專利名稱：：復方蛹蟲草制劑及制法與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥復方制劑，具體涉及一種具有調節(jié)免疫功能和改善消化功能的復方蛹蟲草制劑及制法及應用。二
背景技術：
：近年來，因社會、環(huán)境等多因素導致的慢性結腸炎、腸激惹綜合征、萎縮性胃炎等消化道疾病發(fā)病人群逐漸增多，2008年國內腸易激惹綜合癥與炎性腸病專題會議中，知名專家研究報道，在1991年至2000年的10年間，潰瘍性結腸炎的發(fā)病率是前IO年的3.8倍。該類疾病中腸免疫系統(tǒng)介導的炎癥反應與腸上皮通透性的改變，是互相促進的過程，可以肯定兩者間的密切聯(lián)系，在炎癥性腸病腸粘膜持續(xù)慢性炎癥中起著關鍵作用。對免疫失衡所致的炎性腸病、腸易激惹綜合癥的基礎性研究還認為，該類患者均存在腸上皮通透性增加和腸道菌群紊亂，而二者又可促發(fā)腸道免疫反應。因此，免疫屏障、生物屏障、菌群屏障及機械屏障等多重因素是共同導致胃腸炎性疾病的因素。(醫(yī)師報，2008年4月17日第20版"腸粘膜免疫紊亂可能是IBS重要機制)。中醫(yī)認為慢性腸病雖表現(xiàn)為胃脘脹痛、痞悶不舒、食納減退等病在胃腸的征象，但久之則可使機體陰陽平衡與氣機升降失調。但脾胃作為后天之本，"四季脾旺不受邪"、"脾胃內傷，百病由生"。因此消化系統(tǒng)關乎人體營養(yǎng)物質的吸收并充養(yǎng)四肢、九竅和全身各臟的重要功能，機體消化功能障礙將會誘發(fā)全身其他臟器疾病。所以，維護機體消化功能的正常對機體健康有著極其重要的作用。在以往的胃腸炎性疾病保健產品中，多見是以改善消化吸收和潤腸通便以及保護胃腸粘膜功能為主。如"具有改善胃腸功能的保健食品"(專利號200510064224.X)是以決明子、低聚異麥芽糖、螞蟻為原料制成。其通過調節(jié)腸道菌群和通便作用而改善消化功能。我們認為，該發(fā)明的缺點為決明子性寒，久用易敗胃腸；其次該配方未能考慮到調節(jié)免疫對改善消化功能的重要。又如"蛹蟲草食品和蛹蟲草基質及其制備方法"保健品(專利號03133807.0)是以蛹蟲草等為原料制成，但其沒能考慮到改善蛹蟲草消化道不良作用的缺點。三
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種復方蛹蟲草制劑和制備方法及其在增強免疫功能和改善消化道功能保健食品中的應用。本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)的一種復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草10-90份、山藥5-60份、薏苡仁5-30份、低聚糖l-5份。一種復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草30-70份、山藥15-45份、薏苡仁10-25份、低聚糖3-4份。一種復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草50份、山藥30份、薏苡仁20份、低聚糖3.5份。上述復方蛹蟲草制劑的制備方法，其特征在于制法分為水煎煮法和低濃度醇提法兩種(一)、水煎煮法的步驟如下(1)稱取蛹蟲草進行超微粉碎，將山藥、薏苡仁加水煎煮，煎液濃縮至稠膏狀；(2)將上述稠膏與蛹蟲草微粉、低聚糖混勻，加入適量的相關劑型的輔料制成相應的劑型。(二)低濃度醇提法的步驟如下(1)稱取蛹蟲草進行超微粉碎，將山藥、薏苡仁加稀醇提取，提取液經(jīng)真空減壓濃縮回乙醇，繼續(xù)濃縮至稠膏；(2)將上述稠膏、蛹蟲草微粉與低聚糖混勻，加入適量的相關劑型的輔料制成相應的劑型。上述的制備方法，其特征在于在水煎法步驟(1)中加水6-10倍量煎煮兩次，煎煮廣2小時，煎液濃縮至相對密度1.08~1.10。上述的制備方法，其特征在于在醇提法歩驟(1)中加8-10倍量的30~50%的乙醇提取2次，每次提取l-2小時，提取液濃縮至相對密度1.081.10。上述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于所述的低聚糖為異麥芽低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖或水蘇糖中的一種。上述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于加入適量的相關劑型的輔料制成顆粒劑、散劑、袋泡劑、膠囊劑或片劑。上述的復方蛹蟲草制劑在制備增強免疫功能保健食品中的應用。上述的復方蛹蟲草制劑在制備改善消化道功能保健食品中的應用。本發(fā)明的顆粒劑、袋泡劑、膠囊劑、片劑等劑型，每袋為3-15克，每次1袋，或每粒含0.5g，每次2粒，每日2次。蛹蟲草與冬蟲夏草同屬異種，(Cordyc印smilitarisL.Link),又名北冬蟲夏草,屬子囊菌亞門(AscomycotJna)核菌綱(pyreno-mycetes)球殼目(Sphaerin]es)麥角菌禾斗(claviti印itaceae)蟲草屬(Coedyc印s)。蛹蟲草含有蟲草素、蟲草多糖等多種生物活性物質，具有抗炎、抗癌、抗菌、增強免疫等作用，對巴豆油所致耳腫脹和醋酸所致毛細血管通透性的增高、脂多糖誘導的炎癥均有顯著抗炎作用(柴建萍，白興榮,謝道燕.蛹蟲草主要有效成分及其藥理功效.云南農業(yè)科技.2003，(4):22-23)。因此，蛹蟲草用于炎性腸病具有增強免疫與抗炎的雙重效應。雖然蛹蟲草具有顯著的增強免疫等效應，但也見報道經(jīng)口給予大、小鼠蛹蟲草水煎液24h后，動物出現(xiàn)腹瀉、食欲減退現(xiàn)象，且大鼠比小鼠表現(xiàn)更明顯(鄒志飛等.人工家蠶蛹巴西蟲草的毒性研究.中國公共衛(wèi)生學報，1995,14(4):251-252)。解學魁等人進行的亞慢性毒性試驗發(fā)現(xiàn)，高劑量組蛹蟲草(8g/kg)和中劑量組(4g/kg)大鼠體重明顯低于對照組，提示蛹蟲草對幼年大鼠的生長發(fā)育具有抑制作用(解學魁等.北冬蟲夏草粉劑的亞慢性毒性試驗.毒理學雜志，2007,21(3):243-244)。我們研究也發(fā)現(xiàn)，成年人口服蛹蟲草3克/日，偶見有腹瀉現(xiàn)象。5g/kg以上灌胃小鼠，可出現(xiàn)明顯的致瀉現(xiàn)象。而大量研究證實，山藥、薏苡仁對脾虛大鼠的便溏等癥狀具有預防和治療作用，"山藥、薏米皆清脾肺之藥，然單用山藥，久則失于粘膩；單用薏米，久則失于淡滲，惟等分并用，乃可久服無弊"(《衷中參西錄》)。鑒此，采用山藥、薏米與蛹蟲草配伍，達到既減輕蛹蟲草的致瀉反應，又改善脾胃消化功能之目的。也正是本發(fā)明的創(chuàng)新點之一。本發(fā)明的創(chuàng)新點之二，是根據(jù)炎性腸病發(fā)病機制的最新研究觀點，認為免疫屏障、生物屏障、菌群屏障及機械屏障等多種綜合因素與該類病機有關，尤其是腸粘膜免疫紊亂可能是炎癥性腸病的重要機制。因此，突破以往抗炎、潤腸通便作為治療炎性腸病的常規(guī)，將業(yè)已公認的雙歧因子增值物質低聚糖引入本配方，不僅可調節(jié)腸道菌群失調，還可與蛹蟲草、山藥、薏仁發(fā)揮免疫調節(jié)協(xié)同作用，從多環(huán)節(jié)改善炎性腸病消化功能的失衡，達到更好防治炎性腸病的效果。具體實施例方式結合具體實施方式，對本發(fā)明進一步說明如下(一)按下表中所列重量配比稱取本發(fā)明所需原料，單位kg<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>(二)制備實施例按上表內各實施例中原料配比，制備成相應劑型，具體方法步驟如下1、將蛹蟲草10份進行超微粉碎，將山藥60份、薏苡仁5份加水煎煮兩次，第一次IO倍量，煎煮1.5h，第二次8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濃縮至稠膏狀，將上述原料與低聚果糖5份混合均勻，以酒精為粘合劑進行濕法制粒，烘干、整粒成顆粒劑。2.將蛹蟲草30份進行超微粉碎，將山藥45份、薏苡仁10份加水煎煮兩次，第一次IO倍量，煎煮1.5h，第二次8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濃縮至稠膏狀，至相對密度1.081.10，加入倍他環(huán)糊精包合物及適量糊精噴霧干燥成粉，將上述原料與異麥芽低聚糖4份混合均勻后干法制粒成顆粒劑；3.將蛹蟲草50份進行超微粉碎，將山藥35份、薏苡仁15份加水煎煮兩次，第一次8倍量，煎煮1.5h，第二次6倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濃縮至稠膏狀，至相對密度1.08I.IO左右，加入倍他環(huán)糊精包合物及適量糊精噴霧干燥成粉，將蛹蟲草微粉、與低聚半乳糖3份混合均勻后干法制粒，分裝膠囊后制成膠囊劑；4.將蛹蟲草70份進行超微粉碎，將山藥20份、薏苡仁20份加水煎煮兩次，第一次8倍量，煎煮1.5h，第二次6倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濃縮至稠膏狀，至相對密度1.08I.IO左右，加入倍他環(huán)糊精包合物及適量糊精噴霧千燥成粉，將蛹蟲草微粉與低聚果糖2份混合均勻后干法制粒，分裝后制成袋泡劑；5.將蛹蟲草90份進行超微粉碎，將山藥5份、薏苡仁30份加水煎煮兩次，第一次8倍量，煎煮1.5h，第二次6倍量，煎煮1.5h，合并煎液，濃縮至稠膏狀，至相對密度1.081.10左右，加入倍他環(huán)糊精包合物及適量糊精噴霧千燥成粉，將蛹蟲草微粉與大豆低聚糖1份混合均勻后干法制粒，加入硬脂酸鎂，混勻、壓片制成片劑。6.預先將蛹蟲草10份進行超微粉碎，將山藥60份、薏苡仁5份加水煎煮兩次，第一次IO倍量，煎煮1.5h，第二次8倍量，煎煮1.5h，合并煎液、濃縮后加入蛹蟲草微粉、低聚果糖5份入膠體磨進行細磨，再進行均質、噴霧干燥成粉為粉劑或袋泡劑。7.將蛹蟲草10份進行超微粉碎，將山藥60份、薏苡仁5份加30%稀醇提取2次，第一次10倍量，1.5小時，第二次8倍量，1.5h，提取液經(jīng)真空減壓濃縮回收乙醉，繼續(xù)濃縮至稠膏狀，將稠膏、蛹蟲草微粉與低聚半乳糖5份混合均勻，以酒精為粘合劑進行濕法制粒，烘干、整粒成顆粒劑。(三)單味蛹蟲草與復方蛹蟲草制劑的最大耐受量比較研究1.試驗材料動物昆明種健康小鼠80只，雌雄各半，體重20—22g。試劑蛹蟲草超微粉、復方蛹蟲草顆粒劑。2.藥物配制復方蛹蟲草(試藥A):取復方蛹蟲草顆粒劑15g(約含蛹蟲草超微粉2.Og)，加蒸餾水40ml配制成0.375g/ml的最大濃度試液。單方蛹蟲草(試藥B):取蛹蟲草超微粉2.Og及糊精13.Og，加蒸餾水40ral配制成0.375g/ml的濃度試液。3.試驗方法動物分為A、B兩組，每組雌雄動物各20只，A組給予試藥A，B組給予試藥B。動物禁食12小時。灌胃給藥，每次0.8ml/只，一日兩次，相當于日劑量為30g/kg，連續(xù)觀察14天，詳細記錄動物反應情況。按公式推算相當于人用劑量(15克/日)的倍數(shù)。小鼠最大耐受倍數(shù)=(每只小鼠耐受藥量/小鼠平均體重20g)X(成人平均體重60kg/成人每日用量)。4.試驗結果與分析試液A給藥后除一只雄性動物出現(xiàn)輕度腹瀉外，其余動物均未見任何不良反應。試藥B給藥后11只動物出現(xiàn)腹瀉癥狀，腹瀉率達27.5%，并有4只(10%)動物死f:。根據(jù)公式算得復方蛹蟲草顆粒劑小鼠口服最大耐受量為人用量的125倍，可見蛹蟲草與山藥、薏仁、低聚果糖配伍后安全性比單味蛹蟲草明顯提高。(四)對調節(jié)免疫功能的藥效學作用研究l.試驗準備1.1儀器752型分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)、計時器(上海星鉆秒表有限公司)，分析天平(上海民橋精密科學儀器有限公司，F(xiàn)A1104),二氧化碳培養(yǎng)箱(日本SANYO),酶標儀(美國BioTek)，超凈工作臺(蘇州市華宇凈化設備有限公司)，200目篩網(wǎng)，96孔培養(yǎng)板(平底)(C0STAR公司)。1.2試劑印度墨汁(SchmidGmbHH.Co.D-73257)、生理鹽水(華裕制藥有限公司)、Na2C03(上?；瘜W試劑總廠)、蒸餾水、蛹蟲草超微粉(無錫山野菌物有限公司，批號080119);復方蛹蟲草顆粒劑(本實驗室自制)；鹽酸左旋咪唑片(南京白敬宇制藥有限責任公司，批號070802)，香菇多糖(南京蘇朗醫(yī)藥有限公司，批號070611)，RPMI1640細胞培養(yǎng)液(南京丁貝生物科技有限公司，批號080812)、小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司，批號080424)、2-巰基乙醇(2-ME)(A腿ESCO公司，批號0803)、青霉素(BIOSHARP公司，批號0741)、鏈霉素(BIOSHARP公司，批號0382)、刀豆蛋白A(ConA)(Sigma公司，批號02010)、鹽酸(上海中試化工總公司，批號20080309)、異丙醇(上?；瘜W試劑有限公司，批號20031105)、MTT(BIOSHARP公司，批號0793)、Hank，s液、PBS緩沖液(pH7.2-7.4)。1.3試藥配制方法將印度墨汁原液用生理鹽水稀釋4倍；取0.lgNa2C03，加蒸鎦水至lOOml。完全培養(yǎng)液PRMI1640培養(yǎng)液過濾除菌，用前加入10%小牛血清，1%谷胺酰胺(200mmol/L)，青霉素(100U/mL)，鏈霉素(100Pg/L)及5X10—5mol/L的2-巰基乙醇，用無菌的lmol/L的HC1或lmoVL的Na0H調pH7.2-7.4。ConA液用雙蒸餾水配制成100ug/mL的溶液，過濾除菌，在低溫冰箱(-2(TC)保存。無菌Hank，s液用前以3.5%的無菌NaHC03調pH7.2-7.4。MTT液將5mgMTT溶于lmLpH7.2的PBS中，現(xiàn)配現(xiàn)用。酸性異丙醇溶液96mL異丙醇中加入4mLlmol/L的HC1，臨用前配制。受試藥物配制方法取山藥薏苡仁提取物1.8g，蛹蟲草微粉0.9g，低聚果糖1.2g，共3.9g。取全量加入少量3%CMCNa溶液，研磨均勻，補至20ml，即為高劑量組濃度。取1/3量加CMCNa至20ml，即為中劑量組濃度。取1/6量加CMCNa至20ml，即為低劑量組濃度。1.4實驗動物清潔級健康ICR小鼠，雄性，18-22g，每組12只。2.試驗方法2.1單、復方蛹蟲草促進單核一巨噬細胞吞噬功能的研究2.1.1基本原理小鼠尾靜脈注射一定大小的顆粒物質如碳粒等，可迅速被肝脾等器官內網(wǎng)狀內皮細胞吞噬而使其血漿濃度降低，因此可以從其廓清率了解整個單核巨噬細胞系統(tǒng)的吞噬功能。2.1.2分組按隨機區(qū)組分組法將小鼠分為正常組(正常飲食詞養(yǎng))、陽性組(給予鹽酸左旋咪唑片)、蛹蟲草生藥組(給予蛹蟲草粉末)、復方蛹蟲草顆粒劑低劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑高劑量組，各組連續(xù)灌胃(0.2ml/10gBW)給藥30天。2.1.3OD值測定小鼠稱體重，從尾靜脈注入稀釋的印度墨汁，按每10g體重0.lml計算。待墨汁注入，立即計時。注入墨汁2(t》、10(12)分鐘后，分別從內眥靜脈叢取血20ul，立即將其加入2ml0.1%他2〔03溶液中。用752型分光光度計在600nm波長處測光密度值(0D)，以％20)3溶液作空白對照。將小鼠處死，取肝臟和脾臟，用濾紙吸干臟器表面血污，稱重。以吞噬指數(shù)表示小鼠碳廓清的能力，按下式計算吞噬指數(shù)a。小鼠網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)對碳顆粒的吞噬作用計算公式如下碳廓清指數(shù)k-(1ogOD「logOD2)/(t2-t》；校正的吞噬指數(shù)a^(體重/肝脾重)Xk1/3計量數(shù)據(jù)以7土SD表示，采用SPSS11.5進行數(shù)據(jù)分析。多組之間均數(shù)比較用方差分析，多組均數(shù)間的多重比較用SNK-q檢驗。以受試組的吞噬指數(shù)顯著高于對照組的吞噬指數(shù)，判定該實驗結果陽性。2.1.5結果在一定范圍內，碳顆粒的清除速度與劑量呈指數(shù)關系，吞噬速度與血碳濃度成正比，與吞噬的碳粒成反比。結果見表l。表l復方蛹蟲草顆粒劑對碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響(n=12，I土SD)組別劑量(g/kg)碳廓清指數(shù)k吞噬指數(shù)a正常對照組等體積0.0219±0.00443.7±0.6陽性藥組8mg0.0364±0.00875.8±0.5*蛹蟲草生藥組0.30.0279±0.00814.6±0.4*低劑量組0.650.0257±0.00734.3±0.6中劑量組1.30.0297±0.00834.8±0.5*高劑量組3.90.0336±0.00565.3±0.7*1.440.02*,。檢驗，與對照組比較Z5<0.05由表l可知蛹蟲草生藥組，復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、高劑量組的吞噬指數(shù)a均顯著高于正常對照組。表明復方蛹蟲草顆粒劑具有增強單核-巨噬細胞功能的作用。2.2復方蛹蟲草顆粒劑對ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化影響的研究2.2.1基本原理T細胞在體外培養(yǎng)時，受到非特異性有絲分裂原ConA刺激后，可出現(xiàn)細胞體積增大，代謝旺盛，蛋白和核酸合成增加，即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平，因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。MTT法(即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法)可用于淋巴細胞轉化試驗。MTT是一種噻唑鹽，化學名3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到CoM作用后發(fā)生增殖活化，其胞內線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高，MTT作為其底物參與反應，形成藍色的甲臜(Formazan)顆粒沉積于細胞內或細胞周圍，經(jīng)鹽酸-異丙醇溶解后為藍色溶液，可用酶標測定儀測定細胞培養(yǎng)物的0D值，測定波長570nm。根據(jù)0D值的大小計算反應體系中細胞增殖程度。2.2.2分組按隨機區(qū)組分組法將小鼠分為正常組(正常飲食飼養(yǎng))、陽性組(給予香菇多糖10mg/kgBW)、蛹蟲草生藥組(給予蛹蟲草粉末)、復方蛹蟲草顆粒劑低劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑高劑量組，各組連續(xù)灌胃(0.2ml/10gBW)給藥30天。2.2.3脾細胞懸液制備無菌取脾，置于盛有無菌Hank's液平皿中，用鑷子輕輕將脾磨碎，制成單個細胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，或用4層紗布將脾磨碎，用Hank's液洗2次，每次離心10min(1000r/min)。然后將細胞懸浮于ImL的完全培養(yǎng)液中，用臺酚藍染色計數(shù)活細胞數(shù)(應在95%以上)，調整細胞濃度為3X106個/mL。2.2.4淋巴細胞增殖反應將每一份脾細胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔lmL，一孔加75uLConA液(相當于7.5ug/mL)，另一孔作為對照，置5WC02，37'CC02孵箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結束前4h，每孔吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的PRMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/mL)50uL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入lmL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解。分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個孔作3個平行孔，用酶標儀，以570nm波長測定光密度值。2.2.5數(shù)據(jù)處理及結果判定計量數(shù)據(jù)以Y土SD表示，采用SPSS11.5進行數(shù)據(jù)分析。多組之間均數(shù)比較用方差分析，多組均數(shù)間的多重比較用SNK-q檢驗。以受試組的光密度差值和增殖率顯著高于對照組的光密度差值和增殖率，判定該實驗結果陽性。2.2.6結果表2復合蛹蟲草顆粒劑對小鼠脾淋巴細胞轉化的影響(n=12,Y±SD)組別劑量(g生藥/kgBW)△OD增殖率(%)正常對照組等體積0.090±0.06223.352±18.080香菇多糖組0.010.264±0.097-58.247±25.721*蛹蟲草生藥組0.30.251±0.083*54.673±24.392*低劑量組0.650.216±0.10142.818±17.352中劑量組1.300.260±0.076*56.413±27.340*高劑量組3.900.256±0.112*59.363±35.052*F3.1543.236P0.0290.037*，^檢驗，與對照組比較尸〈0.05AOD表示用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值。增殖率為(加ConA孔的光密度值一不加ConA孔的光密度值)/不加ConA孔的光密度值X100X。由表2結果可知，復合蛹蟲草顆粒劑中劑量組、高劑量組明顯增加了AOD和增殖率(與正常組比較，P<0.05)，表明復合蛹蟲草顆粒劑具有增強小鼠脾淋巴細胞增殖轉化的能力。3.結論單核巨噬細胞系統(tǒng)(網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)，RES)因能迅速清除多種致病物質，是維持機體內環(huán)境穩(wěn)定的一個重要系統(tǒng)。巨噬細胞是免疫細胞的一種，具有多種免疫功能，如吞噬及殺傷多種病原菌微生物、處理和呈遞抗原、分泌細胞因子(IL-1，IL-6，IL-8)等，在炎癥和腫瘤等許多疾病過程中發(fā)揮了重要的作用。單核-巨噬細胞功能試驗發(fā)現(xiàn)，復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、高劑量組的吞噬指數(shù)a均顯著高于正常對照組，表明復方蛹蟲草顆粒劑具有增強單核-巨噬細胞功能的作用。淋巴細胞增殖和分化是機體免疫應答過程的一個重要階段。因此，檢測淋巴細胞增殖水平是細胞免疫研究和臨床免疫功能檢測的一種常用方法。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平，因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。小鼠脾淋巴細胞轉化試驗發(fā)現(xiàn)，在各試驗組的淋巴細胞懸液中加入促分裂劑ConA后，A0D和增殖率明顯增加，淋巴細胞呈現(xiàn)增殖和轉化效應。而復方蛹蟲草中劑量組、高劑量組使淋巴細胞自然增殖率提高的更加顯著(與正常組比較，P<0.05),表明復方蛹蟲草可以調節(jié)淋巴細胞的增殖和轉化。本研究證實，復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、高劑量組對免疫系統(tǒng)的單核-巨噬細胞功能具有增強作用，可以判定該受試物具有增強單核-巨噬細胞功能的免疫調節(jié)效應；復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、高劑量組對脾淋巴細胞轉化具有增強作用，可以判定該受試物具有增強細胞免疫功能的免疫調節(jié)效應。因此，復方蛹蟲草顆粒劑在細胞免疫功能和單核-巨噬細胞功能檢測中均呈現(xiàn)出陽性結果，可判定復方蛹蟲草顆粒劑具有增強免疫力功能。(五)對利血平所致小鼠脾虛模型的小腸推進作用的影響方法:取體重18-22g小鼠，按體重隨機分為正常對照組、模型組、復方蛹蟲草顆粒劑低劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑中劑量組、復方蛹蟲草顆粒劑高劑量組，各組連續(xù)12天灌胃給蒸餾水或受試藥。同時除正常對照組小鼠外，其余小鼠皮下注射利血平0.15mg/kg/day。于第11天禁食不禁水24小時。第12天各組小鼠灌服10%炭末的蒸餾水或受試藥20ml/kg，20min后頸椎脫臼處死動物，打開腹腔，分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至盲腸的腸管，置于托盤散，不加牽引將小腸鋪成直線，量取小腸總長度和幽門至炭末前沿的距離(炭末推進距離)，計算小腸炭末推進百分率，進行組間比較，t檢驗。小腸推進率%=(幽門至炭末前沿距離/幽門至回盲部距離)X100%結果利血平所致脾虛模型小鼠小腸推進率減少，與空白組比較，差異有顯著性意義(P<0.01)，復方蛹蟲草顆粒劑低劑量組、中劑量組、高劑量組均可顯著提高利血平所致脾虛模型小鼠小腸推進率，與模型組比較，差異有顯著和非常顯著意義(P〈0.05和p<0.01)。(見表3)表3復方蛹蟲草顆粒對利血平所致脾虛模型小鼠小腸炭末推進率的影響(I土S,n=10)組別劑量(g/kg)炭末推進率空白組—73.2±6.0模型組——60.2±12.8*低劑量組0.6569.0±5.4中劑量組1.3072.8±7.6*高劑量組3.9083.6±5.2**注與模型組比較，*P<0.05**P〈0.01;與正常組比較，女P〈0.05。試驗3結果表明，復方蛹蟲草顆粒劑能明顯促進小鼠腸推進，表明受試藥物有一定的促進胃腸蠕動作用，可改善消化功能。權利要求1.一種復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草10-90份、山藥5-60份、薏苡仁5-30份、低聚糖1-5份。2.根據(jù)權利要求l所述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草30-70份、山藥15-45份、薏苡仁10-25份、低聚糖3-4份。3.根據(jù)權利要求1或2所述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于它是由下列重量份原料配比所制成蛹蟲草50份、山藥30份、薏苡仁20份、低聚糖3.5份。4.一種制備權利要求1、2或3所述復方蛹蟲草制劑的方法，其特征在于制法分為水煎煮法和低濃度醇提法兩種(一)、水煎煮法的步驟如下(1)稱取蛹蟲草進行超微粉碎，將山藥、薏苡仁加水煎煮，煎液濃縮至稠膏狀；(2)將上述稠膏與蛹蟲草微粉、低聚糖混勻，加入適量的相關劑型的輔料制成相應的劑型。(二)低濃度醇提法的步驟如下(1)稱取蛹蟲草進行超微粉碎，將山藥、薏苡仁加稀醇提取，提取液經(jīng)真空減壓濃縮回收乙醇，繼續(xù)濃縮至稠膏；(2)將上述稠膏、蛹蟲草微粉與低聚糖混勻，加入適量的相關劑型的輔料制成相應的劑型。5.根據(jù)權利要求書4所述的制備方法，其特征在于在水煎法步驟(1)中加水6-10倍量煎煮兩次，煎煮廣2小時，煎液濃縮至相對密度1.08~1.10.6.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于在醇提法步驟(1)中加8-10倍量的3(T5(W的乙醇提取2次，每次提取1-2小時，提取液濃縮至相對密度1.08、.10.7.如權利要求1、2或3所述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于所述的低聚糖為異麥芽低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖或水蘇糖中的一種。8.如權利要求1、2或3所述的復方蛹蟲草制劑，其特征在于加入適量的相關劑型的輔料制成顆粒劑、散劑、袋泡劑、膠囊劑或片劑。9.如權利要求1、2或3所述的復方蛹蟲草制劑在制備增強免疫功能保健食品中的應用。10.如權利要求l、2或3所述的復方蛹蟲草制劑在制備改善消化道功能保健食品中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種復方蛹蟲草制劑及制法與應用。按重量份配比，它所含活性成分的原料制備包括蛹蟲草(又叫北蟲草)、山藥、薏苡仁和低聚果糖等4味，其制備方法是將蛹蟲草(又叫北蟲草)超微粉碎，與山藥和薏苡仁用水提取(或稀醇提取)后的干燥濃縮物混勻、加適量輔料，制成顆粒劑、袋泡劑、膠囊劑、片劑等劑型。經(jīng)藥效學試驗結果表明本發(fā)明制劑具有增強免疫功能和改善消化道功能作用，并較單味蛹蟲草更為安全。文檔編號A61K36/8994GK101474375SQ200910028488公開日2009年7月8日申請日期2009年1月23日優(yōu)先權日2009年1月23日發(fā)明者輝嚴,嚴國俊,于瑞蓮,麗吳,李文林,勇楊,潘蘇華,許金國,軍龍申請人:南京中醫(yī)藥大學;無錫山野菌物有限公司