專(zhuān)利名稱(chēng)：纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域的新用途。
背景技術(shù)：
纖維蛋白原存在于血液當(dāng)中，是凝血過(guò)程中的一種重要蛋白，又稱(chēng)為凝血因子I，其分子量大約340，000道爾頓，由兩個(gè)亞基通過(guò)二硫鍵連接形成二聚體，每個(gè)亞基由3條多 肽鏈相互纏繞組成，分別叫做A，B，C鏈。在凝血過(guò)程中，纖維蛋白原被凝血酶酶切，生成纖 維蛋白進(jìn)而形成不溶的纖維蛋白多聚體，由纖維蛋白多聚體形成的血纖維和血小板一起構(gòu) 成牢固的止血栓。纖維蛋白原在血液中的含量約為1. 5-4毫克/毫升，同時(shí)纖維蛋白原也 是一種應(yīng)激蛋白，其含量與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)，且可以反映心腦血管疾病的危險(xiǎn)程度。纖維蛋白原-420是纖維蛋白原的一種亞型，其A鏈C末端比普通的纖維蛋白原的 A鏈延伸出一個(gè)球狀結(jié)構(gòu)域，該球狀結(jié)構(gòu)域與B，C鏈末端的球狀結(jié)構(gòu)域具有很高的同源性， 稱(chēng)作alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白。纖維蛋白原_420的分子量約為420，000道爾頓，有別于一般 組織纖維蛋白原的分子量340，000道爾頓。蛋白構(gòu)象病(protein misfolding disease)是由于組織中特定的蛋白質(zhì)發(fā)生了 構(gòu)象變化，進(jìn)而聚集并產(chǎn)生淀粉樣沉淀(amyloidosis)，最終出現(xiàn)組織器官的病理性改變的 一類(lèi)疾病，如阿爾茨海默癥，瘋牛病等都屬于這一類(lèi)病癥。對(duì)于這類(lèi)病癥目前還沒(méi)有很好的 防治方法。已有的方法如單克隆抗體技術(shù)，化學(xué)小分子，合成多肽等，存在免疫排斥，缺乏廣 譜性，副作用大，體內(nèi)半衰期短等缺點(diǎn)。細(xì)胞內(nèi)存在大量的熱休克蛋白(heat shock protein)或分子伴侶(chaperone)， 在機(jī)體遭受刺激時(shí)大量表達(dá)，保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的蛋白免受高溫、自由基、有機(jī)溶劑(如乙醇)等 的傷害。但是在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)不存在熱休克蛋白，機(jī)體保護(hù)細(xì)胞外的蛋白分子的機(jī)制目前還 不清楚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域的新用途。本發(fā)明人的研究表明，纖維蛋白原-420是人體自身的蛋白分子，在體內(nèi)不會(huì)被很 快降解，也不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)；具有分子伴侶活性和廣譜的非特異性的保護(hù)作用，能促 進(jìn)變性蛋白正確折疊，穩(wěn)定蛋白構(gòu)象和功能，可以在蛋白復(fù)性、質(zhì)量控制中變性蛋白檢測(cè)和 抗蛋白變性等方面廣泛應(yīng)用。所述的蛋白可以為重組蛋白或天然蛋白。纖維蛋白原-420分子包含alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，并且單獨(dú)alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白 也具有與纖維蛋白原-420相同的或類(lèi)似的功能；其中，alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白的氨基酸序列 如序列表中序列1所示；纖維蛋白原-420具體可為人的纖維蛋白原-420。纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白可以通過(guò)配制成蛋白試劑來(lái)使用。所 述蛋白試劑至少包括纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，也不排除其他的溶劑和添 加劑。所作用的其他蛋白和纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白的比例在25 1到1 100的之間，當(dāng)然包括1 1這樣的比值，都可以達(dá)到比較好的效果。不同的最佳比值 取決于應(yīng)用的具體情況。本發(fā)明的研究表明纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白能抑制變性的蛋白聚 集保護(hù)蛋白活性，可用于制備治療蛋白構(gòu)象病病的藥物。其中，所述治療蛋白變性疾病的藥物，是以纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋 白為活性成分的藥物。所述治療蛋白變性疾病的藥物可用于治療多種原因引起的蛋白變性 疾病，如發(fā)燒引起的熱變性，由煙、酒、氧自由基等有害物質(zhì)造成的蛋白變性。其中，所述治療蛋白構(gòu)象病的藥物，是以纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白 為活性成分的藥物。本發(fā)明的纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白能捕捉蛋白的解折疊過(guò)程，通 過(guò)幫助蛋白正確的折疊或者使其保持在一個(gè)折疊的狀態(tài)，從而保持功能或者防止蛋白聚 集，繼而穩(wěn)定蛋白的活性和功能。因此，纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白可增強(qiáng)蛋 白抗變性能力，在體外可作為蛋白穩(wěn)定劑使用。其中，所述蛋白穩(wěn)定劑，是以纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白為活性成分 的蛋白穩(wěn)定劑；所述蛋白穩(wěn)定劑可抑制那些容易聚集沉淀的蛋白的聚集；所述蛋白穩(wěn)定劑 還可以保護(hù)酶的活性，如穩(wěn)定檸檬酸合成酶、熒光素酶，胰島素等的酶活性。
在生物診斷試劑盒中，尤其是ELISA免疫診斷試劑盒中交聯(lián)了報(bào)告酶的抗體(如 辣根過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酶或者熒光素酶)穩(wěn)定性下降，加入纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白可以提高產(chǎn)品保質(zhì)期和蛋白質(zhì)試劑的穩(wěn)定性，達(dá)到提高產(chǎn)品質(zhì)量的目的。纖維蛋白原-420或alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白還可以用于識(shí)別正在解折疊和變性的蛋 白，因此還可在蛋白質(zhì)產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)中應(yīng)用。


圖1為纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶熱變性聚集。圖2為alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶化學(xué)變性聚集。圖3為纖維蛋白原-420抑制檸檬酸合成酶熱變性失活。圖4為alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶熱變性失活。圖5為alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白特異性識(shí)別變性檸檬酸合成酶蛋白。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶變性聚集a、纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白的制備纖維蛋白原-420是先從血液或臍帶血中純化出混合的纖維蛋白原，然后再進(jìn)一 步純化出纖維蛋白原-420。方法如下(1)混合纖維蛋白原的純化首先取新鮮的血液或臍帶血，加入蛋白酶抑制劑，在 4°C低溫離心2000rpm，吸出上清，得到淡黃色的血漿。向血漿中加入甘氨酸干粉使其終濃度 達(dá)到2. 1M，同時(shí)攪拌使甘氨酸完全溶解，得到絮狀白色沉淀。5000rpm離心15min得到的沉 淀用原來(lái)血漿體積的1/3的緩沖液(0. 15M氯化鈉，0.01M磷酸鈉，pH 6.4溶解)，重復(fù)該步 驟，直到溶解后體積為原來(lái)血漿體積的1/10。加入等體積的純水稀釋。然后將稀釋后的溶液在2-5°C靜置6小時(shí)，離心去除沉淀，上清液加入等體積0. 3M的氯化鈉溶液，再加入95%乙醇使乙醇終濃度達(dá)到8% (體積比)，同時(shí)溫度降低到_3°C，沉淀充分后5000rpm離心得 到的沉淀作為下一步純化纖維蛋白原-420的原料。(2)纖維蛋白原-420的純化(1)得到的纖維蛋白原沉淀溶于0. 3M氯化鈉溶液 然后透析到0. 005mol/L Tris-磷酸緩沖液，pH 8. 6 (摩爾濃度按照磷酸根計(jì)算)。層析柱 選用Mono Q HR 10/10陰離子交換柱(Pharmacia)。上樣后洗脫采用分步pH洗脫，首先從 0. 005mol/L Tris-磷酸緩沖液迅速過(guò)渡到0. 2mol/L Tris-磷酸緩沖液，pH 6.0，然后維持 0. 2mol/L Tris-磷酸緩沖液，pH 6. 0洗脫12倍柱體積，最后采用線性梯度洗脫12倍柱體積 過(guò)渡到0.5mol/L Tris-磷酸緩沖液，pH4. 2。在最后一步線性洗脫時(shí)得到纖維蛋白原-420 蛋白。蛋白透析到125mmol/L氯化鈉，25mmol/L HEPES緩沖液(pH 7.4)中進(jìn)行保存。alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白按照如下方法獲得alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白復(fù)性與純化以人肝臟cDNA文庫(kù)為模板設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò) 增。引物序列為5-GGAATTCCATATGGACTGTGATGATGTCCTCC-35-ACCGCTCGAGCTATTGGGTCACAAGGGGCC-3在引物中引入了限制性?xún)?nèi)切酶NdeI和XhoI的酶切位點(diǎn)。PCR擴(kuò)增的退火溫度 55°C。PCR擴(kuò)增出的α EC片段經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶NdeI和XhoI酶切后，連接到同樣雙酶切的 pET_30a表達(dá)載體(Novagen公司)中，構(gòu)建的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 BL21/DE3(北京鼎國(guó)生物技術(shù)公司)中，獲得重組菌。挑取重組菌單克隆接種到10毫升LB 培養(yǎng)基(卡那霉素100 μ g/ml)，培養(yǎng)過(guò)夜。然后轉(zhuǎn)接到1升的LB培養(yǎng)基(卡那霉素100 μ g/ ml)中，待菌液濁度0D_值達(dá)到0. 8左右的時(shí)候，加入0. 5mM IPTG誘導(dǎo)4小時(shí)后離心收集 菌體。破碎菌體后，收集包涵體蛋白。溶解并還原包涵體蛋白后，用陰離子交換柱純化。上 樣緩沖液8M尿素、20mMTris-HCl和pH 8. 0,30mM BME ；洗脫緩沖液為上樣緩沖液中添加IM 氯化鈉。采用線性梯度洗脫，分步收集洗脫峰。電泳檢測(cè)蛋白純度。選取純度大于80%的 組分進(jìn)行復(fù)性實(shí)驗(yàn)。復(fù)性時(shí)，蛋白濃度用含8M尿素的20mM Tris-HCl緩沖液(pH 8.0)調(diào)整 到小于0. 2mg/ml，然后透析到20mM Tris-HCl, 150mM氯化鈉，ImM氯化鈣，pH 8. 0中。間隔 至少4小時(shí)換一次透析液，至少換兩次復(fù)性液，充分透析過(guò)夜。最后透析到20mM Tris-HCl 的上樣緩沖液中準(zhǔn)備純化復(fù)性蛋白。采用陰離子交換柱進(jìn)行純化。上柱前離心或用0.22 微米孔徑的濾膜過(guò)濾。采用鹽離子線性梯度洗脫，分步收集蛋白峰。用氧化電泳檢測(cè)純度。b、纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶熱變性聚集檸檬酸合成酶是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)關(guān)鍵酶，但該蛋白熱穩(wěn)定性很差，體外在 43°C就會(huì)很快變性聚集，進(jìn)而形成沉淀。檸檬酸合成酶聚集過(guò)程可以用光散射的變化反映 出來(lái)，實(shí)驗(yàn)方法如下用熒光儀FL4500(日立公司)檢測(cè)光散射過(guò)程，調(diào)節(jié)儀器激發(fā)光為500nm，發(fā)射 光為500nm，狹縫寬度為2. 5nm ；將檸檬酸合成酶溶解在40mM HEPES緩沖液中，使其終濃度 為0. 15 μ M，實(shí)驗(yàn)組1中同時(shí)加入0. 15 μ M纖維蛋白原-420，實(shí)驗(yàn)組2中同時(shí)加入0. 15 μ M alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，對(duì)照組1同時(shí)加入相同體積的HEPES溶液，對(duì)照組2同時(shí)加入相同 體積的1. 2 μ M的牛血清白蛋白，將實(shí)驗(yàn)樣品放入43°C水浴中，檢測(cè)光散射信號(hào)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。
光散射信號(hào)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，表明加熱200秒內(nèi)，對(duì)照組1和2的檸檬酸合成酶就開(kāi)始發(fā)生聚集，可以檢測(cè)到光散射信號(hào)的增加；而實(shí)驗(yàn)組1和2中檸檬酸合成酶聚 集明顯變少，實(shí)驗(yàn)組2對(duì)于檸檬酸合成酶的熱變性聚集的抑制效果好于實(shí)驗(yàn)組1，0. 15μΜ alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白幾乎完全抑制等摩爾濃度檸檬酸合成酶的43°C熱變性聚集過(guò)程。圖1中(〇)代表對(duì)照組1，( Δ )代表對(duì)照組2，( )代表實(shí)驗(yàn)組1，( □)代 表實(shí)驗(yàn)組2。C、纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶化學(xué)變性聚集檸檬酸合成酶在鹽酸胍和還原劑條件下(6M鹽酸胍，IOmMDTT,室溫孵育2小時(shí)) 完全還原變性后，用40mM HEPES緩沖液稀釋到終濃度為0. 15 μ M，實(shí)驗(yàn)組1中同時(shí)加入 0. 3μΜ alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，實(shí)驗(yàn)組2中同時(shí)加入0. 6 μ M alphaEC結(jié)構(gòu)域蛋白，對(duì)照組1 同時(shí)加入相同體積的HEPES溶液，對(duì)照組2同時(shí)加入相同體積的1. 2μ M的牛血清白蛋白。 然后檢測(cè)各個(gè)樣品的光散射信號(hào)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。用熒光儀FL4500(日立公司)檢測(cè)光散 射過(guò)程，調(diào)節(jié)儀器激發(fā)光為500nm，發(fā)射光為500nm，狹縫寬度為2. 5nm。光散射信號(hào)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組明顯改變聚集過(guò)程。 0. 3 μ M alpha EC就可以明顯抑制聚集，0. 6 μ M的alpha EC則幾乎完全抑制聚集。圖2中(〇)對(duì)照組1，( ·)對(duì)照組2，(Δ )實(shí)驗(yàn)組1，( □)加入0. 6 μ M alphaEC。實(shí)施例2、纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白保護(hù)檸檬酸合成酶(CS)活性纖維蛋白原-420和alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白抑制檸檬酸合成酶(CS)熱變性失活的 實(shí)驗(yàn)方法如下將檸檬酸合成酶溶解在40mM HEPES緩沖液中，使其終濃度為0. 075 μ Μ,實(shí)驗(yàn)組1 中同時(shí)加入0. 075 μ M纖維蛋白原-420，實(shí)驗(yàn)組2中同時(shí)加入0. 15 μ M纖維蛋白原-420，實(shí) 驗(yàn)組3中同時(shí)加入0.075 μ M alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，實(shí)驗(yàn)組4中同時(shí)加入0. 15 μ M alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，對(duì)照組加入等體積的HEPES緩沖液。將實(shí)驗(yàn)樣品放入43°C水浴中，同時(shí)開(kāi) 始檢測(cè)檸檬酸合成酶活性的變化。將檸檬酸合成酶加熱前的活性定為100%。檸檬酸合成酶活性測(cè)定方法如下930μ 1 TF緩沖液(50mM Tris, 2mM EDTA, ρΗ8. 0), 10 μ 1 IOmM 草酰乙酸(oxaloacetic acid)，10 μ 1 IOmM DTNB，30 μ 15mM 乙酰輔 酶A (acetyl-CoA)，將上述溶液混合后迅速加入20 μ 1含有檸檬酸合成酶的溶液，立刻檢測(cè) 412nm的紫外吸收動(dòng)態(tài)變化，吸光度變化線性曲線的斜率代表酶活性大小。檸檬酸合成酶活性測(cè)定結(jié)果如圖6和7所示，表明隨著時(shí)間推移，對(duì)照組檸檬酸合 成酶的活性迅速降低，但是實(shí)驗(yàn)組都能夠有效的減慢檸檬酸合成酶的活性喪失的速度。圖3中，(〇)代表對(duì)照，(Δ )代表實(shí)驗(yàn)組1，( □)代表實(shí)驗(yàn)組2 ；圖4中，(〇) 代表對(duì)照，(Δ )代表實(shí)驗(yàn)組3，( □)代表實(shí)驗(yàn)組4。實(shí)施例3、alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白特異性識(shí)別變性檸檬酸合成酶檸檬酸合成酶與alpha E C結(jié)構(gòu)域蛋白混合在一起孵育，當(dāng)在43°C加熱5min或 IOmin后，上清分別加入抗檸檬酸合成酶的抗體和抗alpha EC的抗體進(jìn)行免疫共沉淀。檸 檬酸合成酶與alpha EC混合在一起在室溫孵育，然后上清分別加入抗檸檬酸合成酶的抗體 和抗alpha EC的抗體進(jìn)行免疫共沉淀，作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5，表明加入抗檸檬酸合成酶的抗體，變性的檸檬酸合成酶能被沉淀 下來(lái)，同時(shí)alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白也能夠被沉淀下來(lái)。加入抗alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白的抗體，alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白被沉淀下來(lái)，檸檬酸合成酶也能夠被沉淀下來(lái)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明加 熱后，檸檬酸合成酶與alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白形成了復(fù)合物，這樣其中一種蛋白的抗體就也 能夠同時(shí)把另一個(gè)蛋白沉淀下來(lái)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)沒(méi)有發(fā)生免疫共沉淀。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明alpha EC 結(jié)構(gòu)域蛋白能夠特異性的識(shí)別并結(jié)合熱變性的檸檬酸合成酶。圖5中，圖上部分為用檸檬酸合成酶的抗體免疫共沉淀，電泳后用alpha EC抗體 檢測(cè)，泳道1為alpha EC陽(yáng)性對(duì)照，泳道2為在室溫孵育10分鐘然后共沉淀，泳道3和4 為在43°C分別加熱5和10分鐘后共沉淀；圖下部分為用alpha EC的抗體免疫共沉淀，電 泳后用檸檬酸合成酶抗體檢測(cè)，泳道1為檸檬酸合成酶陽(yáng)性對(duì)照，泳道2為室溫孵育10分 鐘后共沉淀，泳道3和4為在43°C分別加熱5和10分鐘后共沉淀。圖中“CS”代表檸檬酸 合成酶，“alpha EC”代表alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白。序列表<110>清華大學(xué)<120>纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域的新用途<130>CGGNARW92137<160>1<210>1<211>236<212>PRT<213>Homo sapiens<400>1Asp Cys Asp Asp Val Leu Gln Thr His Pro Ser Gly Thr Gln Ser Gly151015lie Phe Asn lie Lys Leu Pro Gly Ser Ser Lys lie Phe Ser Val Tyr202530Cys Asp Gln Glu Thr Ser Leu Gly Gly Trp Leu Leu lie Gln Gln Arg354045Met Asp Gly Ser Leu Asn Phe Asn Arg Thr Trp Gln Asp Tyr Lys Arg505560Gly Phe Gly Ser Leu Asn Asp Glu Gly Glu Gly Glu Phe Trp Leu Gly65707580Asn Asp Tyr Leu His Leu Leu Thr Gln Arg Gly Ser Val Leu Arg Val859095Glu Leu Glu Asp Trp Ala Gly Asn Glu Ala Tyr Ala Glu Tyr His Phe100105110Arg Val Gly Ser Glu Ala Glu Gly Tyr Ala Leu Gln Val Ser Ser Tyr115120125Glu Gly Thr Ala Gly Asp Ala Leu lie Glu Gly Ser Val Glu Glu Gly130135140Ala Glu Tyr Thr Ser His Asn Asn Met Gln Phe Ser Thr Phe Asp Arg
145150155160Asp Ala Asp Gln Trp Glu Glu Asn Cys Ala Glu Val Tyr Gly Gly Gly165170175Trp Trp Tyr Asn Asn Cys Gln Ala Ala Asn Leu Asn Gly lie Tyr Tyr
180185190Pro Gly Gly Ser Tyr Asp Pro Arg Asn Asn Ser Pro Tyr Glu lie Glu195200205Asn Gly Val Val Trp Val Ser Phe Arg Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Arg210 215 220Ala Val Arg Met Lys lie Arg Pro Leu Val Thr Gln22523023權(quán)利要求
如下a)或b)的蛋白在抑制蛋白聚集或變性蛋白復(fù)性中的應(yīng)用；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述a)或b)的蛋白與所述變性蛋白的 摩爾比為25 1至1 100。
3.如下a)或b)的蛋白在制備用于預(yù)防和/或治療蛋白構(gòu)象病的藥物中的應(yīng)用；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
4.一種用于預(yù)防和/或治療蛋白構(gòu)象病的藥物，其活性成分是如下a)或b)的蛋白；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
5.如下a)或b)的蛋白在抗蛋白變性中的應(yīng)用；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
6.一種用于治療蛋白變性疾病的藥物，其活性成分是如下a)或b)的蛋白；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
7.一種蛋白穩(wěn)定劑，其活性成分是如下a)或b)的蛋白；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
8.如下a)或b)的蛋白在蛋白質(zhì)產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)中應(yīng)用；a)其氨基酸序列為序列表中的序列1；b)纖維蛋白原-420；所述纖維蛋白原-420優(yōu)選為人的纖維蛋白原-420。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域的新用途。纖維蛋白原-420分子包含alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白，并且單獨(dú)alpha EC結(jié)構(gòu)域蛋白也具有與纖維蛋白原-420相同的或類(lèi)似的功能。纖維蛋白原-420及其活性結(jié)構(gòu)域可以在抑制蛋白聚集、幫助蛋白復(fù)性、抗預(yù)防和/或治療蛋白構(gòu)象病的藥物、質(zhì)量控制中變性蛋白檢測(cè)和抗蛋白變性等方面廣泛應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K38/17GK101822823SQ200910079569
公開(kāi)日2010年9月8日 申請(qǐng)日期2009年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月6日
發(fā)明者付彥, 唐華東, 羅永章 申請(qǐng)人:清華大學(xué)