專利名稱：：一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種皮膚抗過敏、止癢有效活性成分，該活性成分為天然植物土茯苓提取物，尤其是涉及一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：近年的流行病學(xué)調(diào)查顯示，過敏性疾病具有逐年增加的趨勢(shì)，特別是由環(huán)境原因引起的過敏反應(yīng)及抗遺傳性過敏性皮膚炎的增加趨勢(shì)尤為顯著，已成為不可忽視的社會(huì)現(xiàn)象。其問題的出現(xiàn)不僅由于過敏源的逐年增加、大氣污染、食品和化妝品的添加物的濫用，而且也由于近年來人們飲食習(xí)慣的變化。過敏性疾病的治療方法通常以消除過敏源為本，進(jìn)而根據(jù)臨床癥狀的程度、起因及發(fā)病機(jī)制進(jìn)行選擇性藥物治療。常見的過敏癥一般為I型過敏反應(yīng)，如過敏性鼻炎、支氣管哮喘及蕁麻疹等疾病，由肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺等化學(xué)遞質(zhì)介導(dǎo)，刺激血管擴(kuò)張，增大血管通透性，促進(jìn)支氣管平滑肌收縮，提高末端神經(jīng)感應(yīng)等過度生物體應(yīng)激反應(yīng)。因此，對(duì)I型過敏性疾病的治療，臨床上主要使用抗組胺劑及對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒具有抑制活性的抗過敏藥物。皮膚瘙癢經(jīng)常伴隨過敏癥狀產(chǎn)生。介導(dǎo)瘙癢的受體位于真皮與表皮連接處的無髓C纖維游離神經(jīng)末梢上，通過神經(jīng)突觸連接二級(jí)神經(jīng)元，然后通過脊髓丘腦束到達(dá)丘腦的板層核，最后到達(dá)大腦皮質(zhì)，產(chǎn)生瘙癢感覺。近年來的研究證實(shí)多種化學(xué)介質(zhì)如組胺等能引起實(shí)驗(yàn)性瘙癢，這些介質(zhì)通過與無髓c纖維游離神經(jīng)末梢上的特異性受體結(jié)合而產(chǎn)生癢感神經(jīng)沖動(dòng)。參與瘙癢的遞質(zhì)多而復(fù)雜，但也一些共同的遞質(zhì)如組胺、白介素等。其中組胺源性瘙癢是目前研究最清楚的瘙癢傳導(dǎo)途徑?？菇M胺藥是目前臨床治療瘙癢和過敏的首選藥。但是，目前合成的抗組胺藥在臨床使用中多數(shù)出現(xiàn)瞌睡、口渴、胃腸消化系統(tǒng)受損等副作用，長(zhǎng)期服用也存在一定的臨床安全性問題。臨床應(yīng)用的抗過敏制劑局限于暫時(shí)性的緩解，而不能從根本上改善過敏性體質(zhì)。從身體健康及生活習(xí)慣角度出發(fā)，一種有效且安全的用于止癢和抗過敏的醫(yī)藥品、保健食品或化妝品為人們所期待。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可以作為食物調(diào)料劑，毒性較低，并能在較低的濃度下抑制組胺的釋放，能很好的祛除皮膚瘙癢，達(dá)到抗敏作用天然植物土茯茶提取物的應(yīng)用方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，該應(yīng)用方法是將天然植物土茯苓提取物應(yīng)用于抑制組胺釋放的藥物、化妝品或保健食品中，提供抗過敏、止癢效果。所述的土茯苓提取物添加濃度范圍為0.001%100%(w/w)。所述的天然植物土茯苓提取物包括采用溶劑萃取、水蒸汽蒸餾法或二氧化碳超臨界萃取得到的粗土茯苓提取物，以及萃取后采用精制方法得到的精制土茯茶提取物。所述的溶劑萃取是將天然植物土茯苓粉碎后置于提取溶劑中，土茯茶與提取溶劑的質(zhì)量比為2/1-1/40，在20-10(TC下，浸泡0.1-336h，過濾，濃縮，得土茯苓提取物。所述的提取溶劑為水、有機(jī)溶劑或者有機(jī)溶劑水溶液。所述的有機(jī)溶劑為l-5個(gè)碳的醇、乙酸乙酯、二丙二醇或者石油醚中的一種或幾種。所述的有機(jī)溶劑水溶液中有機(jī)溶劑為1-5個(gè)碳的醇或二丙二醇中的一種或幾種。所述的l-5個(gè)碳的醇包括乙醇、甲醇、甘油、丙二醇、1,3-丁二醇。所述的二氧化碳超臨界萃取是將天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超臨界萃取裝置的提取釜中，采用食品級(jí)二氧化碳萃取壓力在15-45MPa，萃取溫度30-55。C，二氧化碳流量8-25kg/h進(jìn)行超臨界萃取，萃取時(shí)間0.5—4h，然后分離釜調(diào)整分離壓力3—10MPa，分離溫度為30-50°C，分離出流浸膏，得土茯苓提取物。所述的水蒸汽蒸餾法是將天然植物土茯苳粉碎后置于鋪紗布的箅子，把箅子放入連接冷凝器的不銹鋼蒸鍋中，通入壓力為0.12MPa0.15MPa水蒸汽，蒸餾時(shí)間為0.5-4h，然后收集冷凝器中水層上的液體，得土茯苳提取物。所述的精制方法是將溶劑萃取或二氧化碳超臨界萃取獲得的土茯苳提取物經(jīng)非極性樹脂吸附后，采用洗脫劑洗脫，濃縮至浸膏，得到精制的土茯苳提取物。所述的洗脫劑為水或體積濃度為30%95%的有機(jī)溶劑水溶液，有機(jī)溶劑為乙醇或甲醇。所述的洗脫劑優(yōu)選水或體積濃度為25%50%的有機(jī)溶劑水溶液，有機(jī)溶劑優(yōu)選乙醇。所述的非極性樹脂包括HPDIOO，DlOl，HZ891。本發(fā)明提供的天然植物土茯苓提取物，可以多種口服劑型投放市場(chǎng)，用于改善過敏。當(dāng)然，土茯苓提取物也可以與常用的賦形劑等醫(yī)藥用載體結(jié)合并制劑化。必要時(shí)也可以添加一些防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等制劑添加物?？梢愿鶕?jù)市場(chǎng)需要及消費(fèi)者的心理要求改換劑型，例如使用片劑、顆粒劑、膠囊劑等劑型。比較適宜的賦形劑，一般考慮有乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖維素等。潤(rùn)滑劑一般應(yīng)采用硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉等。溶劑通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐劑一般采用氯丁醇、芐醇、二羥基乙酸等?？寡趸瘎┩ǔＲ詠喠蛩猁}、抗壞血酸等比較適宜。本發(fā)明提供的土茯苓提取物，也可以原型、水溶液稀釋后作為皮膚外用劑使用。當(dāng)然也可以通過與醫(yī)藥用載體結(jié)合制成一定的制劑，如氣霧劑、液體制劑、提取物、混懸劑、乳劑、軟膏劑、半流體制劑、擦劑、洗劑等劑型提供化妝品、醫(yī)藥品市場(chǎng)的消費(fèi)。本發(fā)明在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)上，結(jié)合藥理學(xué)和藥效學(xué)等現(xiàn)代科學(xué)，建立一種評(píng)估天然植物提取物的抗組胺釋放模型，并在此基礎(chǔ)上對(duì)藥物進(jìn)行藥理藥效學(xué)測(cè)定。組胺是一種經(jīng)典的致癢介質(zhì)，主要儲(chǔ)存于體內(nèi)肥大細(xì)胞和堿性粒細(xì)胞中，任何剌激肥大細(xì)胞的因素，如變應(yīng)性、物理性、精神性等因素均可使肥大細(xì)胞脫顆粒釋放出組胺，導(dǎo)致瘙癢。因此具有穩(wěn)定肥大細(xì)胞，減少組胺釋放作用的物質(zhì)可用于治療由組胺所致的瘙癢癥。除特殊說明外，本發(fā)明涉及的試劑和原料均市售可得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的最大效果在于本發(fā)明的土茯苓提取物除了傳統(tǒng)的復(fù)方外，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)都沒有單味土茯苓提取物可以抑制組胺的釋放而達(dá)到皮膚抗敏作用的報(bào)道，這是本發(fā)明最大的亮點(diǎn)。土茯苓提取物可以制成中藥制劑，用來抑肥大細(xì)胞和堿性粒細(xì)胞中的組胺釋放，從而起到皮膚抗過敏的效果。且其為天然植物提取物，副作用小。具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下述各實(shí)施例中的原藥提取液樹脂洗脫劑的比例均為重量比。實(shí)施例1取土茯苓100g，提取液A為純水，配置洗脫劑B:去離子水，C:30%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HZ891，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:10:3:12:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在3(TC浸泡72h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HZ891吸附后，用B洗脫后洗脫劑棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例2取土茯苓100g，提取液A為純水，配置洗脫劑B:去離子水，C:30%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂D101，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:10:3:12:12。將土茯茶粉碎后以提取液A在5(TC提取5h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)D101吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例3取土茯苓100g，提取液A為純水，配置洗脫劑B:去離子水，C:30%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂H103，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:8:2:9:12。將土茯零粉碎后以提取液A在8(TC提取三次，每次2h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)H103吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例4取土茯苓100g，提取液A為純水，配置洗脫劑B:去離子水，C:30%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HPDIOO，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:8:2:12:8。將土茯苓粉碎后以提取液A在70。C提取兩次，每次3h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HPD100吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例5取土茯苓100g，提取液A為乙醇，配置洗脫劑B:去離子水，C:50%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HZ891，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C-1:10:3:12:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在3(TC提取48h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HZ891吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例6取土茯苓100g，提取液A為甲醇，配置洗脫劑B:去離子水，C:50%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂DlOl，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C-1:10:2:12:8。將土茯苓粉碎后以提取液A在5(TC提取12h,濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)D101吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例7取土茯苓100g，提取液A為乙酸乙酯，配置洗脫劑B:去離子水，C:50%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂H103，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑Oh8:3:12:12。將土茯苳粉碎后以提取液A在8(TC提取三次，每次2h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)H103吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例8取土茯苓100g，提取液A為石油醚，配置洗脫劑B:去離子水，C:50%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HPDIOO，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C-1:10:3:12:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在70。C提取兩次，每次3h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HPD100吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例9取土茯苓100g，配置提取液A為30%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:75%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HZ891，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:20:3:12:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在3(TC提取24h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HZ891吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例10取土茯苓100g，配置提取液A為50%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:75%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂DlOl，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C=h10:3:9:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在5(TC提取8h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)D101吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例11取土茯苓100g，提取液A為75%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:75%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂H103，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:10:3:9:12。將土茯苓粉碎后以提取液A在8(TC提取兩次，每次2h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)H103吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例12取土茯苓100g，提取液A為85%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:75%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HPD100，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:10:3:9:12。將土茯苓粉碎后以提取液A在70。C提取兩次，每次3h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HPD100吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例13取土茯苓100g，配置提取液A為30%甲醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:95%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HZ891,原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:20:3:12:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在3(TC提取72h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HZ891吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例14取土茯苓100g，配置提取液A為50%甲醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:95%乙醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂DlOl，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C-1:10:3:9:9。將土茯苳粉碎后以提取液A在5(TC提取8h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)D101吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例15取土茯苓100g，提取液A為75%甲醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:95%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂H103，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C-1:10:3:9:12。將土茯零粉碎后以提取液A在7(TC提取兩次，每次3h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)H103吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例16取土茯苓100g，提取液A為85%甲醇水溶液(V/V)，配置洗脫劑B:去離子水，C:95%甲醇水溶液(V/V)，選擇非極性樹脂HPD100，原藥提取液樹脂洗脫劑B:洗脫劑C4:8:3:9:9。將土茯苓粉碎后以提取液A在70。C提取兩次，每次3h，濃縮到約為lmg/ml生藥濃度的藥液，經(jīng)HPD100吸附后，用B洗脫后洗脫劑B棄去，收集洗脫劑C洗脫段。濃縮至浸膏，得土茯苓提取物。效果實(shí)施例1土茯苓提取物抑制組胺釋放實(shí)驗(yàn)土茯苓提取物由實(shí)施例3制備，測(cè)定組胺釋放方法如下1.肥大細(xì)胞分離純化采用AnnaNemeth等的方法略加改進(jìn)，正常SD大鼠放血脫頸椎處死，腹腔注射預(yù)冷的PBS(含l%FCS)15ml，輕輕按摩腹部2min，吸取腹腔灌洗液并置入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37'C，5%(302細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置30min，等待巨噬細(xì)胞附壁后輕輕吸取細(xì)胞懸液離心(4°C，1500r/min)10min，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液約0.5ml。7mlP-F10(Percoll-HamF10)在4°C，3000r/min離心20min形成梯度，將濃縮的細(xì)胞懸液輕輕鋪入梯度之上4。C，2000r/min離心20min分離細(xì)胞，收集界面下l/3細(xì)胞，用PBS洗滌2次(1000r/min，離心10min)后重懸，錐蟲藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力，甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞純度，得純度大于95%的肥大細(xì)胞。調(diào)節(jié)細(xì)胞密度約106/ml，置于含10%FCS的DMEM培養(yǎng)基中待用。2.藥物處理將肥大細(xì)胞調(diào)整為約含RPMCs5乂104個(gè)/組，加入不同濃度的土茯零提取液，置入37°C，5%C02孵箱中孵育20分鐘，取出后立即加入compound48/80(0.5ug/ml)，置入37。C，5。/。C02孵箱中孵育10分鐘，取出立即放入冰水浴中5min終止反應(yīng)，模型對(duì)照組以PBS取代藥物，正常對(duì)照組為未加入藥物和compound48/80處理組。3.樣品準(zhǔn)備將各管以4'C，6000r/min離心10分鐘，吸取上清液測(cè)定釋放到胞外的組胺量A;沉淀用PBS重懸，IO(TC煮沸10min裂解細(xì)胞，測(cè)定殘留在細(xì)胞內(nèi)的組胺量A。4.組胺的測(cè)定上述各樣品加入高氯酸(0.4mol/L)，離心(4°C，6000r/min)10分鐘取上清。采用Shore等熒光測(cè)定改良法進(jìn)行測(cè)定取1.6ml上清夜置于已經(jīng)加入1.5gNaCl的具塞試管中，再加入4.0ml正丁醇和0.2ml2.5NNaOH，立即混勻，置康氏震蕩器震蕩5分鐘，靜置分層后取出3.6ml正丁醇相到已經(jīng)加入L2mlO.INHCL和2.0ml正庚烷的10ml具塞試管中，震蕩5分鐘，棄有機(jī)相，取1.0mlHCL相到試管中，用三蒸水稀釋一倍，加0.5ml0.4NNaOH堿化，混勻并迅速加入0.1%OPT甲醇液O.lml，立即混勻并在21-22。C反應(yīng)10分鐘，力n0.5ml0.5NHCL酸化終止縮合反應(yīng)，并使熒光物質(zhì)穩(wěn)定。每個(gè)數(shù)據(jù)均為3個(gè)平行復(fù)管的平均數(shù)。根據(jù)測(cè)得的熒光強(qiáng)度，分別按下式計(jì)算各組細(xì)胞的組胺釋放率(P釋放)和組胺釋放抑制率(P抑制)。P釋放=(上清液組胺量A-自發(fā)分泌組胺量)/(上清液組胺量A+細(xì)胞內(nèi)組胺量B)X100X;P抑制-(l-藥物組組胺釋放量/模型組組胺釋放量)X100%。其中自發(fā)分泌組胺量=正常細(xì)胞上清液中的組胺量。各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(土S)表示，應(yīng)用方差分析，將每個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行比較，P<0.05為差異有顯著性意義，P<0.01為差異有非常顯著性意義。由抗組胺釋放模型測(cè)得實(shí)例3制備土茯苓提取物組胺釋放量效關(guān)系如表1:表1-實(shí)施例3土茯苓提取物組胺釋放率正常藥物土茯苓提取物對(duì)照刺激25ug/ml12.5ug/ml6.25ug/ml3.125ug/mll還5ug/ml組胺釋放3.0864.727.5512.4731.3953.卯55.88率(％)由表1可知，由實(shí)施例3制備的土茯苓提取物在濃度1.6025ug/ml-25ug/ml時(shí)具有抑制組胺釋放的作用，在25ug/ml時(shí)，組胺釋放率為7.55%。效果實(shí)施例2土茯苓提取物抑制組胺釋放實(shí)驗(yàn)土茯苓提取物由實(shí)施例15制備，除了加入的藥物換成了實(shí)施例15制備的，其余測(cè)定步驟同效果實(shí)施例1。由抗組胺釋放模型測(cè)得實(shí)例15制備土茯苓提取物抑制組胺釋放量效關(guān)系如表2:表2-實(shí)施例15土茯苓提取物組胺釋放率<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表2可知，由實(shí)施例15制備的土茯苓提取物在濃度1.6025ug/ml-25ug/ml時(shí)具有抑制組胺釋放的作用，在25ug/ml時(shí)，組胺釋放率為6.84%。實(shí)施例17將天然植物土茯苓粉碎后置于水中，土茯苓與水的質(zhì)量比為2/1，在100"C下，浸泡O.lh，過濾，將濾液濃縮得到生藥濃度為lmg/ml的溶液，該溶液經(jīng)非極性樹脂HPD100吸附后，采用體積濃度為30%的乙醇水溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，濃縮至浸膏，得到土茯苓提取物。實(shí)施例18將天然植物土茯苓粉碎后置于有機(jī)溶劑乙醇中，土茯苓與有機(jī)溶劑乙醇的質(zhì)量比為1/40，在2(TC下，浸泡72h，過濾，將濾液濃縮得到生藥濃度為lmg/ml的溶液，該溶液經(jīng)非極性樹脂HZ891吸附后，采用體積濃度為50%的乙醇水溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，濃縮至浸膏，得到土茯苓提取物。實(shí)施例19將天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的體積濃度為10%，土茯苓與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1/6，在3(TC下，浸泡20h，過濾，將濾液濃縮得到生藥濃度為lmg/ml的溶液，該溶液經(jīng)非極性樹脂HZ891吸附后，采用體積濃度為60%的甲醇水溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，濃縮至浸膏，得到土茯苳提取物。實(shí)施例20將天然植物土茯苓粉碎后置于甲醇水溶液中，甲醇的體積濃度為95%，土茯苓與甲醇水溶液的質(zhì)量比為1/8，在卯。C下，浸泡60h，過濾，將濾液濃縮得到生藥濃度為lmg/ml的溶液，該溶液經(jīng)非極性樹脂D101吸附后，采用體積濃度為95%的甲醇水溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，濃縮至浸膏，得到土茯茶提取物。實(shí)施例21將天然植物土茯苓粉碎后置于甲醇水溶液中，甲醇的體積濃度為85%，土茯苓與甲醇水溶液的質(zhì)量比為1/20，在9(TC下，浸泡60h，過濾，得到土茯苓提取物。實(shí)施例22將天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的體積濃度為70%，土茯苓與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1/30，在5(TC下，浸泡36h，過濾，濃縮，得土茯茶提取物。實(shí)施例23將天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超臨界萃取裝置的提取釜中，采用食品級(jí)二氧化碳萃取壓力在15MPa，萃取溫度3(TC，二氧化碳流量25kg/h進(jìn)行超臨界萃取，萃取時(shí)間4h，然后分離釜調(diào)整分離壓力3MPa，分離溫度為50°C，分離出流浸膏，得土茯苓提取物。實(shí)施例24將天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超臨界萃取裝置的提取釜中，采用食品級(jí)二氧化碳萃取壓力在45MPa，萃取溫度55。C，二氧化碳流量8kg/h進(jìn)行超臨界萃取，萃取時(shí)間0.5h，然后分離釜調(diào)整分離壓力10MPa，分離溫度為30°C，分離出流浸膏，將流浸膏用體積濃度為75%的乙醇調(diào)整到生藥濃度為lmg/ml的溶液，該溶液經(jīng)非極性樹脂HZ891吸附后，采用體積濃度為50%的乙醇水溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，濃縮至浸膏，得到土茯苓提取物。實(shí)施例25將天然植物土茯苓粉碎后置于鋪紗布的箅子，把箅子放入連接冷凝器的不銹鋼蒸鍋中，通入壓力為0.12MPa水蒸汽，蒸餾時(shí)間為4h，然后收集冷凝器中水層上的液體，得土茯苓提取物。實(shí)施例26所述的水蒸汽蒸餾法是將天然植物土茯苓粉碎后置于鋪紗布的箅子，把箅子放入連接冷凝器的不銹鋼蒸鍋中，通入壓力為0.15MPa水蒸汽，蒸餾時(shí)間為0.5h，然后收集冷凝器中水層上的液體，得土茯苓提取物。實(shí)施例27將天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的體積濃度為95%，土茯苓與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1/30，在7(TC下，提取10h，過濾，濃縮，干燥，加入1%硫酸溶液沉淀，收集沉淀，干燥，得土茯茶提取物，其中含有花旗松素、光葉菝葜甙、甲基丁二酸、紫丁香酸。實(shí)施例28將天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的體積濃度為95%，土茯苓與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1/30，在20。C下，提取336h，過濾，濃縮至浸膏，拌入4倍量80-100目硅膠，依次用30-6(TC石油醚、氯仿、甲醇提取，收集氯仿洗脫部分，濃縮，干燥，得土茯苓提取物。實(shí)施例29將天然植物土茯苓粉碎后置于甘油水溶液中，甘油的體積濃度為10%，土茯苓與甘油水溶液的質(zhì)量比為1/40，在IO(TC下，提取lh，過濾，濃縮，得土茯苳提取物。實(shí)施例30將天然植物土茯苓粉碎后置于丙二醇水溶液中，丙二醇的體積濃度為1%，土茯苓與丙二醇水溶液的質(zhì)量比為1/20，在95'C下，提取2h，過濾，濃縮，得土茯苓提取物。實(shí)施例31將天然植物土茯苓粉碎后置于1，3—丁二醇水溶液中，1，3—丁二醇的體積濃度為30%，土茯苓與1，3—丁二醇水溶液的質(zhì)量比為1/10，在卯。C下，提取3h，過濾，濃縮，得土茯苓提取物。實(shí)施例32將天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇水溶液中，二丙二醇的體積濃度為15%，土茯苓與二丙二醇水溶液的質(zhì)量比為1/40，在85。C下，提取6h，過濾，濃縮，得土茯苓提取物。實(shí)施例33將天然植物土茯苓粉碎后置于1，3—丁二醇中，土茯茶與1，3—丁二醇的質(zhì)量比為1/10，在9(TC下，提取3h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例34將天然植物土茯苓粉碎后置于丙二醇中，土茯苓與丙二醇的質(zhì)量比為1/5，在卯。C下，提取3h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例35將天然植物土茯苓粉碎后置于甘油中，土茯苓與甘油的質(zhì)量比為1/10，在9(TC下，提取3h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例36將天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇中，土茯苓與二丙二醇的質(zhì)量比為1/10，在7(TC下，提取10h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例37將天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇、丙二醇、甘油、1，3—丁二醇體積比為l:1:1:l的混合液中，土茯苓與混合液的質(zhì)量比為1/10,在7(TC下，提取10h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例38將天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇、丙二醇、甘油、1，3—丁二醇、水體積比為h1:1:1:l的混合液中，土茯茶與混合液的質(zhì)量比為1/10，在7(TC下，提取10h，過濾，得土茯苓提取物。實(shí)施例39將100g天然植物土茯零粉碎后置于水中，土茯苳與水的質(zhì)量比為1/10，在70'C下，提取10h，過濾，濃縮為浸膏，把浸膏加入1000g體積濃度為70%的乙醇水溶液中，沉淀，過濾，濃縮，得土茯苳提取物。實(shí)施例40將100g天然植物土茯苓粉碎后置于體積濃度為70%的乙醇水溶液中，土茯苓與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1/10，在70。C下，提取10h，過濾，濃縮為浸膏，把浸膏加入1000g水中，沉淀，過濾，濃縮，得土茯茶提取物。采用上述實(shí)施例方法得到的提取物應(yīng)用于抑制組胺釋放的藥物、化妝品或保健食品中，從而達(dá)到皮膚止癢，抗過敏作用，提取物包括溶劑萃取、二氧化碳超臨界萃取、萃取后精制的土茯苓提取物或者土茯苓提取物單體，土茯茶提取物單體包括花旗松素、光葉菝葜甙、甲基丁二酸、紫丁香酸等等。權(quán)利要求1.一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，該應(yīng)用方法是將天然植物土茯苓提取物應(yīng)用于抑制組胺釋放的藥物、化妝品及保健食品中，提供抗過敏，止癢效果，所述的土茯苓提取物添加濃度范圍為0.001％～100％(W/W)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的天然植物土茯苓提取物包括采用溶劑萃取、水蒸汽蒸餾法或二氧化碳超臨界萃取得到的粗土茯苓提取物，以及萃取后采用精制方法得到的精制土茯苓提取物及其單體。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種天然植物芍藥提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的溶劑萃取是將天然植物土茯苓粉碎后置于提取溶劑中，土茯苓與提取溶劑的質(zhì)量比為2/1-1/40，在20-100。C下，浸泡0.1-336h，過濾，濃縮，得土茯苓提取物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種天然植物土茯苳提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的提取溶劑為水、有機(jī)溶劑或者有機(jī)溶劑水溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為l-5個(gè)碳的醇、乙酸乙酯、二丙二醇或者石油醚中的一種或幾種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種天然植物土茯零提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑水溶液中有機(jī)溶劑為1-5個(gè)碳的醇或二丙二醇中的一種或幾種。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的l-5個(gè)碳的醇包括乙醇、甲醇、甘油、丙二醇、1,3-丁二醇。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然植物土茯茶提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的藥物、化妝品及保健食品分別為藥物、化妝品及保健食品可接收的形式。全文摘要本發(fā)明涉及一種天然植物土茯苓提取物的應(yīng)用方法，該應(yīng)用方法是將天然植物土茯苓提取物應(yīng)用于抑制組胺釋放的藥物、化妝品及保健食品中。本發(fā)明采用抑制肥大細(xì)胞釋放組胺的試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，確認(rèn)天然植物土茯苓提取物的抗過敏與止癢效果。文檔編號(hào)A61K36/88GK101612292SQ200910055790公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年7月31日優(yōu)先權(quán)日2009年7月31日發(fā)明者李成亮申請(qǐng)人:上海汝萊芾生物科技有限公司;上海萊博生物科技有限公司;上海萊格生物科技有限公司;上海萊浦森生物科技有限公司;上海蔻漫生物科技有限公司