專(zhuān)利名稱：：一種補(bǔ)骨脂素有效成分及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種補(bǔ)骨脂素中藥有效成分。
背景技術(shù)：
：2007年10月1日實(shí)施的《藥品注冊(cè)管理辦法》對(duì)創(chuàng)新性藥物的研發(fā)給予較大的鼓勵(lì)，國(guó)內(nèi)創(chuàng)新藥物申報(bào)數(shù)量也呈現(xiàn)明顯上升的趨勢(shì)。但與發(fā)達(dá)國(guó)家新藥雜質(zhì)研究相比，我國(guó)的研究水平仍有一定差距。雜質(zhì)研究的主要差距體現(xiàn)在對(duì)雜質(zhì)研究的系統(tǒng)性和規(guī)范性。這也就直接限制了我國(guó)藥品研究水平和藥品質(zhì)量的提高。針對(duì)雜質(zhì)明確研究目的、研究思路以及相關(guān)技術(shù)的研究是很多醫(yī)藥工作者急需解決的難題。中藥補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂(PsoraleacorylifoliaL)果實(shí)，性溫，味辛，具補(bǔ)腎助陽(yáng)之功效。主治腎虛冷瀉，小便頻數(shù)，陽(yáng)萎，腰膝冷痛，虛寒喘咳，外用治白癜風(fēng)。現(xiàn)代研究表明，補(bǔ)骨脂具有擴(kuò)張血管，增加心肌收縮力，抗菌，雌性激素樣作用，治療白癜風(fēng)等生理活性。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)補(bǔ)骨脂的化學(xué)成分進(jìn)行了多方面的研究，取得一些新成果。但到目前為止還沒(méi)有任何以補(bǔ)骨脂為原料提取的有效成分制備的新藥，特別是對(duì)有效成分雜質(zhì)的研究。
發(fā)明內(nèi)容本院的科研人員通過(guò)創(chuàng)造性的勞動(dòng)得到了補(bǔ)骨脂素有效成分，針對(duì)該有效成分進(jìn)行的長(zhǎng)期的研究，發(fā)現(xiàn)并分離出其雜質(zhì)為補(bǔ)骨脂乙素和補(bǔ)骨脂酚，通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)骨脂素具有治療男性勃起障礙的作用，再通過(guò)系統(tǒng)的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素和補(bǔ)骨脂素具有協(xié)同藥理作用，補(bǔ)骨脂酚與補(bǔ)骨脂素是拮抗藥理作用，通過(guò)上述研究，我們針對(duì)雜質(zhì)補(bǔ)骨脂酚進(jìn)行含量限定，同時(shí)對(duì)起到協(xié)同作用的補(bǔ)骨脂乙素，從安全性方面考慮，也進(jìn)行含量研究。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一種補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂素含量為90%_97%，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為3%_8%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于1%。其中補(bǔ)骨脂素含量為95%-97%,雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%-4.5%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.5%。其中補(bǔ)骨脂素含量96%-97%,雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%-4%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.1%。補(bǔ)骨脂素的制備方法為取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用30%-70%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。其中所述大孔吸附樹(shù)脂為D101、AB-8、NKA中的一種。3其中所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇中的一種。所述的補(bǔ)骨脂素在制備治療陰莖勃起障礙藥物中的應(yīng)用。含量分析照高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水=5545為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm，理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、補(bǔ)骨脂乙素對(duì)照品、補(bǔ)骨脂酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml各含20μg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明有效成分，精密稱定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5-10μ1，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1表1補(bǔ)骨脂素有效成分含量測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論分析實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明有效成分的含量為補(bǔ)骨脂素含量為90%-97%,含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為3%_8%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于；或補(bǔ)骨脂素含量為95%-97%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%-4.5%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.5%；或補(bǔ)骨脂素含量96%-97%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%_4%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.1%。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)(一)雄性激素樣作用的研究1、對(duì)切除睪丸大鼠的作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大白鼠包選用30d雄性WiStar大白鼠實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，在無(wú)菌條件下，切除其雙側(cè)睪丸，術(shù)后14d隨機(jī)分為不同實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)分組如下)，灌胃給藥，給藥組給藥量相同，對(duì)照組給予等溶的生理鹽水，連用30d，末次給藥24h后處死，取包皮腺、前列腺及精囊腺稱濕重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)分組組別1補(bǔ)骨脂素；組別2補(bǔ)骨脂素+補(bǔ)骨脂乙素；組別3補(bǔ)骨脂素+補(bǔ)骨脂酚；表2對(duì)切除睪丸大鼠附性器官影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注與對(duì)照組比較<0.01；*P<0.052、對(duì)正常大鼠的作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大白鼠包選用30d雄性WiStar大白鼠實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，隨機(jī)分為組，灌胃給藥，給藥組給藥量相同，對(duì)照組給予等溶的生理鹽水，連用30d，末次給藥24h后處死，取包皮腺、前列腺及精囊腺稱濕重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3o<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論藥效學(xué)初步實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明有效成分中補(bǔ)骨脂酚對(duì)補(bǔ)骨脂素具有拮抗作用，補(bǔ)骨脂乙素對(duì)補(bǔ)骨脂素具有協(xié)同藥理作用。(二)對(duì)生殖系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)1、雄性動(dòng)物睪丸重，睪丸/體重比值，雌性動(dòng)物子宮重、卵巢重、及卵巢/體重比值，子宮/體重比值；2、雄性動(dòng)物辜丸間質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)及曲精管直徑測(cè)量；3、睪丸精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)活躍程度的變化；4、雌性大鼠卵巢、子宮病理組織學(xué)檢查；5、性腺超微形態(tài)觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞、曲細(xì)精管、卵巢；6、大鼠血清性激素水平測(cè)定。結(jié)果表明本發(fā)明藥物具有顯著促進(jìn)性腺內(nèi)分泌功能的作用，尤其對(duì)雄性動(dòng)物效果更加明顯。表現(xiàn)為睪丸重量增加顯著，睪丸間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多及曲細(xì)精管直徑增大。血清性激素檢測(cè)結(jié)果與組織形態(tài)學(xué)所見(jiàn)相符合。(三)對(duì)生殖藥效學(xué)研究1、對(duì)陰莖刺激試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明一定劑量本發(fā)明藥物能提高去勢(shì)大鼠陰莖對(duì)外部刺激的興奮性，在局部微量電刺激作用下，動(dòng)物陰莖勃起潛伏期明顯縮短(P<0.01和0.05)。2、交配試驗(yàn)試驗(yàn)給予不同劑量本發(fā)明藥物14天后，雄性交配能力明顯增強(qiáng)。表現(xiàn)為合籠后撲捉雌鼠潛伏期及射精潛伏期明顯縮短，20分鐘內(nèi)完成的撲捉及射精次數(shù)明顯增加，特別大劑量組達(dá)到100%。3、對(duì)腎虛動(dòng)物的藥效試驗(yàn)應(yīng)用本發(fā)明藥物的腎虛動(dòng)物(去勢(shì)大鼠)各生殖器官重量與臟器指數(shù)均高于去勢(shì)模型組，其中大劑量組更為明顯(p<0.01)，說(shuō)明本發(fā)明藥物具有很好的作用。4、對(duì)幼年雄鼠睪丸發(fā)育的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明應(yīng)用不同劑量本發(fā)明，睪丸重量與臟器指數(shù)均高于正常對(duì)照組，且具有顯著差異(P<0.01或0.05)，從而證明本發(fā)明具有促進(jìn)幼年大鼠皋丸發(fā)育的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)論本發(fā)明有效成分補(bǔ)骨脂素含量為90%_97%，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為3%-8%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于1%；或補(bǔ)骨脂素含量為95%-97%,雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%-4.5%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.5%；或補(bǔ)骨脂素含量96%-97%,雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%_4%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.具有很好的藥理作用。臨床實(shí)驗(yàn)在包括19例陽(yáng)痿個(gè)體的安慰劑對(duì)照的臨床試驗(yàn)中，測(cè)試組給予本發(fā)明藥物。安慰劑給予不含有本發(fā)明藥物。15例男性中有14例觀察到勃起完全，而安慰劑治療的4例男性中未有1例體驗(yàn)到勃起。毒理實(shí)驗(yàn)本發(fā)明有效成分對(duì)小鼠毒理實(shí)驗(yàn)，LD50為1235mg/kg；對(duì)大鼠進(jìn)行長(zhǎng)期毒理實(shí)驗(yàn)，給藥劑量是臨床給藥劑量50倍、75倍、100倍，未發(fā)現(xiàn)大鼠異常反應(yīng)，解剖后，未發(fā)現(xiàn)大鼠臟器異常反應(yīng)。制備實(shí)施例實(shí)施例1一種補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂素含量為90.01%，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量%7.92%,雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量0.99%。實(shí)施例2一種補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂素含量為96.92%，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為2.80%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量0.24%。實(shí)施例3一種補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂素含量為94.37%，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為4.29%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量0.51%。實(shí)施例4一種補(bǔ)骨脂素，其中補(bǔ)骨脂素含量為94.99%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為4.46%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量0.48%。實(shí)施例5根據(jù)權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素，其中補(bǔ)骨脂素含量為95.58%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為4.01%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量0.37%。實(shí)施例6一種補(bǔ)骨脂素，其中補(bǔ)骨脂素含量96.03%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3.98%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.07%。實(shí)施例7取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上大DlOl孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用30%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑甲醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例8取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用70%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑乙醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例8取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上NKA大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用40%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑丙醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例9取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上DlOl大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用70%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑正丁醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例10取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用35%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑丙醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例11取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上NKA大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用30%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑正丁醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例12取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上DlOl大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用45%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑丙醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。實(shí)施例13取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用65%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑甲醇提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。上述實(shí)施例中補(bǔ)骨脂素在制備治療陰莖勃起障礙藥物中的應(yīng)用。權(quán)利要求一種補(bǔ)骨脂素，其特征在于補(bǔ)骨脂素含量為90％-97％，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為3％-8％，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于1％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素，其中補(bǔ)骨脂素含量為95%-97%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%-4.5%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.5%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素，其中補(bǔ)骨脂素含量96%-97%，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3%_4%，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.1%。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的補(bǔ)骨脂素，其特征在于制備方法為取補(bǔ)骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，濃縮，加水溶解完全，靜置，過(guò)濾，濾液濃縮，上大孔吸附樹(shù)脂，水洗，水洗液去除，用30%-70%乙醇洗脫，保留洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，干燥物用有機(jī)溶劑提取，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脫，濃縮，干燥，得到補(bǔ)骨脂素。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的補(bǔ)骨脂素，其中所述大孔吸附樹(shù)脂為D101、AB-8、NKA中的一種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種補(bǔ)骨脂素，其中所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇中的一種。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的補(bǔ)骨脂素在制備治療陰莖勃起障礙藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種天然藥物有效成分及其制備方法，其特征在于補(bǔ)骨脂素含量為90％-97％，含有兩個(gè)雜質(zhì)，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素的含量為3％-8％，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于1％。優(yōu)選為補(bǔ)骨脂素含量為95％-97％，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3％-4.5％，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.5％。優(yōu)選為補(bǔ)骨脂素含量96％-97％，雜質(zhì)補(bǔ)骨脂乙素含量為3％-4％，雜質(zhì)補(bǔ)骨酚含量低于0.1％。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明有效成分具有很好的治療男性勃起障礙的作用。文檔編號(hào)A61P15/10GK101824040SQ20091007950公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2009年3月6日優(yōu)先權(quán)日2009年3月6日發(fā)明者周亞君,安曉雪,王愛(ài)民申請(qǐng)人:北京卓越同創(chuàng)藥物研究院