專利名稱：從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種超臨界C(V流體連續(xù)萃取蛹蟲草中蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多
糖的工藝。
背景技術(shù)：
冬蟲夏草是一類藥用價值極高的珍稀名貴藥材，含有眾多活性成分，如蟲草酸、蟲草多 糖、多種核苷類(蟲草素、脲苷、腺苷)、揮發(fā)油、黃酮、甾醇類化合物、超氧化物歧化酶等。 其中蟲草多糖、蟲草素、蟲草酸的含量是評價蟲草質(zhì)量主要指標(biāo)。其中的蟲草素是一種核苷
類抗生素，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌和消炎、提高免疫力、抗白血病等多種生物活性。蟲 草多糖能調(diào)節(jié)人體免疫功能，增強抗病能力，具有抗癌活性，對各種疾病引起的白細(xì)胞降低 有很好的輔助治療作用，還具有降血糖的功能，同時冬蟲夏草多糖能增強單核巨噬細(xì)胞功能，
提高血清IgG水平，促進淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。蟲草酸能抑制各種病菌的成長，可預(yù)防與治療腦 血栓、腦出血、心肌梗塞等疾病。但是從冬蟲夏草中提取以上組份價格極貴。蛹蟲草是冬蟲 夏草的重要人工替代品之一，其功能成分、藥理藥效作用與天然冬蟲夏草基本一致， 200710122409.0公開了一種從蛹蟲草中提取精制蟲草素和蟲草多糖的方法，是將蛹蟲草粉 末以冷滲法提取過濾，濾渣與乙醇混合，超聲波輔助提取、離心，上清液濃縮、醇析。醇析 上清液減壓濃縮、洗脫，洗脫液濃縮結(jié)晶，用正丁醇重結(jié)晶，得到蟲草素；醇析沉淀進行酶 解脫蛋白處理、離心，上清液濃縮、洗脫，流出液濃縮、醇析，冷凍干燥后得到精制多糖。 這種方法提取蟲草素和蟲草多糖，提取率低，工藝復(fù)雜，只能提取出蟲草素和蟲草多糖；而 不能連續(xù)提取出蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖，且其有機溶劑的使用量較高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可減少有機溶劑的用量，減少分離步驟，提高提取率、降低
3成本、能從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草精油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖的綜合工藝。 本發(fā)明包括以下步驟 (1)將過40 60目篩的蛹蟲草菌絲體粉加入到超臨界C02流體萃取儀中；在壓力 15-25Mpa，溫度35-4CTC， 032流量為50-150L/min的條件下，萃取1-3h，在分離釜中分離出 蛹蟲草揮發(fā)油；
(2) 用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的酯類或酮類有機夾帶劑，在壓力為22-30 Mpa，溫 度為35-4(TC、 (％流量為50-150L/min的條件下，繼續(xù)萃取l_3h,從分離釜中分離出含蟲草 素的有機夾帶劑，在55-65'C將該溶液進行減壓蒸餾回收有機夾帶劑，燒瓶中剩余物為蟲草 素產(chǎn)品，冷凍干燥得蟲草素；
(3) 在原超臨界C(V流體萃取儀中，用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的蒸餾水作為夾帶劑， 在壓力為25-3(Mpa，溫度為40-5(TC的條件下，萃取1-3h,采用一級分離方式分離出含蟲草 酸和蟲草多糖的水溶液，往該溶液中加入北蟲草多糖溶液4倍體積的95%的乙醇，產(chǎn)生絮狀 沉淀，低溫放置3-5h，沉淀完全后，在轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/min條件下離心10-20min，得 蟲草多糖沉淀，經(jīng)冷凍干燥，得蟲草多糖產(chǎn)品；將離心上清液6(TC旋轉(zhuǎn)減壓濃縮回收乙醇， 濃縮液為蟲草酸浸膏，經(jīng)冷凍干燥，得含蟲草酸的產(chǎn)品。
所述酯類夾帶劑是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。 所述酮類夾帶劑是丙酮、甲乙酮。
本發(fā)明能在保護活性成分生物活性的前提下，快速、高效地將蛹蟲草中的蟲草素、蟲草 酸、蟲草多糖提取出來，簡化了分離純化的步驟，降低了有機溶劑的使用，提高了生產(chǎn)效率， 降低了生產(chǎn)成本。所得到的蛹蟲草揮發(fā)油的提取得率為6. 5%左右，蟲草素的提取率為0. (M9% 左右，蟲草素的純度為45%左右，蟲草酸的提取率為2%左右，蟲草酸的純度為25%左右，蟲 草多糖的提取率為6. 8%左右，蟲草多糖純度為45%左右。
具體實施例方式
實施例1: 、(1)取液體發(fā)酵的蛹蟲草菌絲體，在真空箱中60'C干燥12h，于植物粉碎機中粉碎， 過40目篩，得蛹蟲草菌絲體粉，準(zhǔn)確稱取lkg蛹蟲草菌絲體粉，加入到萃取釜容積為3升的 超臨界C02流體萃取儀的萃取釜中，設(shè)置萃取壓力20Mpa左右，萃取溫度37°C， 0)2流量為 80L/h，萃取時間2h。從分離釜中得亮黃色透明的蛹蟲草揮發(fā)油。
(2) 保持萃取釜中的蛹蟲草菌粉不變，改變萃取條件為萃取壓力25 Mpa左右，萃取 溫度4(TC,夾帶劑為2升乙酸乙酯，C02流量為50L/h,萃取時間2h。從分離釜中得含蟲草素 的乙酸乙酯溶液。在6(TC下將該溶液進行減壓蒸餾回收乙酸乙酯，燒瓶中剩余物為蟲草素產(chǎn) 品，冷凍干燥，產(chǎn)品質(zhì)量約為lg，蟲草素含量為42%左右。
(3) 保持萃取釜中的蛹蟲草菌粉不變，改變萃取壓力為25Mpa，萃取溫度為45。C,改用 2升蒸餾水作為夾帶劑，萃取2h,采用一級分離方式分離，得到含蟲草酸和蟲草多糖水溶液， 往該溶液中加入4倍蟲草多糖水溶液體積的95%的乙醇，產(chǎn)生絮狀沉淀，低溫放置5h，沉淀 完全后，4000轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)速離心10min，得沉淀，沉淀冷凍干燥，得蟲草多糖產(chǎn)品，產(chǎn)品質(zhì)量 約為150g,蟲草多糖純度約為45%。將離心上清液6(TC旋轉(zhuǎn)減壓濃縮回收乙醇，濃縮液為浸 膏，冷凍干燥，得產(chǎn)品約為80g，該產(chǎn)品含蟲草酸，蟲草酸含量約為25%。
實施例2:
(1) 取人工固體栽培的蛹蟲草子實體，在真空箱中6(TC干燥12h,于植物粉碎機中粉碎， 過40目篩，得蛹蟲草子實體菌粉，準(zhǔn)確稱取lkg蛹蟲草子實體菌粉，加入到3L的超臨界C(X 流體萃取儀的萃取釜中，設(shè)置萃取壓力20Mpa左右，萃取溫度4(TC, 0)2流量為120L/h,萃 取時間2h。從分離釜中得亮黃色透明的蛹蟲草揮發(fā)油。
(2) 保持萃取釜中的蛹蟲草菌粉不變，改變萃取條件為萃取壓力25Mpa左右，萃取溫 度40。C，夾帶劑為2升乙酸乙酯，C02流量為50L/h,萃取時間2h。從分離釜中得含蟲草酸 的乙酸乙酯溶液。在60。C下將該溶液進行減壓蒸餾回收乙酸乙酯，燒瓶中剩余物為蟲草酸產(chǎn) 品，冷凍干燥，產(chǎn)品質(zhì)量約為l.lg，蟲草素純度約為45%。
(3) 保持萃取釜中的蛹蟲草子實體菌粉不變，改變萃取樂力為30Mpa，萃取溫度為45
5'C，改用2升蒸餾水作為夾帶劑，萃取2h，采用一級分離方式分離，得到含蟲草酸和蟲草多 糖水溶液，往該溶液中加入蟲草多糖水溶液4倍體積的95%的乙醇，產(chǎn)生絮狀沉淀，低溫放 置4h，沉淀完全后，4000轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)速離心10min，得沉淀，沉淀冷凍干燥，得蟲草多糖產(chǎn)品， 產(chǎn)品質(zhì)量約為140g，蟲草多糖純度約為50%。將離心上清液60'C旋轉(zhuǎn)減壓濃縮回收乙醇，濃 縮液為浸膏，冷凍干燥，得產(chǎn)品約為70g，該產(chǎn)品含蟲草酸，蟲草酸含量約為30%。
權(quán)利要求
1.一種從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖的工藝，其特征在于，包括以下步驟(1)將過40～60目篩的蛹蟲草菌絲體粉加入到超臨界CO2流體萃取儀中；在壓力15-25Mpa，溫度35-40℃，CO2流量為50-150L/min的條件下，萃取1-3h，在分離釜中分離出蛹蟲草揮發(fā)油；(2)用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的酯類或酮類有機夾帶劑，在壓力為22-30Mpa，溫度為35-40℃、CO2流量為50-150L/min的條件下，繼續(xù)萃取1-3h，從分離釜中分離出含蟲草素的有機夾帶劑，在55-65℃將該溶液進行減壓蒸餾回收有機夾帶劑，燒瓶中剩余物為蟲草素產(chǎn)品，冷凍干燥得蟲草素；(3)在原超臨界CO2流體萃取儀中，用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的蒸餾水作為夾帶劑，在壓力為25-30Mpa，溫度為40-50℃的條件下，萃取1-3h，采用一級分離方式分離出含蟲草酸和蟲草多糖的水溶液，往該溶液中加入北蟲草多糖溶液4倍體積的95％的乙醇，產(chǎn)生絮狀沉淀，低溫放置3-5h，沉淀完全后，在轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/min條件下離心10-20min，得蟲草多糖沉淀，經(jīng)冷凍干燥，得蟲草多糖產(chǎn)品；將離心上清液60℃旋轉(zhuǎn)減壓濃縮回收乙醇，濃縮液為蟲草酸浸膏，經(jīng)冷凍干燥，得含蟲草酸的產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖 的工藝，其特征在于，所述酯類夾帶劑是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖 的工藝，其特征在于，所述酮類夾帶劑是丙酮、甲乙酮。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從蛹蟲草中連續(xù)提取蟲草揮發(fā)油、蟲草素、蟲草酸與蟲草多糖的工藝。是將過40～60目篩的蛹蟲草菌絲體粉加入到超臨界CO<sub>2</sub>流體萃取儀中；在壓力15-25MPa，溫度35-40℃，CO<sub>2</sub>流量為50-150L/min的條件下，萃取1-3h，在分離釜中分離出蛹蟲草揮發(fā)油；再用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的酯類或酮類有機夾帶劑繼續(xù)萃取1-3h萃取分離出蟲草素；再用蛹蟲草菌絲體粉質(zhì)量1-3倍的蒸餾水作為夾帶劑，萃取1-3h，采用一級分離方式分離出含蟲草酸和蟲草多糖的水溶液。本發(fā)明降低了有機溶劑的使用，提高了生產(chǎn)效率，降低了生產(chǎn)成本。所得到的蛹蟲草揮發(fā)油的提取得率為6.5％左右，蟲草素的提取率為0.049％左右，蟲草素的純度為45％左右，蟲草酸的提取率為2％左右。
文檔編號A61P29/00GK101580755SQ20091004366
公開日2009年11月18日 申請日期2009年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者劉東波, 夏志蘭, 熊興耀, 謝紅旗 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)