專利名稱：：一種脫除血管組織內(nèi)細(xì)胞的血管基質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種脫除血管組織內(nèi)細(xì)胞的血管基質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
：在心血管疾病的治療中，動脈旁路手術(shù)是血管重建的主要方法。而很多患者因為合并血管疾病或血管做過手術(shù)等原因，無法找到合適的自體血管。人工血管在小口徑血管疾病，如冠狀動脈和膝下血管的治療中，由于缺乏抗凝的內(nèi)皮層，或人工血管的順應(yīng)性與自然血管不匹配將引起的內(nèi)膜增生等原因，遠(yuǎn)期通暢率不理想。將動物血管經(jīng)脫細(xì)胞處理后，去除血管組織中引起排異反應(yīng)的細(xì)胞成分，僅保留動物種屬間保守性好的細(xì)胞外基質(zhì)成分，再將自體細(xì)胞種植到脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建的支架上，并在生物反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，可以構(gòu)建組織工程血管。文獻(xiàn)S.Kaushal,G.E.Amiel,K丄Guleserian,O.M.Shapira,T.Perry,RW.Sutherland,E.Rabkin,A.M.Moran,F.J.Schoen,A.Atala，S.Soker，J.Bischoff,andJ.E.Mayer,Jr.,Functionalsmall-diameterneovesselscreatedusingendothelialprogenitorcellsexpandedexvivo.NatMed7(2001)1035-40給出了這樣的方法，但該方法具有一個明顯的缺陷血管壁中的細(xì)胞成分無法脫除干凈，在實際操作中，按照該文獻(xiàn)的方法進(jìn)行脫細(xì)胞處理后，1^染色和4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(4'，6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)熒光染色都可以看到大量的細(xì)胞核,殘留在脫細(xì)胞血管基質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞碎片將會在宿主體內(nèi)引起炎性反應(yīng)或免疫排斥反應(yīng)，最終將導(dǎo)致移植失敗。此外，盡管該文獻(xiàn)提到血管在脫細(xì)胞處理前經(jīng)過胰酶處理，但并未公開具體的胰酶的處理方法。不僅未說明酶的濃度和處理時間，甚至在附注的脫細(xì)胞方法decellularizedgraftpreparation中都未出現(xiàn)胰酶處理這一環(huán)節(jié)。該文章最后附注的具體的脫細(xì)胞方法是-a)將新鮮獲取的豬髂血管在蒸餾水中放置lh以除去血液成分。b)將血管放入含P/。TritonX-100和0.1。/。氫氧化銨的PBS(500ml)中，放置于機(jī)械震蕩器中(120轉(zhuǎn)/分鐘)，于4。C條件下，進(jìn)行脫細(xì)胞處理72h，每24h更換一次脫細(xì)胞液。C)沖洗干凈后，血管進(jìn)行凍干及冷氣消毒。此方法有兩對矛盾-1、當(dāng)徹底脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分時，往往易破壞脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建的支架的強(qiáng)度，使血管不能耐受體內(nèi)的壓力條件；2、脫細(xì)胞處理后，基質(zhì)的孔隙率和孔徑如果小，不利于植入體內(nèi)后受體細(xì)胞的浸潤和生長；但孔隙率和孔徑大，也會降低基質(zhì)的力學(xué)強(qiáng)度。綜上，在保證能夠徹底脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分的同時，又盡可能小地破壞脫細(xì)胞基質(zhì)的力學(xué)強(qiáng)度，并且得到的較佳的脫細(xì)胞基質(zhì)的孔隙率和孔徑是本方法的兩大技術(shù)難點。因此，選擇合適的脫除血管內(nèi)細(xì)胞的條件，是解決以上問題的關(guān)鍵所在。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)方法的不足，并探索出文獻(xiàn)方法中未公開的技術(shù)方法，選擇合適的脫細(xì)胞條件，構(gòu)建一種較為理想可行的小口徑組織工程血管。即在保證能夠徹底脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分的同時，盡可能小地破壞脫細(xì)胞基質(zhì)的力學(xué)強(qiáng)度，并且得到較佳的脫細(xì)胞基質(zhì)的孔徑。本發(fā)明提供了一種能夠脫除血管組織內(nèi)的細(xì)胞成分，并最大程度保護(hù)脫細(xì)胞基質(zhì)的結(jié)構(gòu)完整性的脫細(xì)胞方法。本發(fā)明人經(jīng)反復(fù)摸索，獲得了合適的對動物血管進(jìn)行脫細(xì)胞條件，尤其是找出了文獻(xiàn)中未見的較為合適的胰酶濃度和胰酶處理時間和方法，獲得了滿意的結(jié)果。具體步驟如下歩驟l)脫細(xì)胞將動物血管放在蒸餾水中l(wèi)h，再將血管放入含有l(wèi)%TritonX-100和0.1%氨水的PBS中，4"C條件下振蕩處理72h，每日更換脫細(xì)胞溶液，得到脫細(xì)胞血管基質(zhì)；步驟2)去除去垢劑將步驟1)得到的脫細(xì)胞血管基質(zhì)在PBS中，4'C條件下再振蕩處理6080h，以除去所述基質(zhì)上殘留的去垢劑；步驟3)酶處理將步驟2)得到的脫細(xì)胞血管基質(zhì)放入含0.15%0.35%胰蛋白酶(V/V)和0.01%0.03%EDTA(V/V)的PBS中處理0.51.5h。所述動物血管優(yōu)選用豬髂動脈或豬頸動脈；所述酶處理中優(yōu)選濃度是0.2%0.3%(V/V)胰蛋白酶-0.02。/。EDTA(V/V)處理后的脫細(xì)胞血管可進(jìn)行消毒，如可采用y射線消毒，保存在4'C冰箱中。本發(fā)明采用了文獻(xiàn)中l(wèi)%TritonX-100和0.P/。氫氧化銨的脫細(xì)胞方法，針對該方法脫細(xì)胞不徹底的缺點，結(jié)合胰蛋白酶-EDTA，并對胰蛋白酶-EDTA的濃度和作用時間進(jìn)行摸索，得出較為理想的濃度和作用時間。因為l°/。TritonX-100和0.1%氫氧化銨對細(xì)胞有毒性，雖然經(jīng)過沖洗，但是很難將其完全清除，而且實驗證實細(xì)胞種植后細(xì)胞貼附到管壁的數(shù)量少，因此將胰蛋白酶-EDTA處理放在l%TritonX-100和0.1%氫氧化銨處理之后，結(jié)果細(xì)胞能夠大量種植到脫細(xì)胞基質(zhì)的管腔面上。經(jīng)以下多項實驗證實，本發(fā)明得到的脫細(xì)胞血管效果好，達(dá)到了發(fā)明的目的1、脫細(xì)胞基質(zhì)鑒定組織切片的HE和DAPI染色結(jié)果表明，經(jīng)本發(fā)明的脫細(xì)胞方法處理后，豬豬髂動脈或頸動脈的細(xì)胞成分被完全清除。透射電鏡結(jié)果也證實了細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)無細(xì)胞、細(xì)胞器以及磷脂細(xì)胞膜的殘留(見圖1D)。Masson三色法染色表明細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分膠原和彈性蛋白結(jié)構(gòu)保存完整(見圖1C)。掃描電鏡結(jié)果表明脫細(xì)胞腔面沒有內(nèi)皮細(xì)胞及其殘余成分(見圖1E)，橫切面的掃描電鏡可見脫細(xì)胞基質(zhì)為疏松多孔結(jié)構(gòu)脫除血管中的細(xì)胞成分(見圖1F)，HE和DAPI染色已經(jīng)透射電鏡證實了脫細(xì)胞的效果(見圖1A及圖1B)。2、孔隙率的檢測自然血管的孔隙率為72.51%，脫細(xì)胞基質(zhì)的孔隙率為94.93%;自然血管的平均孔徑為L2um，脫細(xì)胞處理后的平均孔徑為14.2ym。本實驗對比了未經(jīng)脫細(xì)胞處理的自然血管以及用0.25。/。胰蛋白酶-0.02。/。EDTA處理15min，lh，2h，3h和4h后的孔隙率(見表1)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)用0.25。/。胰蛋白酶-0.02y。EDTA處理lh的孔隙率最大，為94.93%，平均孔徑14.2ym，增加0.25n/。胰蛋白酶-0.02。/。EDTA消化時間孔隙率反而下降，可能與脫細(xì)胞基質(zhì)纖維結(jié)構(gòu)塌陷有關(guān)。3、力學(xué)檢測經(jīng)過脫細(xì)胞處理后的細(xì)胞外血管基質(zhì)的力學(xué)強(qiáng)度較新鮮犬髂動脈下降，其中脫細(xì)胞處理后的豬髂動脈的爆破強(qiáng)度為2975土680.53mmHg(n=6)，自然血管的爆破強(qiáng)度為1675±283.95mmHg(n=6)，t=3.054,-P=0.038。數(shù)據(jù)表明，經(jīng)脫細(xì)胞處理后，血管的爆破強(qiáng)度僅略有下降。4、細(xì)胞種植采用旋轉(zhuǎn)法將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞種植到脫細(xì)胞基質(zhì)的管腔面，以達(dá)到管腔面抗凝的目的。在相同的細(xì)胞種植密度和種植環(huán)境的條件下，比較不加用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA的文獻(xiàn)提供的脫細(xì)胞方法和加用0.25。/。胰蛋白酶-0.02。/。EDTA的本發(fā)明方法。從圖2種植細(xì)胞的血管移植物的形態(tài)學(xué)檢測圖中可看出，A是細(xì)胞旋轉(zhuǎn)種植3h后血管移植物的H&E染色結(jié)果，種植的細(xì)胞分布在管腔面，細(xì)胞沒有穿透過內(nèi)彈力層(X200)。B是血管移植物在旋轉(zhuǎn)種植MSCs后的腔面掃描電鏡，表明細(xì)胞隨機(jī)排列(X500)。文獻(xiàn)方法得到的脫細(xì)胞血管基質(zhì)種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞后，可看出種植到管腔面的細(xì)胞稀疏，且細(xì)胞呈近似球形，說明細(xì)胞活性差，見圖3。用本發(fā)明提供的脫細(xì)胞方法得到的血管基質(zhì)種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞后，可看出基質(zhì)表面基本被種植的細(xì)胞覆蓋，并且細(xì)胞伸展，表明細(xì)胞的活力強(qiáng)，見圖4。綜上各實驗結(jié)果表明，采用本發(fā)明的脫細(xì)胞方法制備的脫細(xì)胞基質(zhì)能夠脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分，雖然力學(xué)強(qiáng)度略有下降，但其力學(xué)強(qiáng)度能夠耐受體內(nèi)血流壓力的沖擊，仍能滿足使用要求，并且脫細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞毒性低，實驗證實在消化lh時獲得的脫細(xì)胞基質(zhì)的孔隙率最大，適合于自體種子細(xì)胞的種植和長入，能夠為血管組織工程提供一種理想的血管支架。圖1是脫細(xì)胞血管基質(zhì)的形態(tài)學(xué)檢測圖譜；圖中A是服E染色表明細(xì)胞成分脫除(X200)。B，DAPI染色表明脫細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)不含有細(xì)胞核(X200)。C，Masson染色表明脫細(xì)胞基質(zhì)的彈性蛋白和膠原結(jié)構(gòu)保存完整(X200)。D，透射電鏡表明脫細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)沒有細(xì)胞成分(X4000)。E，脫細(xì)胞基質(zhì)腔面的掃描電鏡(X500)。F，脫細(xì)胞基質(zhì)的橫切面的掃描電鏡(X350);圖2是種植細(xì)胞的血管移植物的形態(tài)學(xué)檢測圖中A是細(xì)胞旋轉(zhuǎn)種植3h后血管移植物的H&E染色結(jié)果，B是血管移植物在旋轉(zhuǎn)種植MSCs后的腔面掃描電鏡；圖3是文獻(xiàn)提供的脫細(xì)胞方法得到的血管基質(zhì)種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞后的管腔面；圖4是用本發(fā)明提供的脫細(xì)胞方法得到的血管基質(zhì)種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞后的管腔面。具體實施例方式6制備1、實驗材料-1)血管取自臨近的屠宰場取新鮮屠宰的豬的髂動脈，直徑約4-5mm，長度約5cm。2)試劑l%TritonX-100(Sigma);0.1%氫氧化銨(Sigma);PBS(GIBCO);0.25%胰蛋白酶-0.02。/oEDTA(Sigma);10%胎牛血清(FBS,GIBCO);低糖-DMEM培養(yǎng)基(LG-DMEM，GIBCO);3)儀器TS-100脫色搖床(北京賓達(dá)英創(chuàng)科技有限公司)；DK-8D型恒溫水槽(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；LP-400分光光度計(法國)；S-4800掃描電鏡(HITACHI,日本)；AutoPoreIV9510壓滎儀(MicromeriticsInstrumentsInc.USA)ShimadzuAG-5000A(日本)；2、實驗方法血管取自臨近的屠宰場取新鮮屠宰的豬的髂動脈，直徑約4-5mm，長度約5cm，用無菌PBS(GIBCO)沖洗去除血液后，放入4'C冰盒中，迅速送回實驗室進(jìn)行處理。1)脫細(xì)胞方法a)用蒸餾水浸泡lh，以裂解管腔內(nèi)的血細(xì)胞，剝除外膜的疏松結(jié)締組織，結(jié)扎動脈分支。b)將血管放入含l%TritonX-100(Sigma)和0.1%氫氧化銨(Sigma)的PBS中，放置于脫色搖床上G0轉(zhuǎn)/分鐘)，于4'C條件下，進(jìn)行脫細(xì)胞處理72h，每24h更換一次脫細(xì)胞液。將血管放入PBS中振蕩沖洗72h，每24h更換一次PBS。c)將血管放入到含0.25%胰蛋白酶-0.02。/。EDTA的PBS中，37。C水浴箱中處理lh。d)將血管放入PBS中振蕩沖洗lh。e)脫細(xì)胞血管放入裝有PBS的離心管中用Y射線消毒，消毒后的脫細(xì)胞血管保存在4'C冰箱中。實施例2脫細(xì)胞血管基質(zhì)的檢測1、組織學(xué)方法4%甲醛溶液固定，HE染色觀察脫細(xì)胞基質(zhì)的大體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞成分變化；Masson染色觀察膠原纖維和彈性纖維結(jié)構(gòu)變化；DAPI熒光染色觀察細(xì)胞核；7結(jié)果見圖1A-1C。2、電鏡觀察方法透射電鏡觀察脫細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞成分和基質(zhì)成分；掃描電鏡觀察管壁表面組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果見圖1D1F。組織切片的HE(圖1A)和DAPI(圖IB)染色結(jié)果表明，經(jīng)l%TritonX-100，0.1%氨水和0.25Q/。胰蛋白酶-0.02y。EDTA順序處理后，豬髂血管的細(xì)胞成分被完全清除。透射電鏡結(jié)果也證實了細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)無細(xì)胞、細(xì)胞器以及磷脂細(xì)胞膜的殘斷圖1D)。Masson三色法染色表明細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分膠原和彈性蛋白結(jié)構(gòu)保存完整(圖1C)。掃描電鏡結(jié)果表明脫細(xì)胞腔面沒有內(nèi)皮細(xì)胞及其殘余成分(圖1E)，橫切面的掃描電鏡可見脫細(xì)胞基質(zhì)為疏松多孔結(jié)構(gòu)(圖1F)。3、孔隙率檢測方法新鮮豬髂動脈及脫細(xì)胞血管基質(zhì)標(biāo)本(用l%TritonX-100和0.P/。氫氧化銨的PBS脫細(xì)胞處理72h后，再分別用0.25Q/Q胰蛋白酶-0.02。/。EDTA處理15min，lh，2h，3h和4h后脫細(xì)胞基質(zhì))經(jīng)低壓凍干后進(jìn)行孔隙率檢測?？紫堵蕼y定采用AutoporeIV9510壓汞儀，壓力范圍0.5Psia-6000Psia，低壓測量孔徑范圍360-3.6um，高壓測量最小孔徑可達(dá)0.003um。結(jié)果自然血管和用1。/。TritonX-100和0."/。氫氧化銨的PBS脫細(xì)胞處理72h后，再分別用0.25Q/。胰蛋白酶-0.02。/。EDTA處理15min，lh，2h，3h和4h后脫細(xì)胞基質(zhì)的孔隙率分別為72.51%，80.06%，94.93%，81.40%，77.13%和80.98%。其中自然血管的平均孔徑為1.2ym，而用1。/。TritonX-100和0.1。/。氫氧化銨的PBS脫細(xì)胞處理72h后，再用0.25%胰蛋白酶-0.02Q/oEDTA處理lh后的脫細(xì)胞基質(zhì)的平均孔徑為14.2wm。孔隙率檢測數(shù)據(jù)見下表表l孔隙率檢測結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>4、生物力學(xué)測定方法測定爆破強(qiáng)度將組織標(biāo)本連于爆破壓測量表，游離端封閉，裝置內(nèi)充盈PBS液，室溫下，調(diào)節(jié)加壓螺栓以約5mmHg/s的速度壓縮腔內(nèi)液體，以壓力表記錄管道系統(tǒng)內(nèi)增加的壓力。在本組以天然豬動脈為陽性對照組。爆破壓被定義為管型材料破裂前所達(dá)到的最高壓力，表示材料對壓力變化的耐受能力。結(jié)果經(jīng)過脫細(xì)胞處理后的細(xì)胞外血管基質(zhì)的爆破強(qiáng)度較新鮮犬髂動脈下降，其中脫細(xì)胞處理后的豬髂動脈的爆破強(qiáng)度為2975土680.53mmHg(n=6)，自然血管的爆破強(qiáng)度為1675±283.95mmHg(n=6)，t=3.054，-P=0.038。5、細(xì)胞毒性試驗實驗材料與方法方法參照《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)》GB/T14233.2-2005第8部分-細(xì)胞毒性試驗。1)脫細(xì)胞基質(zhì)浸提液的制備將脫細(xì)胞基質(zhì)按lcn^試樣表面積加10ml浸提介質(zhì)比例在37。C恒溫箱中浸提24h。浸提介質(zhì)是含10°/。(v/v)胎牛血清的面EM培養(yǎng)液。配制成50%和100。/。濃度的脫細(xì)胞基質(zhì)浸提液，備用。2)實驗細(xì)胞細(xì)胞為L929細(xì)胞，培養(yǎng)液為含10%胎牛血清的函EM。3d后細(xì)胞計數(shù)約4X104/L，備用。3)浸提液實驗(MTT法)常規(guī)收集L929細(xì)胞，消化計數(shù)后分成3組，每組重復(fù)8孔，接種于96孔板內(nèi)，每孔接種103細(xì)胞。先用含10%胎牛血清的匿EM培養(yǎng)24h，細(xì)胞貼壁后，棄去培養(yǎng)液，分別加入0(空白對照)、50%和100%PCLA浸提液。培養(yǎng)3天，采用MTT法測定各組570nm波長的吸光度(A)值在酶標(biāo)儀上以570咖波長測定吸收值[D(A)值]，取平均值。通過下面的公式計算相對增殖率(RGR)，RGR=(實驗組吸光度值/空白對照組吸光度值)X100%。結(jié)果細(xì)胞貼壁后換用50%和100%脫細(xì)胞基質(zhì)浸提液培養(yǎng)三天的OD570分別為0.374±0.030和0.331±0.021，相對應(yīng)的RGR為107%和95%，對應(yīng)的細(xì)胞毒性為0級和1級。(見表2)9表2細(xì)胞毒性試驗結(jié)果分組OD570RGR空白對照0.350±0.022100%50%浸提液0.374±0.030107%100%浸提液0.331±0.02195%6、細(xì)胞種植實驗方法1)實驗細(xì)胞細(xì)胞為從犬骨髓中分離培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)液為10%胎牛血清(FBS,GIBCOTM)、100U/ml青鏈霉素、100Ug/ml鏈霉素的低糖DMEM培養(yǎng)基(LG-DMEM)，取2代的間充質(zhì)干細(xì)胞用于細(xì)胞種植。2)種植方法消化細(xì)胞并用培養(yǎng)液重懸至3±0.5X106/mL，用注射器吸取1.5mL細(xì)胞懸液從培養(yǎng)室一端的三通注入到脫細(xì)胞基質(zhì)管腔內(nèi)。連接到低速旋轉(zhuǎn)器上，轉(zhuǎn)速為5-6轉(zhuǎn)/小時，旋轉(zhuǎn)3h。3)細(xì)胞種植的檢測將種植細(xì)胞后的脫細(xì)胞基質(zhì)用分別用10%甲醛或2.5%戊二醛固定，用于常規(guī)組織切片HE染色和掃描電鏡檢查。結(jié)果血管脫細(xì)胞基質(zhì)在旋轉(zhuǎn)種植后的組織切片可見細(xì)胞貼附在基質(zhì)的管腔面生長，沒有細(xì)胞浸潤穿過內(nèi)彈力層(圖2A)。旋轉(zhuǎn)種植3h后的掃描電鏡結(jié)果可見基質(zhì)的管腔面基本為種植的MSCs覆蓋，部分細(xì)胞尚未伸展呈圓形，大部分的細(xì)胞尤其是與基質(zhì)貼附的細(xì)胞已經(jīng)伸展(圖2B)。權(quán)利要求1、一種脫除血管內(nèi)細(xì)胞的血管基質(zhì)的制備方法，其特征在于步驟如下步驟1)脫細(xì)胞將動物血管放在蒸餾水中1h，再將血管放入含有1％TritonX-100和0.1％氨水的PBS中，4℃條件下振蕩處理72h，每日更換脫細(xì)胞溶液，得到脫細(xì)胞血管基質(zhì)；步驟2)去除去垢劑將步驟1)得到的脫細(xì)胞血管基質(zhì)在PBS中，4℃條件下再振蕩處理60～80h，以除去所述基質(zhì)上殘留的去垢劑；步驟3)酶處理將步驟2)得到的脫細(xì)胞血管基質(zhì)放入含0.15％～0.35％胰蛋白酶(V/V)和0.01％～0.03％EDTA(V/V)的PBS中處理0.5～1.5h。2、權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述動物血管是豬髂動脈或豬頸動脈。3、權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述胰蛋白酶濃度是0.2%0.3%(V/V)，EDTA濃度是0.020/。(V/V)。4、權(quán)利要求1或2所述的制備方法，酶處理后的脫細(xì)胞血管基質(zhì)用y射線消毒進(jìn)行消毒后，保存在4'C冰箱中。5、一種脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分的血管基質(zhì)，其特征是用權(quán)利要求l所述方法制備的。6、權(quán)利要求5所述的脫除血管內(nèi)的細(xì)胞成分的血管基質(zhì)，其特征在于是用豬髂動脈或豬頸動脈制備的。全文摘要本發(fā)明涉及一種脫除血管組織內(nèi)細(xì)胞成分的血管基質(zhì)及其制備方法。本發(fā)明提供了一種方法，能夠脫除血管組織內(nèi)的細(xì)胞成分，并最大程度保護(hù)脫細(xì)胞基質(zhì)的結(jié)構(gòu)完整性。其步驟包括脫細(xì)胞、去除去垢劑和進(jìn)行酶處理。本發(fā)明制備的血管脫細(xì)胞基質(zhì)具有較好的力學(xué)強(qiáng)度和合適的孔隙率，細(xì)胞毒性低，并且能夠成功種植細(xì)胞于脫細(xì)胞基質(zhì)上，從而可為血管組織工程提供一個良好的組織支架。文檔編號A61L27/36GK101474426SQ20091007667公開日2009年7月8日申請日期2009年1月14日優(yōu)先權(quán)日2009年1月14日發(fā)明者吳英鋒,建張,李建新,李春民,董建德,谷涌銓,兵陳申請人:首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院