專利名稱：：一種抗輻射藥物的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種抗輻射藥物的分離純化方法。
背景技術(shù)：
：超濾技術(shù)是20世紀(jì)70代末80年代初發(fā)展起來的一種新興的應(yīng)用技術(shù)，它主要利用一種多孔的半透膜，憑借一定的壓力，對(duì)液體進(jìn)行分離，迫使小分子的物質(zhì)通過，大分子物質(zhì)被截留，從而達(dá)到分離、提純、濃縮的目的。超濾膜的孔徑規(guī)格一般以分子量截留值為指標(biāo)，而不是以孔徑尺寸為指標(biāo)，故不同于一般傳統(tǒng)的微孔濾材。超濾技術(shù)在醫(yī)藥工業(yè)中多用于制備藥用純水、注射劑除熱原及生物制劑的濃縮、分離等。在中藥液體制劑中，超馮技術(shù)在中藥制劑中的應(yīng)用逐漸增多。水提醇沉、醇提水沉等傳統(tǒng)除雜工藝，雖然基本上可以滿足去除雜質(zhì)、保留有效成嬈及制劑成型等要求，但大量研究及實(shí)踐證明此工藝依然存在不少問題首先是有效成分的損失，中藥中的部分有效成分本來含量就很低，再紼過水口醇沉、酸提水沉等除雜工藝這些成分可能全部被沉淀而除去；另外，由于雜質(zhì)沉淀時(shí)的吸附和包埋等因素，也造成了有效成分較大的損失。其次，除雜效果不理想。中藥提取液中的鞣質(zhì)、淀粉、樹脂和蛋白等，傳統(tǒng)的水醇法不易除盡，因而固體收率依然很高，不僅給患者帶來服用時(shí)的不便和痛苦，同時(shí)也使中藥制劑容易吸潮變質(zhì)，而且制劑口感較差。1.超濾技術(shù)應(yīng)用于中藥液體制劑具有以下優(yōu)點(diǎn)①超濾時(shí)無相變，有利于保存中藥的生理活性及理化穩(wěn)定性，且超濾技術(shù)的應(yīng)用會(huì)盡量多地保留方劑中多種有效成分，肽保持中藥方劑配伍的特點(diǎn)；②由于不耗用有改溶劑，與傳統(tǒng)方法相比，超濾可減少工序，縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本，且整個(gè)工藝可連續(xù)進(jìn)行，利于大規(guī)模生產(chǎn)；③提高中藥制劑的質(zhì)量。高相對(duì)分子質(zhì)量非藥效成分或低藥效成分的存在，降低了中藥有效部位的濃度，加大了服用劑量，同時(shí)使中藥口感差，易吸潮變質(zhì)，難以保存。由于超濾能最大限度地除去高相對(duì)分子質(zhì)量非藥效成分或低藥效成分，故可以降低服用劑量、改善制劑的口感和成品性質(zhì)，從而提高制劑質(zhì)量。2超濾技術(shù)應(yīng)用于中藥液體制劑的依據(jù)中藥的化學(xué)成分十分復(fù)雜，通常含有生物堿、氨基酸、有機(jī)酸、酚類、皂苷、留體、萜類化合物以及蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)、鞣質(zhì)、糖類、淀粉、纖維素、無機(jī)鹽等。其相對(duì)分子質(zhì)量的分布很寬，為幾十至幾百萬道爾頓。其中，高相對(duì)分子質(zhì)量的物質(zhì)主要是膠體和纖維素等非藥用成分或藥用成分較差的成分，而中藥有效成分如生物堿、黃酮類、苷類等的相對(duì)分子質(zhì)量較小，一般都在1000以下。由此可見，藥的有效成分非藥用成分的相對(duì)分子質(zhì)量差別弈大，故選用適宜分子量載留值的濾膜，可選擇性地去除雜質(zhì)，保留有效成分。
發(fā)明內(nèi)容鑒于上述，本發(fā)明的目的旨在提供一種抗輻射藥物的分離純化方法。本方法將超濾技術(shù)運(yùn)用到當(dāng)歸紅芪分離純化過程中，最大限度地除去高相對(duì)分子質(zhì)量非藥效成分或低3藥效成分，可以降低服用劑量、改善制劑的口感和成品性質(zhì)，從而提高制劑質(zhì)量。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種抗輻射藥物的分離純化方法，其步驟是取當(dāng)歸紅芪飲片按重量15比例加水煎煮二次，第一次加當(dāng)歸和紅芪飲片重量6倍量水煎煮2h，第二次加當(dāng)歸和紅芪飲片重量4倍量水煎煮lh，合并兩次煎液靜置過夜，200目篩過濾，得濾液；濾液再經(jīng)超濾膜超濾，超濾壓力<0.4Mpa，溫度<40°C，超濾液經(jīng)噴霧干燥，制成干粉。上述的超濾膜為10-2萬分子量超濾膜膜為聚醚砜(PES)，10萬分子量膜孔徑為0.05um,5萬分子量超濾膜孔徑為0.25um,2萬分子量超濾膜孔徑為0.01ym。當(dāng)歸、紅芪超濾膜提取物理化性質(zhì)1.本品為淡黃色粉末，易溶于水，不溶于乙醇，甲醇。易吸潮，PH值5-6。本品水溶液在365nm紫外燈下顯紫色。2.本品水溶液加入10%的a-萘酚乙醇溶液3滴，搖勻后將試管傾斜，沿試管壁加入濃硫酸出現(xiàn)紫紅色環(huán)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1.超濾提取技術(shù)沒有改變藥液中的主要化學(xué)成分，能夠有效地除去鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，相對(duì)水提法能夠提高中藥中有效成分的含量。對(duì)當(dāng)歸紅芪水提物用10萬、5萬、2萬分子量膜濾物，用高效液相色譜的方法，進(jìn)行梯度洗脫，由圖2可見，當(dāng)歸紅芪水提物、超濾物色譜圖比較一致，說明使用超濾提取技術(shù)沒有改變藥液中的主要化學(xué)成分。2.10萬分子量的超濾物中中藥有效成分的含量高于5萬和2萬分子量的超濾物。3.本發(fā)明制備的干粉通過對(duì)當(dāng)歸紅芪中芒柄花素含量和多糖含量的測(cè)定，表明抗輻射效果好。4.本法與水提醇沉相比工藝流程短、能有效除去雜質(zhì)，能夠減少藥物服用量。圖1是本發(fā)明工藝流程圖。圖2為當(dāng)歸紅芪水提物、10萬分子量超濾物、5萬分子量超濾物，2萬分子量超濾物液相色譜圖比較。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明再作進(jìn)一步的說明實(shí)施例1本發(fā)明采用的中藥材來自甘肅省岷縣，當(dāng)歸購自岷縣生產(chǎn)基地、黃芪、紅芪均購自岷縣藥材站。取當(dāng)歸紅芪飲片按重量15的比例加水煎煮二次，第一次加當(dāng)歸和紅芪飲片重量6倍量水煎煮2h，第二次加當(dāng)歸和紅芪飲片復(fù)生重量4倍量水煎煮lh，合并兩次煎液靜置過夜，200目篩過濾，得濾液；濾液再經(jīng)小試平板超濾試驗(yàn)機(jī)超濾膜超濾(小試平板超濾試驗(yàn)機(jī)型號(hào)FLWMEM0250，膜板數(shù)量6塊，膜組件規(guī)格380X240X230(mm)，膜有效過濾面積為025m2)，超濾條件為壓力小于等于0.4Mpa，溫度小于等于40°C，過濾液經(jīng)膜孔徑為0.05um的10萬分子量超濾膜(截留分子量為10萬)超濾，得超濾液。超濾液用噴霧干燥儀(型號(hào):BUCHIMiniSprayDryerB-290)噴霧干燥，制成干粉。實(shí)施例2當(dāng)歸紅芪提取液噴干粉防輻射的主要有效成分的測(cè)定文獻(xiàn)(趙紅，黃黎明.抗輻射中藥的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]實(shí)用藥物與臨床.2008，(11)4238-240)報(bào)道中藥中多糖與黃酮類成分有抗輻射的作用，本發(fā)明分別用膜孔徑為0.05um的10萬分子量膜膜超濾制備干粉、膜孔徑為0.025ym的5萬分子量膜膜超濾制備干粉、超濾液噴干粉、膜孔徑為0.01i!m的2萬分子量膜膜超濾制備干粉分別對(duì)當(dāng)歸和紅芪飲片中的活性成分芒柄花素(7-羥基-4'-甲氧基異黃酮)和多糖進(jìn)行含量測(cè)定，并建立了水提物及超濾物譜圖(見圖2)，并且比較了當(dāng)歸紅芪運(yùn)用水提法和超濾技術(shù)這兩種方法對(duì)藥物有效成分的影響。(一)、對(duì)具有抗輻射作用的芒柄花素進(jìn)行測(cè)定Agilent(安捷倫)1100HPLC測(cè)定芒柄花素當(dāng)歸紅芪中芒柄花素含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)試用性試驗(yàn)色譜柱幾18柱(4.6X250mm,5um)；流動(dòng)相甲醇-水(6040)；流速:lml/min；柱溫:25°C；檢測(cè)波長250nmo對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥恒重的芒柄花素對(duì)照品2.8mg,用甲醇-定容至100ml，精密量取1ml，置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.0028mg/ml的溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品噴干粉約l.Og，置10ml量瓶中，用甲醇定容至10ml超聲30分鐘，放置室溫。過濾，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45ym濾膜過濾，濾液即為供試品液。供試品含量結(jié)果，見表1表1當(dāng)歸紅芪中芒柄花素的含量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表1可得出(1)當(dāng)歸紅芪提取物中芒柄花素的含量為0.0076%，遠(yuǎn)小于10萬、5萬、2萬分子量超濾物中芒柄花素的含量；(2)當(dāng)歸紅芪超濾物中膜孔徑為0.05um(10萬分子量)超濾物中芒柄花素的含量為0.0195%，大于膜孔徑為0.025um(5萬分子量)和膜孔徑為0.01um(2萬分子量)超濾物中芒柄花素的含量。從以上可知用10萬分子量超濾膜、5萬分子量超濾膜、2萬分子量超濾膜制備當(dāng)歸紅芪噴干粉，首選10萬分子量超濾膜。紫外分光光度計(jì)(UV-2401PC)測(cè)定多糖含量(二)、當(dāng)歸紅芪中多糖的測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取105°C干燥至恒重的無水葡萄糖14mg，置100mL量瓶中，加適量水溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得(每lmL中含無水葡萄糖0.14mg)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.OmL,分別置具塞試管中，分別加水至2mL，各精密加入5%苯酚溶液lmL，搖勻，迅速精密加入硫酸6mL，搖勻，置40°C浴中10分鐘，取出，置冰水浴中5分鐘，取出，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2005版一部)。照紫外-可見分光光度法，在490nm的波長處測(cè)定吸光度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。供試品溶液的制備取本品約1.5g，精密稱定，置100mL容量瓶中溶解，加水至刻度，搖勻。精密量取2mL，加乙醇10mL，振搖，離心，取沉淀加水溶解，置25mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取2mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加5%苯酚溶液lmL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算，即得。供試品含量結(jié)果，見表2。表2當(dāng)歸紅芪中多糖含量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表2可以看出當(dāng)歸紅芪提取物多糖含量為3.0%，當(dāng)歸紅芪用10萬分子量超濾膜，當(dāng)歸紅芪噴干粉多糖含量為6.08%。多糖含量高的抗輻射效果好。由圖2可見，對(duì)當(dāng)歸紅芪水提物、10萬、5萬、2萬分子量膜濾物，用高效液相色譜的方法，進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)行比較。當(dāng)歸紅芪水提物、超濾物色譜圖比較一致，說明使用超濾提取技術(shù)并沒有改變藥液中的主要化學(xué)成分。并且從表1和表2可見，超濾提取技術(shù)能夠有效地除去鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，相對(duì)水提法能夠提高中藥中抗輻射的有效成分多糖和芒柄花素的含量。權(quán)利要求一種抗輻射藥物的分離純化方法，其步驟是取當(dāng)歸紅芪飲片按重量1∶5比例加水煎煮二次，第一次加當(dāng)歸和紅芪飲片重量6倍量水煎煮2h，第二次加當(dāng)歸和紅芪飲片重量4倍量水煎煮1h，合并兩次煎液靜置過夜，過濾煎液，得濾液；濾液再經(jīng)超濾膜超濾，超濾壓力≤0.4Mpa，溫度≤40℃，超濾液經(jīng)噴霧干燥，制成干粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種抗輻射藥物的分離純化方法，其特征是上述的超濾膜為10-2萬分子量超濾膜膜為聚醚砜(PES)，10萬分子量膜孔徑為0.05μm，5萬分子量超濾膜孔徑為0.25μm，2萬分子量超濾膜孔徑為0.01μm。全文摘要本發(fā)明涉及一種抗輻射藥物的提取方法。取當(dāng)歸紅芪飲片按重量1∶5比例加水煎煮二次，第一次加當(dāng)歸和紅芪飲片質(zhì)量6倍量水煎煮2h，第二次加當(dāng)歸和紅芪飲片質(zhì)量4倍量水煎煮1h，合并兩次煎液靜置過夜，過濾煎液，得濾液；濾液再經(jīng)超濾膜超濾，超濾壓力≤0.4MPa，溫度≤40℃，超濾液經(jīng)噴霧干燥，制成干粉。本發(fā)明制備的干粉通過對(duì)當(dāng)歸紅芪中芒柄花素含量和多糖含量的測(cè)定，表明當(dāng)歸紅芪提取液噴干粉抗輻射效果好，該方法為開發(fā)出的一種適合廣大受輻射損害人群使用的抗輻射藥物提供物質(zhì)條件。文檔編號(hào)A61K36/48GK101822710SQ20091002150公開日2010年9月8日申請(qǐng)日期2009年3月6日優(yōu)先權(quán)日2009年3月6日發(fā)明者李應(yīng)東申請(qǐng)人:甘肅中醫(yī)學(xué)院