專利名稱：一種治療心血管疾病的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制備領(lǐng)域，涉及一種治療心血管疾病的藥物組合物及其制備方法。尤其涉及一種含有能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群的治療心血管疾病的藥物組合物。
背景技術(shù)：
心血管疾病是人類健康的第一殺手，其發(fā)病率一直居高不下。在我國(guó)隨著生活水平的不斷提高以及生活壓力的加大，心血管疾病的發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)。心血管疾病的誘因包括長(zhǎng)期吸煙、高血壓、高血脂、高血糖以及長(zhǎng)期外環(huán)境壓力等。隨著研究的深入，人們漸漸認(rèn)識(shí)到心血管疾病的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，呈動(dòng)態(tài)過(guò)程。盡管長(zhǎng)期以來(lái)，抗心血管疾病的新藥研發(fā)有著不斷的新進(jìn)展，但是由于臨床上常用藥物仍然是以單靶點(diǎn)作用的西藥為主要用藥方式，因此對(duì)于這種多途徑發(fā)病機(jī)制的疾病仍然顯得單薄。如今越來(lái)越多的學(xué)者提倡聯(lián)合用藥，通過(guò)不同作用特點(diǎn)的藥物來(lái)聯(lián)合控制疾病的進(jìn)程。基于復(fù)雜疾病對(duì)于用藥的要求，復(fù)方藥物則顯得具有較大的優(yōu)勢(shì)。復(fù)方藥物長(zhǎng)期以來(lái)以其多成分、多靶點(diǎn)以及副作用小的作用特點(diǎn)受到了越來(lái)越多的重視。但是由于復(fù)方成分復(fù)雜，其藥效組分及作用靶點(diǎn)一直是復(fù)方藥物走向世界市場(chǎng)的瓶頸。如今隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展以及各學(xué)科間的交叉融合，復(fù)方藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和體內(nèi)作用靶點(diǎn)確認(rèn)已經(jīng)成為可能。本發(fā)明所涉及的一種治療心血管疾病的組份藥物來(lái)源于治療冠心病的特效復(fù)方藥物麝香保心丸的入血成分。生物信息學(xué)分析表明該組份藥物體內(nèi)作用的靶點(diǎn)和心血管疾病的發(fā)病進(jìn)程緊密相關(guān)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，該組合藥物可以減小急性心肌梗死大鼠心肌梗死面積，降低血清中LDH和CK的含量。麝香保心丸(國(guó)藥準(zhǔn)字Z31020068)主要含麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片。麝香保心丸是芳香溫通類治療胸痹(冠心病、心絞痛)的代表復(fù)方中藥藥物，因其療效確切、安全方便、價(jià)格經(jīng)濟(jì)，而成為治療冠心病、心絞痛的常用藥物之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，麝香保心丸在芳香溫通類治療胸痹的中藥中穩(wěn)居第一，是唯一在全國(guó)擁有較高知名度的獨(dú)家傳統(tǒng)中藥大品種。該藥物于2005年獲得國(guó)家科技部、國(guó)家保密局秘密級(jí)國(guó)家秘密技術(shù)證書[證書編號(hào)MMJS2005YY048 (X)]。所述復(fù)方中藥的藥物活性成分測(cè)定已受到本領(lǐng)域研究者的關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療心血管疾病的藥物組合物，尤其涉及一種含有能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群的治療心血管疾病的藥物組合物，并進(jìn)一步確認(rèn)其在體內(nèi)的作用靶點(diǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供制備上述藥物組合物的方法。

本發(fā)明通過(guò)對(duì)的復(fù)方中藥麝香保心丸(國(guó)藥準(zhǔn)字Z31020068，國(guó)家秘密技術(shù)證書編號(hào)MMJS2005YY048 (X))進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究，通過(guò)液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析得到能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群，進(jìn)而組成藥物組合物。所述的藥效成分群包括以下成分:日本蟾蜍它靈，人參皂苷Re，人參皂苷Ra1,I β -羥基蟾毒靈，人參皂苷Rb1，脂蟾毒精醇，人參皂苷Re，人參皂苷Rb2,人參皂苷，人參皂苷Rd，蟾毒靈，膽酸，豬去氧膽酸，華蟾酥毒基，鵝去氧膽酸和去氧膽酸。上述各成分的含量如下(按重量計(jì)算):日本蟾蜍它靈0.l-5mg,人參皂苷Re0.5-10.0mg,人參皂苷Ra10.2-10.0mg, I β -羥基蟾毒靈0.l_5mg，人參皂苷Rb10.2-10.0mg,脂蟾毒精醇0.1-10.0mg,人參皂苷Re 0.3-10.0mg,人參皂苷Rb20.2-10.0mg,人參皂苷 Rb30.2-10.0mg,人參皂苷 Rd 0.5-10.0mg,蟾毒靈 0.1-5.0mg,膽酸0.5-10.0mg,豬去氧膽酸0.5-10.0mg,華蟾酥毒基0.2-5.0mg,鵝去氧膽酸0.1-10.0mg,去氧膽酸0.1-10.0mgo本發(fā)明的藥物組合物通過(guò)如下如下方法和步驟制備:(I)制備空白血清樣品:羧甲基纖維素鈉用純水制成0.5%的混懸液，用于SD大鼠灌胃給藥(lml/kg大鼠體重)。灌胃0.5-3小時(shí)后，腹腔注射I %的戊巴比妥鈉溶液(0.15ml/kg大鼠體重)麻醉大鼠。靜脈取血，置于涂肝素鈉的EP管中，在4°C條件下，3000r/min離心lOmin。取上清液400 μ I,加入到5ml EP管中。沉淀蛋白后，潤(rùn)旋Imin,12000r/min離心10分鐘，上清液真空旋轉(zhuǎn)蒸干，殘?jiān)尤?00 μ I甲醇復(fù)溶，離心。上清液即為空白血清樣品。(2)制備給藥后血清樣品:上述麝香保心丸藥物碎成細(xì)粉后，用0.5%的羧甲基纖維素鈉制成混懸液，藥物的濃度為0.34g/ml。SD大鼠給予藥物混懸液灌服(3.4g/kg大鼠體重)。服藥0.5-3小時(shí)后，大鼠腹腔注射1%的戊巴比妥鈉溶液(0.15ml/kg大鼠體重)麻醉。靜脈取血，置于涂肝素鈉的EP管中，在4°C條件下，3000r/min離心lOmin。取上清液400 μ 1，加入至IJ 5ml EP管中。沉淀蛋白后，渦旋lmin，12000r/min離心10分鐘，上清液真空旋轉(zhuǎn)蒸干，殘?jiān)尤?00 μ I甲醇復(fù)溶，離心。上清液即為給藥血清樣品。

(3)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析:色譜柱:Waters Symmetry C18色譜柱,5 μ m,250mmX4.6mm ;流動(dòng)相為甲醇-水系統(tǒng)、乙腈-水系統(tǒng)、乙腈:0.5 %乙酸水溶液或乙腈:
0.5%甲酸水溶液；流速0.8mL/min ;柱溫25°C;電噴霧離子化源(ESI)，源電壓3.5kv ;干燥氣流速10L/min ;干燥氣溫度350°C ;噴霧氣壓力30psi ；MS/MS打碎電壓1.0V，掃描的范圍為100-1500U，分別采集正離子和負(fù)離子模式下的MS和MS/MS圖譜(質(zhì)譜圖見(jiàn)

圖1和圖2)。數(shù)據(jù)分析采用Chemstation工作站軟件。(4)通過(guò)質(zhì)譜所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)分析以及標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)，進(jìn)而確定麝香保心丸的入血成分即麝香保心丸的藥效物質(zhì)。本發(fā)明中，通過(guò)文獻(xiàn)檢索查找治療心血管疾病藥物的靶點(diǎn)蛋白以及和心血管疾病相關(guān)通路上的靶點(diǎn)共339個(gè)，然后采用INVDOCK程序?qū)λ鏊幬锝M合物中的成分進(jìn)行分子和蛋白的對(duì)接計(jì)算。結(jié)果顯示，所述的藥物組分在體內(nèi)所作用的靶點(diǎn)蛋白包括血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、磷酸酯酶A2、腎素、細(xì)胞間粘附因子、髓過(guò)氧化物酶、纖維蛋白素原、凝血素、半胱氨酸蛋白酶、凝血因子X(jué)1、凝血因子VII和凝血因子IX等。這些靶點(diǎn)蛋白均是心血管疾病通路中的重要因子。本發(fā)明采用急性心肌梗死大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)比較各實(shí)驗(yàn)組間乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的含量差異以及心肌梗死的程度，確定藥物的治療效果，結(jié)果證明，所述的藥物組合物具有良好的療效。動(dòng)物:健康SD雄性大鼠，體重160_190g，雄性(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司)。器材:ENC0RE100型自動(dòng)生化分析儀。試劑:水合氯醛(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，氯化硝基四氮唑藍(lán)(南京卓爾生化技術(shù)有限公司)，實(shí)驗(yàn)涉及的化合物均采用市售標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，含量均> 98% )，特效復(fù)方藥物麝香保心丸(上海和黃藥業(yè)有限公司)，陽(yáng)性藥物異山梨醇酯(上海衡山藥業(yè)有限公司)，丹參滴丸(天津天士力集團(tuán))。實(shí)驗(yàn)分組為模型組，麝香保心丸組，本發(fā)明藥物組，陽(yáng)性藥物異山梨醇酯組，陽(yáng)性藥物丹參滴丸組及假手術(shù)組。實(shí)驗(yàn)方法:觀察磨香保心丸及其組分灌胃給藥對(duì)SD(Sprague-Dawley)大鼠急性心肌梗死的保護(hù) 作用。大鼠90只實(shí)驗(yàn)分為6組，每組15只，即假手術(shù)組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥組(異山梨醇酯組、復(fù)方丹參滴丸組)，麝香保心丸組，本發(fā)明藥物組。以上各組均采用灌胃給藥方法，給藥容積:IOmlAg0連續(xù)給藥4天，末次給藥后0.5h，乙醚麻醉動(dòng)物，行開(kāi)胸手術(shù)。手術(shù)區(qū)剃毛，消毒，快速開(kāi)胸，剪斷第3、4肋骨暴露心臟。撕開(kāi)心包將心臟輕輕擠出，在左心耳下1mm，肺動(dòng)脈圓錐旁開(kāi)0.5mm處用微創(chuàng)縫合針穿過(guò)冠狀動(dòng)脈前降支將其結(jié)扎，輕輕提拉切口皮膚將心臟送回胸腔，縫合切口。給藥后5小時(shí)，再將動(dòng)物用15%水合氯醛2ml/kg腹腔注射麻醉，針狀電極插入四肢皮下記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(連接到交流放大器用于監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)二導(dǎo)聯(lián)心電圖。經(jīng)計(jì)算機(jī)chart4.12軟件(ML785/8S,AD Instruments,澳大利亞)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)并存儲(chǔ)數(shù)據(jù))。觀察各組動(dòng)物心電圖變化情況。腹主動(dòng)脈取血，離心后留取血清，冰箱保存；取心臟，稱全心重量，剪去右心室后稱重(左心重)，并將左室沿著心臟縱軸相隔2mm切成5片，用生理鹽水洗凈，置37 °C 0.025%氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)磷酸鹽緩沖液染色。15-30分鐘后立即用生理鹽水沖去多余染料。梗死心肌不著色，非梗死心肌被染成蘭紫色，拍照，然后剪去著色部分，將未著色的梗死部分稱重。觀察指標(biāo):心肌梗死程度(結(jié)果見(jiàn)表I)，梗死區(qū)即NBT染色未著色心??；心肌梗死面積=梗死心肌重量/左心室重量X 100%或梗死心肌重量/全心室重量X 100%。血清中LDH，CK的含量(結(jié)果見(jiàn)表2)。表I各實(shí)驗(yàn)組對(duì)SD大鼠急性心肌梗死模型心肌梗死范圍的影響
權(quán)利要求
1.一種治療心血管疾病的藥物組合物，其特征是含有能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群組成，所述成分包括:日本蟾蜍它靈，人參皂苷Re，人參皂苷Ra1,1 β -羥基蟾毒靈，人參皂苷Rb1,脂蟾毒精醇，人參皂苷Re，人參皂苷Rb2,人參皂苷，人參皂苷Rd，蟾毒靈，膽酸，豬去氧膽酸，華蟾酥毒基，鵝去氧膽酸和去氧膽酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的藥物組合物，其特征是所述成分的重量配比是:日本蟾蜍它靈0.l_5mg，人參皂苷Re 0.5-10.0mg，人參皂苷Ra1 0.2-10.0mg,I β -羥基蟾毒靈0.l-5mg,人參皂苷Rbi 0.2-10.0mg,脂蟾毒精醇0.1-10.0mg,人參皂苷 Re 0.3-10.0mg，人參皂苷 Rb2 0.2-10.0mg，人參皂苷 Rb3 0.2-10.0mg，人參皂苷 Rd0.5-10.0mg,蟾毒靈0.1-5.0mg,膽酸0.5-10.0mg,豬去氧膽酸0.5-10.0mg,華蟾酥毒基0.2-5.0mg,鵝去氧膽酸 0.1-10.0mg,去氧膽酸 0.1-10.0mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的藥物組合物，其特征是其中所述的能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群是通過(guò)對(duì)復(fù)方中藥麝香保心丸國(guó)藥準(zhǔn)字Z31020068，國(guó)家秘密技術(shù)證書編號(hào)MMJS2005YY048 (X)進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究，通過(guò)液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析得到。
4.權(quán)利要求1的治療心血管疾病的藥物組合物，其特征是通過(guò)如下方法和步驟制備: (1)制備空白血清樣品； (2)制備給藥后血清樣品，所述藥物為權(quán)利要求3所述的麝香保心丸； (3)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析:色譜柱:WatersSymmetry C18色譜柱，5μπι,250mmX4.6mm ;流動(dòng)相為甲醇-水系統(tǒng)、乙腈-水系統(tǒng)、乙腈:0.5 %乙酸水溶液或乙腈:0.5%甲酸水溶液；流速0.8mL/min ;柱溫25V ;電噴霧離子化源，源電壓3.5kv ;干燥氣流速10L/min ;干燥氣溫度350°C ;噴霧氣壓力30psi ；MS/MS打碎電壓1.0V,掃描的范圍為100-1500U，分別采集正離子和負(fù)離子模式下的MS和MS/MS圖譜； (4)通過(guò)質(zhì)譜所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)分析以及標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)，確定麝香保心丸的入血成分即麝香保心丸的藥效物質(zhì)。
5.權(quán)利要求1的藥物組合物在制備體內(nèi)作用靶點(diǎn)為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、磷酸酯酶A2、腎素、細(xì)胞間粘附因子、髓過(guò)氧化物酶、纖維蛋白素原、凝血素、半胱氨酸蛋白酶、凝血因子X(jué)1、凝血因子VII或凝血因子IX制劑中的用途。
6.權(quán)利要求1的藥物組合物在制備減小急性心肌梗死制劑中的用途。7、權(quán)利要求1的藥物組合物在制備降低急性心肌梗死血清中乳酸脫氫酶和肌酸激酶的含量制劑中的用途。
7.7 權(quán)利要求1的藥物組合物在制備保護(hù)急性心肌缺血損傷制劑中的用途。
8. &根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征是制成片劑、分散片、含片、口崩片、緩釋片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、顆粒劑、注射劑、粉針劑或氣霧劑。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制備領(lǐng)域，涉及一種治療心血管疾病的藥物組合物及其制備方法。尤其涉及一種含有能吸收進(jìn)入血液的藥效成分群的治療心血管疾病的藥物組合物。所述的藥效成分群包括日本蟾蜍它靈，人參皂苷Re，人參皂苷Ra1，1β-羥基蟾毒靈，人參皂苷Rb1，脂蟾毒精醇，人參皂苷Rc，人參皂苷Rb2，人參皂苷，人參皂苷Rd，蟾毒靈，膽酸，豬去氧膽酸，華蟾酥毒基，鵝去氧膽酸和去氧膽酸。本發(fā)明藥物具有明確的體內(nèi)作用靶點(diǎn)，和多成分多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)。對(duì)急性心肌缺血損傷具有良好的保護(hù)作用，可縮小心肌梗死面積，降低血清中乳酸脫氫酶和肌酸激酶的含量。
文檔編號(hào)A61P9/10GK103156870SQ200910056638
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2009年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月18日
發(fā)明者詹常森, 張衛(wèi)東, 周俊杰, 柳潤(rùn)輝, 陳忠樑, 姜鵬, 徐瑞林, 張正光 申請(qǐng)人:上海和黃藥業(yè)有限公司, 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)