專利名稱：一類硫脲類衍生物及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及硫脲類衍生物及其制備方法與在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
iV-取代硫脲類衍生物是一類用途廣泛的化合物，其結(jié)構(gòu)中的非對稱單元是許 多酶抑制劑和生物模擬肽的常見結(jié)構(gòu)特征，故多數(shù)具有生物活性，在農(nóng)藥上應(yīng)用 廣泛，其中許多可用作除草劑、殺蟲劑和植物生長調(diào)節(jié)劑等。在醫(yī)藥、生物領(lǐng)域 中也具有十分重要的地位，它除了具有廣譜的抗菌性之外，對白血病、腫瘤也有 很好的藥效。因此，取代硫脲類化合物具有很廣的應(yīng)用前景。
自發(fā)現(xiàn)硫脲類化合物具有一定的生物活性后，人們就將其作為一種具有開發(fā) 潛力的生物耙標，開展合理分子設(shè)計以及從天然生物活性物質(zhì)中尋找更高或更廣 譜的生物活性、更高的選擇性、更低的毒性、更長或更短的殘效期等，即開發(fā)出 具有廣闊前景且對人類、生態(tài)更安全的新型硫脲類化合物。
硫脲類衍生物作為醫(yī)藥的前景十分值得關(guān)注。國際上相關(guān)領(lǐng)域的最新研究表 明硫脲衍生物作為非肽類促生長素抑制素的激動劑具有很高的活性，而后者在許 多癌癥的發(fā)生機制中扮演著重要角色。而且這只是取代硫脲類化合物生物活性的 一個方面。因此，對其進行深入研究具有一定的理論和實際價值，尤其是在合成 系列新型取代硫脲類衍生物的基礎(chǔ)上對它們的生物活性進行系統(tǒng)的研究具有十 分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新硫脲類衍生物以及它們的制備方法與用途。 本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一類硫脲類衍生物，其特征是它有如下通式
4<formula>formula see original document page 5</formula>
一種上述的硫脲類衍生物的制法，它由下列步驟組成-
步驟l.于無水乙醇中，加入具有R'結(jié)構(gòu)的醛和具有W結(jié)構(gòu)的胺，醛與胺的物質(zhì)的量之比為1:1.2攪拌加熱至60 65T:，反應(yīng)3h后冷卻，減壓蒸去多余的 溶劑和胺，重結(jié)晶得到R^N-R2，
步驟2.將得到的R^N-ie溶于無水乙醇，置于冰浴中，緩慢向其中加入等 物質(zhì)的量的NaBH4，加完之后，撤去冰浴，在常溫下反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，向 體系加水，用氯仿萃取水溶液2 3次，之后減壓蒸干，得到WNR2，
步驟3.將等物質(zhì)的量的化合物RiNI^與異硫氰酸苯酯(PhNCS)溶于氯仿， 在6(TC溫度下攪拌回流4h，過濾，將所得固體在乙醇中重結(jié)晶得到本發(fā)明的硫 脲類衍生物。
上述的制法，所述的步驟l中，無水乙醇的用量為每毫摩爾醛加10-15ml。 上述的制法，所述的步驟2中，無水乙醇的用量為每毫摩爾R^N-W加 10-15ml。
上述的制法，所述的步驟3中，CHC13的用量為每毫摩爾R I^加10-15ml。
本發(fā)明的硫脲類衍生物對人白血病細胞(K562)和人體口腔上表皮癌細胞 (KB)有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的硫脲類衍生物可以應(yīng)用于制備抗腫瘤 藥物。
具體實施例方式
實施例一N-芐基-N-(5-氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物l)的制備
OH
于250 ml單口圓底燒瓶中加入100 ml無水乙醇，選用5-氯水楊醛(10 mmol) 和節(jié)胺(12mmol)。攪拌反應(yīng)約3個小時在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸去多余溶劑和胺, 得到黃色油狀物。加熱條件下用40ml乙醇將其全部溶解，之后冷卻重結(jié)晶，得到亮黃色固體。將固體轉(zhuǎn)移進250 ml單口圓底燒瓶，加100ml無水乙醇將其完 全溶解，并將燒瓶置于冰浴中，分批緩慢加入硼氫化鈉(320mg,10mmoD,撤 去冰浴，在常溫下攪拌反應(yīng)約6 h。取下燒瓶，向反應(yīng)體系中加水，轉(zhuǎn)移出至500ml 分液漏斗，每次加200ml氯仿萃取2 3次，減壓蒸去氯仿后得到2-((芐胺基) 甲基)-4-氯酚。將其轉(zhuǎn)移至250 ml單口圓底燒瓶中，加100ml氯仿溶解，再向 溶液中滴加lOmmol異硫氰酸苯酯(PhNCS)，加熱至6(TC攪拌回流4h，有白色 固體物質(zhì)生成。將固體過濾出，在常溫下用乙醇清洗3~4次，除去雜質(zhì)。再以 40ml無水乙醇，在加熱至65'C左右時將固體完全溶解，冷卻至室溫，重結(jié)晶得 到白色顆粒狀目標化合物。產(chǎn)率65%。 Mp 131-134°C. 'H-NMR (300MHz， DMSO-A, Sppm): 4.90 (s， 2 H); 5.12 (s， 2 H); 6.84 (d， 8.6, 1 H); 7.08 (s, 1 H); 7.13 (d, J= 4.1， 1 H); 7.20 (m, 2 H); 7.23 (d, J= 5.2, 2 H); 7.26 (t, /= 3.7， 2 H); 7.33 (m, 2 H); 7.70 (d, / = 8.1, 2 H); 9.47 (s, 1 H); 10.08 (s， 1 H). MS (ESI): 382.09 ([M+H]+). Anal, calc. for C21H19C1N20S: C 65.87, H 5.00, CI 9.26, N 7.32, O 4.18, S 8.370/o; found: C 65.98, H 4.92, CI 9.36, N 7.25, O 4.08, S 8.290/0.
實施例二 N-對氟節(jié)基-N-(5-氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物2)的制備
OH
制備方法同實施例一。以對氟芐胺代替芐胺，得到白色顆粒狀目標化合物。 產(chǎn)率63%。 Mp 133-138°C. ^陽NMR (300MHz, DMSO-^， Sppm): 4.95 (s, 2 H); 5.16 (s， 2 H); 6.77 7.2， 1 H); 6.94(s, 1 H); 7.02 (d, J= 8.3, 1 H); 7.12 (d, / =
5.1, 2 H); 7.20 (m, 2 H); 7.26 (t, J= 2.4， 1 H); 7.39 (d， 6.2, 2 H); 7.70 (d， /= 8.1， 2 H); 10.47 (s, 1 H); 12.08 (s, 1 H). MS (ESI): 400.08 ([M+H]+). Anal. cale. for C21H18C1FN20S: C 62.92， H 4.53， CI 8.84， F4.74, N 6.99, O 3.99， S 8.00%; found: C63.98, H 4.38, CI 8.76, F4.69, N 6.89, 0 3.95, S 8.01%.
實施例三N-(2-嗎啉乙基)-N-(5-氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物3)的制備
制備方法同實施例一。以N- (3-氨基乙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末 狀目標化合物。產(chǎn)率57%。 Mp 123-126°C. ^-NMR (300MHz, DMSO-^， Sppm): 2.36 (t, /= 2.7, 4 H); 2.39 (t, J= 2.2， 2 H); 3.55 (t, /= 6.0, 2 H); 3.65 (t, /= 2.4， 4 H); 5.16 (s, 2 H); 6.77 (d, /= 8.2, 1 H); 6.81 (t， 6.4， 1 H); 7.13 ((1,7= 5.2, 1 H); 7.20 (m, 2 H); 7.26 (s, 1 H); 7.70 (d， 《/= 5.8， 2 H); 9.29 (s, 1 H); 11.52 (s, 1 H). MS (ESI): 405.13 ([M+H]+). Anal, calc. for C2oH24ClN302S: C, 59.17; H, 5.96; CI, 8.73; N, 10.35; O, 7.88; S, 7.90%; found: C, 60.07; H, 5.88; Cl， 8.73; N， 10.34; O, 7.76; S, 7.91%.
實施例四N-(3-嗎啉丙萄-N-(5-氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物4)的制備
OH
制備方法同實施例一。以N- (3-氨基丙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末
8狀目標化合物。產(chǎn)率52°/。。 Mp 120-123°C. ^-NMR (300MHz, DMSO-d6， S卯m): 1.56 (m, 2 H); 2.35 (t, /= 2.7, 4 H); 2.46 (t, /= 3.4, 2 H); 3.44 (t, J= 2.8, 2 H); 3.65 (t， 《/= 3.6， 4 H); 5.16 (s， 2 H); 6.76 (d, /= 6.8, 1 H); 6.82 (t， 8.0, 1 H); 7.13 (d, /= 7.2, 1 H); 7.21 (m, 2 H); 7.26 (s, 1 H); 7.72 (d, /= 8.2, 2 H); 8.14 (s, 1 H); 10.26 (s, 1 H). MS (ESI): 419.14 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H26C1N302S: C， 60.06; H， 6.24; Cl: 8.44; N， 10.01; O， 7.62; S， 7.64%; found: C, 60.15; H， 6.19; Cl, 8.42; N, 10.11; O, 7.56; S, 7.61%.
實施例五N-芐基-N-(5-溴-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物5)的制備
OH
制備方法同實施例一。以5-溴水楊醛代替5-氯水楊醛，得到淡黃色粉末狀 目標化合物。產(chǎn)率64% 。 Mp 141-144°C. iH-NMR(300MHz，DMSO-c/6,5ppm): 4.93 (s， 2 H); 5.16 (s， 2 H); 6.85 (d, /= 8.1， 1 H); 7.09 (s, 1 H); 7.14 (d, /= 4.5， 1 H); 7.20 (m, 2 H); 7.23 (d, /= 5.16 2 H); 7.25 (t, /= 3.7, 2 H); 7.33 (m, 2 H); 7.72 (d， /= 7.8, 2 H); 9.52 (s, 1 H); 10.20 (s， 1 H). MS (ESI): 426.04 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H19BrN2OS: C, 59.02; H, 4.48; Br, 18.70; N, 6.56; O, 3.74; S, 7.50%; found: C, 59.14; H， 4.42; Br, 18.65; N, 6.51; O， 3.74; S, 7.48%.
實施例六N-對氟芐基-N-(5-溴-2-羥基芐萄-N'-苯基硫脲(化合物6)的制備OH
制備方法同實施例一。以5-溴水楊醛代替5-氯水楊醛，對氟芐胺代替節(jié)胺， 得到淡黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率62%。 Mp 152-154°C. iH-NMR (300MHz, DMSO-^， 5ppm): 4.93 (s, 2 H); 5.14 (s, 2 H); 6.77 (d, 7= 7.6, 1 H); 6.92(s, 1 H); 7.02 (d， /= 8.5, 1 H); 7.09 (d, /= 5.4, 2 H); 7.18 (m, 2 H); 7.24 (t, /= 2.4, 1 H); 7.38 (d， 《/= 7.2， 2 H); 7.68 (d， /= 7.8, 2 H); 10.50 (s， 1 H); 12.12 (s， 1 H). MS (ESI): 444.03 ([i^+H]+). Anal, calc. for C2iH18BrFN2OS: C, 56.64; H, 4.07; Br， 17.94; F， 4.27; N, 6.29; O， 3.59; S， 7.200/0; found: C， 56.86; H， 4.02; Br, 17.91; F, 4.15; N， 6.21; 0,3.56; S, 7.13%.
實施例七N-(2-嗎啉乙萄-N-(5-溴-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物7)的制備
制備方法同實施例一。以5-溴水楊醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基乙基) 嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率52%。Mp 133-136°C. 'H-NMR (300MHz, DMSO-A, 5ppm): 2.39 (t, /= 2.7, 4 H); 2.41 (t， J= 2.2, 2 H); 3.55 (t， / = 6.0， 2 H); 3.65 (t, /= 2.4， 4 H); 5.16 (s, 2 H); 6.77 (d， /= 8.2, 1 H); 6.81 (t, /= 6.4, 1
10H); 7.13 (d， /= 5.2, 1 H); 7.20 (m, 2 H); 7.26 (s, 1 H); 7.70 (d， /= 5.8, 2 H); 9.20 (s, 1 H); 12.02 (s， 1 H). MS (ESI): 449.08 ([M+H]+). Anal. calc. for C20H24BrN3O2S: C, 53.33; H, 5.37; Br， 17.74; N, 9.33; O, 7.10; S, 7.12%; found: C, 53.51; H, 5.32; Br, 17.68; N, 9.30; O, 7.10; S, 7.070/o.
實施例八N-(3-嗎啉丙基)-N-(5-溴-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物8)的制備
制備方法同實施例一。以5-溴水楊醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基丙基) 嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率49%。 Mp 119-123°C. iH-NMR (300MHz， DMSO陽4 Sppm): 1.54 (m, 2 H); 2.33 (t, /= 2.7, 4 H); 2.46 (t, /= 3.4, 2 H); 3.44 (t， 《/= 2.8， 2 H); 3.63 (t， /= 3.6, 4 H); 5.16 (s, 2 H); 6.76 (d， /= 6.8, 1 H); 6.82 (t， J"= 8.0， 1 H); 7.13 (d， 《/= 7.2, 1 H); 7.28 (m, 2 H); 7.36 (s, 1 H); 7.72 (d， /= 8.2， 2 H); 9.14 (s, 1 H); 11.23 (s, 1 H). MS (ESI): 463.09 ([Af+H]+). Anal. calc. for C21H26BrN302S: C， 54.31; H, 5.64; Br， 17.21; N, 9.05; O, 6.89; S， 6.卯％; found: C, 54.51; H， 5.62; Br, 17.15; N, 9.05; O, 6.84; S, 6.82%.
實施例九N-節(jié)基-N-(3,5-二氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物9)的制備<formula>formula see original document page 12</formula>制備方法同實施例一。以3， 5-二氯水楊醛代替5-氯水楊醛，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率62%。Mp 149-152°C. ^-NMR (300MHz, DMSO-J6, 5ppm):5.12 (s, 2 H); 5.16 (s， 2 H); 6.81 (t, /= 7.4, 1 H); 7.14 (s, 1 H); 7.22 (m, 8 H); 7.70 (d, /= 6.2,2 H); 9.24 (s, 1 H); 12.03 (s， 1 H). MS (ESI): 416.05 ([Af+H]+). Anal. calc. forC2iH18Cl2N2OS: C， 60.43; H, 4.35; CI, 16.99; N， 6.71; O, 3.83; S， 7.68%; found: C,60.56; H， 4.28; CI, 16.94; N, 6.66; O, 3.83; S, 7.57%.
實施例十N-對氟芐基-N-(3,5-二氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物10)的制備<formula>formula see original document page 12</formula>
制備方法同實施例一。以3， 5-二氯水楊醛代替5-氯水楊醛，對氟芐胺代替芐胺，得到白色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率64%。 Mp 151-154°C. 1H-NMR(300MHz, DMSO-f/6, Sppm): 5.03 (s, 2 H); 5.12 (s, 2 H); 6.77 (t， /= 7.6, 1 H); 7.12(d, /= 5.4, 2 H); 7.14 (s， 1 H); 7.26 (m, 5 H); 7.68 (d, 8.2， 2 H); 10.20 (s， 1 H); 12.13(s， 1 H). MS (ESI): 434.04 ([Af+H〗+). Anal. calc. for C21H17C12FN20S: C, 57.94; H,3.94; CI, 16.29; F， 4.36; N, 6.43; O, 3.68; S, 7.37%; found: C, 58.12; H, 3.86; CI,16.23; F, 4.28; N， 6.43; 0, 3.68; S, 7.25%.
實施例十一N-(2-嗎啉乙基)-N-(3， 5-二氯-2-羥基芐基)-N，-苯基硫脲(化合物11)的制備
制備方法同實施例一。以3， 5-二氯水楊醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基乙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率53%。 Mp 133-138°C.iH-NMR (300MHz, DMSO-fl 6, Sppm): 2.34 (t, J= 3.7， 4 H); 2.39 (t, /= 2.1, 2 H);3.55 (t, /= 5.8， 2 H); 3.68 (t， /= 3.4， 4 H); 5.18 (s， 2 H); 6.77 (d， J= 8.8,1 H); 7.14 (s:1 H); 7.20 (m, 2 H); 7.34 (s, 1 H); 8.03 ((!， /= 7.8， 2 H); 8.95 (s， 1 H); 10.02 (s, 1 H).MS (ESI): 439.09 ([M+H〗+). Anal. calc. for C20H23Cl2N3O2S: C， 54.55; H, 5.26; CI,16.10; N, 9.54; O, 7.27; S, 7.28%; found: C, 54.68; H, 5.18; CI, 16.06; N, 9.54; O,7.29; S, 7.23%.
實施例十二 N-(3-嗎啉丙基)-N-(3， 5-二氯-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物12)的制備
13制備方法同實施例一。以3， 5-二氯水楊醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基丙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率55%。 Mp 122-127°C.iH-NMR (300MHz, DMS0-4, 5ppm): 1.56 (m, 2 H); 2.37 (t, /= 3.1, 4 H); 2.46 (t， J=3.4, 2 H); 3.44 (t， /= 2.8, 2 H); 3.63 (t, /= 3.6, 4 H); 5.16 (s， 2 H); 6.76 (s, 1 H);6.82 (s， 1 H); 7.13 (t， /= 7.2, 1 H); 7.28 (m， 2 H); 7.36 (s， 1 H); 7.72 (d， 《/= 8.2, 2 H);9.14 (s， 1 H); 11.23 (s, 1 H). MS (ESI): 453.10 ([AZ+H]+). Anal. calc. forC21H25C12N302S: C, 55.51; H, 5.55; Cl， 15.60; N, 9.25; O, 7.04; S, 7.06%; found: C，55.64; H, 5.48; Cl, 15.54; N, 9.23; O, 7.02; S， 7.06o/o.
實施例十三N-節(jié)基-N-(3,5二溴-2-羥基芐萄-N，-苯基硫脲(化合物13)的制備
BrS.
NH
Br
OH
制備方法同實施例一。以3， 5-二溴水楊醛代替5-氯水楊醛，得到黃色顆粒狀目標化合物。產(chǎn)率65%.。 Mp 142-147 °C. ^-NMR (300MHz， DMSO-或5ppm): 5.14 (s, 2 H); 5.16 (s, 2 H); 6.78 (t， J= 7.8, 1 H); 7.15 (s， 1 H); 7.26 (m, 8 H);7.83 (d, /= 7.2, 2 H); 10.34 (s， 1 H); 12.13 (s, 1 H). MS (ESI): 503.95 ([M+H]+).Anal. calc. for C21H18Br2N2OS: C， 49.82; H， 3.58; Br, 31.57; N, 5.53; O, 3.16; S，6.33%; found: C, 49.98; H, 3.54; Br, 31.51; N, 5.47; O, 3.13; S, 6.30%.
實施例十四N-對氟芐基-N-(3,5-二溴-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物14)的制備
OH
制備方法同實施例一。以3， 5-二溴水楊醛代替5-氯水楊醛，對氟芐胺代替芐胺，得到黃色顆粒狀目標化合物。產(chǎn)率64%。 Mp 154-156°C. ^-NMR(300MHz, DMSO-^， Sppm): 5.13 (s, 2 H); 5.16 (s, 2 H); 6.87 (t, 8.2, 1 H); 7.14(d， /= 5.4, 2 H); 7.17 (s， 1 H); 7.31 (m， 5 H); 7.72 8.8, 2 H); 10.19 (s, 1 H); 11.73
(s, 1 H). MS (ESI): 521.94 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H17Br2FN2OS: C, 48.11; H，3.27; Br, 30.48; F, 3.62; N, 5.34; O, 3.05; S， 6.12%; found: C， 48.24; H， 3.22; Br，30.44; F, 3.60; N， 5.31; O, 3.02; S， 6.08%.
實施例十五N-(2-嗎啉乙基)-N-(3， 5-二溴-2-羥基芐基)-N，-苯基硫脲(化合物15)的制備Br
SVNH
制備方法同實施例一。以3， 5-二溴水楊醛代替5-氯水楊醛，N- G-氨基乙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率47%。 Mp 143-148°C.!H-NMR (300MHz, DMS0-c4, Sppm): 2.36 (t， 2.8, 4 H); 2.41 (t, /= 2.4, 2 H);3.55 (t， /= 5.8, 2 H); 3.65 (t， 《/= 4.6， 4 H); 5.20 (s, 2 H); 6.87 ((!， /= 8.3, 1 H); 7.21(m， 2 H); 7.54 (s, 1 H); 7.64 (s, 1 H); 8.03 (d, ■/= 7.8， 2 H); 8.98 (s, 1 H); 10.12 (s, 1H). MS (ESI): 526.99 ([M+H]+). Anal. calc. for C20H23Br2N3O2S: C， 45.38; H， 4.38;Br, 30.19; N， 7.94; O, 6.05; S, 6.06o/o; found: C， 45.58; H, 4.29; Br, 30.13; N, 7.84; O,6.02; S， 6.040/0.
實施例十六N-(3-嗎啉丙基)-N-(3， 5-二溴-2-羥基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物16)的制備
制備方法同實施例一。以3， 5-二溴水楊醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基丙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率50%。 Mp 121-124°C.力-NMR (300MHz, DMSO-4 Sppm): 1.56 (m, 2 H); 2.40 (t, /= 3.4, 4 H); 2.46 (t, /
16=3.4， 2 H); 3.45 (t， J= 3.8, 2 H); 3.63 (t, /= 3.6， 4 H); 5.16 (s， 2 H); 6.78 (t, /= 7.9,1 H); 7.22 (m， 2 H); 7.53 (s, 1 H); 7.62 (s, 1 H); 7.74 (d, /= 8.2, 2 H); 10.09 (s, 1 H);11.23 (s， 1 H). MS (ESI): 541.00 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H25Br2N302S: C, 46.42;H， 4.64; Br, 29.41; N， 7.73; O， 5.89; S, 5.90%; found: C, 46.54; H, 4.58; Br, 29.37; N,7.66; O, 5.81;S，5，/0.
實施例十七N-芐基-N-(3-硝基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物17)的制備
制備方法同實施例一。以間硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率63%。 Mp 144-147°C. !H-NMR (300MHz, DMSO-4, Sppm):5.16 (s， 2 H); 5.18 (s, 2 H); 6.80 (t, /= 7.9, 1 H); 7.26 (m, 7 H); 7.65 (m, 4 H); 8.10(m, 2 H); 12.16 (s, 1 H). MS (ESI): 377.12 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H19N302S: C,66.82; H， 5.07; N， 11.13; O, 8.48; S， 8.490/0; found: C, 66.95; H, 5.01; N, 11.10; O,8.42; S， 8.39%.
實施例十八N-對氟芐基-N-(3-硝基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物18)的制備<formula>formula see original document page 17</formula>制備方法同實施例一。以間硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，對氟芐胺代替芐胺，得到黃色顆粒狀目標化合物。產(chǎn)率63%。 Mp 144-146°C. ^-NMR (300MHz,Sppm): 5.15 (s, 2 H); 5.18 (s， 2 H); 6.92 (t， 《/= 8.6， 1 H); 7.14(d, /= 6.4, 2H); 7.30 (m, 4 H); 7.65 (m, 4 H); 8.07 (d， /= 7.2， 1 H); 8.12 (s， 1 H); 11.53 (s, 1 H).MS (ESI): 395.11 ([M+H]+). Anal. calc. for C21H18FN302S: C, 63.78; H, 4.59; F, 4.80;N， 10.63; O， 8.09; S， 8.11%; found: C, 63.88; H, 4.55; F, 4.80; N， 10.62; O， 8.08; S,8.07%.
實施例十九N-(2-嗎啉乙基)-N-(3-硝基芐基)-N，-苯基硫脲(化合物19)的制備
制備方法同實施例一。以間硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，N-(3-氨基乙基)嗎啉代替芐胺，得到淡黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率48%。 Mp 145-148°C.^-NMR (300MHz， Sppm): 2.37 (t, /= 2.9， 4 H); 2.41 (t， 《/= 2.4， 2 H);
3.58 (t, /= 3.8, 2 H); 3.70 (t， 《/= 4.1， 4 H); 5.20 (s, 2 H); 6.87 (d, /= 8.3, 1 H); 7.21(m, 2 H); 7.63 (m, 4 H); 8.10 (m, 2 H); 12.12 (s， 1 H). MS (ESI): 400.16 ([M+H]+).Anal. calc. for C20H24N4O3S: C, 59.98; H， 6.04; N, 13.99; O, 11.98; S， 8.01%; found:C， 60.12; H， 6.01; N， 13.94; O, 11.92; S, 8.00%.
實施例二十N-(3-嗎啉丙基)-N-(3-硝基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物20)的制備
18制備方法同實施例一。以間硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，N- (3-氨基丙基)嗎啉代替芐胺，得到淡黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率52%。 Mp 131-134°C.!H-NMR (300MHz， DMSO-t/6， Sppm): 1.58 (m， 2 H); 2.40 (t, /= 2.8, 4 H); 2.48 (t, /=3.2, 2 H); 3.45 (t， /= 3.2, 2 H); 3.67 (t, 5.4, 4 H); 5.16 (s, 2 H); 6.85 (t, /= 7.9,1 H); 7.22 (m， 2 H); 7.63 (m, 4 H); 8.12 (d， 《/= 7.7, 1 H); 8.17 (s, 1 H); 11.78 (s, 1 H).MS (ESI): 414.17 ([M+H]+). Anal. calc. for C2iH26N403S: C， 60.85; H, 6.32; N, 13.52;0,11.58; S, 7.74%; found: C， 60.98; H, 6.30; N, 13.52; 0,11.54; S, 7.71%.
實施例二十一N-節(jié)基-N-(4-硝基芐萄-N，-苯基硫脲(化合物21)的制備
SVNH
制備方法同實施例一。以對硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率60%。 Mp 146-147°C. ^-NMR (300MHz， DMSO-^， Sppm):5.16 (s, 2 H); 5.18 (s, 2 H); 6.82 (t, /= 8.3， 1 H); 7.28 (m, 7 H); 7.65 (d, ■/= 8.2, 2 H);7.95 (d， 8.1, 2 H); 8.14 (d, ■/= 8.7, 2 H); 12.12 (s， 1 H). MS (ESI): 377.12([il^+H]+). Anal. calc. for C21H19N302S: C， 66.82; H, 5.07; N, 11.13; O， 8.48; S,8.49%; found: C, 66.96; H, 5.00; N, 11.13; O, 8.44; S, 8.39%.
實施例二十二 N-對氟芐基-N-(4-硝基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物22)的制備
<formula>formula see original document page 19</formula>制備方法同實施例一。以對硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，對氟芐胺代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率61%。 Mp 143-145°C. !H-NMR (300MHz,DMSO-A, Sppm): 5.16 (s, 2 H); 5.21 (s, 2 H); 7.02 (t, ■/= 8.4, 1 H); 7.16(d， /= 7.6， 2H); 7.31 (m, 4 H); 7.72(d， /= 6.6, 2 H); 7.95(d, /= 8.6， 2 H); 8.14 (d, /= 7.2, 2 H);12.13 (s, 1 H). MS (ESI): 395.11 ([M+H]+). Anal. calc. for C2iH18FN302S: C， 63.78;H, 4.59; F, 4.80; N， 10.63; O, 8.09; S, 8.11%; found: C, 63.89; H, 4.56; F， 4.73; N,10.62; O，8.02; S， 8.01%.
實施例二十三N-(2-嗎啉乙基)-N-(4-硝基芐基)-N，-苯基硫脲(化合物23)的制備
制備方法同實施例一。以對硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，N-(3-氨基乙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率51%。 Mp 142-148°C. ^-NMR(300MHz, Sppm): 2.34 (t, /= 2.2, 4 H); 2.38 (t, /= 2.9, 2 H); 3.58 (t, / =
3.8, 2 H); 3.66 (t, /= 4.1， 4 H); 5.18 (s, 2 H); 6.82 (d， /= 8.3, 1 H); 7.25 (m, 2 H);7.70 (d， </= 7.5, 2 H); 8.01 (d, /= 8.3， 2 H); 8.21 ((!， /= 8.5， 2 H);11.82 (s, 1 H). MS(ESI): 400.16 ([M+H]+). Anal. calc. for C20H24N4O3S: C， 59.98; H， 6.04; N， 13.99; O,11.98; S， 8.01%; found: C, 60.15; H， 6.02; N, 13.96; 0,11.90; S， 7.93%.
實施例二十四N-(3-嗎啉丙基)-N-(4-硝基芐基)-N'-苯基硫脲(化合物24)的制
備0 N
制備方法同實施例一。以對硝基苯甲醛代替5-氯水楊醛，N-(3-氨基丙基)嗎啉代替芐胺，得到黃色粉末狀目標化合物。產(chǎn)率52%。 Mp 121-124°C. iH-NMR(300MHz， DMS0-c4， Sppm): 1.56 (m， 2 H); 2.38 (t, 2.5， 4 H); 2.48 (t， /= 2.8, 2H); 3.46 (t, /= 3.2, 2 H); 3.67 (t, /= 6.4, 4 H); 5.22 (s, 2 H); 7.05 (t, /= 8.9, 1 H);7.30 (m, 2 H); 7.81 (d, /= 9.8, 2 H); 8.12 ((!， /= 7.7, 2 H); 8.27 (d, </= 9.2, 2 H);12.08 (s, 1 H). MS (ESI): 414.17 ([M+H]+). Anal, calc. for C21H26N403S: C, 60.85; H,6.32; N, 13.52; O, 11.58; S， 7.74%; found: C, 60.92; H， 6.31; N， 13.45; O, 11.52; S,7.71%.
實施例二十五硫脲類衍生物體外抗腫瘤活性研究
采用MTT [3-(4, 5)-雙甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑藍]法來測定硫脲類
衍生物對人體口腔上表皮癌細胞株(KB)和人白血病細胞株(K562)的ICso值。
(1) 培養(yǎng)液(每升)的配制①懸浮細胞RPMI-1640培養(yǎng)粉一袋(10.4g)，新生牛血清100 ml,青霉素溶液(20萬U/ml) 0.5 ml,鏈霉素溶液(20萬U/ml)0.5 ml，加三蒸水溶解后，用5.6%的NaHC(V溶液調(diào)PH值至7.2-7.4，最后定容至1000 ml。過濾滅菌。②貼壁細胞同上，再加入NaHC03 2.00 g, HEPES 2.38
(2) D-Hanks緩沖液(每升)的配制NaCl 8.00 g， KC1 0.40 g, Na2HP04-12H20 0.06 g， KH2P04 0.06g， NaHC03 0.35 g。高壓滅菌。
(3) 胰蛋白酶液的配制利用D-Hanks緩沖液配成濃度為0.5%胰蛋白酶液。過濾除菌。
(4) 實驗藥液的配制將測試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲備液， 一般按實驗最高濃度的10倍配制儲備液。根據(jù)化合物溶解性不同，可用三蒸水直接
21溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解。DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不宜過大，加藥后的每孔細胞懸液中DMSO的終濃度一般不超過0.05。/。-0.P/。。儲備液保存于-20。C冰箱中備用。
(5) 人白血病細胞K562的培養(yǎng)為懸浮生長細胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10%小牛血清、100U/ml鏈霉素)，置于37。C、 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次。傳代時將原瓶中培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000 rpm離心5min，棄去原培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液，吹打均勻，移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。
(6) 人體口腔上表皮癌細胞KB的培養(yǎng)為貼壁生長細胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10%小牛血清、100U/ml鏈霉素)，置37°C、 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次。傳代時先棄去原培養(yǎng)液，再用D-Hanks緩沖液洗滌；然后用0.5%胰蛋白酶消化30秒左右，加入少量新鮮培養(yǎng)液終止消化；吹打，使貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來；移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。
(7) 細胞孵育取對數(shù)生長期的2種腫瘤細胞，調(diào)細胞懸液濃度為l-1.5xl05個mr1。在96孔培養(yǎng)板中每孔加細胞懸液100pl，置37。C， 5%(:02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后，分別按設(shè)計加入藥液。
(8) 加藥將測試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個孔中，每個濃度設(shè)6個平行孔。實驗分為藥物試驗組(分別加入不同濃度的測試藥)、對照組(只加培養(yǎng)液和細胞，不加測試藥)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細胞和測試藥)。將加藥后的96孔板置于37GC， 5y。C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。陽性對照藥物的活性按照測試樣品的方法測定。
(9) 存活細胞的測定在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加MTT 40^1(用D-Hanks緩沖液配成4mg/ml)。在37。C放置4h后，移去上清液。每孔加
150 nl DMSO,振蕩5 min，使formazan結(jié)晶溶解。最后，利用自動酶標儀在570nm波長處檢測各孔的光密度(OD值)。
抑制率的計算細胞生長的抑制率按照下列公式計算
生長抑制率=(1一存活率)><100% = [l—(OD實驗一OD空白)/ (OD對照一OD空白)]><100% (OD實驗表示測試藥物組的平均光密度，OD對照表示對照組的平均光密度，ODs自表示對照組的平均光密度)。
半數(shù)抑制濃度(IC5Q)定義為當50%的腫瘤細胞存活時的藥物濃度。根據(jù)測
定的光密度(OD值)，制作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其
對應(yīng)的藥物濃度。測得的ICso見表l所示
表1本發(fā)明所列硫脲類化合物的對腫瘤細胞的抑制IC5(^直(/zM:)
化合物IC50 ,化合物ic50(,
KBK562KBK562
14.2 ±0.125.5 ± 0.06139.5 ± 0.2511.3 ±0.74
24.5 ±0.136.4 ± 0.041410.0 ±0.219.2 ±0.87
320.2 ± 0.4218.8± 0.381522.9 ±0.8617.7± 0.45
420.9 ±0.1119.4± 0.781620.0 ±0.1816.6 ±0.37
25.2 ± 0.2723.9± 0.671729.2 ±0.3724.8 ± 0.86
622.1 ±0.8220.2 ± 0.661817.0 ±0.2116.7± 0.53
718.2 ±0.2113.6 ±0.471915.5 ±0.1513.8± 0.34
829.8 ±0.5127.8 ± 0.892026.5 ± 0.2324.1± 0.97
919.1 ±0.7615.6 ±0.542120.5 ±0.1217.2 ±0.32
1018.7 ±0.5514.6 ±0.962215.6 ±0.3314.2 ± 0.86
1124.2 ± 0.9820.5 ± 0.432317.5 ± 0.2413.4 ±0.33
1226.9 ±0.1223.4 ± 0.672422.5 ± 0.5419.8± 0.23
注五氟尿嘧啶ICsoOiM)/KB: 16.2±0.08ICso 0iM)/K562: 13.5 ±0.152權(quán)利要求
1.一類硫脲類衍生物，其特征是它有如下通式式中R1為 id="icf0003" file="A2009100313290002C3.tif" wi="142" he="29" top= "140" left = "27" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>基團；R2為 id="icf0005" file="A2009100313290002C5.tif" wi="126" he="22" top= "229" left = "31" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>基團。
2. —種權(quán)利要求1所述的硫脲類衍生物的制法，其特征是它由下列步驟組成 步驟1.于無水乙醇中，加入具有Ri結(jié)構(gòu)的醛和具有^結(jié)構(gòu)的胺，醛與胺的物質(zhì)的量之比為1:1.2攪拌加熱至60 65'c，反應(yīng)3h后冷卻，減壓蒸去多余的溶劑和胺，重 結(jié)晶得到R^N-R2，步驟2.將得到的R^N-W溶于無水乙醇，置于冰浴中，緩慢向其中加入等物質(zhì)的 量的NaBH4，加完之后，撤去冰浴，在常溫下反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束向體系加水，用氯仿 萃取水溶液2 3次，之后減壓蒸干，得到WnR2，步驟3.將等物質(zhì)的量的化合物R'Nie與異硫氰酸苯酯溶于氯仿，在6(tc溫度下攪 拌回流4h，過濾，將所得固體在乙醇中重結(jié)晶得到所述的硫脲類衍生物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟l中，所述的無水乙醇的用量為每 毫摩爾醛加10-15ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟2中，所述的無水乙醇的用量為每 毫摩爾R^N-R2力tl 10-15ml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制法，其特征是步驟3中，所述的CHCl3的用量為每 毫摩爾R^NI^加10-15ml。
6. 權(quán)利要求1所述的硫脲類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一類硫脲類衍生物，它有如右通式，本發(fā)明的硫脲類衍生物對人體口腔上表皮癌細胞株(KB)和人白血病細胞株(K562)有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的尿素類衍生物可以在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61K31/5375GK101560175SQ200910031329
公開日2009年10月21日 申請日期2009年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者濤 嚴, 朱海亮, 李環(huán)球 申請人:南京大學