專利名稱：：左亞葉酸鈉及其制備方法及藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種制備左亞葉酸鈉的方法，通過(guò)該方法得到的左亞葉酸鈉及穩(wěn)定的藥物組合物，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤目前已成為我國(guó)最常見(jiàn)的疾病之一。我國(guó)有關(guān)部門(mén)對(duì)70年代至80年代末的統(tǒng)計(jì)資料提示，我國(guó)城市癌癥死亡率為128.03/10萬(wàn)人口，在各類死因中占第二位。據(jù)估算，全國(guó)每年新發(fā)生的癌癥病人約160萬(wàn)，每年約有130萬(wàn)人死于癌癥，大約每死亡5人中就有1人死于癌癥。隨著人口老化、城市人口增長(zhǎng)、環(huán)境惡化，全國(guó)癌癥的發(fā)生與死亡人數(shù)將會(huì)繼續(xù)增加。雖然癌癥的死亡率較高，但并非不治之癥。隨著化療、放療等治療手段的發(fā)展，癌癥患者的五年生存率逐年提高。因此，合理有效地利用各種治療手段和資源，提高治療效果，以期達(dá)到最佳療效，無(wú)疑是醫(yī)務(wù)工作者的重要課題。當(dāng)前，化療是腫瘤綜合治療的主要手段之一，隨著新型化療藥和輔助化療藥的不斷涌現(xiàn)，如何合理選擇和搭配各種抗腫瘤的藥物資源，對(duì)于提高治愈率，延長(zhǎng)患者的生存期，提高其生存質(zhì)量具有重要的意義。其中活性成分左亞葉酸為較好抗巨幼細(xì)胞貧血和腫瘤化療的輔助用藥。左亞葉酸的藥理作用與亞葉酸相似，但其用藥劑量是亞葉酸的1/2。左亞葉酸不需要被二氫葉酸還原酶還原即可參加利用葉酸鹽作為一碳單位來(lái)源的反應(yīng)，且左亞葉酸可以主動(dòng)或被動(dòng)地通過(guò)細(xì)胞膜，左亞葉酸基本作用和葉酸相同，但效果優(yōu)于葉酸，因?yàn)槿~酸在肝及骨髓中先變?yōu)閬喨~酸才能起作用，而左亞葉酸為亞葉酸的活性形式，也具有剌激白細(xì)胞生長(zhǎng)成熟的作用，能改善巨幼細(xì)胞性貧血。左亞葉酸鈣由美國(guó)惠氏藥品公司首先研制成功，94年首先英國(guó)上市，并已在意大利、加拿大、日本、南非、芬蘭、冰島等10多個(gè)國(guó)家上市，其制劑有片劑、水針劑及凍干針劑。左亞葉酸鈣具有藥效和安全性方面的優(yōu)勢(shì)，具有確切的效果，在治療直腸癌、胃癌等方面具有一定療效。左亞葉酸鈣中左亞葉酸為活性成分，由于鈣離子沒(méi)有藥理作用，對(duì)左亞葉酸的活性沒(méi)有幫助，并且左亞葉酸鈣需緩慢滴注，避免血漿中過(guò)高的鈣離子濃度而引起的不必要副作用。而左亞葉酸鈉的溶解性優(yōu)于左亞葉酸鈣，其溶液的兼容性也優(yōu)于左亞葉酸鈣。因?yàn)樽髞喨~酸鈉的藥效和安全性明顯優(yōu)于亞葉酸鈉和左亞葉酸鈣，所以用于臨床更安全，更有效。公開(kāi)號(hào)為CN1559412的中國(guó)專利在2005年1月5日公開(kāi)了亞葉酸鈉凍干粉針劑及其制備方法，公開(kāi)號(hào)為CN101229167的中國(guó)專利公開(kāi)了藥物左亞葉酸鈉的制備方法和制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。在公開(kāi)號(hào)為CN1456561的中國(guó)專利申請(qǐng)中2003年11月19日公開(kāi)了左亞葉酸及其鈣鹽的制備方法，其制備方法是將混旋的亞葉酸及其鈣鹽溶解后上柱，再用水、有機(jī)溶劑或P朋.0-11.0的緩沖溶液及其混合溶液作為洗脫劑進(jìn)行沖洗，收集左亞葉酸及鈣鹽含量大于80%的溶液，調(diào)節(jié)pH值為7.0，加入乙醇析出左亞葉酸及左亞葉酸鈣，再用水重結(jié)晶1_3次，得到99%以上的左亞葉酸及左亞葉酸鈣。通過(guò)這種方法得到的左旋亞葉酸的光學(xué)純度高，但是分離設(shè)備復(fù)雜，分離成本高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一目的是提供一種制備左亞葉酸鈉的方法，左亞葉酸鈉的純度可以達(dá)到98.5%-99.9%。本發(fā)明的另一目的提供了一種通過(guò)本發(fā)明制備方法得到的左亞葉酸鈉，所述左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5%-99.9%。本發(fā)明的再一目的提供了一種注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物，該藥物組合物以左亞葉酸鈉為活性成分，具有很好的穩(wěn)定性。本發(fā)明一方面提供了一種制備左亞葉酸鈉的方法，所述的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5%-99.9%，該方法包括以下步驟a.首先將左亞葉酸鈣加入水中，接著將左亞葉酸鈣水溶液加熱到50-6(TC;b.用無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)加熱的左亞葉酸鈣水溶液的pH值為1-2，并在0-25t:冷卻；c.將步驟b得到的冷卻溶液在冷卻溫度下放置l-24小時(shí)，從溶液中析出左亞葉酸晶體，過(guò)濾，分別用水和有機(jī)醇洗滌左亞葉酸晶體；d.將步驟c洗滌得到的左亞葉酸晶體加入鈉的堿性水溶液中，并向該溶液中加入有機(jī)醇，去除有機(jī)醇和水，室溫下，析出晶體，過(guò)濾，干燥晶體得到所述的左亞葉酸鈉。左亞葉酸鈣可以從商業(yè)上購(gòu)買，也可以按照
背景技術(shù)：
和本發(fā)明中公開(kāi)的方法制備得到。將左亞葉酸f丐水溶液加熱到50-6(TC，用無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)加熱的左亞葉酸^水溶液的pH值為l-2，并在0-25t:冷卻以及在冷卻溫度下將冷卻溶液放置l-24小時(shí)，采用該操作的原因是左亞葉酸鈣在水中的溶解性不好，用無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值并放置后，從溶液中析出的常常是左亞葉酸和左亞葉酸鈣的混和物，影響了左亞葉酸的收率，所以本發(fā)明中嚴(yán)格控制左亞葉酸鈣的水溶液的加熱溫度，無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)水溶液的pH值、冷卻溫度和冷卻溫度下放置時(shí)間，從而提高溶液中析出的左亞葉酸晶體的光學(xué)純度和左亞葉酸晶體的收率。此外，本發(fā)明制備的左亞葉酸鈉的結(jié)構(gòu)確證圖譜見(jiàn)附圖1、附圖2、附圖3、附圖4、附圖5。優(yōu)選地，步驟a中所述左亞葉酸鈣的光學(xué)純度為98.5-99.9%。優(yōu)選地，步驟b得到的冷卻溶液中左亞葉酸的濃度為0.l-2mo1/1。此濃度范圍的左亞葉酸在冷卻條件下析出晶體的收率最大，達(dá)到70-85%。優(yōu)選地，步驟b中的所述的無(wú)機(jī)酸選自鹽酸、稀硫酸和磷酸中的一種。優(yōu)選地，步驟b中所述的無(wú)機(jī)酸為鹽酸。優(yōu)選地，步驟d中所述鈉的堿性水溶液的濃度為0.5-5mo1/1，并且左亞葉酸晶體溶解于鈉的堿性水溶液后得到的溶液的pH值為8-12，所述的鈉的堿性溶液為NaOH水溶液或乙醇鈉的水溶液?？刂撇襟Ed中鈉的堿性水溶液的摩爾濃度的目的是得到的左亞葉酸鈉的收率最高，達(dá)到90%，光學(xué)純度最高，達(dá)到99%。優(yōu)選地，所述的有機(jī)醇為乙醇、甲醇或異丙醇，并且步驟d中有機(jī)醇和左亞葉酸晶體的體積比為5-20:1。優(yōu)選地，所述的左亞葉酸f丐是通過(guò)以下方法得到的將混旋亞葉酸f丐溶解于55-6(TC的水中，向混旋的亞葉酸f丐水溶液中加入亞葉酸f丐0.5-3倍摩爾數(shù)的CaCl2攪拌溶解，用氨水調(diào)節(jié)PH值8-12，室溫冷卻，放置2-5小時(shí)，過(guò)濾，干燥，制得光學(xué)純度為80%左亞葉酸鈣I，再將左亞葉酸鈣I溶解于55-6(TC水中，向左亞葉酸鈣I的水溶液加入CaCl2，100-105t:下回流，用10-30X氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7-9，室溫冷卻，放置1_24小時(shí)，過(guò)5濾，干燥，得到光學(xué)純度為98.5-99.9%的左亞葉酸鈣。本發(fā)明另一方面還提供了一種左亞葉酸鈉，所述的左亞葉酸鈉通過(guò)本發(fā)明的制備方法得到，所述左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5-99.9%。本發(fā)明再一方面提供了一種注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物，該藥物組合物中含有光學(xué)純度為98.5-99.9%的左亞葉酸鈉、pH值調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑，所述的穩(wěn)定劑選自精氨酸、葡甲胺、泊洛沙姆、卡波姆、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、磷酸二氫鈉、十二烷基硫酸鈉和三羥甲基氨基甲烷中的一種或幾種。本申請(qǐng)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)含有左亞葉酸鈉的藥物組合物在儲(chǔ)存中穩(wěn)定性差、容易出現(xiàn)可見(jiàn)異物，并且隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增長(zhǎng)，注射用的藥物組合物會(huì)發(fā)生滲透壓不合格的現(xiàn)象，從而影響了藥物的使用安全性。因此，為了提高藥物的安全性，本申請(qǐng)發(fā)明人經(jīng)過(guò)屢次實(shí)驗(yàn)，找到了上述用于左亞葉酸鈉藥物組合物的穩(wěn)定劑，解決了隨著儲(chǔ)存時(shí)間增長(zhǎng)，藥物安全性降低的問(wèn)題。優(yōu)選地，所述的注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物為凍干粉針劑、注射液或輸液劑。優(yōu)選地，所述的左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑中含有其總重量0.1_49%的左亞葉酸鈉、50-90%的水溶性填充劑、0.01-10X的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑和余量的滲透壓調(diào)節(jié)劑。將凍干粉針劑中的左亞葉酸鈉、水溶性填充劑、pH值調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑的范圍控制在上述范圍的目的是得到的左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑具有很好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。優(yōu)選地，所述左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑中含有其總重量10-30%的左亞葉酸鈉。優(yōu)選地，所述的左亞葉酸鈉藥物組合物注射液中含有其總重量0.1-20%的左亞葉酸鈉、0.01-10%的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑、0.1-0.9%的滲透壓調(diào)節(jié)劑和余量的注射用水。將左亞葉酸鈉、pH值調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑的范圍控制在上述范圍的目的是得到的左亞葉酸鈉藥物組合物注射液具有很好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。優(yōu)選地，所述的左亞葉酸鈉藥物組合物的輸液劑中含有其總重量0.01-2%的左亞葉酸鈉、0.01-10%的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑、0.1-0.9%的滲透壓調(diào)節(jié)劑和余量的注射用水。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑為精氨酸、三羥甲基氨基甲烷或磷酸二氫鈉。優(yōu)選地，所述的pH值調(diào)節(jié)劑為生理上可接受的酸、堿和鹽中的一種或幾種。更優(yōu)選地，生理上可接受的酸選自枸櫞酸、磷酸和鹽酸中的一種或幾種，生理上可接受的堿選自氫氧化鉀和氫氧化鈉中的一種或兩種，生理上可接受的鹽選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銨、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀和碳酸氫銨中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述的水溶性填充劑選自甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、吐溫、葡萄糖、木糖醇、乳糖和半乳糖中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述藥物組合物在水溶液狀態(tài)下的pH值為7-9。本發(fā)明再一方面提供了一種左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑的制備方法，稱量左亞葉酸鈉、水溶性填充劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑溶解于注射用水中，用pH值調(diào)節(jié)劑將PH值調(diào)節(jié)到7-9，加入活性炭脫色，在20-3(TC下攪拌10-60分鐘，脫炭，除菌，在-2(TC_201:冷凍干燥，制得凍干粉針劑。與現(xiàn)有技術(shù)不同的是本發(fā)明以左亞葉酸鈣為原料通過(guò)結(jié)晶法得到了左亞葉酸，接著以左亞葉酸為原料，通過(guò)中和、結(jié)晶的方法得到了左亞葉酸鈉。在由左亞葉酸鈣制備左亞葉酸的過(guò)程中，本發(fā)明方法特別控制了左亞葉酸鈣水溶液的加熱溫度，從而促進(jìn)了左亞葉酸鈣的溶解。使用無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值、控制冷卻結(jié)晶的溫度和結(jié)晶的時(shí)間，保證得到左亞葉酸的光學(xué)純度可以達(dá)到98.5-99.9%，左亞葉酸相對(duì)于左亞葉酸鈣的收率達(dá)到70-85%;在由左亞葉酸制備左亞葉酸鈉的過(guò)程中，本發(fā)明方法特別控制了鈉的堿性水溶液和有機(jī)醇的加入量，從而控制左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5-99.9%，左亞葉酸鈉相對(duì)于左亞葉酸鈣的收率達(dá)到80-95%。本發(fā)明提供了適合臨床治療巨幼細(xì)胞貧血和抗腫瘤病輔助治療要求的左亞葉酸鈉的藥物組合物，并以左亞葉酸鈉為活性成分，發(fā)明了穩(wěn)定的注射給藥的藥物組合物，尤其是靜脈注射給藥的藥物組合物，提供了臨床上的一種治療手段。注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物提高了現(xiàn)有的左亞葉酸鈉注射液中左亞葉酸鈉的光學(xué)純度和藥物組合物的穩(wěn)定性，本發(fā)明制備的左亞葉酸鈉是通過(guò)左亞葉酸鈣得到的，制備方法簡(jiǎn)單易行，成本低。同時(shí)由于采用本發(fā)明方法制備的左亞葉酸鈉化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，旋光體穩(wěn)定，有關(guān)物質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，所以由該活性物質(zhì)制備的注射用的藥物組合物在放置過(guò)程中穩(wěn)定，單個(gè)雜質(zhì)小于0.4%，pH值更穩(wěn)定，用于靜脈給藥安全性更高，療效更好。本發(fā)明提供的左亞葉酸鈉的藥物組合物，其中的活性成分是左亞葉酸鈉，輔料包含PH調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑，輔料還可以包含注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑和水溶性填充劑，其中所述的藥物組合物制劑包括凍干粉針劑、注射液和輸液劑。在所述的左亞葉酸鈉的藥物組合物制劑中a.凍干粉針劑中，左亞葉酸鈉活性成分占總量的重量百分比為0.1_49%，優(yōu)選10-30%。b.注射液中，左亞葉酸鈉活性成分的濃度為lmg/ml-200mg/ml，優(yōu)選20-lOOmg/ml，包括lml、2ml、4ml、9ml和18ml規(guī)格。c.輸液劑中藥物的濃度為O.lmg/ml-20mg/ml，包括50ml、100ml、250ml的規(guī)格，與氯化鈉、葡萄糖的一種或幾種組成的復(fù)方輸液劑。1.本發(fā)明的左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑的優(yōu)選配方及制備方法如下組成以下組成均為重量百分比(1)凍干粉針劑左亞葉酸鈉0.1%-49%水溶性填充劑50%-90%pH調(diào)節(jié)劑0.01%-10%穩(wěn)定劑0.001%-2%滲透壓調(diào)節(jié)劑0.1%-0.9%制備方法取如上配方的左亞葉酸鈉、水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑，加入注射用水適量攪拌使其溶解，調(diào)pH值至7-9，加水至全量，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下攪拌10-60分鐘，脫炭，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得淡黃色疏松塊狀物，封口即得。2.本發(fā)明的左亞葉酸鈉藥物組合物注射液的優(yōu)選配方及制備方法如下以下組成均為重量百分比0.1-20%的左亞葉酸鈉、0.01-10X的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑、0.1-0.9%的滲透壓調(diào)節(jié)劑和余』左亞葉酸鈉pH調(diào)節(jié)劑穩(wěn)定劑滲透壓調(diào)節(jié)劑注射用水:的注射用水。0.1%-20.0%0.01%-10%0.001%-2%0.1%-0.9%制備方法取左亞葉酸鈉和水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)pH值至7-9使其溶解，加水至全量，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下攪拌10-60分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌、灌封即得。3.本發(fā)明的左亞葉酸鈉藥物組合物輸液劑的配方及制備方法如下以下組成均:百分比左亞葉酸鈉0.01%-2%pH調(diào)節(jié)劑0.01%-10%穩(wěn)定劑0.001%-2%滲透壓調(diào)節(jié)劑0.1%-0.9%注射用水余量制備方法取左亞葉酸鈉、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑，加入注射用水適量攪拌使其溶解，調(diào)節(jié)pH值至7-9，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下攪拌10-60分鐘，脫炭，加水至全量，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌封、包裝。按照以上配方得到的左亞葉酸鈉的藥物組合物，包括凍干粉針劑、注射液和輸液劑在(TC_81:和室溫放置5天、10天進(jìn)行可見(jiàn)異物、滲透壓檢查考察，與0天比較結(jié)果如下表1本發(fā)明的藥物組合物樣品可見(jiàn)異物考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2本發(fā)明的藥物組合物樣品滲透壓考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3本發(fā)明的藥物組合物樣品可見(jiàn)異物考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4本發(fā)明的藥物組合物樣品滲透壓考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>此外，我們還對(duì)本發(fā)明的藥物組合物樣品室溫長(zhǎng)期放置的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果如下表5本發(fā)明的藥物組合物樣品可見(jiàn)異物考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從表1到表6可以看出，本發(fā)明的左亞葉酸鈉藥物組合物的穩(wěn)定性好，所以用于靜脈給藥安全性更高，療效更好。圖1表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的紫外掃描圖。圖2表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的高效液相色譜圖。圖3表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的核磁共振氫譜圖。圖4表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的差熱分析圖。圖5表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的紅外光譜鑒別圖。圖6表示本發(fā)明實(shí)施例3獲得的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度色譜圖。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，實(shí)施例僅為解釋性的說(shuō)明，決不意味著它以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1左亞葉酸鈉的制備方法(1)左亞葉酸鈣的制備混旋亞葉酸鈣加入水中，加熱攪拌溶解，加入CaCl2，攪拌溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH值8-12，室溫冷卻后，析出大固體，放置2-5h時(shí)間后，過(guò)濾，干燥，制得光學(xué)純度為80%左亞葉酸鈣。再加水，加入CaCl2，加熱回流，用10-30X質(zhì)量濃度的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值7-9，溶解，室溫冷卻，放置一定時(shí)間，過(guò)濾，干燥，如此操作二次，制得光學(xué)純度為99%的左亞葉酸牽丐。[oogo](2)左亞葉酸鈉的制備專利CN88102709.X中簡(jiǎn)單介紹采用離子交換的方法制備左亞葉酸鈉，本方法是通過(guò)試驗(yàn)獲得左亞葉酸鈉，并通過(guò)核磁，差熱等儀器進(jìn)行了結(jié)構(gòu)的確證。具體制備方法如下方法一、將光學(xué)純度為99%的左亞葉酸鈣加入水中，加熱后，滴加5N鹽酸，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為l-2，冰浴冷卻，放置過(guò)夜，共計(jì)12小時(shí)，水層逐漸析出白色固體，過(guò)濾，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亞葉酸晶體。得到的左亞葉酸晶體的光學(xué)純度為99.3%，左亞葉酸晶體相對(duì)于左亞葉酸鈣的收率為73.4%。將左亞葉酸晶體加入到1_10%的氫氧化鈉水溶液中，再加95%乙醇，攪拌溶解，減壓濃縮，析出淺黃色固體，過(guò)濾，干燥，得左亞葉酸鈉，得到的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為99.3%，相對(duì)于左亞葉酸收率達(dá)到90%。方法二、將光學(xué)純度為99%的左亞葉酸鈣加入水中，加熱溶解后，通過(guò)強(qiáng)堿性離子交換樹(shù)脂，收集餾分，水層濃縮至盡，得黃色固體，加入乙醇洗，干燥，得左亞葉酸鈉。實(shí)施例2左亞葉酸鈣的制備將10g的混旋亞葉酸鈣加入120ml的水中，加熱至60°C，攪拌溶解，加入20g的CaC^，攪拌溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH值至10.5，室溫冷卻，析出大量固體，放置3小時(shí)，過(guò)濾，干燥，制得4.7g光學(xué)純度為80%的左亞葉酸鈣。將4.7g80X的左亞葉酸鈣加入水中，加入8g的CaCl2，加熱回流，用20%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到8.0，溶解，室溫冷卻，放置4小時(shí)，過(guò)濾，干燥，制得3.5g光學(xué)純度為95%的左亞葉酸鈣。將3.5g95%的左亞葉酸鈣加入水中，加入5g的CaCl2，加熱回流，用20%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到8.0，溶解，室溫冷卻，放置4小時(shí)，過(guò)濾，干燥，制得3.0g光學(xué)純度為99%的左亞葉酸鈣，光學(xué)收率60%。實(shí)施例3左亞葉酸鈉的制備將5g的光學(xué)純度為99%的左亞葉酸鈣加入50ml的水中，加熱至5(TC，滴加5N鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1-2，冰浴0-5t:冷卻，在該溫度下放置過(guò)夜，共1小時(shí)，水層逐漸析出白色固體，過(guò)濾，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亞葉酸3.4g，加入到20ml的5%的氫氧化鈉水溶液中，攪拌，固體逐漸溶解，溶液顏色為棕黃色，減壓濃縮至干，加入95%乙醇15ml，攪拌，逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色固體，過(guò)濾，干燥，得左亞葉酸鈉3.3g。左亞葉酸鈉的鑒定圖1表示獲得的左亞葉酸鈉的紫外掃描圖，圖中的1峰表示苯環(huán)及其取代基酰胺基團(tuán)，2峰表示嘧啶基團(tuán)。圖2表示獲得的左亞葉酸鈉的高效液相色譜圖，保留時(shí)間為11.967分鐘的是左亞葉酸鈉，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，左亞葉酸鈉的純度達(dá)到98.5%以上。圖3表示獲得的左亞葉酸鈉的核磁共振氫譜圖，1.7-2.5表示的4個(gè)H為CH2基團(tuán)；3.0_3.7表示的4個(gè)H為與氨基相連CH2基團(tuán)；4.1、4.9表示的2個(gè)H為與N相連的CH基團(tuán)；4.5表示1個(gè)活潑H;6.6-6.7表示的2個(gè)H為與氨基端相連的苯環(huán)H;7.5_7.8表示的2個(gè)H為與羰基端相連的苯環(huán)H;8.6表示的1個(gè)H為醛基H。圖4表示獲得的左亞葉酸鈉的差熱分析圖，在13.5-17分鐘出的峰表示熔點(diǎn)為201°C-205°〇，在21.5-23.5分鐘出的峰表示藥物完全分解溫度276°C-280°C。圖5表示獲得的左亞葉酸鈉的紅外光譜鑒別圖，在波數(shù)為1329cm一1、1280cm—1出的峰為苯環(huán)基團(tuán)，波數(shù)為1607cm—\1638cm—1出的峰為羰基團(tuán)，波數(shù)為2968cm—1出的峰為甲基基團(tuán)，波數(shù)為3393cm—1出的峰為羥基和氨基團(tuán)。圖6表示獲得的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度色譜圖。從以上六幅圖可以看出通過(guò)本發(fā)明的方法可以獲得光學(xué)純度為98.5%以上的左亞葉酸鈉。實(shí)施例4左亞葉酸鈉的制備將5g的光學(xué)純度為99%的左亞葉酸鈣加入50ml的水中，加熱至5(TC，滴加5N鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至l-2，冰浴0-5t:冷卻，在該溫度下放置過(guò)夜，共12小時(shí)，水層逐漸析出白色固體，過(guò)濾，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亞葉酸3.4g，加入95%乙醇15ml，攪拌，加入1.5g的乙醇鈉，攪拌回流，固體顏色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色固體，室溫冷卻，過(guò)濾，干燥，得左亞葉酸鈉3.2g，光學(xué)純度達(dá)到99.3%。實(shí)施例5左亞葉酸鈉的制備將5g的光學(xué)純度為99X的左亞葉酸鈣加入50ml的水中，加熱至50°C，溶解，通過(guò)強(qiáng)堿性離子交換樹(shù)脂，收集餾分，水層濃縮至盡，得黃色固體，加入乙醇洗，干燥，得左亞葉酸鈉2.8g。實(shí)施例6取實(shí)施例3左亞葉酸鈉3g，置于容器中，加穩(wěn)定劑泊洛沙姆0.25g，注射用水80ml，攪拌使溶解，加入甘露醇25g、乳糖10g、氯化鈉lg攪拌使溶解，加0.lmol/L的氫氧化鈉適量調(diào)節(jié)pH至7-9.0，補(bǔ)加水至120ml。加入0.5g活性碳，在20-3(TC下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液按每支1ml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥12小時(shí)，至樣品溫度到室溫后，再干燥5小時(shí)，制得淡黃色疏松塊狀物，封口即得左亞葉酸鈉凍干粉針。實(shí)施例7取實(shí)施例3左亞葉酸鈉3g，置于容器中，加穩(wěn)定劑卡伯姆0.3g，注射用水25ml，攪拌使溶解，加入甘露醇10g、山梨醇5g、氯化鈉0.27g，攪拌使溶解，以0.lmol/L的鹽酸適量調(diào)節(jié)pH至7.0-9.0，補(bǔ)加水至30ml。加入0.lg活性碳，在25"下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液按每支2ml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥18小時(shí)，至樣品溫度到室溫后，再干燥5小時(shí)，制得淡黃色疏松塊狀物，封口即得左亞葉酸鈉凍干粉針。實(shí)施例8取實(shí)施例4左亞葉酸鈉2.5g，置于容器中，加穩(wěn)定劑十二烷基硫酸鈉0.05g，加注射用水40ml，加入甘露醇30g，半乳糖20g攪拌使溶解，以lmol/L的鹽酸或lmol/L氫氧化鈉適量調(diào)節(jié)pH至7.0-9.0，補(bǔ)加水至50ml。加入0.lg活性碳，在25。C下攪拌30分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液按每支lml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥15小時(shí)，至樣品溫度到室溫后，再干燥5小時(shí)，制得淡黃色疏松塊狀物，封口即得左亞葉酸鈉凍干粉針。實(shí)施例9取實(shí)施例2左亞葉酸鈉5g，精氨酸lg，加入注射用水450ml中，攪拌溶解，加入2%的碳酸氫鈉適量調(diào)節(jié)PH為7-9，加入2.5g活性炭，室溫?cái)嚢栉?0分鐘，除炭，補(bǔ)加水至500ml，精濾、以每支lml灌封、滅菌，即得左亞葉酸鈉注射液。實(shí)施例10取實(shí)施例3左亞葉酸鈉6g，加入到已溶解0.5g三羥甲基氨基甲烷的注射用水50ml中，加入0.lmol/L的鹽酸或0.lmol/L的氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH為7_9.O，補(bǔ)加水至60ml，加入0.18g活性炭，室溫?cái)嚢栉?0分鐘，除炭，精濾，以每支2ml灌封、滅菌，即得左亞葉酸鈉注射液。實(shí)施例11取實(shí)施例4左亞葉酸鈉3g，加入注射用水50ml中，加0.lg磷酸二氫鈉，攪拌使溶解，加入lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH為8.0-9.O，補(bǔ)加注射用水至60ml，加入0.15g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，以每支lml灌封，即得左亞葉酸鈉注射液。實(shí)施例12取實(shí)施例4左亞葉酸鈉3g，加入注射用水50ml中，加0.Olg焦亞硫酸鈉，攪拌使溶解，加入0.lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH為7.0-8.O，補(bǔ)加注射用水至60ml，加入0.15g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、以每支2ml灌封、滅菌，即得左亞葉酸鈉注射液。實(shí)施例13取實(shí)施例4左亞葉酸鈉6g，加入注射用水25ml中，加0.05g亞硫酸鈉，攪拌使溶解，加入lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH為7.0-9.O，補(bǔ)加注射用水至30ml，加12入0.lg活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、以每支1ml灌封、滅菌，即得左亞葉酸鈉注射液。實(shí)施例14取實(shí)施例3左亞葉酸鈉鈉鹽2.5g，加入10g磷酸二氫鈉和225g氯化鈉，再加注射用水20000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)pH為7-9.O，加入25g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至25000ml，精濾、灌封每瓶100ml，滅菌，即得左亞葉酸鈉氯化鈉輸液劑。實(shí)施例15取實(shí)施例4左亞葉酸鈉5g，加入500g葡萄糖，lg三羥甲基氨基甲烷，再加注射用水2000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)pH為8.0_9.0，加入10g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至5000ml，精濾、灌封每瓶50ml，滅菌，即得左亞葉酸鈉葡萄糖輸液劑。實(shí)施例16取實(shí)施例11進(jìn)行異常毒性檢查限值確定取同一性別體重20g小鼠20只，采用實(shí)施例ll制備的注射液(規(guī)格lml:50mg)，按照常規(guī)注射速度尾靜脈注射lml/只，注射速度為0.lml/秒，連續(xù)觀察5天，動(dòng)物未出現(xiàn)流涎、分泌物增多、體重下降等毒性反應(yīng)或死亡，表明本品在最大給藥劑量下，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，具有較好的安全性。因此即以該劑量作為檢查限值。實(shí)施例17取實(shí)施例11進(jìn)行溶血、過(guò)敏、剌激試驗(yàn)結(jié)果1.溶血采用直接觀察法未發(fā)現(xiàn)溶血和紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象，酶標(biāo)儀檢測(cè)亦未發(fā)現(xiàn)溶血現(xiàn)象。2.過(guò)敏全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)中左亞葉酸鈉注射液10mg/kg及25mg/kg劑量組豚鼠過(guò)敏反應(yīng)陰性；被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)中左亞葉酸鈉注射液10mg/kg及25mg/kg劑量組大鼠過(guò)敏反應(yīng)陰性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明左亞葉酸鈉注射液過(guò)敏性試驗(yàn)結(jié)果陰性。3.剌激家兔肌肉給予左亞葉酸鈉注射液2mg/kg(藥物濃度2mg/ml)及5mg/kg(藥物濃度25mg/ml)，對(duì)肌肉無(wú)明顯剌激作用；家兔耳緣靜脈給予左亞葉酸鈉注射液10mg/kg(藥物濃度2mg/ml)及25mg/kg(藥物濃度10mg/ml)，對(duì)血管無(wú)明顯剌激作用；組織病理學(xué)檢查左亞葉酸鈉注射液對(duì)家兔的肌肉和耳緣靜脈無(wú)明顯剌激性，左亞葉酸鈉注射液局部剌激試驗(yàn)結(jié)果陰性。權(quán)利要求一種制備左亞葉酸鈉的方法，所述的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5-99.9％，該方法包括以下步驟a.首先將左亞葉酸鈣加入水中，接著將左亞葉酸鈣水溶液加熱到50-60℃，優(yōu)選地，所述左亞葉酸鈣的光學(xué)純度為98.5-99.9％；b.用無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)加熱的左亞葉酸鈣水溶液的pH值為1-2，并在0-25℃冷卻；c.將步驟b得到的冷卻溶液在冷卻溫度下放置1-24小時(shí)，從溶液中析出左亞葉酸晶體，過(guò)濾，分別用水和有機(jī)醇洗滌左亞葉酸晶體；d.將步驟c洗滌得到的左亞葉酸晶體加入鈉的堿性水溶液中，并向該溶液中加入有機(jī)醇，去除有機(jī)醇和水，室溫下，析出晶體，過(guò)濾，干燥晶體得到所述的左亞葉酸鈉。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中步驟b得到的冷卻溶液中左亞葉酸的濃度為0.l-2mol/l。3.根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的方法，其中步驟b中所述的無(wú)機(jī)酸選自鹽酸、稀硫酸和磷酸中的一種，優(yōu)選鹽酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟d中所述的鈉的堿性水溶液的濃度為0.5-5mol/l，并且左亞葉酸晶體溶解于鈉的堿性水溶液后得到的溶液的pH值為8-12，所述的鈉的堿性溶液為NaOH水溶液或乙醇鈉的水溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的有機(jī)醇為乙醇、甲醇或異丙醇，并且步驟d中有機(jī)醇和左亞葉酸晶體的體積比為5-20:1。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的左亞葉酸鈣是通過(guò)以下方法得到的將混旋亞葉酸鈣溶解于55-6(TC的水中，向混旋的亞葉酸鈣水溶液中加入亞葉酸鈣0.5-3倍摩爾數(shù)的CaCl2，攪拌溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH值8-12，室溫冷卻，放置2_5小時(shí)，過(guò)濾，干燥，制得光學(xué)純度為80%左亞葉酸鈣I，再將左亞葉酸鈣I溶解于55-6(TC水中，向左亞葉酸鈣I的水溶液加入CaCl2，100-105C下回流，用10-30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7-9，，室溫冷卻，放置1-24小時(shí)，過(guò)濾，干燥，得到光學(xué)純度為98.5-99.9%的左亞葉酸牽丐。7.—種由權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述方法制備得到的左亞葉酸鈉，所述左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5-99.9%。8.—種注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物，該藥物組合物中含有光學(xué)純度為98.5%_99.9%的左亞葉酸鈉、pH值調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑，所述的穩(wěn)定劑選自精氨酸、葡甲胺、泊洛沙姆、卡波姆、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、磷酸二氫鈉、十二烷基硫酸鈉和三羥甲基氨基甲烷中的一種或幾種，優(yōu)選精氨酸、三羥甲基氨基甲烷或磷酸二氫鈉，優(yōu)選地，所述的注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物中還含有水溶性填充劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述的注射用的左亞葉酸鈉藥物組合物為凍干粉針劑、注射液或輸液劑。10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的藥物組合物，其中左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑中含有其總重量O.1-49%的左亞葉酸鈉、50-90%的水溶性填充劑、0.01-10%的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑和余量的滲透壓調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選地，所述左亞葉酸鈉藥物組合物凍干粉針劑中含有其總重量10-30%的左亞葉酸鈉。11.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的藥物組合物，其中左亞葉酸鈉藥物組合物注射液中含有其總重量O.1-20%的左亞葉酸鈉、0.01-10X的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑、·0.1-0.9%的滲透壓調(diào)節(jié)劑和余量的注射用水。12.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的藥物組合物，其中左亞葉酸鈉藥物組合物的輸液劑中含有其總重量0.01-2%的左亞葉酸鈉、0.01-10%的pH值調(diào)節(jié)劑、0.001-2%的穩(wěn)定劑、0.1-0.9%的滲透壓調(diào)節(jié)劑和余量的注射用水，優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑為精氨酸、三羥甲基氨基甲烷或磷酸二氫鈉。13.根據(jù)權(quán)利要求8-12中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述的pH值調(diào)節(jié)劑為生理上可接受的酸、堿和鹽中的一種或幾種，優(yōu)選地，生理上可接受的酸選自枸櫞酸、磷酸和鹽酸中的一種或幾種，生理上可接受的堿選自氫氧化鉀和氫氧化鈉中的一種或兩種，生理上可接受的鹽選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銨、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀和碳酸氫銨中的一種或幾種。14.根據(jù)權(quán)利要求8-13中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述的水溶性填充劑選自甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、吐溫、葡萄糖、木糖醇、乳糖和半乳糖中的一種或幾種。15.根據(jù)權(quán)利要求8-14中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物在水溶液狀態(tài)下的pH值為7-9。全文摘要本發(fā)明提供了一種制備左亞葉酸鈉的方法，所述的左亞葉酸鈉的光學(xué)純度為98.5％-99.9％，本發(fā)明還提供了通過(guò)本發(fā)明方法制備得到的左亞葉酸鈉和左亞葉酸鈉藥物組合物。通過(guò)本發(fā)明方法制備的左亞葉酸鈉光學(xué)純度達(dá)到98.5％以上，得到的左亞葉酸鈉藥物組合物在放置過(guò)程中穩(wěn)定，單個(gè)雜質(zhì)小于0.4％，pH值更穩(wěn)定，用于靜脈給藥安全性更高，療效更好。文檔編號(hào)A61K9/19GK101792444SQ20091006780公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2009年2月2日優(yōu)先權(quán)日2009年2月2日發(fā)明者任曉文,吳疆,孫歆慧,李祎亮,李鵬旺,鄒美香,靳朝東申請(qǐng)人:天津康鴻醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司