專利名稱：一種新的制備復(fù)方腦蛋白水解物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的制備復(fù)方腦蛋白水解物的方法。
背景技術(shù)：
腦蛋白水解物最早由奧地利EBEWE藥廠以Cerebrolysin為商品名出售。腦蛋白水 解物是是無蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)化器官特異性氨基酸混合物的水溶液，其中含有多種人體必需的 氨基酸、非必需氨基酸、活性多肽、唾液酸等，可用于顱腦外傷、腦血管病后遺癥伴有記憶減 退及注意力集中障礙，對于治療器質(zhì)性腦性精神綜合癥、腦血管代償不足，神經(jīng)衰竭狀態(tài)， 幼兒腦發(fā)育不全，癲癇中風(fēng)、腦炎、腦震蕩等具有良好的功效。腦蛋白水解物中，游離氨基酸、活性多肽和唾液酸對腦功能障礙的恢復(fù)起著不可 忽視的作用，但是現(xiàn)有的制備方法得到的腦蛋白水解物中游離氨基酸含量很低，尤其是游 離氨基酸的含量非常低，達不到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用納濾技術(shù)提供一種從哺乳動物腦組織中制備的復(fù)方腦蛋白水解物，使 用該技術(shù)制備的復(fù)方腦蛋白水解物中唾液酸的含量較高、含天然的游離氨基酸較低，通過 補加外源性注射用L-氨基酸，其很大優(yōu)點在于通過血腦屏障并確保療效，對于提高腦蛋白 水解物的質(zhì)量及質(zhì)量可控性、保證腦蛋白水解物的安全性和有效性、擴大臨床應(yīng)用具有重 要的意義。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種從哺乳動物腦組織中制備腦蛋白水解物的方法，包括如下步驟(1)胃酶液水解取新鮮冷凍的哺乳動物腦組織，加純化水或注射用水勻漿，勻漿 液加入胃酶液攪拌均勻，水解，水解完畢加熱微沸，過濾，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液，加入胰酶攪拌均勻，水解，過濾，得腦蛋白水解物粗提 液；(3)除堿性蛋白；(4)超濾分離；(5)納慮濃縮；(6)檢查細菌內(nèi)毒素，得腦蛋白水解物精制品。本發(fā)明腦蛋白水解物的制備方法，優(yōu)選為(1)胃酶液水解取新鮮冷凍的哺乳動物腦組織，緩化，按照1 1 2的比例加純 化水或注射用水，膠體磨勻漿，勻漿液加熱80 90°C，保溫10 20min，降溫至35 40°C， 調(diào)PH值為2. 5 3. 5，加入胃酶液攪拌均勻，37 45°C水解12 18h，水解完畢，加熱微沸 20min，濾布過濾，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液調(diào)節(jié)pH值7. 5 8. 5，胰酶(按原料1 %加入)加入激 活劑，0. 04mol/LCaCl2室溫放置1小時加入胃酶水解液中，再用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH值為7. 5-8. 0,45-55 °C水解4h，水解完畢，調(diào)節(jié)pH值為4. 0 5. 0，按原料總量加入1 %活性炭 100°C加熱20min，用濾布過濾，得腦蛋白水解物粗提液；(3)除堿性蛋白取腦蛋白水解物粗提液，調(diào)節(jié)pH值為9.0 10.0，加熱80 900C，保溫lOmin，降溫30°C以下，用濾紙過濾，得濾液；(4)超濾分離將(3)中所得濾液調(diào)pH值為6. 5 7. 5，用10000分子量的超濾柱 超濾，超濾液冷凍48h;(5)納濾濃縮、活性炭處理將⑷中所得冷凍的超濾液緩化，用0.8μπι濾膜過 濾，除去溶液中脂肪蛋白及雜蛋白，過濾液納濾，納濾液用6mol/LLHcl調(diào)pH值為4. O 5. 0，并加入0. 1 0. 4%活性炭(w/w)，充分攪拌下100°C保溫20 30min，降溫30°C以下， 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，濾液取樣，檢測折光率、氨基酸。(6)補加注射用氨基酸按折光率稀釋納濾液，補加注射用氨基酸，調(diào)整折光率、 氨基酸至質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。(7)超濾、檢查細菌內(nèi)毒素將(6)中所得濾液調(diào)整pH值為7. O 7. 5，再經(jīng)10000 分子量的超濾柱超濾，超濾液取樣檢查細菌內(nèi)毒素，合格后，得復(fù)方腦蛋白水解物精制品。3.復(fù)方腦蛋白水解物制備處方
權(quán)利要求
一種從哺乳動物腦組織中制備腦蛋白水解物的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)胃酶液水解取新鮮冷凍的哺乳動物腦組織，加純化水或注射用水勻漿，勻漿液加入胃酶液攪拌均勻，水解，水解完畢加熱微沸，過濾，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液，加入胰酶，攪拌均勻，水解，過濾，得腦蛋白水解物粗提液；(3)除堿性蛋白；(4)超濾分離；(5)納慮濃縮；(6)檢查細菌內(nèi)毒素，得腦蛋白水解物精制品。
2.如權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)胃酶液水解取新鮮冷凍的哺乳動物腦組織，緩化，按照1 1 2的比例加純化 水或注射用水，膠體磨勻漿，勻漿液加熱80 90°C，保溫10 20min，降溫至35 40°C， 調(diào)PH值為2. 5 3. 5，加入胃酶液攪拌均勻，37 45°C水解12 18h，水解完畢，加熱微沸 20min，濾布過濾，得胃酶水解液；(2)胰酶水解胃酶水解液調(diào)節(jié)pH值7.5 8. 5，胰酶(按原料1 %加入)加入激活 劑，0.0411101/101(12室溫放置1小時加入胃酶水解液中，再用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH值為 7. 5-8. 0,45-55 °C水解4h，水解完畢，調(diào)節(jié)pH值為4. 0 5. 0，按原料總量加入1 %活性炭 100°C加熱20min，用濾布過濾，得腦蛋白水解物粗提液；(3)除堿性蛋白取腦蛋白水解物粗提液，調(diào)節(jié)pH值為9.0 10.0，加熱80 901， 保溫lOmin，降溫30°C以下，用濾紙過濾，得濾液；(4)超濾分離將(3)中所得濾液調(diào)pH值為6.5 7. 5，用10000分子量的超濾柱超 濾，超濾液冷凍48h;(5)納濾濃縮、活性炭處理將(4)中所得冷凍的超濾液緩化，用0.8μπι濾膜過濾，除 去溶液中脂肪蛋白及雜蛋白，過濾液納濾，納濾液用6mol/LLHcl調(diào)pH值為4. O 5. 0，并加 入0. 1 0. 4%活性炭(w/w)，充分攪拌下100°C保溫20 30min，降溫30°C以下，0. 45 μ m 微孔濾膜過濾，濾液取樣，檢測折光率、氨基酸。(6)補加注射用氨基酸按折光率稀釋納濾液，補加注射用氨基酸，調(diào)整折光率、氨基 酸至質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。(7)超濾、檢查細菌內(nèi)毒素將(6)中所得濾液調(diào)整pH值為7.O 7. 5，再經(jīng)10000分 子量的超濾柱超濾，超濾液取樣檢查細菌內(nèi)毒素，合格后，得復(fù)方腦蛋白水解物精制品。
3.復(fù)方腦蛋白水解物制備處方復(fù)方腦蛋白水解物300000ml納濾液75000ml補加純化水或注射用水225000ml注射用L-天門冬氨酸840g
4.如權(quán)利要求1或2制備的腦蛋白水解物，其特征在于，含有活性多肽10 12mg/mL 和唾液酸0. 1 0. 2mg/mL。
5.如權(quán)利要求2(5)(6)所述的腦蛋白水解物與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑制的 藥物組合物，可以制成藥學(xué)上可接受的任一劑型。
6.如權(quán)利要求2(5)(6)所述的腦蛋白水解物在制備治療和/或預(yù)防腦功能障礙的藥物 中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的制備腦蛋白水解物的方法，通過本發(fā)明的方法制備的腦蛋白水解物，含活性多肽10～12mg/ml和唾液酸0.1～0.2mg/ml。通過本發(fā)明方法制備的腦蛋白水解物有效成分含量高，安全可控。
文檔編號A61P25/00GK101991602SQ20091007269
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月18日
發(fā)明者張樹信, 王佰榮 申請人:張樹信;哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司