專利名稱：葫蘆巴總皂苷提取物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥葫蘆巴總皂苷提取物的新用途，具體涉及一種葫蘆巴總皂苷提 取物在治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng)耐量下降的藥品或保健品的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
睪酮是雄激素的主要成份，屬C-19類固醇激素，主要在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中合成，睪酮 除具有產(chǎn)生和維持男性生殖器官、生殖功能和第二性征等作用外，近年研究發(fā)現(xiàn)睪酮水
平低下會(huì)引起還有諸多疾病和運(yùn)動(dòng)耐量降低
男性冠心病患者血漿睪酮較正常人明顯低下。對(duì)伴有雄激素水平下降的冠心病患者 進(jìn)行干預(yù)研究時(shí)也發(fā)現(xiàn)，長期干預(yù)治療，可以明顯緩解老年男性心絞痛患者的臨床癥狀
和ECG缺血改變， 一次靜脈注射的短期干預(yù)也可使運(yùn)動(dòng)誘發(fā)的心絞痛發(fā)生率下降，運(yùn) 動(dòng)試驗(yàn)陽性率降低，并顯著延長心絞痛患者的總運(yùn)動(dòng)時(shí)間和運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)中出現(xiàn)段壓低至 的時(shí)間?？梢姴G酮水平下降可能是男性冠心病發(fā)病的重要危險(xiǎn)因子，維持生理濃度的睪 酮有對(duì)抗男性冠心病的作用(參見任國慶，孫廣輝.睪酮與男性冠心病的關(guān)系.國外醫(yī)學(xué). 心血管疾病分冊(cè),2002,29 (2) :81-83)。
同時(shí)體內(nèi)睪酮水平降低可導(dǎo)致中老年男子部分雄激素缺乏綜合征(PADAM)，嚴(yán)重 影響老年人的身心健康，降低生活質(zhì)量。 一般出現(xiàn)在50歲以后。因此提高睪酮水平對(duì)改 善男性老年人的生活質(zhì)量(參見陳倩，李小鷹.老年男性雄性激素補(bǔ)充治療的臨床應(yīng)用. 中華老年心腦血管病雜志，2007,9 (11) :786-787)。
代謝綜合征(MS)是一組以胰島素抵抗為中心的多種代謝異常的集合，主要包括 高血壓、高脂血癥、糖尿病、肥胖等代謝異常表現(xiàn)
性功能減退及運(yùn)動(dòng)耐量降低。研究發(fā)現(xiàn)睪酮水平低下是MS的特征，與MS的發(fā)生、 發(fā)展有密切關(guān)系，甚至有可能與MS的發(fā)展終點(diǎn)，
比如2型糖尿病、心血管疾病的發(fā)生亦有關(guān)系。低睪酮水平者發(fā)生MS的概率明顯增 高。低睪酮水平是MS發(fā)生的重要標(biāo)志，因此提高睪酮水平是對(duì)MS是必須的(參見 姚玉婷，高天，陸惠華，沈麗蘊(yùn).老年血清睪酮與代謝綜合征關(guān)系.老年醫(yī)學(xué)與保健，2007,13 (5) 295-303)。睪酮是體內(nèi)主要的雄激素，許多研究證明，睪酮能顯著增加運(yùn)動(dòng)員肌肉蛋白質(zhì)的合 成和肌肉力量，提高肌肉對(duì)葡萄糖的吸收和肌糖元的合成與貯備。此外，研究表明血清睪 酮水平與最大攝氧量呈高度正相關(guān)，與耗氧量呈高度負(fù)相關(guān)，在一定條件下睪酮能增強(qiáng) 運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)能力。中醫(yī)藥學(xué)的應(yīng)用是目前合理防治運(yùn)動(dòng)性低血睪酮的有效手段(參見 王啟榮，楊則宜.長時(shí)間運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致低血睪酮的可能機(jī)制及其干預(yù)手段.西安體育學(xué)院學(xué) 報(bào)，2005，22 (1): 78-82)。
葫盧巴為豆科植物葫戸巴屬葫蘆巴(7Hgo e//fly^ "A -gmec"/ ￡.)種子，葫蘆巴 干燥成熟種子作為常用中藥收入《中華人民共和國藥典》。葫蘆巴在我們屬藥食同源的 品種，目前葫蘆巴總皂苷主要在以下方面的應(yīng)用，預(yù)防和治療脂肪肝、降血糖血脂、對(duì) 腦缺血的保護(hù)作用、改善學(xué)習(xí)記憶障礙、抗炎的作用。關(guān)于葫蘆巴總皂苷的藥理作用可 參見蘭衛(wèi)，高曉黎，毛新民"葫蘆巴藥理作用的研究進(jìn)展"[J1.西北藥學(xué)雜志，2008， 23 (5): 335-337。
從葫^巴中提取皂苷常采用水回流提取法、有機(jī)溶劑提取法和酶解法等。張黎明等 用乙醇提取工藝皂苷的收率高于水提工藝，皂苷提取率達(dá)78.3% (參見《從中藥葫蘆巴 種子提取薯蕷皂甙元工藝的研究》[J.天津輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003， 2(18): 6-8)。張黎 明等采用酶解法提取葫蘆巴中皂苷，加酶后皂苷提取率為83.6%，未加酶的結(jié)果則為 58.4% (參見《纖維素酶法提取葫盧巴甾體總皂苷工藝條件的優(yōu)化》J.食品科學(xué)，2006, 2(27):157-159)。姜彬慧等報(bào)道在溫度為50°C， pH4.4，反應(yīng)72h的酶解條件下，皂苷 提取率為2.0% (參見《纖維素酶提高葫蘆巴有效成分收率的研究》[Jj.中草藥，2004， 6(35):626-629)。荊宇，趙余慶將葫蘆巴用85%乙醇提取兩次，提取液濃縮后用水稀釋 成30%，采用D101大孔樹脂吸附。結(jié)果表明提取液經(jīng)過樹脂處理后，溶液明顯澄清， 大量的水溶性膠體、色素被除去。樹脂法能夠有效地對(duì)葫蘆巴中的有效成分進(jìn)行富集， 提高收率，使有效成分含量明顯增加(參見《大孔吸附樹脂提取純化葫蘆巴中總皂苷的 工藝研究》[Jl.中藥研究與信息，2005， 7(6):19-21.)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種葫蘆巴總皂苷提取物在治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng) 耐量下降的藥品或保健品的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明的技術(shù)方案就是葫蘆巴總皂苷用于制備治療或預(yù)防睪酮水平降低和 運(yùn)動(dòng)耐量下降藥物或保健品中的用途。
所獲得的藥品或保健品在醫(yī)學(xué)及運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。
4本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，葫蘆巴總皂苷能提高血清睪酮水平，但各劑量組對(duì)大鼠 體重和生殖器官臟器系數(shù)的影響不明顯。
本發(fā)明還研究發(fā)現(xiàn)，葫蘆巴總皂苷能提高小鼠游泳時(shí)間，但對(duì)小鼠體重?zé)o影響。 本發(fā)明還研究發(fā)現(xiàn)，葫蘆巴總皂苷能延長缺氧下小鼠呼吸停止時(shí)間。 上述提取物不加或加入其可接受的輔料制成相應(yīng)的制劑。
本發(fā)明提供的葫蘆巴總皂苷提取物經(jīng)過加工制備的適合服用的任何單位劑量形式 的制劑。劑型包括片劑，分散片，泡騰片，凍干粉針，糖衣片劑，腸溶衣片劑，膠囊劑， 硬膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒劑，沖劑，丸劑，散劑，丹劑，混懸劑，粉劑，需要時(shí)可以 制成緩釋制劑，腸溶制劑。在制備成藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可 接受載體選自抗氧劑、鰲合劑，表面活性劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、溶劑緩釋材 料、腸溶材料、pH調(diào)劑、矯味劑、色素等，常用的載體如乳糖、葡萄糖、纖維素及 纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、糊精、淀粉、P-環(huán)糊精、滑石粉、硬脂酸鈣、 硬脂酸鎂、羧甲基淀粉等。
按照人和動(dòng)物的體表面積比計(jì)算，小鼠的每公斤體重用量除以9.1得人每公斤體重 用量，大鼠的每公斤體重用量除以6，3得人每公斤體重用量。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案為本發(fā)明的制劑需根據(jù)病人的病情，確定用法用量，可 2-3次/日服用，人日用量為200-4000mg;優(yōu)選600-1200mg;或者人日用量為 0.0036—0.0145g/kg體重。
本發(fā)明提供一種葫蘆巴總皂苷提取物在治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng)耐量下降 的藥品或保健品的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
為了更好的理解本發(fā)明的應(yīng)用實(shí)質(zhì)，以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)--步說明。 實(shí)施例1
取葫戸巴10公斤，加入50%乙醇120公斤，回流提取3次，每次時(shí)間為l小時(shí)， 離心，合并離心液，濃縮，得濃縮液；濃縮液上D101大孔樹脂柱吸附，水洗棄去，用 0.05。/。NaOH溶液洗滌，80%乙醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮至稠膏，真空千燥得葫 蘆巴總皂苷提取物，以薯蕷皂苷元計(jì)，皂苷含量為35.7%。本提取物用于實(shí)施例2-5。
本實(shí)施例中提取總皂甙的方法是參照《大孔吸附樹脂提取純化葫蘆巴中總皂苷的工 藝研究》[J.中藥研究與信息，2005， 7(6):19-21.。 實(shí)施例2胡蘆巴總皂苷提取物急性毒性試驗(yàn) 1實(shí)驗(yàn)材料
1.1藥物胡蘆巴總皂苷粉末，取本品粉末15g，加水至100ml，制成lml含0.15g提
取物的混懸液，此濃度為最大濃度。
1.2動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18 22g， 60只，雄性，由長沙市開富區(qū)東創(chuàng)實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK (湘)2006-0001號(hào)；湖南省藥 品檢驗(yàn)所動(dòng)物房提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK (湘)2003-0006號(hào)。實(shí)驗(yàn)室溫度 18 25°C,動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，每籠5只，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由攝食、攝水。 2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1預(yù)試先取小鼠20只(雄性)，體重18 22g。 一次性灌胃給藥0.8ml/只，觀察七 天，結(jié)果無動(dòng)物死亡，故進(jìn)行最大給藥量測定。 2.2最大給藥量測定
取小鼠40只(雄性)，體重18 22g，均分成兩組01=20)，給藥組和對(duì)照組。隔食 不隔水12小時(shí)后，給藥組動(dòng)物灌胃上述呋喃固醇混懸液0.8ml/20g，對(duì)照組動(dòng)物灌胃等 體積注射用水，間隔12小時(shí)，共給藥二次，給藥后連續(xù)觀察15天動(dòng)物的毒性反應(yīng)，包 括行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、食欲、大小便，以及毛發(fā)、呼吸，口、鼻、眼、耳、肛門等有 無異常分泌物，體重變化及死亡等情況。結(jié)果除給藥組動(dòng)物在給藥后活動(dòng)略有減少外， 其它均未見異常。動(dòng)物全部成活，對(duì)照組體重平均增加36.0%，給藥組體重平均增加 35.5%。第十五天處死小鼠解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，均未見表 面與切面異常。結(jié)果小鼠ig呋喃固醇每日最大給藥量為3.75g提取物/kg，相當(dāng)于臨床 60公斤成人一日用量(0.6g提取物/日，0.6g/60kg:0.01g提取物/kg)的375倍。
表l胡戸巴總皂苷小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表
名稱動(dòng)物數(shù)最大濃度最大體積給藥次數(shù)最大給藥量動(dòng)物死亡 行為飲食大小體重增相當(dāng)人用
(只) (g/ml)(ml/20g)(次/日)(g/Kg/日) 數(shù)(只) 活動(dòng) 便 長(％)量的倍數(shù)
對(duì)照組20— 0.8 2 — 0 正常正常正常36.0 --
胡盧巴20 0.150.8 2 12.S 0 正常正常正常36.2 375皂
苷
3結(jié)論
6呋喃固醇小鼠灌胃3.75g提取物/kg，相當(dāng)于臨床60公斤成人一日用量的375倍， 未見毒性反應(yīng)，提示本品毒性小，在臨床推薦的用藥劑量下使用有一定的安全性。
胡蘆巴總皂苷提取物對(duì)大鼠體重和血清睪酮的影響 1實(shí)驗(yàn)材料
試劑本發(fā)明葫蘆巴總皂苷粉末，實(shí)驗(yàn)時(shí)將粉末溶解于蒸餾水。動(dòng)物清潔級(jí)昆明 種SD大鼠，由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證 SCXK(湘)2006-0001號(hào)；湖南省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證 SYXK(湘)2003-0006號(hào)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3日，且清潔級(jí)昆明種SD大鼠均為每籠5 只飼養(yǎng)。
2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
2.1藥物配制方法和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般分為四組第一組為正常對(duì)照組，給等體積蒸餾水；第二、三、四組 分別為葫盧巴總皂苷高、中、低劑量組，用葫蘆巴總皂苷粉末加蒸餾水分別配成 0.91g/100ml、 0.46g/100ml、 0.23g/100ml的濃度供大鼠用；所有動(dòng)物均灌胃給藥，大鼠 10ml/kg體重。除另有規(guī)定外， 一般每天給藥一次，連續(xù)灌胃，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在18 28°C。
將雄性大鼠40只(體重180.5±15.88)隨機(jī)分為4組，每組10只。每天灌胃給樣1 次，連續(xù)30天。分別于第1天、第8天、第15天、第22天、第30天大鼠稱重。觀察 葫蘆巴總皂苷對(duì)大鼠體重的影響，結(jié)果見表2，采用DAS1.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。第30天 每只大嚴(yán)腹股動(dòng)脈取血，分離血清，采用放射免疫法(TRIA試劑盒)測定血清睪酮水 平。結(jié)果見表3，采用DAS1.0軟件進(jìn)行Dumiet檢驗(yàn)。同時(shí)取右睪丸、右附睪、右前列 腺稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果見表4，采用DAS1.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表2葫蘆巴總皂苷對(duì)大鼠體重的影響(I士SD， n=10)
組別 劑量(g/kg) 第l天體重(g) 第8天體重(g)
空白對(duì)照組 等體積水 182.3士15.9 218.2±19.1
葫盧巴總皂苷高劑量組 0.091 180.4±12.7* 212.5±14.8*
葫蘆巴總皂苷中劑量組 0.046 176.1±17.1* 202.5±18.4*
實(shí)施例3
2.2結(jié)果:
7葫蘆巴總皂苷低劑量組 0.023 183.6±20.9* 217.1±26.6*
組別 第15天體重(g)第22天體重(g) 第30天體重(g)
空白對(duì)照組 259.2±27.8 302.6±31.3 319.6±43.4
葫戸巴總皂苷高劑量組243.9±18.0* 282.9±35.2* 310.1±48.4*
葫蘆巴總皂苷中劑量組236.6±21.6* 276.9±29.7* 299.5±36.2*
葫戸巴總皂苷低劑量組253.9±26.4* 294.1±34.8* 317.9±50.7*
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01 表3葫蘆巴總皂苷對(duì)大鼠血清睪酮水平的影響(7士SD， n=10)
組別 劑量(g/kg) 血清睪酮值(ng/dL)
空白對(duì)照組 等體積水 152.7±56.79
葫蘆巴總皂苷高劑量組 0.091 334.0±130.7**
葫蘆巴總皂苷中劑量組 0.046 295.7±107.4**
葫蘆巴總皂苷低劑量組 0.023 188.3±94.0*
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
表4葫盧巴總皂苷對(duì)大鼠生殖臟器系數(shù)的影響(7iSD， n=10)
組別劑量(g/kg)右睪丸重(g/100g體重)
空白對(duì)照組等體積水0.263±0.031
葫蘆巴總皂苷高劑it組0.0910.272±0.058*
葫蘆巴總皂苷中劑it組0.0460.273±0.041*
葫蘆巴總皂苷低劑J隨0.0230.284±0.050*
組別右附睪重(g/100g體重)右前列腺重(g/100g體重)
空白對(duì)照組0.473±0.1330.066±0.027
葫蘆巴總皂苷高劑it組0.470±0.104*0.057±0.032*
葫蘆巴總皂苷中劑ii組0.508±0.103*0.066±0.026*
葫蘆巴總皂苷低劑it組0.497±0.142*0.064±0.021A
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
結(jié)果表明，葫戸巴總皂苷高、中劑量組能明顯提高血清睪酮水平，但各劑量組對(duì)大 鼠體重和生殖器官臟器系數(shù)的影響不明顯。實(shí)施例4
葫蘆巴總皂苷抗疲勞作用(小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)) 1實(shí)驗(yàn)材料
試劑本發(fā)明葫蘆巴總皂苷粉末，實(shí)驗(yàn)時(shí)將粉末溶解于蒸餾水。動(dòng)物清潔級(jí)昆明 種小鼠，由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證
SCXK(湘)2006-0001號(hào)；湖南省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證 SYXK(湘)2003-0006號(hào)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3日，且清潔級(jí)昆明種小鼠均為每籠5只飼 養(yǎng)。
2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
2.1藥物配制方法和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般分為四組第一組為正常對(duì)照組，給等體積蒸餾水；第二、三、四組
分別為葫蘆巴總皂苷高、中、低劑量組，用葫蘆巴總皂苷粉末加蒸餾水分別配成
0.65g/100ml、 0.32g/100ml、 0.16g/100ml的濃度供小鼠用；所有動(dòng)物均灌胃給藥，小鼠 20ml/kg體重。除另有規(guī)定外， 一般每天給藥一次，連續(xù)灌胃，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在18 28°C。 2.2結(jié)果
取成年雄性小鼠40只(體重21.0士2.0g)，隨機(jī)分為4組，每組10只。每天灌胃給 樣1次，連續(xù)7天。于實(shí)驗(yàn)第1天和第7天小鼠稱重，觀察葫蘆巴總皂苷對(duì)小鼠體重的 影響。結(jié)果見表5，采用DAS1.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)第7天灌胃后60分鐘小鼠尾根 部負(fù)重10%體重的合金塊，于游泳桶中游泳，桶寬30厘米，水深20厘米，水溫20。C， 記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間。結(jié)果見表6，采用DAS1.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表5葫盧巴總皂苷對(duì)小鼠體重的影響(IiSD， n=10)
組別 劑量 第l天體重(g)第7天體重(g)體重差值(g)
一 ——— —__(g/k^__________ —
空白對(duì)照組 等體積水 21.0±2.0 26.2±4.8 5.4±3.5
葫蘆巴總皂苷高劑量組 0.130 22.0±2.0* 24.5±3.2* 2.6±1.8*
葫蘆巴總皂苷中劑量組 0.0621.4±2.1* 24.8±2.7* 3.5±2.0*葫蘆巴總皂苷低劑量組 0.032 21.2±2.3* 24.4±3.2* 3.2±2.3 *
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
表6葫盧巴總皂苷對(duì)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)的影響(IiSD， n=10)
組別 劑量(g/kg) 游泳時(shí)間(min)
空白對(duì)照組 等體積水 6.2±1.8
葫蘆巴總皂苷高劑量組 0.130 10.2±4.5**
葫蘆巴總皂苷中劑量組 0.065 8.6±1.7**
葫蘆巴總皂苷低劑量組 0.032 7.3±2.7*
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01 結(jié)果表明，葫蘆巴總皂苷高、中劑量組能明顯提高小鼠游泳時(shí)間，但葫蘆巴總皂 苷低劑量組對(duì)小鼠游泳時(shí)間作用不明顯。葫蘆巴總皂苷各劑量組均對(duì)小鼠體重?zé)o影響。 實(shí)施例5
葫盧巴總皂苷對(duì)小白鼠常壓耐缺氧的作用
1材料試劑本發(fā)明的葫蘆巴總皂苷粉末，實(shí)驗(yàn)時(shí)將粉末溶解于蒸餾水。動(dòng)物清潔 級(jí)昆明種小鼠，均由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證
SCXK(湘)2006-0001號(hào)；湖南省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證 SYXK(湘)2003-0006號(hào)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3日，且清潔級(jí)昆明種小鼠均為每籠5只飼養(yǎng)。
2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
2.1藥物配制方法和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般分為四組第一組為正常對(duì)照組，給等體積蒸餾水；第二、三、四組 分別為葫蘆巴總皂苷高、中、低劑量組，用葫蘆巴總皂苷粉末加蒸餾水分別配成 0.65g/100ml、 0.32g/100ml、 0.16g/100ml的濃度供小鼠用；所有動(dòng)物均灌胃給藥，小鼠 給藥體積為20ml/kg體重。除另有規(guī)定外， 一般每天給藥一次，連續(xù)灌胃，實(shí)驗(yàn)室溫度 控制在18 28°C。
2.2結(jié)果取清潔級(jí)昆明種成年雄性小鼠40只(體重21.0±2.0g)，隨機(jī)分為4組，每組 10只。每天灌胃給樣l次，連續(xù)7天。第7天給藥后1小時(shí)，腹腔注射鹽酸異丙腎上 腺素15mg'kg"， 15min后，放入150mL的密閉廣口瓶內(nèi)，瓶內(nèi)裝有10 g的鈉石灰。 瓶口涂以凡士林，放入小鼠后將瓶密閉。以秒表記錄小鼠存活時(shí)間。結(jié)果見表7，采用DAS1.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表7葫蘆巴總皂苷對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響(XiSD， n=10)
組別劑量(g/kg)游泳時(shí)間(min)
正常對(duì)照組等體積水20.7±2.6
模型對(duì)照組等體積水14.3±2.1#弁#
葫蘆巴總皂苷高劑量組0.13018.9±1.9"
葫蘆巴總皂苷中劑量組0.06517.9±2.0**
葫蘆巴總皂苷低劑量組0.03217.6±3.1*
與正常對(duì)照組比較 ###P<0.01
與模型對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
結(jié)果表明，葫蘆巴總皂苷高、中劑量組能明顯延長小鼠呼吸停止時(shí)間，但葫蘆巴總 皂苷低劑量組對(duì)顯著延長小鼠呼吸停止時(shí)間不明顯。 實(shí)施例6
取脫膠葫蘆巴豆粉15公斤，加入藥料量8倍的水，預(yù)浸泡30分鐘，超聲波提取2 次，每次時(shí)間20分鐘，離心，合并離心液，濃縮，得濃縮液，加乙醇至80%沉淀，離 心，離心液濃縮揮醇得濃縮液；濃縮液上D101大孔樹脂柱吸附，水洗棄去，用0.01% 的HC1溶液洗滌，用0.15V。NaOH溶液洗滌，85%乙醇洗脫，收集洗脫液，真空濃縮， 噴霧干燥得提取物。以薯蕷皂苷元計(jì)，皂苷含量為50.2%。
本實(shí)施例中提取總皂甙的方法是參照《胡蘆巴渣中有效成分的提取工藝及其應(yīng)用研 究》，西北大學(xué)博士論文，2008。 實(shí)施例7
用實(shí)施例6所得胡蘆巴總皂苷提取物進(jìn)行實(shí)施例7。 1材料
1.1實(shí)施例5所得胡蘆巴總皂苷粉末。實(shí)驗(yàn)時(shí)將粉末溶解于蒸餾水。
1.2動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠，均由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供；實(shí)驗(yàn)
動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK(湘)2006-0001號(hào)；湖南省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許
可證SYXK(湘)2003-0006號(hào)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3日，且清潔級(jí)昆明種小鼠均為每籠
5只詞養(yǎng)。
112實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
2.1藥物配制方法和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為二組第一組為正常對(duì)照組，給等體積蒸餾水；第二組分別為葫蘆巴 總皂苷樣組，用葫蘆巴總皂苷提取物粉末加蒸餾水分別配成0.32g/100ml的濃度供小鼠 用；所有動(dòng)物均灌胃給藥，小鼠給藥體積為20ml/kg體重。除另有規(guī)定外， 一般每天給 藥一次，連續(xù)灌胃7天，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在18 28°C。
2.2抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)(小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn))取成年雄性小鼠20只(體重21.4士0.5g)， 隨機(jī)分為2組，每組10只。每天灌胃給樣l次，連續(xù)7天。實(shí)驗(yàn)第7天灌胃后60分鐘 小鼠尾根部負(fù)重5%體重的合金塊，于游泳桶中游泳，桶寬30厘米，水深20厘米，水 溫20'C，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間。結(jié)果見表8，采用DASl.O軟件進(jìn)行t檢 驗(yàn)。
表8呋喃固醇對(duì)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)的影響(7土SD， n=10)
組別劑量(g/kg)游泳時(shí)間(min)
空白對(duì)照組等體積水6.8±1.8
葫蘆巴總皂苷樣組0.0659,4±1,6***
與空白對(duì)照組比較 *P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
結(jié)果表明，葫蘆巴總皂苷樣組能明顯提高小鼠游泳時(shí)間。
按照人和動(dòng)物的體表面積比計(jì)算，小鼠的每公斤體重用量除以9.1得人每公斤體重 用量，大鼠的每公斤體重用量除以6.3得人每公斤體重用量。
權(quán)利要求
1、葫蘆巴總皂苷用于制備治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng)耐量下降藥物或保健品中的用途。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于人日用量為200-4000mg。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于人日用量為600-1200mg。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于人日用量為0.0036-0.0145g/kg體重。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種葫蘆巴總皂苷提取物在治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng)耐量下降的藥品或保健品的應(yīng)用。需根據(jù)病人的病情，確定用法用量，可2-3次/日服用，人日用量為200-4000mg；優(yōu)選600-1200mg；或者人日用量為0.0036-0.0145g/kg體重。葫蘆巴總皂苷能提高血清睪酮水平，因此，在治療或預(yù)防睪酮水平降低和運(yùn)動(dòng)耐量下降中有著重要的作用。
文檔編號(hào)A61P5/26GK101496828SQ20091004275
公開日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者華 譚 申請(qǐng)人:湖南今漢生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司