專利名稱：：注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑，具體涉及一種注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體。
背景技術(shù)：
：羥基喜樹堿具有抗癌廣譜，療效顯著的特點(diǎn)。目前國內(nèi)只有其注射液制劑在使用，并有復(fù)方羥基喜樹堿的注射液制劑專利申請，96112301。羥基喜樹堿的注射液存在穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)，易變色，該制劑在見光、熱和空氣后，兩天后色澤加深，3個月后產(chǎn)生細(xì)微沉淀，主要含量下降，降解產(chǎn)物增加，其療效下降，毒副作用增加。現(xiàn)有所謂羥基喜樹堿納米粒藥物制劑的粒徑均大于100納米，其實(shí)質(zhì)是脂質(zhì)體，依照相關(guān)規(guī)定，它不能稱為納米制劑。因此現(xiàn)在尚沒有真正意義上的注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體，并提供其制備方法，從而實(shí)現(xiàn)羥基喜樹堿的納米化制劑。本發(fā)明的技術(shù)方案之一為注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體，它是由下列重量份的主要原料配制而成的羥基喜樹堿5,氫化豆磷脂20~60,泊活沙姆10-40,葡萄糖0.2~1，甘露醇0.2~1。其優(yōu)選的是原料重量份為羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂3050,泊活沙姆10~30，葡萄糖0.3-0.6,甘露醇0.3—0.6。特別是原料重量份為羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂30~50,泊活沙姆10~30，葡萄糖0.3—0.6,甘露醇0.3—0.6。本發(fā)明的技術(shù)方案之二為注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體的制備方法，它是將羥基喜樹堿和氫化豆磷脂在40°C6(TC下用乙醇溶解，溶解后得到的有才幾相與加泊洛沙姆水溶液混合，在50—60。C攪拌分散均勻，在1200bar壓力下勻質(zhì)處理，再減壓回收乙醇后，加入葡萄糖和甘露醇溶解，加蒸餾水定容后過濾，所述主要原料配制而成的羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂20~60,泊活沙姆10-40，葡萄糖0.2~1，甘露醇0.2-1。由于本產(chǎn)品中的脂質(zhì)體的粒徑小于100nm，符合中國藥典2005年版納米脂質(zhì)體的要求。試驗(yàn)結(jié)果證明本品2小時內(nèi)有90%藥物到達(dá)腫瘤細(xì)胞內(nèi)，而普通制劑需要48小時才有卯％藥物到達(dá)腫瘤細(xì)胞內(nèi)，動物體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明本品在腫瘤體內(nèi)的藥物農(nóng)度比普通制劑要高5-8倍。其工藝簡單易控制，質(zhì)量穩(wěn)定。圖1注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體制備工藝流程圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1處方1:羥基喜樹堿500毫克，氫化豆磷脂4000毫克，泊活沙姆2000毫克，葡萄糖50毫克，甘露醇50毫克；實(shí)施例2處方2:羥基喜樹堿500毫克，氫化豆磷脂2000毫克，泊活沙姆1000毫克，葡萄糖20毫克，甘露醇20毫克；實(shí)施例3處方3:羥基喜樹堿500毫克，氫化豆磷脂6000毫克，泊活沙姆4000毫克，葡萄糖100毫克，甘露醇100毫克；實(shí)施例4處方4:輕基喜樹堿500毫克，氫化豆磷脂3000毫克，泊活沙姆3000毫克，葡萄糖30毫克，甘露醇60毫克；實(shí)施例5處方5:羥基喜樹堿500毫克，氫化豆磷脂4000毫克，泊活沙姆3500毫克，葡萄糖100毫克，甘露醇60毫克。它是將羥基喜樹堿和氫化豆磷脂在40°C~60"下用乙醇溶解，溶解后得到的有才幾相與加泊洛沙姆水溶液混合，在50—60。C攪拌分散均勻，在1200bar壓力下勻質(zhì)處理，再減壓回收乙醇后，加入葡萄糖和甘露醇溶解，加蒸餾水定容3000毫升后過濾，凍干，過濾采用0.22jxm微孔膜過濾。所述泊洛沙姆水溶液的重量濃度為28.5%。注射用羥喜樹堿納米脂質(zhì)體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.性狀本品為類白色粉末或類白色顆粒狀。2.鑒別(1)取本品一瓶，加0.4%氫氧化鈉溶溶溶解。溶道即顯亮黃色并有黃色熒光另稀醋酸0.5ml熒火消失，溶液變成微黃色。(2)在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間與羥基喜樹堿對照品主峰的保留時間一致。(3)取本品一瓶，加注射用水溶解，取該溶液適量，在電鏡下觀察可見具有脂質(zhì)體雙層結(jié)構(gòu)的納米顆粒。3.檢查(l)pH值取本品，加水制成每O.lml含羥基喜樹堿mg,的溶液，依法測定(中國藥典2005年做二部附錄VIH)。pH值為6.0-7.0，按上述方法測定本品三批樣品，PH值見表1。表l三批注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體溶液的pH值批號123平均45值0811066.346.316.356.346.326.330811076.456.476.446.466.476.460811086.686.666.696.706.696.68(2)干燥失重取本品3瓶，混勻，依試測定(中國藥典2005年版第二部附錄VEI第一法)，含水份小于5%，按該法測定本品三批，其干燥失重分別為3.1°/。，2.6%和2.9%。(3)平均粒徑取本品1瓶，加蒸餾水5ml溶解，用激光粒度分析儀測定溶液。測得三批樣品的粒度結(jié)果見表2。表2.三批注射用輕基喜樹堿二L納米脂質(zhì)體的平均粒度批號平均豐立徑(nm)081106810811070811087873(4)有關(guān)物質(zhì)本品中有關(guān)物質(zhì)一個即喜樹堿，考慮到在穩(wěn)定性試驗(yàn)中有可能產(chǎn)生分解產(chǎn)物，為此采用歸一化法測定有關(guān)物質(zhì)與分解產(chǎn)物，測定方法如下。取本品適量用流動相溶解并定為至100ml，取上述溶液20p注入色謙儀，記錄色謙圖至主峰保留時間的2倍，扣除溶劑峰面積，按各雜質(zhì)峰面積的和與總峰面積的比值計算有關(guān)物質(zhì)與分解產(chǎn)物的含量。按上述方法測定三批本品，其有關(guān)物質(zhì)與分解產(chǎn)物見下表3.表3三批注射用鞋基喜樹堿納米脂質(zhì)體有關(guān)物質(zhì)含量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(5)無菌本品為供靜脈注射用，必須無菌，因此制訂無菌檢查，方法為取本品2瓶，分別加滅菌水制成(lml中含0.2mg的羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體的溶液，依法測定(中國藥典二部，附錄XIH)三批樣品勻符合規(guī)定。4.含量測定采用高效液相色譜法測定。用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲酸一水(60:40)為流動相，檢測波長為382nm，理論塔板數(shù)按羥基喜樹堿計算，應(yīng)不低于3000,外標(biāo)溶液的制備，取羥基喜樹堿對照品約25mg,精密稱定，置之度外50ml容量瓶中，用曱醇定容，取l.Oml用流動相定容到50ml搖勻，作為外標(biāo)溶液。測定法取樣品10瓶，分別用流動相溶解并定容至100ml，作為供試品溶液，將外標(biāo)溶液和供試品溶液用0.8ixm^L孔濾膜濾后，超聲脫氣l分鐘，吸注入HPLC中，記錄色譜圖，按外標(biāo)法，以主峰面積計算供試品溶液中羥基喜樹堿的含量，按該法測定三批樣品含量分別為98.38%,99.71%和100.86%。5.包封率測定取本品一瓶，加水10.0ml溶解，并定量移至離心管中，在4°C，4萬轉(zhuǎn)/分，離心2小時，取出上清液于25ml容量瓶中，用甲醇定容。取20p注入HPLC中，記錄色譜圖；另外稱取約20mg羥基喜樹堿對照品，粒度穩(wěn)定，用曱醇定容至50ml,容量瓶中，取l.Oml用甲醇稀至25ml，取1.0ml用流動相定容至50ml，取20p注入HPLC中，記錄色譜圖。(總藥一游離藥)包封率％=-x100%總藥按上述方法測得三批樣品的的包封率分別為98.77%，97.68和98.51%。注射用羥基喜樹納米脂質(zhì)體對腫瘤細(xì)胞(Bel-7402)的作用本試驗(yàn)采用MTT法測定注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體對人腫瘤細(xì)胞Bel-7402的抗腫瘤作用，結(jié)果見表4。表4注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體對人肝癌Bel-7402的抗腫瘤作用納米脂質(zhì)體制脂質(zhì)體制劑劑抑制率(％)濃度(m濃度(pg/ml)g/m)5096.81252593.262.512.589.431.256,2581.315.6253.12580.07.81251.562573.93.906250.7812551.71.9531250.39062536.40.9765625普通注射劑抑制率抑制率濃度(H(%)(%)g/ml)93.225086.591.712584.089.062.579.585.431.257080.215.62578.171.17.812562.053.73.9062540.335.81.95312537.5以上試驗(yàn)結(jié)果說明在約60%抑瘤率的情況下納米脂質(zhì)體制劑比普通的注射劑要低得多，只有普通注射劑的約1/7。羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體制劑的ICso為0.751,脂質(zhì)體制劑的ICso為1.85,而普通注射劑為ICs。為5.86。ICso(普通注射液)/IC5o(納米脂質(zhì)體)=7.8倍ICso(脂質(zhì)體制劑)/IC5()(納米脂質(zhì)體)=2.46倍注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體對棵鼠人肝癌SMM-7724的抗腫瘤作用。1.試-險方法取生長旺盛的瘤組織切成1.5mrr^左右，在無菌條件下，接種于棵小鼠右側(cè)腋窩皮下?？眯∈笠浦擦鲇糜螛?biāo)長尺測量直徑，待腫瘤生長至50-200rm^后將動物隨機(jī)分組，給藥兩周后，處死動物分離腫瘤稱重，并計算抑瘤率。2.給藥劑量空白組給注射用水，普通羥喜樹堿組值按8mg/kg每周給藥3次；羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體組分為高、中、低三個劑量組。即4mg/kg、2mg/kg和lmg/kg,每周給藥3次。3.試驗(yàn)結(jié)果見表5表5注射用雍基喜樹堿納米脂質(zhì)體對人肝癌SMM，7724的抑制率組別劑量給藥方法動物數(shù)抑瘤率(％)空白對照0.2ml/只iv12普通羥喜注射劑8mg/kgiv669.2高劑量組4mg/kgiv694.6羥喜納米脂質(zhì)體中劑量組2mg/kgiv681.7低劑量組lmg/kgiv664.3羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體在腫瘤體內(nèi)的分布1.組織樣品的處理組織樣本的處理腫瘤組織稱重后，4姿比例加重定量生理鹽水、水浴中勻漿制成200mg/ml的組織勻漿，取200^1組織勻漿，加入50nl內(nèi)標(biāo)溶液，2ml磷酸混;旋2分鐘，避光環(huán)合2小時，環(huán)合后的樣品加乙腈300^1，充分混勻，起聲5分鐘，130000r/min離心10分鐘，取離心后的上清液300^1，置于10ml離心管50°C水浴氮?dú)饬鞔蹈?，殘渣?0nl流動相溶解，取20pl進(jìn)樣。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線取小鼠空白腫瘤體勻漿加HPT標(biāo)準(zhǔn)品溶液，配成含量為12.5、25.0、50、100、250、500ng/ml的組織樣品，按"組織樣品的處理，，項(xiàng)下操作，殘渣以8(HU流動相溶解，取20ul進(jìn)樣，以組織樣本的HPT配制的濃度為橫坐標(biāo)，HPLC色譜圖的主峰面積為縱坐標(biāo)纟會制標(biāo)性曲線。Y=502.82X+268.08r=0.99983.試-險方法取生長旺盛的肺瘤組織切成1.5mm3左右，在無菌條件下，接種于小鼠右側(cè)腋下，待腫瘤生長至100—200mm3后，按8mg/Kg—次性尾靜脈注射，并于0.5,1.0，2.0小時處死動物，分離腫瘤，稱重，按"組織樣品的處理"方法處理，用HPLC發(fā)測定個瘤體內(nèi)的藥物含量。結(jié)果見表6表6<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體，它是由下列重量份的主要原料配制而成的羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂20～60，泊活沙姆10～40，葡萄糖0.2～1，甘露醇0.2～1。2、如權(quán)利要求1所述注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體，其特征是所述原料重量份為羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂30-50，泊活沙姆10~30，葡萄糖0.3—0.6，甘露醇0.3—0.6。3、如權(quán)利要求1所述注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體，其特征是所述原料重量份為羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂40,泊活沙姆20,葡萄糖0.5，甘露醇0.5。4、一種注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體的制備方法，它是將羥基喜樹堿和氫化豆磷脂在40°C60。C下用乙醇溶解，溶解后得到的有機(jī)相與加泊洛沙姆水溶液混合，在50—60。C攪拌分散均勻，在1200bar壓力下勻質(zhì)處理，再減壓回收乙醇后，加入葡萄糖和甘露醇溶解，加蒸餾水定容后過濾，凍干，所述主要原料配制而成的羥基喜樹堿5，氫化豆磷脂20-60，泊活沙姆10~40,葡萄糖0.2~1,甘露醇0.2~1。5、如權(quán)利要求4所述注射用輕基喜樹堿納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述泊洛沙姆水溶液的重量濃度為28.5%。6、如權(quán)利要求4所述注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述過濾采用0.22nm孩i孔膜過濾。7、如權(quán)利要求4所述注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述凍干后的脂質(zhì)體粒徑不超過100納米。全文摘要本發(fā)明公開了一種注射用羥基喜樹堿納米脂質(zhì)體及其制備方法。它是將羥基喜樹堿和氫化豆磷脂在40℃～60℃下用乙醇溶解，溶解后得到的有機(jī)相與加泊洛沙姆水溶液混合，在50-60℃攪拌分散均勻，在1200bar壓力下勻質(zhì)處理，再減壓回收乙醇后，加入葡萄糖和甘露醇溶解，加蒸餾水定容后過濾，凍干。由于本產(chǎn)品中的脂質(zhì)體的粒徑小于100nm，符合中國藥典2005年版納米脂質(zhì)體的要求。試驗(yàn)結(jié)果證明本品2小時內(nèi)有90％藥物到達(dá)腫瘤細(xì)胞內(nèi)，而普通制劑需要48小時才有90％藥物到達(dá)腫瘤細(xì)胞內(nèi)，動物體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明本品在腫瘤體內(nèi)的藥物濃度比普通制劑要高5-8倍。其工藝簡單易控制，質(zhì)量穩(wěn)定。文檔編號A61K9/127GK101548951SQ20091006219公開日2009年10月7日申請日期2009年5月22日優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日發(fā)明者易以木申請人:易以木