專利名稱：一種中藥制劑的質(zhì)量控制方法
一種中藥制劑的質(zhì)量控制方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥的檢測方法，尤其是一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì) 量控制方法。
背景技術(shù)：
夜尿?qū)幹苿┑奶幏綖槿夤?、桑螵蛸、補(bǔ)骨脂(鹽制)、大青鹽，具有補(bǔ)腎散寒 止?jié)窨s尿功效的中藥制劑，特別用于治療兒童遺尿病，對(duì)于腎氣不足型的小兒遺尿癥具 有較好的臨床療效，該藥有效克服了西醫(yī)治療遺尿癥副作用大，見效慢，治愈率低等缺 陷。
本品收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第十七冊(cè) 中，處方由肉桂，補(bǔ)骨脂(鹽制)，桑螵蛸，大青鹽組成，其中補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂 PsoraleacorylifoliaL.的干燥成樹果實(shí)，有補(bǔ)腎、助陽、止瀉的功效，肉桂為樟科植物肉桂 Cinnamomum cassia Presl的干燥樹皮，有補(bǔ)陽、溫腎、祛寒、通脈、止痛的功效，桑螵蛸 為節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱螳螂科昆蟲大刀螂Tenodera sinensis Saussure小刀螂Statiliamaculata 或巨斧螳螂Hierodula patellifera的干燥卵鞘，有益腎、固精、縮尿、止帶的功效，大青 鹽引藥入腎經(jīng)。全方以收澀為主，溫腎縮尿，特別是丸劑加蜜和丸，加強(qiáng)了營養(yǎng)滋潤作 用。
目前衛(wèi)生部頒發(fā)的現(xiàn)有夜尿?qū)幍馁|(zhì)量控制方法中，沒有控制內(nèi)在質(zhì)量的項(xiàng)目， 只有性狀鑒別和丸劑通則項(xiàng)有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定的檢查。局限性很大，專屬性不強(qiáng)，難以有效 控制成品的質(zhì)量。眾所周知，中藥成分十分豐富，而基礎(chǔ)研究還較薄弱，有效成分往往 不明確，或者含量極低，其作用的發(fā)揮常常是多成分，多靶點(diǎn)的綜合作用，這些都給中 成藥的質(zhì)量控制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究增加了難度。
薄層色譜法(TLC)鑒別中對(duì)照藥材的確定越來越多的運(yùn)用在中藥制劑中，由于 對(duì)照品的限制或選擇對(duì)照品不夠?qū)俚仍?，常選用對(duì)照藥材作為TLC鑒別的色譜對(duì) 照。
高效液相色譜(HPLC)具有快速、靈敏、分離效能高等優(yōu)點(diǎn)，在中藥鑒定中， 采用HPLC法分離特征成分后，用紫外檢測器(UV)或質(zhì)譜檢測器(MS)進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析和 定量分析，是全面評(píng)價(jià)質(zhì)量的有效方法。中國藥典(2000年版)一部中就有59種藥材和 50種中成藥采用HPLC法進(jìn)行鑒定，而且還不斷有人用HPLC法對(duì)其它的中藥進(jìn)行鑒定 和成分分析研究。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種能夠即能定性又能定量 的、檢測手段簡單，結(jié)果準(zhǔn)確的中藥制劑夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，通過本發(fā)明的質(zhì) 量控制方法，有效控制這種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量，保證了該制劑的臨床療效。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，步驟是
(1)對(duì)制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸進(jìn)行顯微定性鑒定；
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，對(duì)制劑中肉桂進(jìn)行薄層定性鑒別；
(3)對(duì)制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定。
而且，所述制劑包括夜尿?qū)幫鑴?、夜尿?qū)幤瑒⒁鼓驅(qū)幠z囊劑、夜尿?qū)幧┗?夜尿?qū)庮w粒劑。
而且，所述步驟(1)的定性鑒定方法如下
取制劑置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲?。荒舅?xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
而且，所述步驟O)的鑒別方法為取制劑適量，加硅藻土適量，研碎，加乙 酸乙酯，超聲處理，放冷，濾過，濾液即為供試品溶液；另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙 酯制成溶液，即為對(duì)照品溶液；按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的工藝 制成制劑，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液；薄層色譜法參照《中國藥 典》2005年版一部附錄VI B試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照樣品溶液， 分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴 以二硝基苯胼乙醇試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
而且，所述步驟(3)的含量測定方法為采用高效液相色譜法，測定本制劑 中補(bǔ)骨脂有效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的總含量，色譜柱為C18或C8或C4柱，以 甲醇水為流動(dòng)相，檢測波長為200-300nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇或乙酸乙酯中的任 意一種制成混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，研細(xì)，精密稱定，精 密加入甲醇或乙酸乙酯中的任意一種，稱定重量，超聲處理或加熱回流提取方法中的任 意一種，放冷，稱定重量，用甲醇或乙酸乙酯中的任意一種再補(bǔ)足減失的重量，搖勻， 濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相 色譜儀測定含量。
而且，所述步驟(3)的含量測定夜尿?qū)幹苿┲?，每g制劑含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量不得少于1.35mg。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是
1、本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，經(jīng)過對(duì)該藥物的各種藥化學(xué)成分和藥理作用 報(bào)道的分析，增加了君藥臣藥補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒別方法，以及活性成分桂 皮醛為對(duì)照品的肉桂的薄層鑒別方法，和高效液相色譜法對(duì)補(bǔ)骨脂中有效成分補(bǔ)骨脂素 與異補(bǔ)骨脂素總量進(jìn)行的含量測定方法。
2、本發(fā)明建立了專屬性強(qiáng)的定性鑒別方法和精確的含量測定方法，使用現(xiàn)代手 段把顯微鑒別、色譜鑒別與性狀鑒別等方法相輔相成，提高了其原有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，全面 控制了夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量，對(duì)于保證藥品質(zhì)量、更好地發(fā)揮療效具有非常重要的作用。
3、本發(fā)明提供了一種夜尿?qū)幹苿┬碌馁|(zhì)量控制方法，增加了肉桂中活性成分桂皮醛的薄層色譜鑒別，經(jīng)方法學(xué)試驗(yàn)確認(rèn)方法可行，且陰性無干擾，同時(shí)選擇了補(bǔ)骨脂 中有效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為測定指標(biāo)，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，建立了夜尿?qū)幹?劑HPLC的含量測定方法，本方法有較強(qiáng)的專屬性、重現(xiàn)性和可行性，操作簡單，結(jié)果 準(zhǔn)確，能有效地進(jìn)行質(zhì)量控制，保證夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量和療效。


圖1肉桂薄層鑒別凝膠色譜圖從左至右依次為陰性樣品溶液，樣品(批 號(hào)EM7001)，樣品(批號(hào)EM7002)，樣品(批號(hào)EM7003)，桂皮醛對(duì)照品(中檢 所)；
圖2為本發(fā)明補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液光譜圖3為本發(fā)明異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液光譜圖4為本發(fā)明中補(bǔ)骨脂素異和補(bǔ)骨脂素對(duì)照品色譜圖5為本發(fā)明中補(bǔ)骨脂素異和補(bǔ)骨脂素供試品色譜圖6為本發(fā)明中補(bǔ)骨脂素異和補(bǔ)骨脂素陰性色譜圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，下述實(shí)施例是說明性的，不是限定性 的，不能以下述實(shí)施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
在以下實(shí)施例中夜尿?qū)幹苿┌ㄍ鑴?、片劑、膠囊劑、散劑或顆粒劑。
實(shí)施例1
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯20ml，超聲處理30分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約10ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含0.5μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的 工藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各6 8 μ 1， 對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯 (17 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(50 50)為流動(dòng)相，檢 測波長為M6nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ) 骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各40 μ g的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取2g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量， 超聲處理(功率^OW,頻率33kHz) 30分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品 溶液10 15μ1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲校縢含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例2
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯30ml，超聲處理25分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約15ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含 μ 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的工 藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國 藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μ 1，對(duì)照品 溶液Ιμ ，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯(15 5) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水00 60)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各30 μ g的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照 品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取3g，精密稱定，精密加入甲醇800ml，稱定重量， 超聲處理(功率^OW,頻率33kHz)45分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品 溶液10 15μ1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲?，每g含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例3
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲薄；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品2丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯50ml，超聲處理40分鐘，放冷，濾過，濾液揮至約20ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含0.5μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的 工藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各6 8 μ 1， 對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)-_乙酸乙酯 (18 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(60 40)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各40 μ g的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照 品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取4g，精密稱定，精密加入甲醇100ml，稱定重量， 超聲處理(功率^OW,頻率33kHz)45分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品 溶液10 15μ1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲?，每g含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例4
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯10ml，超聲處理15分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約5ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含 0.8μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的工 藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國 藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各5 μ 1，對(duì)照品 溶液Ιμ ，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯(17 3) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(50 50)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每Iml含各40yg的混合溶液，搖勻，即得 對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取2g，精密稱定，精密加入乙酸乙酯50ml，稱定 重量，超聲處理(功率^OW,頻率33kHz)30分鐘，放冷，稱定重量，用乙酸乙酯再補(bǔ)足 減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1 與供試品溶液10 15 μ 1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲?，每g含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例5
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯20ml，超聲處理30分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約10ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含0.5μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的 工藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各6 8μ1， 對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯 (17 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(70 30)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各40 μ g的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照 品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取2g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加 熱回流提取45分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品溶液10 15 μ 1，注入液 相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲?，每g含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例6
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯25ml，超聲處理15分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約10ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含0.6μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的 工藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各6 8 μ 1，對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯 (20 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(35 65)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每Iml含各50yg的混合溶液，搖勻，即得 對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取2g，精密稱定，精密加入乙酸乙酯50ml，稱定 重量，加熱回流提取30分鐘，放冷，稱定重量，用乙酸乙酯再補(bǔ)足減失的重量，搖勻， 濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品溶液10 15μ1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲校縢含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3) 與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例7
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲??；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品1丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯30ml，超聲處理15分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約10ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含0.5μ1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的 工藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各6 8μ1， 對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯 (17 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品為干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(50 50)為流動(dòng)相，檢測 波長為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各40 μ g的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照 品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取4g，精密稱定，精密加入甲醇100ml，稱定重量， 超聲處理(功率^OW,頻率33kHz)45分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供試品 溶液10 15μ1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲?，每g含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H603)與異補(bǔ)骨脂素(C11H603)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
實(shí)施例8
一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，包括如下步驟
(1)本制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定方法
取本品置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁 稍厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲薄；木栓細(xì)胞表面觀呈 類多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有 長方形或方形結(jié)晶。
(2)以桂皮醛為對(duì)照品，本制劑中肉桂的薄層定性鑒別方法
取本品2丸，加硅藻土相，研碎，加乙酸乙酯30ml，超聲處理15分鐘，放冷， 濾過，濾液揮至約10ml，作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml 含 μ 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的工 藝制成丸劑，在按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國 藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各5 μ 1，對(duì)照品溶 液0.5μ1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C )_乙酸乙酯(15 5) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干擾。
(3)本制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定方法
采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，以甲醇水(60 40)為流動(dòng)相，檢 測波長為M6nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ) 骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含各50 μ g的混合溶液，搖勻，即得 對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，剪碎，取3g，精密稱定，精密加入甲醇100ml，稱定重 量，超聲處理(功率^OW,頻率33kHz)45分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇再補(bǔ)足減失 的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1與供 試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀測定含量；該夜尿?qū)幹苿┲校縢含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)的總量計(jì)，不得少于1.35mg。
為了完成本發(fā)明，申請(qǐng)人做了大量的研究，對(duì)含量測定進(jìn)行了方法學(xué)考察，具 體考察了一下內(nèi)容
(1)儀器與試藥
儀器日本SHIMADZULC-2010C，CLASS-VP 工作站。
試劑甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為去離子水。
對(duì)照品補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素(中國藥品生物制品檢定所購置，批號(hào)補(bǔ)骨 脂素200310;異補(bǔ)骨脂素200309均為含量測定用對(duì)照品)。
樣品夜尿?qū)幫杼旖蛑行滤帢I(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供(批號(hào) E547001, E547002, Ε54700!3)。
(2)色譜條件
參照《中國藥典》2005年版一部補(bǔ)骨脂項(xiàng)下含量測定方法，且分別對(duì)補(bǔ)骨
脂素與異補(bǔ)骨脂素在190nm 400nm進(jìn)行光譜掃描，確定檢測波長為246nm， 結(jié)果見圖2、3。 色譜柱DikmaC18 (250mm X 4.6mm 5 μ m)；流動(dòng)相甲醇-水 (1:1);柱溫40°C ；流速lml/η ι。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
(3)提取方法及時(shí)間的考察
a、提取溶劑與提取方法的考察與選擇取同一批號(hào)(EM700;3)樣品，剪碎，取2g，精密稱定，分別精密加入甲醇、乙酸乙酯各50ml，稱定重量，分別采用超聲處理與 加熱回流的方式，提取時(shí)間均為30分鐘，放冷，稱定各自重量，用各自溶劑補(bǔ)足減失的 重量，濾過，取續(xù)濾液，測定樣品中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的總量。結(jié)果見表1，2。
表1采用甲醇為提取溶劑
權(quán)利要求
1.一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于控制方法的步驟是(1)對(duì)制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸進(jìn)行顯微定性鑒定；(2)以桂皮醛為對(duì)照品，對(duì)制劑中肉桂進(jìn)行薄層定性鑒別；(3)對(duì)制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于所述制劑包 括夜尿?qū)幫鑴?、夜尿?qū)幤瑒?、夜尿?qū)幠z囊劑、夜尿?qū)幧┗蛞鼓驅(qū)庮w粒劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于所述步驟(1) 的定性鑒定方法如下取制劑置顯微鏡下觀察種皮柵狀細(xì)胞淡棕色或紅棕色，表面觀類多角形，壁稍 厚，胞腔內(nèi)含紅棕色物；石細(xì)胞類圓形或類長圓形，壁一面菲薄；木栓細(xì)胞表面觀呈類 多角形，壁稍后，木化，胞腔常含棕色或紅棕色物；不規(guī)則薄片黃色或棕黃色，布有長 方形或方形結(jié)晶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于所述步驟(2) 的鑒別方法為取制劑適量，加硅藻土適量，研碎，加乙酸乙酯，超聲處理，放冷，濾 過，濾液即為供試品溶液；另取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成溶液，即為對(duì)照品溶 液；按處方配比，取除肉桂外的其他藥材按上述制法的工藝制成制劑，再按上述供試品 溶液制備方法制得陰性樣品溶液；薄層色譜法參照《中國藥典》2005年版一部附錄VI B 試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照樣品溶液，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層 板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯胼乙醇試液； 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照樣品無干 擾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于所述步驟 (3)的含量測定方法為采用高效液相色譜法，測定本制劑中補(bǔ)骨脂有效成分補(bǔ)骨脂素 和異補(bǔ)骨脂素的總含量，色譜柱為C18或C8或C4柱，以甲醇水為流動(dòng)相，檢測波長 為200-300nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；分別取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨 脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇或乙酸乙酯中的任意一種制成混合溶液，搖勻，即 得對(duì)照品溶液；另取本制劑適量，研細(xì)，精密稱定，精密加入甲醇或乙酸乙酯中的任意 一種，稱定重量，超聲處理或加熱回流提取方法中的任意一種，放冷，稱定重量，用甲 醇或乙酸乙酯中的任意一種再補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶 液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，其特征在于所述步驟 (3)的含量測定夜尿?qū)幹苿┲?，每g制劑含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)與異補(bǔ)骨脂素 (C11H6O3)的總量不得少于1.35mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量控制方法，步驟是(1)制劑中補(bǔ)骨脂、肉桂、桑螵蛸的顯微鑒定；(2)以桂皮醛為對(duì)照品，制劑中肉桂的薄層定性鑒別；(3)制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量的含量測定。本發(fā)明建立了專屬性強(qiáng)的定性鑒別方法和精確的含量測定方法，使用現(xiàn)代手段把顯微鑒別、色譜鑒別與性狀鑒別等方法相輔相成，提高了其原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，全面控制了夜尿?qū)幹苿┑馁|(zhì)量，對(duì)于保證藥品質(zhì)量、更好地發(fā)揮療效具有非常重要的作用。
文檔編號(hào)A61P13/00GK102018762SQ200910070509
公開日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2009年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月21日
發(fā)明者劉彤, 劉稚菲, 安適之, 李艷鈺, 王志強(qiáng), 金兆祥 申請(qǐng)人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠