專利名稱：磁性脂質體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種脂質體，特別是磁性脂質體。還涉及磁性脂質體的制備方法。
背景技術：
文獻l"公開號為CN100998563"的中國發(fā)明專利公開了一種載藥磁性脂質體的制備方法， 首先將多柔比星藥物溶解于制備好的磁液里形成多柔比星磁液，將L-a-磷脂酰乙醇胺、膽固 醇、L-a-磷脂酰膽堿按7:2:1的重量比制得脂質體薄膜，再將多柔比星磁液加入形成脂質 體薄膜的茄形瓶里，在室溫下進行旋渦振蕩30min直至薄膜脫落完全，將初液倒入試管內進 行超聲粉碎間斷脈沖20min，靜置12小時形成磁性多柔比星脂質體。
文獻2"公開號為CN1559439"的中國發(fā)明專利公開了一種載藥磁性脂質體的制備方法， 首先采用薄膜旋轉蒸發(fā)器在茄形瓶內壁形成一均勻的脂質體薄膜，制備砒霜與錳鋅鐵氧體磁 性納米粒子的混懸液，將此混懸液加到上述含薄膜的茄形瓶中，40±5°(3恒溫震蕩至薄膜脫落， 反復凍融及超聲處理3次制得納米砒霜磁性脂質體。
文獻3"M. M. Elmi, M. N. Sarbolouki. A simple method for preparation of immunomagnetic liposomes. Int. J. Pharm. 2001, 215(1~2): 45-50"公開一種逆向蒸發(fā)法制備磁性脂質體的方法， 其工藝流程為將脂質混合物溶于有機溶劑中，加入含有磁性粒子和藥物的緩沖液，超聲處 理使其形成穩(wěn)定乳劑，于42。C時減壓旋轉蒸發(fā)，達到膠態(tài)后，再滴加緩沖液，繼續(xù)旋轉蒸發(fā)， 得到水性溶液，除去未包封的磁性粒子和藥物，得到磁性脂質體。
以上文獻所公開的磁性脂質體結構如圖2所示，脂質體3將磁性微粒2和藥物1一同包 裹在其內部，這種結構存在一些局限性。第一，磁含量不高、磁響應性低。由于脂質體，特 別是小單室脂質體(SUV)的磷脂雙層的內部空間有限，導致僅有較少量的磁性微粒可以包 在脂質體內部；并且磁性微粒密度較大、易沉降，在脂質體水合形成囊泡的同時，難以均勻 包覆其中。第二，藥物的包載量低。由于脂質體內部空間有限，當磁性微粒占據(jù)其中時，導 致藥物的包載量下降。

發(fā)明內容
為了克服現(xiàn)有技術方法制備的脂質體磁含量低、藥物的包載量低的不足，本發(fā)明提供一 種磁性脂質體，脂質體內包載藥物，磁性微粒沉積在脂質體表面，可以在提高藥物的包載量 的同時，提高磁含量。本發(fā)明還提供這種磁性脂質體的制備方法。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案 一種磁性脂質體，包括藥物、脂質體和磁 性微粒，其特點是所述脂質體內部是藥物，脂質體表面是磁性微粒。一種上述磁性脂質體的制備方法，其特點是包括下述步驟
(a) 分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于體積比甲醇氯仿=1:2混合溶劑中，分別得到 0.1g/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將蛋黃卵磷脂溶液和膽固醇溶液在茄形 瓶中以2:1 2.5:1的摩爾比進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜；
(b) 將pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液加入到已形成脂質體薄膜的茄形瓶中，蛋黃卵磷脂 溶液和膽固醇溶液的總體積與磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1:4 1:10，使用旋渦混合器旋混 20 40min，使用高速分散均質機分散5-10min，充分水合以后離心水洗2 3次，得到表面帶 有負電的脂質體；
(c) 將步驟(b)得到的表面帶有負電性的脂質體分散在濃度為0.8~1.2mg/(ml 0.5MNaCl) 的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，脂質體與聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液的質量比為 1:60" : 100，靜置吸附20~40min后離心水洗；
(d) 將步驟(c)得到的脂質體分散在濃度為0.3 0.6mg/(ml0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸 鈉水溶液中，脂質體與聚苯乙烯磺酸鈉水溶液的質量比為1:60一100，靜置吸附20~40min 后離心水洗；
(e) 將歩驟(d)得到的脂質體分散在濃度為0.8~1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基 二甲基氯化銨水溶液中，脂質體與聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液的質量比為1:60 1:100， 靜置吸附20~40min后離心水洗；
(f) 將質量百分濃度2%、帶有負電的Fe3CU納米微粒磁流體稀液慢慢加入步驟(e)得 到的脂質體中，脂質體與磁流體稀液的質量比為1:0.8 1:2.5，靜置吸附2(K40min后進行分 離，得到磁性脂質體。
本發(fā)明的有益效果是由于脂質體內包載藥物，磁性微粒沉積在脂質體表面，脂質體內 部空間的有限空間全部包載藥物，提高了藥物的包載量，同時提高了磁含量。
下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作詳細說明。


圖1是本發(fā)明磁性脂質體的結構示意圖。 圖2是現(xiàn)有技術磁性脂質體的結構示意圖。 圖3是本發(fā)明磁性脂質體的TEM照片。
具體實施例方式
參照圖l、圖3，本發(fā)明的磁性脂質體的結構是，脂質體3內部是藥物1，脂質體3表面是 磁性微粒2。從磁性脂質體的TEM照片可以清楚地看到脂質體內部的藥物以及表面的磁性微粒。 實施例1:分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于甲醇-氯仿混合有機溶劑(1:2， v/v)中，得到O.lg/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將lOmL蛋黃卵磷脂溶液和2.5mL 膽固醇溶液在茄形瓶中進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜。將50mL磷酸鹽緩沖溶液(pH， 7.4)加入形成脂質體薄膜的茄形瓶中，使用旋渦混合器旋混20min，使用高速分散均質機分 散5min，充分水合以后離心水洗2次，得到表面帶有負電的脂質體。將上述表面帶有負電的 脂質體lg分散在60mL濃度為0.8mg/(ml 0.5MNaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中， 靜置吸附20min后離心水洗；再分散在60mL濃度為0.5mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺酸鈉 水溶液中，靜置吸附20min后離心水洗；再分散在60mL濃度為0.8mg/(ml 0.5MNaCl)的聚 二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，靜置吸附20min后離心水洗。將lg濃度為2。/。的磁流體稀 液慢慢加入上述脂質體中，靜置吸附20min后進行分離，得到磁性脂質體。
實施例2:分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于甲醇-氯仿混合有機溶劑(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將10mL蛋黃卵磷脂溶液和2mL 膽固醇溶液在茄形瓶中進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜。將60mL磷酸鹽緩沖溶液(pH， 7.4)加入形成脂質體薄膜的茄形瓶中，使用旋渦混合器旋混30min，使用高速分散均質機分 散6min，充分水合以后離心水洗3次，得到表面帶有負電的脂質體。將上述表面帶有負電的 脂質體lg分散在70mL濃度為lmg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中， 靜置吸附20min后離心水洗；再分散在70mL濃度為0.4mg/(ml 0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸鈉 水溶液中，靜置吸附20min后離心水洗；再分散在70mL濃度為lmg/(ml0.5MNaCl)的聚二 烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，靜置吸附20min后離心水洗。將1.5g濃度為2%的磁流體稀 液慢慢加入上述脂質體中，靜置吸附20min后逬行分離，得到磁性脂質體。
實施例3:分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于甲醇-氯仿混合有機溶劑(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將10mL蛋黃卵磷脂溶液和2mL 膽固醇溶液在茄形瓶中進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜。將70mL磷酸鹽緩沖溶液(pH， 7.4)加入形成脂質體薄膜的茄形瓶中，使用旋渦混合器旋混30min，使用高速分散均質機分 散8min，充分水合以后離心水洗2次，得到表面帶有負電的脂質體。將上述表面帶有負電的 脂質體lg分散在70mL濃度為1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中， 靜置吸附30min后離心水洗；再分散在70mL濃度為0.5mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺酸鈉 水溶液中，靜置吸附30min后離心水洗；再分散在70mL濃度為1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的聚 二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，靜置吸附30min后離心水洗。將1.8g濃度為2°/。的磁流體 稀液慢慢加入上述脂質體中，靜置吸附30min后進行分離，得到磁性脂質體。
實施例4:分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于甲醇-氯仿混合有機溶劑(1:2， v/v)中， 得到O.lg/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將lOmL蛋黃卵磷脂溶液和2.5mL膽固醇溶液在茄形瓶中進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜。將60mL磷酸鹽緩沖溶液(pH， 7.4)加入形成脂質體薄膜的茄形瓶中，使用旋渦混合器旋混40min，使用高速分散均質機分 散10min，充分水合以后離心水洗3次，得到表面帶有負電的脂質體。將上述表面帶有負電 的脂質體lg分散在80mL濃度為1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液 中，靜置吸附40min后離心水洗；再分散在80mL濃度為0.6mg/(ml 0.5M NaCl)的聚苯乙烯磺 酸鈉水溶液中，靜置吸附40min后離心水洗；再分散在80mL濃度為1.2mg/(ml 0.5MNaCl)的 聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，靜置吸附40min后離心水洗。將2.5g濃度為2%的磁流 體稀液慢慢加入上述脂質體中，靜置吸附40min后進行分離，得到磁性脂質體。
在制備磁性脂質體的過程中，對上述方法所涉及的各種比例范圍、濃度范圍、時間范圍 進行了多次試制，均取得了良好的效果。
權利要求
1、一種磁性脂質體，包括藥物、脂質體和磁性微粒，其特征在于所述脂質體內部是藥物，脂質體表面是磁性微粒。
2、 一種權利要求l所述磁性脂質體的制備方法，其特征在于包括下述步驟(a) 分別將蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解于體積比甲醇氯仿=1:2混合溶劑中，分別得到 0.1g/mL的蛋黃卵磷脂溶液和O.lg/mL的膽固醇溶液，將蛋黃卵磷脂溶液和膽固醇溶液在茄形 瓶中以2:1 2.5:1的摩爾比進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜；(b) 將pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液加入到已形成脂質體薄膜的茄形瓶中，蛋黃卵磷脂 溶液和膽固醇溶液的總體積與磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1:4 1:10，使用旋渦混合器旋混 20 40min，使用高速分散均質機分散5 10min，充分水合以后離心水洗2~3次，得到表面帶 有負電的脂質體；(c) 將步驟(b)得到的表面帶有負電性的脂質體分散在濃度為0.8 1.2mg/(ml0.5MNaCl) 的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液中，脂質體與聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液的質量比為 1:60~1:100，靜置吸附20 40min后離心水洗；(d) 將步驟(c)得到的脂質體分散在濃度為0.3 0.6mg/(ml0.5MNaCl)的聚苯乙烯磺酸 鈉水溶液中，脂質體與聚苯乙烯磺酸鈉水溶液的質量比為1:60 1:100，靜置吸附20 40min 后離心水洗；(e) 將步驟(d)得到的脂質體分散在濃度為0.8~1.2mg/(ml 0.5M NaCl)的聚二烯丙基 二甲基氯化銨水溶液中，脂質體與聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液的質量比為1:60 1:100， 靜置吸附20~40min后離心水洗；(f) 將質量百分濃度2%、帶有負電的Fe304納米微粒磁流體稀液慢慢加入步驟(e)得 到的脂質體中，脂質體與磁流體稀液的質量比為1:0.8 1:2.5，靜置吸附20 40min后進行分 離，得到磁性脂質體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種磁性脂質體及其制備方法，該磁性脂質體將藥物包裹在脂質體內部，磁性微粒包覆在脂質體外面。制備方法是將蛋黃卵磷脂溶液和膽固醇溶液在茄形瓶中以2∶1～2.5∶1的摩爾比進行混合，旋轉蒸發(fā)形成脂質體薄膜；再使用磷酸鹽緩沖溶液對脂質體薄膜進行充分水合得到表面帶有負電的脂質體；然后交替吸附陽離子聚電解質——聚二烯丙基二甲基氯化銨、陰離子聚電解質——聚苯乙烯磺酸鈉、陽離子聚電解質——聚二烯丙基二甲基氯化銨，最后通過電荷作用、自組裝法將表面帶負電的Fe₃O₄磁性粒子沉積到脂質體表面，得到磁性脂質體。由于脂質體內包載藥物，磁性微粒沉積在脂質體表面，脂質體內部空間的有限空間全部包載藥物，提高了藥物的包載量，同時提高了磁含量。
文檔編號A61K9/127GK101564380SQ20091002271
公開日2009年10月28日 申請日期2009年5月26日 優(yōu)先權日2009年5月26日
發(fā)明者洋 于, 盧婷利, 宏 張, 雯 趙, 濤 陳 申請人:西北工業(yè)大學