專利名稱：：一種防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液及其生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中獸藥制劑領(lǐng)域，涉及一種防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液及其生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
：豬藍(lán)耳病又名豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome,PRRS)，1987年，首先在美國報(bào)道，開始被稱為神秘豬病。1990年，德國報(bào)導(dǎo)了相似的臨床暴發(fā)情況，至1991年P(guān)RRS迅速蔓延整個(gè)歐洲。1991年6月，荷蘭學(xué)者首先從病料中分離出了病毒，并稱其為L(zhǎng)elystad病毒。此后，德國和美國學(xué)者也相繼報(bào)道分離出了該病毒。目前PRRS己在全世界范圍內(nèi)廣泛流行，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病。PRRS于上世紀(jì)90年代中期傳入我國，我國將其列為二類動(dòng)物疫病。PRRS給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。其特征是妊娠母豬懷孕后期(60天之后)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱胎明顯增加，仔豬出生率降低，斷奶仔豬死亡率高，母豬再發(fā)情推遲，哺乳豬和斷奶仔豬嚴(yán)重的呼吸道疾病也是一種重耍的特征。該病在國內(nèi)豬場(chǎng)中的發(fā)病率和隱性感染率較高，直接影響著我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，已引起官方的高度重視。該病不僅僅造成種豬的繁殖障礙和仔豬的呼吸道疾病，而且對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)也造成損傷(具體的發(fā)病機(jī)制見附圖1)。主要表現(xiàn)在首先PRRS病毒對(duì)機(jī)體的單核-巨噬細(xì)胞的專嗜性，使該細(xì)胞對(duì)外來病原體的吞噬功能降低；其次抑制機(jī)體白細(xì)胞干擾素的表達(dá)，間接的影響機(jī)體細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子(N-kB)對(duì)白介素-1、白介素-2和干擾素等淋巴因子的釋放。由于PRRS病毒對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的損傷是多方面的，因此當(dāng)豬群感染PRRS之后其抗病能力明顯下降，容易繼發(fā)各種疾病。豬場(chǎng)若發(fā)生藍(lán)耳病，不僅會(huì)影響生豬的出欄，導(dǎo)致豬肉供應(yīng)緊張，而且由其誘發(fā)的多種疾病還可能對(duì)公共衛(wèi)生安全造成威脅。目前獸藥市場(chǎng)防治豬藍(lán)耳病的藥物很多，但效果均不甚理想。一般是采用采用抗菌藥物和抗炎藥物來對(duì)癥治療，或應(yīng)用中藥治療。中藥制劑的組方和工藝大致可大致分為兩個(gè)方面一種是以黃芪、板藍(lán)根、金銀花、連翹等提取物加上一些安乃近、氨基比林、地塞米松等為主的復(fù)合制劑。由于植物提取行業(yè)正處于起步與發(fā)展階段其質(zhì)量管理體系有待改進(jìn)和提高，其提取物的有效成分含量往往偏低，而解熱鎮(zhèn)痛的藥物雖然能短時(shí)間內(nèi)解除高熱癥狀，但大劑量或長(zhǎng)期使用對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)也是有損傷的，因此對(duì)藍(lán)耳病的防治療效不確切。另一種組方和工藝一般是以中藥黃芪、大青葉、連翹、板藍(lán)根、黃連等組合，采用水提醇沉法，該方法往往可以引起一些具有免疫增強(qiáng)作用的天然多糖流失過多，其制劑對(duì)藍(lán)耳病所起的防治效果甚微。鑒于此，市場(chǎng)上迫切需要有顯著療效的藥物制劑及相關(guān)的防治方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、成本低廉、療效顯著的防治豬藍(lán)耳病的中藥注射液及其生產(chǎn)工藝。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，現(xiàn)依據(jù)了如下的技術(shù)方案，該注射液是由以下重量份配比的原料制成黃疾25-45份、當(dāng)歸5-20份、瓜蔞9-20份、黃零9-12份、人參5-30份、麥冬5-30份、五味子5-25份、熟地12-22份、茯苓10-25份、白術(shù)5-15份。本發(fā)明的配方最佳各原料的重量配比為黃芪40份、當(dāng)歸10份、瓜蔞15份、黃芩10份、人參20份、麥冬20份、五味子10份、熟地15份、茯苓18份、白術(shù)10份。本發(fā)明治療藍(lán)耳病注射液的生產(chǎn)工藝方法如下1)、按所述的重量比稱取各種原料，備用；2)、將上述各味中藥加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續(xù)加熱濃4縮，直至所煎熬的藥液濃縮至與原藥材比例約為1:1時(shí)，冷卻至40'C-60°C，加入蛋白酶和果膠酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時(shí)；3)、將上述煎煮液繼續(xù)加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC-8(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置12小時(shí)，倒出上清液，調(diào)節(jié)酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。藍(lán)耳病屬于免疫抑制病，要想治愈必須運(yùn)用多糖提高免疫力。本處方中藥材含有大量多糖成分，以往傳統(tǒng)的中藥提取普遍采用水提醇沉法作為去除雜質(zhì)的分離手段。水提醇沉是中藥制劑的傳統(tǒng)工藝，但醇沉工藝存在一些不足①有效成分損失嚴(yán)重、成本高、成品穩(wěn)定性差、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、勞動(dòng)強(qiáng)度高等；②醇沉過程對(duì)某些藥效成分的嚴(yán)重?fù)p失，難以保證制劑的有效性。絮凝分離技術(shù)與之相比則具成本低、操作安全簡(jiǎn)單、分離效果好、有效成分保留多的特點(diǎn)。本發(fā)明應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，運(yùn)用新工藝研究開發(fā)中藥注射液，從整體上提高中藥注射液的制劑水平，從而確保中藥制劑質(zhì)量與療效的穩(wěn)定。中藥制劑中的雜質(zhì)大多為果膠、蛋白質(zhì)等，可選擇相應(yīng)的酶予以分解除去。針對(duì)中藥中含有脂溶性、難溶于水或不溶于水成分多，通過加入酶，使脂溶性、難溶于水或不溶于水的有效成分轉(zhuǎn)移到水溶性苷糖中。酶反應(yīng)較溫和地將植物組織分解，可較大幅度提高效率。本發(fā)明中使用殼聚糖作為絮凝劑，殼聚糖能提高機(jī)體的免疫力、無毒、無味、無副作用，有良好的絮凝、澄清作用，可用于大部分中草藥的提取精制或制劑的生產(chǎn)。將殼聚糖其加到中藥的水提液中通過吸附、架橋、絮凝作用以及無機(jī)鹽電解質(zhì)微粒和表面電荷產(chǎn)生凝聚作用，使許多不穩(wěn)定的微粒如蛋白質(zhì)、錳液質(zhì)、樹膠、鞣質(zhì)等連接成絮團(tuán)沉降，經(jīng)濾過達(dá)到分離純化的目的。對(duì)于含有機(jī)酸、生物堿、黃酮、多糖等中藥澄清試驗(yàn)，結(jié)果表明，殼聚糖用于人多數(shù)中草藥浸提液均起到良好的澄清作用，能有效保留其中大部分有效成分，不殘留于提取液中，安全無毒，操作簡(jiǎn)便。本發(fā)明工藝使用的澄清劑組成1.酶的組成蛋白酶，果膠酶。2.殼聚糖溶液用1%的醋酸溶液將殼聚糖配成1%的殼聚糖溶液。工藝流程將上述各味中藥煎煮液濃縮至與原藥材比例約為h1時(shí)，冷卻至40°C-60°C，加入酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時(shí)，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC-8(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置12小時(shí)，倒出上清液，調(diào)節(jié)酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。本發(fā)明中所述的注射液的使用方法如下根據(jù)豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克休重，每天注射兩次，連用5天-7天即可取得良好效果。本發(fā)明大量試驗(yàn)表明，殼聚糖對(duì)本處方的中藥提取液能起到非常好的絮凝澄清作用，保留其中木部分有效成分，并能明顯提高多糖、皂苷等有效成分，安全無毒，操作簡(jiǎn)便，無需增加設(shè)備投資。大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所選擇的中藥絮凝技術(shù)比傳統(tǒng)的醇沉工藝有明顯優(yōu)點(diǎn)，使注射液的質(zhì)量和生產(chǎn)效率得到了顯著的提高。本發(fā)明經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)室和臨床實(shí)踐檢驗(yàn)結(jié)果表明，該注射液配方合理、工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、成本低廉、毒副作用小等特點(diǎn)，是對(duì)藍(lán)耳病的防治有較好的效果，具有巨大的市場(chǎng)潛力。具體實(shí)施例方式實(shí)例一1、稱取黃芪40克、當(dāng)歸10克、瓜蔞15克、黃芩10克、人參20克、麥冬20克、五味子10克、熟地15克、茯苓18克、白術(shù)10克，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的IO倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續(xù)加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為1702.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至40°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的3%，放置12小時(shí)，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%，攪拌，放置12小時(shí)，倒出上清液。3.調(diào)節(jié)上清液的pH值至6.5，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。4.將本發(fā)明中所述的注射液根據(jù)豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。實(shí)例二1、稱取配方中的各味中藥，重量為實(shí)施例1中的IO倍，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續(xù)加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為1700毫升。2.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至50°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的4%，放置12小時(shí)，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至40。C,加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的13%，攪拌，放置12小時(shí)，倒出上清液。3.調(diào)節(jié)上清液的pH值至7，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。.4.將本發(fā)明中所述的注射液根據(jù)豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。實(shí)例三1.稱取配方中的各味中藥，重量為實(shí)施例1中的5倍，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續(xù)加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為8502.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至60°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的5%，放置12小時(shí)，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至5(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的15%，攪拌，放置12小時(shí)，倒出上清液。3.調(diào)節(jié)上清液的pH值至7.5，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。4.將本發(fā)明中所述的注射液根據(jù)豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。本發(fā)明在提高機(jī)體免疫力方面的試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)一白細(xì)胞計(jì)數(shù)法一試驗(yàn)材料(1)本發(fā)明的中藥注射液；(2)某公司2%的黃芪多糖注射液；(3)滅菌生理鹽水。(4)豬(為已斷奶35日齡的仔豬，體重約10kg)。二試驗(yàn)方案將空白對(duì)照組豬群，注射滅菌生理鹽水；實(shí)驗(yàn)組一，注射2%的黃芪多糖注射液；實(shí)驗(yàn)組二，注射本發(fā)明的注射液，各15頭，連續(xù)注射2天，檢測(cè)各組的白細(xì)胞數(shù)量。三試驗(yàn)結(jié)果空白對(duì)照組(單位m3)l號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)8號(hào)1.12萬1.31萬1.15萬1.24萬1.22萬1.43萬1.38萬1.29萬9號(hào)10號(hào)11號(hào)12號(hào)13號(hào)14號(hào)15號(hào)1.23萬1.35萬1.21萬1.33萬1.37萬1.19萬1.26萬8實(shí)驗(yàn)組一(注射2%黃芪多糖注射液)單位m:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)驗(yàn)組二(注射本發(fā)明的中藥注射液)單位m3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>藍(lán)耳病屬于一種免疫抑制病，當(dāng)機(jī)體感染藍(lán)耳病病毒(PRRSV)后，血液中白細(xì)胞的數(shù)量可由正常的12000-15000/m3降低至10000/m3以下，當(dāng)機(jī)體白細(xì)胞數(shù)量在10000/m3以下時(shí)，抵抗外來病原體的能力和特異性免疫應(yīng)答的功能均會(huì)降低。豬正常情況下白細(xì)胞的數(shù)量在12000-15000/m3之間，主要由單核-巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等組成。嗜中性粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞是一類吞噬病原微生物極強(qiáng)的吞噬細(xì)胞，其胞漿內(nèi)含有多種酶類.對(duì)侵入機(jī)體內(nèi)的病毒、細(xì)菌、原蟲等病原體具有強(qiáng)大的吞噬和消化功能，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分。淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的50%以上，淋巴細(xì)胞是機(jī)體特異性免疫的重要組成部分，因此測(cè)定白細(xì)胞的數(shù)量，可在一定程度上反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，亦可作為判定療效的一種指標(biāo)。通過以上各組數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的中藥注射液注入機(jī)體后，產(chǎn)生的白細(xì)胞數(shù)目明顯多于對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組一，機(jī)體的免疫能力迅速提高，從而達(dá)到消滅病原體的目的。試驗(yàn)二玫瑰花環(huán)試驗(yàn)一試驗(yàn)材料(1)本發(fā)明的中藥注射液；(2)某公司2°/。的黃芪多糖注射液；(3)滅菌生理鹽水。(4)豬(已斷奶35日齡的仔豬，體重約10kg)。(5)綿羊紅細(xì)胞二試驗(yàn)方法將空白對(duì)照組豬群，注射滅菌生理鹽水；實(shí)驗(yàn)組一，注射2%的黃芪多糖注射液；實(shí)驗(yàn)組二，注射本發(fā)明的注射液，各15頭，每天兩次，連續(xù)注射2天后，第三天在無菌操作的條件下，進(jìn)行耳靜脈采集試驗(yàn)豬的血液，與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成的花環(huán)率。鏡檢觀察計(jì)數(shù)?；ōh(huán)數(shù)E-花環(huán)形成率--X100%空白對(duì)照組:l號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)8號(hào)19%17%16.5%18%20%14%17%18%9號(hào)10號(hào)11號(hào)12號(hào)13號(hào)14號(hào)15號(hào)22%18%17%16%15%21%20%實(shí)驗(yàn)組一(注射2%黃芪多糖注射液)l號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)8號(hào)200/o21%26%24%19%26%22%23%9號(hào)10號(hào)11號(hào)12號(hào)13號(hào)14號(hào)15號(hào)18%24%24%21%20%22%25%實(shí)驗(yàn)組二(注射本發(fā)明的中藥注射液)l號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)8號(hào)29%36%35%28%39%32%31%37%9號(hào)10號(hào)11號(hào)12號(hào)13號(hào)14號(hào)15號(hào)27%36%34%32%33%38%36%藍(lán)耳病病毒(PRRSV)侵入機(jī)體后，通常寄生在機(jī)體的細(xì)胞內(nèi)，利用活體細(xì)胞的營養(yǎng)來生長(zhǎng)，復(fù)制新的個(gè)體，機(jī)體自身對(duì)PRRSV的抗病毒免疫主要靠細(xì)胞免疫，只有細(xì)胞免疫的功能達(dá)到正常水平以上，機(jī)體才能有能力的將體內(nèi)的PRRSV清除。因此我們通過檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的功能來判定機(jī)體細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱。T淋巴細(xì)胞(簡(jiǎn)稱T細(xì)胞)是一個(gè)具有多功能的細(xì)胞群，其表面有綿羊紅細(xì)胞(SRBC)受體，可與綿羊紅細(xì)胞(SRBC)結(jié)合形成玫瑰花環(huán)。此試驗(yàn)?zāi)芊从砊細(xì)胞的活性，從而可以判定機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。Ea-花環(huán)代表機(jī)體的細(xì)胞免疫水平，可以作為反映機(jī)體的免疫狀態(tài)的一種指標(biāo)。通過以上的數(shù)據(jù)證明本發(fā)明的中藥注射液能提高花環(huán)的形成率，顯著提高機(jī)體的免疫力，提高機(jī)體的抗病能力。權(quán)利要求1、一種防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液，其特征在于是它由以下重量份配比的原料制成黃芪25-45份、當(dāng)歸5-20份、瓜蔞9-20份、黃芩9-12份、人參5-30份、麥冬5-30份、五味子5-25份、熟地12-22份、茯苓10-25份、白術(shù)5-15份。2、一種防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液，其特征在于各原料的重量比是黃芪40份、當(dāng)歸10份、瓜蔞15份、黃芩10份、人參20份、麥冬20份、五味子10份、熟地15份、茯苓18份、白術(shù)10份。3、一種用于權(quán)利要求l所述防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液的生產(chǎn)工藝，其特征在于1)、按所述的重量比稱取各種原料，備用；2)、將上述各味中藥加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的IO倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續(xù)加熱濃縮，直至所煎熬的藥液濃縮至與原藥材比例約為1:l時(shí)，冷卻至4(TC-60°C，加入蛋白酶和果膠酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時(shí)；3)、將上述煎煮液繼續(xù)加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至60。C-80°C，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置l2小時(shí)，倒出上清液，調(diào)節(jié)酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。全文摘要本發(fā)明涉及一種防治豬藍(lán)耳病的中獸藥注射液及其生產(chǎn)工藝，它是由黃芪、當(dāng)歸、瓜蔞、黃芩、人參、麥冬、五味子、熟地、茯苓、白術(shù)組成，將上述各味中藥依次經(jīng)煎煮、酶解、絮凝劑沉淀、過濾、灌裝和滅菌后即可使用。本發(fā)明經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)室和臨床實(shí)踐檢驗(yàn)結(jié)果表明，該注射液配方合理、工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、成本低廉、毒副作用小等特點(diǎn)，是對(duì)藍(lán)耳病的防治有較好的效果，具有巨大的市場(chǎng)潛力。文檔編號(hào)A61K36/88GK101618140SQ200910065129公開日2010年1月6日申請(qǐng)日期2009年6月5日優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日發(fā)明者宗向歌,江紅格,羅振軍,蔣二強(qiáng)申請(qǐng)人:河南黑馬動(dòng)物藥業(yè)有限公司