專利名稱：心腦血管及眼科藥物及其制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是提供心腦血管及眼科藥物及其制備和用 途。
背景技術(shù)：
目前尚無公開的文獻(xiàn)僅報(bào)道了葛根素[8_β -D-葡萄吡喃糖-4'，7- 二羥基異黃 酮，分子式=C21H20O9,分子量416. 37，CAS :3681-99_0]，到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚無公開的文 獻(xiàn)報(bào)道葛根素結(jié)晶水合物[C21H20O9 · η H2O, η = 0. 8 1. 3]及其制備方法和用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所涉及的是報(bào)道用于高血壓、冠心病、肺心病、心衰、心絞痛、心肌梗死、心 源性休克、心律失常、心肌炎、缺血性腦病、腦梗塞、腦血栓及其后遺癥、改善腦循環(huán)、椎-基 底動(dòng)脈供血不足性眩暈、下肢深靜脈血栓后綜合征、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥糖尿病腎病，糖 尿病周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾、降低眼內(nèi)壓，防 治青光眼，調(diào)節(jié)血脂等疾病預(yù)防或治療的心腦血管及眼科藥物及其制備和用途。其化學(xué)名 稱為其分子式為C21H20O9 · η H2O, η = 0. 8 1. 3，η可以是0. 85、1、1· 1,1. 25或其之間的 數(shù)字。令人驚奇的是，不含結(jié)晶水的葛根素引濕性遠(yuǎn)高于本發(fā)明獲得的含有結(jié)晶水的葛 根素，本發(fā)明的含有結(jié)晶水的葛根素的水合物比不含結(jié)晶水的更能穩(wěn)定的存在，便于儲(chǔ)存 和運(yùn)輸，并在室溫下具有良好的流動(dòng)性，易于用于制劑的制備。特征性的，本發(fā)明的水合物 的熱分析(TG-DSC或者TG-DTA)圖譜可以看出不同的、近似水平的臺(tái)階狀態(tài)間的特征性的 失重平臺(tái)(大約60-150°C之間)具有強(qiáng)烈的對(duì)應(yīng)的吸熱峰，熱分析圖譜顯示出葛根素1水 合物(C21H20O9 · H2O)、葛根素1. 25水合物(C21H20O9 · 1. 25H20)等，用卡爾費(fèi)休法測(cè)定水分結(jié) 果與熱分析結(jié)果相一致。本發(fā)明的葛根素結(jié)晶水合物，能穩(wěn)定存儲(chǔ)。將上述葛根素的水合物和葛根素?zé)o水 物樣品分別密閉與西林瓶中進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)(色譜條件色譜柱C18(150mmX4. 6mm, 5ym)；流動(dòng)相；0. 的枸櫞酸溶液-甲醇(75 25)；流速lml/min ；溫度室溫；檢測(cè)波 長(zhǎng)250nm)，出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的葛根素的水合物的含量和有關(guān)物質(zhì)沒有明顯變化， 葛根素?zé)o水物加速試驗(yàn)6個(gè)月與0月相比(40°C，RH75%)，有關(guān)物質(zhì)增加的高于葛根素1 水合物。按中國(guó)藥典要求進(jìn)行引濕性試驗(yàn)取葛根素?zé)o水物和本發(fā)明的結(jié)晶水合物約5g， 置于干燥恒重的表面皿中，精密稱重。25°C、相對(duì)濕度為75%，分別于試驗(yàn)Oh和48h取樣， 計(jì)算引濕增重的百分率，結(jié)果顯示，無水物引濕性比本發(fā)明的水合物高得多，說明本發(fā)明的 葛根素結(jié)晶水合物具有更好的存儲(chǔ)穩(wěn)定性。結(jié)果見表1 3。此外，無水物的潮解使得在處理時(shí)要隔絕空氣防止粘連等，不似水合物具有良好 的滑動(dòng)性，改善制劑的可操作性。表1.本發(fā)明葛根素1水合物加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
表 2.
取樣時(shí)間(月)性狀標(biāo)示含量(%)有關(guān)物質(zhì)(%)0類白色粉末99. 5<2%1類白色粉末99. 3<2%2類白色粉末99. 6<2%3類白色粉末99. 4<2%6類白色粉末99. 3<2%本發(fā)明葛根素1水合物長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果取樣時(shí)間(月)性狀標(biāo)示含量(%)有關(guān)物質(zhì)(%)0類白色粉末99. 5<2%3類白色粉末99. 6<2%6類白色粉末99.5<2%9類白色粉末99.4<2%12類白色粉末99.4<2% 表3.引濕試驗(yàn)結(jié)果
取樣時(shí)間(48小時(shí))與O小時(shí)相比，增重％
葛根素1水合物0. 12葛根素?zé)o水物4. 26
心腦血管及眼科藥物制備方法包括
方法A.在反應(yīng)容器中，將葛根粉用水或C1-C6的低分子醇一種或幾種進(jìn)行冷提、 超聲提取、微波提取或回流提一次至數(shù)次合并，過濾，微孔濾膜或者陶瓷膜過濾，濾液濃縮， 濃縮得葛根浸膏，加水，用酸調(diào)節(jié)PH3-5，再用堿或者碳酸鈉或者碳酸氫鈉一種或者數(shù)種調(diào) 節(jié)PH為6-9之間，過濾，然后用C3-C6的低分子醇或C3-C8的低級(jí)酮，如異己酮、或C2-C8的 低級(jí)酯的一種或幾種為溶劑進(jìn)行萃取，萃取液蒸干得固體，加水，再用C3-C6的低分子醇或 C3-C8的低級(jí)酮，如異己酮、或C2-C8的低級(jí)酯的一種或幾種為溶劑進(jìn)行萃取，濃縮，靜置， 過濾，以水、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分 子醇如甲醇、乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑， 進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干燥，即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法B.葛根浸膏或葛根總黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮 物，加水或C1-C6的低分子醇一種或幾種，微孔濾膜(包括陶瓷膜)過濾，過中性氧化鋁層 析柱、硅膠層析柱及大孔樹脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分 子醇、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、一種或幾種進(jìn)行洗脫，濃縮或者超濾膜濃縮，靜置，過濾，以水、 C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、 乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶 一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干燥，即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法C.葛根浸膏或葛根總黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮 物，加水或C1-C6的低分子醇一種或幾種，經(jīng)過微孔濾膜、中空纖維的膜、陶瓷膜、超濾膜、 納濾膜的一種或幾種的一次或數(shù)次過濾或濃縮，以水、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí) 酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、 四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干燥，即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法D.葛根浸膏或葛根黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮 物，經(jīng)過中空纖維的膜、陶瓷膜、超濾膜、納濾膜的一種或幾種的一次或者多次過濾或濃縮， 以水、氯仿、C3-C6的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、乙醇、異丙 醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為溶劑，置于磁通量為0. 1-5特斯拉 的磁場(chǎng)下進(jìn)行一次或多次結(jié)晶，過濾，水洗，干燥，即得葛根素結(jié)晶水合物；上述各方法中的不同步驟可以交替使用，以便制備葛根素結(jié)晶水合物。上述不同方法得到的相同的葛根素水合物或葛根素1水合物其晶型有所不同，在 X粉末衍射上的表現(xiàn)有所不同。心腦血管及眼科藥物的用途在于在制備注射用凍干粉針制劑、或者小水針注射 劑，大輸液制劑(包括葛根素結(jié)晶水合物的葡萄糖、氯化鈉的大輸液制劑)、經(jīng)腸道給藥制 劑，包括片劑、膠囊、顆粒劑、經(jīng)眼部給藥制劑(滴眼液、眼用凝膠)上的應(yīng)用。心腦血管及眼科藥物的用途在于在制備高血壓、冠心病、肺心病、心衰、心絞痛、 心肌梗死、心源性休克、心律失常、心肌炎、缺血性腦病、腦梗塞、腦血栓及其后遺癥、改善腦 循環(huán)、椎-基底動(dòng)脈供血不足性眩暈、下肢深靜脈血栓后綜合征、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥糖 尿病腎病，糖尿病周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾、降 低眼內(nèi)壓，防治青光眼，調(diào)節(jié)血脂等疾病預(yù)防或治療的藥物中的應(yīng)用。葛根素結(jié)晶水合物可以與環(huán)糊精形成的水溶性的包合物(亦為復(fù)合物)，環(huán)糊精 優(yōu)選2-羥丙基β-環(huán)糊精(2-HP-i3-CYD)、3-羥丙基β-環(huán)糊精(3-ΗΡ-β-CYD)、磺丁 醚-β-環(huán)糊精(SBE-i3-CD)等中的一種或多種，并由此制備能夠更穩(wěn)定存放的制劑，這在 已公開文獻(xiàn)中未曾報(bào)道過。葛根素結(jié)晶水合物與環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物形成水溶性的包合 物，其中葛根素結(jié)晶水合物與環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物的質(zhì)量或重量比為1 5至1 60。用于制備經(jīng)腸道給藥制劑的片劑，膠囊，顆粒劑，其中可含有藥學(xué)上可接受的填充 劑，如淀粉、變性淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、環(huán)糊精、山梨醇、甘露醇、磷酸鈣、氨基酸等； 藥學(xué)上可接受的崩解劑，如淀粉、變性淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷 酮、低取代羥丙基纖維素、羥丙基淀粉、羧甲基纖維素鈉、瓜爾樹膠、甲基纖維素、表面活性 劑；藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑和粘合劑，如膠化淀粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維 素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其鹽；藥學(xué)上可接受的潤(rùn)滑劑和助流劑，如硬脂酸、硬脂酸 鎂、硬脂酸鋅、微粉硅膠、滑石粉、聚乙二醇2000-8000、十二烷基硫酸鎂的一種或數(shù)種；藥 學(xué)上可接受的甜味劑，如甜蜜素、阿斯巴甜、糖精鈉、甜葉菊素、木糖醇、山梨醇、木糖、乳糖、 甘草甜素、蔗糖、三氯蔗糖等；藥學(xué)上接受的混懸穩(wěn)定劑，如黃原膠、瓜爾樹膠、甲基纖維素、 乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、聚乙二醇2000-8000、表面活性劑、海藻酸及 其鹽等；粘合劑為聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、預(yù)膠化淀 粉、淀粉、明膠、阿拉伯膠中的一種或數(shù)種，粘合劑可以由水或乙醇或者兩者混合物為溶劑。葛根素結(jié)晶水合物滴眼液制備中，各組分的重量份數(shù)可以為葛根素結(jié)晶水合物 0. 2-2、助溶劑1-10、抗氧化劑0. 02-0. 5、金屬絡(luò)合劑0. 01-0. 2、滲透壓調(diào)節(jié)劑0. 5_10、防腐 劑0. 002-0. 4，水為10-100份，另加PH調(diào)節(jié)劑適量。其制備方式可以是將葛根素水合物加入適量注射用水中，加助溶劑，攪拌，試溶 解，加抗氧劑、防腐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑，水，攪拌均勻，成溶液狀，使pH =5. 0-7. 0，以微孔濾膜或超濾等方式過濾，檢測(cè)，無菌分裝于已滅菌的干凈塑料眼藥水瓶中 即得。葛根素結(jié)晶水合物眼用凝膠，100份凝膠中各組分的重量份數(shù)可以為葛根素結(jié) 晶水合物0. 2-2、凝膠基質(zhì)0. 05-1、滲透壓調(diào)節(jié)劑1-8、抗氧化劑0. 01-0. 5、金屬絡(luò)合劑 0. 01-0. 2、防腐劑0. 002-0. 4，其余為水，另加PH調(diào)節(jié)劑適量。葛根素水合物眼用的凝膠制備葛根素水合物與50-95%基質(zhì)混勻，基質(zhì)可以 是水、乙醇、甘油、三乙醇胺、甘油明膠、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、黃原 膠、聚乙二醇 200-8000 (包括 PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、 PEG4000等)，泊洛沙姆系列(可以是泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-338，泊洛沙 姆-407)、聚乙烯吡咯烷酮、半合成硬脂肪酸脂、水溶性單甘酯、卡波姆系列(如卡波姆931、 934、940、974、AA-1、1342等)等中的一種或數(shù)種，可含有藥學(xué)上可接收的抑菌劑和穩(wěn)定劑， 藥學(xué)上可接收的PH調(diào)節(jié)劑。制備時(shí)可先將凝膠基質(zhì)卡波姆或甘油明膠、甲基纖維素、羥丙 基纖維素、羧甲基纖維素、黃原膠、泊洛沙姆、聚乙二醇等用水分散，加入甘油、水浴加熱，攪 拌混勻，加處方量的葛根素水合物、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑、藥學(xué)上可接收的抑菌劑和穩(wěn) 定劑，攪拌，用藥學(xué)上可接收的PH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH = 5. 0-7. 0左右，加水至全量、攪拌至勻、 過濾、滅菌、分裝，即得。或?qū)⒏鸶厮衔?、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑、藥學(xué)上可接收的抑菌劑和穩(wěn)定劑， 藥學(xué)上可接收的PH調(diào)節(jié)劑，攪拌，使溶解，以微孔濾膜或超濾等方式過濾，，將濾液加入到 注射用水分散的凝膠基質(zhì)中，攪拌，混勻，調(diào)節(jié)PH = 5. 0-7. 0，加水至足量，攪拌均勻，滅菌、 分裝即得葛根素水合物的眼用凝膠。葛根素結(jié)晶水合物的注射劑，其制備方法為凍干粉針制劑的制備方法為取葛根素水合物，加藥學(xué)上可接受的助溶劑、凍干支 持劑或輔形劑，加注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，用藥學(xué)上可接受的酸堿調(diào)節(jié)pH為4. 0 7. 5，加活 性碳0. 005-0. 5% (W/V)攪拌15 45min,過濾，補(bǔ)水，無菌過濾，按50 600mg/瓶分裝， 冷凍干燥，壓塞，得成品。藥學(xué)上可接受的凍干支持劑或輔形劑可以含有乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木 糖醇、右旋糖酐、抗壞血酸、氨基酸、甘氨酸、牛磺酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、去氧膽酸鈉 等的一種或幾種。葛根素水合物小容量注射液及其制備工藝葛根素水合物加注射用水和藥學(xué)上可 接受的附加劑，例如加藥學(xué)上可接受的助溶劑、藥學(xué)上可接受的PH調(diào)節(jié)劑、藥學(xué)上可接受 的抗氧劑、惰性氣體，過濾、除菌制成滅菌小容量注射液，使得其規(guī)格為50 SOOmg/支，其 pH值在3. 5 7. 5之間。葛根素水合物輸液及其制備工藝葛根素水合物加注射用水和藥學(xué)上可接受的附 加劑，例如加藥學(xué)上可接受的助溶劑、藥學(xué)上可接受的等滲調(diào)節(jié)劑、藥學(xué)上可接受的PH調(diào) 節(jié)劑、藥學(xué)上可接受的抗氧劑、惰性氣體，過濾、除菌制成滅菌大容量注射液，使得其規(guī)格為 100 800mg/瓶，其pH值在3. 5 7. 5之間。在本發(fā)明的葛根素水合物的制劑制備中，所使用的藥學(xué)上可接受的增溶劑或助溶 劑可為水、乙醇、丙二醇、丙三醇、1，3-丁二醇、吐溫20-80、聚乙二醇200-1000、聚乙烯吡咯 烷酮、十二烷基硫酸鈉、藥學(xué)上可接受的酰胺(如煙酰胺、硫脲、烏拉坦等)、胺類化合物(如
7乙二胺、二乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、葡甲胺、葡乙胺等)、堿性氨基酸(L型、D型的或消旋 的精氨酸、賴氨酸、組氨酸、瓜氨酸等)、環(huán)糊精、環(huán)糊精優(yōu)選B-環(huán)糊精、2-羥丙基β -環(huán)糊 精(2-ΗΡ- β -CYD)、3_ 羥丙基 β -環(huán)糊精(3-ΗΡ- β -CYD)、磺丁醚-β -環(huán)糊精(SBE- β -CD) 等的一種或幾種。葛根素結(jié)晶水合物與環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中葛根素結(jié) 晶水合物與環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物的質(zhì)量或重量比為1 5至1 60;藥學(xué)上可接受的抑菌劑可以是苯扎氯銨、苯扎溴銨、芐乙胺、西白林、乙醇、硝酸苯 汞、硫柳汞、苯甲醇、苯乙醇、苯氧乙醇、三氯叔丁醇、度米酚、對(duì)羥基苯甲酸酯類(對(duì)羥基苯 甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯等)、山梨酸或其藥用鹽等的一種或幾種。其藥學(xué)上可接受的PH調(diào)節(jié)劑可以是藥學(xué)上可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸、無機(jī)堿或 有機(jī)堿，也可以是廣義的路易斯酸或堿，可以含有一種或者幾種，可以是鹽酸、磷酸、丙酸、 醋酸及醋酸鹽、如醋酸鈉等，乳酸以及乳酸藥用鹽、枸櫞酸藥用鹽、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸 氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸鹽、酒石酸及其藥用鹽、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、 反丁烯二酸、順丁烯二酸、三羥基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、2_氨 基-2_(羥甲基)1，3_丙二醇胺、1，2_己二胺、N-甲基葡萄胺、二異丙胺以及它們的鹽，多羥 基羧酸及藥用鹽，如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、蘋果酸、蘇糖酸、葡庚糖酸、牛磺酸、氨 基酸及氨基酸鹽、磷酸鹽緩沖液、硼酸緩沖液等中的一種或者幾種。其藥學(xué)上可接受的抗氧劑和穩(wěn)定劑(包括絡(luò)合劑)可以是亞硫酸、亞硫酸鹽、亞硫 酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、連二亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽，有機(jī)硫化合物硫脲、谷胱甘肽、二巰基丙 醇、巰基乙酸及鹽、硫代乳酸及鹽、硫代二丙酸及鹽、苯酚類化合物，如沒食子酸及鹽、咖啡 酸、咖啡酸鹽、阿魏酸、阿魏酸鹽、二叔丁基對(duì)苯酚、2，5_ 二羥基苯甲酸、2，5_ 二羥基苯甲酸 鹽、苯酚或其衍生物、水楊酸或其鹽；氨基酸以及其鹽；抗壞血酸及抗壞血酸鹽、異抗壞血 酸及異抗壞血酸鹽、煙酰胺、酒石酸、硝酸鹽、磷酸鹽、醋酸藥用鹽、檸檬酸鹽、?；撬?、EDTA 及EDTA鹽、如EDTA 二鈉、EDTA四鈉、N-二(2-羥乙基)甘氨酸、環(huán)糊精，環(huán)糊精優(yōu)選B-環(huán) 糊精、2-羥丙基β-環(huán)糊精(2-HP-i3-CYD)、3-羥丙基β-環(huán)糊精(3-ΗΡ-β-CYD)、磺丁 醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-⑶)等，以上等中的一種或者幾種。其藥學(xué)上可接受的滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、轉(zhuǎn) 化糖、麥芽糖、右旋糖酐、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、硼酸等中的一種或幾種。去熱源和除菌方式可以是加入配液量0.005 3%的活性炭去熱源，微孔濾膜除 菌和熱壓滅菌，也可以采用超濾除菌、去熱源。超濾方法中，超濾器可選用平板式、卷式、管 式、中空纖維式或圓盒式等，優(yōu)選卷式和中空纖維式超濾器，可采用截留相對(duì)分子質(zhì)量為5 萬至30萬的濾膜除去大部分發(fā)熱性物質(zhì)和細(xì)菌后，再采用截留相對(duì)分子質(zhì)量1000 30000 的濾膜除去剩余熱源，優(yōu)選截留相對(duì)分子質(zhì)量4000 20000的濾膜。本發(fā)明的心腦血管及眼科藥物，適用于制備下列對(duì)所引起的人和動(dòng)物感染的治療 或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用在制備用于高血壓、冠心病、肺心病、心衰、心絞痛、心肌梗死、心源 性休克、心律失常、心肌炎、缺血性腦病、腦梗塞、腦血栓及其后遺癥、改善腦循環(huán)、椎-基底 動(dòng)脈供血不足性眩暈、下肢深靜脈血栓后綜合征、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥糖尿病腎病，糖尿 病周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾、降低眼內(nèi)壓，防治 青光眼，調(diào)節(jié)血脂等治療或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用。
用量用法一般情況下，于成人，取本發(fā)明葛根素水合物0. 020 0. 6g的凍干粉針 制劑或小水針于0. 9%氯化鈉或者5 10%葡萄糖20 500毫升中，作靜脈推注或滴注， 每日1 2次，葛根素水合物的0. 9%氯化鈉或者5 10%葡萄糖大輸液制劑的給藥途徑 為靜脈注射，給藥劑量同前；肌內(nèi)注射取本發(fā)明藥物0. 020 0. 6g凍干粉針制劑溶于注 射用水中，肌內(nèi)注射，每日1 2次；兒童減半量以上使用。經(jīng)胃腸道給藥劑量，一般情況下 為0. 020 0. 6g/次，每日1 3次。滴眼劑的用法成人常用量1 %葛根素滴眼液一次1 2滴，滴入眼瞼內(nèi)，閉目3 5分鐘。每天1-3次。眼用凝膠的給藥劑量參照滴眼液的劑量。


圖1為葛根素1水合物的熱分析圖譜。圖2為葛根素水合物的熱分析圖譜。圖3為葛根素1水合物的熱分析圖譜。測(cè)試條件=Setaram公司Setsys 16，樣品量約5mg,升溫速度:10K/min，N2流速 50ml/min，室溫 400°C左右。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1葛根素1水合物的制備在反應(yīng)容器中，將干葛根粉80g用乙醇80%水 溶液400ml回流提3次，合并提取液，粗濾，再以0. 22 μ m微孔濾膜過濾，濾液濃縮，得葛 根浸膏，加水，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH = 3-5，再用碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)PH為6-7之間，過濾，然后 用正丁醇和異己酮為溶劑進(jìn)行萃取，萃取液蒸干得固體，以水、甲醇、甲酸、乙腈為結(jié)晶溶 劑，進(jìn)行重結(jié)晶3次，過濾，水洗，固體80°C左右干燥4小時(shí)，得類白色結(jié)晶性粉末1. Sg ；熔 點(diǎn)208· 4 212. 5°C分解(未校正)，紫外光譜λ CH3OHfflax250nm, [a]D21+18. 14°C (c = 1，甲 醇)，ESI-MS :m/z :417[M+1]+；紅外光譜ν ■ max 1^3381、1627、1588、1515、1446，卡氏法 測(cè)定水分為4. 19%,TG-DTA 平臺(tái)失重約4. 13%，這與樣品含有1個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值 4. 15% )在誤差范圍內(nèi)(見附圖1)；元素分析實(shí)測(cè)值C 57. 99,H 5. 26 ；理論值C 58. 06， H 5. 10。實(shí)施例2葛根素結(jié)晶水合物的制備葛根浸膏或葛根總黃酮30g，加水，加熱約至 50-700. 15-0. 24 μ m的陶瓷膜過濾，濾液過中性氧化鋁層析柱、洗脫，DlOl大孔樹脂吸 附、用水洗，TLC監(jiān)測(cè)，再用30-75%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，直到其洗脫完畢，過濾，減壓濃 縮，靜置，以水、丙酮、乙醇、乙腈為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶2次，放置，過濾，水洗，將所得的 固體干燥；80°C左右干燥4-6小時(shí)，得類白色固體6. 6克，熔點(diǎn)227. 8 231. 8°C (未校 正)，紫外光譜λ CH3OHmax250nm ； [a]D21+18. 14°C (c = 1，甲醇)，ESI-MS :m/z :417[M+1]+ ；紅 外光譜 -Vmrmax 1^3380、1626、1586、1516、1446 ；卡氏法測(cè)定水分為 4. 01%, TG-DTA 平臺(tái) 失重約3. 49%，這與樣品含有1個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值4. 15%)在誤差范圍內(nèi)(見附圖 2)；元素分析實(shí)測(cè)值=C 58. 13，H 5. 21 ；理論值=C 58. 06，H 5. 10。實(shí)施例3葛根素1水合物的制備40目左右的干葛根粉90g，加水400ml超聲并 回流提取3次，合并提取液，經(jīng)粗濾，再經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜或陶瓷膜過濾，濾液然后在 25-65°C之間，0. 15-2MPa下(壓力可動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，或隨著試驗(yàn)進(jìn)行而增加壓差)，采用截留相
9對(duì)分子質(zhì)量4000 50000的超濾膜(聚砜中空纖維膜組件，纖維孔徑0. 011 μ m,內(nèi)徑為 1. Imm)過濾，濾液再經(jīng)截留相對(duì)分子質(zhì)量200以上的納濾膜過濾，濃縮，以90%甲醇水溶 液溶解，加乙酸、乙腈為結(jié)晶溶劑，放置，結(jié)晶，抽濾，水洗；如上法，以甲醇、水、乙酸、乙腈為 溶劑重結(jié)晶3次，將所得的固體80°C左右干燥4 6小時(shí)，得類白色結(jié)晶固體1. 6克，熔 點(diǎn)215· 5 218. 60C (未校正)，紫外光譜λ CH3°Hmax250nm，[a]D21+18. 14°C (c = 1，甲醇)， ESI-MS :m/z :416，399，360，350，297，267，254 ；紅外光譜:vKBrmaxcm_13380U625U587U515, 1446 ；卡氏法測(cè)定水分為4. 21%,TG-DTA 平臺(tái)失重約4. 07%，這與樣品含有1個(gè)結(jié)晶水的 結(jié)果(理論值4. 15% )在誤差范圍內(nèi)(見附圖3)；元素分析實(shí)測(cè)值C 58. 15，H 5. 02 ；理 論值=C 58. 06，H 5. 10。CH3OH實(shí)施例4葛根素水合物的制備20-60目左右的干葛根粉90g，加水400ml超聲提 取3次，合并提取液，經(jīng)砂型泵粗濾，再經(jīng)0. 22 μ m的微孔濾膜或陶瓷膜過濾，濾液然后在 25-65°C之間，0. 15-2MPa下(壓力可動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，或隨著試驗(yàn)進(jìn)行而增加壓差)，采用截留相 對(duì)分子質(zhì)量3000 50000的超濾膜(聚砜中空纖維膜組件，纖維孔徑0. 011 μ m,內(nèi)徑為 1. Imm)過濾，濾液再經(jīng)截留相對(duì)分子質(zhì)量200以上的納濾膜過濾，濃縮，以90%甲醇水溶 液溶解，加甲酸、乙酸、水為結(jié)晶溶劑，放置，結(jié)晶，抽濾，水洗；如上法，以甲醇、水、乙酸、乙 腈為溶劑重結(jié)晶3次，將所得的固體50°C左右干燥4 6小時(shí)，得類白色結(jié)晶固體1. 6克， 再50°C干燥2 4小時(shí)左右，得類白色結(jié)晶性粉末，易溶于水，熔點(diǎn)226.5°C (分解，未校 正)，紫外光譜λ CH3。Hmax250nm，[a]D21+18. 14°C (c = 1，甲醇)，ESI :m/z 416 [M]+, 399, 360, 350，297，267，254 ；；紅外光譜ν KBr max 1^3378、1624、1585、1516、1446，卡氏法測(cè)定水分 為5. 22%，熱分析TG-DTA :150°C之前的平臺(tái)失重約5. 32%，這與樣品含有1. 25個(gè)結(jié)晶水 的結(jié)果(理論值5. 13% )在誤差范圍內(nèi)。實(shí)施例5取葛根素1水合物20g，加精氨酸10g、甘露醇或木糖醇2. 0 5g加新鮮 的注射用水400ml攪拌使溶解，用枸櫞酸或枸櫞酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 0 6. 8的范圍內(nèi)， 加活性碳0.01 0.5% (W/V)攪拌15 45min，過濾，用0.22微米微孔濾膜過濾或者采用 截留相對(duì)分子質(zhì)量3000 8000的超濾膜過濾，按100、200mg/瓶或300mg/瓶或400mg/瓶 或600mg/瓶(以葛根素計(jì))分裝、加塞、冷凍干燥、壓塞、檢驗(yàn)、得成品。實(shí)施例6取葛根素水合物20g，加甘露醇10g，葡甲胺12g、吐溫802g，加40 60°C 注射用水320ml攪拌使溶解，用葡萄糖酸或枸櫞酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 0 6. 5的范圍內(nèi)， 加活性碳0. 01 0. 5% (W/V)攪拌15 45min,過濾，補(bǔ)加注射用水至400ml，用0. 22微米 微孔濾膜過濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量2000 8000的超濾膜過濾，按100、200mg/瓶或 300mg/瓶或400mg/瓶或600mg/瓶(按葛根素計(jì))分裝、加塞、冷凍干燥、壓塞、檢驗(yàn)合格、 得成品。實(shí)施例7將葛根素水合物IOg加到丙二醇90ml中、再加吐溫_802ml，攪拌使溶，加 80ml新鮮的注射用水，攪拌，攪拌中加焦亞硫酸鈉0. lg、EDTA 二鈉0. lg，2M乳酸和乳酸鈉 調(diào)節(jié)PH值在4. 0 6. 3的范圍內(nèi)，加活性碳0. 5% (W/V)攪拌15 45min，過濾，測(cè)定含量 及PH，補(bǔ)水至溶液總量為200ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過濾過濾，通氮、按2 20ml/ 瓶灌封、滅菌、檢驗(yàn)合格后得成品。實(shí)施例8葛根素1水合物(按葛根素計(jì))10g，甘油100ml、吐溫_802ml、鹽酸半胱 氨酸0. 2g，甘氨酸0. 4g、?；撬?. 5g、3-羥丙基β -環(huán)糊精2g、EDTA 二鈉0. Ig,加到250ml新鮮的注射用水中，攪拌使溶解，2M葡萄糖酸和葡萄糖酸鈉調(diào)節(jié)pH值在4. 0 6. 6的范圍 內(nèi)，加活性碳0. 5% (W/V)攪拌15 45min,過濾，補(bǔ)水至溶液總量為400ml，用0. 22微米微 孔濾膜過濾，通氮、按2 IOml/瓶灌封、滅菌、檢驗(yàn)合格后得成品。實(shí)施例9葛根素水合物大容量注射液的制備將葛根素水合物(以干品計(jì))10. Ig 用4. 5L新鮮的注射用水溶解完全后，加焦亞硫酸鈉lg、葡萄糖250g，?；撬?g，EDTA 二鈉 0. 2g，用4M的磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 0 6. 8的范圍內(nèi)，加配液量 0. 02 0. 5% (W/V)的活性炭，加熱攪拌15 30分鐘左右，過濾脫炭，測(cè)含量、pH值，補(bǔ)水 至溶液為5L，再經(jīng)0. 22um微孔濾膜精濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量4000 8000的超濾膜 過濾，經(jīng)半成品化驗(yàn)，待其含量、PH值和澄明度合格后，通氮灌封于50ml或IOOml或200ml 或250ml的玻璃瓶中，熱壓滅菌30分鐘，放冷，成品檢查，包裝即得。實(shí)施例10葛根素水合物氯化鈉輸液的制備將葛根素水合物(以葛根素計(jì))10g、 氯化鈉45g、鹽酸L-半胱氨酸lg、焦亞硫酸鈉lg、甘氨酸2g、EDTA 二鈉0. 2g，加入到4. 5L新 鮮的注射用水中，控制溫度在80°C以內(nèi)，攪拌使溶解完全，用2M的枸櫞酸或枸櫞酸鈉溶液 調(diào)節(jié)PH值在4. 0 7. 0的范圍內(nèi)，加配液量0. 1 %的活性炭，加熱攪拌15 30分鐘左右， 過濾脫炭，測(cè)含量、PH值，補(bǔ)水至溶液為5L，再經(jīng)0. 22um微孔濾膜精濾或者采用截留相對(duì)分 子質(zhì)量4000 8000的超濾膜過濾，檢測(cè)澄明度、不溶性微粒等合格后，通氮灌封于50ml或 IOOml或200ml或250ml的玻璃瓶中，滅菌，成品檢查，包裝即得。實(shí)施例11葛根素1水合物片劑(200mg/片)處方葛根素1水合物200g微晶纖維素80g羧甲基淀粉鈉20g10%聚維酮K-30乙醇水(7 3)溶液 適量微粉硅膠Ig將葛根素1水合物、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉過100目篩，用10%的聚維酮K-30 乙醇水(7 3)溶液適量制軟材，過18-24目篩制粒，干燥，過14-20目篩整粒后，加微粉硅 膠混勻、壓片、檢驗(yàn)、包裝。實(shí)施例12葛根素1水合物膠囊(IOOmg/粒)處方葛根素1水合物 IOOg微晶纖維素50g乳糖IOg膠化淀粉10%適量硬脂酸鎂2g將葛根素1水合物、微晶纖維素、乳糖過100目篩，用10%的膠化淀粉適量制軟材， 過18-24目篩制粒，干燥，過14-20目篩整粒后，加硬脂酸鎂混合，灌裝膠囊。實(shí)施例13葛根素結(jié)晶水合物的顆粒劑(200mg/包)處方葛根素結(jié)晶水合物200g甘露醇IOOg乳糖20g甜蜜素2g
固體食用香精I(xiàn)g黃原膠2g8%聚維酮K-30乙醇水溶液 適量將葛根素結(jié)晶水合物、甘露醇、乳糖、甜蜜素、食用香精過100目篩，用8%的聚維 酮K-30乙醇水溶液適量制軟材，過18-24目篩制粒，60°C以下干燥，加過100目篩的黃原 膠，過14-20目篩整粒后，混勻，加過100目篩的黃原膠，分包裝。實(shí)施例14葛根素1水合物的滴眼液將葛根素1水合物5. 23g、甘油50ml、聚維酮K_305g加入適量的注射用水，攪拌使 其溶解后，再將亞硫酸鈉0. 6g、EDTA 二鈉0. 3g、5%苯扎氯銨溶液1ml、氯化鈉3. Ig加入到 上述溶液中，攪拌使溶解，以磷酸氫鈉和磷酸氫二鈉溶液調(diào)至6. 0-7. 0，然后加入注射用水 至500ml，攪拌均勻，檢測(cè)，用0. 45-0. 2 μ m微孔濾膜過濾至澄明，分裝于已滅菌的干凈眼藥 水瓶中，滅菌，放冷，即得。實(shí)施例15將葛根素1水合物5. 23g、甘油50ml、聚維酮K_305g加入適量的注射用 水，攪拌使其溶解后，再將焦亞硫酸鈉0. 6g、EDTA 二鈉0. 3g、甘露醇4g加入到上述溶液中， 攪拌使溶解，以硼酸緩沖液調(diào)至6. 0-7. 0，然后加入注射用水至500ml，攪拌均勻，檢測(cè)，用 0. 45-0. 2 μ m微孔濾膜過濾至澄明，分裝于已滅菌的干凈單劑量的眼藥水瓶中，滅菌，放冷， 即得。實(shí)施例16葛根素1合物的眼用凝膠處方葛根素1水合物5. 2g、卡波姆934或卡波姆971 2g、甘油10ml、甘露醇6g、 EDTA二鈉0. lg、硼砂2g、硼酸lg、對(duì)羥基苯甲酸乙酯0. 3g、磷酸氫鈉和磷酸氫二鈉溶液適量 調(diào)節(jié)PH值、加注射用水到500ml。將卡波姆934用適量注射用水使其分散、溶脹，加入甘油、水浴加熱，攪拌混勻，加 處方量的葛根素水合物、甘油、甘露醇、EDTA 二鈉、硼砂、硼酸、對(duì)羥基苯甲酸乙酯加入到適 量注射用水中，攪拌，用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH = 6. 0-6. 7左右，使溶解，將其加入到水分散的凝 膠基質(zhì)中，攪拌，加水至全量、攪拌至勻、過濾、滅菌、分裝，即得。藥效學(xué)試驗(yàn)1、對(duì)烏頭堿誘發(fā)大白鼠心律失常的作用SD大鼠20只，雌雄不拘，體重185士 19g，隨機(jī)分為2組，分別靜脈注射給予生理 鹽水、葛根素1水合物(加助溶劑等配置成可注射的溶液UOOmg^kgA 3%戊巴比妥鈉 40mg· kg—1麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。舌下靜脈注射給藥，6min后，恒速靜脈注射 0. 0025%烏頭堿，Zyg.min-1^). 08ml ^irT1)，記錄出現(xiàn)室早(VP)、室速(VT)、室顫(VF)及 死亡(CA)的時(shí)間，計(jì)算相應(yīng)的劑量。結(jié)果表明，葛根素1水合物組能顯著增加烏頭堿致大鼠VP、VT、VF和CA的用量， PW組與生理鹽水組相比有顯著差異，見表4。表4.葛根素1水合物對(duì)烏頭堿誘發(fā)大白鼠心律失常的作用(I±s,n = 10) Pff組與生理鹽水組相比(t檢驗(yàn))p < 0. 052、葛根素1水合物對(duì)ACE活性的抑制作用Wistar大鼠280 300g 24只，隨機(jī)分為3組，每組8只，一組為對(duì)照組，另兩組分 別為劑量100mg/kg，200mg/kg的給藥組(加助溶劑等配置成可注射的溶液)，腹腔注射給 藥，對(duì)照組給予的生理鹽水，給藥60min后用戊巴比妥鈉腹腔麻碎，開胸心臟取血，血樣 室溫靜置30min，3500r/min低溫離心lOmin，取上清液_65°C左右保存，待測(cè)。ACE活性的測(cè)定參考文獻(xiàn)[王賦敏，等.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1983，6 (3) :145
151]，結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以is表示，數(shù)據(jù)作方差分析和t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明大鼠血清 ACE活性，葛根素1水合物與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組中大鼠血清ACE活性呈濃度依賴性降低(P < 0. 01)，不同濃度的葛根素1水合物明顯抑制ACE活性。結(jié)果見表5。表5.葛根素1水合物對(duì)ACE活性的抑制作用 上世紀(jì)八十年代以來，由于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)在臨床心血管方面 的廣泛應(yīng)用，以及局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的發(fā)現(xiàn)和研究，使人們認(rèn)識(shí)到RAS，尤其 是心血管局部RAS在許多心血管疾病中起著至關(guān)重要的作用。ACE位于RAS的中心，是RAS 活性的限速酶，能將血管緊張素I (Ang I)轉(zhuǎn)變?yōu)檠芫o張素II (Ang II)?，F(xiàn)已證實(shí)Ang II 對(duì)心臟具有冠脈收縮和正性心肌力作用；可直接或間接通過促進(jìn)兒茶酚胺釋放使血管平滑 肌收縮；并能刺激平滑肌細(xì)胞增生，促使心肌細(xì)胞肥大；參與缺血-再灌注損傷，引起心律 失常。ACE還能水解緩激肚，后者為擴(kuò)血管物質(zhì)。正常生理?xiàng)l件下，體內(nèi)的血管緊張素II是維持循環(huán)血壓、心臟和血管形態(tài)的重要 調(diào)節(jié)性物質(zhì)。在高血壓或胰島素抵抗等病理狀態(tài)下，血壓升高血漿或胰島素水平升高等，并 刺激腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)活動(dòng)增強(qiáng)，使得血漿和局部組織中血管緊張素H生成過 多。過多的血管緊張素II促進(jìn)平滑肌細(xì)胞肌球蛋白輕鏈磷酸化，直接收縮血管平滑肌，并 刺激機(jī)體組織產(chǎn)生過多的活性氧，滅活內(nèi)皮細(xì)胞釋放的一氧化氮(NO)，使NO濃度下降，同 時(shí)增加交感神經(jīng)活動(dòng)，使得外周循環(huán)阻力增加而引起血壓升高。另一方面，過多的Ang II通過破壞胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和對(duì)血流動(dòng)力學(xué)的影響，減少 骨骼肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)胰島素抵抗的形成，形成惡性循環(huán)。此外，過多的AngII 刺激轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-bl(TGF-bl)和I型纖溶酶原激活物抑制因子的表達(dá)，這些物質(zhì)的形 成與胰島素抵抗的多種嚴(yán)重并發(fā)癥如高血壓、心臟重塑和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生有著密切關(guān)
13系。研究表明ACEI的藥理作用是多方面的，主要包括1)、抑制循環(huán)中血管緊張素II 轉(zhuǎn)化酶系統(tǒng)；2)、抑制組織及血管緊張素系統(tǒng)；3)、減少末梢神經(jīng)元釋放去甲腎上腺素；4)、 減少內(nèi)皮系統(tǒng)形成內(nèi)皮素；5)、增加緩激肽及擴(kuò)血管的前列環(huán)素的形成；6)、減少醛固酮的 分泌，使水鈉潴留減少。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑通過上述作用可起到以下效應(yīng)降低血壓；逆轉(zhuǎn)心臟及 血管結(jié)構(gòu)，減輕左心室肥厚及重量，使阻力血管中層/管腔徑比值減小，從而減少高血壓、 心肌梗塞后及心功能障礙的心肌細(xì)胞過度增生及肥厚，改善心肌梗塞后的預(yù)后，減少意外 發(fā)生率及死亡率，減少或防止高血壓病靶器官的損害，治療充血性心力衰竭及心功能障礙， 降低充血性心力衰竭的發(fā)生及死亡率，增加大血管的順從性，減少動(dòng)脈粥樣硬化形成及抗 心肌缺血；減低胰島素抵抗，改善對(duì)胰島素的敏感性；具有保護(hù)腎臟的作用，特別是在糖尿 病高血壓患者，由于入球小動(dòng)脈的壓力增高、進(jìn)入的血流也多，必然導(dǎo)致腎小球的高濾過狀 態(tài)，血管緊張素II生成減少，達(dá)到保護(hù)腎功能的作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)表明葛根素結(jié)晶水合物不僅有抗心律失常作用，而且對(duì)ACE活性均有 抑制作用，提示葛根素結(jié)晶水合物可減少AngII的生成和緩激肽的降解，因此，應(yīng)用葛根素 結(jié)晶水合物有助于防治心律失常、高血壓、充血性心力衰竭、心肌缺血和心肌梗死等以及上 述原因引起的心室重構(gòu)、心肌肥大、高脂血癥、非糖尿病腎病、1型糖尿病腎病以及蛋白尿， 保護(hù)腎臟功能，并防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展等作用。3、葛根素結(jié)晶水合物對(duì)大鼠腦缺血的影響Wistar雄性大鼠36只，體重250 300g，隨機(jī)分為3組假手術(shù)組、缺血再灌組 和本發(fā)明藥物組，每組12只。本發(fā)明藥物組采用葛根素1水合物的生理鹽水的混懸液灌 胃，劑量為400mg/kg，體積為2ml，每天兩次，連續(xù)7天，最后一次給藥60min后實(shí)施腦缺血 手術(shù)；假手術(shù)組和缺血再灌組分別給以等容積的生理鹽水2ml。大鼠用10%水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，參照文獻(xiàn)用Zea Longa線拴改良法造模[上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2007，27 (10) :1218_1222]；假手術(shù)組 栓線只插入10mm，其余步驟同模型組，動(dòng)物蘇醒后出現(xiàn)手術(shù)側(cè)Homer征和對(duì)側(cè)體運(yùn)動(dòng)障礙 即為模型制備成功。造模成功后本發(fā)明藥物組一天給藥2次，劑量同前，假手術(shù)組和缺血再 灌組分別給以等容積的生理鹽水2ml。造模后2h抽出線，再灌注24小時(shí)后處死大鼠，迅速 取腦稱重。低溫下用生理鹽水制成10%腦組織勻漿液，低溫離心，3000r/min離心lOmin，棄 沉淀，取上清液，按市售測(cè)試S0D、MDA、N0、N0S相應(yīng)試劑盒的說明書分別測(cè)定S0D、MDA、N0、 NOS含量或活性，結(jié)果見表6。表6.本發(fā)明藥物對(duì)大鼠腦缺血字啊灌注腦組織中NO、NOS, MDA、SOD的影響 結(jié)果表明，與假手術(shù)組相比，缺血再灌模型組大鼠腦組織中SOD活性明顯降低， MDA、NO含量及NOS活性明顯增加(P<0.01)；與缺血再灌模型組相比，本發(fā)明藥物組大鼠腦組織中SOD活性明顯升高，NOS活性降低，MDA、NO含量明顯減少(P < 0. 01)研究表明，NO是具有生物活性信使小分子，可自由穿過細(xì)胞膜，作用于胞內(nèi)的靶分 子。在生物體內(nèi)，NO生成后很快被氧化滅活，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在于細(xì)胞的內(nèi) 外液中。低濃度的NO能使血管擴(kuò)張，抑制血小板集聚與粘附，使谷氨酸調(diào)控的離子通道下 調(diào)，防止細(xì)胞內(nèi)鈣超載，因而對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用；但在高濃度下，NO可與超氧陰離子反應(yīng)生 成超氧亞硝酸根離子，超氧亞硝酸根離子可以降解為0H—和NO2—自由基，使細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì) 過氧化作用，在細(xì)胞的膜水平造成強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性，甚至導(dǎo)致神經(jīng)元死亡等。研究表明，NO在腦缺血性損傷的發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘NO含量明顯增 高，之后緩慢下降，于再灌注期NO再次升高。其機(jī)制可能為腦缺血后神經(jīng)元受損，細(xì)胞膜 去極化過程增強(qiáng)，突觸前谷氨酸等興奮性氨基酸生成大量增加，使胞外谷氨酸濃度升高，激 活N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體，NMDA受體激活后使突觸后Ca2+內(nèi)流增加，激活一 氧化氮合酶N0S，促進(jìn)NO的生成；其二，腦缺血后，ATP大量消耗，導(dǎo)致能量代謝障礙及cAMP 依賴的蛋白激酶活性下降，由于NOS脫磷酸化使得NOS的活性增強(qiáng)，從而促進(jìn)NO的生成。一氧化氮合酶是一氧化氮合成的限速酶NOS。在腦缺血早期，NOS介導(dǎo)生成的NO通 過擴(kuò)張血管改善缺血區(qū)的血液供應(yīng)，具有短時(shí)保護(hù)性作用，但隨著NO的大量產(chǎn)生，在缺血 區(qū)NOS因介導(dǎo)神經(jīng)毒性效應(yīng)并很快占優(yōu)，使腦缺血損傷加?。坏酵砥?，腦缺血腦組織損傷、 炎癥反應(yīng)刺激巨噬細(xì)胞、神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等可大量產(chǎn)生誘導(dǎo)型N0S，誘導(dǎo)型NOS可 緩慢而持久大量地產(chǎn)生N0，過量的NO產(chǎn)生和釋放，加重神經(jīng)元損害。因此，降低誘導(dǎo)型NOS 的產(chǎn)生可明顯減少NO的釋放，從而降低NO的細(xì)胞毒性作用，起到保護(hù)腦細(xì)胞的作用。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，大鼠腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO和NOS含量顯著 增加，說明NO和NOS參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制，給予本發(fā)明藥物治療后，NO和 NOS含量明顯下降。表明本發(fā)明藥物通過對(duì)NOS活性和NO含量進(jìn)行調(diào)節(jié)從而發(fā)揮腦缺血再 灌注損傷的保護(hù)作用。腦缺血及再灌注損傷可導(dǎo)致腦細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生過多的氧自由基，損 傷腦細(xì)胞膜。腦缺血時(shí)由于組織氧和能量代謝的物質(zhì)供應(yīng)不足，ATP生成減少，離子泵失效， Na+-K+-ATP酶活性降低，使大量Na+內(nèi)流、K+外流，Cl_和H20被動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，引起神經(jīng)細(xì)胞 急性滲透性腫脹死亡。Na+內(nèi)流和K+外流導(dǎo)致細(xì)胞膜電位下降產(chǎn)生去極化，電壓依賴性Ca2+ 通道開放，Ca2+大量?jī)?nèi)流；同時(shí)由于K+、蛋白激酶C及遞質(zhì)的釋放等作用，受體依賴性Ca2+通 道開放，Ca2+大量?jī)?nèi)流。細(xì)胞內(nèi)鈣超載可導(dǎo)致氧自由基產(chǎn)生增加、花生四烯酸代謝增強(qiáng)、興奮 性氨基酸遞質(zhì)釋放增加等，興奮性氨基酸又可引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載造成神經(jīng)細(xì)胞凋亡。其 中氧自由基增加是缺血再灌注損傷的一個(gè)重要因素。各種氧自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成一系列 的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物MDA。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧 化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其含量的變化可間接地反映組織中氧自由基含量變化。SOD是細(xì)胞內(nèi)主要的對(duì)抗氧自由基的酶促防御系統(tǒng)，它通過歧化方式清除超氧陰 離子自由基，保護(hù)生物體免受自由基的攻擊。SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基 的能力。因此，本發(fā)明藥物可顯著減少缺血區(qū)腦組織的過氧化脂質(zhì)MDA，NO含量，提高大鼠 腦組織中SOD含量，增加清除自由基的能力，降低NOS活性，可減輕自由基反應(yīng)對(duì)腦組織的
15損害。由此可見，本發(fā)明藥物抑制自由基的生成等多種途徑，保護(hù)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)，有助于降 低腦血管通透性以及改善血液流變學(xué)指標(biāo).改善腦部微循環(huán)，對(duì)抗腦缺血再灌注后氧自由 基對(duì)腦組織的損害作用而發(fā)揮其對(duì)腦的保護(hù)作用?？捎糜谥委熁蝾A(yù)防缺血性腦病、腦梗塞、 腦血栓及其后遺癥、改善腦部微循環(huán)以及潛在的防治白內(nèi)障的作用，并用于制備治療和預(yù) 防相應(yīng)疾病的藥物或健康用品。葛根素結(jié)晶水合物的β受體阻滯作用葛根素結(jié)晶水合物溶解適當(dāng)?shù)娜苊街?、?在體內(nèi)失去結(jié)晶水釋放出葛根素、或者在體內(nèi)直接作用相應(yīng)靶器官或部位。而葛根素能阻 滯異丙腎上腺素使貓的股靜脈對(duì)甲氧明引發(fā)的收縮所產(chǎn)生的舒張作用，呈劑量依賴性，與 普奈洛爾作用相似，表明葛根素對(duì)貓離體血管的作用是β受體阻滯作用。另外，葛根素對(duì) 離體豚鼠心房肌β 1受體也有較顯著的拮抗作用，對(duì)豚鼠氣管條β 2受體拮抗則需較大濃 度，顯示其對(duì)β 1受體的選擇性強(qiáng)于β2受體。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分別從離體器官和整體動(dòng)物水平 表明葛根素為一種β受體拮抗劑。已知β受體的效應(yīng)器為腺苷酸環(huán)化酶，受體激動(dòng)劑使 之激活，拮抗劑則使之抑制，葛根素與β受體結(jié)合后能完全抑制腎上腺素對(duì)腺苷酸環(huán)化酶 的激活作用。葛根素對(duì)正常和高血壓動(dòng)物都有一定的降壓作用。靜注葛根素，可使麻醉狗出現(xiàn) 劑量依賴性的血壓快速下降，作用維持左右。腹腔注射葛根素能明顯降低清醒自發(fā)高血壓 大鼠的血壓并減慢心率。葛根素對(duì)由眼球結(jié)膜下注射地塞米松引起的家兔眼高壓模型有降低眼內(nèi)壓的作 用，作用強(qiáng)度和藥物濃度之間有相關(guān)性。而且葛根素滴眼液對(duì)兔耳緣靜脈快速注射葡萄糖 而引起的眼壓升高有抑制作用，與噻嗎洛爾滴眼液相比作用相似，表明葛根素滴眼液一種 較為理想的抗青光眼藥物。有臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葛根素治療青光眼對(duì)絕大多數(shù)原發(fā)性開角型、 閉角型和繼發(fā)性青光眼均有降低眼內(nèi)壓的作用；葛根素還能通過改善微循環(huán)和視網(wǎng)膜功能 來防治白內(nèi)障。葛根素的β受體阻滯作用使得葛根素結(jié)晶水合物表現(xiàn)出對(duì)高血壓的降壓作用、 降低青光眼的眼內(nèi)壓作用以及抗心律失常作用等的用途。滴注葛根素能對(duì)抗腎上腺素引起的麻醉小鼠腸系膜微循環(huán)障礙；對(duì)視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻 塞患者在應(yīng)用葛根素治療同時(shí)進(jìn)行視網(wǎng)膜熒光造影可見微循環(huán)時(shí)間縮短，同時(shí)發(fā)現(xiàn)葛根素 有明顯的增進(jìn)視力，擴(kuò)大視野等作用，另外，葛根素還通過改善血液流變學(xué)指標(biāo)如降低全血 比粘度，紅細(xì)胞電泳，血球壓積和纖維蛋白原來防治視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞。用葛根素注射液治療 突發(fā)性耳聾的70%患者在用藥，2周內(nèi)甲皺微循環(huán)一直處于良好狀態(tài)，聽力有不同程度的 提尚。60例靜滴葛根素的椎-基底動(dòng)脈供血不足的患者，癥狀改善明顯。葛根素可抑制 動(dòng)脈粥樣硬化，促使血管軟化，還可通過對(duì)ΤΧΒ2、NO、ET等的影響，調(diào)節(jié)腦血流量，改善腦循 環(huán)。改善血液流變學(xué)的指標(biāo)，防治頸椎病葛根素可降低血液粘滯度，減少紅細(xì)胞壓積，縮短 紅細(xì)胞電泳時(shí)間，減慢血沉和降低纖維蛋白原含量。有人應(yīng)用葛根素注射液輔助治療頸椎病，結(jié)果治療組臨床總有效率為98%，與 對(duì)照組比較差異非常顯著；治療組用藥后癥狀與體征消失時(shí)間縮短，血液流變學(xué)檢測(cè)指標(biāo) 全血粘度、血漿粘度、纖維蛋白原和血沉降水平治療后明顯降低。葛根素改善腦微循環(huán)障礙、防治椎-基底動(dòng)脈缺血性眩暈、治療頸椎病，這使得葛根素結(jié)晶水合物將表現(xiàn)出改善腦微循環(huán)障礙，防治椎_基底動(dòng)脈缺血性眩暈、治療頸椎病 的作用。研究發(fā)現(xiàn)，葛根素腹腔注射可顯著降低大鼠酒精攝入量，機(jī)制可能與其抑制線粒 體醛糖還原酶有關(guān)。另外，有人發(fā)現(xiàn)葛根素是苯二氮卓受體的拮抗劑或部分激動(dòng)劑，乙醇的 一些藥理作用是通過腦細(xì)胞苯二氮卓受體發(fā)揮的。葛根素靜注于麻醉或清醒狗的冠狀動(dòng)脈，均能使冠狀血管血流量增加，血管阻力 降低，其作用隨著劑量的增加而加強(qiáng)。葛根素可使心臟搏動(dòng)的速率減慢，心肌收縮力降低， 但并不會(huì)使缺血區(qū)側(cè)支冠狀動(dòng)脈的血流量減少，葛根素對(duì)缺血心肌的作用是通過降低外側(cè) 支冠狀動(dòng)脈阻力而產(chǎn)生的。另外，它可對(duì)抗垂體后葉素引起的大鼠急性心肌缺血，可能是擴(kuò) 張冠狀動(dòng)脈血管的結(jié)果。葛根素能明顯降低缺血再灌注時(shí)心肌乳酸的生成，降低氧耗量和 肌酸磷酸激酶釋放量，對(duì)缺血再灌注后心肌的超微結(jié)構(gòu)亦有所改善。有人應(yīng)用葛根素治療 冠心病，著重觀察血液流變學(xué)，動(dòng)態(tài)心電圖、常規(guī)導(dǎo)聯(lián)心電圖，結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)較治療前有明 顯改善，表明葛根素能有效降低冠心病患者血液流變性，擴(kuò)張血管，改善心肌缺血，是一種 安全有效的抗心肌缺血的藥物。由于葛根素結(jié)晶水合物的在體內(nèi)體外的釋放，將表現(xiàn)出苯二氮卓受體的拮抗劑或 部分激動(dòng)劑的特性，也將顯著降低大鼠酒精攝入量；也將有效降低冠心病患者血液流變性， 擴(kuò)張血管，改善心肌缺血，成為一種安全有效的抗心肌缺血的藥物，這從本發(fā)明的試驗(yàn)中也 有相應(yīng)的證據(jù)。文獻(xiàn)報(bào)道以葛根素靜注治療II型糖尿病患者，發(fā)現(xiàn)葛根素有助于改善血栓源性 微量清蛋白尿的濾出，延緩或阻止糖尿病腎微血管病變的發(fā)生發(fā)展。于健等應(yīng)用葛根素治 療的48例II型糖尿病患者進(jìn)行觀察，葛根素具有明顯的降低血糖、改善胰島素抵抗作用， 認(rèn)為葛根素注射液不僅是治療II型糖尿病患者胰島素抵抗較為理想的藥物；對(duì)糖尿病周 圍神經(jīng)病變也有較好的療效。葛根素一方面可能是通過擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)，增加血流， 增強(qiáng)血液循環(huán)的能力而促進(jìn)胰島素的生物效能，即改善胰島素的敏感性；另一方面，葛根素 通過有效降低全血粘度，增強(qiáng)紅細(xì)胞的變形能力，提高紅細(xì)胞膜彈性，使其結(jié)構(gòu)和物理性能 改善，進(jìn)而加快物質(zhì)運(yùn)輸及使葡萄糖和胰島素跨膜能力，進(jìn)一步改善II型糖尿病患者的胰 島素敏感性面起到降糖作用。葛根素的糖尿病及其并發(fā)癥的治療作用使得葛根素結(jié)晶水合物表現(xiàn)出相應(yīng)的治 療作用以及制備相應(yīng)預(yù)防和治療藥物等的用途。此外，本發(fā)明的藥物對(duì)胃癌等腫瘤的多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)等作用也將可用于制備相應(yīng) 的治療或預(yù)防疾病的藥物?？梢岳斫?，很多細(xì)節(jié)的變化是可能的，這并不因此限制本發(fā)明范圍和精神，本發(fā)明 并不限于上述實(shí)施例。
1權(quán)利要求
一種心腦血管及眼科藥物，其特征在于葛根素結(jié)晶水合物，分子式為C21H20O9·n H2O，n＝0.8～1.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管及眼科藥物，其特征在于葛根素結(jié)晶水合物，分子 式為 C21H2tlO9 · η H2O, η = 0. 95 1. 0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管及眼科藥物，其特征在于葛根素結(jié)晶水合物為葛 根素1水合物，分子式為C21H2tlO9 · H2O0
4.心腦血管及眼科藥物制備方法，其特征在于其制備方法包括如下方法，方法Α.在反應(yīng)容器中，將葛根粉用水或C1-C6的低分子醇一種或幾種進(jìn)行冷提、超 聲提取、微波提取或回流提一次至數(shù)次合并，過濾，微孔濾膜或者陶瓷膜過濾，濾液濃縮，濃 縮得葛根浸膏，加水，用酸調(diào)節(jié)ΡΗ3-5，再用堿或者碳酸鈉或者碳酸氫鈉一種或者數(shù)種調(diào)節(jié) PH為6-9之間，過濾，然后用C3-C6的低分子醇或C3-C8的低級(jí)酮，如異己酮、或C2-C8的 低級(jí)酯的一種或幾種為溶劑進(jìn)行萃取，萃取液蒸干得固體，加水，再用C3-C6的低分子醇或 C3-C8的低級(jí)酮，如異己酮、或C2-C8的低級(jí)酯的一種或幾種為溶劑進(jìn)行萃取，濃縮，靜置， 過濾，以水、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分 子醇如甲醇、乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑， 進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干燥即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法B.葛根浸膏或葛根總黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮物， 加水或C1-C6的低分子醇一種或幾種，微孔濾膜(包括陶瓷膜)過濾，過中性氧化鋁層析 柱、硅膠層析柱及大孔樹脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子 醇、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、一種或幾種進(jìn)行洗脫，濃縮或者超濾膜濃縮，靜置，過濾，以水、 C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、 乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶 一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干燥即得即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法C.葛根浸膏或葛根總黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮物， 加水或C1-C6的低分子醇一種或幾種，經(jīng)過微孔濾膜、中空纖維的膜、陶瓷膜、超濾膜、納濾 膜的一種或幾種的一次或數(shù)次過濾或濃縮，以水、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C3-C8的低級(jí)酮，如 丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、乙醇、異丙醇，C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫 呋喃、乙腈的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過濾，水洗，將所得的固體干 燥即得葛根素結(jié)晶水合物；或者方法D.葛根浸膏或葛根黃酮或葛根的水提濃縮物或葛根的醇水提取濃縮物，經(jīng) 過中空纖維的膜、陶瓷膜、超濾膜、納濾膜的一種或幾種的一次或者多次過濾或濃縮，以水、 氯仿、C3-C6的低級(jí)酮，如丙酮、C2-C8的低級(jí)酯、C1-C6的低分子醇如甲醇、乙醇、異丙醇， C1-C6的低級(jí)脂肪酸、四氫呋喃、乙腈的一種或幾種為溶劑，置于磁通量為0. 1-5特斯拉的 磁場(chǎng)下進(jìn)行一次或多次結(jié)晶，過濾，水洗，干燥，即得葛根素結(jié)晶水合物；上述各方法中的不同步驟可以交替使用，以便制備葛根素水合物。
5.心腦血管及眼科藥物的用途，其特征在于在制備注射用凍干粉針制劑、或者小水 針注射劑，大輸液制劑、經(jīng)腸道給藥制劑，包括片劑、膠囊、顆粒劑、經(jīng)眼部給藥制劑，包括滴 眼液、眼用凝膠上的應(yīng)用。
6.心腦血管及眼科藥物的用途，其特征在于在制備用于高血壓、冠心病、肺心病、心衰、心絞痛、心肌梗死、心源性休克、心律失常、心肌炎、缺血性腦病、腦梗塞、腦血栓及其后 遺癥、改善腦循環(huán)、椎-基底動(dòng)脈供血不足性眩暈、下肢深靜脈血栓后綜合征、糖尿病、糖尿 病并發(fā)癥糖尿病腎病，糖尿病周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、靜脈阻塞、突發(fā) 性耳聾、降低眼內(nèi)壓，防治青光眼，調(diào)節(jié)血脂的治療或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗高血壓、冠心病、腦梗塞、腦血栓及其后遺癥、改善腦循環(huán)、椎-基底動(dòng)脈供血不足性眩暈、下肢深靜脈血栓后綜合征、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥糖尿病腎病，糖尿病周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾、防治青光眼等疾病的心腦血管及眼科藥物——葛根素結(jié)晶水合物及其制備和用途，該衍生物具有較好的存儲(chǔ)穩(wěn)定性，適用于制備對(duì)制備心腦血管及眼科的治療或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P3/10GK101926788SQ200910062770
公開日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月18日
發(fā)明者劉力 申請(qǐng)人:劉力