專利名稱：：一種葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于抗癌的前體藥物，具體地說是一種葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧咬白蛋白大分子前體藥物。
背景技術(shù)：
：長(zhǎng)期以來，癌癥始終嚴(yán)重威脅著人類的生命。癌癥的預(yù)防與治療任務(wù)十分艱巨?？拱┬滤幬锛靶聞┬偷难芯块_發(fā)具有重大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。在抗癌藥傳統(tǒng)藥物劑型中，包封率低、易滲漏、穩(wěn)定性差、毒副作用大以及耙向性差等問題一直是藥劑學(xué)者致力想要解決的。采用大分子前體藥物可望解決這些問題。5-氟尿嘧啶(5-fluoroumcil，5-Fu)是一種常用的抗癌藥物，主要用于治療各種惡性腫瘤及惡性淋巴瘤轉(zhuǎn)移的患者，療效確切。但5-Fu的吸收不穩(wěn)定，一般均靜脈給藥。由于靜脈注入后血中半衰期僅為7.5-10min,消除極快，需靜脈持續(xù)給藥；并且由于5-Fu對(duì)機(jī)體正常組織和病理部位無選擇性，有嚴(yán)重的骨髓抑制和胃腸道反應(yīng)的毒副作用，這使臨床應(yīng)用受到影響。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開展了許多對(duì)5-Fu的新劑型研究工作，包括骨架片、脂質(zhì)體、復(fù)乳、微乳、微球、毫微粒、絲素蛋白膜、控釋植入劑、藥質(zhì)體等。但均未解決耙向性或毒副作用，或在新劑型制備中包封率、產(chǎn)品貯存過程中滲漏等存在不足。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種不良反應(yīng)較小、肝靶向性強(qiáng)的由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物。本發(fā)明的另一目的是提供上述前體藥物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述前體藥物的應(yīng)用。本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的一種由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物，由以下重量比的組分制成白蛋白5-氟尿嘧啶葉酸=100:1~10:1~10。本發(fā)明由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物的制備方法包括以下步驟(1)制備葉酸偶聯(lián)白蛋白將葉酸溶于適量磷酸鹽緩沖液(PBS),加入適量1-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)活化，再加入適量白蛋白，反應(yīng)1~5h即得；制備5-氟尿嘧啶-l-基乙酸將5-氟尿嘧啶在堿性溶液中溶解，水浴加熱50~80。C持續(xù)1030min,加入適量氯乙酸，攪拌2-10h,即得；(2)制備5-氟尿嘧啶-l-基乙酸活性酯將上迷制備的5-氟尿嘧啶-l-基乙酸溶于二甲基曱酰胺(DMF)，按摩爾比5-氟尿嘧咬-l-基乙酸N-羥基琥珀酰亞胺二環(huán)己基碳二亞胺=0.5~2:14:2~6,反應(yīng)0.52h即得；(3)制備前體藥物將葉酸白蛋白偶聯(lián)物溶液加入到5-氟尿嘧啶-l-基乙酸活性酯溶液中，室溫?cái)嚢柚镣肝鲆簾o吸收即得葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物。上述步驟(1)中所述的堿性溶液為強(qiáng)-喊溶液，如氫氧化鉀溶液。本發(fā)明還提供了上述前體藥物的應(yīng)用，是將由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物應(yīng)用于制備抗癌前體藥物納米粒。所述的制備抗癌前體藥物納米粒是將葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物溶于碳酸鹽緩沖液中，攪拌下加入適量乙醇和戊二醛，室溫交聯(lián)固化，去乙醇，冷凍干燥即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明把"靶向概念"、"前體藥物概念"、"遞送載體概念，，三者結(jié)合在一起，利用葉酸受體在大多腫瘤細(xì)胞表面都有高度表達(dá)，同時(shí)在正常細(xì)胞的表達(dá)又高度保守作為立題科學(xué)依據(jù)，葉酸作為"導(dǎo)向基團(tuán)"；將葉酸與大分子"載體，，(牛血清白蛋白)連接，然后與藥物(5-Fu)連接，組裝成一個(gè)新的化學(xué)實(shí)體，最后制備成(PEG修飾)納米粒。獲得的新化學(xué)實(shí)體(5-氟尿嘧啶大分子前體藥物)為藥物與"導(dǎo)向基團(tuán)，，以及遞送"載體"相連接，藥物經(jīng)過化學(xué)修飾，引入遞送"載體"和"導(dǎo)向基團(tuán)"，制備成PEG修飾的納米粒給藥后，通過"導(dǎo)向基團(tuán)"鎖定靶目標(biāo)，將藥物按預(yù)期目標(biāo)聚集于靶組織(靶細(xì)胞)，進(jìn)入細(xì)胞后通過降解去除運(yùn)送"載體"和"導(dǎo)向基團(tuán)，，后，釋放出具有活性的藥物(5-Fu),在靶部位積聚，最后只在作用部位釋放活性藥物，產(chǎn)生療效，不對(duì)別的組織器官產(chǎn)生作用，大大減少給藥劑量，減少毒副作用，為抗癌的研究開發(fā)提供了新的途徑。圖1是實(shí)施例1的葉酸偶聯(lián)白蛋白洗脫曲線圖。圖2是實(shí)施例5中的納米粒粒徑分布圖。圖3是實(shí)施例5空白白蛋白納米粒的電鏡照片(x60000)。圖4是實(shí)施例5載藥白蛋白納米粒電鏡照片(x60000)。具體實(shí)施例方式以下通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。實(shí)施例11.1葉酸偶聯(lián)白蛋白的合成及其分離將10mg葉酸溶于500^1pH7.4的磷酸緩沖液(PBS)中，攪拌溶解后加入25mgEDC后于磁力攪拌器上攪拌活化5min，再加入150mg牛血清白蛋白的PBS溶液3ml，攪拌下反應(yīng)2h即得。將反應(yīng)液過SephadexG-25柱，收集前段淡黃色有乳光部，為適當(dāng)稀釋后的葉酸偶聯(lián)白蛋白。通過SephadexG-25柱分離可清楚看出葉酸偶聯(lián)的白蛋白在柱最下端，而未反應(yīng)的葉酸在柱的最上端，說明已經(jīng)成功分離純化，最上端仍有未反應(yīng)的葉酸從側(cè)面反應(yīng)出白蛋白已完全反應(yīng)，最下端為已經(jīng)純化的葉酸偶聯(lián)白蛋白，由于葉酸在280和363nrn處有兩個(gè)紫外特征吸收峰，經(jīng)參考文獻(xiàn)后，選在363nm波長(zhǎng)處對(duì)葉酸偶聯(lián)白蛋白的洗脫過程進(jìn)行紫外監(jiān)測(cè)。利用洗脫曲線A-V(ml)確證即得。還可運(yùn)用蛋白質(zhì)電泳技術(shù)、酶降解方法等作進(jìn)一步的確認(rèn)葉酸是否已經(jīng)成功偶聯(lián)白蛋白。1.2葉酸偶聯(lián)白蛋白的洗脫曲線由于葉酸在280和363nm處有兩個(gè)紫外特征吸收峰，經(jīng)參考文獻(xiàn)后，選在363nm波長(zhǎng)處對(duì)葉酸偶聯(lián)白蛋白的洗脫過程進(jìn)行紫外監(jiān)測(cè)。葉酸偶聯(lián)白蛋白的洗脫曲線圖見圖1。由洗脫曲線圖所示，第一個(gè)峰對(duì)應(yīng)的是分子量大的葉酸偶聯(lián)白蛋白，第二個(gè)峰對(duì)應(yīng)的是分子量較小的游離葉酸，兩者通過葡聚糖凝膠柱效應(yīng)得到了完全的分離。1.3葉酸白蛋白偶聯(lián)物的紫外掃描分析①偶聯(lián)物在葉酸(363nm)和白蛋白(278nm)的吸收峰處產(chǎn)生位移，可見葉酸已經(jīng)成功偶聯(lián)白蛋白②為了鑒定葉酸與白蛋白的偶聯(lián)效果，以蒸餾水為空白，分別對(duì)白蛋白(BSA)和偶聯(lián)物(F-BSA)進(jìn)行紫外掃描，葉酸(F)掃描光譜以pH7.4的磷酸緩沖液為空白，其中F、BSA和F-BSA三者的濃度分別為20嗎/ml,100嗎/ml,100嗎/ml.通過紫外掃描圖譜及吸光度測(cè)定表明，在葉酸與白蛋白重疊峰處，相同濃度的BSA和F-BSA吸光度存在明顯差異，F(xiàn)-BSA吸光度值明顯大于BSA的吸光度值，結(jié)果表明葉酸已成功偶聯(lián)白蛋白。紅外圖i普顯示BSA在3419.9cm"(-COOH伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；1621.1cm-1(C=C伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；618.9cm"(-C-C伸縮振動(dòng)最大吸收峰)分別有特征吸收峰，F(xiàn)-BSA在在3383.8cm"(-COOH伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；1643.6cm"(C=C伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；1083.9cm"(-C-N伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；618.9cm"(-C-C伸縮振動(dòng)最大吸收峰)分別有特征吸收峰。DTA數(shù)據(jù)顯示BSA在388.7。C有尖銳峰，F(xiàn)-BSA在371.2。C有尖銳峰，進(jìn)一步補(bǔ)充葉酸成功偶聯(lián)白蛋白。1.4葉酸偶聯(lián)白蛋白偶聯(lián)比的計(jì)算Q準(zhǔn)確稱量葉酸2.5mg,用PBS配制成25ml的儲(chǔ)備液，然后分別吸取1,2,3，4，5，6ml置于100ml的容量瓶中，用PBS定容，使?jié)舛瘸?.0，2.0,3.0,4.0，5.0,6.0嗎/ml,并分別進(jìn)行紫外圖譜掃描，從紫外圖諶上獲得葉酸的最大吸收峰處的吸光度A入max,結(jié)果見表1:表l不同濃度的葉酸的吸光度值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)表l不同濃度葉酸所對(duì)應(yīng)得A入應(yīng)做校正標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程1為y=57.486x+0.0018R2=0.997。②準(zhǔn)確稱量BSA62.5mg，用蒸餾水配制成25ml的儲(chǔ)備液，然后分別吸取l,2,3,4,5,6ml置于100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容，使?jié)舛瘸?5，50,75，100,125，150)ag/ml,并分別進(jìn)行紫外圖譜掃描，從紫外圖譜上獲得葉酸的最大吸收峰處的吸光度A^^結(jié)果見表2:表2白蛋白不同濃度下對(duì)應(yīng)的吸光度值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)表2不同濃度葉酸所對(duì)應(yīng)得A一aJ故校正標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程2為y=0.6697x-0.0089R2=0.9888。③將柱層析獲得的F-BSA偶聯(lián)物進(jìn)行紫外掃描得到Ax腿3中白蛋白的濃度，因?yàn)樵谂悸?lián)過程中葉酸過量，加入的白蛋白全部參與反應(yīng)，根據(jù)體積比計(jì)算出偶聯(lián)物中的BSA濃度，將此濃度代入回歸方程2得出Ax皿2④按照吸光度的可疊加原理，偶聯(lián)物的總吸光值為葉酸和白蛋白的疊加吸光值，所以A入隨「A,腿3-Ax賺2代入回歸方程一得出偶聯(lián)物中葉酸的濃度。偶聯(lián)比=(葉酸的濃度+葉酸的分子量)/(白蛋白的濃度+白蛋白的分子量)。偶聯(lián)物的吸光度值為0.232，根據(jù)體積比偶耳關(guān)物中BSA的濃度為114fig/ml，代入上述方程得到白蛋白的吸光度值為0.068，可知葉酸的吸光度值為0.165,代入方程一得偶聯(lián)物中葉酸的濃度為0.0029,根據(jù)上述公式計(jì)算偶聯(lián)比為4，即一個(gè)白蛋白分子偶聯(lián)上4個(gè)葉酸分子，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，每個(gè)蛋白質(zhì)分子偶聯(lián)上3個(gè)葉酸分子即具有靶向性。實(shí)施例22.15-氟脲嘧啶-l-基乙酸(5-FUA)的制備概述在配有回流冷凝器的三頸燒瓶中，加入一定量的氫氧化鉀水溶液，攪拌使其溶解后，加入5-氟尿嘧啶，水浴加熱，攪拌一定時(shí)間，緩慢滴加含氯乙酸的水溶液，水浴加熱，特定溫度下攪拌5h,反應(yīng)過程中用熒光薄層層析硅膠G板檢測(cè)，待原料點(diǎn)消失后停止反應(yīng)，冷卻至室溫，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH,放入水箱冷藏室中冷卻，如有沉淀析出，濾除，再調(diào)pH，冷卻，過濾，沉淀物用蒸餾水洗滌3次，用水重結(jié)晶，烘千得針狀晶體，計(jì)算產(chǎn)率。同時(shí)用紫外、紅外光譜等檢測(cè)。2.25-氟脲嘧啶-l-基乙酸(5-FUA)的制備結(jié)果OOKOH產(chǎn)物用水重結(jié)晶，除掉了未完全反應(yīng)的5-FU和氯乙酸。產(chǎn)物熔點(diǎn)>270°。，產(chǎn)率為81.98%,紫外檢測(cè)結(jié)果5-FU的紫外最大吸收峰在265nm,而合成的5-氟脲嘧啶-l墨基乙酸(5-FUA)的最大吸收峰在273nm，紅外數(shù)據(jù)顯示氟尿嘧啶在3134cnf1(vN—H)、3069cm-1(vc=c)、3031cm-1(v腿)、1661cm-1(vc=0)、1430cm-!(5N-H)、1223cm」(5c-F)、814cm-1(5C.F)處分別有特征吸收峰，5-氟脲嘧啶畫l國(guó)基乙酸在3197.8cm"(-COOH伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；1741.6cm"(C20伸縮振動(dòng)最大吸收峰)；1669.3cm"(C4=0,CKM中縮振動(dòng)最大吸收峰),1425.3cm'1(N3-H彎曲振動(dòng)最大吸收峰)，通過上述紫外及紅外圖譜的比較可確認(rèn)5-FUA的生成。實(shí)施例33.15-氟脲嘧啶-l-基乙酸活性酯的制備將0.465mg5-氟脲嘧啶-l-基乙酸溶于O.lmlDMF中，按摩爾比為5-氟脲嘧啶-l-基乙酸:N-羥基琥珀酰亞胺(NHS):二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)=1:2:4活化60min，活化后的以4000r/min離心15min,取上清，棄沉淀，即得，用薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)。計(jì)算產(chǎn)率。測(cè)定熔點(diǎn)。3.25-氟脲嘧啶-l-基乙酸活性酯的制備結(jié)果利用碳二亞胺法(DCC,NHS)制備活性酯，生成的產(chǎn)物用乙醚洗滌純化，熔點(diǎn)為200-20rC，產(chǎn)率為85.62%。實(shí)施例44.1葉酸白蛋白的偶聯(lián)物與5-氟脲嘧啶-l-基乙酸活性酯的連接將葉酸偶聯(lián)白蛋白溶些許的磷酸緩沖液，完全溶解后慢慢加入到上述制備的5-氟脲嘧啶-l-基乙酸活性酯的DMF溶液中，室溫?cái)嚢?，將反?yīng)液透析，直至透析液在265nm下無吸收，冷凍干燥得目標(biāo)產(chǎn)物。利用酶降解、蛋白質(zhì)電泳技術(shù)等方法可確定新化合物的生成與否。4.25-FUA活性酯與BSA(BSA-F)的偶聯(lián)結(jié)果因?yàn)?-FUA的紫外吸收在273.5歸處，與BSA(278.5nm)或BSA-F(281.5)的紫外吸收產(chǎn)生重疊，通過紫外很難檢驗(yàn)是否反應(yīng)上。于是通過用胰蛋白酶水解偶聯(lián)物的方法來檢驗(yàn)是否已經(jīng)反應(yīng)上。將透析完全的偶聯(lián)物5-FU-BSA-F(5-FU-BSA)水溶液與胰蛋白酶一起放入透析袋中，一段時(shí)間后檢測(cè)到透析外液中有氟尿嘧啶的存在，即說明已經(jīng)成功偶聯(lián)實(shí)施例55-Fu前體藥物納米粒制備將F-BSA-5-Fu溶于不同pH的Na2COrNaHC03緩沖液中，攪拌下加入乙醇和戊二醛適量，室溫交聯(lián)固化，減壓濃縮除去乙醇，得納米粒膠體溶液。最后采用冷凍干燥方法制備納米粒。利用電子顯微鏡觀察其形態(tài)以及粒徑。①藥物濃度的考察，結(jié)果見表3:8表3藥物濃度考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>②pH的考察結(jié)果見表4:表4pH的考察結(jié)果pH肉眼觀察平均粒徑nm多分散系數(shù)7-9藍(lán)色乳光不明顯，溶液基本澄清--10-11藍(lán)色乳光不明顯，溶液基本澄清--12藍(lán)色乳光明顯，基本無粘連152.70.12413藍(lán)色乳光明顯，基本無粘連200.60.756③交聯(lián)劑用量的考察見表5表5交聯(lián)劑用量的考察<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>納米粒粒徑分布圖見圖2。未連接5-Fu的葉酸白蛋白偶合物(BSA-F)與連接5-Fu的葉酸白蛋白偶聯(lián)物(5-FUA-BSA-F)初步摸索制備得到納米粒。取一定量的納米粒于吐溫水溶液中超聲分散后，在透射電鏡下拍照，照片見圖3、圖4,形態(tài)圓整，粒徑在200nm左右。實(shí)施例6體內(nèi)把向性分布觀察利用不同給藥途徑，觀察5-Fu前體藥物對(duì)小鼠腫瘤模型(肝癌)靶器官的靶向效率。利用納米粒包裹焚光素，熒光定量法測(cè)定腫瘤實(shí)體與不同臟器的納米粒分布情況，結(jié)果見表6和表7:表6未連接葉酸的5-Fu-白蛋白化合物的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果(iJgZ土s,n=3)組織0.5hl.Oh2.0h4.0h8.0h12.0h腫瘤2.54±0.0654.86±0.1028.02±0.1885.95±0.2044.72±0.5692.74±0.384心臟1.83±0.0743.02±0.0645.08±0.2034.85±0.1522.21±0.1030.92±0.111肝臟2.26±0.0584.62±0.0446.39±0.3115.12±0.6923.58±0.3011.80±0.589脾1.63±0.2211.84±0.2502.96±0.1402.34±0.5841.87±0.1410.47±0.407肺1.69±0.1572.53±0.5164.25±0.3443.33±0.3671.89±0.0510.62±0.093腎2.00±0.1903.51±0.5535.52±0.2644.46±0.3132.14±0.2011.10±0.116表6中顯示藥物為未連接葉酸的5-Fu-白蛋白化合物，在腫瘤實(shí)體部位的熒光定量與肺臟等器官相差無幾，無顯著性差異。表7連接葉酸的5-Fu-白蛋白化合物的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果0ig,x士s,n=3)組織0.5hl.Oh2.0h4.0h8.0h12.0h腫瘤23.7±0.28419.9±0.24015.6±0.25212.1±0.6328.76±0.5825.89±0.072心臟8.97±0.1818.38±0.3397.15±0.1935.91±0.0263.11±0.1811.14±0.155肝臟12.0±0.55110.9±0.0838.21±0.2946.67±03884.30±0.2762.19±0.134脾6.34±0.5704.92±0.1363.93±0.0862.93±0.0731.71±0.0990.31±0.100肺7.16±0.4285.96±0.0844.07±0.1252.43±0.2101.59±0.5290.51±0.106腎11.4±0.5419.95±0.1447.60±0.4445.60±0.2623.58±0.3210.55±0.058表7為連接葉酸的5-Fu-白蛋白-葉酸化合物，腹腔注射給藥后，在腫瘤部位熒光定量明顯高于其他組織器官(統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性差異)，表明連接葉酸的5-Fu前體藥物對(duì)肺瘤具有選擇性靶向作用。實(shí)施例7對(duì)動(dòng)物腫瘤模型的藥效學(xué)觀察將H22肝癌細(xì)胞(1x1(T個(gè)/ml)注入小鼠腹腔內(nèi)，3個(gè)星期后處死小白鼠，取其體內(nèi)腹水，于2000r/min離心2min后，吸取上清，前肢腋窩皮下注入0.02ml,建立小鼠肝癌實(shí)體模型，同時(shí)給予藥物。IO天后處死小白鼠，取其肝臟進(jìn)行定性分析(病理切片)和抑瘤試-險(xiǎn)，比較不同劑量，不同組別5-Fu前體藥物的作用。同時(shí)采用陽(yáng)性對(duì)照組、無葉酸連接的前體藥物(陰性對(duì)照組)等對(duì)比觀察，結(jié)果見表8和表9:10表85-氟尿嘧啶前體藥物納米粒對(duì)荷瘤小鼠生長(zhǎng)和腫瘤的影響組別劑量mg/kg/d小鼠個(gè)數(shù)小鼠增重/g瘤重/g抑瘤率/%陰性組(生理鹽水)1012.37±2.4402.108±0.5887-陽(yáng)性組(5-FU)109.362±3.7651.399±0.2814*33.63%5-FU-BSANP1010.16±2.3831.675±0.396220.54%5-FU-BSANP-folate高1011.48±4.4961.113±0.1393*47.19%5-FU-BSANP-folate中1011.33±2.4811.259±0.2331*40.27%5-FU-BSANP-folate低1010.90±2.9831.333±0.6373*36.76%freefolate+5-FU-BSANP-folate1014.42±3.4261.745±0.109917.20%與生理鹽水《且相比，*P<0.05動(dòng)物肝癌腫瘤模型的藥效學(xué)觀察，結(jié)果顯示連接葉酸的f;-Fu前體藥物具有明顯的抑瘤效果，而未連接葉酸的5-Fu-白蛋白化合物抑瘤效果不顯著；采用葉酸先阻斷其受體，再給予5-Fu前體藥物，抑瘤效果不顯著，表明連接葉酸的-Fu前體藥物通過葉酸的''導(dǎo)向"作用選擇性作用在腫瘤細(xì)胞。表95-氟尿嘧啶前體藥物納米粒對(duì)脾指數(shù)及胸腺指數(shù)的影響組別劑量mg/kg/d小鼠個(gè)數(shù)脾指數(shù)胸腺指數(shù)陰性組(生理鹽水)109.597±5.7902.492±1.070陽(yáng)性組(5-FU)103.363±0.7339*0.8513±0.1280*5-FU-BSANP1012.51±4駕2.809±0.96085-FU陽(yáng)BSANP-folate高105.898±3.8071.960±0.98835墨FU-BSANP-folate中106.674±1.9342.813±0.86095-FU-BSANP-folate低1013.06±6.5443.066±1.1755-FU誦BSANP-folate+freefolate1010.12±3.2982.911±1.381與生理鹽水組相比，*P<0.05ii權(quán)利要求1.一種由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物，其特征在于由以下重量比的組分制成白蛋白∶5-氟尿嘧啶∶葉酸＝100∶1～10∶1～10。2.權(quán)利要求l所迷的前體藥物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)制備葉酸偶聯(lián)白蛋白；制備5-氟尿嘧啶-l-基乙酸；(2)制備5-氟尿嘧啶-l-基乙酸活性酯；(3)將葉酸白蛋白偶聯(lián)物溶液加入到5-氟尿嘧啶-l-基乙酸活性酯的二曱基曱酰胺溶液中，室溫?cái)嚢柚镣肝鲆簾o吸收即得葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物。3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所述制備葉酸偶聯(lián)白蛋白是將葉酸溶于適量磷酸鹽緩沖液，加入適量l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽活化，再加入適量白蛋白，反應(yīng)l-5h。4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所述制備5-氟尿嘧啶-l-基乙酸是將5-氟尿嘧啶在氬氧化鉀溶液中溶解，水浴加熱50-80。C持續(xù)1030min,加入適量氯乙酸，攪拌210h。5.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述步驟(2)是步驟(1)制得的5-氟尿嘧啶-l-基乙酸溶于二甲基曱酰胺中，其摩爾比為5-氟尿嘧啶-1-基乙酸N-羥基琥珀酰亞胺二環(huán)己基碳二亞胺=0.5-2:14:2~6,反應(yīng)0.5~2h。6.權(quán)利要求1所述前體藥物的應(yīng)用，其特征在于是將葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物應(yīng)用于制備抗癌前體藥物納米粒。7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述制備抗癌前體藥物納米粒是將葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物溶于碳酸鹽緩沖液中，攪拌下加入適量乙醇和戊二醛，室溫交聯(lián)固化，去乙醇，冷凍干燥即得。全文摘要本發(fā)明公開了一種由葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物，由以下重量比的組分制成白蛋白∶5-氟尿嘧啶∶葉酸＝100∶1～10∶1～10。本發(fā)明還公開了所述前體藥物的制備方法，包括以下步驟制備葉酸偶聯(lián)白蛋白；制備5-氟尿嘧啶-1-基乙酸；制備5-氟尿嘧啶-1-基乙酸活性酯；將葉酸白蛋白偶聯(lián)物溶液加入到5-氟尿嘧啶-1-基乙酸活性酯溶液中，室溫?cái)嚢柚镣肝鲆簾o吸收即得葉酸介導(dǎo)的5-氟尿嘧啶白蛋白大分子前體藥物。本發(fā)明還公開了上述前體藥物在制備抗癌前體藥物納米粒中的應(yīng)用。本發(fā)明把“靶向概念”、“前體藥物概念”、“遞送載體概念”三者結(jié)合在一起，提供的前體藥物大大減少了給藥劑量，減少了毒副作用，為抗癌的研究開發(fā)提供了新的途徑。文檔編號(hào)A61K47/48GK101461948SQ20091003641公開日2009年6月24日申請(qǐng)日期2009年1月4日優(yōu)先權(quán)日2009年1月4日發(fā)明者亮朱申請(qǐng)人:廣東藥學(xué)院