專利名稱：黃芪甲苷在治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)參與疾病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃芪甲苷的應(yīng)用，尤其涉及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的用途。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH，又稱IV型超敏反應(yīng))包括了由致敏性 T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)及所引起的組織與細(xì)胞的損傷。細(xì)胞免疫是指抗原存在時(shí) 刺激局部產(chǎn)生細(xì)胞因子，而以特異性T細(xì)胞大量增殖為特征的宿主免疫應(yīng)答。這 些細(xì)胞因子吸引單核細(xì)胞從血液中聚集到受損部位并激活免疫過程。DTH就是包 括了 T細(xì)胞和細(xì)胞因子作用的與細(xì)胞免疫過程相似的免疫應(yīng)答過程。DTH的表達(dá) 很大程度上依靠Thl細(xì)胞所釋放的細(xì)胞因子，因此Thl的誘導(dǎo)具有信號(hào)重要性。 Thl需識(shí)別APC上MHCII類分子與抗原肽復(fù)合物而活化，并發(fā)生特異性克隆擴(kuò) 增。 一般來(lái)說(shuō)，在致敏階段，最初活化的為CD4+Thl細(xì)胞。進(jìn)入效應(yīng)相的Thl 細(xì)胞通過分泌多種細(xì)胞因子(如IFN-y、 IL-3、 GMCSF)，這些細(xì)胞因子尤其是 IFN-y使巨噬細(xì)胞和其他炎癥細(xì)胞富集與活化，產(chǎn)生炎癥。遲發(fā)型超敏反應(yīng)一般 在再次接觸抗原24h后發(fā)生，常在48 ~ 72h達(dá)到高峰。
IV型超敏反應(yīng)起重要作用的臨床疾病有接觸性皮炎，超敏反應(yīng)性肺炎，同種 移植物排斥，細(xì)胞內(nèi)病原體所致肉芽肺病，某些類型藥物過敏等。目前糖皮質(zhì)激 素是一種常用的強(qiáng)效的抗變態(tài)反應(yīng)藥物，具有較強(qiáng)的抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、免疫抑 制作用，但糖皮質(zhì)激素由于其不良反應(yīng)眾多且較為嚴(yán)重，并且單純應(yīng)用糖皮質(zhì)激 素?zé)o法從根本上解決疾病復(fù)發(fā)的問題，因此在臨床上僅用于重癥及急性患者，臨 床應(yīng)用較為受限。而常用于抗移植排斥的藥物環(huán)胞素A在發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)的同 時(shí)，不良反應(yīng)多，常見的為多毛、震顫、胃腸道不適、齒齦增生以及肝、腎毒 性，亦可見乏力、厭食、四肢感覺異常、高血壓、閉經(jīng)等。因此臨床需要療效好 低毒性的藥物應(yīng)用于遲發(fā)型超敏反應(yīng)所引起的疾病的治療。
黃芪甲苷系從中藥黃芪中提取得到的化合物，是黃芪中主要的活性成分之 一。 黃芙(if"cfcc爿5/raga/z')是豆矛+才直4勿蒙古黃芙v4wraga/w51附e附6rfl"flce"51 fF&c/z.j J9gc (Bgc.,7/5vV o或膜芙黃茂」W/Y g"/ws we附Zvfl"flcgwj ( 7sc/ .)S取.的干燥根，為廣泛應(yīng)用之中藥。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其功效為補(bǔ)氣固表、利尿脫 毒、斂疳生肌，現(xiàn)代研究表明，黃芪具有調(diào)節(jié)免疫、降壓、利尿等作用。黃芙曱 苷作為其中主要的活性成分之一，有抗炎降壓、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜，改善心肌收縮及舒張 功能，清除自由基等藥理作用。
經(jīng)過跟蹤最新文獻(xiàn)報(bào)道，未見黃芪曱苦預(yù)防和治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)介導(dǎo)的疾 病的研究。
技術(shù)問題本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)空白，提供一種黃荒曱普在治療遲發(fā)型超敏 反應(yīng)參與的疾病藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)方案本發(fā)明提供了黃芪曱普(AstragalosideIV )的治療遲發(fā)型超敏反 應(yīng)性疾病的用途，分子式C41H68014，其結(jié)構(gòu)如下
本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了其抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)的作用，并且作用主要在 遲發(fā)型超敏反應(yīng)的誘導(dǎo)相起作用，與普通的抗炎作用機(jī)制不同，不是通過抑制炎 癥反應(yīng)，而是通過對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的抑制作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病包括藥物或化學(xué)物質(zhì)引起的接觸性皮炎，超敏反應(yīng)性 肺炎，同種移植物排斥，細(xì)胞內(nèi)病原體所致肉芽腫病，某些類型藥物過敏。遲發(fā) 型超敏反應(yīng)性疾病主要是由Thl細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞和組織損傷。
本發(fā)明的黃芪甲苷一般以藥物組合物的形式使用，這種組合物主要含治療有 效劑量的作為活性成分的黃芪曱苷和可藥用輔料。黃芪曱苷可與任何可藥用的載 體或輔料混合或溶解，以常規(guī)藥用制劑的形式使用，含有黃芪曱苦的藥物組合物 可通過皮膚、粘膜、胃腸內(nèi)和胃腸外給藥，可以制成固體形式的片劑、膠嚢劑、 顆粒劑、粉劑，或半固體形式的油膏或軟膏，或粉末狀針劑，或液體形式的針

發(fā)明內(nèi)容
4劑、懸浮劑、乳劑或搽劑等劑型供臨床應(yīng)用。上述各種劑型的藥物均可以按照藥 學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
黃芪曱苷的制備可采用現(xiàn)有的制備方法。
本發(fā)明提供的中藥單體成分黃芪曱苷具有以下功能可顯著抑制遲發(fā)性超敏 反應(yīng)的典型動(dòng)物模型(2，4-二硝基氯苯(DNCB)引起的小鼠變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮 炎)的耳廓肺脹程度，減輕炎癥反應(yīng)，減輕病變部位病理組織學(xué)損傷，并且作用 主要在誘導(dǎo)相；對(duì)小鼠的胸腺和脾指數(shù)沒有明顯影響，提示其對(duì)免疫器官?zèng)]有明 顯抑制的不良作用；資導(dǎo)相給藥對(duì)DNCB模型小鼠的血清IFN-Y的水平有明顯的 抑制作用。
黃芪曱苷在制備治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。 黃芪曱苷在制備治療接觸性皮炎的藥物中的應(yīng)用。 黃芪曱苷在制備治療超敏反應(yīng)性肺炎的藥物中的應(yīng)用。 黃芙曱香在制備治療同種移植物排斥的藥物中的應(yīng)用。 黃芪曱苷在制備治療細(xì)胞內(nèi)病原體所致肉芽胂病的藥物中的應(yīng)用。 有益效果本發(fā)明的黃芪曱苷作為用于治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的主要活 性成分，可顯著抑制遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)介導(dǎo)的疾病，并且對(duì)免疫器官和其他細(xì)胞沒 有明顯的抑制，有望成為 一種高效低毒的用于治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥 物。


圖l黃芪甲苷對(duì)變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎小鼠模型耳腫脹度的影響模型組小 鼠耳腫脹明顯，黃芪甲苷(AS-IV) 10mg/kg、 20mg/kg誘導(dǎo)相給藥有顯著的抑制 耳腫脹的作用，而在炎癥反應(yīng)的效應(yīng)相給藥未有明顯作用，提示其對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的 免疫反應(yīng)的特異性抑制作用，而非廣泛的抗炎作用。
圖2黃芙甲苷誘導(dǎo)相給藥對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎小鼠模型耳組織病理組織學(xué) 的影響
A, 正常小鼠耳組織x400倍結(jié)構(gòu)清楚，表皮厚度正常，細(xì)胞內(nèi)無(wú)水肺，無(wú)淋巴細(xì) 胞浸潤(rùn)。
B. 2，4-二硝基氯苯(DNCB)誘導(dǎo)的小鼠變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎模型小鼠耳組織 x400倍表皮增厚，可見細(xì)胞內(nèi)水胂及輕度細(xì)胞間水腫，真皮乳頭水腫，膠原纖 維間隙增大，大量以淋巴細(xì)胞為主的單一核細(xì)胞和少許多形核細(xì)胞浸潤(rùn)。真皮血 管擴(kuò)張充血明顯。偶可見血管外紅細(xì)胞。
5C. 陽(yáng)性藥地塞米松組小鼠耳組織x400倍表皮增厚減輕，局部水腫及血管擴(kuò)張 明顯減輕，細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，局部充血明顯減少。D. 黃芪曱苷(AS-IV) 5mg/kg誘導(dǎo)相組小鼠耳組織x400倍與沖莫型組相似，未 觀察到顯著的病理學(xué)改變。E. 黃芪曱苷(AS-IV) 10mg/kg誘導(dǎo)相組小鼠耳組織x400倍表皮增厚減輕，局 部水腫及血管擴(kuò)張明顯減輕，細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，局部充血明顯減少。F. 黃芪曱苷(AS-IV) 20mg/kg誘導(dǎo)相組小鼠耳組織x400倍表皮增厚顯著減 輕，局部水腫及血管擴(kuò)張明顯減輕，細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，局部充血明顯減少。病 理?yè)p傷的恢復(fù)接近正常組。圖3黃芪曱苷對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎小鼠模型血清IFN-Y水平的影響 黃芪甲苷(AS-IV) 5, 10， 20mg/kg劑量誘導(dǎo)相給藥均能抑制IFN，的產(chǎn)生。圖4黃芪甲苷對(duì)變應(yīng)性(變態(tài)反應(yīng)性)接觸性皮炎小鼠模型體重指數(shù)的影響；圖5黃芪曱普對(duì)變應(yīng)性(變態(tài)反應(yīng)性)接觸性皮炎小鼠模型胸腺重量指數(shù)的 作用；圖6黃芪曱苷對(duì)變應(yīng)性(變態(tài)反應(yīng)性)接觸性皮炎小鼠模型脾重量指數(shù)的作用；由圖4~圖6可以看出，地塞米松有顯著抑制體重、胸腺與脾重量指數(shù)的作 用，而黃芪曱苷(AS-IV)誘導(dǎo)相給藥未觀察到對(duì)體重和免疫器官重量的明顯影 響，提示可能其副作用較小。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l 黃芪甲苷對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的抑制作用有以下實(shí)驗(yàn)的證據(jù) 黃芪甲苷對(duì)變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎小鼠模型的影響方法ICR清潔級(jí)小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，分為8組，分別為模型組、地塞 米松組(0.65mg/kg)、黃芙曱苷誘導(dǎo)相給藥(5mg/kg組，10mg/kg組、20mg/kg 組)、黃芪甲苷效應(yīng)相給藥(5mg/kg組，10mg/kg組、20mg/kg組)。黃芪曱苷 (腹腔注射方式)誘導(dǎo)相給藥從造模第一日起每天給藥，至攻擊前一日停止給 藥；黃芪曱苷(腹腔注射方式)效應(yīng)相給藥在攻擊后Oh、 5h、 9h、 18h及24h給 藥；地塞米松組從造模第一日起至第八日每天腹腔注射給藥。實(shí)驗(yàn)第1日于小鼠 腹部刮毛約2x2cm2，第2天和第3天于刮毛部位涂5% (5g/100ml) DNCB丙酮 溶液80^d,第7日用1% (lg/100ml) DNCB丙酮溶液涂布于左耳進(jìn)行攻 擊，右耳涂布丙酮溶液作為對(duì)照。第8日攻擊24h,給藥lh后用打孔器打下兩只耳朵，稱重，計(jì)算耳腫脹度，即左耳片與右耳片的重量差；并取出胸腺及脾臟， 稱重，計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù)即每10 g小鼠的胸腺或脾重量。眼眶取血后，離心 得到血清，ELISA方法進(jìn)行IFN-y的測(cè)定。數(shù)據(jù)用S±s表示，采用Student-t #r驗(yàn)。結(jié)果1) 黃芪曱苷在誘導(dǎo)相給藥能顯著減輕小鼠耳廓的腫脹程度，對(duì)于小鼠的變 應(yīng)性接觸性皮炎有明顯的改善作用，提示其對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的抑制作用(附圖 1),2) 病理組織學(xué)檢查表明，對(duì)于充血、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥狀態(tài)，黃芪曱苷 誘導(dǎo)相給藥有非常顯著的改善(附圖2)。3 )黃芪曱苷誘導(dǎo)相給藥對(duì)變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎小鼠模型血清IFN-y水平有 明顯的抑制作用(附圖3)。4)黃芪曱苷誘導(dǎo)相給藥對(duì)體重和免疫器官未觀察到顯著抑制作用(附圖4~6)。這些結(jié)果說(shuō)明在典型的遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型上，黃芪曱苷誘導(dǎo)相給藥有顯著 的抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)的作用，且對(duì)免疫器官整體的抑制作用不明顯，提示可能 副作用會(huì)較地塞米松小，并且抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)的作用機(jī)制與抑制IFN-y這一 介導(dǎo)炎癥的細(xì)胞因子有關(guān)。實(shí)施例2 黃芪曱苷在制備治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用本發(fā)明中黃芪曱苷的使用劑量，因給藥劑型不同而有所不同， 一般用量每人 每天口服50mg-400mg, 注射用量為50 mg -150mg。(由動(dòng)物劑量推算)本發(fā)明中藥物作為抗遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病使用時(shí)，可以采用皮膚、粘膜、 胃腸內(nèi)和胃腸外給藥，可以制成固體形式的片劑、膠嚢劑、顆粒劑、粉劑，或半 固體形式的油膏或軟膏，或粉末狀注射劑，或液體形式的注射劑、懸浮劑、乳劑 或搽劑等劑型供臨床應(yīng)用。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法 制備。遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病包括接觸性皮炎、超敏反應(yīng)性肺炎、同種移植物排 斥、肉芽腫病等。以下配方舉例說(shuō)明本發(fā)明的劑型，但不作為本發(fā)明劑型的限制。 實(shí)施例3 黃芪甲苷氯化鈉注射液的制備7稱取黃芪甲苦10g,依次加入乙醇和丙二醇各2L,攪拌使溶解，加入氯化鈉 900g，加注射用水至100L,混勻，過濾除菌，分裝，每瓶100ml,灌封，得 10mg/100ml滅菌黃芪曱苷氯化鈉注射液。實(shí)施例4 黃芪甲苦脂肪乳靜脈注射制劑的制備稱取黃芪曱苷100mg投入到容器中；加入注射用大豆油50g,攪拌至藥物分 散，投入卵磷脂5-25g、維生素E 100mg攪拌至磷脂溶解形成均勻混和相。將注 射用水800ml置于另一容器中，加入聚維酮10-40g (或聚乙二醇10g)、甘油 20-25g及卵磷脂5-25g于80。C攪拌溶解形成水相；將含有黃芪曱苷、大豆油和卵 磷脂的混和液在80°C、機(jī)械攪拌下與含有甘油、聚維酮(PVP)和卵磷脂的水相混 和，并用1%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6.5-7.0;再加注射用水至1000ml,并在 80。C下繼續(xù)機(jī)械攪拌1個(gè)小時(shí)制成初乳，將制得的初乳經(jīng)高速分散機(jī)分散，移入 高壓均質(zhì)機(jī)，勻化到乳滴粒徑檢查合格為止；再將初乳乳液經(jīng)微孔濾膜過濾，灌 裝，通氮、蓋壓；用旋轉(zhuǎn)高壓滅菌器在IOO'C, FO為20的條件下滅菌。滅菌完 畢后，逐漸冷卻。在室溫下貯存。即制成10mg/100ml的黃芪曱苷脂肪乳靜脈注 射制劑。穩(wěn)定性測(cè)定方法系釆取新鮮制備的脂肪乳，置于具塞離心管中，4000rpm離 心15min后，未發(fā)現(xiàn)分層，也未見藥物沉淀析出。室溫陰涼處貯存一年，乳劑外 觀、粒徑、Zeta電位等理化性質(zhì)以及含量均未發(fā)生明顯變化，表明乳劑穩(wěn)定。檢查結(jié)果脂肪乳靜脈注射液pH值6.6-6.7,乳粒的大小范圍0.05-1.0,。實(shí)施例5 黃芪曱苷凍干粉針劑的制備黃芪甲苷用醫(yī)用有機(jī)溶劑(曱醇、丙酮中的一種或兩種)溶解后，加入表面處 理分散劑攪拌、加熱至35。C 55。C邊攪拌邊加入聚乳酸，反應(yīng)完成后，在 35。C 55。C溫度下加入賦形劑攪拌至反應(yīng)完成，用微孔濾膜過濾，濾液進(jìn)行凍干 的凍干粉針劑。取黃芪曱苷40mg,加曱醇10ml在室溫下攪拌溶解完畢，加入泊洛沙姆 400mg ,室溫下攪拌均勾后，將溶液加熱到35。C 55。C ,加入聚乳酸 (MW=3000)3000mg,以3~8毫升/分鐘的速度注入，邊加邊攪拌，攪拌速度為 800~1800轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌25 40分鐘后，在35。C 55。C和800~1800轉(zhuǎn)/分鐘，加入 乳糖2000mg,繼續(xù)攪拌2 10分鐘，溶液用0.8n微孔濾膜過濾，濾液分裝于西林 瓶中，每瓶2ml，在-45。C一55。C冷凍2~4小時(shí)，即得成品。8上述制得的黃芪甲苷一聚乳酸納米粒粉針，藥物的包封率為92.6%,載藥量 為24.8% ,平均粒徑為217.6nm， Zate電位為-22.71mv,聚散指數(shù)為0.187。實(shí)施例6 黃荒曱苷片劑的制備 黃芪曱苷 200g 淀粉 800g 糊精 500g 糖粉 450g 硬脂酸鎂 50g將黃芪曱苷與部分淀粉，精糊放入攪拌機(jī)內(nèi)充分混合均勾，制成粉體，將剩 余淀粉、糊精及糖粉加適量水?dāng)噭蚍湃胨≈屑訜嶂瞥珊?，用糊與上述混勻的粉 體于攪拌機(jī)內(nèi)制成軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂壓制成10000片。每片 含黃芪曱苷20毫克。實(shí)施例7 黃芪甲苷膠嚢劑的制備黃芪曱苷20g; 淀粉280g;將上述組分倒入攪拌機(jī)，充分?jǐn)嚢杈鶆?1000粒，每粒膠嚢含黃芪甲苷20毫克。實(shí)施例8 黃芪甲苷軟膏的制備取輔料單硬脂酸甘油酯10~100g、硬酯酸10~100g、凡士林10~100g混合， 加熱40~120°C，加入黃芪甲苷5~50g，與上述液體混合加熱充分溶解；另取十二 烷基硫酸鈉l~10g，羥苯乙酯(U lg,加入到20~200g甘油和30~300g水的混合 物中，加熱至50~100°C,待兩種液體溫度降至30 70。C時(shí)，將兩種液體混合，邊 混合邊攪拌，待混合完畢后再攪拌10~60min,制成100支軟膏，每支軟膏含黃芪 甲苷50 500mg。硬脂酸鎂12g ,用膠嚢機(jī)裝，制得由黃芪曱苷膠囊
權(quán)利要求
1.黃芪甲苷在制備治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2. 黃芪甲苷在制備治療接觸性皮炎的藥物中的應(yīng)用。
3. 黃荒曱苷在制備治療超敏反應(yīng)性肺炎的藥物中的應(yīng)用。
4. 黃芪甲苷在制備治療同種移植物排斥的藥物中的應(yīng)用。
5. 黃芪曱苷在制備治療細(xì)胞內(nèi)病原體所致肉芽腫病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
黃芪甲苷在制備治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。黃芪甲苷在制備治療接觸性皮炎的藥物中的應(yīng)用。黃芪甲苷在制備治療超敏反應(yīng)性肺炎的藥物中的應(yīng)用。黃芪甲苷在制備治療同種移植物排斥的藥物中的應(yīng)用。黃芪甲苷在制備治療細(xì)胞內(nèi)病原體所致肉芽腫病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的黃芪甲苷作為用于治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的主要活性成分，可顯著抑制遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)介導(dǎo)的疾病，有望成為一種高效低毒的用于治療遲發(fā)型超敏反應(yīng)性疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK101664416SQ20091003488
公開日2010年3月10日 申請(qǐng)日期2009年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月11日
發(fā)明者敏 洪 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)