī)的PH調(diào)節(jié)劑(鹽酸、碳酸氫鈉)、抑菌劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑以及抗氧化劑等。
本發(fā)明制劑的相關(guān)藥效學(xué)報告證明利用本發(fā)明制備的黃櫨制劑具有提高動物機體耐缺氧作用和溶解血栓作用，具體見以下附件。
附件 黃櫨抗凝血活性的有效部位、采收季節(jié)及有效部位篩選。
1 材料和方法 1.1 動物 犬，體重15～30kg，雌雄不限，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物房室溫26±3℃，每日人工照明12h，每天上下午各換氣0.5h。ICR小鼠，體重18～22g，♀♂各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號陜醫(yī)動證字第08-004號，溫度、照明及換氣同前面所述，按性別分籠飼養(yǎng)，自由飲水，喂顆粒飼料。
1.2 儀器 MP200B電子天平，上海良平儀器儀表有限公司；HHS電熱恒溫水浴鍋，山西省水文醫(yī)療器械廠；AE240S型電子分析天平，Metler-Toledo Group；752型紫外光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠；D101-2型干燥箱，中國上海實驗儀器總廠；CQ-120型超聲波清洗機，上海躍進醫(yī)用光學(xué)器械廠；Motic B1-220ALED型生物顯微鏡，麥克奧迪實業(yè)集團有限公司；SENCO-R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申生科技有限公司；SHZ-D(III)循環(huán)水式真空泵，鞏義市英峪予華儀器廠；秒表等。
1.3 試驗用藥 1.3.1 藥品漆黃素(Fisetin)對照品，陜西旭煌植物科技發(fā)展有限公司，批號060610；槲皮素(Quercetin)化學(xué)對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號100081-200406；肝素鈉注射液，江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司，批號050612，臨用前用用蒸餾水稀釋，并用PBS(pH＝7.4)溶液調(diào)節(jié)其pH＝7；阿司匹林腸溶片，陜西白鹿制藥股份有限公司，批號070335，臨用前用0.5％CMC-Na溶液配成所需濃度，并用PBS(pH＝7.4)溶液調(diào)節(jié)其pH＝7；戊巴比妥鈉注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批號060609；鹽酸氯胺酮注射液，上海第一生化藥業(yè)公司，批號060910；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉以及氯化鈉等均為分析純。
1.3.2 黃櫨各部位的制備 1.3.2.1 黃櫨莖、枝、葉及根水提液 三批黃櫨藥材的莖、枝、葉及根(批號分別為060909、060924和061117，分別稱為第一批、第二批及第三批各部位)，批號為061226的樹上枯葉、樹下濕葉和樹下干葉，均采自陜西省寶雞地區(qū)的秦嶺山脈，經(jīng)西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院的郭增軍教授鑒定為漆樹科黃櫨屬黃櫨的各部位，其中第一、二批葉子為綠色，第三批藥材葉子為紅色。以上各部位水提液的制備分別取各部分30g，加蒸餾水適量，浸泡，用電熱套加熱提取三次，每次1h，合并提取液，減壓濃縮至60mL，放冷，加95％乙醇使其含醇量達80％，靜置過夜，過濾，減壓回收乙醇后至總體積為30mL，得各自水溶液濃度為1mg/mL，備用。
1.3.2.2 黃櫨醇提物、過柱物制備 莖枝(061117)利用黃櫨莖枝正交實驗結(jié)果，進行黃櫨莖枝有效成分提取，即將黃櫨莖枝用70％乙醇，12倍量，pH為9，1h/次，提取兩次，得黃櫨莖枝醇提液，減壓濃縮后，水浴蒸干，得浸膏。取適量浸膏溶于稀乙醇中，上大孔樹脂后，用15BV0(柱體積)95％乙醇洗脫，將洗脫液減壓濃縮，水浴干燥濃縮液得95％乙醇柱洗脫物。臨用前取前者適量浸膏，用蒸餾水溶解到所需濃度，取后者適量浸膏，用1.0％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液配制到所需濃度。
葉(061117)利用黃櫨葉正交實驗結(jié)果，進行黃櫨葉有效成分提取，即將黃櫨葉用70％乙醇，20倍量，pH為5，2h/次，提取兩次，合并濾液即得黃櫨葉醇提液，減壓濃縮后，水浴蒸干，得70％乙醇提浸膏，臨用前取適量浸膏，用蒸餾水溶解到所需濃度。黃櫨葉水提浸膏制備過程是葉粗粉，加12倍量水，水浴回流提取2次，每次1.5h，合并濾液即得黃櫨葉水提液，減壓濃縮后，水浴蒸干，得其水提浸膏，臨用前取適量浸膏，用蒸餾水溶解到所需濃度。
1.4 試驗方法 1.4.1 總黃酮含量測定 1.4.1.1 漆黃素標準曲線的制備[4] 稱干燥至恒重的漆黃素對照品0.0012g，用分析純95％乙醇溶解并定容至100mL，分別從中取出5mL，4mL，3mL，2mL，1mL，0mL置5mL量瓶中，用95％乙醇稀釋并定容后，在λ＝367±1nm處測定其吸收度，繪制標準曲線得回歸方程。
1.4.1.2 黃櫨各部位水提液中總黃酮含量測定 分別取黃櫨1mg/mL的各部位水提醇沉液5mL，分別置蒸發(fā)皿中，水浴揮至近干，用少量95％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，繼續(xù)用95％乙醇稀釋并定容后，在λ＝367±1nm處測定其吸收度，計算測定液中總黃酮的含量，進而計算黃櫨各藥用部位中總黃酮的含量， 并列表比較。
1.4.1.3 加樣回收試驗 取批號為061117的黃櫨莖水提液0.1mL置5mL容量瓶中，再加入濃度為0.464mg/mL漆黃素的95％乙醇溶液0.06mL，混勻，用95％乙醇定容至5mL，在λ＝367±1nm處測定其吸收度，測定回收率。
1.4.2 犬體外抗凝血和溶栓試驗[5] 1.4.2.1 抗凝血實驗犬，用鹽酸氯胺酮及苯巴比妥鈉肌肉注射麻醉后，手術(shù)，頸總動脈插管取血。取12支滅菌小試管，分別加入0.3mL 0.9％ NaCl溶液；0.3mL 5.556U/mL的肝素鈉溶液；0.3mL黃櫨第二批及第三批莖、枝、葉和根的大劑量組溶液(1mg/mL)、槲皮素大劑量組溶液(0.01mg/mL)以及漆黃素大劑量組溶液(0.01mg/mL)。然后再在每管各加0.7mL血液，上下顛倒混勻，置37℃恒溫水浴，每30min觀察，記錄，拍照。4h后，輕輕振搖各試管，取上部血水涂片，顯微鏡下觀察紅細胞形態(tài)并拍照。其他實驗條件不變，進一步觀察中、小劑量的黃櫨各部分溶液(0.5mg/mL、0.25mg/mL)、槲皮素和漆黃素(0.005mg/mL、0.0025mg/mL)溶液對犬體外凝血時間的影響。以上各溶液臨用前用pH為7.4的PBS調(diào)節(jié)其pH為7。
1.4.2.2 血栓溶解實驗犬頸總動脈取血。取12支滅菌小試管，在每管各加1mL血液，待血液凝固后，分別加入1mL 0.9％ NaCl；1mL 5.556U/mL的肝素鈉溶液；各1mL黃櫨第二批及第三批莖、枝、葉和根的大劑量組溶液(1mg/mL)、槲皮素大劑量組溶液(0.01mg/mL)以及漆黃素大劑量組溶液(0.01mg/mL)。然后再上下顛倒1次混勻，置37℃恒溫水浴，每隔10min，上下顛倒三次每支試管，以促進各溶液進入血栓內(nèi)部反應(yīng)，每30min觀察，記錄，拍照。4h后，取出血栓，濾紙吸干余血后稱濕重，同時，取撈出血栓后的液體涂片，在顯微鏡下，觀察血細胞釋放情況及形態(tài)，并拍照。其他實驗條件不變，進一步觀察中、小劑量黃櫨各部分溶液(0.5mg/mL、0.25mg/mL)、槲皮素和漆黃素(0.005mg/mL、0.0025mg/mL)溶液對已成型血栓的影響。
1.4.2.3 血栓溶解率實驗犬頸總動脈取血。制備實驗性血栓，將血栓切割成大小大致相等的小塊，每塊重約0.4g，取6塊，依次加入已放有0.6mL的0.9％的NaCl溶液；0.6mL的5.556U/mL的肝素鈉溶液；各0.6mL黃櫨第二批及第三批莖、枝、葉和根的大劑量組溶液(2mg/mL)、槲皮素大劑量組溶液(0.02mg/mL)以及漆黃素大劑量組溶液(0.02mg/mL)的12支潔凈滅菌試管。然后置置37℃恒溫水浴，2h后取出所有試管，小心取出血栓，并用濾紙條輕輕吸干血栓表面水分后，依次稱重，計算血栓溶解率。其他實驗條件不變，進一步觀察中、小劑量的黃櫨各部分溶液(1.0mg/mL、0.5mg/mL)、槲皮素和漆黃素(0.01mg/mL、0.005mg/mL)溶液對犬體外已成型血栓溶解率的影響。
溶解率＝(W-G)/W×100％ W實驗前血栓重量 G實驗后血栓重量 1.4.3 小鼠體內(nèi)抗凝血試驗 1.4.3.1 37℃恒溫水浴法 ICR小鼠，體重18～22g，♀、♂各半，按體重分層，隨機分組對照組給生理鹽水0.18g/kg，阿司匹林組0.1g/kg，黃櫨莖枝(061117)70％乙醇提取物、醇提殘渣的水提物、95％乙醇柱洗脫物、水提物以及黃櫨葉70％乙醇提取物和其水提物大劑量組(2.8g/kg)，槲皮素和漆黃素大劑量組(0.0224g/kg)，各組灌胃0.4ml/20g。參照文獻[5]，禁食12～16h后，各組分別灌胃同體積的生理鹽水，阿司匹林1％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)混懸液，黃櫨各大劑量組溶液。灌胃后57～59分鐘，將小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，灌胃后60min，在距離尾尖1.5mm處剪斷，并將尾尖浸入37℃±0.5℃的生理鹽水中(用小燒杯裝生理鹽水后，放于水浴鍋中)，記錄剪斷尾尖至停止出血的時間間隔，即為出血時間。其他實驗條件不變，進一步觀察并記錄黃櫨各部分小劑量組(0.7g/kg)溶液、槲皮素和漆黃素小劑量組(0.0056g/kg)溶液的出血時間。
1.4.3.2 冰水浴法 基本操作同恒溫水浴法，不同之處是，給藥前，進行了小鼠出血時間篩選，如果給藥前出血時間大于10min的小鼠，則淘汰掉；同時試驗是在冰水浴中進行。利用冰水浴法對陰性對照組生理鹽水0.18g/kg，陽性對照組阿司匹林0.1g/kg，黃櫨莖枝(061117)70％乙醇提取物、95％乙醇柱洗脫物、水提物、黃櫨葉水提物大劑量組(2.8g/kg)及小劑量組(0.7g/kg)，漆黃素大劑量組(0.0224g/kg)、小劑量組(0.0056g/kg)的出血時間進行測定。
2 結(jié)果與結(jié)論 2.1 總黃酮含量測定 2.1.1 漆黃素標準曲線的制備 2.1.1.1 在λ＝367±1nm處測定漆黃素對照品各濃度的吸收度，得標準曲線回歸方程為Y＝0.1303X+0.028，R2＝0.9991(n＝6)，當(dāng)漆黃素濃度在3～12微克/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.1.2 黃櫨各部位水提液中總黃酮含量測定 三批黃櫨莖、枝、葉、根以及批號為061226的黃櫨樹上枯葉、樹下濕葉和樹下干葉各自所含總黃酮含量測定結(jié)果見表1、

圖1與表2。表1可見，第一、第二批藥材的枝、葉和根中總黃酮與各自莖相比，有顯著差異(p<0.01)；第三批藥材的枝、葉和根中總黃酮與其莖相比，有差異(p<0.05)；圖1可見，隨著季節(jié)增加，黃櫨根、枝、莖和葉中總黃酮含量呈上升趨勢，其中以葉中總黃酮含量為最高；表2可見，第三批葉中總黃酮與樹上枯葉、樹下干葉及樹下濕葉相比，有顯著性差異(p<0.01)，樹下干葉和樹下濕葉中總黃酮含量與樹上枯葉中的總黃酮相比，有顯著性差異(p<0.01)。結(jié)論若以總黃酮含量為依據(jù)，黃櫨的入藥部位，為葉，其采收季節(jié)為十一月份葉變紅色為佳。
表1 黃櫨不同批次原藥材各部位中總黃酮含量測定(n＝5)
注“＊”表示與莖總黃酮含量比較，有差異(p<0.05)；“＊＊”表示與莖總黃酮含量比較，有顯著性差異(p<0.01)。
表2 黃櫨樹上枯葉、樹下干葉與樹下濕葉中總黃酮含量測定(n＝5)
注“＊＊”表示與樹上枯葉中總黃酮含量比較，有顯著性差異(p<0.01)；“ΔΔ”表示與第三批葉中總黃酮含量比較，有顯著性差異(p<0.01)。
2.1.1.3 加樣回收試驗結(jié)果見表3。結(jié)果可見該方法可行。
表3 黃櫨莖的加樣回收試驗(n＝5)
2.2 犬體外抗凝血和溶栓試驗 抗凝血試驗以生理鹽水(0.9％NaCl)為陰性對照，以肝素鈉為陽性對照，用黃櫨各進行抗凝血實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組開始形成血栓后，在37℃恒溫孵育，隨著水分滲出血栓逐漸萎縮，但最終都有血栓存在，生理鹽水組形成的血栓最大，肝素鈉陽性對照組形成的血栓最小有的幾乎沒有，黃櫨各給藥組及槲皮素和漆黃素組，形成的血栓大小介于生理鹽水組和肝素鈉組之間(見圖2、圖4)；黃櫨各給藥組的大、中劑量組的凝血時間與生理鹽水組相比較均有顯著性差異(p<0.01)，黃櫨各批各部位之間的血栓形成時間沒有顯著性差異(p>0.05)(見表1)。實驗結(jié)果表明，黃櫨各部位提取物具有明顯的抗凝血作用。
表1 黃櫨各部位提取物、槲皮素及漆黃素對犬體外凝血時間、血栓形成的影響(±s)

注與生理鹽水組比較，**P<0.01，*P<0.05。
4h后，輕輕振搖各試管，取上部血水涂片，顯微鏡下觀察紅細胞形態(tài)并拍照觀察發(fā)現(xiàn)陰性對照組細胞多以泯錢狀排列，成塊狀；肝素鈉組紅細胞較多，細胞形態(tài)良好，基本散在，為雙面凹的圓盤形；黃櫨的各批各部位組的紅細胞形態(tài)圓整、散在，其中根部分的紅細胞數(shù)目較少；槲皮素和漆黃素組的紅細胞形態(tài)也圓整、散在，其中漆黃素組的細胞數(shù)目明顯多于槲皮素組。結(jié)果表明，黃櫨各部位均有顯著的抗凝血活性，抗凝血有效成分是其所含總黃酮中的兩種主要成分—漆黃素和槲皮素。
A生理鹽水；B肝素鈉；C-F分別為黃櫨(060924)的莖、枝、葉和根中劑量(0.5mg/mL)；G-J分別為黃櫨(061117)莖、枝、葉和根中劑量(0.5mg/mL)；K、L分別為槲皮素和漆黃素中劑量組(5μg/mL)。
2.2 黃櫨的血栓溶解 以生理鹽水(0.9％NaCl)為陰性對照，肝素鈉為陽性對照，用黃櫨各部位進行犬血栓溶解實驗，37℃恒溫孵育2h發(fā)現(xiàn)陰性對照組試管中的血栓較大，頂部平坦；陽性對照組的血栓細小，不易分辨頂部，上清液中含有較多從血栓中溶解釋放出來的紅細胞；黃櫨各部位以及槲皮素、漆黃素中血栓塊大小介于陰性、陽性組之間，且上清液部分顏色較深，有較多紅細胞，各組血栓頂部基本有斜削現(xiàn)象，即溶解現(xiàn)象，且頂部面積小于陰性對照組。結(jié)果表明，黃櫨各部位提取物、槲皮素和漆黃素有溶栓作用。
3h后，取出血栓，濾紙吸干余血后稱濕重，同時，取撈出血栓后的液體涂片，在顯微鏡下，觀察血細胞釋放情況及形態(tài)，發(fā)現(xiàn)(1)犬1mL血液在體外凝固后與各給藥組作用后，血栓基本變小，黃櫨各部位、槲皮素的大、中劑量組以及漆黃素的大劑量組對已成型血栓的溶解作用與生理鹽水組相比較均有顯著性差異(p<0.01)，漆黃素的中劑量組與生理鹽水組溶栓效果有差異(p<0.05)，紅葉黃櫨和綠葉黃櫨各部位分別比較，其溶栓效果沒有顯著性差異(p>0.05)(見表1)；(2)血液涂片中，陰性實驗組紅細胞數(shù)目少，形態(tài)好；陽性對照組細胞最多，形態(tài)正常；實驗組中第二批藥材根部提取物溶栓后紅細胞數(shù)量與陰性組相當(dāng)，其它各組細胞明顯多于陰性組(見圖8A-L)。結(jié)果表明，黃櫨各部位提取物、漆黃素和槲皮素有溶栓作用，槲皮素和漆黃素可能是黃櫨溶栓的有效成分。
2.3 以犬新鮮血栓為材料，與各組藥物在37℃恒溫條件下，作用2h后計算血栓溶解率(見表2)。結(jié)果可見生理鹽水對血栓有溶解作用；肝素鈉、黃櫨各部位提取物、槲皮素以及漆黃素大、中劑量組與陰性對照組相比較，對血栓有顯著的溶解作用(p<0.01)；黃櫨根部提取物小劑量組與陰性對照組比較，其對血栓的溶解率沒有差異(p<0.05)；黃櫨各部位之間以及紅葉黃櫨和綠葉黃櫨之間的血栓溶解率沒有差異(p<0.05)。結(jié)果表明黃櫨有溶解血栓的作用；紅葉黃櫨與黃葉黃櫨各部位的溶栓效果沒有差異；槲皮素和漆黃素也有溶血栓效果，它們是黃櫨溶血栓的有效成分。
表2 黃櫨各部位、槲皮素及漆黃素對犬已成型血栓溶解率的影響(％，±s)

注與生理鹽水組比較，**P<0.01，*P<0.05。
2.4 小鼠體內(nèi)抗凝血試驗 2.4.1 37℃恒溫水浴法阿司匹林組小鼠的出血時間與生理鹽水組相比較，有顯著差異性(p<0.01)；黃櫨莖枝70％乙醇提取物的大、小劑量組，黃櫨莖枝水提取物大劑量組，以及漆黃素大劑量組小鼠的出血時間與生理鹽水組相比較，有差異(p<0.05)，而且此四個劑量組對小鼠的出血時間與阿司匹林組相比較，沒有差異(p>0.05)。結(jié)果表明黃櫨莖枝70％乙醇提取物及其水提物、漆黃素均有抗凝血作用，且其抗凝血效果與0.1g/kg的阿司匹林相當(dāng)。
表3 黃櫨有關(guān)提取物、槲皮素及漆黃素對小鼠出血時間的影響(±s)

注與生理鹽水組比較，“**”表示P<0.01，“*”表示P<0.05；與阿司匹林組比較，“ΔΔ”表示P<0.01，“Δ”表示P<0.05。
2.4.2 冰水浴法由于在使用37℃恒溫水浴法測定小鼠出血時間的過程中，發(fā)現(xiàn)小鼠的個體差異性很大，差異性愈大，引起小鼠出血時間的差異性增大，故設(shè)計使用冰水浴法對37℃恒溫水浴法中所得出血時間大于7min的劑量組對小鼠出血時間的影響進行再次確認。結(jié)果可見黃櫨莖枝70％乙醇提取物、黃櫨莖枝95％乙醇柱洗脫物以及漆黃素大劑量組的抗凝血效果與生理鹽水組有差異(p<0.05)；除過黃櫨莖枝70％乙醇提取物、黃櫨莖枝水提物、漆黃素各自的小劑量組外，其余各樣品劑量組對小鼠出血時間的影響與阿司匹林組相比，均沒有差異性(p>0.05)。結(jié)果表明黃櫨莖枝70％乙醇提取物溶液上柱后所得的95％乙醇洗脫部分(總黃酮)，具有抗凝血效果，抗凝血效果與0.1g/kg的阿司匹林相當(dāng)，其抗凝血活性成分是其中所含的漆黃素。
表4 黃櫨有關(guān)提取物、槲皮素及漆黃素對小鼠出血時間的影響(±s)

實施例二 1 方法 小鼠耐缺氧實驗[11]取ICR小鼠80只，雌雄各半，按體重隨機分成8組，每組10只。分別為(1)、正常組(灌胃蒸餾水)；(2)、普萘洛爾組(0.0135g/kg)；(3)、黃櫨大、中、小劑量組(20.0g/kg、10.0g/kg、5.0g/kg)；(4)、復(fù)方黃櫨大、中、小劑量組(20.0g/kg、10.0g/kg、5.0g/kg)。灌喂給藥，灌胃體積10mL/kg，1h后，將小鼠分別放入裝有7.5g碳酸鈉的125mL具塞廣口瓶內(nèi)，凡士林涂抹瓶口，密封，計時，觀察并記錄小鼠至缺氧窒息死亡的時間。做完一輪后順時針交換瓶子。
2 結(jié)果及結(jié)論 黃櫨對小鼠耐缺氧的影響見表1。表1可見，與陰性對照組比較，黃櫨有效部位大劑量組有非常顯著的耐缺氧作用(P<0.001)，中劑量組有顯著耐缺氧作用(P<0.05)，低劑量組沒有耐缺氧作用(P>0.05)。
表1 黃櫨對小鼠缺氧存活時間的影響(x±s)
注與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。
黃櫨有耐缺氧作用，且在大、中劑量時，其作用與0.0135g/kg普萘洛爾相當(dāng)。
3 討論 黃櫨能提高小鼠常壓耐缺氧能力，與陰性對照組比較，可非常顯著地延長缺氧小鼠存活時間(P<0.001)，有耐缺氧作用。
權(quán)利要求
1、黃櫨有效部位的新用途，其特征是采收黃櫨葉、莖、枝和根提取總黃酮作為提高機體耐缺氧作用和作為溶解血栓作用的藥物。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃櫨有效部位新用途，其特征是作為預(yù)防及治療冠心病、心絞痛和心肌梗塞的藥物。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃櫨有效部位的新用途，其特征是作為預(yù)防和治療腦血栓及血栓栓塞性疾病的藥物。
4、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任意一項所述的黃櫨有效部位的新用途，其特征是所述的黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為藥用成分。
5、提高機體耐缺氧作用的藥物制劑，其特征是含有黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分。
6、具有溶解血栓作用的藥物制劑，其特征是含有黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分。
7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的提高機體耐缺氧作用的藥物制劑，其特征是以黃櫨有效部位總黃酮中分離出漆黃素和槲皮素作為有效成分，添加藥學(xué)上可以接受的載體或輔助性成分制備而成。
8、根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有溶解血栓作用的藥物制劑，其特征是以黃櫨有效部位總黃酮中分離出槲皮素和漆黃素作為有效成分，添加藥學(xué)上可以接受的載體或輔助性成分制備而成。
9、根據(jù)權(quán)利要求7所述的提高機體耐缺氧作用的藥物制劑，其特征是作為預(yù)防及治療冠心病、心絞痛和心肌梗塞的藥物。
10、根據(jù)權(quán)利要求5-9任意一項所述的藥物制劑，其特征是所述的藥物制劑是膠囊劑、顆粒劑、片劑、散劑、注射劑、口服液和新劑型中任何一種。
全文摘要
本發(fā)明任務(wù)之一是確定黃櫨藥用的有效部位，并提供該有效部位的藥效學(xué)用途及各種制劑。黃櫨有效部位的新用途，其是采收黃櫨葉、莖、枝和根提取總黃酮作為提高動物機體耐缺氧作用或溶解血栓等作用的藥物。本發(fā)明優(yōu)點是確定了黃櫨的有效部位，并分離出有效成分作為藥用，明顯提高了治療效果，通過實驗證明，本發(fā)明制劑可以顯著提高動物耐缺氧能力，效果與西藥抗心絞痛藥普萘洛爾相當(dāng)，避免了西藥的毒副作用，并具有活血化淤，降低全血粘度的功效，用于預(yù)防和治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞及淤血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或胸痛。同時，本發(fā)明制劑還具有體外抗凝血和溶血栓的功效。
文檔編號A61K36/185GK101474220SQ20091002104
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月24日
發(fā)明者崔恩賢, 龍麗輝, 欣 李, 常永孝, 李天生, 張潔群 申請人:崔恩賢