專(zhuān)利名稱(chēng)：一種人參酸性多糖的降血糖應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥植物多糖的生物活性領(lǐng)域，具體涉及一種人參酸性多糖的降血糖 的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人參被人們稱(chēng)為“百草之王”，是聞名遐邇的“東北三寶”(人參、貂皮、鹿茸)之一， 是馳名中外、老幼皆知的名貴藥材。古代人參的雅稱(chēng)為黃精、地精、神草。在中國(guó)醫(yī)藥史上， 使用人參的歷史非常久遠(yuǎn)。早在戰(zhàn)國(guó)時(shí)代，良醫(yī)扁鵲對(duì)人參藥性和療效已有了解；秦漢時(shí)代 的《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為藥中上品。明代著名中醫(yī)學(xué)者龔居中在《四百味歌擴(kuò)》中列為第 一條“人參味甘，大補(bǔ)元?dú)?，止渴生津，調(diào)營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)”，成為無(wú)數(shù)中醫(yī)入門(mén)的第一句背誦歌訣。隨著社會(huì)的日益發(fā)展，人們的生活水平日益提高，我國(guó)糖尿病的發(fā)病率也在逐年 上升。20年來(lái)，我國(guó)糖尿病患病率顯著增加。1980年全國(guó)14省市30萬(wàn)人的流行病學(xué)調(diào)查 結(jié)果顯示，糖尿病患病率0. 67%。1994年全國(guó)19省市21萬(wàn)人的調(diào)查，25 64歲年齡段糖 尿病的患病率為2. 5% (人口標(biāo)化率為2. 28%)，糖耐量減低(IGT)為3. 2% (人口標(biāo)化率 為2. 12%)。這一數(shù)字與同等發(fā)展水平國(guó)家的數(shù)據(jù)相近，比1980年增加了近3倍。中國(guó)中 醫(yī)科學(xué)院糖尿病研究總院調(diào)查資料顯示，我國(guó)的糖尿病患者人數(shù)已達(dá)4000萬(wàn)左右，占世界 糖尿病人群總數(shù)的五分之一，患病率居世界第二位，并且以每天至少3000人的速度增加， 每年增加超過(guò)120萬(wàn)人，預(yù)測(cè)至2010年我國(guó)糖尿病人口總數(shù)將猛增至8000萬(wàn)至1億人。根 據(jù)《中國(guó)糖尿病控制現(xiàn)狀》報(bào)告表明，我國(guó)已成為糖尿病發(fā)病的“重災(zāi)區(qū)”，是全球糖尿病第 二大國(guó)，更讓人憂(yōu)心的是，越來(lái)越多的孩子也成了糖尿病患者。據(jù)《中國(guó)糖尿病及用藥市場(chǎng) 分析》披露，中國(guó)目前服用糖尿病治療藥物的人數(shù)為800萬(wàn)人，其中長(zhǎng)期服用中高價(jià)日消費(fèi) 在3-4. 10元和高價(jià)日消費(fèi)4. 90-13. 6元，占服用糖尿病藥物的患者比例近6成。根據(jù)這組 數(shù)字可以推算出，目前中國(guó)的糖尿病用藥市場(chǎng)規(guī)模為130億人民幣。糖尿病分1型糖尿病(type 1 diabetes)和2型糖尿病(type 2 diabetes)。其 中1型糖尿病多發(fā)生于青少年，其胰島素分泌缺乏，必須依賴(lài)胰島素治療維持生命。2型糖 尿病多見(jiàn)于30歲以后中、老年人，其胰島素的分泌量并不低甚至還偏高，病因主要是機(jī)體 對(duì)胰島素不敏感(即胰島素抵抗)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2型糖尿病占糖尿病的80%，有50%新診斷的 2型糖尿病患者已存在一種或一種以上的慢性并發(fā)癥，有些患者是因?yàn)椴l(fā)癥才發(fā)現(xiàn)患糖 尿病的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以2型糖尿病為模型，旨在研究無(wú)毒副作用的人參酸性多糖在降血糖方面 的應(yīng)用。本發(fā)明可以通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)1.人參總多糖的提取100°C條件下用蒸餾水煮提人參根4小時(shí)。提取物經(jīng)4層 紗布過(guò)濾。過(guò)濾得到的殘?jiān)谙嗤瑮l件下重復(fù)提取兩次。合并三次提取所得濾液，離心去除其中的不溶物，上清液加入6倍體積的95%乙醇沉淀過(guò)夜，離心，收集沉淀，常規(guī)干燥后 得到人參總多糖。2. Sevag法脫蛋白向10%的人參多糖水溶液中加入1/4體積的Sevag試劑，充分 震蕩兩個(gè)小時(shí)，離心去除蛋白層和氯仿層，水層重復(fù)操作至不再出現(xiàn)蛋白層為止，所得水溶 液經(jīng)乙醇沉淀和常規(guī)干燥得到脫蛋白級(jí)分人參多糖。3.人參酸性糖的分離將10%的脫蛋白級(jí)分人參多糖經(jīng)DEAE-纖維素離子交換柱 (cr型)分級(jí)，用兩倍柱體積的蒸餾水洗脫，去除未結(jié)合的中性糖級(jí)分，收集由兩倍柱體積 的0. 5M氯化鈉水溶液洗脫得到的酸性糖級(jí)分，經(jīng)蒸餾水透析、冰凍干燥得到氯化鈉洗脫的 結(jié)合級(jí)分人參酸性多糖。本發(fā)明方法值得得人參酸性多糖，其單糖組成為 Gal Glc Ara Rha GalUA GlcUA = 18.0 18. 5 15. 5 2. 5 44. 2 1. 3， 分子量分布范圍2.8X103 1.8X105。人參酸性多糖可以制成口服制劑、針劑、粘膜吸收、 透皮吸收等劑型。人參多糖降糖實(shí)驗(yàn)1、人參粗多糖降糖實(shí)驗(yàn)取100只小鼠隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，其余空腹12小時(shí)，按180mg/kg劑量 腹腔注射PH4. 5的檸檬酸緩沖液配制的鏈脲佐菌素(STZ)溶液。72h后，尾靜脈采血，強(qiáng)生 隨手測(cè)血糖儀測(cè)定禁食12h后的空腹血糖值，取血糖值大于15. 00mmol/L的小鼠為成型糖 尿病小鼠。糖尿病模型小鼠按血糖值分為7組，每組10只，模型對(duì)照組灌胃給蒸餾水，陽(yáng)性 對(duì)照組灌胃給小鼠優(yōu)降糖，其余5組為人參多糖組。人參多糖組分成12. 5、25、50、100和 200mg/kg劑量組。每天灌胃給藥1次，連續(xù)10d，末次給藥后將所有各組小鼠空腹12h，眼眶 取血，分離血清，葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1 表1人參多糖對(duì)STZ糖尿病小鼠血糖值影響 注與正常對(duì)照組比較:AA, p < 0. 01 ；與模型組比較:*，p < 0. 05廣，p < 0. 01從表1可知，灌胃10天后，人參多糖和優(yōu)降糖均能顯著降低高血糖小鼠的血糖值， 其中人參多糖50mg/kg組能夠極顯著降低小鼠的高血糖，并能夠達(dá)到正常值，說(shuō)明人參多 糖在口服的情況下具有降血糖的作用。2、人參酸性多糖與中性多糖降糖實(shí)驗(yàn)為篩選人參多糖的有效極分，按照人參粗多糖50mg的分離比例，將人參酸性多糖和中性多糖做降糖分析。取100只小鼠隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，其余空腹12小時(shí)，按
180mg/kg劑量腹腔注射pH4.5的檸檬酸緩沖液配制的鏈脲佐菌素(STZ)溶液。72h后，尾
靜脈采血，強(qiáng)生隨手測(cè)血糖儀測(cè)定禁食12h后的空腹血糖值，取血糖值大于15. 00mmol/L的
小鼠為成型糖尿病小鼠。糖尿病模型小鼠按血糖值分為4組，每組10只，模型對(duì)照組灌胃
給蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給小鼠優(yōu)降糖，30mg/kg人參中性多糖和10mg/kg酸性多糖組。
每天灌胃給藥1次，連續(xù)10d，末次給藥后將所有各組小鼠空腹12h，眼眶取血，分離血清，葡
萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
注與正常對(duì)照組比較:ΔΔ，ρ < 0. 01 ；與模型組比較:*，ρ < 0. 05 ；**，ρ < 0. 01從表2可知，灌胃10天后，人參多糖和優(yōu)降糖均能顯著降低高血糖小鼠的血糖值， 其中人參酸性多糖10mg/kg組能夠極顯著降低小鼠的高血糖，并能夠達(dá)到正常值，說(shuō)明人 參多糖在口服的情況下具有降血糖的作用的主要極分為酸性多糖部分。


圖1，人參酸性多糖的分子篩凝膠分布圖(s印harose CL-6B)。圖2，人參酸性多糖的單糖組成圖(HPLC)。
具體實(shí)施例方式1.稱(chēng)取人參根1500克，用22. 5升蒸餾水100°C提取4小時(shí)，提取物經(jīng)4層紗布過(guò) 濾。過(guò)濾得到的殘?jiān)谙嗤瑮l件下重復(fù)提取兩次。合并三次提取所得濾液，4000轉(zhuǎn)/分離 心10分鐘，棄沉淀，上清液80°C濃縮至700毫升。向上清液中加入4倍體積的95%乙醇， 充分?jǐn)嚢韬螅o止沉淀過(guò)夜。離心，收集沉淀，常規(guī)干燥(95%乙醇、無(wú)水乙醇、乙醚依次充分 攪拌后離心，沉淀減壓干燥過(guò)夜)。得到152. 9克人參粗糖樣品。2.稱(chēng)取人參粗糖150克，溶解于1500毫升水中，加入375毫升Sevag試劑(正丁 醇氯仿=1 4，ν/ν)，充分震蕩兩個(gè)小時(shí)，靜止分層后，4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，去除蛋 白層和氯仿層。水層重復(fù)操作至不再出現(xiàn)蛋白層為止，所得水溶液經(jīng)乙醇沉淀和常規(guī)干燥 得到脫蛋白人參多糖級(jí)分人參多糖(129克)。3.將人參多糖(25克)溶于蒸餾水(250毫升)中，用DEAE-纖維素離子交換柱 (8. OX 20cm, Cl-)分離。依次用2升蒸餾水和2升0. 5M氯化鈉洗脫，洗脫液流速為25毫 升/分鐘，每50毫升洗脫液收集一管，經(jīng)由苯酚硫酸法檢測(cè)，收集適當(dāng)級(jí)分，經(jīng)蒸餾水透析 24小時(shí)后，冰凍干燥分別得到水洗脫的未結(jié)合級(jí)分人參中性多糖(15. 1克)和氯化鈉洗脫 的結(jié)合級(jí)分人參酸性多糖(4. 3克)。
權(quán)利要求
一種人參酸性多糖在治療降血糖方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種人參酸性多糖在降血糖方面的應(yīng)用，以人參根為原材料，經(jīng)過(guò)提取，純化，精制，制備出具有降血糖作用的人參酸性多糖。本發(fā)明涉及的人參酸性多糖可制備具有降血糖作用人參酸性多糖的各種制劑。本發(fā)明保留了人參多糖的活性，并提高了人參多糖降血糖活性成分的純度。
文檔編號(hào)A61K31/715GK101862346SQ200910066819
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2009年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月14日
發(fā)明者倪維華, 臺(tái)桂花, 周義發(fā), 孫成新, 陳艷, 韓翰 申請(qǐng)人:東北師范大學(xué)